專利名稱：Hsd11基因增加腫瘤細(xì)胞對(duì)多種凋亡誘導(dǎo)因子的敏感性的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明專利為HSD11基因的新功能，HSD11基因在調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞對(duì)多種凋亡誘導(dǎo)因子的敏感性方面具有重要作用。本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)高技術(shù)中的新方法、新基因、新蛋白的開發(fā)與應(yīng)用領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，1996年全球58億人口中因癌癥死亡約有630萬(wàn)人，約占總死亡人數(shù)的12％，其中近60％死于肺癌、胃癌、乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、口腔癌、肝癌、宮頸癌及食管癌，是僅次于心血管疾病的第二大死因。從1996年以來(lái)全球每年新確診的腫瘤患者均在1030萬(wàn)人以上，到1999年底全球腫瘤患者總數(shù)已逾4000萬(wàn)人。世界衛(wèi)生組織2001年報(bào)道，世界癌癥發(fā)病率和死亡率比1990年上升了22％，今后20年還將上升大約50％。據(jù)我國(guó)衛(wèi)生部統(tǒng)計(jì)，近年來(lái)我國(guó)每年新增腫瘤患者約250萬(wàn)人，每年接受治療的腫瘤患者在600萬(wàn)人以上。因此腫瘤是一類嚴(yán)重危害人類健康的重大疾病。
目前常見的腫瘤治療方法有三種手術(shù)、放療和化療，其中手術(shù)治療是直接切除腫瘤組織，而放療和化療的主要原理就是采用放射性射線或化學(xué)藥物促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡，因此深入了解細(xì)胞凋亡的調(diào)控機(jī)制對(duì)于腫瘤的治療具有重要意義。目前放療和化療的分子靶標(biāo)大多為DNA，通過抑制DNA的合成、阻礙細(xì)胞分裂從而誘使腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。隨著對(duì)細(xì)胞凋亡機(jī)制的了解的深入，一些新的基因已經(jīng)逐步成為腫瘤治療的新靶標(biāo)。例如，p53蛋白在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要作用，過量表達(dá)p53基因可以直接導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生凋亡，以該基因?yàn)榘谢虻幕蛑委煱l(fā)展很快，其中以腺病毒攜帶p53臨床進(jìn)展最為迅速，全球至少有5個(gè)方案進(jìn)入III期臨床試驗(yàn)，我國(guó)科學(xué)家研究的Ad-P53已上市，成為世界上第一個(gè)上市的基因治療藥物。除了直接誘導(dǎo)凋亡的基因以外，很多與凋亡相關(guān)的基因都可以調(diào)節(jié)細(xì)胞對(duì)各種凋亡刺激的敏感性，這其中包括許多目前廣泛使用的化療藥物。因此這些基因也有可能成為腫瘤治療的新靶標(biāo)，而深入了解這些基因的功能對(duì)于腫瘤的治療具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。
發(fā)明目的本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了HSD11基因的一個(gè)新功能HSD11基因可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞對(duì)多種凋亡刺激的敏感性，而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡是放療和化療的主要原理之一，因而HSD11基因有可能成為腫瘤治療的靶標(biāo)。
