本發(fā)明涉及以腸道微生物為靶點(diǎn)的疾病預(yù)防及營養(yǎng)食品領(lǐng)域,特別是涉及一種改善腸道微生態(tài)預(yù)防慢性病的組合物、均衡營養(yǎng)食品及應(yīng)用。
背景技術(shù):
人體是一個由人的細(xì)胞和所有共生微生物構(gòu)成的“超級生物體”,也是一個非常復(fù)雜的生態(tài)系統(tǒng)。在人的身體內(nèi)外生活的微生物細(xì)胞數(shù)量甚至是人體自身細(xì)胞數(shù)量的10倍,有百萬億之多。超過90%的共生微生物生活在人的體內(nèi),稱為“腸道菌群”。成人腸道棲息著大約1014數(shù)量級的細(xì)菌,主要定植在結(jié)腸,形成一個約1.5kg重的菌群生態(tài)系統(tǒng),包括1000~1150種細(xì)菌。21世紀(jì)以來,人類面臨著“膳食纖維鴻溝”的巨大挑戰(zhàn),該“膳食纖維鴻溝”是指在現(xiàn)代飲食方式中,人們很難按照推薦標(biāo)準(zhǔn)吃到足夠量的膳食纖維,以至于一些腸道微生物消失,腸道菌群被破壞,腸道通透性增加,機(jī)體長期處于低度炎癥狀態(tài),免疫力降低,進(jìn)而引起各種慢性疾病。
現(xiàn)在有觀點(diǎn)認(rèn)為,人體許多健康問題都是由體內(nèi)菌群失衡引起,決定因素是微生態(tài)的平衡。如腸道菌群和肥胖有關(guān),腸道菌群失衡引起肥胖的作用機(jī)制,主要有以下三方面:部分產(chǎn)丁酸的菌屬能降解膳食中的多糖,轉(zhuǎn)變成短鏈脂肪酸供身體吸收利用,導(dǎo)致宿主從飲食中吸收能量的能力增加;腸道菌群還能夠調(diào)控能量儲存組織基因的表達(dá)活性,主要與脂肪生成相關(guān)的基因有fiaf及chrebp/srebp-1;高脂飲食通過改變腸道菌群結(jié)構(gòu),引起代謝性內(nèi)毒素血癥,然后通過lps/cdl4信號通路引起慢性系統(tǒng)性炎癥,導(dǎo)致肥胖、胰島素抵抗等。還有研究表明:腸道菌群的代謝物與主要心血管不良事件發(fā)生率提高有關(guān),腸道菌群與結(jié)直腸癌具有相關(guān)性。且還有觀點(diǎn)認(rèn)為腸道菌群產(chǎn)生的毒素是令人體衰老、得病的重要原因。
基于人們對腸道菌群新的認(rèn)識,腸道菌群是多種慢病致病和疾病治療的重要因素,并且具有可塑性,因而是理想的預(yù)防及治療疾病的新靶點(diǎn)?,F(xiàn)已有研究發(fā)現(xiàn),調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)的平衡,可實(shí)現(xiàn)緩解與治療疾病的目的。比如腹瀉、便秘、陰道感染等綜合癥狀,國內(nèi)外研究證明使用特定的經(jīng)臨床證實(shí)的益生菌可有效地進(jìn)行治療。還有研究報(bào)道通過使用低聚果糖益生元調(diào)節(jié)腸道菌群的結(jié)構(gòu),可以影響多種胃腸道激素的合成和分泌,如結(jié)腸中的glp-1和glp-2濃度增加,二肽基肽酶iv(dpp-4)濃度降低,從而改善代謝性內(nèi)毒素血癥;α糖苷酶抑制劑可以明顯提高有益菌如雙歧桿菌的數(shù)目,改善糖代謝作用,并且減少脂肪組織炎癥。還有研究表明膳食纖維可減緩消化速度和加快膽固醇的排泄,降低患腸癌的風(fēng)險(xiǎn),同時(shí)可吸收食物中有毒物質(zhì),可預(yù)防肥胖癥、腸道疾病、心血管疾病、糖尿病、降低血壓、抗乳腺癌、改變腸道系統(tǒng)中微生物群落組成以平衡菌群、提高人體免疫功能。
但現(xiàn)有的研究與應(yīng)用仍存在諸多問題:1、沒有解決21世紀(jì)人類面臨的“膳食纖維鴻溝”的巨大挑戰(zhàn),以至于一些腸道微生物消失,腸道菌群被破壞,進(jìn)而引起各種慢性疾病,占人類死亡原因85%的慢性疾病有增無減;2、沒有有效足量的營養(yǎng)組合物以改善腸道菌群的失衡,單獨(dú)添加食用功能聚糖組合物或普通聚糖組合物,對人體產(chǎn)生積極作用的同時(shí),也會階段性的造成個別有益菌過多或不足,腸通量增加等負(fù)向作用;3、缺乏有關(guān)將重要功能聚糖益生元組合與普通聚糖復(fù)合纖維素協(xié)同作用的研究及應(yīng)用,以彌補(bǔ)簡單聚糖組合物類型的缺點(diǎn)與不足;4、缺乏同時(shí)滿足人體和腸道菌群(超級生物體)營養(yǎng)的主食,不能簡便地進(jìn)行一級預(yù)防,從根本上保證人類的健康問題。
綜上所述,近年來微生物組學(xué)、代謝組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、宏基因組學(xué)關(guān)聯(lián)分析等技術(shù)逐漸被應(yīng)用于腸道微生物的研究中,對詮釋腸道細(xì)菌和人體健康的關(guān)系,研究腸道細(xì)菌在疾病發(fā)生中的作用給予了極大的推動,研制改善腸道微生態(tài)的組合物,消除慢性炎癥及免疫力低下等致病因素,改善軀體亞健康體質(zhì),預(yù)防心腦血管疾病、糖尿病、慢性神經(jīng)退行性疾病及癌癥等慢性疾病,研制同時(shí)滿足人體及維護(hù)腸道微生態(tài)的食品,即研制超級生物體主食、解決“膳食纖維素鴻溝”均是重要的營養(yǎng)健康問題。本發(fā)明就是在此基礎(chǔ)上研發(fā)一種新的維護(hù)腸道生態(tài)環(huán)境提供菌群營養(yǎng)的組合物及均衡營養(yǎng)食品,改善人類軀體亞健康體質(zhì),有效一級預(yù)防非感染類慢性疾病,實(shí)屬當(dāng)前重要研發(fā)課題之一。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種改善腸道微生態(tài)預(yù)防慢性疾病的組合物,促進(jìn)有益菌的生長與繁殖,維護(hù)非益生菌的適量生存,抑制有害菌的生長與活性,維持腸道微生物穩(wěn)態(tài)平衡,降低腸通量、血液內(nèi)毒素及炎癥因子,增強(qiáng)細(xì)胞代謝及體質(zhì)免疫能力,代謝短鏈脂肪酸、支鏈氨基酸、維生素等營養(yǎng)代謝物,降低腸道ph值,促進(jìn)鈣鐵鎂等礦物質(zhì)的吸收,消除慢性炎癥及免疫力低下等致病因素,改善軀體亞健康體質(zhì),一級預(yù)防心腦血管疾病、糖尿病等慢性疾病。
