專(zhuān)利名稱(chēng)：偶聯(lián)酶促反應(yīng)測(cè)定腺苷脫氨酶的方法和試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物樣本中測(cè)定腺苷脫氨酶活性的技術(shù)方案以及有此方案制造的試劑。特別是涉及一種有腺苷脫氨酶將腺苷脫氨產(chǎn)生次黃苷后偶聯(lián)多酶促反應(yīng)體系。
背景技術(shù)：
Heinz(1980)借助腺苷脫氨酶(Adenosine deaminase，ADA)將腺苷(Adenosine)脫氨產(chǎn)生次黃苷(Inosine)。通過(guò)次黃苷偶聯(lián)嘌呤核苷磷酸化酶(Purine nucleoside phosphorylase，PNP)和黃嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase，XOD)酶促反應(yīng)生成過(guò)氧化氫(H2O2)。過(guò)氧化氫酶(Catalase)將過(guò)氧化氫還原成水，在乙醇(Ethanol)存在條件下生成乙醛(Acetaldehyde)。乙醛依賴(lài)NADP+被醛脫氫酶(Aldehyde dehydrogenase)氧化，同時(shí)NADP+被還原成NADPH。通過(guò)測(cè)量334nm處NADPH吸光度上升的速率來(lái)測(cè)算ADA活性。該法缺點(diǎn)是反應(yīng)體系過(guò)于繁瑣、試劑成本高，阻礙臨床推廣使用。其反應(yīng)原理和參考文獻(xiàn)如下
Heinz F，Reckel S，Pilz R，Kalden JR.嘌呤代謝酶的新分光光度計(jì)測(cè)定法IV。測(cè)定腺苷脫氨酶。酶。1980；25(1)50-5。[Heinz F，Reckel S，Pilz R，Kalden JR.A newspectrophotometric assay for enzymes of purine metabolism.IV.Determination ofadenosine deaminase.Enzyme.1980；25(1)50-5.]Trinder(1969)利用供氫體N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-3-甲基苯胺[N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3-methylaniline，EHSPT或TOOS]和偶聯(lián)物4-氨基安替比林(4-aminoantipyrine，4-AA)在過(guò)氧化物酶(Peroxidase，POD)的氧化作用下被過(guò)氧化氫(H2O2)凝聚生成紫紅色的有色醌(Quinone dye)。有色醌最大吸收光譜在545-556nm處。通過(guò)測(cè)量556nm處有色醌吸光度上升的速率來(lái)測(cè)算POD活性。該法缺點(diǎn)是供氫體的選擇過(guò)窄，僅選用EHSPT。其反應(yīng)原理和參考文獻(xiàn)如下 P.Trinder，用葡萄糖氧化酶和一種新型氧受體來(lái)測(cè)定血糖。臨床生化年刊，卷6，24-26頁(yè)，1969。[P.Trinder，Determination of glucose in blood using glucose oxidase with analternative oxygen acceptor.Annals in Clinical Biochemistry，v.6，p.24-26，1969]發(fā)明內(nèi)容Heinz氏測(cè)定腺苷脫氨酶的次黃苷偶聯(lián)酶促反應(yīng)體系過(guò)于繁瑣，尤其是過(guò)氧化氫酶、醛脫氫酶和NADP+的使用造成試劑成本高，阻礙臨床推廣使用。
Trinder氏反應(yīng)僅選用EHSPT作為供氫體，不利于反應(yīng)的靈活應(yīng)用。
本發(fā)明將次黃苷偶聯(lián)PNP和XOD酶促反應(yīng)以及Trinder氏反應(yīng)聯(lián)合使用。使XOD氧化下產(chǎn)生的H2O2通過(guò)Trinder氏反應(yīng)將苯胺類(lèi)供氫體和4-氨基安替比林偶聯(lián)物凝聚成有色產(chǎn)物。通過(guò)連續(xù)反應(yīng)和動(dòng)態(tài)觀察有色產(chǎn)物的產(chǎn)量，從而測(cè)定腺苷脫氨酶的活性。