內(nèi)容與要求采用分子克隆等技術(shù)得到HSD11基因的cDNA序列并將HSD11基因的全長(zhǎng)編碼區(qū)克隆至真核表達(dá)載體；采用電穿孔方法將HSD11的真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)入Hela細(xì)胞中并讓HSD11基因過量表達(dá)，采用紫外線照射以及TNFα、TRAIL和staurosporine等化學(xué)物質(zhì)處理細(xì)胞時(shí)發(fā)現(xiàn)，過量表達(dá)HSD11基因的Hela細(xì)胞對(duì)這些凋亡刺激更敏感，轉(zhuǎn)染HSD11基因的細(xì)胞在相同的凋亡刺激時(shí)比對(duì)照細(xì)胞的凋亡比例高。另一方面，采用特異針對(duì)HSD11基因的RNA干擾質(zhì)粒抑制HSD11基因的表達(dá)導(dǎo)致Hela細(xì)胞拮抗紫外線照射以及TNFα、TRAIL和staurosporine等化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)的凋亡，在相同的凋亡刺激條件下，抑制HSD11基因表達(dá)的Hela細(xì)胞的凋亡比例比對(duì)照細(xì)胞的凋亡比例低。深入研究HSD11基因調(diào)節(jié)細(xì)胞對(duì)凋亡刺激的敏感性的機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn)，HSD11主要通過調(diào)節(jié)Bcl-xL的表達(dá)水平來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞對(duì)凋亡刺激的敏感性。因此本發(fā)明要求HSD11基因在細(xì)胞凋亡調(diào)控方面的新功能以及HSD11基因在腫瘤治療方面的應(yīng)用價(jià)值。
該發(fā)明達(dá)到的技術(shù)指標(biāo)為1.克隆HSD11基因的全長(zhǎng)序列并將HSD11基因的編碼區(qū)克隆到pcDNA-FLAG真核表達(dá)載體中。
2.構(gòu)建一個(gè)針對(duì)HSD11基因的RNA干擾載體ps-HSD11，并證明該載體可以有效地抑制Hela細(xì)胞內(nèi)HSD11基因的表達(dá)(圖1)。
3.流式細(xì)胞分析結(jié)果表明，過量表達(dá)HSD11基因增加Hela細(xì)胞對(duì)TNFα誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的敏感性(圖2)。
4.過量表達(dá)HSD11基因增加Hela細(xì)胞對(duì)紫外線照射以及TNFα、TRAIL和staurosporine等化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)的凋亡的敏感性(圖3)。
5.抑制HSD11基因的表達(dá)導(dǎo)致Hela細(xì)胞可以拮抗紫外線照射以及TNFα、TRAIL和staurosporine等化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)的凋亡(圖4)。
6.檢測(cè)細(xì)胞中的caspases和PARP的表達(dá)水平進(jìn)一步證明HSD11基因增加Hela細(xì)胞對(duì)TNFα誘導(dǎo)的凋亡的敏感性(圖5)。
7.檢測(cè)細(xì)胞中的caspases和PARP的表達(dá)水平進(jìn)一步證明HSD11基因增加Hela細(xì)胞對(duì)紫外線誘導(dǎo)的凋亡的敏感性(圖6)。
8.檢測(cè)細(xì)胞中的caspases和PARP的表達(dá)水平進(jìn)一步證明抑制HSD11基因的表達(dá)導(dǎo)致Hela細(xì)胞可以拮抗紫外線照射誘導(dǎo)的凋亡(圖7)。
9.檢測(cè)細(xì)胞中的Bcl-2家族蛋白的表達(dá)水平表明過量表達(dá)HSD11降低Hela細(xì)胞中Bcl-xL的表達(dá)水平，而抑制Hela細(xì)胞中的HSD11基因的表達(dá)則有助于使Hela在TNFα刺激后維持Bcl-xL的表達(dá)水平(圖8)。
10.檢測(cè)細(xì)胞中的Bcl-2家族蛋白的表達(dá)水平表明過量表達(dá)HSD11降低Hela細(xì)胞中Bcl-xL的表達(dá)水平，而抑制Hela細(xì)胞中的HSD11基因的表達(dá)則有助于使Hela在紫外照射后維持Bcl-xL的表達(dá)水平(圖9，圖10)。


圖1.將我們構(gòu)建的RNA干擾質(zhì)粒ps-HSD11與對(duì)照質(zhì)粒ps-NC分別轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后24小時(shí)收獲細(xì)胞的蛋白質(zhì)，Western blot檢測(cè)細(xì)胞中HSD11基因以及對(duì)照基因β-actin的表達(dá)水平，結(jié)果表明ps-HSD11可以有效地抑制Hela細(xì)胞內(nèi)HSD11基因的表達(dá)。
