專利名稱：頭孢呋辛與他唑巴坦的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種具有廣譜抗菌作用的藥物組合物，特別是涉及一種頭孢呋辛與他唑巴坦的組合物。
背景技術(shù)：
頭孢呋辛(cefuroxime)為第二代頭孢菌素中的代表品種，其在7位有一個甲氧肟基側(cè)鏈，其抗菌機制是妨礙細胞壁合成。頭孢呋辛本身即對革蘭陽性菌具有較強的抗菌作用。醫(yī)學(xué)文獻報道對MSSA的MIC90值在2mg.L-1左右，對肺炎鏈球菌的MIC90值在0.125-1mg.L-1之間，對卡他莫拉菌的MIC90值為1mg.L-1。2000-2001中國細菌耐藥監(jiān)測結(jié)果顯示，頭孢呋辛對MSSA和MSSE的MIC90值均為4mg.L-1，對肺炎鏈球菌MIC90值為2mg.L-1。第二代頭孢呋辛對革蘭陰性菌作用優(yōu)于一代頭孢菌素，對革蘭陽性菌作用(包括產(chǎn)酶耐藥金葡球菌)優(yōu)于三代頭孢菌素，對厭氧菌有一定作用，對β-內(nèi)航膠酶穩(wěn)定其在體內(nèi)分布廣，各組織液中包括骨、滑液與房水中均可超過抑制常見菌所需濃度，腎毒性比一代頭孢菌毒低。
頭孢呋辛雖對大多數(shù)革蘭陽性及陰性菌具有較強的抗菌活性，但對超廣譜β內(nèi)酷膠酶(ESBLs，Extended-spectrum β-lactamase)穩(wěn)定性差，產(chǎn)ESBLs細菌對其耐藥。自上世紀70年代后開始在臨床廣泛應(yīng)用。它即保持了第一代頭孢菌素對革蘭陽性菌抗菌作用強的優(yōu)勢，同時對細菌產(chǎn)生的廣譜酶穩(wěn)定，提高了對革蘭陰性菌的抗菌作用。然而隨著超廣譜酶的出現(xiàn)與增多，其對革蘭陰性菌的耐藥率開始上升。2000-2001中國細菌耐藥監(jiān)測研究結(jié)果顯示，其對革蘭陰性菌中較敏感的細菌，如沙門菌屬、志賀菌屬、嗜血桿菌屬等，耐藥率分別為4.8％、11.8％和0％；對臨床常見的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌，耐藥率在30％左右；而對于耐藥性較高的腸桿菌科細菌如陰溝腸桿菌、沙雷菌屬等，耐藥率基本上在40％以上。
他唑巴坦(tazobactam)是一種競爭性不可逆的廣譜β-內(nèi)酰胺酶抑制劑，它在目前臨床常見的三個酶抑制劑中，抑酶作用較強，對大部分超廣譜β-內(nèi)酰胺酶有抑制作用，對某些超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的作用甚至超過克拉維酸。
如何在保持頭孢呋辛較強的抗菌活性的前提下，有效解決其對革蘭陰性菌的耐藥性問題，是人們迫切需要解決的問題。迄今為止，尚未見有關(guān)頭孢呋辛與他唑巴坦的組合物的報導(dǎo)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在解決頭孢呋辛對細菌的耐藥性問題，而提供一種既能保持對革蘭陽性菌的較強的抗菌作用，又能明顯加強對革蘭陰性菌的抗菌作用的具有強效廣譜抗菌作用的頭孢呋辛與他唑巴坦的組合物。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種頭孢呋辛與他唑巴坦的組合物，該組合物由頭孢呋辛與他唑巴坦按1～10∶1的重量比混合而成。
頭孢呋辛與他唑巴坦的優(yōu)選重量比為1∶1，2∶1，4∶1，8∶1，頭孢呋辛與他唑巴坦的最佳重量比為2∶1。
該組合物按如下工藝制備a、將1～10份重量的頭孢呋辛與1份重量的他唑巴坦置于100級潔凈室內(nèi)的混合機中混合3～8分鐘，過30目篩；b、將混合液再置于混合機中混合3～8分鐘，再過30目篩；如此反復(fù)2～5次；c、混合完成后經(jīng)檢驗中間體含量合格后，進行無菌分裝。
在對混合液進行無菌分裝過程中采用二次充氮工藝，使藥液瓶中的含氧量在1％左右。
本發(fā)明的貢獻在于，它有效解決了近年來由于廣泛大量選用頭孢菌素，導(dǎo)致細菌對三代頭孢菌高度耐藥的問題。試驗結(jié)果證實，本發(fā)明的混合物明顯增強了對革蘭陰性菌的抗菌作用，尤其是對大腸埃希菌、克雷伯菌屬、變形桿菌屬、摩氏摩根菌、陰溝腸桿菌、弗勞地枸橡酸桿菌。酶抑制劑他唑巴坦的加入則明顯提高了頭孢呋辛對耐藥菌的抗菌作用，使得MIC90值下降了8-128倍，耐藥率減少了12-80個百分點。該混合物和頭孢呋辛都對除MRSA以外的其它革蘭陽性球菌有很好的抗菌作用。本發(fā)明的混合物明顯加強了對革蘭陰性菌的抗菌作用并保持對革蘭陽性菌很好的抗菌、殺菌作用，可作為強效廣譜殺菌藥。


