專利名稱：聯(lián)苯雙酯作為腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及聯(lián)苯雙酯作為多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑的新用途，特別是與抗腫瘤藥物合用治療發(fā)生多藥耐藥的腫瘤，提高腫瘤細(xì)胞對(duì)抗腫瘤藥的敏感性的新用途。
聯(lián)苯雙酯片劑和滴丸對(duì)慢性肝炎有顯著降谷丙轉(zhuǎn)氨酶(SGPT)效果，對(duì)降低甲胎蛋白(α-FP)、殘留黃疸以及轉(zhuǎn)肽酶均有一定療效，亦能提高白蛋白比例，以及改善肝炎主要癥狀，例如厭食、疼痛和腸胃氣脹。從1981年開始，聯(lián)苯雙酯被中華人民共和國(guó)應(yīng)用于治療慢性肝炎，尤其是乙型肝炎及藥物誘導(dǎo)性肝損傷。聯(lián)苯雙酯收載于1995年中華人民共和國(guó)藥典。
聯(lián)苯雙酯用于治療肝炎時(shí)可以為片劑或滴丸，滴丸口服后吸收率比片劑高1-2倍。
聯(lián)苯雙酯還具有一定的抗腫瘤作用，能夠劑量依賴性的抑制腫瘤組織DNA和蛋白質(zhì)的合成。此外，臨床上聯(lián)苯雙酯還能夠與甲氨喋呤、6-巰基嘌呤等抗腫瘤藥合用，而減輕這些抗腫瘤藥對(duì)肝臟的損害。
腫瘤細(xì)胞經(jīng)過化療后產(chǎn)生的獲得性耐藥以及某些腫瘤細(xì)胞本身具有內(nèi)在耐藥性是腫瘤化療失敗的重要原因之一。產(chǎn)生多藥耐藥的機(jī)制非常復(fù)雜，多藥耐藥糖蛋白P-gp的過度表達(dá)為主要機(jī)制，許多化療藥物都是該膜蛋白的底物，例如長(zhǎng)春堿類、蒽環(huán)類、表鬼臼毒素類、紫杉烷類等。逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥性從而使腫瘤細(xì)胞恢復(fù)對(duì)化療劑的敏感性具有非常重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。迄今已經(jīng)發(fā)現(xiàn)不少化合物在體外及體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中具有很強(qiáng)的逆轉(zhuǎn)MDR作用，如包括維拉帕米的鈣通道阻滯劑、鈣調(diào)蛋白拮抗劑、環(huán)孢菌素類、喹啉類、抗雌激素類，然而運(yùn)用到臨床上，除對(duì)某些血液系統(tǒng)的腫瘤耐藥有較為肯定的逆轉(zhuǎn)作用外，對(duì)實(shí)體瘤耐藥的逆轉(zhuǎn)作用很不理想。一般認(rèn)為，這些化合物在人體可耐受劑量下在體內(nèi)不能達(dá)到有效的逆轉(zhuǎn)濃度，而一旦加大劑量使其血藥濃度達(dá)到體外試驗(yàn)中具有逆轉(zhuǎn)活性的濃度時(shí)，就會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的毒副作用，或者逆轉(zhuǎn)劑與抗腫瘤藥物合用時(shí)了改變抗腫瘤藥物的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，從而產(chǎn)生不可預(yù)見的毒副反應(yīng)。例如，本發(fā)明中作為陽性對(duì)照的維拉帕米，雖然在體外有很強(qiáng)的腫瘤耐藥逆轉(zhuǎn)活性，但是應(yīng)用到體內(nèi)卻發(fā)現(xiàn)在未達(dá)逆轉(zhuǎn)耐藥濃度時(shí)就產(chǎn)生了嚴(yán)重的心血管毒性，因而限制了其在臨床上應(yīng)用為多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑。所以，開發(fā)作用強(qiáng)且毒副作用小的多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑仍然是研究的主要方向。
為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，本發(fā)明的主要目的在于提供一種聯(lián)苯雙酯在制備腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑中的新用途。
本發(fā)明的另一目的在于提供一種聯(lián)苯雙酯和抗腫瘤藥物的聯(lián)用。
