專利名稱：苯丙氨醇類化合物作為制備治療乙肝藥品的應(yīng)用及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及將苯丙氨醇類化合物作為制備治療乙肝藥品的應(yīng)用及其制備方法，特別是將化合物N-(N-苯甲?；?L-苯丙氨?；?-O-乙?；?L-苯丙氨醇作為制備治療乙肝藥品的應(yīng)用及其這種化合物的制備方法。
背景技術(shù)：
乙肝是由乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus)引起的一種嚴(yán)重危害人民健康的傳染病，乙型肝炎病毒引起急性和慢性乙肝，在我國感染率很高，其中有很多人是乙肝表面抗原(HBsAg)的攜帶者。肝炎病毒的持續(xù)感染會導(dǎo)致肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌，病死率很高。目前治療乙肝的藥物主要有核甘類化合物甘昔洛韋、阿昔洛韋、范昔洛韋、拉夫嘧啶，中草藥有效成分甘草甜、甲基斑蝥胺、豬苓多糖，生物類藥物干擾素，此外，一些中草藥如葉下珠、白花蛇舌草、夏枯草等對乙肝病毒也有一定的抑制作用。從中草藥和民族藥中尋找特效的抗乙肝病毒的藥物，是醫(yī)藥學(xué)界面臨的一項緊迫任務(wù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人在研究治療肝炎民族藥馬蹄金中抗乙肝病毒的活性成分時，從中提取分離制得一種化合物，并測定其化學(xué)結(jié)構(gòu)，通過藥效學(xué)篩選發(fā)現(xiàn)其據(jù)有良好的抗乙肝病毒的作用，且無細(xì)胞毒性。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)迄今未見該化合物及具有該二肽基本化學(xué)骨架結(jié)構(gòu)的化合物用作治療乙肝的藥物，本發(fā)明是這樣的化合物的化學(xué)名為N-(N-苯甲?；?L-苯丙氨?；?-O-乙?；?L-苯丙氨醇，其化學(xué)結(jié)構(gòu)為 本發(fā)明所述的化合物是按下述方法制取的1、從中草藥馬蹄金中制備馬蹄金全草粉碎，用乙醇冷浸兩次，濾過，然后再用70％乙醇冷浸，合并提取液，減壓濃縮得浸膏，混懸于水中后，用石油醚萃取三次，收集石油醚層，減壓濃縮后得膏，拌砂上硅膠柱，以石油醚-乙醚系統(tǒng)為洗脫劑梯度洗脫及反復(fù)離心薄層層析，分離得到化合物。
2、采用化學(xué)合成方式合成具體的反應(yīng)步驟是 (1)以L-苯丙氨酸為原料，二氯亞砜催化下與甲醇進(jìn)行甲酯化反應(yīng)，得產(chǎn)物1；(2)以硼氫化鈉為還原劑，在水溶液中對產(chǎn)物1還原，得產(chǎn)物2；(3)在-10℃冰鹽浴冷卻下，將產(chǎn)物1溶解于吡啶中，攪拌下滴加苯甲酰氯反應(yīng)，得產(chǎn)物3；(4)將產(chǎn)物2溶解于無水甲醇中，在甲醇鈉的催化下與產(chǎn)物3反應(yīng)，得產(chǎn)物4；(5)將產(chǎn)物4溶解于無水吡啶中，用乙酸酐進(jìn)行乙酰化，得產(chǎn)物5，即本發(fā)明所說的化合物。
由于獲得的化合物的水溶性不好，影響其抗乙肝病毒的活性，對該化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，以提高其水溶性，衍生物化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下
衍生物1R1＝CH2N(CH3)2·HCl(H2SO4)，R2＝H，R3＝H，R4＝CH2OAc或CH2OH衍生物2R1＝H，R2＝NHCH2CH2N(CH3)2·HCl(H2SO4)，R3＝H，R4＝CH2OAc或CH2OH衍生物3R1＝H，R2＝H，R3＝CH2N(CH3)2·HCl(H2SO4)，R4＝CH2OAc或CH2OH衍生物4R1＝H，R2＝H，R3＝H，R4＝COONa或COONH4該化合物及其衍生物的通式如下 本發(fā)明的化合物及其衍生物抗乙肝病毒的效果在于所提供的化合物具有明顯的抗乙肝病毒的活性，且無細(xì)胞毒性作用，該活性通過以下實驗結(jié)果得到證實抗乙肝病毒的作用材料與方法(1)體外細(xì)胞模型HepG2 2.2.1.5(2)MTT法檢測樣品對細(xì)胞的毒性(3)EIA法(華美生物工程公司HBsAg和HBeAg診斷試劑盒)檢測樣品對HBsAg和HBeAg的抑制作用(4)陽性藥物對照阿西洛韋(ACV)實驗結(jié)果該化合物在0.1mol/ml時未見細(xì)胞毒性，對HBsAg抑制率為49.0％，對HBeAg抑制率為20.0％。對照藥物阿昔洛韋在0.4mol/ml時對HBsAg抑制率為52.9％，對HBeAg抑制率為44.2％，表明該化合物有抑制乙肝病毒的作用。