為解決上述技術(shù)問題,本發(fā)明提供一種改善腸道微生態(tài)預(yù)防慢性病的組合物,包括菊粉、低聚半乳糖和復(fù)合膳食纖維,其中所述菊粉、低聚半乳糖和復(fù)合膳食纖維的配方比為:1~75:1~75:5~95。
作為本發(fā)明的一種改進(jìn),,所述菊粉、低聚半乳糖和復(fù)合膳食纖維的配方比為:10~50:10~50:25~50。
進(jìn)一步改進(jìn),所述菊粉為低聚果糖、多聚果糖或低聚果糖與多聚果糖的混合物;所述復(fù)合膳食纖維為非益生元的可溶纖維與不溶纖維的混合物,其中,所述可溶纖維與不溶纖維的配方比為10~90:10~90。所述功能性聚糖菊粉、低聚半乳糖和普通聚糖復(fù)合膳食纖維的配方比為:25:25:50、25:50:25或35:15:50。
進(jìn)一步改進(jìn),所述非益生元的可溶纖維為抗性糊精、聚葡萄糖、低聚異麥芽糖或其混合物;所述不溶纖維為不溶于水的纖維素、半纖維素、木質(zhì)素或其混合物。
本發(fā)明還提供一種包含上述組合物的均衡營養(yǎng)食品,該均衡營養(yǎng)食品還包括谷物粉,所述谷物粉與所述組合物的配方比為:50~95:50~5。
進(jìn)一步改進(jìn),所述谷物粉與所述組合物的配方比為:70~95:30~5。
進(jìn)一步改進(jìn),所述谷物粉為小麥面粉、大米粉、玉米粉和馬鈴薯全粉中一種或多種的組合物,所述均衡營養(yǎng)食品被制備成復(fù)方大米、面粉、面條、意面、米線、面包、面包團(tuán)或面包預(yù)拌粉的形式。
進(jìn)一步改進(jìn),所述復(fù)方大米的制備方法為:將所述谷物粉與所述組合物混合,并采用壓制工藝擠壓成大米形態(tài),其中所述組合物中的不溶纖維素采用微晶纖維素。
本發(fā)明還公開上述組合物在制備預(yù)防炎癥性腸病的食品或藥品中的應(yīng)用。
本發(fā)明還公開上述組合物在制備改善胃腸動力和預(yù)防便秘的食品或藥品中的應(yīng)用。
本發(fā)明還公開上述組合物在制備預(yù)防糖尿病的食品或藥品中的應(yīng)用。
本發(fā)明還公開上述組合物在制備預(yù)防心腦血管疾病的食品或藥品中的應(yīng)用。
本發(fā)明還公開上述組合物在制備調(diào)節(jié)腸道菌群提高免疫系統(tǒng)的食品或藥品中的應(yīng)用。
采用這樣的設(shè)計(jì)后,本發(fā)明至少具有以下優(yōu)點(diǎn):
本發(fā)明組合物通過包含功能性聚糖益生元組合,為腸道益生菌提供食物,促進(jìn)有益細(xì)菌的生長繁殖,同時(shí)抑制有害菌的生長與活性,維持腸道微生物的穩(wěn)態(tài)平衡,并且其包含的普通聚糖復(fù)合膳食纖維具有發(fā)酵性、吸水溶脹、梯度黏合、機(jī)械隔離、網(wǎng)孔吸附、離子交換及菌群調(diào)節(jié)的作用,為腸道內(nèi)有益細(xì)菌的生長提供有利環(huán)境,且可減緩消化速度和加快膽固醇的排泄,吸收食物中有毒物質(zhì),維持非益生菌的適量生存。功能聚糖與普通聚糖的協(xié)同作用,消除單獨(dú)使用功能聚糖或普通聚糖的負(fù)向作用,降低腸通量、血液內(nèi)毒素及炎癥因子,增強(qiáng)細(xì)胞代謝及體質(zhì)免疫能力,代謝短鏈脂肪酸、支鏈氨基酸、維生素等營養(yǎng)代謝物,降低腸道ph值,促進(jìn)鈣鐵鎂等礦物質(zhì)的吸收,消除慢性炎癥及免疫力低下等致病因素,改善軀體亞健康體質(zhì),預(yù)防心腦血管疾病、糖尿病等慢性疾病。本發(fā)明組合物能良好的維持腸道微生物的穩(wěn)態(tài)環(huán)境預(yù)防慢性疾病。
本發(fā)明包含上述組合物的均衡營養(yǎng)食品作為人們每天不可或缺的主食,不僅為人體本身提供營養(yǎng)成分,還為與人體共生的菌群提供環(huán)境及營養(yǎng)物質(zhì),維護(hù)人體這個超級生物體的均衡營養(yǎng),有效改善人類亞健康體質(zhì),預(yù)防疾病,保障健康。
附圖說明
上述僅是本發(fā)明技術(shù)方案的概述,為了能夠更清楚了解本發(fā)明的技術(shù)手段,以下結(jié)合附圖與具體實(shí)施方式對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
圖1是本發(fā)明應(yīng)用實(shí)施例中小鼠腸道內(nèi)容物ph值的變化圖。
圖2是本發(fā)明應(yīng)用實(shí)施例中小鼠血清生化指標(biāo)dao的變化圖。
圖3是本發(fā)明應(yīng)用實(shí)施例中小鼠血清生化指標(biāo)tmao的變化圖。
圖4是本發(fā)明應(yīng)用實(shí)施例中小鼠血清生化指標(biāo)scfa的變化圖。
圖5是本發(fā)明應(yīng)用實(shí)施例中小鼠小腸絨毛的高度和隱窩切片變化圖。
圖6是本發(fā)明應(yīng)用實(shí)施例中空白組小鼠21天腸道菌群在門水平上的組成圖。
