專利名稱：一種中藥提取物及其制備方法和質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及來源于植物材料的藥用提取物和制備方法，具體的說是獨(dú)一味藥材的提取物和它的制備方法，屬中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
獨(dú)一味，拉丁名為Lamiophlomisrotata(Benth.)Kudo，屬唇形科，獨(dú)一味屬，僅1種，又名獨(dú)步通，藏語亦稱“大巴”、“打布巴”。其根及根莖或全草入藥，藥材表面枯黃色或黃褐色，質(zhì)堅(jiān)硬、干枯、氣腥臭，是我國藏、蒙、納西等民族民間常用草藥之一。最早載于藏醫(yī)名著《四部醫(yī)典》、《月王藥診》?，F(xiàn)有制劑獨(dú)一味片的藥理研究，通過止血、鎮(zhèn)痛、抑菌，急性、亞急性毒性試驗(yàn)，免疫功能試驗(yàn)和抗腫瘤試驗(yàn)，證實(shí)獨(dú)一味有較好的止血、鎮(zhèn)痛和抗菌作用，且毒性小，副作用少，還能提高特異性和非特異性免疫功能。研究也證實(shí)，對(duì)獨(dú)一味作用貢獻(xiàn)最大的，是其中的獨(dú)一味總黃酮，如果能從獨(dú)一味藥材中取得純度較高的總黃酮，對(duì)于制劑創(chuàng)新是極為有利的。但事實(shí)上，能將獨(dú)一味提取物中的總黃酮含量提升到50％以上(即達(dá)到新藥研究中“有效部分”的水平)的方法，目前還沒有。本發(fā)明正是針對(duì)這一點(diǎn)，進(jìn)行了深入的研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是，得到獨(dú)一味的提取物，其中總黃酮的含量達(dá)50％以上。為此，發(fā)明人在研究總黃酮特性的基礎(chǔ)上，提出獨(dú)一味提取物的制備方法，主要包含如下步驟a、取獨(dú)一味藥材，煎煮2-4次，每次加6-10倍量水，每次煎煮1-3小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成85℃時(shí)相對(duì)密度為1.10-1.30的清膏；b、將清膏加乙醇，使溶液含醇量為50％-80％，靜置12-24小時(shí)，取上清液，回收乙醇至無醇味。
c、將回收乙醇后的水液過樹脂柱或聚酰胺柱，先用水和濃度為20％乙醇洗滌柱，再用濃度為35-90％乙醇洗脫，收集洗脫液，干燥，得獨(dú)一味提取物。
經(jīng)檢驗(yàn)，以上提取物中的總黃酮含量可達(dá)50％～70％。基本達(dá)到了發(fā)明目的，所得到的產(chǎn)物也正是發(fā)明人想保護(hù)的產(chǎn)品。
得到初步結(jié)果后，為了細(xì)化參數(shù)，發(fā)明人進(jìn)一步研究，得到詳細(xì)方法a、取獨(dú)一味藥材，粉碎，煎煮3次，每次加入生藥量的8倍量水，每次煎煮1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對(duì)密度在85℃時(shí)為1.10-1.30的清膏。
b、將清膏加乙醇，使溶液含醇量為70％，靜置24小時(shí)，取上清液，回收乙醇至無醇味。
c、將上述回收乙醇后的水液過樹脂柱或聚酰胺柱，先用水和濃度為20％乙醇洗滌柱，再用濃度為40-60％乙醇洗脫，收集洗脫液，干燥，得到獨(dú)一味提取物。
此時(shí)檢驗(yàn)，提取物中總黃酮含量為可達(dá)60％以上。
有一點(diǎn)比較關(guān)鍵，過柱時(shí)的水液與大孔吸附樹脂或聚酰胺的體積應(yīng)為1∶5-10，樹脂或聚酰胺太少，就會(huì)吸附不完全，不可能得到合格產(chǎn)品；樹脂或聚酰胺太多，必然浪費(fèi)，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明1∶5-10的區(qū)間是比較合適的。
另外，這里所用大孔吸附樹脂的型號(hào)沒有限定，可以是AB-8、D101、D201中的任一種。
在進(jìn)行以上研究的同時(shí)，發(fā)明人還建立了該獨(dú)一味提取物的質(zhì)量控制方法，目的之一是控制產(chǎn)品質(zhì)量；目的之二，是用這種方法來檢驗(yàn)工藝流程每一環(huán)節(jié)是否達(dá)到精制目標(biāo)的必要手段。因而，質(zhì)量控制方法，無論與產(chǎn)品還是與制備方法，均應(yīng)屬同一發(fā)明構(gòu)思的。
以下從二個(gè)方法來詳細(xì)闡述該質(zhì)量控制方案。
第一是紫外法測(cè)定總黃酮1.對(duì)照品溶液的制備 精密稱取在120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品20mg，置100ml量瓶中，加70％乙醇80ml，超聲溶解，放冷，加70％乙醇至刻度，搖勻，即得；標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對(duì)照品溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分別置25ml量瓶中，加水至5ml，加5％亞硝酸鈉溶液1ml，混勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘；以相應(yīng)的溶液為空白。照分光光度法，在500nm波長處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
測(cè)定法 取本品適量，精密稱定，置100ml磨口三角瓶中，加熱水25ml，攪拌并超聲處理20分鐘，放冷，用石油醚15ml提取一次，將水層定量轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，再精密加入無水乙醇70ml，再超聲處理10分鐘，放冷，加水至刻度，搖勻，以3000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，精密量取上清液1ml，置25ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“加水至5ml”起，依法測(cè)定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的含量，計(jì)算，即得。
