專利名稱：腺苷脫氨酶診斷試劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種疾病診斷試劑，特別涉及一種腺苷脫氨酶診斷試劑。
腺苷脫氨酶，簡(jiǎn)稱ADA，是一種與機(jī)體細(xì)胞免疫系統(tǒng)有著重要聯(lián)系的核酸代謝酶，對(duì)ADA的測(cè)定對(duì)于肝、膽疾病的診斷及黃疸的鑒別診斷非常重要。目前，測(cè)定ADA的方法主要采用手工法，即固定時(shí)間法，此法在測(cè)定過(guò)程中有氨的丟失，造成較大誤差，而且其特異性不高，靈敏度也差，常常造成誤診。
本發(fā)明的目的就是要克服上述缺陷，研制一種特異性強(qiáng)、靈敏度高、誤差小，能夠作自動(dòng)分析的腺苷脫氨酶診斷試劑。
本發(fā)明的技術(shù)方案是由下列成份按下列含量組成腺苷 0.3-1.2mmol/Lα-酮戊二酸 1.5-7.5mmol/L還原性輔酶Ⅰ 0.15-0.4mmol/L谷氨酸脫氫酶 4000-16000μ/L磷酸緩沖液 0.03-0.1mmol/L本發(fā)明的腺苷脫氨酶診斷試劑的優(yōu)點(diǎn)在于沒有氨的丟失，測(cè)試極其準(zhǔn)確，而且特異性高、靈敏度高。
本發(fā)明的實(shí)施例1將下列成份按下述含量組成腺苷 0.6mmol/Lα-酮戊二酸 5.0mmol/L還原性輔酶Ⅰ 0.35mmol/L谷氨酸脫氫酶 8000μ/L磷酸緩沖液 0.05mmol/L根據(jù)原理，測(cè)試腺苷脫氨酶ADA，是通過(guò)酶的含量多少與催化活性成正比，其反應(yīng)式為 其中 是腺苷;
H2O是水ADA是腺苷脫氨酶，在本反應(yīng)中作催化劑 是次黃苷NH3是氨腺苷與水在ADA催化作用下(PH值呈7.4)生成次黃苷和氨，而生成的氨又與本試劑繼續(xù)發(fā)生反應(yīng) 式中NH3-是氨NADH-還原性輔酶ⅠGLDH-谷氨酸脫氫酶 NAD-輔酶Ⅰ
在第一個(gè)反應(yīng)式中生成的氨迅速與NADH、α-酮戊二酸在GLDH催化作用下反應(yīng)。
通過(guò)氨消耗NADH的速率，從而可以測(cè)定ADA的活性。
本發(fā)明的試劑是先稱取0.6mmol/L腺苷、5.0mmol/L α-酮戊二酸、8000μ/LGLDH溶于500ml PH7.4的磷酸鹽緩沖液中;再稱取0.35mmol/L NADH溶于500ml PH7.4的磷酸緩沖液中。將上述兩種試劑分別進(jìn)行低溫冷凍干燥。應(yīng)用前，將上述兩試劑等量混和即成工作試劑。
實(shí)施例2將下列成份按此含量組成腺苷 0.70mmol/Lα-酮戊二酸 4.5mmol/L還原性輔酶Ⅰ 0.50mmol/L谷氨酸脫氫酶 9000μ/L磷酸緩沖液 0.07mmol/L其它同實(shí)施例1。
權(quán)利要求
1.腺苷脫氨酶診斷試劑，其特征在于有下列成份組成，其成份含量為腺苷 0.3-1.2mmol/Lα-酮戊二酸 1.5-7.5mmol/L還原性輔酶I 0.15-0.4mmol/L谷氨酸脫氫酶 4000-16000mmol/L磷酸緩沖液0.03-0.1mmol/L
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述腺苷脫氨酶診斷試劑，其特征在于其成份具體含量為腺苷 0.6mmol/Lα-酮戊二酸 5.0mmol/L還原性輔酶Ⅰ 0.35mmol/L谷氨酸脫氫酶 8000μ/L磷酸緩沖液 0.05mmol/L
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述腺苷脫氨酶診斷試劑，其特征在于其成份具體含量為腺苷 0.70mmol/Lα-酮戊二酸 4.5mmol/L還原性輔酶Ⅰ 0.50mmol/L谷氨酸脫氫酶 9000μ/L磷酸緩沖液 0.07mmol/L
全文摘要
本發(fā)明涉及一種疾病診斷試劑，特別涉及一種腺苷脫氨酶診斷試劑。本發(fā)明利用酶的含量多少與催化活性成正比，產(chǎn)生氨并連續(xù)反應(yīng)，進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察，從而測(cè)定腺苷脫氨酶ADA的活性。解決了常用的固定時(shí)間法中氨的丟失而造成的誤差大、靈敏度差、特異性不高的缺陷。使對(duì)于肝、膽疾病的診斷及黃疸的鑒別診斷的準(zhǔn)確率大大提高。
文檔編號(hào)C12Q1/25GK1099803SQ9311172
公開日1995年3月8日 申請(qǐng)日期1993年8月28日 優(yōu)先權(quán)日1993年8月28日
發(fā)明者朱瀾 申請(qǐng)人:朱瀾