所述的抗腫瘤藥物包括為P-gp底物的抗腫瘤藥物。所述的P-gp底物的抗腫瘤藥物包括蒽環(huán)類、長(zhǎng)春堿類、紫杉烷類、鬼臼類，以及米托蒽醌、放線菌素D、絲裂霉素C。所述的腫瘤包括具有P-糖蛋白過度表達(dá)的內(nèi)在多藥耐藥性以及獲得多藥耐藥性實(shí)體腫瘤和血液系統(tǒng)腫瘤。
因此，本發(fā)明涉及的聯(lián)苯雙酯可以用于預(yù)防和逆轉(zhuǎn)腫瘤的多藥耐藥性。換言之，將含有聯(lián)苯雙酯的藥物組合物向需預(yù)防和/或治療的宿主給藥。
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)聯(lián)苯雙酯在體外、體內(nèi)均有逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥性的作用。
在體外，聯(lián)苯雙酯能夠逆轉(zhuǎn)獲得性多藥耐藥細(xì)胞株KBv200、MCF-7/Adr細(xì)胞對(duì)長(zhǎng)春新堿(VCR)和阿霉素(Adr)的耐藥性，聯(lián)苯雙酯還能夠逆轉(zhuǎn)KBv200細(xì)胞對(duì)紫杉醇和足葉乙甙(VP-16)的耐藥性，但是對(duì)上述兩種細(xì)胞各自的敏感細(xì)胞株沒有影響。聯(lián)苯雙酯還能逆轉(zhuǎn)具有內(nèi)在多藥耐藥性細(xì)胞株Bel7402細(xì)胞對(duì)VCR和Adr的交叉耐藥性。
KBv200細(xì)胞為人口腔上皮癌KB細(xì)胞經(jīng)VCR篩選得到的多藥耐藥細(xì)胞株，對(duì)VCR和Adr的耐藥性分別是敏感KB細(xì)胞的139和35倍。加入聯(lián)苯雙酯后，能逆轉(zhuǎn)KBv200細(xì)胞對(duì)VCR和Adr的耐藥性，并呈明顯的劑量依賴關(guān)系。50μmol/L聯(lián)苯雙酯使KBv200細(xì)胞VCR的IC50由3917nmol/L降至287nmol/L，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為13.7倍，使Adr的IC50由1055nmol/L降至70nmol/L，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為15倍。而聯(lián)苯雙酯對(duì)KB細(xì)胞Adr和VCR的IC50卻沒有影響。
KBv200細(xì)胞除對(duì)VCR和Adr耐藥外，對(duì)紫杉醇和VP-16也有耐藥性，其耐藥倍數(shù)分別是KB細(xì)胞的137和11倍。聯(lián)苯雙酯同樣能夠劑量依賴性的逆轉(zhuǎn)紫杉醇和VP-16的耐藥性，在50μmol/L時(shí)逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為25.7和2.3。聯(lián)苯雙酯對(duì)紫杉醇和VP-16對(duì)KB細(xì)胞的敏感性也沒有影響。
MCF-7/Adr細(xì)胞為人乳腺癌MCF-7細(xì)胞經(jīng)Adr篩選得到的另外一種多藥耐藥細(xì)胞株，對(duì)VCR和Adr的耐藥性分別是MCF-7細(xì)胞的4和89倍。加入聯(lián)苯雙酯后，能逆轉(zhuǎn)MCF-7/Adr細(xì)胞的多藥耐藥性，并呈現(xiàn)明顯的劑量依賴關(guān)系。50μmol/L聯(lián)苯雙酯使MCF-7/Adr細(xì)胞VCR的IC50由2125nmol/L降至459nmol/L，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為4.6倍，使Adr的IC50由28750nmol/L降至3757nmol/L，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為7.7倍。聯(lián)苯雙酯卻不影響VCR和Adr對(duì)MCF-7細(xì)胞的敏感性。
由此可見，聯(lián)苯雙酯能夠逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的獲得多藥耐藥性。對(duì)于具有內(nèi)在多藥耐藥性的腫瘤細(xì)胞，聯(lián)苯雙酯也有一定的逆轉(zhuǎn)作用，并且也具有明顯的劑量依賴性。人肝癌Bel7402細(xì)胞株具有內(nèi)在多藥耐藥性，聯(lián)苯雙酯使Bel7402細(xì)胞對(duì)VCR和Adr的敏感性增加，其中50μmol/L聯(lián)苯雙酯使Bel7402細(xì)胞VCR的IC50由2147nmol/L降至279nmol/L，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為7.7倍，使Adr的IC50由516nmol/L降至152nmol/L，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為3.4倍。
