專利名稱：使用青蒿素樣化合物預(yù)防或延緩癌癥顯現(xiàn)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通過對受試者給予自由基發(fā)生劑來預(yù)防或延緩癌癥顯現(xiàn)的方法。
背景技術(shù)：
青蒿素是從植物黃花蒿(Artemisia annua L.)中分離的倍半萜內(nèi)酯類，該植物的提取物已經(jīng)用于治療瘧疾至少1600年。青蒿素分子含有內(nèi)過氧化橋，它與鐵原子反應(yīng)形成自由基。青蒿素的抗瘧作用是因其與寄生蟲內(nèi)的血紅素發(fā)生反應(yīng)形成自由基而使細(xì)胞死亡所導(dǎo)致的。癌細(xì)胞具有顯著高于正常細(xì)胞的鐵流入。因此，已經(jīng)證實(shí)青蒿素和青蒿素類似物對建立的腫瘤和腫瘤細(xì)胞系具有細(xì)胞毒性(例如，參見Woerdenbag等(1993)《天然產(chǎn)物雜志》(J.Nat.Prod.)56(6)849-56；Lai &Singh(1995)《癌癥通訊》(Cancer Lett.)9141-6；Efferth等(2001)《國際腫瘤學(xué)雜志》(Int.J.Oncol.)18767-73；Li等(2001)《生物有機(jī)藥物化學(xué)通訊》(Bioorg.Med.Chem.Lett.)115-8；Singh&Lai(2001)《生命科學(xué)》(Life Sci.)7049-56；Efferth等(2002)《生物化學(xué)與藥理學(xué)》(Biochem.Pharmacol.)64617-23；Efferth等(2002)《血細(xì)胞、分子和疾病》(Blood Cells，Molecules & Diseases)28(2)160-8；Sadava等(2002)《癌癥通訊》(Cancer Lett.)179151-6)。
已經(jīng)描述了青蒿素的許多類似物和其它具有生物活性的含有內(nèi)過氧化橋(endoperoxide bridge)的化合物(例如，參見美國專利US 5,180,840；美國專利US5,216,175；美國專利US5,225,427；Cumming等(1998)《藥物化學(xué)雜志》(J Med.Chem.)41(6)952-64；Posner等(1999)《藥物化學(xué)雜志》(J Med.Chem.)42300-4；Li等(2001)《生物有機(jī)藥物化學(xué)通訊》(Bioorg.Med.Chem.Lett.)115-8；Wu等(2001)《歐洲藥物化學(xué)雜志》(Eur.J.Med.Chem.)36469-79；Posner等(2003)《藥物化學(xué)雜志》(J Med.Chem.)461060-5)。已經(jīng)用于治療瘧疾的青蒿素類似物包括二氫青蒿素、蒿甲醚、青蒿琥酯、蒿乙醚、二氫青蒿素丙基碳酸酯和阿替林酸(artelinic acid)。
青蒿素是相對安全的藥物，甚至在高劑量下也只有極少且極低微的副作用。已經(jīng)將6天70mg/kg/天的口服劑量用于治療人瘧疾。在用青蒿琥酯治療癌癥患者后，沒有觀察到明顯的不良副作用(口服劑量50mg/天；肌內(nèi)劑量60mg/天；為期9個月)(Singh &Verma(2002)《腫瘤學(xué)學(xué)報(bào)》(Arch.Oncol.)10(4)279-80)。還已將青蒿素和青蒿素類似物用于治療皮膚病，諸如銀屑病、起泡性皮膚病、病毒疣、上皮軟疣(mulluscum conntagiosum)和痔(例如，參見美國專利US4,978,676；美國專利US5,219,880)。還將青蒿素和青蒿素類似物用于預(yù)防瘧疾。
