專(zhuān)利名稱(chēng)：牛、羊、豬口蹄疫多毒株通用滅活疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種牛、羊、豬口蹄疫多毒株通用滅活疫苗。
口蹄疫是偶蹄動(dòng)物牛、羊、豬等多種家畜烈性傳染病。因?yàn)槠淞餍型o畜牧業(yè)和國(guó)民經(jīng)濟(jì)帶來(lái)重大損失，稱(chēng)為“政治經(jīng)濟(jì)病”，被國(guó)際獸疫局列為A類(lèi)傳染病第一號(hào)。各國(guó)政府都十分重視本病的防治工作。
注射疫苗是防治本病的重要手段之一。我國(guó)現(xiàn)行口蹄疫滅活疫苗，分牛、羊用和豬用兩類(lèi)。分別用單一毒株制苗，其抗原的代表性不足，且抗原量少，免疫效力較低。且通用性較差，對(duì)牛、羊、豬共發(fā)的口蹄疫病的預(yù)防性較差。
本發(fā)明的目的是為了提供一種利用牛、羊、豬多個(gè)毒株混合制苗，提高了抗原含量，混合制苗的抗原性好、免疫效力高，可適于牛、羊、豬通用的多毒株滅活疫苗。
本發(fā)明的目的可通過(guò)如下措施來(lái)實(shí)現(xiàn)一種牛、羊、豬口蹄疫多毒株通用滅活疫苗是由至少三種口蹄疫病毒的O型毒株經(jīng)常規(guī)疫苗配制工藝配制而制成，它由下述重量百分含量的原料制成口蹄疫病毒(Aphthae Eizooticae Aviariae)OA5820-30％口蹄疫病毒(Aphthae Eizooticae Aviariae)OMII20-30％口蹄疫病毒(Aphthae Eizooticae Aviariae)OY-80 20-30％乳化劑3-8％藥用白油22-32％。所述的乳化劑為吐溫-80，司本-80。
上述口蹄疫病毒OA58、OMⅡ、OY-80均由農(nóng)業(yè)部指定的蘭州獸醫(yī)研究所提供。OA58的商品代號(hào)為AV97，是從新疆阿克蘇黃牛58年口蹄疫病毒中分離出的；OMⅡ的商品代號(hào)為AV100，是口蹄疫的鼠化毒；OY-80本身就是商品代號(hào)，是從廣西融水豬口蹄疫病毒分離出來(lái)的。OA58和OMⅡ在中國(guó)獸藥監(jiān)查所、中國(guó)微生物保藏管理委員會(huì)獸醫(yī)微生物中心編寫(xiě)1992年出版的《中國(guó)獸醫(yī)菌種目錄》的141、142頁(yè)上公開(kāi)其名稱(chēng)和成份。OY-80在農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)公開(kāi)的《中華人民共和國(guó)獸用生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》第20頁(yè)公開(kāi)其名稱(chēng)和成份。
本發(fā)明的種毒培養(yǎng)是將三種毒株分別用BHK-21傳代細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)，其傳代培養(yǎng)過(guò)程如下1、種細(xì)胞生產(chǎn)用BHK-21傳代細(xì)胞，中國(guó)獸藥監(jiān)察所70年代由國(guó)外引入。種細(xì)胞保存于液氯中。細(xì)胞化凍復(fù)蘇后懸浮于營(yíng)養(yǎng)液中。
細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)液E-MEM培養(yǎng)基0.5％水解乳蛋白歐氏液(以上兩種溶液等量混合)小牛血清5-10％7.5％碳酸氫鈉調(diào) PH7.4細(xì)胞濃度每毫升10萬(wàn)個(gè)，36-37℃培養(yǎng)48小時(shí)長(zhǎng)成致密單層備用。
2、細(xì)胞擴(kuò)大細(xì)胞經(jīng)數(shù)次擴(kuò)大培養(yǎng)，最后用15立升園瓶旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)。
3、病毒接種將已生長(zhǎng)良好細(xì)胞棄去營(yíng)養(yǎng)液分別接種含有不同毒株病毒的維持液繼續(xù)培養(yǎng)，維持液為0.5％E-LH溶液，不含MEM和牛血清，PH7.6，經(jīng)10-20小時(shí)細(xì)胞產(chǎn)生病變、脫落，即可收獲。病毒接種于BHK21細(xì)胞單層，連續(xù)繼代培養(yǎng)12代以上，第六代開(kāi)始用乳鼠法測(cè)定收獲液毒價(jià)均在8.0以上，其中第八代起達(dá)LD608.25-9.0。