歸納以上結(jié)果，聯(lián)苯雙酯逆轉(zhuǎn)多種腫瘤藥物耐藥的倍數(shù)見下表。
逆轉(zhuǎn)倍數(shù)細(xì)胞系 藥物 聯(lián)苯雙酯 (μmol/L)VPL(μmol/L)5025 12.510KBv200 VCR13.6 3.62.3435.2Adr15.1 4.82.314.5紫杉醇 25.7 6.33.061.4VP-16 2.32.10.64.4MCF-7/AdrVCR4.62.81.85.6Adr7.75.01.925.2Bel7402VCR7.76.51.225.0Adr3.42.51.88.7注耐藥逆轉(zhuǎn)倍數(shù)＝IC50(抗腫瘤藥)/IC50(抗腫瘤藥+受試逆轉(zhuǎn)藥)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的聯(lián)苯雙酯在動(dòng)物體內(nèi)同樣表現(xiàn)出良好的逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥活性。我們用裸鼠建立了對(duì)VCR耐藥的動(dòng)物腫瘤模型，并且在同一只裸鼠左右腋下分別皮下種植對(duì)VCR敏感和耐藥的移植性KB實(shí)體腫瘤。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，單用VCR(0.4mg/Kg，每?jī)商煲淮?，?次)，能夠顯著抑制敏感的KB移植性腫瘤的生長(zhǎng)，與對(duì)照組相比抑瘤率為39％，但是對(duì)耐藥的KBv200移植性腫瘤則幾乎沒有抑制作用(與對(duì)照組相比抑瘤率為1％)。聯(lián)苯雙酯口服，每天一次，共14次，能夠顯著增強(qiáng)VCR對(duì)KBv200移植性腫瘤的抑制作用，其中，150、300和500mg/Kg聯(lián)苯雙酯與VCR合用，抑瘤率分別為19％、36％和48％，但是對(duì)VCR對(duì)KB移植性腫瘤的抑制作用沒有影響，說明聯(lián)苯雙酯與VCR合用，能顯著增加耐藥腫瘤對(duì)VCR的敏感性。測(cè)定各組裸鼠體重發(fā)現(xiàn)，治療前后各組體重均沒有明顯下降，并且在給藥過程中沒有觀察到任何毒副作用，說明聯(lián)苯雙酯與VCR合用治療耐藥腫瘤是安全而有效的。
本發(fā)明的進(jìn)一步研究表明聯(lián)苯雙酯逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞多藥耐藥性的機(jī)理，是與抑制多藥耐藥糖蛋白(P-gp)的活性和表達(dá)密切關(guān)系。
Adr為蒽環(huán)類的抗腫瘤藥，能夠自發(fā)熒光，因此應(yīng)用熒光分光光度計(jì)可以檢測(cè)Adr的熒光強(qiáng)度，從而確定Adr的含量。耐藥的MCF-7/Adr細(xì)胞和敏感的MCF-7細(xì)胞與10μmol/L Adr孵育3小時(shí)以后，MCF-7細(xì)胞內(nèi)Adr的濃度是MCF-7/Adr細(xì)胞的4.4倍，說明耐藥的MCF-7/Adr細(xì)胞Adr的外排增加或攝入減少，從而使得胞內(nèi)Adr的含量下降。在給Adr的同時(shí)加入聯(lián)苯雙酯，并沒有增加MCF-7細(xì)胞內(nèi)Adr的濃度，但是在MCF-7/Adr細(xì)胞，50和25μmol/L聯(lián)苯雙酯與Adr合用使細(xì)胞內(nèi)Adr的蓄積量顯著增加，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析有顯著差異，其中50μmol/L聯(lián)苯雙酯使得Adr的濃度增加2倍以上。聯(lián)苯雙酯能夠增加抗腫瘤藥物在耐藥腫瘤細(xì)胞內(nèi)的蓄積從而具有逆轉(zhuǎn)多藥耐藥的活性。