圖1是兩株大腸埃希菌的殺菌曲線圖，其中圖1A是其中一株大腸埃希菌的殺菌曲線圖，圖1B是另一株大腸埃希菌的殺菌曲線圖。
圖2是兩株肺炎克雷伯菌的殺菌曲線圖，其中圖2A是其中一株肺炎克雷伯菌的殺菌曲線圖，圖2B是另一株肺炎克雷伯菌的殺菌曲線圖。
圖3是兩株金黃色葡萄球菌的殺菌曲線圖，其中圖3A是其中一株金黃色葡萄球菌的殺菌曲線圖，圖3B是另一株金黃色葡萄球菌的殺菌曲線圖。
具體實施例方式
下列實施例是對本發(fā)明的進一步解釋和說明，對本發(fā)明不構(gòu)成任何限制。
取2份(重量)的頭孢呋辛與1份(重量)的他唑巴坦，置于100級潔凈室內(nèi)的V型混合機中，混合5分鐘，過30目篩；將混合藥液再置于混合機中混合5分鐘，再過30目篩；如此反復(fù)3次；將混合藥液裝于無菌罐中，嚴封。再依照臨床用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗中間體含量，合格后進行無菌分裝。為減少殘留氧量對藥品含量的影響，在無菌分裝過程中采用二次充氮工藝，使藥液瓶中的含氧量控制在1％左右(一次充氮，殘留氧量在5％左右)，以確保在貯存期間藥品含量的穩(wěn)定。分裝操作方法采用制藥工業(yè)中常規(guī)的無菌分裝工藝。
下列實驗有助于說明本發(fā)明的組合物的抗菌作用及效果。
本發(fā)明對頭孢呋辛與他唑巴坦的四種配比(1∶1、2∶1、4∶1、8∶1)及單劑對臨床分離致病菌的體外抗菌作用進行了試驗。
1.實驗菌株實驗菌株共計661株，菌種來自全國10個地區(qū)中的15家醫(yī)院2001年1月～2003年1月臨床分離致病菌，包括革蘭陰性菌439株和革蘭陽性菌222株，其中革蘭陰性菌包括大腸埃希菌、克雷伯菌屬、產(chǎn)氣腸桿菌、陰溝腸桿菌、弗勞地枸橡酸桿菌、奇異變形桿菌、普通變形桿菌、摩氏摩根菌、宋氏志賀菌、福氏志賀菌、傷寒沙門菌、粘質(zhì)沙雷菌、鮑曼不動桿菌、銅綠假羊胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌、流感嗜血桿菌)；革蘭陽性菌包括金黃色葡萄球菌、甲氧西株耐藥金葡菌、甲氧西株敏感金葡菌、表皮葡萄球菌、肺炎鏈球菌、化月農(nóng)性鏈球菌、元乳鏈球菌、卡他莫才立。上述菌種由北京大學(xué)臨床藥理研究所實驗室按2002年美國臨床實驗標(biāo)準(zhǔn)委員會(NCCLS2002)標(biāo)準(zhǔn)進行菌株復(fù)核、鑒定。
每株細菌在試驗前都經(jīng)過平板轉(zhuǎn)活分純，以新鮮菌體用于試驗。每次實驗均用標(biāo)準(zhǔn)菌株大腸桿菌ATCC 25922，金黃色葡萄球菌ATCC 29213，銅綠假單胞菌ATCC 27853作為敏感實驗質(zhì)控菌；用不含抗菌藥物的平皿做為試驗菌株生長對照。
2.培養(yǎng)基與孵育條件金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌在MH培養(yǎng)基，35℃孵育24h；肺炎鏈球菌在營養(yǎng)培養(yǎng)基中加入5％脫纖維羊血的血培基上，35℃，5％CO2環(huán)境(CO2培養(yǎng)箱)中孵育24h；化膿性鏈球菌和糞鏈球菌在MH培養(yǎng)基中加入5％脫纖維羊血的血培基上，35℃孵育24h；流感嗜血桿菌在腦心浸液培基中加入5％脫纖維羊血，制成“巧克力”培養(yǎng)基，放置在35℃，5％CO2環(huán)境中孵育24h；其它革蘭陰性菌均為MH培養(yǎng)基，37℃孵育16-18h。
3.最低抑菌濃度(MIC)測定采用平皿二倍稀釋法，抗菌藥物測定濃度范圍為256-0.004mg.L-1。被試菌懸液用Denley多點接種儀接種，測定各抗菌藥物對各種致病菌的最低抑菌濃度(MICmg)。細菌原液濃度為＞108CFU/mL，接種物懸液按1∶10稀釋以獲得107CFU/mL的接種濃度，接種物復(fù)種器可在瓊脂表面接種1-2μl的菌液，最終瓊脂上的點所含的接種菌約104CFU。按NCCLS 2002規(guī)定的判定標(biāo)準(zhǔn)計算細菌耐藥率。頭孢呋辛與他唑巴坦混合物的判定參照單藥的判定標(biāo)準(zhǔn)。