圖2.將轉(zhuǎn)染pcDNA-HSD11或轉(zhuǎn)染pcDNA-FLAG的Hela細(xì)胞分別采用100ng/ml的TNFα處理12小時(shí)或不處理作為對(duì)照，流式細(xì)胞儀分析不同細(xì)胞的凋亡水平，結(jié)果表明過量表達(dá)HSD11基因增加Hela細(xì)胞對(duì)TNFα誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的敏感性。
圖3.將轉(zhuǎn)染pcDNA-HSD11或轉(zhuǎn)染pcDNA-FLAG的Hela細(xì)胞分別采用150J/m2的紫外線處理或者分別采用100ng/ml的TNFα、50ng/ml的TRAIL、0.2μM的staurosporine處理12小時(shí)，采用流式細(xì)胞儀分析不同細(xì)胞的凋亡水平，三次實(shí)驗(yàn)的結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析后得到圖3，過量表達(dá)HSD11基因增加Hela細(xì)胞對(duì)紫外線照射以及TNFα、TRAIL和staurosporine等化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)的凋亡的敏感性。
圖4.將轉(zhuǎn)染RNA干擾質(zhì)粒ps-HSD11或轉(zhuǎn)染對(duì)照質(zhì)粒ps-NC的Hela細(xì)胞分別采用150J/m2的紫外線處理或者分別采用100ng/ml的TNFα、50ng/ml的TRAIL、0.2μM的staurosporine處理12小時(shí)，采用流式細(xì)胞儀分析不同細(xì)胞的凋亡水平，三次實(shí)驗(yàn)的結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析后得到圖4，抑制HSD11基因的表達(dá)導(dǎo)致Hela細(xì)胞可以拮抗紫外線照射以及TNFα、TRAIL和staurosporine等化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)的凋亡。
圖5.將轉(zhuǎn)染ps-HSD11(泳道1和4)、pcDNA-FLAG(泳道2和5)或pcDNA-HSD11(泳道3和6)的Hela細(xì)胞分別采用100ng/ml的TNFα處理12小時(shí)或不處理作為對(duì)照，在沒有采用TNFα刺激時(shí)，過量表達(dá)HSD11基因、抑制內(nèi)源HSD11基因表達(dá)或者對(duì)照細(xì)胞中三種caspases都沒有被活化，而PARP也保持完整狀態(tài)，三種細(xì)胞之間沒有明顯差別(泳道4-6)。采用TNFα刺激細(xì)胞后，三種caspases都出現(xiàn)不同程度活化，其中RNA干擾抑制HSD11基因表達(dá)的細(xì)胞三種caspases活化程度最低(泳道1)，而與之相反，過量表達(dá)HSD11基因的Hela細(xì)胞中三種caspase活化程度最高(泳道3)。與上述結(jié)果對(duì)應(yīng)，抑制HSD11基因表達(dá)的細(xì)胞中PARP斷裂程度最低，表明細(xì)胞凋亡程度最低(泳道1)；而過量表達(dá)HSD11基因的細(xì)胞的PARP斷裂程度最高，表明細(xì)胞凋亡程度高(泳道3)。這一結(jié)果進(jìn)一步證明了HSD11基因增加了Hela細(xì)胞對(duì)TNFα刺激的凋亡的敏感性。
圖6.將轉(zhuǎn)染pcDNA-HSD11質(zhì)?；蜣D(zhuǎn)染pcDNA-FLAG對(duì)照質(zhì)粒的Hela細(xì)胞在采用150J/m2紫外處理，然后檢測(cè)恢復(fù)不同時(shí)間的細(xì)胞中caspases以及PARP的表達(dá)情況。結(jié)果表明，caspase-3與caspase-9在紫外照射后恢復(fù)培養(yǎng)4h時(shí)就開始斷裂激活，而caspase-8激活的程度比較低。在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)，過量表達(dá)HSD11基因的細(xì)胞中caspases的激活程度都高于轉(zhuǎn)染對(duì)照質(zhì)粒的細(xì)胞。與此相似，過量表達(dá)HSD11基因的細(xì)胞中PARP的斷裂程度也高于轉(zhuǎn)染對(duì)照質(zhì)粒的細(xì)胞，這些結(jié)果證明過量表達(dá)HSD11基因?qū)е翲ela細(xì)胞對(duì)紫外刺激誘導(dǎo)的凋亡更敏感。