癌癥一般是因單細(xì)胞易于以無法控制的方式增殖而發(fā)生。本領(lǐng)域中需要抑制易于發(fā)展成癌癥的細(xì)胞的方法，以預(yù)防或延緩癌癥發(fā)作。本發(fā)明滿足了這一需求。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了用于預(yù)防或延緩癌癥顯現(xiàn)的方法。該方法包括對受試者給予有效預(yù)防或延緩癌癥顯現(xiàn)的用量的自由基發(fā)生劑。在某些實(shí)施方案中，所述的自由基發(fā)生劑為含有內(nèi)過氧橋的化合物。一般來說，所述的內(nèi)過氧化物化合物選自倍半萜內(nèi)酯類及其醇類、碳酸酯類、酯類、醚類和磺酸酯類、阿替夫林、1，2，4-三噁烷類和1，2，4，5-四噁烷類組成的組。所述的內(nèi)過氧化物化合物(endoperoxide compound)可以為下列通式的化合物或其藥物上可接受的鹽
其中R為 或 R1為氫、羥基、烷基或具有下列通式-O-R2， 或 其中R2為烷基或芳基且n為1-6。
可用于實(shí)施本發(fā)明的代表性內(nèi)過氧化物化合物包括、但不限于青蒿素、二氫青蒿素、蒿甲醚、蒿乙醚、青蒿琥酯、阿替林酸和二氫青蒿素丙基碳酸酯。
自由基發(fā)生劑還包括不含內(nèi)過氧橋、但可以與鐵反應(yīng)形成自由基、例如基于碳的自由基的化合物。自由基發(fā)生劑的來源可以是天然(例如分離自植物)、合成或半合成的。例如，可以通過在微生物宿主中表達(dá)相關(guān)合成途經(jīng)中的酶而產(chǎn)生自由基發(fā)生劑(例如，參見Martin等(2003)《天然生物技術(shù)》(Nature Biotechnol.)，在線公開2003年6月1日，doi10.1038/nbt833)。
在某些實(shí)施方案中，所述的方法進(jìn)一步包括對受試者給予有效量的胞內(nèi)鐵強(qiáng)化劑(iron-enhancing agent)的步驟。典型的胞內(nèi)鐵強(qiáng)化化合物為鐵鹽和復(fù)合物，包括鐵膽鹽、硫酸亞鐵甘氨酸(ferroglycinesulfate)、葡聚糖鐵復(fù)合物(dextran iron complex)、胨化鐵、山梨醇鐵、氧化鐵、含糖鐵、全鐵蛋白和全運(yùn)鐵蛋白。
本發(fā)明的方法適用于任意哺乳動物受試者，諸如人體受試者。因此，在某些實(shí)施方案中，按照本發(fā)明方法用自由基發(fā)生劑治療的接觸致癌物的受試者保持不發(fā)生癌癥的時間是不使用自由基發(fā)生劑治療的對照組動物的2倍。
此外，本發(fā)明的方法使癌癥顯現(xiàn)的可能性降低。因此，在某些實(shí)施方案中，按照本發(fā)明方法用自由基發(fā)生劑治療的接觸致癌物的受試者中無一發(fā)生癌癥，而不使用自由基發(fā)生劑治療的對照組動物中有43％發(fā)生癌癥。
本發(fā)明在另一個方面中提供了試劑盒，它包括自由基-發(fā)生劑和使用該自由基發(fā)生劑來延緩或預(yù)防受試者中癌癥顯現(xiàn)的技術(shù)說明書。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的試劑盒可以進(jìn)一步包括鐵強(qiáng)化劑。
附圖簡述當(dāng)結(jié)合附圖考慮時，本發(fā)明的上述方面和許多附加優(yōu)點(diǎn)更為顯而易見，正如參照下列詳細(xì)描述中同樣可以更好地得到理解，其中附

圖1表示如實(shí)施例1中所述從接觸致癌物，但不進(jìn)行治療1-38周后(表示為″◆″)或每周口服給予青蒿素后(表示為″■″)發(fā)生腫瘤的動物百分比的圖解表示法。
附圖2表示如實(shí)施例2中所述從接觸致癌物，但不進(jìn)行治療1-10周后(表示為″◆″)或用混合在食物中的青蒿素治療后(表示為″■″)發(fā)生腫瘤的動物百分比的圖解表示法。
