專利名稱：用于藥理活性化合物的可控釋放的可注射組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及用于延長藥理活性化合物的釋放時間并減小其毒性的方法和組合物。
背景技術：
以下關于發(fā)明背景的討論僅用于幫助讀者了解本發(fā)明，而并非把現(xiàn)有技術描述為或歸于本發(fā)明。
人們常常希望能夠延長注射藥物的釋放時間以延長它的作用持續(xù)時間，或者達到降低它的毒性作用的目的。在體內(nèi)容易溶解的配方通常被快速地吸收并造成可利用藥物在短時間內(nèi)快速擴散，而與此相反，人們更希望藥理活性產(chǎn)物能夠逐漸的釋放。為了提供可控制和延緩釋放的藥物化合物，已經(jīng)進行了各種嘗試，但是它們都沒有成功克服與技術相關的所有難題，例如獲得延長的釋放時間，最大穩(wěn)定性和功效，降低毒性，在制備上的最大可再現(xiàn)性，以及消除由不良的基質物質引起的有害的物理、生化或毒理作用。
氧四環(huán)素(oxytetracycline)是用于治療哺乳動物各種感染的一種被廣泛使用和有效的抗生素。特別是，它可以用于治療和預防家畜的呼吸道感染病。傳統(tǒng)方式的反復給藥使其成本巨大。
替米考星(tilmicosin)是一種具有兩個叔胺的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。它有較長的組織半衰期并能有效地抵抗寬范圍的細菌，能夠用來治療牛的呼吸道疾病。在高濃度時替米考星是心臟致毒的，由于安全原因它在敏感性物種如貓、羊、豬和馬中的使用幾乎完全被廢除。商業(yè)產(chǎn)品Micotil(Eli Lilly & Co.，Indianapolis，IN)是其二磷酸鹽的溶液，在美國專利No.5,574,020中有描述。這種配方在牛體內(nèi)是有效的，但是這種抗生素會快速釋放并由此在許多物種體內(nèi)產(chǎn)生毒性，包括狗和貓。
發(fā)明概述將在2001年10月19提交的申請系列號60/343,625在此完整引入以供參考，包括所有的圖表和附圖。
本發(fā)明提供了用于延長藥理活性化合物的釋放時間和降低其毒性的組合物和方法。這些化合物包含一種具有親脂性抗衡離子(lipophiliccounterion)的藥理活性化合物的鹽和一種藥學上可接受的水溶性溶劑，它們結合起來形成一種可注射組合物。親脂性抗衡離子可以是一種飽和或不飽和C8-C22脂肪酸，優(yōu)選的可以是一種飽和或不飽和C10-C18脂肪酸。當這種組合物被注射到哺乳動物體內(nèi)時，其中至少有一部分組合物沉淀并隨時間的過去釋放出活性化合物。因此，這種組合物在哺乳動物體內(nèi)形成了一個緩慢釋放活性化合物的藥物倉庫。所以，本發(fā)明使人們能夠在長達15天甚至更長的一段時間內(nèi)提供活性化合物的可控制劑量施用。在優(yōu)選的實施方案中，藥理活性化合物可以是替米考星，抗生素例如氧四環(huán)素或強力霉素(doxycycline)、或氟西汀(fluoxetine)、羅紅霉素(roxithromycin)、特比奈芬(turbinafine)、或美托洛爾(metoprolol)，親脂性抗衡離子可以是癸酸、月桂酸、油酸、亞油酸或肉豆蔻酸。在優(yōu)選的實施方案中，藥學上可接受的溶劑是N-甲基吡咯烷酮(NMP)。在另一個實施方案中，藥學上可接受的溶劑是含有丙二醇(例如，約10％)的甘油縮甲醛，其中含有或不含有穩(wěn)定劑。
本發(fā)明也提供了對哺乳動物施用本發(fā)明的組合物和配方的新方法。這些方法提供了活性化合物的組合物，如果這些活性化合物以目前可獲得的形式存在，可能對接受治療的哺乳動物產(chǎn)生毒性。因此，本發(fā)明的配方和方法使人們能夠施用先前由于安全考慮而不能在某些物種中廣泛使用的化合物。這些方法也使人們能夠延長化合物的釋放時間并提供給接受治療的病人可控劑量的活性化合物。本發(fā)明的方法使人們能夠對接受治療的哺乳動物以藥學上的有效劑量施用藥理活性化合物達4-15天，包括任一特定的天數(shù)，直到15天和包括15天，或甚至更多。精確的時間將依賴于幾種變化因素，對于某一特定的藥理活性化合物或者應用，可以利用這些變化因素使本發(fā)明最優(yōu)化。優(yōu)選的是化合物經(jīng)注射后在接受治療組織中存在4-5天；更優(yōu)選的是化合物經(jīng)注射后在接受治療組織中以藥學上的有效量存在6天，或甚至7天。在其他實施方案中，通過改變變化因素也可能使釋放時間延長至超過15天。