第二是高效液相色譜法對(duì)槲皮素的含量測(cè)定色譜條件 流動(dòng)相55∶45的甲醇-0.4％磷酸；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長370nm；柱溫30℃；理論板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。
對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷干燥過夜的槲皮素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取總黃酮含量測(cè)定項(xiàng)下的本品150mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加2.5mol/L鹽酸甲醇溶液20ml，超聲處理30分鐘，放冷，用2.5mol/L鹽酸甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10ml，置50ml圓底燒瓶中，于90℃水浴中加熱水解30分鐘，放冷，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
由于本發(fā)明的技術(shù)方案，將獨(dú)一味總黃酮含量提升到50％以上，必將給該藥的藥效、制劑帶來重大飛躍，市場(chǎng)價(jià)值也會(huì)提升，因而在藥學(xué)開發(fā)中具有較為重大的意義，使用本發(fā)明的提取物，配以輔料，可以較為容易地制得片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑和栓劑等劑型，因而，這些劑型也應(yīng)在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
以下通過具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例制法取獨(dú)一味1000g，粉碎，加水煎煮三次，加水量分別為10、8、8倍，每次1小時(shí)，合并煎液，濾過(160目篩)，濾液濃縮成相對(duì)密度約為1.30(85℃)的清膏，將清膏加乙醇，使含醇量為50％，靜置24小時(shí)，取上清液，回收乙醇至無醇味，水液過大孔樹脂柱，分別用水、20％乙醇、60％乙醇洗脫，收集60％乙醇的洗脫液，濃縮、干燥(60℃，-0.08Mpa)，干膏粉成細(xì)粉。加交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮60g，低取代羥丙纖維素40g，微晶纖維素100g，混勻，用75％的乙醇制粒；濕顆粒加交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮40g，拌勻，干燥(50℃)，整粒，加微粉硅膠1g，并加交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮適量，至500g，混勻，壓成1000片，制成分散片。
含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備 精密稱取在120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品20mg，置100ml量瓶中，加70％乙醇80ml，水浴加熱溶解，放冷，加70％乙醇至刻度，搖勻，即得(每1ml中含無水蘆丁0.2mg)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對(duì)照品溶液1.0ml、2.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml，分別置25ml量瓶中，加水至6ml，加5％亞硝酸鈉溶液1ml，混勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘；以相應(yīng)的溶液為空白。照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄V B)，在500nm波長處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
測(cè)定法 取本品10片，研細(xì)，取1.0g，精密稱定，置100ml量瓶中，加70％乙醇70ml，置水浴上微熱并時(shí)時(shí)振搖30分鐘，放冷，加70％乙醇至刻度，搖勻，放置2小時(shí)，精密量取上清液1ml，置25ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“加水至6ml”起，依法測(cè)定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的含量，計(jì)算，即得。
本品每片含總黃酮以蘆丁(C27H30O16)計(jì)，不得少于20.0mg。
實(shí)施方案二制法取獨(dú)一味1000g，各加10倍量水煎煮三次，每次1小時(shí)，合并煎液，濾過(200目篩)，濾液減壓(65℃-70℃，-0.08Mpa)濃縮成相對(duì)密度為1.12(65℃)的清膏，將清膏加乙醇，使溶液含醇量為80％，靜置12小時(shí)，取上清液，回收乙醇至無醇味，將回收乙醇后的水液過聚酰胺柱，分別用水、20％乙醇和90％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，噴霧干燥，噴干粉加植物油調(diào)節(jié)總量至600g，膠體磨研磨20分鐘，制成1000粒軟膠囊，即得。