優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)描述本發(fā)明在一個方面中提供了預(yù)防或延緩癌癥顯現(xiàn)的方法，該方法包括對受試者給予有效預(yù)防或延緩癌癥顯現(xiàn)的用量的自由基發(fā)生劑。本發(fā)明的方法適用于任意的哺乳動物受試者，諸如人體受試者或動物受試者。本文所用的術(shù)語″預(yù)防或延緩癌癥顯現(xiàn)″指的是預(yù)防或延緩在不給予本發(fā)明自由基發(fā)生劑的情況下將發(fā)生的癌癥出現(xiàn)。術(shù)語″癌癥顯現(xiàn)″指的是癌癥在臨床上有表現(xiàn)或可通過適合于檢測和診斷癌癥的任意方法檢測到的時間點(diǎn)。因此，可以將癌癥顯現(xiàn)推遲確定的一段時間或?qū)⑵錈o限期延遲。例如，可以通過殺傷癌前細(xì)胞或者遺傳性或環(huán)境性傾向于異?；驘o法控制的細(xì)胞增殖的細(xì)胞、通過防止這些細(xì)胞分裂或通過防止這些細(xì)胞異?；驘o法控制的分裂來預(yù)防或延緩癌癥的顯現(xiàn)。通過預(yù)防或延緩癌癥的顯現(xiàn)，自由基發(fā)生劑可以延長癌癥顯現(xiàn)前的時間和/或減少癌癥顯現(xiàn)的可能性。
術(shù)語″自由基發(fā)生劑″指的是可以與鐵或含鐵的化合物反應(yīng)而生成自由基、諸如基于碳的自由基的任意試劑。在某些實(shí)施方案中，所述的自由基發(fā)生劑為內(nèi)過氧化物化合物。術(shù)語″內(nèi)過氧化物化合物″指的是含有在有鐵和含鐵的化合物存在下可發(fā)生反應(yīng)而生成自由基的內(nèi)過氧橋的化合物。內(nèi)過氧化物化合物還可以在有銅和錳存在的情況下形成自由基。有代表性的內(nèi)過氧化物化合物如上所述，不過，顯然其它內(nèi)過氧化物化合物也可用于這一目的。
可用于實(shí)施本發(fā)明的典型內(nèi)過氧化物化合物為青蒿素及其類似物，以及含有可與鐵和含鐵化合物反應(yīng)而形成自由基的內(nèi)過氧化橋的其它化合物。因此，合適的內(nèi)過氧化物化合物包括倍半萜內(nèi)酯類及其醇類、碳酸酯類、酯類、醚類和磺酸酯類、阿替夫林、1，2，4-三噁烷類和1，2，4，5-四噁烷類。合適的含有內(nèi)過氧化物的本發(fā)明倍半萜化合物包括下式化合物及其藥物上可接受的鹽 其中R為 或 R1為氫、羥基、烷基或具有下列通式
-O-R2， 或 其中R2為烷基或芳基，且n為1-6。本文所用的術(shù)語″烷基″指的是含有1-6個碳原子、優(yōu)選1-4個碳原子的低級烷基。本發(fā)明的烷基可以為直鏈或支鏈基團(tuán)。術(shù)語″芳基″指的是含有4-14個主鏈碳或雜原子的單環(huán)和多環(huán)芳族基團(tuán)，包括碳環(huán)芳基和雜環(huán)芳基。碳環(huán)芳基是所有的環(huán)原子均為碳的芳基。雜環(huán)芳基含有1-4個雜原子作為環(huán)原子，剩余的環(huán)原子為碳。有代表性的芳基包括例如苯基和芐基。藥物上可接受的鹽包括堿金屬或堿土金屬鹽，優(yōu)選鈉或鉀鹽。
例如，本發(fā)明的內(nèi)過氧化物化合物包括青蒿素，其中R為 二氫青蒿素(R1＝-OH)；artesunicacid(R1＝-OCO(CH2)2CO2H)；以及青蒿琥酯；蒿甲醚(R1＝-OCH3)；和蒿乙醚(R1＝-OC2H5)。本發(fā)明其它有代表性的內(nèi)過氧化物化合物包括阿替林酸、二氫青蒿素丙基碳酸酯、阿替夫林(Ro.42-1611)及其類似物(Biirgen等(1994)Sixth Int.Cong.Infect.Dis.Abst.427，p.152，Prague)、1，2，4-三噁烷類(Peters等(1993)Ann.Trop.Med.Parasit.87(1)9-16)和1，2，4，5-四噁烷類(Vennerstrom等(1992)《藥物化學(xué)雜志》(J Med Chem.)35(16)3023-3027)。青蒿素的其它合適的結(jié)構(gòu)類似物描述在例如美國專利US5,216,175和US5,180,840、Cumming等(1998)《藥物化學(xué)雜志》(J Med Chem.)41(6)952-64和PCT專利申請WO97/01548、WO 99/33461和WO 00/42046中。