圖7.將轉(zhuǎn)染ps-HSD11質(zhì)?；蜣D(zhuǎn)染ps-NC對(duì)照質(zhì)粒的Hela細(xì)胞在采用150J/m2紫外處理，然后檢測(cè)恢復(fù)不同時(shí)間的細(xì)胞中caspases以及PARP的表達(dá)情況。結(jié)果表明，抑制HSD11基因的表達(dá)抑制了紫外照射引起的caspase-3、caspase-8和caspase-9的激活，同時(shí)抑制HSD11基因的表達(dá)抑制了紫外照射引起的PARP的斷裂，這表明采用RNA干擾抑制HSD11基因的表達(dá)拮抗紫外照射引起的細(xì)胞凋亡。
圖8.將轉(zhuǎn)染ps-HSD11(泳道1和4)、pcDNA-FLAG(泳道2和5)或pcDNA-HSD11(泳道3和6)的Hela細(xì)胞分別采用100ng/ml的TNFα處理12小時(shí)或不處理作為對(duì)照，檢測(cè)了轉(zhuǎn)染不同質(zhì)粒的Hela細(xì)胞在TNFα刺激前后Bcl-2家族的四種分子的變化。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染不同質(zhì)粒的Hela細(xì)胞的Bcl-2、Bax與Bak沒有顯著差別，采用TNFα處理三種細(xì)胞后Bcl-2、Bax與Bak的表達(dá)也沒有明顯改變。與此不同，在TNFα處理之前，轉(zhuǎn)染pcDNA-HSD11質(zhì)粒的Hela細(xì)胞中的Bcl-xL表達(dá)水平比轉(zhuǎn)染pcDNA-FLAG對(duì)照質(zhì)粒低(泳道6)，而轉(zhuǎn)染RNA干擾質(zhì)粒沒有顯著改變Bcl-xL的表達(dá)(泳道4，5)；采用TNFα處理后，三種細(xì)胞的Bcl-xL表達(dá)水平都有所下降，但是過量表達(dá)HSD11基因的細(xì)胞的Bcl-xL表達(dá)水平最低(泳道3)，而抑制內(nèi)源HSD11基因表達(dá)的細(xì)胞Bcl-xL表達(dá)水平只有少量降低，基本維持不變(泳道1)。以上結(jié)果表明過量表達(dá)HSD11基因可以降低Bcl-xL的表達(dá)水平，而抑制HSD11基因的表達(dá)有助于細(xì)胞在接受TNFα刺激時(shí)維持Bcl-xL的表達(dá)水平。
圖9.將轉(zhuǎn)染pcDNA-HSD11質(zhì)粒或轉(zhuǎn)染pcDNA-FLAG對(duì)照質(zhì)粒的Hela細(xì)胞在采用150J/m2紫外處理，然后檢測(cè)恢復(fù)不同時(shí)間的細(xì)胞中Bcl-2家族蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。結(jié)果表明，過量表達(dá)HSD11基因并沒有改變Bcl-2、Bax與Bak的表達(dá)水平，而且紫外處理后這些蛋白的表達(dá)水平也沒有顯著改變。但是過量表達(dá)HSD11降低了Hela細(xì)胞中Bcl-xL的表達(dá)水平，紫外處理后，Hela細(xì)胞中Bcl-xL的表達(dá)水平隨時(shí)間的延長(zhǎng)而不斷下降，而過量表達(dá)HSD11的細(xì)胞中的Bcl-xL的表達(dá)在同一時(shí)間點(diǎn)都比對(duì)照細(xì)胞低，上述結(jié)果表明過量表達(dá)HSD11基因降低了Bcl-xL的表達(dá)水平。
圖10.將轉(zhuǎn)染ps-HSD11質(zhì)粒或轉(zhuǎn)染ps-NC對(duì)照質(zhì)粒的Hela細(xì)胞在采用150J/m2紫外處理，然后檢測(cè)恢復(fù)不同時(shí)間的細(xì)胞中Bcl-2家族蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染ps-HSD11沒有改變細(xì)胞中的Bcl-2、Bax與Bak的表達(dá)水平，而且紫外處理后這些蛋白的表達(dá)水平也沒有顯著改變。另外，抑制內(nèi)源HSD11基因的表達(dá)也沒有改變正常細(xì)胞中Bcl-xL的表達(dá)水平，但是采用紫外線處理細(xì)胞后，對(duì)照細(xì)胞中Bcl-xL的表達(dá)水平隨恢復(fù)培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而降低，而抑制HSD11基因表達(dá)的細(xì)胞中Bcl-xL的表達(dá)水平只有微弱降低，這表明抑制HSD11基因的表達(dá)可以使Hela細(xì)胞在紫外線處理時(shí)維持Bcl-xL的表達(dá)水平。