本發(fā)明用Trinder氏反應(yīng)代替了Heinz氏次黃苷偶聯(lián)酶促反應(yīng)法中過(guò)氧化氫酶和醛脫氫酶反應(yīng)步驟。從而簡(jiǎn)化了Heinz氏法測(cè)定腺苷脫氨酶的次黃苷偶聯(lián)酶促反應(yīng)體系、省去了昂貴的過(guò)氧化氫酶、醛脫氫酶和NADP+成分、大大降低了試劑成本，為ADA測(cè)試法的產(chǎn)業(yè)化和市場(chǎng)化開(kāi)辟了一條新路。
本發(fā)明對(duì)Trinder氏反應(yīng)也進(jìn)行了改進(jìn)。將以下任一苯胺類(lèi)化合物用作Trinder氏反應(yīng)的供氫體。從而增加了反應(yīng)的靈活性，使腺苷脫氨酶測(cè)定的整套反應(yīng)體系更有利于臨床推廣使用。
1)N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-3-甲氧基苯胺[N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3-methoxylaniline(ADOS)]2)N-乙基-N-(3-硫丙基)-3-甲氧基苯胺[N-Ethyl-N-(3-sulfopropyl)-3-methoxyaniline(ADPS)]3)N-乙基-N-(3-硫丙基)苯胺[N-Ethyl-N-(3-sulfopropyl)aniline(ALPS)]4)N，N-雙(4-硫丁基)-3-甲基苯胺[N，N-Bis(4-sulfobutyl)-3-methylaniline(TODB)]5)N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-3-甲基苯胺[N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3-methylaniline(TOOS)]
6)N-乙基-N-(3-硫丙基)-3-甲基苯胺[N-Ethyl-N-(3-sulfopropyl)-3-methylaniline(TOPS)]以本發(fā)明的次黃苷偶聯(lián)酶促反應(yīng)配制了測(cè)定ADA的試劑盒。
具體實(shí)施例方式
1.確定Adenosine Michaelis常數(shù)Km1)試劑組成試劑I Trizma-base緩沖液pH 7.650毫摩爾/升(mmol/L)4-AA 2mmol/LADA300單位/升[U/L(牛腸)]PNP100U/LXOD200U/LPOD600U/L試劑II Tris-HCl緩沖液pH 4.0 50mmol/LAdenosine 0.001-10mmol/LTOOS 2mmol/L2)試驗(yàn)參數(shù)與操作步驟溫度37℃波長(zhǎng)550納米(nm)比色杯光徑 1.0厘米(cm)測(cè)試方法速率法反應(yīng)方向正予孵育 1.8毫升(ml)試劑I予孵育時(shí)間 3分鐘啟動(dòng)反應(yīng)加0.9ml試劑II延遲時(shí)間5分鐘測(cè)試時(shí)間3分鐘測(cè)試儀 Shimadzu UV-1603)計(jì)算計(jì)算出測(cè)試時(shí)間段每分鐘平均吸光度的變化(ΔA/min)。
ΔA/min=(ΔA1/min+ΔA2/min+ΔA3/min)3]]>4)結(jié)果以ΔA/min作為反應(yīng)速率V，用1/V作為Y軸，Adenosine濃度S的倒數(shù)1/S作為X軸。作Lineweaver-Burke圖。求得Adenosine Km 3.53×10-5mol/L。
2.確定有色產(chǎn)物毫摩爾消光系數(shù)ε1)試劑組成試劑ITrizma-base緩沖液pH7.6 50mmol/L4-AA 2mmol/LADA300U/L(牛腸)