有效抑制易發(fā)展成癌癥的細(xì)胞的自由基發(fā)生劑的用量最高可達(dá)最大耐受劑量，但該濃度并非關(guān)鍵，而且可以廣泛改變。當(dāng)然，其精確量隨化合物、給藥途徑、患者的身體情況和其它因素而改變?？梢詫⒚咳談┝孔鳛閱蝿┝拷o藥或可以將其分成多次劑量給藥。
實(shí)際給予的自由基發(fā)生劑的用量可以是預(yù)防有效量，本文中該術(shù)語用于表示對癌癥顯現(xiàn)產(chǎn)生實(shí)質(zhì)性的預(yù)防或延緩作用所需的用量?？梢愿鶕?jù)來源于體外或動物模型試驗(yàn)系統(tǒng)的劑量-反應(yīng)曲線外推出有效劑量。一般將動物模型用于測定理想的劑量范圍和給藥途徑。這類信息可用于確定用于人或其它哺乳動物給藥的有用劑量和給藥途徑。有效劑量的測定完全屬于本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍。因此，實(shí)際給予的用量取決于具體受試者，優(yōu)選是優(yōu)化用量，以便獲得所需效果，并且沒有顯著副作用。
可以通過標(biāo)準(zhǔn)制藥步驟在細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)嶒?yàn)動物中測定自由基發(fā)生劑、諸如內(nèi)過氧化物化合物的預(yù)防功效和可能的毒性(例如ED50，即有效治療50％群體的劑量；和LD50，即使50％群體致死的劑量)。治療與毒性效果之間的劑量比是治療指數(shù)，可以將其表示為LD50與ED50之比。表現(xiàn)出高治療指數(shù)、例如治療指數(shù)至少約為60的自由基發(fā)生劑特別適合于實(shí)施本發(fā)明的方法。可以將從細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)和動物研究中獲得的數(shù)據(jù)用于確定用于人或其它哺乳動物的劑量范圍。自由基發(fā)生劑的劑量優(yōu)選屬于包括幾乎沒有或完全沒有毒性的ED50的循環(huán)濃度范圍。劑量一般在該范圍內(nèi)變化，這取決于所用的劑型、受試者的敏感性和給藥途徑。因此，最佳用量可以根據(jù)給藥方法的不同而改變，并且一般是以相同或相似形式給藥的常用藥劑的用量。例如，對于局部或口服給藥，一般可以每天進(jìn)行1-3次。
就諸如青蒿素及其類似物這類內(nèi)過氧化物化合物而言，可以以約0.1-約20mg/千克體重/天、諸如約0.5-約15mg/千克體重/天、例如約1-約10mg/千克體重/天的水平使用包括所述化合物的制劑獲得良好的結(jié)果。就成年人受試者而言，內(nèi)過氧化物、諸如青蒿素、蒿甲醚或蒿乙醚的典型每日口服劑量約為20mg-約200mg，諸如約40mg-約180mg或約80mg-約160mg。對于其它自由基發(fā)生劑可以使用類似的劑量。
可以如實(shí)施例1和2中所述，通過任意有效途經(jīng)、例如通過口服給予本發(fā)明的自由基發(fā)生劑。還可以通過非腸道途徑給予自由基發(fā)生劑。給藥方法包括局部、吸入、口含、動脈內(nèi)、皮下、髓內(nèi)、靜脈內(nèi)、鼻內(nèi)、直腸內(nèi)、眼內(nèi)給藥和其它常用方式?？梢詫⒆杂苫l(fā)生劑配制成組合物，該組合物中另外含有合適的藥物上可接受的載體，包括賦形劑和其它有利于對哺乳動物受試者給予所述自由基發(fā)生劑的其它化合物。有關(guān)配制和給藥的更具體的技術(shù)可以在最新版《Remington氏藥物科學(xué)》(″Remington′s Pharmaceutica1 Sciences″)(Maack Publishing Co，Easton PA)中找到。