具體實(shí)施例1.Hela細(xì)胞的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)所用Hela細(xì)胞采用RPMI 1640培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)(補(bǔ)加0.03％谷氨酰胺，0.2％NaHCO3，0.59％Hepes(pH7.2)，10％熱滅活(56℃，30min)的胎牛血清及雙抗(青霉素和鏈霉素各100單位/mL)，培養(yǎng)條件為5％的CO2，培養(yǎng)溫度37℃。
2.Hela細(xì)胞的處理a.電轉(zhuǎn)收集細(xì)胞，用無(wú)血清無(wú)雙抗的培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞一次后，用適當(dāng)體積的無(wú)血清無(wú)雙抗的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，離心后以1×107個(gè)細(xì)胞/500μL體積重懸。在標(biāo)記好的Eppendorf管中加入以適當(dāng)比例混合的質(zhì)粒，再加入500μL細(xì)胞，加樣器吹打混勻，轉(zhuǎn)入冰浴預(yù)冷的電轉(zhuǎn)杯中，冰浴10min。250V，950μF電擊(Bio-Rad)，結(jié)束后于冰上放置5min，然后補(bǔ)加完全培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，依據(jù)實(shí)驗(yàn)需要在24-48小時(shí)后處理或收集細(xì)胞。b.凋亡誘導(dǎo)處理將轉(zhuǎn)染不同質(zhì)粒的細(xì)胞分別采用不同的凋亡誘導(dǎo)劑進(jìn)行處理，其中紫外線的劑量為150J/m2或300J/m2，TNFα的濃度為100ng/ml、TRAIL的濃度為50ng/ml、staurosporine的濃度為0.2μM，三種藥物的處理時(shí)間均為12小時(shí)，3.Hela細(xì)胞凋亡水平的檢測(cè)收獲1×106采用不同條件處理過的Hela細(xì)胞，用PBS至少洗兩遍，加250μL PBS重懸細(xì)胞，加750μL無(wú)水乙醇，4℃放置至少16h。檢測(cè)前，離心沉淀細(xì)胞，用PBS洗兩遍，再500μL PBS重懸，然后加入25μL濃度為1mg/mL碘化丙啶(PI)和2μL初始濃度為10mg/mL的RNase A，混勻后37℃放置30min后，即可進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)。統(tǒng)計(jì)圖中的結(jié)果均為三次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)后的結(jié)果。
4.Western blot檢測(cè)HSD11基因以及凋亡調(diào)控中重要基因的表達(dá)水平a.細(xì)胞總蛋白的收集室溫，1,000rpm離心收集2×106細(xì)胞，預(yù)冷的PBS洗滌二次，4℃2,000rpm離心5min。細(xì)胞沉淀重懸于100μL冰預(yù)冷的RIPA緩沖液(50mM HEPES，pH7.5，150mM NaCl，2mM EDTA，2mM EGTA，1％TritonX-100，50mM NaF，5mM Sodium Pyriphosphate，50mM Sodium β-glycerophosphate，1mM SodiumOrtho-vanadate，1mM DTT， 1mM PMSF，10μg/mL Leupeptin，10μg/mL Aprotinin)。4℃在旋轉(zhuǎn)儀上混勻1h后，12,000rpm離心10min。取上清分裝于-70℃儲(chǔ)存或者測(cè)定濃度之后進(jìn)行下一步操作。b.樣品的電泳分離及轉(zhuǎn)移樣品在濃縮膠中以80V，分離膠中以120V電壓(Bio-Rad系統(tǒng))電泳至溴酚藍(lán)距凝膠底部時(shí)停止電泳。戴上手套，用2張Whatman 3M濾紙剝下凝膠，用剪刀將膠和濾紙修剪成合適大小，然后將膠和其中一張濾紙泡在電轉(zhuǎn)緩沖液(39mM甘氨酸，48mMTris堿，30％甲醇)至少5min以上，將另一張濾紙作模板，剪一張同樣大小的硝酸纖維素膜，然后一同放入電轉(zhuǎn)緩沖液浸泡片刻，稍后安裝電轉(zhuǎn)裝置按負(fù)極/多孔墊片/濾紙/凝膠/硝酸纖維素膜/濾紙/多孔墊片/正極，把整個(gè)結(jié)合體浸泡于含電轉(zhuǎn)緩沖液的電泳槽中，由負(fù)極向正極方向進(jìn)行電轉(zhuǎn)(注先趕盡各層之間可能存在的氣泡)，0.22A 4℃電轉(zhuǎn)1.2-1.3h。