4、病毒滅活病毒用BEI滅活，經(jīng)用乳鼠和動(dòng)物測(cè)定滅活完全后用于配苗。
本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)具有如下優(yōu)點(diǎn)1、本發(fā)明利用牛、羊、豬的多個(gè)毒株混合制苗，提高了抗原含量，抗原性好、免疫效力高。
本發(fā)明的免疫原性測(cè)定將接種病毒的細(xì)胞收獲液制苗，免疫黃牛進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，攻毒用流行毒株10000個(gè)發(fā)病量，試驗(yàn)三批各5頭牛，總保護(hù)15/15。未免疫對(duì)照牛3/3發(fā)病。
本發(fā)明的疫苗性能測(cè)定最小免疫量測(cè)定疫苗3批(9901,9902,9903)按用量1/3即1.0毫升免疫牛，30天用10000全數(shù)發(fā)病量強(qiáng)毒進(jìn)行攻擊，三批分別保護(hù)4/5,4/5,4/5，對(duì)照3/3發(fā)病，說(shuō)明1/3劑量即可達(dá)到農(nóng)業(yè)部部頒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
疫苗效力檢驗(yàn)按規(guī)定效檢20批，每批免疫牛5頭，免疫量3毫升，攻毒量2.0毫升含10000全數(shù)發(fā)病量，免疫牛全部保護(hù)，對(duì)照牛全部發(fā)病，即規(guī)定攻毒量可保護(hù)100％。
對(duì)豬效力試驗(yàn)疫苗9901批、9905批、9919批分別免疫豬5頭，免疫后28天用豬源強(qiáng)毒OY80進(jìn)行攻擊，均5/5保護(hù)，說(shuō)明對(duì)豬保護(hù)力良好。
免疫牛血清抗體測(cè)定
據(jù)資料介紹PD50達(dá)1∶128以上即可100％抗擊強(qiáng)毒攻擊。從上述結(jié)果可看出，疫苗有良好免疫效果。
2、本發(fā)明的疫苗無(wú)毒、安全。
本發(fā)明還將結(jié)合實(shí)施例作進(jìn)一步詳述實(shí)施例1一種牛、羊、豬口蹄疫多毒株通用滅活疫苗由下述重量百分含量的原料經(jīng)常規(guī)疫苗配制工藝配制而成口蹄疫病毒OA58 20％、口蹄疫病毒OMⅡ20％、口蹄疫病毒OY-880 30％、吐溫-80 6％、藥用白油24％。
實(shí)施例2一種牛、羊、豬口蹄疫多毒株通用滅活疫苗由下述重量百分含量的原料經(jīng)常規(guī)疫苗配制工藝配制而成口蹄疫病毒OA58 25％、口蹄疫病毒OMⅡ25％、口蹄疫病毒OY-80 20％、司本-80 3％、藥用白油27％。
實(shí)施例3一種牛、羊、豬口蹄疫多毒株通用滅活疫苗由下述重量百分含量的原料經(jīng)常規(guī)疫苗配制工藝配制而成口蹄疫病毒OA58 30％、口蹄疫病毒OMⅡ20％、口蹄疫病毒OY-80 25％、司本-80 3％、藥用白油22％。
權(quán)利要求
1.一種牛、羊、豬口蹄疫多毒株通用滅活疫苗，其特征在于該疫苗是由至少三種口蹄疫病毒的O型毒株經(jīng)常規(guī)疫苗配制工藝配制而成，它由下述重量百分含最的原料制成口蹄疫病毒(Aphthae Eizooticae Aviariae)OA5820-30％口蹄疫病毒(Aphthae Eizooticae Aviariae)OMⅡ20-30％口蹄疫病毒(Aphthae Eizooticae Aviariae)OY-80 20-30％乳化劑3-8％藥用白油22-32％。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種牛、羊、豬口蹄疫多毒株通用滅活疫苗,該疫苗是由至少三種口蹄疫病毒的O型毒株和乳化劑和藥用白油經(jīng)常規(guī)疫苗配制工藝配制而成;本發(fā)明利用牛、羊、豬多個(gè)毒株混合制苗,提高了抗原含量,混合制苗的抗原性好、免疫效力高。
文檔編號(hào)A61K39/135GK1321516SQ0011380
公開(kāi)日2001年11月14日 申請(qǐng)日期2000年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2000年4月28日
發(fā)明者田連信, 呂紅 申請(qǐng)人:中牧實(shí)業(yè)股份有限公司蘭州生物藥廠