圖7是本發(fā)明應(yīng)用實(shí)施例中實(shí)驗(yàn)組a小鼠21天腸道菌群在門水平上的組成圖。
圖8是本發(fā)明應(yīng)用實(shí)施例中實(shí)驗(yàn)組b小鼠21天腸道菌群在門水平上的組成圖。
圖9是本發(fā)明應(yīng)用實(shí)施例中實(shí)驗(yàn)組c小鼠21天腸道菌群在門水平上的組成圖。
圖10是本發(fā)明應(yīng)用實(shí)施例中四個實(shí)驗(yàn)組小鼠21天腸道菌群在屬水平上的組成圖。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明改善腸道微生態(tài)預(yù)防慢性病的組合物包括:菊粉、低聚半乳糖和復(fù)合膳食纖維,其中該菊粉、低聚半乳糖和復(fù)合膳食纖維的配方比例為:1~75:1~75:5~95。
本發(fā)明的菊粉(inulin)是指低聚果糖、多聚果糖或低聚果糖與多聚果糖的混合物;低聚半乳糖(galactooligosaccharides,gos)是一種具有天然屬性的功能性低聚糖,其分子結(jié)構(gòu)一般是在半乳糖或葡萄糖分子上連接1~7個半乳糖基,即gal-(gal)n-glc/gal(n為0-6);復(fù)合膳食纖維是指非益生元的可溶纖維和不溶纖維的混合物,其中,非益生元的可溶纖維是指抗性糊精、聚葡萄糖、低聚異麥芽糖或其混合物,不溶纖維(solkfloc)是指不溶于水的纖維素、半纖維素、木質(zhì)素或其混合物,本實(shí)施例中非益生元可溶纖維與不溶纖維的配比為10~90:10~90。
本發(fā)明該菊粉、低聚半乳糖和復(fù)合膳食纖維的較優(yōu)配方比例為:10~50:10~50:25~50。
本發(fā)明該菊粉、低聚半乳糖和復(fù)合膳食纖維的更優(yōu)配方比例為:25:25:50、25:50:25或35:15:50。
為了使該改善腸道微生態(tài)的組合物更好的作用于人體,本發(fā)明還提供了包含上述組合物的均衡營養(yǎng)食品,該均衡營養(yǎng)食品包括谷物粉和上述組合物,其谷物粉與上述組合物的配方比為50~95:50~5。
其中谷物粉是指小麥面粉、大米(粳米、秈米、糯米)粉、玉米粉、馬鈴薯全粉或其組合物,則由該谷物粉和上述組合物形成的均衡營養(yǎng)食品形態(tài)主要有復(fù)合大米、面粉、面條(搟面條、干面條、半干面條、濕面條)、意面、米線、面包、面包團(tuán)或面包預(yù)拌粉等等多種形式的食品,且不限于上述這些形式。
本發(fā)明該谷物粉和上述組合物的較優(yōu)配方比例為:70~95:30~5。
本發(fā)明該谷物粉和上述組合物的更優(yōu)配方比例為:70:30、85:15或88:12。
當(dāng)然,本發(fā)明均衡營養(yǎng)食品中還可以包括礦物質(zhì)、維生素以及低聚木糖、l-阿拉伯糖、水蘇糖、瓜爾豆膠等營養(yǎng)強(qiáng)化劑及補(bǔ)充劑,其添加范圍均符合國際食品法典委員會(cac)《食品中必需營養(yǎng)素添加的通用原則》要求。
本發(fā)明中功能性聚糖菊粉、低聚半乳糖、水蘇糖均屬于益生元,能通過選擇性的刺激一種或者幾種有益細(xì)菌的生長和活性,抑制有害菌的生長與活性。該益生元組合給腸道中益生菌提供“食物”,促進(jìn)有益細(xì)菌生長繁殖,抑制有害菌的生長與活性。本發(fā)明組合物中的普通聚糖組合維護(hù)適量的非益生菌的生存,復(fù)合不溶膳食纖維具有發(fā)酵性、吸水溶脹、梯度黏合、機(jī)械隔離、網(wǎng)孔吸附、離子交換及菌群調(diào)節(jié)的作用,為腸道內(nèi)有益細(xì)菌的生長提供有利環(huán)境,且可減緩消化速度和加快膽固醇的排泄,吸收食物中有毒物質(zhì),降低患腸癌的風(fēng)險(xiǎn)。所以本發(fā)明均衡營養(yǎng)食品能良好的維持腸道微生物的穩(wěn)態(tài)環(huán)境,降低腸道通透性,一級預(yù)防慢性疾病,保障健康。
產(chǎn)品實(shí)施例1:均衡營養(yǎng)大米
谷物粉采用粳米粉和糯米粉以80:20混合的大米粉混合物,菌群營養(yǎng)組合物采用菊粉:低聚半乳糖:聚葡萄糖:微晶纖維素為30:20:25:25的組分配比混合物,且谷物粉與菌群營養(yǎng)組合物的配比為85:15。
該均衡營養(yǎng)大米的制備方法如下:
1、將菌群營養(yǎng)組合物中各組分按比例置于攪拌器中充分混合,制成預(yù)混粉料,備用;
2、將粳米粉和糯米粉以80:20的比例混合成大米粉混合物,將該大米粉混合物與步驟1得到的預(yù)混粉料按80:20的比例混合,再加27~29%的水?dāng)嚢枵{(diào)質(zhì),得均衡營養(yǎng)大米半成品;
3、將步驟2得到的均衡營養(yǎng)大米半成品用雙螺桿擠壓機(jī)擠壓造粒,然后用流化床干燥機(jī)干燥,再經(jīng)過冷卻、篩理,即得本實(shí)施例均衡營養(yǎng)大米。
本實(shí)施例均衡營養(yǎng)大米的成品形態(tài)似天然大米,品相美觀。其口感特性:細(xì)膩滑潤,沒有顆粒感,不回生。其功能特性:滿足了超級生物體(人體和腸道菌群)的均衡營養(yǎng)需求,升糖指數(shù)小于50,能改善便秘,增殖益生菌,降低腸道ph值,改善腸道微生態(tài)環(huán)境。
產(chǎn)品實(shí)施例2:均衡營養(yǎng)面粉
谷物粉采用普通面粉,菌群營養(yǎng)組合物采用菊粉:低聚半乳糖:聚葡萄糖:微晶纖維素為25:25:20:30的組分配比混合物,且谷物粉與菌群營養(yǎng)組合物的配比為90:10。
該均衡營養(yǎng)面粉的制備方法如下:
1、將菌群營養(yǎng)組合物中各組分按比例置于攪拌器中充分混合,制成預(yù)混粉料,備用;