經(jīng)典的腫瘤細(xì)胞多藥耐藥由P-gp介導(dǎo)，細(xì)胞膜上P-gp過度表達(dá)使得細(xì)胞內(nèi)藥物濃度下降，從而降低抗腫瘤藥物的細(xì)胞毒作用，VCR、Adr、紫杉醇和VP-16都是P-gp的底物。P-gp過度表達(dá)是腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生多藥耐藥的主要機(jī)制。耐藥的KBv200、MCF-7/Adr以及Bel7402細(xì)胞都有P-gp的過度表達(dá)，所以應(yīng)用免疫熒光細(xì)胞染色法檢測(cè)聯(lián)苯雙酯對(duì)MCF-7/Adr細(xì)胞膜上P-gp表達(dá)的影響。流式細(xì)胞儀的結(jié)果發(fā)現(xiàn)MCF-7/Adr細(xì)胞膜上P-gp表達(dá)水平顯著高于敏感的MCF-7細(xì)胞，當(dāng)MCF-7/Adr與50μmol/L聯(lián)苯雙酯孵育24小時(shí)后，膜上P-gp的表達(dá)水平下降，說明聯(lián)苯雙酯能夠抑制P-gp在耐藥細(xì)胞膜上的過度表達(dá)。25μmol/L聯(lián)苯雙酯也有抑制P-gp表達(dá)的活性。激光共聚焦顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)MCF-7/Adr細(xì)胞膜上的熒光強(qiáng)度比MCF-7細(xì)胞強(qiáng)，當(dāng)MCF-7/Adr與聯(lián)苯雙酯孵育后，膜上的熒光強(qiáng)度顯著下降。表明聯(lián)苯雙酯逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥作用的機(jī)制是抑制了與多藥耐藥密切相關(guān)的P-gp蛋白的過度表達(dá)。
綜上所述，聯(lián)苯雙酯逆轉(zhuǎn)多藥耐藥的機(jī)制與抑制P-gp的活性和過度表達(dá)有關(guān)。聯(lián)苯雙酯能夠增加耐藥腫瘤細(xì)胞內(nèi)抗腫瘤藥的蓄積，并且能劑量依賴性的降低耐藥腫瘤細(xì)胞膜上P-gp的表達(dá)水平。
根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，所述的聯(lián)苯雙酯還包括其藥效學(xué)上可接受的鹽、鹽的水合物、酯或前體藥物。
本發(fā)明因此還涉及含有作為活性成份的聯(lián)苯雙酯和常規(guī)藥物賦形劑或輔劑的藥物組合物。通常本發(fā)明藥物組合物含有0.1-90重量％的聯(lián)苯雙酯。
聯(lián)苯雙酯的藥物組合物可根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法制備。用于此目的時(shí)，如果需要，可將聯(lián)苯雙酯與一種或多種固體或液體藥物賦形劑和/或輔劑結(jié)合，制成可作為人藥或獸藥使用的適當(dāng)?shù)氖┯眯问交騽┝啃问健?br> 本發(fā)明的聯(lián)苯雙酯或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮膚、腹膜或直腸等。
本發(fā)明聯(lián)苯雙酯組合物的給藥途徑可為注射給藥。注射包括靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、皮內(nèi)注射和穴位注射等。
給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型。如液體劑型可以是真溶液類、膠體類、微粒劑型、乳劑劑型、混懸劑型。其他劑型例如片劑、膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、栓劑、凍干粉針劑等。
本發(fā)明的聯(lián)苯雙酯可以制成普通制劑、也可以是緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。
為了將單位給藥劑型制成片劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如淀粉、糊精、硫酸鈣、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、碳酸鈣、白陶土、微晶纖維素、硅酸鋁等；濕潤(rùn)劑與粘合劑，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、紫膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解劑，例如干燥淀粉、海藻酸鹽、瓊脂粉、褐藻淀粉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、碳酸鈣、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等；崩解抑制劑，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氫化油等；吸收促進(jìn)劑，例如季銨鹽、十二烷基硫酸鈉等；潤(rùn)滑劑，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸鹽、硼酸、液體石蠟、聚乙二醇等。還可以將片劑進(jìn)一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。