可以如實(shí)施例1和2中所述使用本領(lǐng)域中眾所周知的藥物上可接受的載體配制用于口服給藥的自由基發(fā)生劑，其劑量適合于口服給藥。這類載體使自由基發(fā)生劑能夠被配制成適合于受試者攝取的片劑、丸劑、錠劑、膠囊、液體、凝膠、糖漿劑、漿液、混懸液等。可以將口服應(yīng)用的自由基發(fā)生劑與例如固體賦形劑一起配制，任選研磨所得混合物，并且，如果需要，則在加入合適的其它化合物后將該顆?；旌衔锛庸?，以制成片劑或錠劑藥芯。合適的賦形劑包括碳水化合物或蛋白質(zhì)填料。它們包括、但不限于糖類，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨醇；來自玉米、小麥、稻、馬鈴薯或其它植物的淀粉；纖維素，諸如甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素或羧甲基纖維素鈉；和樹膠，諸如阿拉伯膠和黃耆膠；以及蛋白質(zhì),諸如明膠和膠原蛋白。如果需要，可以加入崩解劑或加溶劑，諸如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、藻酸或其鹽，諸如藻酸鈉。
給錠芯包上合適的包衣層，諸如濃糖溶液，其中還可以含有阿拉伯樹膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝膠、聚乙二醇和/或二氧化鈦、漆用溶液和合適的有機(jī)溶劑或溶劑混合物?？梢韵蚱瑒┗蝈V劑包衣層中加入染料或色素以用于產(chǎn)品識別或表征活性化合物用量(即劑量)。
例如，可以將用于口服給藥的自由基發(fā)生劑配制成由明膠制成的推入配合式膠囊以及由明膠和諸如甘油或山梨醇這類包衣材料組成的密封軟膠囊。推入配合式膠囊可以含有內(nèi)過氧化物化合物，其中混有填充劑或粘合劑，諸如乳糖或淀粉；潤滑劑，諸如滑石或硬脂酸鎂；和任選的穩(wěn)定劑。在軟膠囊中，可以將自由基發(fā)生劑溶于或懸浮于合適的含有或不含穩(wěn)定劑的液體中，諸如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇。例如，可以將自由基發(fā)生劑，諸如內(nèi)過氧化物化合物、如蒿甲醚、蒿乙醚、青蒿素或其它青蒿素類似物溶于油，諸如大豆油、橄欖油或花生油中。合適的大豆油包括、但不限于來自大豆Glycine Soya Bentham(例如Shanghai Number 2 Oil Factory，cat.no.91102)的大豆油。
用于非腸道給藥的組合物包括一種或多種自由基發(fā)生劑的水溶液。為了進(jìn)行注射，可以將本發(fā)明的內(nèi)過氧化物化合物配制在水溶液中，諸如生理上相容的緩沖液，如Hank′s溶液、林格液或生理緩沖鹽水。含水的注射混懸液可以含有增加該混懸液粘度的物質(zhì)，諸如羧甲基纖維素鈉、山梨醇或葡聚糖。另外，可以將自由基發(fā)生劑的混懸液制備成適宜的油類注射混懸液。合適的親脂性溶劑或載體包括脂肪油，諸如芝麻油；或合成的脂肪酸酯類，諸如油酸乙酯或甘油三酯類；或脂質(zhì)體。該混懸液還可以任選含有合適的穩(wěn)定劑或能增加自由基發(fā)生劑的溶解度以便制備高濃度溶液的試劑。
為了進(jìn)行局部或鼻部給藥，一般將適合于透入特定屏障的滲透劑用于制劑中。它們的實(shí)例為2-吡咯烷酮、N-甲基-2-吡咯烷酮、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、丙二醇、甲醇或異丙醇、二甲亞砜和月桂氮酮。還可以包括其它試劑以使該制劑在美容上可接受。它們的實(shí)例為脂肪、蠟、油、染料、香料、防腐劑、穩(wěn)定劑和表面活性劑。還可以包括諸如本領(lǐng)域中公知的那些角質(zhì)分解劑。實(shí)例為水楊酸和硫。為了進(jìn)行局部給藥，組合物可以是經(jīng)皮軟膏或貼劑的形式以便全身投遞所述化合物，并且可以按照常規(guī)方式制備(例如，參見Barry，《皮膚病用制劑》(Dermatological Formulations)(Drugs and the PharmaceuticalSciences--Dekker)；Harrys Cosmeticology(Leonard Hill Books)。
為了進(jìn)行直腸給藥，可以以栓劑或滯留型灌腸劑的形式給予組合物?？梢酝ㄟ^將自由基發(fā)生劑與合適的無刺激性賦形劑混合來制備這類組合物，所述的無刺激性賦形劑在常溫下為固體，而在直腸溫度下為液體，由此可在直腸中熔化而釋放藥物。合適的賦形劑包括、但不限于可可脂和聚乙二醇類。