在一方面，本發(fā)明提供了用于藥理活性化合物施用的組合物。該組合物可以包括一種具有親脂性抗衡離子的藥理活性化合物的鹽和一種藥學上可接受的水溶性溶劑，在一定條件下它們結合起來形成一種可注射組合物。這種組合物被注射到哺乳動物體內(nèi)時可以沉淀并隨時間的過去釋放出藥理活性化合物。在各種實施方案中，本發(fā)明的組合物可以包括多種藥理活性化合物，如替米考星、氧四環(huán)素、強力霉素、美托洛爾、磺胺甲嘧啶(sulfamethazine)、三甲氧芐二氨嘧啶(trimethoprim)、新霉素、鏈霉素、慶大霉素、狄布卡因(debucaine)、布比卡因(bupivacaine)、苯唑卡因(benzocaine)、丁卡因(tetracaine)、乙酰普馬嗪(acepromazine)、伊曲康唑(itraconazole)、四環(huán)素、磺胺類、氨基糖苷類(aminoglycosides)，或任意具有合適的溶解性和化學功能的藥理活性化合物。親脂性抗衡離子可以是一種具有介于8和22之間的任一特定碳原子數(shù)目的飽和或不飽和脂肪酸，優(yōu)選的是一種C8-C18脂肪酸，更優(yōu)選的是一種C10-C18脂肪酸，如月桂酸、亞油酸、癸酸和肉豆蔻酸。其他的親脂性抗衡離子也可以被使用，例如二羧酸，如癸二酸，多聚酸，如親脂性聚羧酸，芳香族酸，如安息香酸。藥學上可接受的載體可以是一種有機溶劑。在優(yōu)選的實施方案中，該溶劑可能是吡咯烷酮、N-甲基吡咯烷酮、聚氧乙烯、丙二醇、甘油縮甲醛、異山梨醇二甲基醚、乙醇、二甲基亞砜、四氫糠醇、甘油三乙酸酯，或這些溶劑的任意組合，或具有類似可接受性質如非毒性和可溶于水的其它溶劑。
在另一種實施方案中，本發(fā)明的組合物是一種具有聚羧酸抗衡離子的藥理活性化合物的鹽和一種藥學上可接受的水溶性溶劑，在一定條件下它們結合起來形成一種可注射組合物。這種組合物在室溫下被注射到水中會沉淀或者在生理(“體內(nèi)”)環(huán)境中會沉淀。這種組合物被注射到哺乳動物體內(nèi)時會隨時間的過去釋放出活性化合物。這里的“聚羧酸”是指含有至少兩個羧基的分子。在優(yōu)選的實施方案中，聚羧酸是聚天冬氨酸、聚丙烯酸、癸二酸、聚癸二酸、聚安息香酸或它們的組合。這里的“聚”是指二或者更多。
在一個實施方案中，藥理活性化合物可以是氧四環(huán)素，親脂性抗衡離子可以是月桂酸，藥學上可接受溶劑可以是丙二醇、聚氧乙烯、甘油縮甲醛或者是這些溶劑的適當組合。在另一個實施方案中，藥理活性化合物可以是替米考星，親脂性抗衡離子可以是月桂酸，藥學上可接受溶劑可以是丙二醇、聚氧乙烯、甘油縮甲醛或者是這些溶劑的適當組合。仍然在另一個實施例中，組合物引入或注射到水環(huán)境時組合物可能沉淀并隨時間的過去釋放出活性化合物。當被注射到哺乳動物體內(nèi)時，組合物也可以在哺乳動物體內(nèi)形成一個藥物倉庫，被藥物倉庫將隨時間的過去釋放出化合物。
另一方面，本發(fā)明提供了對哺乳動物施用藥理活性化合物的方法。該方法包括制備一種組合物和將該組合物注射到哺乳動物體內(nèi)。這里所說的組合物是一種具有親脂性抗衡離子的藥理活性化合物的鹽和一種藥學上可接受的水溶性溶劑，在一定條件下它們結合起來形成一種可注射配方。當這種組合物被注射到哺乳動物體內(nèi)時，其中至少有一部分組合物沉淀并隨時間的過去釋放出藥理活性化合物。
另一方面，本發(fā)明提供了延長施給哺乳動物的藥理活性化合物的釋放時間的方法。該方法包括制備一種配方和將組合物注射到哺乳動物體內(nèi)。這里所說的配方是一種具有親脂性抗衡離子的藥理活性化合物的鹽和一種藥學上可接受的水溶性溶劑，在一定條件下它們結合起來形成一種可注射配方。當這種組合物被注射到哺乳動物體內(nèi)后，其中至少有一部分組合物沉淀并隨時間的過去釋放出活性化合物，從而延長了化合物的釋放時間。因而本發(fā)明可以給接受治療的哺乳動物提供可控劑量的活性化合物。
另一方面，本發(fā)明提供了制備一種用于給哺乳動物施用藥理活性化合物的可注射配方的方法。本方法包括制備一種具有親脂性抗衡離子的藥理活性化合物的鹽，提供藥學上可接受的水溶性溶劑，將鹽和該溶劑在一定條件下結合以形成一種可注射配方。當這種配方被注射到哺乳動物體內(nèi)時，其中至少有一部分配方沉淀并隨時間的過去釋放出藥理活性化合物。
在另一方面本發(fā)明提供了用于對哺乳動物施用藥理活性化合物的組合物。該組合物包含一種具有親脂性抗衡離子的藥理活性化合物的鹽和一種藥學上可接受的溶劑，它們結合起來形成一種可注射組合物。當組合物被注射到哺乳動物體內(nèi)時，溶解在溶劑中的具有親脂性抗衡離子的藥理活性化合物至少有一部分在體內(nèi)沉淀，并隨時間的過去釋放出活性化合物。
本發(fā)明因而具備優(yōu)于以前可獲得的配方的重要優(yōu)點。本發(fā)明實現(xiàn)了藥理活性化合物的可控釋放從而降低了毒性，特別是在小型動物中，如貓和狗。它也具備能夠以一種有效的方式對家畜施用化合物的優(yōu)點，這種方式與以前可獲得的用藥方式相比，需要時間和資源上更少的投資。藥理活性化合物可以在一種穩(wěn)定的、可注射的配方中被利用。這種配方被注射時會沉淀并在一段延長的時期內(nèi)緩慢釋放活性化合物。
以上描述的發(fā)明概述不是限定性的，本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點在下面對優(yōu)選實施方案的具體描述和權利要求中是顯而易見的。
附圖簡述