4.最低殺菌濃度(MBC)測定采用試管二倍稀釋法，將系列稀釋的抗菌藥物溶液與菌應(yīng)用液(106CFU/ml)混合，經(jīng)37℃過夜孵育后，澄清的試管繼續(xù)孵育6小時再接種于不含抗生素的平皿中。經(jīng)37℃，18小時孵育，未見細菌生長的最低抗菌藥物濃度為最低殺菌濃度(MBC，mg.L-1)。
5.殺菌曲線在營養(yǎng)肉湯中加入一定濃度的待測抗菌藥物及菌應(yīng)用液，使培養(yǎng)液中細菌的終濃度為106CFU/ml(對照管中不含抗生素)。取即刻、1、2、4、6、8、12及24小時的培養(yǎng)物，進行菌落計數(shù)，并繪制殺菌曲線。
6.對體外抗菌作用的影響因素(1)、細菌接種量影響用平皿二倍稀釋法測定四種自己比頭孢呋辛/他唑巴坦對測試菌的不同菌量(104、105、106、107CFU/ml)對MIC值的影響。
(2)、培養(yǎng)基pH值的影響用平皿二倍稀釋法測定四種配比頭孢呋辛/他唑巴坦對測試菌在不同pH值(pH5.0、pH6.0、pH7.0、pH7.5、pH8.0、pH8.5)條件下對MIC值的影響。
(3)、血清蛋白含量的影響用平皿二倍稀釋法測定四種配比頭孢呋辛/他唑巴坦對測試菌在不同的血清濃度(25％、50％、75％)與不含血清的培養(yǎng)基觀察血清蛋白含量對MIC值的影響。
試驗結(jié)果如下1.不同配比的頭孢呋辛/他唑巴坦對661株臨床分離致病菌的MIC結(jié)果(見表1.)表1
OrganismMIC(mg/L)(strains/β-lactamase positive strains) AntibioticMIC50MICMICmode MICrange90Cefuroxime165122 1-512CXM+TAZ(1∶1) 2 16 2 1-16Escherichia coli CXM+TAZ(2∶1) 4 16 2 1-32(58/53) CXM+TAZ(4∶1) 4 16 2 1-32CXM+TAZ(8∶1) 4 16 2 1-32Tazobactam256 256256 128-512Cefuroxime4 5122 1-512CXM+TAZ(1∶1) 2 16 1 1-128Klebsiella spp. CXM+TAZ(2∶1) 4 64 1 1-512(47/32) CXM+TAZ(4∶1) 4 64 1 1-512CXM+TAZ(8∶1) 2 5122 1-512Tazobactam256 512128 128-512Cefurroxime 4 2562 1-512CXM+TAZ(1∶1) 4 1282 0.5-128Enterobacter aerogenes CXM+TAZ(2∶1) 4 1282 2-256(28/26) CXM+TAZ(4∶1) 4 1282 1-256CXM+TAZ(8∶1) 4 2562 0.5-256Tazobactam256 512256 128-512Enterobacter cloacae Cefuroxime128 512512 0.25-512(33/30) CXM+TAZ(1∶1) 8 64 4 0.25-128CXM+TAZ(2∶1) 8 64 4 0.25-128CXM+TAZ(4∶1) 8 64 4 0.25-128
CXM+TAZ(8∶1) 864 40.25-128Tazobactam 512 512 512 64-512Cefuroxime 8256 41-512CXM+TAZ(1∶1) 432 21-64Citrobacter freundiiCXM+TAZ(2∶1) 464 21-128(30/28) CXM+TAZ(4∶1) 864 21-128CXM+TAZ(8∶1) 4128 41-128Tazobactam 256 512 256 128-512Cefuroxime 1410.25-4CXM+TAZ(1∶1) 0.5 40.5 0.25-4Shigella flexneri CXM+TAZ(2∶1) 1410.25-4(15/5) CXM+TAZ(4∶1) 1410.25-4CXM+TAZ(8∶1) 1410.25-4Tazobactam 128 256 128 128-256Organism