2、將普通面粉與步驟1得到的預(yù)混粉料按90:10的比例混合,攪拌充分調(diào)質(zhì),篩理,即可本實(shí)施例均衡營養(yǎng)面粉。
本實(shí)施例均衡營養(yǎng)面粉的成品形態(tài)似普通面粉,口感細(xì)膩,做各種面食均沒有顆粒感。其功能特性:滿足了超級生物體(人體和腸道菌群)的均衡營養(yǎng)需求,吸水特性增強(qiáng),升糖指數(shù)小于50,能增殖益生菌,降低腸道ph值,改善便秘,改善腸道微生態(tài)環(huán)境。
產(chǎn)品實(shí)施例3:均衡營養(yǎng)面條
谷物粉采用普通面粉,菌群營養(yǎng)組合物采用菊粉:低聚半乳糖:聚葡萄糖:微晶纖維素為25:25:25:25的組分配比混合物,且谷物粉與菌群營養(yǎng)組合物的配比為70:30。
該均衡營養(yǎng)面條的制備方法如下:
1、將菌群營養(yǎng)組合物中各組分按比例置于攪拌器中充分混合,制成預(yù)混粉料,備用;
2、將普通面粉與步驟1得到的預(yù)混粉料按70:30的比例混合,再加水?dāng)嚢?,加水至含水?0%左右,水溫15~20℃為宜,攪拌10~15分鐘;
3、熟化10~15分鐘,熟化溫度25℃左右,熟化后軋面、切條、干燥、冷風(fēng)定條,含水量降至14%,即得本實(shí)施例均衡營養(yǎng)面條。
本實(shí)施例均衡營養(yǎng)面條口感細(xì)膩滑潤、勁道。其功能特性:滿足了超級生物體(人體和腸道菌群)的均衡營養(yǎng)需求,升糖指數(shù)小于50,能增殖益生菌,降低腸道ph值,改善便秘,改善腸道微生態(tài)環(huán)境。
產(chǎn)品實(shí)施例4:均衡營養(yǎng)面包
谷物粉采用中筋面粉,菌群營養(yǎng)組合物采用菊粉:低聚半乳糖:聚葡萄糖:微晶纖維素為25:20:25:30的組分配比混合物,且谷物粉與菌群營養(yǎng)組合物的配比為88:12。
該均衡營養(yǎng)面包的制備方法如下:
1、將菌群營養(yǎng)組合物中各組分按比例置于攪拌器中充分混合,制成預(yù)混粉料,備用;
2、將中筋面粉與步驟1得到的預(yù)混粉料按85:15的比例混合,再加水?dāng)嚢瑁凑諅鹘y(tǒng)面包工藝和面、第一次發(fā)酵、第二次調(diào)制面團(tuán)處理、第二次發(fā)酵、整形、成型、烤前加工處理、烘烤、冷卻、即得本實(shí)施例均衡營養(yǎng)面包條。該步驟由于菌群營養(yǎng)組合物組分的特性省去了傳統(tǒng)方法制作面包的白砂糖、植物油等配料。
本實(shí)施例均衡營養(yǎng)面包口感細(xì)膩滑潤、組織蓬松、柔軟,不易塌陷。其功能特性:滿足了超級生物體(人體和腸道菌群)的均衡營養(yǎng)需求,升糖指數(shù)小于50,能增殖益生菌,降低腸道ph值,改善便秘,改善腸道微生態(tài)環(huán)境。
本發(fā)明改善腸道微生態(tài)的組合物包含功能聚糖、普通聚糖膳食纖維,多種聚糖發(fā)生顯著的協(xié)同作用,對宿主產(chǎn)生積極作用沒有產(chǎn)生負(fù)向作用。對腸道有益菌、中性菌提供組合營養(yǎng)及利于其增殖的腸道環(huán)境,豐富了腸道菌群的代謝組物,包括對人體有益的初級代謝組物及次級代謝組物,改善了腸道的微生態(tài),達(dá)到以改善腸道微生物穩(wěn)態(tài)為靶點(diǎn),預(yù)防慢性疾病的效果;本發(fā)明均衡營養(yǎng)食品還同時(shí)提供了腸道菌群及人體(超級生物體)的均衡營養(yǎng),以其方便的主食為載體提供了維護(hù)腸道微生態(tài)穩(wěn)態(tài)平衡的組合物,有效改善人類軀體亞健康體質(zhì),預(yù)防危及人類重大健康問題的慢性疾病。
應(yīng)用實(shí)施例
本實(shí)驗(yàn)把聚糖類組合物分為三個類型,1)功能性聚糖組合物;2)普通聚糖組合物;3)包含多種功能性聚糖和普通聚糖的組合物;用于研究不同類型聚糖組合物的協(xié)同作用,這個協(xié)同作用的重點(diǎn)在于兩個方面,一是適宜微生物豐度值及微生物生存環(huán)境的變化;二是對宿主生理指標(biāo)的影響變化。具體試驗(yàn)步驟如下:
1.材料與設(shè)備
1.1試劑
dao試劑盒,scfa試劑盒,tmao試劑盒,由上海酶聯(lián)生物科技有限公司提供;
1.2實(shí)驗(yàn)動物
spf級8周齡的barbl/c小鼠,購買于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心;
1.3實(shí)驗(yàn)飼料
按照上述聚糖類組合物的分類不同,制備四種實(shí)驗(yàn)飼料組:
空白組o基料100%,即小鼠一般飼料;
實(shí)驗(yàn)組a基料+功能聚糖組合物具體為:基料85%、低聚半乳糖7.5%、菊粉7.5%;
實(shí)驗(yàn)組b基料+普通聚糖組合物具體為:基料85%、不溶膳食纖維7.5%(麥麩提取)、聚葡萄糖7.5%;
實(shí)驗(yàn)組c基料+功能聚糖組合物+普通聚糖組合物具體為:基料85%、低聚半乳糖4%、菊粉3.5%、不溶膳食纖維4%、聚葡萄糖3.5%;上述試驗(yàn)飼料均由北京瑞千景科技發(fā)展有限公司提供。且上述配方基于要做成食品應(yīng)用,按人均每日食用主食250~300克算,滿足食用復(fù)合膳食纖維37~45克的用量做效果參考。
1.4主要儀器與設(shè)備
電子天平、ph計(jì),梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀。
2實(shí)驗(yàn)方法
2.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