圖1顯示了依照本發(fā)明制備的氧四環(huán)素比游離藥物的氧四環(huán)素以更緩慢的速度釋放到鹽水中。溶劑是二甲基亞砜(DMSO)，親脂性抗衡離子是月桂酸。
圖2顯示了依照本發(fā)明制備的美托洛爾比游離藥物的美托洛爾以更緩慢的速度釋放到鹽水中。脂肪酸和溶劑分別是月桂酸和N-甲基吡咯烷酮。
圖3顯示了藥理活性化合物(替米考星)的釋放速率受所選擇的脂肪酸的鏈長影響。溶劑N-甲基吡咯烷酮；親脂性抗衡離子癸酸和月桂酸。
圖4顯示了溶劑對替米考星的體外釋放動力學的影響。親脂性抗衡離子二癸酸；配方中替米考星為100mg/ml?？s寫如下PEG＝聚氧乙烯，THFA＝四氫糠醇，DMA＝二甲基乙酰胺，ISO-DME＝異山梨醇二甲基醚，DMSO＝二甲基亞砜，NMP＝N-甲基吡咯烷酮。
圖5顯示了藥理活性化合物(替米考星)的釋放速度是脂肪酸鹽的濃度的函數(shù)。親脂性抗衡離子癸酸。
圖6顯示了氟西汀∶月桂酸脂肪酸鹽配方在體外的釋放動力學。
圖7顯示了氟西汀鹽酸(HCl)和氟西汀∶月桂酸脂肪酸鹽(FAS)在貓體內(nèi)的藥物動力學。
圖8是21天內(nèi)貓肺組織中的替米考星濃度的半對數(shù)圖。八只雄性和八只雌性貓被使用，對所有組織樣品的劑量均為10mg/kg體重。
圖9是21天內(nèi)貓腎組織中的替米考星濃度的半對數(shù)圖。八只雄性和八只雌性貓被使用，對所有組織樣品的劑量均為10mg/kg體重。
圖10是21天內(nèi)貓肝臟組織中的替米考星濃度的半對數(shù)圖。八只雄性和八只雌性貓被使用，對所有組織樣品的劑量均為10mg/kg體重。
發(fā)明詳述本發(fā)明的組合物可以用具有基礎功能性的藥理活性化合物的鹽來制備。它們的制備可以使用各種親脂性酸、飽和或不飽和脂肪酸、膽酸、磷脂酸、二羧酸如癸二酸，或其他任何能夠和藥理活性化合物結合而導致產(chǎn)生的鹽在水中不可溶但在水溶性溶劑中可溶的酸。這里的“鹽”是指通過離子相互吸引化學結合而非共價連接的兩種化合物?！芭c水可混溶”是指溶劑能夠與水以任意比例混合而不出現(xiàn)兩相分離?！八苄浴笔侵溉軇┰谒芤褐杏幸欢黠@程度的溶解性，如，甘油三乙酸酯被認為是水溶性溶劑，因為它以約1∶14的比例溶解在水中?！坝H脂性抗衡離子”是指一種脂溶性分子的離子形式。親脂性抗衡離子優(yōu)選是一種脂肪酸，但是也可以是另一種脂溶性分子。抗衡離子有至少一個與在鹽的另一組分上的化學基團所帶電荷相反的電荷，由此便能引起兩個分子間的離子吸引?！翱勺⑸渑浞健被颉翱勺⑸浣M合物”是指可以被汲取到注射器中并通過皮下、腹腔內(nèi)、或肌肉內(nèi)注射進哺乳動物體內(nèi)，同時不會因為組合物內(nèi)固體物質的存在而造成不利影響的配方或組合物。固體物質包括但不局限于晶體、膠質或凝膠。“藥理活性化合物”是指能對接受治療的哺乳動物產(chǎn)生藥理效應的化學化合物。例如，該效應可能是破壞或防止細菌或寄生蟲的生長，減緩炎癥，或其他在接受治療哺乳動物體內(nèi)的藥學和可測效應。
動詞“沉淀”是指化合物形成沉淀物或固體。沉淀物是指室溫下在體外或生理(體內(nèi))環(huán)境里溶液中形成的不溶性固體。沉淀物可能出現(xiàn)多種形式，如固體、晶體、膠質或凝膠?！八帉W上的有效劑量”是該劑量能在接受治療哺乳動物身上產(chǎn)生可測的和醫(yī)學上顯著的效果，從而導致進程發(fā)展至治愈或預防目標疾病，或緩解或防止作為治療原由的狀況。“藥學上可接受溶劑”是指能夠溶解由藥理活性化合物和親脂性抗衡離子構成的鹽的液體，并且它適合人類和/或動物使用，不會造成與合理的利/害比例相當?shù)牟徽數(shù)牟焕母弊饔?如毒性、興奮和過敏反應)。
本發(fā)明的組合物具備數(shù)個優(yōu)點。本組合物是含有高濃度活性化合物的可注射組合物。在優(yōu)選的實施方案中，藥理活性化合物可以在10％-60％(w/v)的范圍內(nèi)被加載到組合物中。但是，本領域的普通技術人員會意識到這個范圍可以廣泛的變化，這依賴于藥理活性化合物的溶解性或不溶解性、所選擇的親脂性抗衡離子、所選擇的溶劑、最終產(chǎn)品的注射能力和特定應用任何其它的相關要求?；钚曰衔镆部赡芤缘腿?0％或5％，甚至1％的比例被加載，并仍能產(chǎn)生有效的作用。類似地，在需要時活性化合物也可以被加載至70％，或甚至更高。不需要外來的賦形劑或載體。本組合物很容易過濾，因而簡化了加工過程。從配方中將水除去被認為能夠提高配方的穩(wěn)定性和抑制微生物生長。正如這里所描述的，制備組合物的過程是簡單的，并且由于藥理活性化合物的中和，根據(jù)本發(fā)明用藥應該在注射位點產(chǎn)生較溫和的反應。