MIC(mg/L)(strains/β-lactamase positive strains) Antibiotic MIC MICMICrangMICmode5090Cefuroxime 4440.5-4CXM+TAZ(1∶1) 2220.5-4Shigella sonneiCXM+TAZ(2∶1) 2220.5-4(15/5)CXM+TAZ(4∶1) 2220.5-4CXM+TAZ(8∶1) 2220.5-4Tazobactam 128 128 128 128Salmonella typhiCefuroxime 2821-16(18/2) CXM+TAZ(1∶1) 1411-8
CXM+TAZ(2∶1) 14 2 1-8CXM+TAZ(4∶1) 14 1 1-16CXM+TAZ(8∶1) 14 1 1-8Tazobactam 128 256128128-256Cefuroxime 264 4 1-64CXM+TAZ(1∶1) 216 1 0.5-16Proteus mirabilisCXM+TAZ(2∶1) 232 1 1-32(14/2)CXM+TAZ(4∶1) 264 2 0.5-64CXM+TAZ(8∶1) 21282 1-128Tazobactam 256 512256256-512Cefuroxime 256 5125121-512CXM+TAZ(1∶1) 14 1 0.5-16Proteus vulgarisCXM+TAZ(2∶1) 18 1 0.5-8(15/11)CXM+TAZ(4∶1) 18 1 0.5-8CXM+TAZ(8∶1) 28 1 0.5-8Tazobactam 256 512256256-512Cefuroxime 16 64 16 4-512CXM+TAZ(1∶1) 24 2 1-32Morganella morganiiCXM+TAZ(2∶1) 28 2 1-32(26/22)CXM+TAZ(4∶1) 416 4 2-128CXM+TAZ(8∶1) 816 4 2-512Tazobactam 256 512256128-512Serratia marcescensCefuroxime 512 51251232-512(29/29)CXM+TAZ(1∶1) 32 64 64 8-128
CXM+TAZ(2∶1) 64 128 64 16-512CXM+TAZ(4∶1) 64 128 64 16-512CXM+TAZ(8∶1) 64 128 64 16-512Tazobactam512512 512 256-512Organism MIC(mg/L)(strains/β-lactamase positive strains) AntibioticMIC50MICMICmode MICrange90Cefuroxime512512 512 2-512CXM+TAZ(1∶1) 16 3216 0.5-128Acinetobacter baumanniiCXM+TAZ(2∶1) 32 3232 1-128(28/27)CXM+TAZ(4∶1) 64 128 64 1-128CXM+TAZ(8∶1) 128128 128 2-256Tazobactam16 3216 1-512Cefuroxime512512 512 8-512CXM+TAZ(1∶1) 512512 512 16-512Pseudomonas aeruginosa CXM+TAZ(2∶1) 512512 512 32-512(30/25) CXM+TAZ(4∶1) 512512 512 16-512CXM+TAZ(8∶1) 512512 512 16-512Tazobactam512512 512 256-512Cefuroxime512512 512 128-512CXM+TAZ(1∶1) 128128 128 64-128Stenotrophomonas maltophillaCXM+TAZ(2∶1) 128256 128 64-256(25/21)CXM+TAZ(4∶1) 128256 128 64-256CXM+TAZ(8∶1) 256256 256 64-256Tazobaetam512512 512 128-512
Cefuroxime 0.510.5 0.062-8CXM+TAZ(1∶1) 0.25 0.5 0.5 0.622-2Haemophilus spp.