將小鼠隨機(jī)分配到空白組o、實(shí)驗(yàn)組a、實(shí)驗(yàn)組b、實(shí)驗(yàn)組c四個組中(8只/組),飼喂于獨(dú)立通風(fēng)籠系統(tǒng),嚴(yán)格控制12h光照/黑夜,環(huán)境溫度設(shè)定在22℃;
本實(shí)驗(yàn)分4周,第1周為適應(yīng)期,第2、3、4周為實(shí)驗(yàn)期。在適應(yīng)期,四組小鼠均進(jìn)食空白飼料(即基料100%);在實(shí)驗(yàn)期,空白組o小鼠進(jìn)食空白飼料,實(shí)驗(yàn)組小鼠分別進(jìn)食實(shí)驗(yàn)組a、實(shí)驗(yàn)組b、實(shí)驗(yàn)組c對應(yīng)飼料;在實(shí)驗(yàn)期第二周和第三周結(jié)束時(shí),隨機(jī)抽取3只小鼠,摘眼球采血,脫臼法處死小鼠,取小腸,存放于福爾馬林溶液,用于he染色;收集結(jié)腸內(nèi)容物樣品,-80℃保存;并分析ph、細(xì)菌菌群組成等。血液收集后分離血清,采用試劑盒測血清中各項(xiàng)生化指標(biāo)二胺氧化酶(dao)、氧化三甲胺(tmao)、短鏈脂肪酸(scfa)。
2.2血清代謝參數(shù)的測定
小鼠眼球取血后,室溫靜置1h,3000rpm離心15min,分離上層血清,保存于-80℃。血清中生化指標(biāo),采用試劑盒測定,包括dao、tmao、scfa;
2.3腸道內(nèi)容物ph值的測定
稱取一定100mg腸道內(nèi)容物,按照15ml/g添加去離子水,充分分散,13000g離心2min,用ph計(jì)測定上清液的ph值。
2.4腸道內(nèi)容物代謝組學(xué)的測定
秤取100mg樣品,加入甲醇:水:氯仿(3:1:1)的溶液,漩渦震蕩使其分散均勻,靜置12小時(shí),離心取上清。取提取液100μl,加入20μl0.2mg/ml的核糖醇作為內(nèi)標(biāo)物質(zhì),充分混勻后,在45℃下用n2吹干;向吹干的提取物中加入40μl20mg/ml的鹽酸甲氧胺溶液,充分混勻,在30℃下,以130rpm轉(zhuǎn)速下反應(yīng)90min;充分反應(yīng)后,再加入40μlbstfa(含1%tmcs),充分混勻后,在37℃下氣浴30min,取出后,在室溫下放置120min,再在4℃下待測。
gc-ms色譜條件:
gc條件:agilent7890,串聯(lián)lecopegasus4dtof/ms檢測器;
gerstelmps進(jìn)樣系統(tǒng);
色譜柱:db-5ms30m×250μm×0.25mm
程序升溫:70℃,保持1min,以5℃/min升至280℃,保持10min
載氣:he;流速:1ml/min;進(jìn)樣體積:1μl;分流比1:2;
質(zhì)譜條件:
ms條件:ei源:質(zhì)量掃描范圍:50-800da,掃描速度10/s;進(jìn)樣口、傳輸線和離子源溫度分別為:250℃、250℃及220℃。
數(shù)據(jù)處理
色譜圖中各化合物通過工作站chromatof4.50進(jìn)行色譜峰對齊、去卷積、峰檢索后(自帶的nist等質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行鑒定),再利用核糖醇(內(nèi)標(biāo)物)進(jìn)行歸一化處理原始圖譜經(jīng)積分后(信噪比s/n>100),最終獲得各色譜峰及代謝物名稱、峰面積等相關(guān)數(shù)據(jù)。
2.5小腸絨毛高度和隱窩深度的變化測量
imagepro-plus6.0分析腸組織絨毛長度、隱窩深度及杯狀細(xì)胞的方法:運(yùn)用ipp軟件的直線工具選取絨毛較伸展并具有完整腸絨毛的圖片對每張切片的絨毛長度和隱窩深度進(jìn)行測量。
2.6腸道內(nèi)容物16sdna的測定
微生物dna的提取參照腸道內(nèi)容物dna提取試劑盒(omegabio-tek,norcross,ga,u.s.)的說明書。提取的dna質(zhì)量通過1%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測。dna樣品保存在-20°冰箱。采用illuminamiseq測序平臺pe300通過高通量測序方法對細(xì)菌16s核糖體rna基因的16sv3-v4高變區(qū)進(jìn)行pcr擴(kuò)增(擴(kuò)增條件為:95℃解鏈2min,95℃30s,55℃30s,72℃30s,25個循環(huán),再72℃延伸10min),所用引物為:正向引物(515f)5’-barcode-gtgccagcmgccgcgg)-3’,反向引物(907r)5’-ccgtcaattcmtttragttt-3’,且對于每個樣本,分別加上8bp的標(biāo)簽序列。每個樣品的擴(kuò)增均做三次重復(fù),反應(yīng)體系為25μl,包括2.5μl的10×pyrobestbuffer,2μl的2.5mmdntps,正反向引物各1μl(10μm),0.4u的dna聚合酶(pyrobestdnapolymerase,takara),15ng的dna模板,其余為ddh2o。從2%瓊脂糖凝膠中回收擴(kuò)增子,依照axyprepdnagelextractionkit說明書進(jìn)行純化(axygenbiosciences,unioncity,ca,u.s.),再用quantifluortm-st(promega,u.s.)進(jìn)行定量。將純化后的擴(kuò)增子等量混合,然后根據(jù)illuminamiseq測序平臺的標(biāo)準(zhǔn)流程進(jìn)行雙端2×300bp測序。