這些不同類型的添加劑各自的用量對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的，最佳用量與針對相同類型給藥所設(shè)計(jì)的其它已知制劑相同。例如，對于角質(zhì)層滲透促進(jìn)劑來說，一般包括約0.1％-約15％濃度。
可以按照與本領(lǐng)域中已知類似的方式制備含有本發(fā)明自由基發(fā)生劑的組合物(例如，通過常規(guī)的混合、溶解、成粒、制錠、研磨、乳化、包囊、包埋或凍干法)。還可以通過常規(guī)方式(例如包衣)改變組合物以提供適當(dāng)釋放特性，例如緩釋或靶向釋放。
可以將含有自由基發(fā)生劑的組合物制成鹽的形式，并且可以與許多酸成鹽，包括、但不限于鹽酸、硫酸、乙酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、琥珀酸等。鹽比相應(yīng)的游離堿形式更易溶于水性或其它質(zhì)子溶劑中。
在制備了配制成含有自由基發(fā)生劑和可接受的載體的這類組合物后，可以將它們放入合適的容器并標(biāo)記使用。
可以單獨(dú)或與一種或多種其它治療活性劑一起給予本發(fā)明的自由基發(fā)生劑。例如，通過增加氧的張力、減少抗氧化劑的攝取和使用諸如咪康唑這類藥物阻斷過氧化物酶和過氧化氫酶，可以獲得內(nèi)過氧化物化合物的較高功效。還可以通過給予胞內(nèi)鐵強(qiáng)化化合物來提高自由基發(fā)生劑的有效性。因此，本發(fā)明的某些實(shí)施方案還包括胞內(nèi)鐵強(qiáng)化劑。自由基發(fā)生劑，諸如內(nèi)過氧化物化合物，會與鐵反應(yīng)形成自由基。已經(jīng)證實(shí)給予鐵鹽或攜帶鐵的蛋白質(zhì)全運(yùn)鐵蛋白增加了癌細(xì)胞對青蒿素或二氫青蒿素的敏感性(Lai & Singh(1995)《癌癥通訊》(Cancer Lett.)9141-46；Moore等(1995)《癌癥通訊》(Cancer Lett.)9883-7；Singh & Lai(2001)《生命科學(xué)》(Life Sci.)7049-56；Sadava等(2002)《癌癥通訊》(Cancer Lett.)1179151-6)。按照本發(fā)明某些實(shí)施方案的方法，給予胞內(nèi)鐵強(qiáng)化劑后增加了自由基發(fā)生劑延緩或預(yù)防癌癥顯現(xiàn)的有效性。
術(shù)語″胞內(nèi)鐵強(qiáng)化劑″指的是可有效增加體內(nèi)亞鐵的胞內(nèi)濃度的任意活性劑，包括藥物上可接受的鐵鹽和鐵復(fù)合物?？捎糜趯?shí)施本發(fā)明的鐵鹽包括富馬酸亞鐵、硫酸亞鐵、碳酸亞鐵、檸檬酸亞鐵、葡萄糖酸亞鐵和乳酸亞鐵?？捎糜趯?shí)施本發(fā)明的鐵復(fù)合物一般包括含鐵的藥物上可接受的復(fù)合物，例如鐵膽鹽、硫酸亞鐵甘氨酸、葡聚糖鐵復(fù)合物、胨化鐵、山梨醇鐵、氧化鐵和含糖鐵；以及與鐵結(jié)合蛋白和糖蛋白復(fù)合的鐵，諸如全鐵蛋白(holoferritin)和全運(yùn)鐵蛋白(holotransferrin)。
對特定受試者和活性劑而言，用于本發(fā)明的胞內(nèi)鐵強(qiáng)化劑的濃度一般可高達(dá)最大耐受劑量，如上所述，它將隨活性劑、受試者、疾病情況和其它因素的不同而改變。約1-約20mg鐵/千克受試者體重/天的劑量范圍一般用于該目的。在一個實(shí)施方案中，可以在給予自由基發(fā)生劑前給予胞內(nèi)鐵強(qiáng)化劑。
本發(fā)明的方法對受試者的癌癥顯現(xiàn)提供了顯著的延緩作用。因此，在某些實(shí)施方案中，如實(shí)施例1中所述，按照本發(fā)明方法用自由基發(fā)生劑治療的接觸致癌物的受試者保持無癌狀態(tài)的時間至少是不使用自由基發(fā)生劑治療的對照組動物的大約2倍。