本發(fā)明提供了調(diào)整藥理活性化合物釋放速率和釋放時間的功能。釋放速率可以通過改變制鹽時所用的抗衡離子的親脂性和分子量來調(diào)整。例如，替米考星的月桂酸鹽通常比其癸酸鹽釋放得更慢。另外，配方中較高濃度的鹽通常產(chǎn)生較低的釋放速率。從60％替米考星-脂肪酸鹽配方中釋放出替米考星癸酸鹽的速率比從30％替米考星-脂肪酸鹽配方中釋放出替米考星癸酸鹽的速率低。類似的，正如這里解釋的，其他變化如親脂性抗衡離子的選擇、溶劑選擇、鹽濃度及其他條件都可以被操作以延長或縮短活性化合物到目的點的釋放時間。一般，可以基于帶電基團的摩爾比來制備鹽。但是人們也可以通過使用半鹽或改變1∶1的比例成功地制備不溶性鹽。藥學上可接受的溶劑可以是與水混溶的溶劑或水溶性溶劑，優(yōu)選是與水混溶的溶劑。也可以使用水溶性溶劑和/或水混溶性溶劑的混合物。本領域普通技術人員會意識到各種水溶性溶劑可以混合起來以使某一特定應用的結果最優(yōu)化。例如聚氧乙烯、丙二醇和甘油縮甲醛的混合物可以各種比例混合從而提供一種最佳溶劑。在一些實施方案中，以大致相等的量混合可以得到一種合適的溶劑。
在其他實施方案中，本發(fā)明中含有具有親脂性抗衡離子的藥理活性化合物的鹽的配方可以同其非鹽形式聯(lián)合使用，以達到提供較高的活性化合物起始劑量的目的。
不期望受到某個特定理論的約束，當藥理活性制劑加上親脂性抗衡離子形成一種鹽，然后與注射用的有機溶劑結合時，便可獲得可注射組合物。當該配方被注射到哺乳動物體內(nèi)時，認為溶劑可能從注射位點擴散掉，同時水相體液擴散到注射位點，這就導致了藥理活性化合物在接受治療哺乳動物體內(nèi)沉淀。沉淀可以呈現(xiàn)多種形式，如固體、晶體、膠質或凝膠。因而在那里就存在聚集的活性化合物，它在一段期望的時間內(nèi)以藥學上的有效劑量釋放。該沉淀物作為哺乳動物體內(nèi)的藥物倉庫實現(xiàn)了化合物在一段時期內(nèi)的釋放。釋放時間可以是所期望的至少3天、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天，或者任一特定的天數(shù)直到15天，包括15天甚至更長?！八幬飩}庫”是指接受治療的哺乳動物體內(nèi)的藥理活性化合物的聚集或沉淀，它能夠隨時間的過去釋放出藥學上有效劑量的活性化合物。
已有顯示，脂肪酸鏈的長度、脂肪酸的特定組合、藥理活性化合物∶親脂性抗衡離子鹽在配方中的百分比，和所選擇的藥學上可接受的溶劑都會影響到藥理活性化合物的釋放動力學。因此，藥理活性化合物的釋放動力學可以通過操作這些或其他的變化而方便和容易地控制。還發(fā)現(xiàn)該配方經(jīng)高壓滅菌時是穩(wěn)定的。本領域普通技術人員會意識到本發(fā)明可以應用到許多具有合適的溶解性和化學功能性的藥理活性化合物中。所以，預期本發(fā)明可以應用到各種藥理活性化合物，如藥物、藥劑、營養(yǎng)物或其他希望施給哺乳動物的化合物。
本領域普通技術人員會意識到基于所涉及的藥理活性化合物的特征可以對這里提出的方法作一些修飾。下面非限定性的實施例代表了本發(fā)明的進一步應用，它們僅僅作為實施例被提供。
實施例1氧四環(huán)素
氧四環(huán)素有一個叔胺基團，氧四環(huán)素的鹽酸鹽易溶于水。我們發(fā)現(xiàn)將一摩爾脂肪酸加到一摩爾氧四環(huán)素中可制備一種鹽，該鹽與初始的氧四環(huán)素相比，在水中的溶解性更低，但在N-甲基吡咯烷酮(NMP)中的溶解性更高。當水加到該NMP配方中時，該鹽沉淀。
氧四環(huán)素在體外的釋放速率可以用下面的方法來測定將該配方密封在透析袋(Pierce，Rockford，IL)中，將它放置在含有鹽溶液的容器內(nèi)，然后測量在該鹽水中作為時間函數(shù)的藥物的量。本發(fā)明的配方與現(xiàn)有的氧四環(huán)素配方作了比較。圖1顯示了本發(fā)明的氧四環(huán)素配方比游離藥物的氧四環(huán)素以更緩慢的速度被釋放到鹽水中。
本發(fā)明的氧四環(huán)素組合物可以通過將0.464克氧四環(huán)素和0.203克月桂酸添加到3ml NMP中而制得。將上述混合物攪拌60分鐘，得到澄清溶液。將1ml的此溶液密封在一個透析袋中，又將此透析袋懸于150ml含有磷酸緩沖液的pH7.4的鹽水中。在不同的時間取出等量溶液，并用分光光度測定法測定氧四環(huán)素的濃度。圖1中的結果顯示氧四環(huán)素持續(xù)地從透析袋中擴散出來，長達120多個小時，而到此時也只有約50％的氧四環(huán)素被釋放。
實施例2美托洛爾美托洛爾是一種抗高血壓、防心絞痛和抗心律失常的藥物，結構如下
它的琥珀酸鹽和酒石酸鹽有多種商品名稱，可以從商業(yè)上獲得。這些鹽及該藥物的堿性形式在水中都有很大溶解性。堿式美托洛爾可以用標準方法從商業(yè)上獲得的酒石酸鹽中制備。當美托洛爾的胺基被月桂酸中和時，所得到的鹽難溶于水，但是易溶于在藥學上可接受的非水相溶劑。本發(fā)明的美托洛爾組合物通過將0.3224克美托洛爾堿和0.2661克月桂酸加入到2.415ml NMP中制得。將上述混合物攪拌30分鐘，得到澄清溶液。將1ml的此溶液密封在一個透析袋中，又將此透析袋懸于150ml含有磷酸緩沖液的pH7.4的鹽水中。在不同的時間取出等量溶液，并用分光光度測定法測定美托洛爾的濃度。圖2中的結果顯示美托洛爾持續(xù)地從透析袋中擴散出來，長達48多個小時，而美托洛爾堿的對比溶液(將150mg美托洛爾堿溶解在1.124ml NMP中而制得)則快速的擴散掉。