含量測(cè)定照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄V B)測(cè)定。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱取在120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品20mg，置100ml量瓶中，加70％乙醇80ml，超聲溶解，放冷，加70％乙醇至刻度，搖勻，即得(每1ml中含無水蘆丁0.2mg)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對(duì)照品溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分別置25ml量瓶中，加水至5ml，加5％亞硝酸鈉溶液1ml，混勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘；以相應(yīng)的溶液為空白。照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄V B)，在500nm波長處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
測(cè)定法 取本品20粒的內(nèi)容物，混勻，取1.2g，精密稱定，置100ml磨口三角瓶中，加熱水25ml，攪拌并超聲處理(功率250W，頻率40KHz)20分鐘，放冷，用石油醚(60？0℃)提取一次(15ml)，將水層定量轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，再精密加入無水乙醇70ml，再超聲處理(功率250W，頻率40KHz)10分鐘，放冷，加水至刻度，搖勻，離心(3000轉(zhuǎn)/分鐘)5分鐘，精密量取上清液1ml，置25ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“加水至5ml”起，依法測(cè)定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的含量，計(jì)算，即得。
本品每粒含總黃酮以蘆丁(C27H30O16)計(jì)，不得少于20.0mg。
實(shí)施方案三制法取獨(dú)一味藥材，粉碎，煎煮3次，每次加入生藥量的8倍量水，每次煎煮1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對(duì)密度在85℃時(shí)為1.10-1.30的清膏。
將清膏加乙醇適量，使溶液含醇量為70％，回收乙醇至無醇味；將上述提取液上樹脂柱，先用水和濃度為20％乙醇洗滌柱，再用濃度為50％乙醇洗脫，收集洗脫液，干燥，制成微丸，即得。
含量測(cè)定照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄V B)測(cè)定。
a、UV法對(duì)總黃酮的含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備 精密稱取在120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品20mg，置100ml量瓶中，加70％乙醇80ml，超聲溶解，放冷，加70％乙醇至刻度，搖勻，即得(每1ml中含無水蘆丁0.2mg)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對(duì)照品溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分別置25ml量瓶中，加水至5ml，加5％亞硝酸鈉溶液1ml，混勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘；以相應(yīng)的溶液為空白。照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄V B)，在500nm波長處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
測(cè)定法 取本品適量，精密稱定，置100ml磨口三角瓶中，加熱水25ml，攪拌并超聲處理(功率250W，頻率40KHz)20分鐘，放冷，用石油醚(60？0℃)提取一次(15ml)，將水層定量轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，再精密加入無水乙醇70ml，再超聲處理(功率250W，頻率40KHz)10分鐘，放冷，加水至刻度，搖勻，離心(3000轉(zhuǎn)/分鐘)5分鐘，精密量取上清液1ml，置25ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“加水至5ml”起，依法測(cè)定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的含量，計(jì)算，即得。
b、HPLC色譜法對(duì)槲皮素的含量測(cè)定色譜條件 流動(dòng)相甲醇-0.4％磷酸(55∶45)；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長370nm；柱溫30℃；理論板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。
對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷干燥過夜的槲皮素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取總黃酮含量測(cè)定項(xiàng)下的本品150mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加2.5mol/L鹽酸甲醇溶液20ml，超聲處理(250W，40Hz)30分鐘，放冷，用2.5mol/L鹽酸甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10ml，置50ml圓底燒瓶中，于90℃水浴中加熱水解30分鐘，放冷，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
權(quán)利要求