PNP100U/LXOD200U/LPOD600U/L試劑II Tris-HCl緩沖液pH4.0 50mmol/LAdenosine 3mmol/LADOS或ADPS或ALPS 2mmol/L或TODB或TOPS或TOOS2)試驗(yàn)參數(shù)與操作步驟溫度37℃波長(zhǎng)265nm(Adenosine)比色杯光徑 1.0cm測(cè)試方法速率法反應(yīng)方向負(fù)予孵育 1.8ml試劑I予孵育時(shí)間 3分鐘啟動(dòng)反應(yīng)加0.9ml試劑II延遲時(shí)間2.5小時(shí)測(cè)試儀 Shimadzu UV-160動(dòng)態(tài)觀察1mmol/L Adenosine吸光度下降至2.5小時(shí)后完全降解。然后，在以下波長(zhǎng)測(cè)定有色產(chǎn)物的吸光度542nm (ADOS)540nm (ADPS)561nm (ALPS)630nm (TODB)630nm (TOPS)550nm (TOOS)3)結(jié)果ε毫摩爾消光系數(shù) 在本法條件下供氫體ADOS氧化凝聚產(chǎn)物ε＝27.2mM-1cm-1ADPS氧化凝聚產(chǎn)物ε＝27.9mM-1cm-1ALPS氧化凝聚產(chǎn)物ε＝41.3mM-1cm-1TODB氧化凝聚產(chǎn)物ε＝22.5mM-1cm-1TOPS氧化凝聚產(chǎn)物ε＝22.5mM-1cm-1TOOS氧化凝聚產(chǎn)物ε＝32.2mM-1cm-13.苯胺類(lèi)供氫體化合物的選擇1)試劑組成試劑ITrizma-base緩沖液pH7.6 50mmol/L4-AA 2mmol/LPNP 100U/LXOD 200U/LPOD 600U/L試劑II Tris-HCl緩沖液pH4.050mmol/LAdenosine10mmol/L
ADOS或ADPS或ALPS2mmol/L或TODB或TOPS或TOOS2)生物樣本0-600U/L牛腸ADA。
3)試驗(yàn)參數(shù)與操作步驟溫度37℃波長(zhǎng)542nm (ADOS)540nm (ADPS)561nm (ALPS)630nm (TODB)630nm (TOPS)550nm (TOOS)比色杯光徑 1.0cm測(cè)試方法速率法反應(yīng)方向正予孵育 0.05ml樣本+1.8ml試劑I予孵育時(shí)間 3分鐘啟動(dòng)反應(yīng)加0.9ml試劑II延遲時(shí)間5分鐘測(cè)試時(shí)間3分鐘測(cè)試儀 Shimadzu UV-1604)計(jì)算計(jì)算出測(cè)試時(shí)間段每分鐘平均吸光度的變化(ΔA/min)。
ΔA/min=(ΔA1/min+ΔA2/min+ΔA3/min)3]]>ADA(U/L)=ΔA/min×Tv×1000ϵ×Sv×L]]>一個(gè)ADA活性單位(U/L)定義為在本測(cè)試特定條件下每分鐘將1微摩爾(μmole)腺苷脫氨成為次黃苷。
ε毫摩爾消光系數(shù) 在本法條件下供氫體ADOS氧化凝聚產(chǎn)物ε＝27.2mM-1cm-1ADPS氧化凝聚產(chǎn)物ε＝27.9mM-1cm-1ALPS氧化凝聚產(chǎn)物ε＝41.3mM-1cm-1TODB氧化凝聚產(chǎn)物ε＝22.5mM-1cm-1TOPS氧化凝聚產(chǎn)物ε＝22.5mM-1cm-1TOOS氧化凝聚產(chǎn)物ε＝32.2mM-1cm-1Tv總反應(yīng)體積(ml)Sv樣品體積(ml)L比色杯光徑(cm)
5)結(jié)果不管選擇哪種苯胺類(lèi)供氫體化合物，ADA線(xiàn)性范圍3-600(U/L)4.ADA測(cè)定試劑盒產(chǎn)品名稱(chēng)腺苷脫氨酶(ADA)試劑盒型號(hào)生化試劑產(chǎn)品代碼DC-ADA規(guī)格試劑I(R1)50ml，試劑II(R2)25ml，ADA正常血清(凍干)1ml/1瓶，ADA異常血清(凍干)1ml/1瓶，275測(cè)試/盒(羅氏Cobas Mira生化分析儀)。
檢測(cè)介質(zhì)血清、血漿、胸腹水或腦脊液適用于體外診斷用途腺苷脫氨酶(ADA)試劑盒適用于體外定量測(cè)定人血清、血漿、胸腹水或腦脊液中的腺苷脫氨酶(Adenosine Deaminase，ADA)活性。