實施例2A替米考星替米考星是一種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，結構如下 它能有效地抵抗寬范圍的細菌，并被用來治療牛的呼吸道疾病。其堿性形式是中等程度地溶于水，而它的鹽酸鹽和磷酸鹽是高度溶于水。在高濃度時，替米考星是致心臟毒性的，所以不能靜脈給藥。出于安全考慮，它在敏感性物種如貓、羊、豬和馬中的使用幾乎完全被廢除。
當替米考星的兩個胺基被某些脂肪酸中的任意一種(如癸酸C10，月桂酸C12，肉豆蔻酸C14，棕櫚酸C16，硬脂酸C18，油酸C18，反油酸C18，亞油酸C18和芥酸C22)中和時，產(chǎn)生的鹽難溶于水，但是易溶于在藥學上可接受的非水溶劑。當將該鹽配方密封在透析盒中并放置在鹽水中時，該替米考星鹽沉淀，替米考星從袋中慢慢釋放出來。釋放速率是脂肪酸的鏈長(圖3)、溶劑(圖4)和替米考星-脂肪酸鹽濃度(圖5)的函數(shù)。
實施例3-體外的替米考星將10克(0.0115摩爾)替米考星和0.0253摩爾的不同羧酸(例如，在各自分析中的癸酸、月桂酸、亞油酸或肉豆蔻酸)放入一個燒瓶中，加入N-甲基吡咯烷酮至終體積為100ml，然后攪拌60分鐘以獲得澄清溶液。取這些溶液各1ml密封在透析袋中，再將透析袋懸在盛有150ml含有磷酸緩沖液的pH7.4的鹽水的燒瓶中。在約1個小時內(nèi)可以觀察到鹽沉淀在袋中。在不同的時間取出等量鹽水，并用高壓液相色譜法(HPLC)測定替米考星。圖3顯示了癸酸(C-10)鹽和月桂酸(C-12)鹽的實驗結果，表明替米考星持續(xù)地從透析袋中擴散出來，長達120多個小時。鏈長度較長的酸使替米考星釋放較慢。Micotil(Eli Lilly，Indianapolis，IN)是替米考星的一種磷酸鹽，它很容易溶解并快速從袋中擴散出來。
實施例4-在各種溶劑中的替米考星-二癸酸在幾種與水混溶的溶劑中制備了替米考星-二癸酸鹽的溶液，在各種溶劑中將10克(0.0115摩爾)替米考星與0.0253摩爾癸酸結合，并使溶液終體積為100ml。體外的釋放速率用實施例1中的透析方法測定。圖4的結果顯示釋放速率隨溶劑的變化，但是所有這些溶劑產(chǎn)生的釋放速率都比圖3中所示的磷酸鹽(Micotil(R))的釋放速率慢。
實施例5-替米考星釋放的濃度效應制備替米考星-二癸酸鹽的溶液，在NMP中將兩等份癸酸分別與30克(0.0345摩爾)替米考星和60克(0.0690摩爾)替米考星結合，并使溶液終體積都達到100ml。體外的釋放速率用實施例1中的透析方法測定。圖5中的數(shù)據(jù)顯示了較高的初始濃度導致較慢的釋放速率。
實施例6-體內(nèi)的替米考星在N-甲基吡咯烷酮中分別配制了100mg/ml的替米考星二癸酸鹽、二月桂酸鹽和二肉豆蔻酸鹽的配方，然后將這些配方按每公斤體重45或75毫克的劑量皮下注射到貓的頸背部。以前的數(shù)據(jù)表明替米考星磷酸鹽的25mg/kg的劑量對貓是致死的。經(jīng)注射后貓表現(xiàn)有體溫下降和嗜睡，這表示該藥物被生物利用。發(fā)現(xiàn)使用鏈長大于C10的脂肪酸的配方所產(chǎn)生的毒性要小得多，這與藥物從這些配方中釋放較慢相符。所有的這些貓都存活下來并在注射后3天正常行動。下面的表1總結了這些結果。
表1在特定時間間隔血液中的替米考星水平在N-甲基吡咯烷酮中將替米考星分別與癸酸、月桂酸或肉豆蔻酸結合，得到相應的100mg/ml的替米考星鹽配方，將這些配方按指示的劑量注射到9只健康成年貓中。每只貓在6小時和2天時在血細胞和血漿中所得到的濃度在表1中顯示。

也研究了在組織中的替米考星鹽。將溶在含有10％丙二醇的甘油縮甲醛中的濃度為100mg/ml的替米考星∶二月桂脂肪酸鹽以10mg/kg的劑量進行皮下給藥，并測定了藥物在貓體內(nèi)的生物分布。
這里描述的方法是為了測定和定量在各種動物組織和血清中替米考星而設計的，尤其是貓的肝、腎和肺組織及血清。本領域普通技術人員會意識到在不偏離本發(fā)明的情況下，可以對所描述的方法進行多種變化。
將替米考星配方以每公斤體重10毫克的劑量注射到動物后的2天、3天、4天、7天、14天和21天收集它們的腎、肝和肺組織樣品。結果在圖8、圖9和圖10中顯示。我們發(fā)現(xiàn)在貓中腎是標志組織，而在牛和豬中肝是標志組織。腎中的藥物水平總是比在肝中的高，并且在兩種組織中最大濃度(Cmax)都是在48小時左右達到(腎Cmax為13.8mcg/gm；肝Cmax為7.3mcg/gm)。對肺而言，發(fā)現(xiàn)Cmax為7.5mcg/gm，并且是在注射該劑量后約48小時被觀察到。存在于組織中的替米考星的可檢測水平一直持續(xù)到該研究的第21天。
