專利名稱：具有長時間作用的胰高血糖素樣肽－1類似物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及胰高血糖素樣肽-1類似物。此外，本發(fā)明還涉及具有長時間作用的胰高血糖素樣肽-1類似物。
背景技術：
口服攝取食物會引發(fā)胰島素和胰島素量調節(jié)激素以相互協(xié)調的方式分泌，通過增加肝臟、肌肉和脂肪組織對葡萄糖和游離脂肪酸的攝取和減少肝臟的糖原異生作用來控制血糖水平。胰島素的分泌由腸內分泌細胞產生的促分泌激素(即腸促胰島素)調節(jié)。葡萄糖依賴型促胰島素肽(GIP)和胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)可以表現(xiàn)出幾乎所有的腸促胰島素作用。與GIP不同，GLP-1對于糖尿病患者也是有效的。因此，使用GLP-1及其類似物來治療糖尿病引起了許多人的興趣[關于GLP-1生理學的詳細討論見綜述1]Kieffer TJ and Habener JF.，1999，Endocrine reviews，20(6)，876-913；2]Doyle ME and Egan JM.，2001，Recent Prog.Horm.Res.，56377-99；3]Holst JJ.1999，Trends Endocrinol.Metab.，10(6)，229-235；4)Perfetti R and MerkelP.，2000.，Eur.J.Endocrinol.，143717-725；5)Nauck MA.，1997，Cur.Opin.Endocrinol.Diabet.，4291-299；6)Gutniak MK.，1997，Intl.Diabet.Monitor.，9(2)1-12；7)Drucker DJ.，2001，Endocrinol.，142(2)521-527]。
GLP-1是來源于具有160個氨基酸的激素原-胰高血糖素原的具有30個氨基酸的肽。在胰和腸中不同激素原轉化酶的作用導致胰高血糖素和其他不確定肽的產生，而胰高血糖素原的切割產生GLP-1和GLP-2，還有兩種其它的肽。在所有目前已研究的哺乳動物中，GLP-1的氨基酸序列是100％同源的，這意味著它具有關鍵性的生理作用。GLP-1(7-37)OH的C-末端被截短并被酰胺化以形成GLP-1(7-36)NH2。游離酸GLP-1(7-37)OH和酰胺GLP-1(7-36)NH2的生物效應和代謝更新是沒有區(qū)別的。按照慣例，氨基酸的編號基于從胰高血糖素原肽加工的GLP-1(1-37)OH。有生物活性的GLP-1是進一步加工GLP-1(7-36)NH2而得到的結果。因此GLP-1(7-37)OH或GLP-1(7-36)NH2的第一個氨基酸是His7。
在胃腸道中，GLP-1由腸、結腸和直腸粘膜的L-細胞對管腔內葡萄糖的刺激發(fā)生應答而產生的?；钚訥LP-1的血漿半衰期＜5分鐘，其代謝清除率約是12-13分鐘(Holst JJ.，1994，Gastroenterology，1071848-1855)。參與GLP-1代謝的主要蛋白酶是二肽基肽酶(DPP)IV(CD26)，其可以切割N-端His-Ala二肽而產生代謝產物GLP-1(9-37)OH或GLP-1(9-36)NH2，上述產物被不同的觀點認為是GLP-1受體的滅活的、弱的激動劑或拮抗劑。GLP-1受體(GLP-1R)是具有463個氨基酸的G蛋白偶聯(lián)受體，集中于胰臟的β細胞和肺中，而在腦、脂肪組織和腎中的含量較少。GLP-1(7-37)OH或GLP-1(7-36)NH2對GLP-1R的刺激作用導致腺苷酸環(huán)化酶活化、cAMP合成、膜去極化、細胞內鈣升高和葡萄糖誘導的胰島素分泌增加(Holz GGet al.，1995，J.Biol.Chem.，27017749-57)。
GLP-1是最有效的胰島素促分泌素，是由腸粘膜對食物攝取產生應答而分泌的。人體中免疫反性GLP-1的空腹水平是5-10pmol/L，在進食后上升到25pmol/L(Perfetti R and Merkel P，2000見上)。GLP-1R敲除小鼠是葡萄糖非耐受的這一事實著重說明了GLP-1復雜的腸促胰島素作用(Scrocchi LA et al.，1996，Nat.Med.21254-1258)。在糖尿病患者中靜脈輸注GLP-1會產生腸促胰島素反應，雖然這些患者中對口服葡萄糖的腸促胰島素反應減弱。通過輸注或皮下注射施用GLP-1不僅可以控制糖尿病患者的空腹葡萄糖水平，而且也能維持胰島素分泌的葡萄糖閾值(Gutniak M et al.，1992，New Engl.J.Med.，3261316-1322；Nauck MA et al.，1986，Diabetologia，2946-52；Nauck MA et al.，1993，同前．36741-744)。因此GLP-1顯示出了其可以作為以生理方式增加胰島素分泌、同時避免與磺酰脲類藥物相關的低血糖癥的可能治療劑的巨大潛力。