概述腺苷脫氨酶(adenosine deaminase，ADA)將腺苷(Adenosine)脫氨產(chǎn)生次黃苷(Inosine)和氨(NH3)。ADA廣泛存在人體各組織中，尤以小腸、肝、脾最多，血液細(xì)胞內(nèi)酶活性為血清中的40～70倍，故測(cè)定時(shí)應(yīng)避免溶血。血清ADA正常參考值3-30U/L。ADA異常增高見(jiàn)于1.肝臟病-ADA活性是反映肝損傷的敏感指標(biāo)，可作為肝功能常規(guī)檢查項(xiàng)目之一，與ALT或GGT(r-GT)等組成肝酶譜能較全面地反映肝臟病的酶學(xué)改變。血清中ADA活性的測(cè)定可1)用于判斷急性肝損傷及殘留病變急性黃疸性肝炎，肝細(xì)胞出現(xiàn)損傷，在黃疸尚未出現(xiàn)前，可見(jiàn)增高。因ADA分子量較ALT小，當(dāng)肝細(xì)胞輕度受損時(shí)ADA比ALT先釋入血內(nèi)。ADA在反映急性肝病的殘存病變時(shí)優(yōu)于ALT。
2)協(xié)助診斷慢性肝病和有助于肝纖維的診斷慢性肝炎活動(dòng)期，慢性遷延性肝炎和肝硬化ADA升高明顯。ADA在反映慢性肝損傷時(shí)優(yōu)于ALT.慢性肝病，尤其是肝硬變時(shí)ADA陽(yáng)性率高達(dá)90％，其酶活性以肝硬變＞慢性肝炎，并隨肝纖維化程度增加而遞增，失代償期肝硬變ADA活性明顯高于代償期肝硬變。
3)有助于黃疸的鑒別溶血性黃疸，肝細(xì)胞性黃疸ADA升高。但阻塞性黃疸時(shí)ADA升高不明顯，因此在判斷黃疸性質(zhì)時(shí)有一定的鑒別價(jià)值。
2.結(jié)核性胸腹水-結(jié)核性胸水中ADA活性明顯高于其他原因引起的胸水，因此可測(cè)定胸水中的ADA來(lái)進(jìn)行鑒別診斷。
3.傷寒-由傷寒引發(fā)高熱血清ADA活性顯著升高。而高燒有及他原因造成ADA卻不增高。
4.腦膜炎-腦脊液ADA檢測(cè)可作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病診斷和鑒別診斷的重要指標(biāo)，結(jié)核性腦膜炎ADA活性顯著增高，病毒性腦炎不增高。
原理
(λmax 556nm)應(yīng)用ADA偶聯(lián)嘌呤核苷磷酸化酶(Purine nucleoside phosphorylase，PNP)，黃嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase，XOD)和過(guò)氧化物酶(Peroxidase，POD)反應(yīng)連續(xù)監(jiān)測(cè)法。ADA酶解腺苷(Adenosine)脫氨產(chǎn)生次黃苷(Inosine)；再通過(guò)偶聯(lián)PNP的作用，生成次黃嘌呤(Hypoxanthine)；后者在XOD氧化下生成尿酸(Uric Acid)和過(guò)氧化氫(H2O2)；最后在POD的作用下H2O2再與N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-3-甲基苯胺[N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3-methylaniline(EHSPT或TOOS)]、4-氨基安替比林(4-aminoantipyrine，4-AA)反應(yīng)(Trinder氏反應(yīng))，生成紫紅色的有色醌(Quinone dye)。通過(guò)動(dòng)態(tài)測(cè)量有色醌550nm處吸光度上升的速度來(lái)測(cè)算ADA的活性。
試劑盒組份每個(gè)腺苷脫氨酶(ADA)試劑盒含有1.試劑I(R1) 50ml/1瓶2.試劑II(R2)25ml/1瓶3.ADA正常血清(凍干) 1ml/1瓶4.ADA異常血清(凍干) 1ml/1瓶5.檢驗(yàn)證明6.1份使用說(shuō)明。
試劑組成試劑I Trizma-base緩沖液pH7.6 50mmol/L4-AA 2mmol/LPNP 100U/LXOD 200U/LPOD 600U/L試劑II Tris-HCl緩沖液pH4.050mmol/LAdenosine10mmol/LTOOS 2mmol/LADA質(zhì)控血清 牛腸ADA和人血清試劑配制本試劑盒為液體雙試劑，可直接上機(jī)使用。ADA質(zhì)控血清需要溶于1ml蒸餾水中方可使用。