此外，本發(fā)明的方法降低了癌癥顯現(xiàn)的可能性。因此，在某些實(shí)施方案中，如實(shí)施例1和2中所述，用自由基發(fā)生劑治療的接觸致癌物的受試者與不使用內(nèi)過氧化物化合物治療的對照組動物相比更少會發(fā)生癌癥。在某些實(shí)施方案中，如實(shí)施例2中所述，與不使用自由基發(fā)生劑治療的對照組動物中有43％患癌相比，按照本發(fā)明方法用自由基發(fā)生劑治療的接觸致癌物的受試者無一發(fā)生癌癥。
本發(fā)明在另一個方面中提供了試劑盒，它包括一種或多種自由基發(fā)生劑和使用自由基發(fā)生劑延緩或預(yù)防癌癥顯現(xiàn)的技術(shù)說明書。該技術(shù)說明書可以指示給予自由基發(fā)生劑可能特別有利的狀況，例如存在癌癥家族史、已有癌癥發(fā)生或接觸致癌物。該說明書還提供了給藥的建議，諸如劑量。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的試劑盒可以進(jìn)一步包括鐵強(qiáng)化劑及其與內(nèi)過氧化物化合物聯(lián)合使用的技術(shù)說明書。
下列實(shí)施例僅解釋了目前已知用于實(shí)施本發(fā)明的最佳方式，但不應(yīng)用于限制本發(fā)明。
實(shí)施例1本實(shí)施例描述了用于預(yù)防或延緩接觸致癌物的大鼠中癌癥發(fā)展的代表性方法，通過每周口腔插管給予青蒿素來進(jìn)行。
材料和方法對雌性Sprague-Dawley大鼠給予胃內(nèi)單劑量的致癌物，即懸浮于橄欖油(Sigma Chemicals，St Louis，MO；25mg/ml)中的7，12-二甲基苯并[a]蒽(DMBA；Sigma Chemicals，St Louis，MO；50mg/kg體重)。將動物隨機(jī)分成兩個處理組，一組每周口腔插管接受青蒿素(Holley Pharmaceuticals，F(xiàn)ullerton，CA；在10mg/ml的橄欖油中10mg/kg)的或橄欖油(對照組)。在給予DMBA一周后開始進(jìn)行青蒿素治療。每周對動物體內(nèi)存在的乳腺腫瘤觸摸一次。對動物體內(nèi)存在的每個腫瘤記錄檢測時間和部位以及大小。
結(jié)果致癌物處理后6周，經(jīng)青蒿素治療的動物中沒有一只出現(xiàn)腫瘤，而對照組動物中有17％存在腫瘤。致癌物處理后10周，經(jīng)青蒿素治療的動物中有9％出現(xiàn)腫瘤，而對照組動物中有58％的動物出現(xiàn)腫瘤。致癌物處理后20周，經(jīng)青蒿素治療的動物中有54％出現(xiàn)腫瘤，而對照組動物中有83％的動物出現(xiàn)腫瘤。致癌物處理后38周，經(jīng)青蒿素治療的動物中有64％出現(xiàn)腫瘤，而對照組動物中100％的動物出現(xiàn)腫瘤。這些結(jié)果如表1和附圖1中所示。
表1.每周用青蒿素治療的動物中的腫瘤發(fā)展情況
因此，每周使用青蒿素治療延緩了經(jīng)致癌物處理的動物中的腫瘤表現(xiàn)。此外，出現(xiàn)腫瘤的動物少于對照組。
實(shí)施例2本實(shí)施例描述了通過提供混在食物中的青蒿素來預(yù)防或延緩接觸致癌物的大鼠中癌癥出現(xiàn)的有代表性的方法。
材料和方法如實(shí)施例1中所述，類似地用致癌物DMBA處理雌性大鼠。將大鼠隨機(jī)分成兩個處理組。在DMBA處理后的第二天將青蒿素(0.05％)混入一組動物的食物中?；诿刻斓臄z食量估計(jì)每天攝取的青蒿素約為10mg/kg/天。對另一組動物(對照組)定期給予大鼠食物。
結(jié)果致癌物處理后10周，用青蒿素飼喂的動物中沒有一只出現(xiàn)腫瘤，而對照組動物中有43％存在腫瘤，正如表2和附圖2中所示。
表2.飼喂青蒿素的動物中腫瘤的發(fā)生
盡管已經(jīng)舉例說明和描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，但是可以理解能夠?qū)ζ溥M(jìn)行各種改變而不會脫離本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍。