GLP-1對于葡萄糖穩(wěn)態(tài)的其他重要機理是抑制胰高血糖素分泌和抑制胃動力(Tolessa T et al.，1998，J.Clin.Invest.，102764-774)。通過減少糖原異生和糖原分解，GLP-1對于胰臟α細胞的抑制作用可以導致肝葡萄糖生成減少(D′Alessio D et al.，1997，Diabetes，46(Suppl.1)29A)。在糖尿病患者中，保持著GLP-1的抗胰高血糖素作用。
所謂的GLP-1回腸制動效應，是由迷走神經的傳出受體或由腸內平滑肌的直接作用產生的，在該效應中胃動力和胃液分泌被抑制。GLP-1導致的胃酸分泌減少促成了養(yǎng)分利用的停滯期，因此避免了對快速胰島素反應的需求?？傊珿LP-1的胃腸效應明顯有助于延遲葡萄糖和脂肪酸吸收，調節(jié)胰島素分泌和葡萄糖穩(wěn)態(tài)。
GLP-1也表明能誘導β細胞特異性基因，例如GLUT-1轉運蛋白、胰島素受體(經PDX-1和胰島素啟動子的相互作用)和己糖激酶-1。因此，GLP-1具有逆轉通常與衰老相關的葡萄糖不耐性的潛力，如嚙齒動物實驗所示(Perfetti R.and MerkelP.，2000，見上文)。另外，GLP-1也有助于β細胞的新生和β細胞群的增加，以及β細胞功能的恢復(Wang Y.et al.，1997，J.Clin.Invest.，992883-2889；Xu G.et al.，1999，Diabetes，482270-2276)。
GLP-1的中心效應包括在減少食物攝取后增加飽足感，該效應是通過下丘腦GLP-1的作用完成的。在II型糖尿病患者中連續(xù)皮下輸注GLP-148小時可以減少饑餓感和食物攝取，并增加飽足感(Toft-Nielsen MB.et al.，1999，Diabetes Care，221137-1143)。這些厭食效應在GLP-1敲除小鼠中是沒有的(Scrocchi LA.et al.，1996見上文)。
GLP-1的藥代動力學和藥效學(靜脈注射肽在血清中的半衰期是約2-3分鐘[Vilsboll T.et al.，2003，J.Clin.Endocrinol.Med.，88220])以及低血糖作用的持續(xù)時間(2-3小時[Nauck MA.et al.，1996，Diabetologia，391546；Todd JF.et al.，1998，Clin.Sci.95325])都清楚地顯示出，其每日一次或每日兩次給藥不能足夠滿足較嚴重的糖尿病患者需要在全天控制血糖生成的需求。
國際申請WO99/43706公開了一種GLP-1類似物，其在至少一個賴氨酸殘基上具有親脂取代基，使得肽與白蛋白結合以延長體內作用。沒有描述未在賴氨酸殘基上修飾的GLP-1類似物具有更長時間的作用。
國際申請WO 01/98331公開了在下列一個或多個位置有修飾的GLP-1類似物11、12、16、22、23、24、25、27、30、33、34、35、36和37。如其所述，與GLP-1(7-37)OH相比，這些類似物的聚集傾向顯著降低。
國際申請WO 03/18516公開了在下列一個或多個位置有修飾的GLP-1類似物7、8、12、16、18、19、20、22、25、27、30、33及37。如其所述，這些類似物具有增強的功效，有利于使用與有限生物利用度相關的遞送技術。
因此，仍然需要開發(fā)有效的GLP-1類似物，其不僅顯示DPPIV抗性，而且其具有更長的藥理學作用時間。
本發(fā)明正是試圖滿足上述這些及其他的需求。
本發(fā)明引用大量的文獻，在此將它們全部引入本文作為參考。

發(fā)明內容
本發(fā)明涉及具有更高的生物學效能和延長的藥理學活性的新型GLP-1類似物。在一個實施方案中，本發(fā)明涉及在下列一個或多個位置具有氨基酸取代的GLP-1類似物(長度為28或29個氨基酸)8、20、27、30和33。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及包含如下序列的GLP-1類似物R1-His-X8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-X20-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-X27-Phe-Ile-X30-Trp-Leu-X33其中R1選自氫、線性或支化的不飽和C1-C6?；⑷芜x取代的芳基羰基、任選取代的環(huán)烷基羰基和任選取代的芳基烷基羰基；在本發(fā)明的一個實施方案中，R1是氫、2-羥基苯甲?；蚍词?3-己烯?；籜8選自Ala、Aib、Val和Gly；