在組織的藥物濃度為1mcg/gm時獲得了約98％的藥物提取率。在各種貓組織中替米考星的檢測極限被確定為0.032mcg/gm。對貓血清而言，在強化后濃度處于0.15到6mcg/gm的范圍時，得到了95％的藥物提取率。檢測極限被確定為0.16mcg/gm，并具有從0.15到6mcg/gm的線性度。
組織樣品的制備在紙巾上用剪子或解剖刀弄碎組織制備組織樣品。在每個試管中加入10ml甲醇并分別勻化樣品10到15分鐘。樣品在冰上超聲一分鐘，然后在4℃以10000轉/分鐘(rpm)離心30分鐘。把甲醇提取物全部倒入干凈離心管中，并在這些管中將組織樣品用10ml甲醇和5.0ml100mM磷酸鹽重懸。這些離心管被漩渦振蕩，然后在4℃以10000rpm離心30分鐘。將提取物全部倒入干凈離心管中，并在4℃以5000rpm離心10分鐘。將甲醇提取物加到裝有70ml水的燒瓶中并旋轉使其混合。
將每份提取物上樣到固相萃取C18 Sep-Pak Plus(SPE)柱(Waters，Milford，MA)，使用一個真空管或流體靜壓泵將提取物導入SPE柱。一旦上樣完成，就用10ml水洗每個SPE柱，然后用10ml 25％乙腈/水以低于每分鐘5ml的流速洗柱。從儀器上卸下SPE柱，并用真空干燥器在高真空(26in.Hg)下將柱完全干燥10分鐘。
用5％乙酸/甲醇將分析物從SPE柱中洗脫出。只收集最初的2.0ml洗脫液。將容量瓶顛倒混合，并儲存在4℃過夜。
樣品洗脫液在經(jīng)0.22μm PVDF濾膜過濾后，在SphereClone5μm苯基柱(Phenomenex，Torrance，CA)上用高壓液相色譜法(HPLC)進行分析。
實施例7-氟西汀 氟西汀是一種選擇性的5-羥色胺再攝取抑制劑，它廣泛用于人類的精神障礙，如強迫癥。已表明氟西汀對治療狗的攻擊行為和分離焦慮以及貓的尿失禁行為是有效的。在含有10％丙二醇的甘油縮甲醛中將氟西汀與脂肪酸按1∶1的比例配成100mg/ml和150mg/ml的氟西汀月桂酸鹽。使用實施例1中描述的透析技術研究濃度為100mg/ml的兩種配方的體外釋放動力學，結果在圖6中顯示。在含有10％丙二醇的甘油縮甲醛中，濃度為100mg/ml的氟西汀堿在實驗中作為對照使用。氟西汀堿配方的釋放約需160個小時，而1∶1(藥物∶月桂酸)的月桂酸鹽配方的釋放需要700個小時。
氟西汀與月桂酸比例為1∶1.1的濃度為150mg/ml的脂肪酸鹽配方按20mg/kg和30mg/kg的劑量皮下注射到貓中。同時兩只貓以1毫克/公斤/天的劑量口服給藥28天。收集42天內(nèi)的血清樣品并用HPLC對氟西汀進行了分析，HPLC中在C18柱上使用含有35％乙腈的pH2.7的磷酸鹽緩沖液。結果顯示脂肪酸鹽配方的單次皮下注射提供了與42天的每日口服給藥相當?shù)乃幬餄舛?圖7)。
氟西汀也可在含有10％丙二醇的甘油縮甲醛中配制成亞油酸鹽，得到澄清溶液。發(fā)現(xiàn)這個配方也在水中沉淀。
實施例8-羅紅霉素
羅紅霉素是一種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，結構如下 它能有效地廣譜抗菌，并被用于治療牛的呼吸疾病。在含有10％丙二醇的甘油縮甲醛中用亞油酸將羅紅霉素的胺基中和，得到200mg/ml的澄清溶液。和在替米考星中的情況一樣，當把該溶液摻入水中時，該鹽會沉淀。
實施例9-特比奈芬特比奈芬是一種抗真菌藥物，結構如下 特比奈芬是鯊烯環(huán)氧化酶的一種特異性抑制劑，而鯊烯環(huán)氧化酶是真菌的麥角固醇生物合成中的關鍵酶。在含有10％丙二醇的甘油縮甲醛中用亞油酸將特比奈芬的胺基中和，得到150mg/ml的澄清溶液。得到的鹽極難溶于水，當把該鹽摻入水中時會有沉淀。
為了本領域技術人員制備和使用本發(fā)明，我們已經(jīng)足夠詳細的描述和舉例說明了本發(fā)明，同時，各種替代、修飾和改進都應該明顯視為沒有脫離本發(fā)明的精神和范圍。
本領域技術人員容易體會到本發(fā)明很適宜實現(xiàn)目標和獲得上面提到的固有的結果和優(yōu)點。本領域技術人員會在這里面作出修飾和其它使用。這些修飾被包含在本發(fā)明的精神內(nèi)，并受到權利要求的限定。
對于本領域技術人員來說，很明顯的是，在不脫離本發(fā)明的范圍和精神下，可以對這里公開的本發(fā)明作出各種替換和修飾。
本說明書提及的所有專利和出版物都表明了在與本發(fā)明相關的領域中普通技術人員的水平。
在這里被解釋性地描述的本發(fā)明可以在缺乏在這里沒有特別公開的某個元素或某些元素、某個限制或某些限制時被恰當?shù)貙嵤?。已?jīng)采用的術語和表達是描述性的術語，而不局限于它們，并且無意在這類術語和表達的使用中排斥被顯示和被描述的特征或它的一部分的任何等價詞，但是要承認各種可能的修飾是在本發(fā)明要求保護的范圍內(nèi)。所以，應該理解的是，盡管本發(fā)明已經(jīng)通過優(yōu)選的實施方案和可選擇的特征被特別的公開，但是本領域技術人員可能對在這里公開的概念作出修飾和改變，而這些修飾和改變被認為是在由所附的權利要求限定的本發(fā)明范圍內(nèi)。