用qiime(version1.17)軟件對原始fastq文件進(jìn)行處理,處理標(biāo)準(zhǔn)如下:(i)以10bp為一個滑動窗口,如果窗口內(nèi)平均質(zhì)量值低于20,則從窗口開始截去后端堿基,并過濾掉小于50bp的序列。(ii)根據(jù)標(biāo)簽序列區(qū)分樣本,標(biāo)簽序列允許的錯配數(shù)為0,引物錯配數(shù)為2,且去掉包含模糊堿基的序列。(iii)相互拼接上的序列之間,重疊區(qū)不得少于10bp,且去掉無法拼接的序列。用uparse(version7.1http://drive5.com/uparse/)軟件聚類生成操作分類單元(operationalunits,otus),相似度為97%。再用uchime軟件鑒別嵌合體序列,并將之去除。分類學(xué)比對時(shí),用silva(ssu115)16s核糖體rna數(shù)據(jù)庫,算法為rdpclassifier(http://rdp.cme.msu.edu/),置信閾值為70%。
3結(jié)果與結(jié)論
3.1腸道內(nèi)容物的ph
參照附圖1所示,在空白組o小鼠中,腸道內(nèi)容物的ph值在14天和21天分別為8.23和8.17。而實(shí)驗(yàn)組a、b、c三組小鼠的腸道內(nèi)容物ph值急劇下降至6.0左右,并且實(shí)驗(yàn)組c組數(shù)值是最穩(wěn)定的。這是因?yàn)榧?xì)菌分解寡糖,產(chǎn)生短鏈脂肪酸,從而降低了ph值。
腸道ph值是腸道微生態(tài)的重要參數(shù),ph值參數(shù)變化顯著,從該實(shí)驗(yàn)可知,實(shí)驗(yàn)組c配方飼料最為穩(wěn)定理想。
3.2小鼠血清生化指標(biāo)
表1實(shí)驗(yàn)組飼料干預(yù)后小鼠血清生化指標(biāo)的變化
由表1和附圖2至4可以看出,實(shí)驗(yàn)組小鼠血清各項(xiàng)指標(biāo)同空白組比較結(jié)果為:
實(shí)驗(yàn)組a:dao指標(biāo)變化不穩(wěn)定,tmao數(shù)值負(fù)項(xiàng)變化(變大),scfa變化不顯著;
實(shí)驗(yàn)組b:dao指標(biāo)變化不顯著,tmao21天數(shù)值負(fù)項(xiàng)變化大(變大),scfa變化波動大;
實(shí)驗(yàn)組c:dao變化顯著,tmao變化顯著,scfa變化顯著。
由于二胺氧化酶(dao)是腸道黏膜細(xì)胞的內(nèi)酶,血液中dao數(shù)值的高低,直觀表達(dá)了腸道黏膜的損傷程度,腸通量的高低。通常認(rèn)為,低聚糖會選擇性地促進(jìn)腸道內(nèi)有益菌的增殖,從而對宿主健康具有促進(jìn)作用。然而,也有報(bào)道稱:低聚果糖會增加大鼠腸道的通透性,在高劑量時(shí)甚至?xí)黾觭almonella的異位,過量食用低聚糖也會引起腸道不適,如腹鳴、脹氣。由表1可以看出,在實(shí)驗(yàn)期第二周結(jié)束時(shí),a組小鼠的dao值最低,但在實(shí)驗(yàn)期第三周結(jié)束時(shí),反而升高;這可能是由于過量的功能性低聚糖組合物增加了小鼠的腸道通透性,導(dǎo)致dao值升高所致;而c組小鼠呈現(xiàn)出了一個逐漸降低的過程,說明c組配方的協(xié)同作用彌補(bǔ)了a、b兩組配方的重要缺陷,是理想的配方組合物。
依賴腸道微生物的膽堿代謝產(chǎn)物氧化三甲胺(tmao)在心血管疾病發(fā)生發(fā)展中起著重要作用,其中宿主tmao水平升高與心血管疾病呈明顯正相關(guān);腸道微生物將攝入的卵磷脂、膽堿、肉堿等營養(yǎng)素作為碳能量來源,腸道微生物具有三甲胺裂解(酶哺乳動物是沒有這種酶的),可以使這些營養(yǎng)素中c-n鍵斷裂三甲胺即作為代謝廢物釋放,通過門脈循環(huán)進(jìn)入肝臟,在肝臟經(jīng)過黃素單氧化酶,主要是(fmo3)氧化生成tmao。
在實(shí)驗(yàn)期第二周和第三周結(jié)束時(shí),a、b兩組數(shù)值甚至高于空白組o,出現(xiàn)負(fù)向作用,說明功能性聚糖組合物和普通性聚糖組合物雖然對腸道微生態(tài)有影響變化,但對宿主會階段性產(chǎn)生負(fù)向作用;c組小鼠的血清tmao值最低,這說明c組飼料既能夠促進(jìn)有益菌的生長,又能平衡微生物穩(wěn)態(tài),并抑制能生成氧化三甲胺前體的微生物。
短鏈脂肪酸(scfa)對于維持人體腸道健康有著重要的作用。尤其是丁酸,作為結(jié)腸粘膜的生長誘導(dǎo)劑和炎癥的抑制劑,能誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡,防止結(jié)腸癌變的發(fā)生。腸道中scfa的含量可以反映細(xì)菌活性,影響肝脂質(zhì)與碳水化合物的調(diào)控。細(xì)菌利用低聚糖產(chǎn)生短鏈脂肪酸,結(jié)合圖1,實(shí)驗(yàn)組a、b、c三組小鼠的腸道內(nèi)容物ph值均顯著低于空白組,但從實(shí)驗(yàn)期第二周血清的檢測結(jié)果分析發(fā)現(xiàn),血清中的scfa空白組小鼠最高;在實(shí)驗(yàn)期第3周結(jié)束時(shí)的血清結(jié)果來看,c組變化不明顯,該結(jié)果和腸道黏膜增厚的通透性降低有關(guān),與c組血清dao最低相吻合。