為了將給藥單元制成丸劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氫化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高嶺土、滑石粉等；粘合劑，如阿拉伯膠、黃蓍膠、明膠、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解劑，如瓊脂粉、干燥淀粉、海藻酸鹽、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等。
為了將給藥單元制成栓劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于載體的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高級(jí)醇、高級(jí)醇的酯、明膠、半合成甘油酯等。
為了將給藥單元制成膠囊，將有效成分聯(lián)苯雙酯與上述的各種載體混合，并將由此得到的混合物置于硬的明膠膠囊或軟膠囊中。也可將有效成分聯(lián)苯雙酯制成微囊劑，混懸于水性介質(zhì)中形成混懸劑，亦可裝入硬膠囊中或制成注射劑應(yīng)用。
例如，將本發(fā)明法的組合物制成注射用制劑，如溶液劑、混懸劑溶液劑、乳劑、凍干粉針劑，這種制劑可以是含水或非水的，可含一種和/或多種藥效學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑。如稀釋劑可選自水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的異硬脂醇、多氧化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，為了制備等滲注射液，可以向注射用制劑中添加適量的氯化鈉、葡萄糖或甘油，此外，還可以添加常規(guī)的助溶劑、緩沖劑、pH調(diào)節(jié)劑等。這些輔料是本領(lǐng)域常用的此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑、甜味劑或其它材料。
最優(yōu)選的給藥劑型為滴丸或軟膠囊。
本發(fā)明聯(lián)苯雙酯藥物組合物的給藥劑量取決于許多因素，例如所要預(yù)防或治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度，患者或動(dòng)物的性別、年齡、體重、性格及個(gè)體反應(yīng)，給藥途徑、給藥次數(shù)等，因此本發(fā)明的治療劑量可以有大范圍的變化。一般來講，本發(fā)明中藥學(xué)成分的使用劑量是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。可以根據(jù)本發(fā)明聯(lián)苯雙酯組合物中最后的制劑中所含有的實(shí)際藥物數(shù)量，加以適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，以達(dá)到其治療有效量的要求，完成本發(fā)明的逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的目的。通常對(duì)體重約75公斤患者，所給聯(lián)苯雙酯的日劑量為0.001mg/kg體重-100mg/kg體重，優(yōu)選3mg/kg體重-30mg/kg體重。上述劑量可以單一劑量形式或分成幾個(gè)，例如二、三或四個(gè)劑量形式給藥這受限于給藥醫(yī)生的臨床經(jīng)驗(yàn)以及包括運(yùn)用化療、放療手段的給藥方案


圖1.DDB對(duì)敏感及耐藥的MCF-7細(xì)胞內(nèi)Adr蓄積的影響。