另外，在本發(fā)明的特征和方面以馬庫什(Markush)組的形式來描述的地方，本領域技術人員會認識到本發(fā)明也由此以該馬庫什組的任何單個成員或某些成員的亞組的形式被描述。例如，假如X被描述為選自溴、氯和碘，那么X作為溴的權利要求和X作為溴和碘的權利要求都被完全描述。
其它實施方案在下面的權利要求中被提出。
權利要求
1.一種用于給哺乳動物施用藥理活性化合物的組合物，包括一種具有親脂性抗衡離子的該藥理活性化合物的鹽；和一種藥學上可接受的溶劑；被結合在一起形成一種可注射組合物，當該組合物被注射到水中時會發(fā)生沉淀；并且其中該組合物被注射進哺乳動物體內(nèi)時隨時間的過去釋放出該活性化合物。
2.權利要求1的組合物，其中藥學上可接受的溶劑是一種與水可混溶的溶劑。
3.權利要求1的組合物，其中藥理活性化合物是一種抗生素。
4.權利要求1的組合物，其中藥理活性化合物是替米考星、氧四環(huán)素、強力霉素、氟西汀、羅紅霉素、特比奈芬或美托洛爾。
5.權利要求1的組合物，其中藥理活性化合物選自三甲氧芐二氨嘧啶、新霉素、鏈霉素、慶大霉素、狄布卡因、布比卡因、苯唑卡因、丁卡因、乙酰普馬嗪、伊曲康唑、四環(huán)素、磺胺類和氨基糖苷類。
6.權利要求1的組合物，其中親脂性抗衡離子是一種C10-C22飽和或不飽和脂肪酸。
7.權利要求1的組合物，其中親脂性抗衡離子是一種C10-C18飽和或不飽和脂肪酸。
8.權利要求7的組合物，其中脂肪酸選自月桂酸、癸酸、肉豆蔻酸、油酸和亞油酸。
9.權利要求1的方法，其中親脂性抗衡離子是一種聚羧酸。
10.權利要求1的組合物，其中聚羧酸選自癸二酸、聚癸二酸、聚天冬氨酸、聚丙烯酸和聚安息香酸。
11.權利要求1的組合物，其中藥學上可接受的溶劑選自下列一種或一種組合吡咯烷酮、N-甲基吡咯烷酮、聚氧乙烯、丙二醇、甘油縮甲醛、異山梨醇二甲基醚、乙醇、二甲基亞砜和四氫糠醇。
12.權利要求1的組合物，其中藥學上可接受的溶劑包括含有10％丙二醇的甘油縮甲醛，含有或不含有穩(wěn)定劑。
13.權利要求1的組合物，其中藥學上可接受的溶劑是甘油三乙酸酯。
14.權利要求1的組合物，其中藥理活性化合物是氧四環(huán)素，親脂性抗衡離子是月桂酸，和藥學上可接受的溶劑選自聚氧乙烯、丙二醇和甘油縮甲醛中的一種或多種。
15.權利要求1的組合物，其中藥理活性化合物是替米考星，親脂性抗衡離子是月桂酸，和藥學上可接受的溶劑選自聚氧乙烯、丙二醇和甘油縮甲醛中的一種或多種。
16.一種給哺乳動物施用藥理活性化合物的方法，包括制備一種組合物，包括該藥理活性化合物和一種親脂性抗衡離子構成的鹽；和一種藥學上可接受的溶劑；被結合到一起形成一種可注射配方；和將該組合物注射到哺乳動物體內(nèi)；其中該組合物被注射進哺乳動物體內(nèi)時，至少有一部分組合物沉淀并隨時間的過去釋放出活性化合物。
17.權利要求16的方法，其中藥學上可接受的溶劑是一種與水可混溶的溶劑。
18.權利要求16的方法，其中藥理活性化合物是一種抗生素。
19.權利要求18的方法，其中抗生素是替米考星、四環(huán)素或強力霉素。
20.權利要求18的方法，其中抗生素選自三甲氧芐二氨嘧啶、新霉素、鏈霉素、慶大霉素、四環(huán)素、磺胺類和氨基糖苷類。
21.權利要求16的方法，其中親脂性抗衡離子是一種脂肪酸。
22.權利要求21的方法，其中脂肪酸是一種C10-C22脂肪酸。
23.權利要求22的方法，其中脂肪酸選自月桂酸、癸酸、肉豆蔻酸、油酸和亞油酸。
24.權利要求16的方法，其中親脂性抗衡離子是癸二酸。
25.權利要求16的方法，其中藥學上可接受的載體選自吡咯烷酮、N-甲基吡咯烷酮、聚氧乙烯、丙二醇、甘油縮甲醛、異山梨醇二甲基醚、乙醇、二甲基亞砜和四氫糠醇。
26.權利要求16的方法，其中藥學上可接受的載體是甘油三乙酸酯。
27.權利要求16的方法，其中藥理活性化合物是氧四環(huán)素，親脂性抗衡離子是月桂酸，和藥學上可接受的溶劑選自聚氧乙烯、丙二醇和甘油縮甲醛中的一種或多種。
28.權利要求16的方法，其中藥理活性化合物是替米考星，親脂性抗衡離子是癸酸，和藥學上可接受的溶劑選自聚氧乙烯、丙二醇和甘油縮甲醛中的一種或多種。
29.一種延長施用給哺乳動物的藥理活性化合物的釋放時間的方法，包括制備一個配方，包括一種該藥理活性化合物和一種親脂性抗衡離子構成的鹽；和一種藥學上可接受的溶劑；被結合到一起形成一種可注射配方；和將該配方注射到哺乳動物體內(nèi)；其中該配方被注射進哺乳動物體內(nèi)時，至少有一部分配方沉淀并隨時間的過去釋放出活性化合物，由此延長該藥理活性化合物的釋放時間。
30.權利要求29的方法，其中藥學上可接受的溶劑是一種與水可混溶的溶劑。
31.權利要求29的方法，其中親脂性抗衡離子是一種C10-C18脂肪酸。
32.權利要求31的方法，其中抗生素是替米考星、氧四環(huán)素或強力霉素。
33.權利要求32的組合物，其中脂肪酸選自月桂酸、癸酸和肉豆蔻酸。
34.權利要求29的組合物，其中親脂性抗衡離子是癸二酸。