以本發(fā)明提供的該二肽類化合物具有抗乙肝病毒的活性，制成治療乙型肝炎的藥物，可用于乙肝病人的治療，經(jīng)檢索，迄今未見該化合物及具有該二肽基本化學(xué)骨架結(jié)構(gòu)的化合物用作治療乙肝的藥物的報道。
本發(fā)明的實施例1取4.2Kg馬蹄金全草粉碎，用95％的工業(yè)乙醇冷浸兩次，每次浸27小時，用紗布過濾，然后再用70％乙醇冷浸47小時，合并提取液，減壓濃縮得浸膏350g，混懸于水中后，用石油醚萃取三次，收集石油醚層，減壓濃縮后得膏50g，拌砂上硅膠柱，以石油醚-乙醚系統(tǒng)為洗脫劑(9∶0.5-3∶7)梯度洗脫及離心薄層反復(fù)層析，分離得到本化合物11.7mg。
對本發(fā)明所獲得的化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行測定白色針晶，mp 186～187℃，[α]D20-35.71(0.028，CHCl3)。IR(KBr)cm-13314，1725，1661，1631，1533，746，698。EI-MS m/z444，384，353，311，269，252，224，172，131，105(100％)，91，77，60。1H-NMR(CDCl3，400MHz)7.69(2H，m，H-3″，7″)，7.50(1H，m，H-5″)，7.42(2H，m，H-4″，6″)，7.0～7.3(10H，m，H-5～9；H-5′～9′)，6.72(1H，d，J＝7.6Hz，NHCOΦ)，5.94(1H，d，J＝8.8Hz，NH-phenylanyl)，4.74(1H，m，H-2)，4.33(1H，m，H-2′)，3.92(1H，dd，J＝11.2Hz，4.0Hz，H-1′)，3.79(1H，dd，J＝11.2Hz，4.0Hz，H-1′)，3.20(1H，dd，J＝13.6Hz，6.0Hz，H-3)，3.03(1H，dd，J＝13.6Hz，6.0Hz，H-3)，2.73(2H，m，H-3′)，2.00(3H，s，CH3CO)。13CNMR(CDCl3，100MHz)170.76(C-1)，170.24(COCH3)，167.09(C-1″)，136.67(C-4′)，136.59(C-4)，133.64(C-2″)，131.89(C-5″)，129.27(C-6，8)，129.10(C-6′，8′)，128.73(C-5，9)，128.61(C-5′，9′)，128.55(C-7′)，127.11(C-7)，127.03(C-3″，7″)，126.72(C-4″，6″)，64.56(C-1′)，54.95(C-2)，49.41(C-2′)，38.41(C-3)，37.41(C-3′)，20.77(COCH3)。以上光譜數(shù)據(jù)證明該化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)為N-(N-苯甲?；?L-苯丙氨酰基)-O-乙?；?L-苯丙氨醇(N-(N-benzoyl-L-phenylalanyl-)-O-actyl-L-phenylalanol)。
將得到的產(chǎn)品按照現(xiàn)有制藥技術(shù)，將其制作成為藥品，可以用于臨床治療。
本發(fā)明的實施例2本發(fā)明提供的N-(N-苯甲?；?L-苯丙氨酰基)-O-乙?；?L-苯丙氨醇的化學(xué)合成制取方法是(1)將20毫升甲醇冰鹽浴中冷卻，滴加2.4毫升SOCl2，加入4.32克L-苯丙氨酸，室溫攪拌2.5小時，再于80℃水浴回流30分鐘，減壓蒸出甲醇，加入甲醇14毫升溶解后，再加入乙醚72毫升，冷卻，析出結(jié)晶，抽濾得產(chǎn)物1，即L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽5.00克；(2)將769毫克硼氫化鈉溶于11.2毫升水中，冰鹽浴冷卻，滴加含有1.03克苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽的8.6毫升水溶液，攪拌反應(yīng)至室溫后再于室溫下反應(yīng)5小時，反應(yīng)液用等體積乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯相，以1/3體積的飽和氯化納水溶液洗滌一次，乙酸乙酯層以無硫酸鈉干燥后，蒸干溶劑得產(chǎn)物2，即苯丙氨醇0.56克；(3)在-10℃冰鹽浴冷卻下，將1.07克產(chǎn)物1溶解于5毫升吡啶中，攪拌下滴加苯甲酰氯0.6毫升，冰鹽浴溫度逐漸升高至室溫，再于室溫反應(yīng)5小時，反應(yīng)完畢后，在反應(yīng)液中加入等體積的水，以等體積的乙酸乙酯萃取一次，乙酸乙酯層以6M的HCl洗滌去除吡啶后再以蒸餾水洗滌一次除去酸，減壓回收乙酸乙酯，得產(chǎn)物3，即N-苯甲?