綜上所述,實(shí)驗(yàn)組a、b、c三組飼料代表了三種類型的配方,c組配方是最理想的一類配方,c組中各組份的協(xié)同作用對于腸道微生態(tài)穩(wěn)態(tài)平衡及宿主產(chǎn)生了積極作用而沒有產(chǎn)生副作用;a、b兩組配方在對腸道微生態(tài)穩(wěn)態(tài)平衡及宿主產(chǎn)生了積極作用的同時(shí),均階段性的造成了一定的副作用。這在后面的試驗(yàn)結(jié)果中也達(dá)到了進(jìn)一步的印證。
3.3對小腸絨毛的高度和隱窩的影響
表2實(shí)驗(yàn)組飼料干預(yù)后小腸絨毛高度及隱窩深度的變化
從表2和附圖5可以看出,實(shí)驗(yàn)組a、b、c與空白組o小鼠在喂養(yǎng)14天和21天的指標(biāo)變化。小腸是機(jī)體營養(yǎng)素消化、吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)的主要部位,因此良好的小腸粘膜結(jié)構(gòu)對于完善消化生理功能,促進(jìn)機(jī)體的生長發(fā)育尤為重要。小腸絨毛作為小腸的重要組成部分,不但對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收起著重要作用,而且有害菌群的定殖還會遭到小腸絨毛強(qiáng)有力擺動的破壞。益生菌對腸道形態(tài)功能的影響可能不僅僅是對腸絨毛形態(tài)的改變,還有更多細(xì)胞水平上的改變。絨毛高度與隱窩深度的比值反映了小腸的功能狀態(tài),當(dāng)比值下降,表明黏膜受損,消化吸收功能下降,動物生長發(fā)育受阻等喂養(yǎng)14天后,發(fā)現(xiàn)a組和b組的絨毛高度與隱窩深度的比值是高于對照組的,而c組與之相差不明顯;21天后,b組和c組的絨毛高度與隱窩深度的比值高于對照組,且c組表現(xiàn)最佳;可能是由于它促進(jìn)了小鼠胃腸道正常微生物區(qū)系的建立,維持消化道內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,改善腸絨毛的存在環(huán)境,這也在血液生化檢驗(yàn)c組二胺氧化酶dao數(shù)值中得到了驗(yàn)證。
3.4腸道內(nèi)容物代謝組學(xué)的測定
表3.試驗(yàn)組部分有機(jī)酸的數(shù)值變化
從表3可以看出,不同飼料喂養(yǎng),小鼠腸道內(nèi)容物中異亮氨酸,亮氨酸,纈氨酸,酪氨酸丁二酸、乙二酸,戊酸以及異戊酸含量的變化。糖尿病導(dǎo)致部分氨基酸代謝異常,有兩大特征:1.血漿總氨基酸含量、生糖氨基酸含量在糖尿病時(shí)降低,而且與血糖呈顯著負(fù)相關(guān);2.不論血糖控制的好壞,支鏈氨基酸的含量及其占總氨基酸的比例均是增加。
但是在糖尿病發(fā)生前的5-10年前,部分氨基酸含量是升高的,尤其是血液中異亮氨酸、亮氨酸、纈氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸等5種氨基酸水平就出現(xiàn)了異常升高的現(xiàn)象。該實(shí)驗(yàn)很清楚的顯示,尤其是以21天的結(jié)果更為明顯,這5種氨基酸隨著飼料配比的合理化組合發(fā)生了明顯的改變,基本以顯著降低為主。對于防治與降低糖尿病的發(fā)病率具有顯著性意義。
評估這些氨基酸的指標(biāo)不但對于預(yù)測糖尿病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn),而且對于心臟病、腫瘤(腎癌、胰腺癌)也具有實(shí)際意義,針對性的及早干預(yù)和預(yù)防,起到精準(zhǔn)性的一級預(yù)防作用。
細(xì)菌利用低聚糖產(chǎn)生短鏈脂肪酸,其含量增加,造成腸道內(nèi)ph值下降。乙酸主要是由擬桿菌門產(chǎn)生的,但丁酸鹽主要是由厚壁菌門產(chǎn)生的。丁酸是結(jié)腸細(xì)胞的主要能量來源,增加腸道健康和潛在的降低腸道通透性和預(yù)防代謝性內(nèi)毒素血癥等。喂養(yǎng)14天時(shí),c組分別與a、b小鼠比較發(fā)現(xiàn),丁二酸、乙二酸的含量上升,戊酸的含量下降;喂養(yǎng)21天時(shí)發(fā)現(xiàn),乙二酸含量上升,丁二酸和異戊酸含量下降。
3.5腸道內(nèi)容物16sdna測定
本實(shí)驗(yàn)在小鼠腸道內(nèi)容物樣品中,檢測到四個門的細(xì)菌,其中擬桿菌門,厚壁菌門和變形菌門是豐度最大的三個門。從圖6至9顯示的小鼠21天腸道菌群在門水平上的組成,可以看出,在空白組0小鼠中,可以看出擬桿菌門豐度達(dá)到65.6%,厚壁菌門31.66%,變形菌門1.44%;
在實(shí)驗(yàn)組a組小鼠中,三者豐度分別達(dá)到87.84%、2.98%、8.77%;
在實(shí)驗(yàn)組b組小鼠中,三者豐度分別達(dá)到90.72%,5.93%,2.75%;
在實(shí)驗(yàn)組c組小鼠中,三者豐度分別達(dá)到85,65%,7.00%,6.45%。
實(shí)驗(yàn)組a、b、c與空白組比較發(fā)現(xiàn),擬桿菌門和變形菌門豐度增加;厚壁菌門豐度降低;由此可見,小鼠攝入低聚糖后,促進(jìn)了擬桿菌門和變形菌門的增殖,厚壁菌門的生長則受到抑制。
本實(shí)驗(yàn)在小鼠腸道內(nèi)容物中,共檢測到14個屬的細(xì)菌比例在0.1%以上;bacteriodes、alloprevotella(普雷沃菌屬)、parabacteriodes、lachnospiraceae(毛螺科菌)、parasutterella是腸道內(nèi)容物樣品中的主要屬;從附圖10顯示的小鼠21天腸道菌群在屬水平上的組成,可以看出:
小鼠攝入實(shí)驗(yàn)組a飼料后,腸道內(nèi)容物中的bacteriodes顯著增加,而b組小鼠腸道內(nèi)容物中bacteriodes顯著降低,c組bacteriodes變化則不明顯,說明功能性低聚糖組合物具有促進(jìn)bacteriodes增殖的作用,普通低聚糖則沒有此作用;