CXM+TAZ(2∶1) 0.25 10.25 0.125-4(28/21)CXM+TAZ(4∶1) 0.25 10.25 0.125-4CXM+TAZ(8∶1) 0.25 10.25 0.125-4Tazobactam 256512 256 4-512Cefuroxime 512512 512 8-512Methicillin resistant CXM+TAZ(1∶1) 256512 256 16-512Staphylococcus aureus CXM+TAZ(2∶1) 512512 512 32-512(25/19)CXM+TAZ(4∶1) 512512 512 32-512CXM+TAZ(8∶1) 512512 512 256-512Tazobactam 128512 128 64-512Cefuroxime 2 820.5-16Methicillin sensitive CXM+TAZ(1∶1) 2 420.25-8Staphylococcus aureus CXM+TAZ(2∶1) 2 820.25-8(32/15)CXM+TAZ(4∶1) 2 820.25-16CXM+TAZ(8∶1) 2 820.25-32Tazobactam 64 512 64 32-512Organism MIC(mg/L)Antibiotic(strains/β-lactamase positive strains) MIC50MIC90MICmode MICrangeCefuroxime 1 810.125-512CXM+TAZ(1∶1) 0.520.5 0.125-512Methicillin sensitiveCXM+TAZ(2∶1) 0.520.5 0.125-512Staphylococcus epidermidisCXM+TAZ(4∶1) 1 410.125-512(47/36)CXM+TAZ(8∶1) 1 420.125-512Tazobactam 32 256 32 8-512
Cefuroxime 0.016 0.062 0.0160.004-2CXM+TAZ(1∶1) 0.008 0.062 0.0040.004-2Streptococcus pneumoniaeCXM+TAZ(2∶1) 0.008 0.125 0.0080.004-2(60)CXM+TAZ(4∶1) 0.008 0.062 0.0080.004-2CXM+TAZ(8∶1) 0.008 0.062 0.0080.004-2Tazobactam 8 16 82-512Cefuroxime 0.004 2 0.0040.004-16CXM+TAZ(1∶1) 0.004 2 0.0040.004-8Streptococcus pyogenes CXM+TAZ(2∶1) 0.004 2 0.0040.004-16(26)CXM+TAZ(4∶1) 0.004 2 0.0040.004-16CXM+TAZ(8∶1) 0.004 2 0.0040.004-8Tazobactam 32 25632 32-512Cefuroxime 0.25 1 0.25 0.004-1CXM+TAZ(1∶1) 0.125 0.50.1250.004-0.5Moraxella catarrhalis CXM+TAZ(2∶1) 0.125 0.50.1250.004-0.5(19)CXM+TAZ(4∶1) 0.125 0.50.1250.004-0.5CXM+TAZ(8∶1) 0.125 0.50.1250.004-0.5Tazobactam 2 16 22-33Cefuroxime 0.031 0.031 0.0310.004-0.125CXM+TAZ(1∶1) 0.031 0.031 0.0310.004-0.125Streptococcus agalactiaeCXM+TAZ(2∶1) 0.031 0.031 0.0310.004-0.125(13)CXM+TAZ(4∶1) 0.031 0.031 0.0310.004-0.125CXM+TAZ(8∶1) 0.031 0.031 0.0310.004-0.125Tazobactam128 256128 64-256