35.權利要求29的組合物，其中藥理活性化合物是氧四環(huán)素，親脂性抗衡離子是月桂酸，和藥學上可接受的溶劑選自聚氧乙烯、丙二醇和甘油縮甲醛中的一種或多種。
36.權利要求29的組合物，其中藥理上可接受的化合物是替米考星，親脂性抗衡離子是月桂酸，和藥學上可接受的溶劑選自聚氧乙烯、丙二醇和甘油縮甲醛中的一種或多種。
37.制備一種用于給哺乳動物施用藥理活性化合物的可注射配方的方法，包括提供該藥理活性化合物和一種親脂性抗衡離子構成的鹽；提供一種藥學上可接受的溶劑；把該鹽和該溶劑結合而形成一種可注射配方；其中該配方被注射進哺乳動物體內(nèi)時，至少有一部分配方沉淀并隨時間的過去釋放出活性化合物。
38.權利要求37的方法，其中藥學上可接受的溶劑是一種與水可混溶的溶劑。
39.權利要求37的方法，其中藥理活性化合物是一種抗生素。
40.權利要求37的組合物，其中抗生素是替米考星、氧四環(huán)素或強力霉素。
41.權利要求37的方法，其中親脂性抗衡離子是一種C10-C18脂肪酸。
42.權利要求41的方法，其中脂肪酸選自月桂酸、癸酸和肉豆蔻酸。
43.權利要求37的方法，其中親脂性抗衡離子是癸二酸。
44.權利要求37的方法，其中藥學上可接受的載體選自吡咯烷酮、N-甲基吡咯烷酮、聚氧乙烯、丙二醇、甘油縮甲醛、異山梨醇二甲基醚、乙醇、二甲基亞砜和四氫糠醇。
45.權利要求37的方法，其中藥學上可接受的載體是甘油三乙酸酯。
46.權利要求37的方法，其中藥理活性化合物是氧四環(huán)素，親脂性抗衡離子是月桂酸，和藥學上可接受的溶劑選自聚氧乙烯、丙二醇和甘油縮甲醛中的一種或多種。
47.權利要求37的方法，其中藥理活性化合物是替米考星，親脂性抗衡離子是月桂酸，和藥學上可接受的溶劑選自聚氧乙烯、丙二醇和甘油縮甲醛中的一種或多種。
48.權利要求37的方法，其中藥理活性化合物是氧四環(huán)素，親脂性抗衡離子是月桂酸，和藥學上可接受的溶劑選自聚氧乙烯、丙二醇和甘油縮甲醛中的一種或多種。
49.一種用于將藥理活性化合物施用給哺乳動物的組合物，包括一種具有親脂性抗衡離子的該藥理活性化合物的鹽；和一種藥學上可接受的溶劑；被結合在一起形成一種可注射組合物，并且其中當該組合物被注射到水環(huán)境時，至少有一部分組合物沉淀并隨時間的過去釋放出活性化合物。
50.權利要求49的組合物，其中藥學上可接受的溶劑是一種與水可混溶的溶劑。
51.權利要求49的組合物，其中抗生素是替米考星、氧四環(huán)素或強力霉素。
52.權利要求49的組合物，其中藥理活性化合物選自三甲氧芐二氨嘧啶、新霉素、鏈霉素、慶大霉素、狄布卡因、布比卡因、苯唑卡因、丁卡因、乙酰普馬嗪、伊曲康唑、四環(huán)素、磺胺類和氨基糖苷類。
53.權利要求49的組合物，其中親脂性抗衡離子是一種C10-C18脂肪酸。
54.權利要求53的組合物，其中脂肪酸選自月桂酸、癸酸和肉豆蔻酸。
55.權利要求49的組合物，其中親脂性抗衡離子是癸二酸。
56.權利要求49的組合物，其中藥學上可接受的溶劑選自下列的一種或一種組合吡咯烷酮、N-甲基吡咯烷酮、聚氧乙烯、丙二醇、甘油縮甲醛、異山梨醇二甲基醚、乙醇、二甲基亞砜和四氫糠醇。
57.權利要求49的組合物，其中藥學上可接受的溶劑是甘油三乙酸酯。
58.一種用于將藥理活性化合物施用給哺乳動物的組合物，包括一種具有親脂性抗衡離子的該藥理活性化合物的鹽；和一種藥學上可接受的溶劑；被結合在一起形成一種可注射組合物，并且其中至少一部分該藥理活性化合物和親脂性抗衡離子溶解在溶劑中而且在體內(nèi)沉淀。
59.一種用于將藥理活性化合物施用給哺乳動物的組合物，包括一種具有聚羧酸抗衡離子的該藥理活性化合物的鹽；和一種藥學上可接受的溶劑；被結合在一起形成一種可注射組合物，當該組合物被注射到水中時會發(fā)生沉淀；并且其中該組合物被注射進哺乳動物體內(nèi)時隨時間的過去釋放出活性化合物。
60.權利要求58的組合物，其中聚羧酸選自聚天冬氨酸、聚丙烯酸、癸二酸、聚癸二酸和聚安息香酸。
61.權利要求58的組合物，其中藥學上可接受的溶劑是一種與水可混溶的溶劑。
62.權利要求58的組合物，其中藥理活性化合物是一種抗生素。
63.權利要求58的組合物，其中藥理活性化合物是替米考星、氧四環(huán)素、強力霉素、氟西汀、羅紅霉素、特比奈芬或美托洛爾。
64.權利要求58的組合物，其中藥理活性化合物選自三甲氧芐二氨嘧啶、新霉素、鏈霉素、慶大霉素、狄布卡因、布比卡因、苯唑卡因、丁卡因、乙酰普馬嗪、伊曲康唑、四環(huán)素、磺胺類和氨基糖苷類。
全文摘要
本發(fā)明提供用于延長藥理活性化合物的釋放時間并降低其毒性的組合物和方法。這些化合物包含一種具有親脂性抗衡離子的該藥理活性化合物的鹽和一種藥學上可接受的水溶性溶劑，它們結合起來形成一種可注射組合物。親脂性抗衡離子可以是一種飽和或不飽和C
文檔編號A61P31/04GK1607937SQ02819284
公開日2005年4月20日 申請日期2002年10月18日 優(yōu)先權日2001年10月19日
發(fā)明者Y·V·S·N·穆爾蒂, R·蘇瓦 申請人:愛德士實驗室公司