；?L-苯丙氨酸甲酯1.43克；(4)取0.7克產(chǎn)物2溶解于2毫升無水甲醇中，冰鹽浴冷卻至-10℃以下，加入1.74M的甲醇鈉-甲醇溶液0.264毫升，攪拌下加入含1.30克產(chǎn)物3的甲醇溶液，混合均勻，反應(yīng)液移至冰箱中冷凍過夜，次日取出，再于室溫下反應(yīng)24小時，產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析分離，氯仿-甲醇(20∶1)洗脫得產(chǎn)物4，即N-(N-苯甲?；?L-苯丙氨?；?-L-苯丙氨醇1.15克；(5)將產(chǎn)物4溶解于無水吡啶中，用乙酸酐進(jìn)行乙?；?，得產(chǎn)物5，即N-(N-苯甲?；?L-苯丙氨?；?-O-乙?；?L-苯丙氨醇。
將產(chǎn)物5與從馬蹄金中獲得的化合物進(jìn)行比較，Rf、熔點、IR、1H-NMR、MS一致、混合熔點不降低，證明其化學(xué)結(jié)構(gòu)。
將得到的產(chǎn)品按照常規(guī)工藝制作成為藥品，可以用于臨床的治療。
權(quán)利要求
1.苯丙氨醇類化合物作為制備治療乙肝藥品的應(yīng)用，其特征在于將化合物N-(N-苯甲酰基-L-苯丙氨?；?-O-乙?；?L-苯丙氨醇用為制備治療乙肝藥品的藥物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為
2.按照權(quán)利要求1所述的苯丙氨醇類化合物作為制備治療乙肝藥品的應(yīng)用，其特征在于該化合物的衍生物可以作為制備治療乙肝藥品的應(yīng)用具體地說其衍生物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式可為 衍生物1R1＝CH2N(CH3)2·HCl(H2SO4)，R2＝H，R3＝H，R4＝CH2OAc或CH2OH衍生物2R1＝H，R2＝NHCH2CH2N(CH3)2·HCl(H2SO4)，R3＝H，R4＝CH2OAc或CH2OH衍生物3R1＝H，R2＝H，R3＝CH2N(CH3)2·HCl(H2SO4)，R4＝CH2OAc或CH2OH衍生物4R1＝H，R2＝H，R3＝H，R4＝COONa或COONH4
3.按照權(quán)利要求1、2所述的苯丙氨醇類化合物作為制備治療乙肝藥品的應(yīng)用，其特征在于具有下面的化學(xué)結(jié)構(gòu)式的衍生物也可以作為制備治療乙肝藥品的應(yīng)用其衍生物的化學(xué)結(jié)構(gòu)通式為
4.一種制備苯丙氨醇類化合物的方法，其特征在于它們是以下述方法制取的取馬蹄金全草、粉碎，用乙醇冷浸兩次，濾過，然后再用乙醇冷浸，合并提取液，減壓濃縮得浸膏，混懸于水中后，用石油醚萃取三次，收集石油醚層，減壓濃縮后得膏，拌砂上硅膠柱，以石油醚-乙醚系統(tǒng)為洗脫劑梯度洗脫及反復(fù)離心薄層層析，分離得到該化合物。
5.按照權(quán)利要求4所述的制備苯丙氨醇類化合物的方法，其特征在于采用化學(xué)合成的方法制取，具體的步驟是 a.以L-苯丙氨酸為原料，二氯亞砜催化下與甲醇進(jìn)行甲酯化反應(yīng)，得產(chǎn)物1；b.以硼氫化鈉為還原劑，在水溶液中對產(chǎn)物1還原，得產(chǎn)物2；c.在-10℃冰鹽浴冷卻下，將產(chǎn)物1溶解于吡啶中，攪拌下滴加苯甲酰氯反應(yīng)，得產(chǎn)物3；d.將產(chǎn)物2溶解于無水甲醇中，在甲醇鈉的催化下與產(chǎn)物3反應(yīng)，得產(chǎn)物4；e.將產(chǎn)物4溶解于無水吡啶中，用乙酸酐進(jìn)行乙?；?，得產(chǎn)物5，即本發(fā)明所說的化合物。
全文摘要
本發(fā)明是一種將化合物苯丙氨醇類化合物作為制備治療乙肝藥品的應(yīng)用及其這種化合物的制備方法，它的抗乙肝病毒活性成分為苯丙氨醇類化合物N－(N－苯甲?；璍－苯丙氨酰基)－O－乙?；璍－苯丙氨醇(N－(N－benzoyl－L－phenylalanyl－))－O－actyl－L－phenylalanol，這種化合物由中草藥馬蹄金中分離獲得或通過化學(xué)合成獲得，具有抗乙肝病毒的作用，該化合物及其具有該二肽基本化學(xué)骨架結(jié)構(gòu)的化合物迄今未用作抗乙肝病毒類藥物，本發(fā)明的化合物及其衍生物對乙肝病毒(HBV)具有明顯的抑制作用，無明顯的細(xì)胞毒性，可將其用作乙肝病人的治療藥物。
文檔編號A61K31/165GK1437937SQ02160309
公開日2003年8月27日 申請日期2002年12月19日 優(yōu)先權(quán)日2002年8月2日
發(fā)明者梁光義, 劉玉明, 徐必學(xué) 申請人:貴州省中國科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點實驗室