(1)革蘭陰性桿菌實驗結(jié)果表明酶抑制劑他唑巴坦的加入明顯提高了頭孢呋辛對其耐藥菌的抗菌活性。頭孢呋辛/他唑巴坦1∶1混合物對大腸埃希菌、克雷伯菌屬、普通變形桿菌、摩氏摩根菌、陰溝腸桿菌、弗勞地枸橡酸桿菌、粘質(zhì)沙雷菌、鮑曼不動菌的MIC90值比單藥頭孢呋辛下降8～128倍。其中普通變形桿菌和摩氏摩根菌的MIC90值從512mg.L-1和64mg.L-1降至4mg.L-1，已落入敏感范圍；大腸埃希菌和克雷伯菌屬的MIC90值均從512mg.L-1降至16mg.L-1，屬于中介范疇。從耐藥率來看，加入他唑巴坦后，大腸埃希菌對頭孢呋辛和4種不同配比的頭孢呋辛/他唑巴坦(1∶1，2∶1，4∶1，8∶1)的耐藥率由單藥的50.0％，分別下降為0％、1.7％、1.7％、和3.4％；在15株普通變形桿菌中，有12株耐頭孢呋辛，他唑巴坦的加入明顯降低了頭孢呋辛的耐藥率，4種不同配比的頭孢呋辛/他唑巴坦耐藥率由單藥時的80％，分別降至0％、0％、0％和6.7％，MIC90值也比單藥下降了64-128倍；克雷伯菌屬和奇異變形桿菌的耐藥率也由46.8％、14.3％降至19.2％(1∶1，2∶1)和0.0％(1∶1)；摩氏摩根菌耐藥率由26.9％全部降為3.8％。對于陰溝腸桿菌、弗勞地枸橡酸桿菌和粘質(zhì)沙雷菌，1∶1配比增效作用較明顯，耐藥率由57.6％、36.7％和100％分別降至45.5％、23.3％和79.3％。對于沙門菌屬、志賀菌屬和流感嗜血桿菌，頭孢呋辛仍保有較好的抗菌作用，MIC90值均在敏感范圍內(nèi)，加入酶抑制劑后，MIC值下降1-2倍。對產(chǎn)氣腸桿菌、銅綠假單胞菌和嗜麥芽窄食單胞菌，加入酶抑制劑他唑巴坦后未見明顯增效作用。
(2)革蘭陽性球菌對除MRSA以外的其它被測革蘭陽性球菌，頭孢呋辛仍具有較好的抗菌作用。對MSSA和MSSE，頭孢呋辛的MIC90值均為8mg.L-1，屬敏感范疇。加入他唑巴坦后，4種配比的MIC90值分別為MSSA4，8，8，8mg.L-1；MSSE2，2，4，4mg.L-1，比單藥下降了1～4倍。對鏈球菌屬和卡他莫拉菌，頭孢呋辛的MIC90值均≤2mg.L-1，加入酶抑制劑后作用相當(dāng)。
2.不同配比的頭孢呋辛/他唑巴坦對35株臨床分離致病菌的MBC結(jié)果(見表2-1、表2-2)表2-1OrganismsMIC(mg/L) MBC(mg/L)Antibiltic(strain NO.) 50％90％ Range 50％90％RangeCXM+TAZ(1∶1)4 4 2-44 8 2-8CXM+TAZ(2∶1)Escherichia coli 4 8 2-84 8 4-16CXM+TAZ(4∶1)(11) 8 16 4-16 8 16 4-16CXM+TAZ(8∶1)8 16 4-16 8 16 4-16CXM+TAZ(1∶1)2 4 0.5-4 2 4 0.5-4CXM+TAZ(2∶1)Klebsiella pneumoniae 2 4 0.5-4 4 4 0.5-4CXM+TAZ(4∶1)(13) 2 8 0.5-8 4 8 0.5-16CXM+TAZ(8∶1)4 8 0.5-8 4 8 0.5-8CXM+TAZ(1∶1)2 2 2-42 2 2-4CXM+TAZ(2∶1)Staphylococcus aureus 2 4 2-42 8 2-8CXM+TAZ(4∶1)(11) 2 4 2-44 4 2-8CXM+TAZ(8∶1)2 4 2-44 8 2-8表2-2No.of strains with different ratio of MBC/MICOrganismsAntibiotic 1248MIC/MBC≤4(％)(strain no.)CXM+TAZ(1∶1)821011(100)Escherichia coliCXM+TAZ(2∶1)821011(100)(11)CXM+TAZ(4∶1)11 00011(100)CXM+TAZ(8∶1)731011(100)
CXM+TAZ(1∶1) 10 30013(100)Klebsiella pneumoniae CXM+TAZ(2∶1) 12 10013(100)(13)CXM+TAZ(4∶1) 9 40013(100)CXM+TAZ(8∶1) 10 30013(100)CXM+TAZ(1∶1) 11 00011(100)Staphylococcus aureus CXM+TAZ(2∶1) 7 31011(100)(11)CXM+TAZ(4∶1) 7 40011(100)CXM+TAZ(8∶1) 4 52011(100)MBC結(jié)果顯示，4種不同配比的頭孢呋辛/他唑巴坦對肺炎克雷伯菌的MBC/MIC≤2倍，對大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌的MBC/MIC≤4倍，說明頭孢呋辛/他唑巴坦的復(fù)方制劑具有典型的殺菌作用。
3.殺菌曲線結(jié)果四種配比的頭孢呋辛/他唑巴坦及頭孢呋辛單劑對大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、金黃色葡萄球菌的殺菌曲線見圖1～6。