(■MCF-7細(xì)胞，□MCF-7/Adr細(xì)胞，**與單用Adr相比p＜0.01；***與單用Adr相比p＜0.001)圖2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)DDB對(duì)MCF-7/Adr細(xì)胞P-gp表達(dá)的影響(MCF-7/Adr細(xì)胞—空白對(duì)照；—25μmol/L DDB；—50μmol/L DDB；—10μmol/L VPL；—MCF-7細(xì)胞)圖3.激光共聚焦顯微鏡觀察DDB對(duì)MCF-7/Adr細(xì)胞P-gp表達(dá)的影響(0MCF-7/Adr細(xì)胞；1MCF-7/Adr細(xì)胞+10μmol/L維拉帕米(VPL)；2MCF-7/Adr細(xì)胞+50μmol/L DDB；3MCF-7/Adr細(xì)胞+25μmol/L DDB；4MCF-7細(xì)胞；5MCF-7/Adr細(xì)胞，僅加二抗)圖4.DDB對(duì)VCR對(duì)裸鼠耐藥的KBv200移植性腫瘤(A)以及敏感的KB移植性腫瘤(B)生長(zhǎng)抑制作用的影響。
具體結(jié)果見表1-4。
表1.聯(lián)苯雙酯對(duì)KB以及KBv200細(xì)胞對(duì)Adr和VCR敏感性的影響濃度 IC50(nmol/L)藥物 (μmol/L) Adr VCRKB KBv200 KBKBv200對(duì)照 0 30±9 1055±7 28±233917±325VPL10 26±6 73±29 26±149±8聯(lián)苯雙酯 50 32±17 70±21 30±19287±9025 29±9 219±66 24±121092±24312.5 29±3 461±41 30±6 1690±213Adr和VCR的IC50通過計(jì)算機(jī)中效分析軟件計(jì)算得到，表示為三次以上獨(dú)立試驗(yàn)得到的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。聯(lián)苯雙酯溶于二甲基亞砜，VPL溶于生理鹽水。
表2.聯(lián)苯雙酯對(duì)KB以及KBv200細(xì)胞對(duì)紫杉醇和VP-16敏感性的影響藥物濃度 IC50(μmol/L) 紫杉醇(ng/ml) VP-16(μmol/L)KB KBv200 KB KBv200對(duì)照644.7±201. 4.53±2.11 0.43±0.24 4.7±0.32聯(lián)苯雙酯2.5 268.7±148. 7.50±1.12 0.41±0.20 5.2±1.8825 127.5±84.6 2.14±0.42 0.31±0.13 4.5±0.750 31.5±12.3 2.00±0.30 0.41±0.19 3.9±1.5VPL 10 13.2±0.71.04±0.18 0.28±0.05 6.3±1.8紫杉醇和VP-16的IC50通過計(jì)算機(jī)中效分析軟件計(jì)算得到，表示為三次以上獨(dú)立試驗(yàn)得到的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。聯(lián)苯雙酯溶于二甲基亞砜，VPL溶于生理鹽水。
表3.聯(lián)苯雙酯對(duì)MCF以及MCF-7/Adr細(xì)胞對(duì)Adr和VCR敏感性的影響濃度 IC50(nmol/L)藥物(μmol/L) Adr VCRMCF-7MCF-7/AdrMCF-7 MCF-7/Adr對(duì)照0323±13 28750±7000 487±130 2125±290VPL 10 333±25 1142±492219±41 380±49聯(lián)苯雙酯50 380±74 3757±1000 470±6459±2125 348±261 5720±891539±14 759±29612.5 373±310 14967±851 283±198 1170±42表注說明同表1表4.聯(lián)苯雙酯對(duì)Bel7402細(xì)胞對(duì)Adr和VCR敏感性的影響藥物濃度 IC50(nmol/L)(μmol/LAdr VCR)對(duì)照0 516±58 2147±189VPL 10 59±4.2 86±7
聯(lián)苯雙酯50 152±26279±7325 203±11328±1612.5285±551805±276表注說明同表1
