專利名稱：一種犬、狐、貂用抗病毒免疫球蛋白及生產(chǎn)工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開了一種犬、狐、貂用抗病毒免疫球蛋白及生產(chǎn)工藝，涉及動物用生物藥品生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域。
在毛皮經(jīng)濟(jì)動物中，主要的病毒性傳染病是犬瘟熱、細(xì)小病毒性腸炎、狂犬病、犬肝炎(狐貍腦炎)、犬喉氣管炎、犬副流感、偽狂犬病和冠狀病毒性腸炎等，特別是犬溫?zé)岷图?xì)小病毒腸炎的發(fā)病率和死亡率都很高，對于毛皮經(jīng)濟(jì)動物的養(yǎng)殖造成很大損失；常規(guī)的辦法是進(jìn)行病毒疫苗的免疫預(yù)防接種，但現(xiàn)有的疫苗保護(hù)率都不高，只能達(dá)到80％左右，免疫效果不理想。病毒性疾病與其它的傳染病不一樣，由于病毒侵襲和生長增殖的特殊性，即必需在活著的靶細(xì)胞中增殖，所以到現(xiàn)在為止，還沒有找到一種能在體內(nèi)細(xì)胞內(nèi)特異性殺滅病毒的藥品。
本發(fā)明提供一種犬、狐、貂用抗病毒免疫球蛋白及生產(chǎn)工藝，利用馬、驢和騾來生產(chǎn)犬、狐、貂用抗病毒免疫球蛋白，目的是解決毛皮經(jīng)濟(jì)動物病毒性傳染病的緊急預(yù)防和緊急治療的問題。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案如下將犬、狐、貂傳染病毒(至少一種)的弱毒培養(yǎng)液濃縮，病毒的TCID50效價(jià)在105.0以上，經(jīng)差異離心法把病毒提純濃縮50～120倍，加福氏完全佐劑，按最佳途徑和計(jì)量經(jīng)3次對馬(或驢、騾)進(jìn)行免疫后，待抗體效價(jià)達(dá)最高峰值時(shí)采血，分離血清，用辛酸法分離提取純化抗病毒的特異性免疫球蛋白，即IgG，含量20mg/ml(±2％)。
本發(fā)明的積極效果在于通過馬、驢、騾免疫，防止了同種毛皮經(jīng)濟(jì)動物之間某些其它病毒性傳染病的人為傳染，安全性好，用馬生產(chǎn)的犬、狐和貂用的抗病毒免疫球蛋白的中和效價(jià)為100倍稀釋的免疫球蛋白的中和效價(jià)為103.4(即2512倍)，200倍稀釋的免疫球蛋白的中和效價(jià)為1023(即199倍)。通過血清提取免疫球蛋白，呈無色透明液體，既可以冰凍保存(-20℃以上)，也可以冷藏保存(+4℃～+12℃)儲運(yùn)方便。
在臨床試用效果較好，本品在小動物門診進(jìn)行了緊急預(yù)防和緊急治療試驗(yàn)，同群犬中5只發(fā)生了腹瀉，經(jīng)臨床診斷和電鏡檢測，均確診為細(xì)小病毒性腸炎，對其余未發(fā)病的54只幼犬用抗病毒二聯(lián)免疫球蛋白(抗犬瘟熱和抗細(xì)小病毒)進(jìn)行了緊急預(yù)防注射，經(jīng)觀察未再發(fā)生腸炎。對32例犬瘟熱進(jìn)行緊急治療，治愈29例，治愈率達(dá)90.6％，對43例細(xì)小病毒腸炎病犬進(jìn)行了緊急治療，治愈40例，治愈率達(dá)93％。
下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明實(shí)施例1將犬瘟熱弱毒培養(yǎng)液(TCID50效價(jià)在105.625以上)和細(xì)小病毒弱毒培養(yǎng)液(TCID50效價(jià)在105.0以上)用冷凍超速離心機(jī)差速離心法，分別將兩種病毒提純濃縮100倍。用兩種病毒的等量混合液與福氏完全佐劑等量制成免疫試劑，給健康馬免疫接種。第一次基礎(chǔ)免疫，皮內(nèi)接種，8ml/匹，分8點(diǎn)注射；第二次加強(qiáng)免疫，淋巴結(jié)接種，8ml/匹，分8點(diǎn)注射；第三次高度免疫，靜脈緩慢注射，3ml/匹，兩次間隔一周，最后一次免疫后14天左右采血檢測抗體效價(jià)，待瓊脂擴(kuò)散效價(jià)達(dá)到32倍以上時(shí)，在無菌條件下放血并分離血清。