圖1A、圖1B為兩株大腸埃希菌的殺菌曲線圖。兩株大腸埃希菌均產(chǎn)酶。頭孢呋辛及1∶1，2∶1、4∶1、8∶1配比對01-1308和01-1311的MIC值分別為512和512mg/L，4和2mg/L，4和4mg/L，16和8mg/L，8和8mg/L。選擇殺菌藥物濃度為8mg.L-1。兩株菌的曲線走勢相似，1∶1配比從起始106CFU/ml經(jīng)12或24小時，最終將細菌殺至0；2∶1和4∶1自己比也可將細菌數(shù)量殺至102CFU/ml以下；8∶1配比雖然在8或12小時時，可將細菌數(shù)量殺至103CFU/ml左右，但由于殺菌不夠徹底，隨著時間延長，藥效下降，出現(xiàn)細菌數(shù)量反彈。頭孢呋辛單藥在此濃度不能起到殺菌作用。
圖2A、圖2B所示為兩株肺炎克雷伯菌的殺菌曲線圖。兩株肺炎克雷伯菌均產(chǎn)酶。頭孢呋辛及1∶1、2∶1、4∶1飛8∶1配比對01-76和01-77的MIC值分別為256和128mg.L，2和2mg/L，4和4mg/L，2和4mg/L，2和8mg/L。選擇殺菌藥物濃度為8mg.L-1。其中01-76株，1∶1配比從起始106CFU/ml經(jīng)12小時殺至0，其它配比經(jīng)24小時也均殺至0，頭孢呋辛單藥在此濃度不能殺菌。而01-77株，只有1∶1自己比將細菌殺至0，其它配比和單藥均不能有效殺菌。
圖3A、圖3B所示為兩株金黃色葡萄球菌的殺菌曲線圖。兩株金黃色葡萄球菌均產(chǎn)酶。頭孢呋辛及1∶1、2∶1、4∶1、8∶1配比對01-281和01-192的MIC值分別為2和2mg/L，2和1mg/L，2和2mg/L，2和2mg/L，2和2mg/L選擇殺菌藥物濃度為16mg.L-1。由圖可見，在此濃度下，各配比均能將細菌數(shù)量由106CFU/ml殺至0，單獨頭孢呋辛也可將細菌殺至0或102CFU/ml以下。
4.對體外抗菌作用的影響因素(見表3)表3Organism Inoculum Size(CFU/ml)Antibiotic(strain No.) 104105106107MIC502222CXM+TAZ(1∶1)MIC902244MIC502244CXM+TAZ(2∶1)Escherchia coli MIC904448(10) MIC502224CXM+TAZ(4∶1)MIC904448MIC502224CXM+TAZ(8∶1)MIC9044482Klebsiella pneumoniaeMIC501112(10)CXM+TAZ(1∶1)MIC901222MIC501122CXM+TAZ(2∶1)MIC902222MIC501122CXM+TAZ(4∶1)MIC901222
MIC501112CXM+TAZ(8∶1)MIC902224MIC501112CXM+TAZ(1∶1)MIC902222MIC502222CXM+TAZ(2∶1)MIC902222Staphylcoccus aureus(10)MIC501222CXM+TAZ(4∶1)MIC902222MIC501222CXM+TAZ(8∶1)MIC902222如表3所示，不同配比的頭孢呋辛/他唑巴坦在細菌接種量分別為104、105和107CFU/ml時，對大腸埃希菌、肺炎克雷白菌和金黃色葡萄球菌MIC值與細菌接種量在106時相比無明顯差異。說明細菌接種量在104-107CFU/ml對不同配比的頭孢呋辛/他唑巴坦抗3種菌的MIC值無明顯影響。
培養(yǎng)基pH值分別為5.0、6.0、7.0、7.5、8.0、和8.5時，四種配比的頭孢呋辛/他唑巴坦對大腸埃希菌、肺炎克雷白菌、金黃色葡萄球菌的MIC值見表4。
表4Organism Medium pHAntbiotic(strain No.)PH5.0 PH6.0 pH7.0 pH7.5 PH8.0 PH8.5Escherchia coli 4 2MIC502 2 2 1(11)CXM+TAZ(1∶1)4 4MIC904 2 2 18 4MIC502 2 2 2CXM+TAZ(2∶1)8 4MIC904 4 4 24 4MIC502 2 2 2CXM+TAZ(4∶1)168MIC908 4 4 4
4 4MIC502222CXM+TAZ(8∶1)1616MIC9016 4842 2MIC502111CXM+TAZ(1∶1)22MIC90221122MIC502111CXM+TAZ(2∶1)22Klebsiella MIC902211pneumoniae22(13)MIC502211CXM+TAZ(4∶1)44MIC90222122MIC502111CXM+TAZ(8∶1)24MIC90222111MIC501211CXM+TAZ(1∶1)11MIC90121211MIC501211CXM+TAZ(2∶1)11Staphylcoccus MIC901212aureus11(10)MIC501212CXM+TAZ(4∶1)11MIC90121211MIC501212CXM+TAZ(8∶1)11MIC901212由表4可見，對于大腸埃希菌和肺炎克雷白菌，隨著pH值的增加，各配比的MIC50、MIC90值均略有下降，相差在2-4倍。說明在堿性條件下，該混合物的抗菌作用有所增強，而酸性環(huán)境則可減弱其抗菌作用。對金黃色葡萄球菌，pH值的改變沒有明顯影響藥物對其抗菌作用。