進(jìn)行聯(lián)苯雙酯體內(nèi)逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥實(shí)驗(yàn)時(shí)，取生長(zhǎng)良好的KB腫瘤切成小塊，接種到裸鼠的左腋下，再取生長(zhǎng)良好的KBv200腫瘤切成小塊，接種到同一只裸鼠的右腋下。待接種的KB以及KBv200腫瘤增殖到直徑為7-15mm時(shí)(大約兩周)隨機(jī)分組給藥，此時(shí)為第1天，每組7~8只。共分7組，空白對(duì)照組不做任何處理；僅給VCR組VCR 0.4mg/Kg，第二天開始腹腔注射(i.p.)，每?jī)商煲淮?，?天；VCR+聚乙二醇400組聚乙二醇400，第一天開始口服，每天一次，連續(xù)14天，VCR給法同僅給VCR組；僅給聯(lián)苯雙酯組聯(lián)苯雙酯500mg/Kg，第一天開始口服，每天一次，連續(xù)14天；VCR+聯(lián)苯雙酯150mg/Kg、VCR+聯(lián)苯雙酯300mg/Kg和VCR+聯(lián)苯雙酯500mg/Kg組聯(lián)苯雙酯150mg/Kg、300mg/Kg以及500mg/Kg，第一天開始口服，每天一次，連續(xù)14天，VCR給法同僅給VCR組，聚乙二醇400以及各劑量的聯(lián)苯雙酯口服體積為5ml/Kg，并且與VCR腹腔注射的時(shí)間間隔為3小時(shí)。VCR以及VPL溶于無菌生理鹽水，聯(lián)苯雙酯溶于聚乙二醇400。每?jī)商鞙y(cè)定裸鼠的體重以及腫瘤的長(zhǎng)和寬，用公式V＝a2×b/2(其中a為寬，b為長(zhǎng)，單位mm)計(jì)算腫瘤的體積，用公式RTV＝VX/V1將不同組腫瘤大小標(biāo)準(zhǔn)化，其中RTV為相對(duì)腫瘤體積，VX為第X天時(shí)測(cè)量的腫瘤體積，V1為治療第一天測(cè)量的腫瘤體積。用抑瘤率IR來評(píng)價(jià)聯(lián)苯雙酯的作用，IR＝(對(duì)照組RTV的平均值-治療組RTV的平均值)/對(duì)照組RTV的平均值×100％。具體結(jié)果見表5和圖4。
表5.給藥第16天聯(lián)苯雙酯對(duì)VCR對(duì)KB以及KBv200移植性腫瘤抑制作用的影響體重增組別 加百分 IR(％)率(％) KB腫瘤 KBv200腫瘤空白對(duì)照 6.6 --僅給聯(lián)苯雙酯500mg/Kg 18.2 14.5 17.6僅給VCR組3.5 39.2a1.0VCR+聚乙二醇400 0.0 37.9a3.1VCR+聯(lián)苯雙酯150mg/Kg 2.4 49.6b19.1VCR+聯(lián)苯雙酯300mg/Kg 8.6 47.8a36.1*VCR+聯(lián)苯雙酯500mg/Kg-3.1 57.9b47.5**與KBv200移植性腫瘤空白對(duì)照相比，*P＜0.05；**P＜0.01與KB移植性腫瘤空白對(duì)照相比，aP＜0.05；bP＜0.0權(quán)利要求
1.聯(lián)苯雙酯在制備腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，聯(lián)苯雙酯與抗腫瘤藥物聯(lián)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的用途，其特征在于，所述的抗腫瘤藥物包括為P-gp底物的抗腫瘤藥物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的用途，其特征在于，所述的P-gp底物的抗腫瘤藥物包括蒽環(huán)類、長(zhǎng)春堿類、紫杉烷類、鬼臼類，以及米托蒽醌、放線菌素D、絲裂霉素C。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述的腫瘤包括具有P-糖蛋白過度表達(dá)的內(nèi)在多藥耐藥性以及獲得多藥耐藥性實(shí)體腫瘤和血液系統(tǒng)腫瘤。
全文摘要
本發(fā)明涉及聯(lián)苯雙酯作為多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑新用途，特別是與抗腫瘤藥物合用治療發(fā)生多藥耐藥的腫瘤，提高腫瘤細(xì)胞對(duì)抗癌藥的敏感性的新用途。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1463701SQ0212286
公開日2003年12月31日 申請(qǐng)日期2002年6月17日 優(yōu)先權(quán)日2002年6月17日
發(fā)明者劉耕陶, 金晶, 黃敏, 魏懷玲 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所