試劑的穩(wěn)定與貯存期試劑30℃下可避光保存一周，室溫18-19℃下一月，2-8℃一年，嚴(yán)禁冷凍。凍干ADA質(zhì)控血清2-8℃或冷凍保存一年。溶化后的ADA質(zhì)控血清30℃下保存至少二周，2-8℃或冷凍保存期更長(zhǎng)。
樣本收集血清、胸腹水或腦脊液。用新鮮和非溶血的血清或血漿。如果有需要可以進(jìn)行抗凝處理。生物樣品中ADA在4℃條件下穩(wěn)定一周。
試驗(yàn)參數(shù)與操作步驟溫度37℃波長(zhǎng)550nm比色杯光徑 1.0cm測(cè)試方法速率法反應(yīng)方向正予孵育 0.05ml樣品+1.8ml R1(或依比例混勻)予孵育時(shí)間 3分鐘啟動(dòng)反應(yīng)加0.9ml R2(或依比例混勻)樣品/試劑 1∶54延遲時(shí)間5分鐘測(cè)試時(shí)間3分鐘空白參照水總反應(yīng)時(shí)間 8分鐘測(cè)試儀 Shimadzu UV-160計(jì)算計(jì)算出測(cè)試時(shí)間段每分鐘平均吸光度的變化(ΔA/min)。
ΔA/min=(ΔA1/min+ΔA2/min+ΔA3/min)3]]>ADA(U/L)=ΔA/min×Tv×1000ϵ×Sv×L]]>一個(gè)ADA活性單位(U/L)定義為在本測(cè)試特定條件下每分鐘將1μmole腺苷脫氨成為次黃苷。
ε毫摩爾消光系數(shù) 在本法條件下有色醌ε＝32.2(1cm光徑)Tv總反應(yīng)體積(ml)Sv樣品體積(ml)L比色杯光徑(cm)當(dāng)比色杯光徑1cm時(shí)ADA(U/L)＝ΔA/min×1708當(dāng)比色杯光徑0.5cm時(shí)ADA(U/L)＝ΔA/min×3416注意事項(xiàng)1.如果受限于分析儀比色杯容積限制，可以依比例(詳見(jiàn)試驗(yàn)參數(shù))調(diào)整R1、樣本及R2使用量。0.18ml R10.005ml 樣本0.09ml R2的比例曾應(yīng)用于羅氏Cobas Mira生化分析儀，其結(jié)果和Shimadzu UV-160分光光度儀無(wú)顯著性差異。
2.如果受限于分析儀只能接受單試劑，則可以在測(cè)試前依比例(詳見(jiàn)試驗(yàn)參數(shù))混合R1及R2成為一混合劑。
3.若樣品ADA＞600U/L，也即用1cm比色杯光徑反應(yīng)吸光值變化大于0.35A/min，須用生理鹽水稀釋樣品，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。
4.如保存不當(dāng)，試劑發(fā)現(xiàn)有混濁時(shí)，應(yīng)棄用。
試劑性能線(xiàn)性范圍0-600 ADA(U/L)(γ2＞0.99)精密度批內(nèi)CV 6.4％和批間CV 7.5％特異性血清、30mg/dL膽紅素、200mg/dL血紅蛋白、500mg/dL甘油三酯和4mg/dL抗壞血酸對(duì)本法無(wú)干擾。
參考值正常人血清ADA活性參考值4-24U/L，建議各實(shí)驗(yàn)室根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)條件自行訂定正常人血清ADA活性范圍。
儀器全自動(dòng)、半自動(dòng)生化分析儀或可見(jiàn)光分光光度計(jì)產(chǎn)品特征液體雙試劑特異性測(cè)定ADA測(cè)定精密度高抗干擾能力強(qiáng)適合自動(dòng)化快速測(cè)定參考文獻(xiàn)參閱實(shí)申參考資料。
權(quán)利要求
1.一種測(cè)定生物樣本中腺苷脫氨酶活性的方法，其特征是借助腺苷脫氨酶將腺苷脫氨產(chǎn)生次黃苷，通過(guò)次黃苷偶聯(lián)嘌呤核苷磷酸化酶和黃嘌呤氧化酶酶促反應(yīng)生成過(guò)氧化氫，過(guò)氧化氫在過(guò)氧化物酶的作用下使苯胺類(lèi)供氫體和4-氨基安替比林偶聯(lián)物凝聚成有色產(chǎn)物，通過(guò)連續(xù)反應(yīng)和動(dòng)態(tài)觀察有色產(chǎn)物的產(chǎn)量，從而測(cè)定腺苷脫氨酶的活性。