將硝酸纖維素膜取下，F(xiàn)ast Green(0.04％Fast Green溶于20％甲醇和5％冰醋酸)染色，雙蒸水漂洗，選取所需分子量之間的區(qū)帶進(jìn)行反應(yīng)。分子量依其Rf值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出。c.免疫反應(yīng)以及顯色反應(yīng)用溶于1×TBST(20mM Tris-HCl，pH7.5，500mM NaCl，0.05％Tween20)的5％脫脂奶粉37℃搖晃封閉1h，TBST緩沖液洗5min×3次。先用一抗100μg/mL，1∶1000稀釋在1％BSA/TBS-T中，4℃在rotator上反應(yīng)過夜或室溫反應(yīng)1h；TBS-T緩沖液洗10min×3次(抗體加入1％BSA和0.1％NaN3-20℃保存，可以重復(fù)使用)。再用HRP標(biāo)記的二抗IgG，1∶2000稀釋在封閉液中，室溫反應(yīng)1h。TBS-T緩沖液洗10min×3，滴干膜。將膜放在一張保鮮膜上，用手拿住保鮮膜的兩端，預(yù)先將ECL反應(yīng)液A和B按1∶1體積混勻，加入ECL反應(yīng)混合液(50μL/cm2)，讓混合液鋪滿整張膜，反應(yīng)1min。滴干膜，用另一張保鮮膜將膜包好，于暗室中壓上X光片，曝光時(shí)間30sec-5min不等，之后顯影，定影。
權(quán)利要求
1.本發(fā)明涉及一個(gè)一個(gè)名為HSD11的基因，該基因的特征為在GenBank中的注冊(cè)號(hào)AY652615，cDNA的長(zhǎng)度為1055堿基對(duì)，編碼蛋白質(zhì)長(zhǎng)度為312個(gè)氨基酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述之基因，其特征在于在人宮頸癌細(xì)胞Hela細(xì)胞中過量表達(dá)HSD11基因增加了Hela細(xì)胞對(duì)紫外線照射以及腫瘤壞死因子α(TNFα)、腫瘤壞死因子相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)和staurosporine等化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的敏感性。
3.根據(jù)權(quán)利要求1、2所述之基因，其特征在于采用RNA干擾技術(shù)抑制Hela細(xì)胞中HSD11基因的表達(dá)能夠?qū)е翲ela細(xì)胞拮抗紫外線照射以及TNFα、TRAIL和staurosporine等化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3所述之基因及其功能，其特征在于HSD11基因可以增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)射線以及化學(xué)藥物誘導(dǎo)的凋亡的敏感性，因而可以與腫瘤的放射性療法和化學(xué)療法結(jié)合用于癌癥患者的治療。
全文摘要
本發(fā)明涉及一個(gè)名為HSD11的基因在細(xì)胞凋亡調(diào)控上的功能以及該基因在腫瘤治療上的價(jià)值。內(nèi)容包括在人宮頸癌細(xì)胞Hela細(xì)胞中過量表達(dá)HSD11基因增加了Hela細(xì)胞對(duì)紫外線照射以及TNFα、TRAIL和staurosporine等化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的敏感性；采用RNA干擾技術(shù)抑制Hela細(xì)胞中HSD11基因的表達(dá)能夠?qū)е翲ela細(xì)胞拮抗紫外線照射以及TNFα、TRAIL和staurosporine等化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。由于HSD11基因可以增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)射線以及化學(xué)藥物誘導(dǎo)的凋亡的敏感性，所以HSD11基因具有與腫瘤的放射性療法和化學(xué)療法結(jié)合用于癌癥患者治療的潛力。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1869219SQ20051007106
公開日2006年11月29日 申請(qǐng)日期2005年5月24日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月24日
發(fā)明者蔡從利, 繆時(shí)英, 王琳芳 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所