權(quán)利要求
1.預(yù)防或延緩癌癥顯現(xiàn)的方法，包括對受試者給予有效預(yù)防或延緩癌癥顯現(xiàn)的用量的自由基發(fā)生劑。
2.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的自由基發(fā)生劑是選自下組的內(nèi)過氧化物化合物倍半萜內(nèi)酯類及其醇類、碳酸酯類、酯類、醚類和磺酸酯類、阿替夫林、1，2，4-三噁烷類和1，2，4，5-四噁烷類。
3.權(quán)利要求2所述的方法，其中所述的內(nèi)過氧化物化合物為下列通式的化合物及其藥物上可接受的鹽 其中R為 或 其中R1為氫、羥基、烷基或具有下列通式-O-R2， 或 其中R2為烷基或芳基，且n為1-6。
4.權(quán)利要求2所述的方法，其中所述的內(nèi)過氧化物化合物為倍半萜化合物，其選自青蒿素、二氫青蒿素、蒿甲醚、蒿乙醚、青蒿琥酯、阿替林酸和二氫青蒿素丙基碳酸酯組成的組。
5.權(quán)利要求4所述的方法，其中所述的內(nèi)過氧化物化合物為青蒿素。
6.權(quán)利要求4所述的方法，其中所述的內(nèi)過氧化物化合物為蒿甲醚。
7.權(quán)利要求2所述的方法，其中每天對受試者給予約0.1-約20mg/kg的內(nèi)過氧化物化合物。
8.權(quán)利要求2所述的方法，其中通過口服或局部給予所述的內(nèi)過氧化物化合物。
9.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的自由基發(fā)生劑為青蒿素，所述的受試者為人體受試者，并且以粉劑、片劑或膠囊形式口服給予青蒿素，其劑量約為0.1-20mg/kg/天。
10.權(quán)利要求1所述的方法，其中對受試者給予自由基發(fā)生劑可以對癌癥顯現(xiàn)提供延緩作用。
11.權(quán)利要求1所述的方法，其中對受試者給予自由基發(fā)生劑可以降低癌癥顯現(xiàn)的可能性。
12.權(quán)利要求1所述的方法，進(jìn)一步包括對受試者給予有效量的胞內(nèi)鐵強(qiáng)化劑。
13.權(quán)利要求12所述的方法，其中所述的胞內(nèi)鐵強(qiáng)化劑選自鐵膽鹽、硫酸亞鐵甘氨酸、葡聚糖鐵復(fù)合物、胨化鐵、山梨醇鐵、氧化鐵、含糖鐵、全鐵蛋白和全運(yùn)鐵蛋白組成的組。
14.權(quán)利要求12所述的方法，其中在給予自由基發(fā)生劑前對受試者給予胞內(nèi)鐵強(qiáng)化劑。
15.一種試劑盒，其中包括自由基發(fā)生劑和使用自由基發(fā)生劑預(yù)防或延緩癌癥顯現(xiàn)的技術(shù)說明書。
16.權(quán)利要求15所述的試劑盒，其中所述的自由基發(fā)生劑為內(nèi)過氧化物化合物，其選自倍半萜內(nèi)酯類及其醇類、碳酸酯類、酯類、醚類和磺酸酯類、阿替夫林、1，2，4-三噁烷類和1，2，4，5-四噁烷類組成的組。
17.權(quán)利要求16所述的試劑盒，其中所述的內(nèi)過氧化物化合物為青蒿素。
18.權(quán)利要求16所述的試劑盒，其中所述的內(nèi)過氧化物化合物為蒿甲醚。
19.權(quán)利要求15所述的試劑盒，其中進(jìn)一步包括鐵強(qiáng)化劑和使用該鐵強(qiáng)化劑的技術(shù)說明書。
全文摘要
本發(fā)明提供了通過對受試者給予自由基發(fā)生劑來預(yù)防或延緩癌癥發(fā)展的方法。有代表性的自由基發(fā)生劑包括內(nèi)過氧化物化合物，諸如含有內(nèi)過氧化物的倍半萜化合物，諸如青蒿素及其類似物、阿替夫林及其類似物、1，2，4－三噁烷類和1，2，4，5－四噁烷類。可以通過給予鐵鹽或復(fù)合物來提高胞內(nèi)鐵濃度。
文檔編號A61K31/335GK1668293SQ03816797
公開日2005年9月14日 申請日期2003年6月6日 優(yōu)先權(quán)日2002年6月6日
發(fā)明者H·C·萊, N·P·辛格 申請人:華盛頓大學(xué)