2.一種按權(quán)利要求1制造的測(cè)定生物樣本中腺苷脫氨酶活性的產(chǎn)品，其特征是借助腺苷脫氨酶將腺苷脫氨產(chǎn)生次黃苷，通過(guò)次黃苷偶聯(lián)嘌呤核苷磷酸化酶和黃嘌呤氧化酶酶促反應(yīng)生成過(guò)氧化氫，過(guò)氧化氫在過(guò)氧化物酶的作用下使苯胺類(lèi)供氫體和4-氨基安替比林偶聯(lián)物凝聚成有色產(chǎn)物，通過(guò)連續(xù)反應(yīng)和動(dòng)態(tài)觀察有色產(chǎn)物的產(chǎn)量，從而測(cè)定腺苷脫氨酶的活性。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定生物樣本中腺苷脫氨酶活性的方法，其特征是苯胺類(lèi)供氫體可為以下任何一種N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3-methoxylaniline(ADOS)N-Ethyl-N-(3-sulfopropyl)-3-methoxyaniline(ADPS)N-Ethyl-N-(3-sulfopropyl)aniline(ALPS)N，N-Bis(4-sulfobutyl)-3-methylaniline(TODB)N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3-methylaniline(TOOS)N-Ethyl-N-(3-sulfopropyl)-3-methylaniline(TOPS)。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制造測(cè)定生物樣本中腺苷脫氨酶活性的產(chǎn)品，其特征是苯胺類(lèi)供氫體可為以下任何一種N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3-methoxylaniline(ADOS)N-Ethyl-N-(3-sulfopropyl)-3-methoxyaniline(ADPS)N-Ethyl-N-(3-sulfopropyl)aniline(ALPS)N，N-Bis(4-sulfobutyl)-3-methylaniline(TODB)N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3-methylaniline(TOOS)N-Ethyl-N-(3-sulfopropyl)-3-methylaniline(TOPS)。
全文摘要
Heinz(1980)借助腺苷脫氨酶將腺苷脫氨產(chǎn)生次黃苷，通過(guò)次黃苷偶聯(lián)嘌呤核苷磷酸化酶和黃嘌呤氧化酶酶促反應(yīng)生成過(guò)氧化氫，在過(guò)氧化氫酶和醛脫氫酶的作用下，測(cè)量334nm處NADPH吸光度上升的速率來(lái)測(cè)算腺苷脫氨酶活性。該法缺點(diǎn)是試劑成本過(guò)高。本發(fā)明引入Trinder氏反應(yīng)，將次黃苷偶聯(lián)酶促反應(yīng)生成的過(guò)氧化氫在過(guò)氧化物酶的作用下使苯胺類(lèi)供氫體和4－氨基安替比林偶聯(lián)物凝聚成有色產(chǎn)物。通過(guò)連續(xù)反應(yīng)和動(dòng)態(tài)觀察有色產(chǎn)物的產(chǎn)量，從而測(cè)定腺苷脫氨酶的活性。本發(fā)明簡(jiǎn)化了Heinz氏測(cè)定腺苷脫氨酶的次黃苷偶聯(lián)酶促反應(yīng)體系，降低了試劑成本。本發(fā)明將苯胺類(lèi)化合物ADOS、ADPS、ALPS、TODB、TOOS和TOPS用作Trinder氏反應(yīng)的供氫體，增加了反應(yīng)的靈活性。本發(fā)明還涉及用于進(jìn)行上述方法的試劑盒。
文檔編號(hào)G01N21/77GK1693881SQ20051005320
公開(kāi)日2005年11月9日 申請(qǐng)日期2005年2月6日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月6日
發(fā)明者蔡楓 申請(qǐng)人:浙江亞克藥業(yè)有限公司, 蔡楓