1.一種中藥獨(dú)一味提取物，其特征在于該提取物是由獨(dú)一味藥材加水提取，提取液加乙醇進(jìn)行醇沉，醇沉后的溶液濃縮，再經(jīng)樹脂柱或聚酰胺柱精制而得，且其總黃酮含量為50％以上。
2.權(quán)利要求1所述獨(dú)一味提取物的制備方法，其特征在于采用以下步驟a、取獨(dú)一味藥材，煎煮2-4次，每次加6-10倍量水，每次煎煮1-3小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成85℃時(shí)相對(duì)密度為1.10-1.30的清膏；b、將清膏加乙醇，使溶液含醇量為50％-80％，靜置12-24小時(shí)，取上清液，回收乙醇至無醇味。c、將回收乙醇后的水液過樹脂柱或聚酰胺柱，先用水和濃度為20％乙醇洗滌柱，再用濃度為35-90％乙醇洗脫，收集洗脫液，干燥，得獨(dú)一味提取物。
3.如權(quán)利要求2所述獨(dú)一味提取物的制備方法，其特征在于采用以下步驟a、取獨(dú)一味藥材，粉碎，煎煮3次，每次加8倍量水，每次煎煮1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成85℃時(shí)相對(duì)密度為1.10-1.30的清膏。b、將清膏加乙醇，使溶液含醇量為70％，靜置24小時(shí)，取上清液，回收乙醇至無醇味。c、將回收乙醇后的水液過樹脂柱或聚酰胺柱，先用水和濃度為20％乙醇洗滌柱，再用濃度為40-60％乙醇洗脫，收集洗脫液，干燥，得獨(dú)一味提取物。
4.如權(quán)利要求2或3所述獨(dú)一味提取物的制備方法，其特征在于步驟c中過柱的水液與所用大孔吸附樹脂或聚酰胺的體積為1∶5-10。
5.如權(quán)利要求4所述獨(dú)一味提取物的制備方法，其特征在于大孔吸附樹脂的型號(hào)可以是AB-8、D101或D201中的任一種。
6.權(quán)利要求1所述獨(dú)一味提取物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法可以是如下方法中一種或二種a、紫外法對(duì)總黃酮的含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備 精密稱取在120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品20mg，置100ml量瓶中，加70％乙醇80ml，超聲溶解，放冷，加70％乙醇至刻度，搖勻，即得；標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對(duì)照品溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分別置25ml量瓶中，加水至5ml，加5％亞硝酸鈉溶液1ml，混勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘；以相應(yīng)的溶液為空白。照分光光度法，在500nm波長處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定法 取本品適量，精密稱定，置100ml磨口三角瓶中，加熱水25ml，攪拌并超聲處理20分鐘，放冷，用石油醚15ml提取一次，將水層定量轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，再精密加入無水乙醇70ml，再超聲處理10分鐘，放冷，加水至刻度，搖勻，以3000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，精密量取上清液1ml，置25ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“加水至5ml”起，依法測(cè)定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的含量，計(jì)算，即得。b、高效液相色譜法對(duì)槲皮素的含量測(cè)定色譜條件 流動(dòng)相55∶45的甲醇-0.4％磷酸；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長370nm；柱溫30℃；理論板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷干燥過夜的槲皮素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。供試品溶液的制備 取總黃酮含量測(cè)定項(xiàng)下的本品150mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加2.5mol/L鹽酸甲醇溶液20ml，超聲處理30分鐘，放冷，用2.5mol/L鹽酸甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10ml，置50ml圓底燒瓶中，于90℃水浴中加熱水解30分鐘，放冷，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
7.權(quán)利要求1所述的獨(dú)一味提取物在制備用于活血止痛、化瘀止血的藥物中的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求1所述的獨(dú)一味提取物在制備片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、栓劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種中藥獨(dú)一味的提取物，是按照特定工藝制備而得，且其中總含黃酮含量達(dá)50％以上，具有一定的技術(shù)創(chuàng)新性。同時(shí)，還公開了該提取物的制備方法及質(zhì)量控制方法，通過這兩種方法的結(jié)合，就可以得到合格的獨(dú)一味提取物。
文檔編號(hào)A61K9/16GK1799576SQ20051020001
公開日2006年7月12日 申請(qǐng)日期2005年1月7日 優(yōu)先權(quán)日2005年1月7日
發(fā)明者代龍 申請(qǐng)人:代龍