在血清中加入倍量的pH4.0的0.06M/L的醋酸鹽緩沖液，室溫下強(qiáng)力攪拌，同時(shí)按血清量計(jì)算，以7.5％的比例滴加化學(xué)純級的辛酸，4000轉(zhuǎn)/分離心30分鐘，過濾取上清液裝入透析袋，在pH7.4的0.015M/L的磷酸鹽緩沖液中透析48小時(shí)，再用除菌濾器抽濾，取樣檢測瓊脂擴(kuò)散效價(jià)在16倍以上時(shí)，蛋白含量在20mg/ml(±2％)時(shí)，在無菌室分裝，即得本發(fā)明產(chǎn)品。
實(shí)施例2將犬瘟熱弱毒培養(yǎng)液(TCID50效價(jià)在105.625以上)、細(xì)小病毒腸炎弱毒培養(yǎng)液(TCID50效價(jià)在105.0以上)、犬肝炎(狐貍腦炎)腺病毒弱毒培養(yǎng)液(TCID50效價(jià)在104.5以上)、犬副流感病毒弱毒培養(yǎng)液(TCID50效價(jià)在104.5以上)、狂犬病毒弱毒培養(yǎng)液(LD50效價(jià)在105.0以上)和偽狂犬病毒弱毒培養(yǎng)液(TCID50效價(jià)在105.0以上)六種弱毒培養(yǎng)液，提純濃縮，對驢或騾進(jìn)行免疫，按實(shí)施例1中所述得方法規(guī)程進(jìn)行，即得本發(fā)明產(chǎn)品。
實(shí)施例3根據(jù)實(shí)際需要可增減弱毒培養(yǎng)液的種類，按實(shí)施例1中敘述的方法規(guī)程進(jìn)行，就可得到相應(yīng)的犬狐貂用的抗病毒免疫球蛋白。
權(quán)利要求
1.一種犬、狐、貂用抗病毒免疫球蛋白，其特征在于用馬或驢、騾經(jīng)免疫生產(chǎn)犬、狐、貂用抗病毒免疫球蛋白。
2.一種犬、狐、貂用抗病毒免疫球蛋白的生產(chǎn)工藝，包括將犬、狐、貂傳染病毒的弱毒培養(yǎng)液濃縮，加福氏完全佐劑，對馬或驢或騾進(jìn)行免疫，待血清中球蛋白的瓊脂擴(kuò)散效價(jià)達(dá)到最高峰時(shí)采血，分離血漿，用辛酸法分離提取免疫球蛋白。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于免疫馬或驢或騾時(shí)采取皮內(nèi)、穴位、靜脈分三次接種，每兩次間隔一周。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于犬、狐、貂傳染病毒的弱毒培養(yǎng)液濃縮為50～120倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于犬、狐、貂傳染病毒的弱毒培養(yǎng)液包括犬瘟熱、細(xì)小病毒性腸炎、狂犬病、犬肝炎(狐貍腦炎)、犬喉氣管炎、犬副流感、偽狂犬病和冠狀病毒性腸炎中的一種或幾種混合物。
全文摘要
本發(fā)明公開一種犬、狐、貂用抗病毒免疫球蛋白及生產(chǎn)工藝,將犬、狐、貂傳染病毒的弱毒培養(yǎng)液濃縮,加福氏完全佐劑,對馬或驢、騾進(jìn)行免疫,待血清中球蛋白的瓊脂擴(kuò)散效價(jià)達(dá)到最高峰時(shí)采血,分離血漿,用辛酸法分離提取免疫球蛋白。通過馬、驢、騾免疫,防止了同種毛皮經(jīng)濟(jì)動物之間某些其它病毒性傳染病的人為傳染。安全性好,效價(jià)高;通過血清提取免疫球蛋白,呈無色透明液體,既可以冰凍保存(－20℃以上),也可以冷藏保存(+4℃～+12℃)儲運(yùn)方便。
文檔編號A61K39/395GK1296851SQ0012329
公開日2001年5月30日 申請日期2000年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2000年11月18日
發(fā)明者楊盛華, 李潤萍, 胡奎 申請人:楊盛華, 李潤萍, 胡奎