b、c組小鼠腸道內(nèi)容物樣品中alloprevotella、parabacteriodes增加,a組則降低,說明普通低聚糖有促進(jìn)alloprevotella、parabacteriodes增殖的能力;
與空白組相比,a、b、c三組樣品中l(wèi)achnospiraceae都降低,而parasutterella都有所升高;低聚半乳糖和菊粉作為益生元,不被機(jī)體消化吸收而直接進(jìn)入大腸,對調(diào)整腸道菌群、維持腸道正常環(huán)境、調(diào)節(jié)腸道功能、提高機(jī)體健康水平具有重要作用。聚葡萄糖作為一種水溶性膳食纖維,可以縮短食物在胃內(nèi)的排空時(shí)間,有效改善腸道功能,被攝入人體后,只是到了胃腸道的下半部分被發(fā)酵,產(chǎn)生短鏈脂肪酸如丁酸等,降低了腸道ph值,可以幫助抵抗感染等。從麩皮中提取的不溶性膳食纖維,不能溶解于水又不能被大腸中微生物酵解,僅能減少排泄物在腸道的停留時(shí)間,增加腸道內(nèi)容物的體積,起到了改善微生物繁殖環(huán)境和潤腸通便的作用。
本實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)驗(yàn)證功能聚糖和普通聚糖組合物的協(xié)同作用,這個協(xié)同作用的重點(diǎn)在于兩個方面,一是適宜微生物豐度值及微生物生存環(huán)境的變化;二是平衡的微生物營養(yǎng)影響宿主生理指標(biāo)的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:各類型聚糖組合物均對小鼠腸道微生態(tài)及生理指標(biāo)有顯著的影響變化,其中,包含功能聚糖、普通聚糖組合物的協(xié)同作用改善了宿主腸道微生物穩(wěn)態(tài)平衡,對宿主產(chǎn)生了積極作用而沒有產(chǎn)生副作用;單獨(dú)添加功能聚糖組合物或普通聚糖組合物的實(shí)驗(yàn)組,對宿主產(chǎn)生積極作用的同時(shí),均階段性的造成了一定的副作用。
3.6試驗(yàn)結(jié)論及分析:
本實(shí)驗(yàn)通過研究了不同聚糖組合物對小鼠腸道微生態(tài)系統(tǒng)的影響;采用了四種飼料配方喂養(yǎng)小鼠:o組、a組、b組和c組;通過宏基因組分析小鼠腸道內(nèi)容物菌群發(fā)現(xiàn):不同的膳食飲食對腸道菌群影響很大,低聚半乳糖+菊粉(a組)會導(dǎo)致擬桿菌屬顯著升高,普雷沃菌屬顯著降低,腸道菌群的多樣性降低;雙歧桿菌雖然顯著增加,但所占比例較?。痪燮咸烟?不溶性膳食纖維(b組)飼養(yǎng)小鼠,擬桿菌屬顯著降低,普雷沃菌屬和多形擬桿菌屬顯著升高;低聚半乳糖+菊粉+聚葡萄糖+復(fù)合不溶纖維素(c組)飼養(yǎng)小鼠,擬桿菌屬、普雷沃菌屬等菌屬有波動,但變化不顯著,說明不同的膳食飲食對腸道菌群影響很大。還通過結(jié)腸內(nèi)容物的ph和血液中scfa數(shù)據(jù)表明,低聚糖和膳食纖維發(fā)酵產(chǎn)生大量短鏈脂肪酸,使得ph下降;血清中dao,tmao含量和小腸絨毛數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn),c組小鼠表現(xiàn)最佳,說明對正常小鼠來說,聚糖、膳食纖維的多樣性有助于腸道微生態(tài)系統(tǒng)的健康。
綜上,各類型聚糖組合物均對小鼠腸道微生態(tài)及生理指標(biāo)有顯著的影響變化,其中,包含功能聚糖、普通聚糖組合物的協(xié)同作用改善了宿主腸道微生物穩(wěn)態(tài)平衡,對宿主產(chǎn)生了積極作用而沒有產(chǎn)生副作用;單獨(dú)添加功能聚糖組合物或普通聚糖組合物的實(shí)驗(yàn)組,對宿主產(chǎn)生積極作用的同時(shí),均階段性的造成了一定的副作用。表明平衡膳食不能簡單的添加功能聚糖或普通聚糖等營養(yǎng)強(qiáng)化劑及補(bǔ)充劑,而食用包含功能聚糖和普通聚糖的配方組合物的均衡營養(yǎng)才是維護(hù)腸道微生態(tài)穩(wěn)態(tài)、保障健康的關(guān)鍵。
本發(fā)明改善腸道微生態(tài)的組合物包含功能聚糖、普通聚糖復(fù)合膳食纖維,多種聚糖發(fā)生顯著的協(xié)同作用,對宿主產(chǎn)生積極作用且沒有產(chǎn)生負(fù)向作用。對腸道有益菌、中性菌提供組合營養(yǎng)及利于其增殖的腸道環(huán)境,豐富了腸道菌群的代謝組物,包括對人體有益的初級代謝組物及次級代謝組物,改善了腸道的微生態(tài),達(dá)到以改善腸道微生物穩(wěn)態(tài)為靶點(diǎn),預(yù)防慢性疾病的效果;本發(fā)明均衡營養(yǎng)食品還同時(shí)提供了腸道菌群及人體(超級生物體)的均衡營養(yǎng),以其方便的主食為載體提供了維護(hù)腸道微生態(tài)穩(wěn)態(tài)平衡的組合物,有效改善人類軀體亞健康體質(zhì),預(yù)防危及人類重大健康問題的慢性疾病。
以上所述,僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已,并非對本發(fā)明作任何形式上的限制,本領(lǐng)域技術(shù)人員利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容做出些許簡單修改、等同變化或修飾,均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。