培養(yǎng)基中分別加入25％、50％和75％人血清蛋白時，四種配比的頭孢呋辛/他唑巴坦對大腸埃希菌、肺炎克雷白菌、金黃色葡萄球菌的MC值見表5。
表5OrganismHuman Serum in Medium(％)Antibiotic(strain No.)025％ 50％ 75％MIC5021 1 0.125CXM+TAZ(1∶1)MIC9021 2 0.25MIC5022 2 0.125CXM+TAZ(2∶1)Escherchia coliMIC9042 2 1(10)MIC5021 2 0.125CXM+TAZ(4∶1)MIC904 2 2 1MIC502 1 1 0.125CXM+TAZ(8∶1)MIC904 2 2 1MIC500.031 0.062 0.062 0.031CXM+TAZ(1∶1)MIC900.031 0.062 0.062 0.062MIC500.031 0.062 0.062 0.031CXM+TAZ(2∶1)MIC900.031 0.062 0.062 0.062Klebsiella pneumoniae(10)MIC500.031 0.031 0.031 0.031CXM+TAZ(4∶1)MIC900.031 0.062 0.062 0.062MIC500.031 0.031 0.031 0.031CXM+TAZ(8∶1)MIC900.031 0.062 0.031 0.062MIC504 2 4 2CXM+TAZ(1∶1)MIC904 4 4 4MIC504 4 4 2CXM+TAZ(2∶1)MIC904 4 4 4Staphylcoccus aureus(10)MIC504 4 4 2CXM+TAZ(4∶1)MIC904 4 4 4MIC504 4 4 2CXM+TAZ(8∶1)MIC904 4 4 4
由表可見，當(dāng)培養(yǎng)基中加入75％人血清蛋白時，4種聯(lián)合制劑對大腸埃希菌的MIC50、MIC90值較不加血清均有下降，降低4-16倍。其它比例及菌種對體外抗菌作用沒有的顯著影響。
權(quán)利要求
1.一種頭孢呋辛與他唑巴坦的組合物，其特征在于，該組合物由頭孢呋辛與他唑巴坦按1～10∶1的重量比混合而成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的頭孢呋辛與他唑巴坦的組合物，其特征在于，頭孢呋辛與他唑巴坦的優(yōu)選重量比為1∶1，2∶1，4∶1，8∶1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的頭孢呋辛與他唑巴坦的組合物，其特征在于，頭孢呋辛與他唑巴坦的最佳重量比為2∶1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一條所述的頭孢呋辛與他唑巴坦的組合物，其特征在于，該組合物按如下工藝制備a、將1～10份重量的頭孢呋辛與1份重量的他唑巴坦置于100級潔凈室內(nèi)的混合機中混合3～8分鐘，過30目篩；b、將混合液再置于混合機中混合3～8分鐘，再過30目篩；如此反復(fù)2～5次；c、混合完成后經(jīng)檢驗中間體含量合格后，進行無菌分裝。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的頭孢呋辛與他唑巴坦的組合物，其特征在于，在對混合液進行無菌分裝過程中采用二次充氮工藝，使藥液瓶中的含氧量在1％左右。
全文摘要
一種頭孢呋辛與他唑巴坦的組合物，該組合物由頭孢呋辛與他唑巴坦按1～10∶1的重量比混合而成。頭孢呋辛與他唑巴坦的優(yōu)選重量比為1∶1，2∶1，4∶1，8∶1，頭孢呋辛與他唑巴坦的最佳重量比為2∶1。其制備工藝為a.將1～10份重量的頭孢呋辛與1份重量的他唑巴坦置于100級潔凈室內(nèi)的混合機中混合3～8分鐘，過30目篩；b.將混合液再置于混合機中混合3～8分鐘，再過30目篩；如此反復(fù)2～5次；c.混合完成后經(jīng)檢驗中間體含量合格后，進行無菌分裝。本發(fā)明有效解決了頭孢呋辛對細菌的耐藥性問題，該混合物既能保持對革蘭陽性菌的較強的抗菌作用，又能明顯加強對革蘭陰性菌的抗菌作用。
文檔編號A61P31/00GK1562040SQ20041002652
公開日2005年1月12日 申請日期2004年3月15日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月15日
發(fā)明者閻志剛, 王磊, 林詩貴 申請人:深圳市制藥廠