X20選自Leu和Gly，Gly具有C6-C20烷基側鏈；在本發(fā)明的一個實施方案中，X20是S-辛基甘氨酸；X27選自Ala、Leu、Val、Ile和Glu；X30選自Glu、Asp、Asn、Gln和Ala；并且X33選自Lys-Asn-Aib-OH、Lys-Asn-Aib-NH2、Val-Lys-Asn-OH、Val-Lys-Asn-NH2、Lys-Asn-OH、Lys-Asn-NH2、Val-Lys-Gly-Arg-NH2、Val-Lys-Aib-Arg-OH、Val-Lys-Aib-Arg-NH2、Lys-Asn-Gly-OH和Lys-Asn-Gly-NH2，前提是該序列不是His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)和谷氨酸(Glu)的氨基酸；在8位具有選自丙氨酸(Ala)、氨基異丁酸(Aib)、纈氨酸(Val)和甘氨酸(Gly)的氨基酸；在30位具有選自谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、天冬酰胺(Asn)、天冬氨酸(Asp)和丙氨酸(Ala)的氨基酸；和C-端氨基酸序列纈氨酸33-賴氨酸34-天冬酰胺35-NH2。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其具有選自氫和2-羥基苯甲?；腞1；在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)和谷氨酸(Glu)的氨基酸；在8位具有選自丙氨酸(Ala)、氨基異丁酸(Aib)、纈氨酸(Val)和甘氨酸(Gly)的氨基酸；在30位具有選自谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、丙氨酸(Ala)、天冬酰胺(Asn)和天冬氨酸(Asp)的氨基酸；和C-端氨基酸序列纈氨酸33-賴氨酸34-天冬酰胺35-NH2。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其具有選自2-羥基苯甲?；头词?3-己烯?；腞1；在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)和谷氨酸(Glu)的氨基酸；在30位具有選自谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、丙氨酸(Ala)、谷氨酰胺(Gln)和天冬酰胺(Asn)的氨基酸；和C-端氨基酸序列賴氨酸33-天冬酰胺34-NH2。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其具有選自2-羥基苯甲酰基和反式-3-己烯?；腞1；在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、谷氨酸(Glu)和異亮氨酸(Ile)的氨基酸；在30位具有選自谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、天冬氨酸(Asp)、天冬酰胺(Asn)和丙氨酸(Ala)的氨基酸；和C-端氨基酸序列賴氨酸33-天冬酰胺34-氨基異丁酸35-NH2。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其具有選自氫、2-羥基苯甲?；头词?3-己烯酰基的R1；在8位具有選自氨基異丁酸(Aib)、丙氨酸(Ala)、纈氨酸(Val)和甘氨酸(Gly)的氨基酸；在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、谷氨酸(Glu)和異亮氨酸(Ile)的氨基酸；在30位具有選自谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酰胺(Gln)和丙氨酸(Ala)的氨基酸；和C-端氨基酸序列賴氨酸33-天冬酰胺34-氨基異丁酸35-NH2。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其具有選自氫和反式-3-己烯?；腞1；在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)和谷氨酸(Glu)的氨基酸；在8位具有選自氨基異丁酸(Aib)、纈氨酸(Val)、丙氨酸(Ala)和甘氨酸(Gly)的氨基酸；在30位具有選自谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、天冬氨酸(Asp)、天冬酰胺(Asn)和丙氨酸(Ala)的氨基酸；和C-端氨基酸序列賴氨酸33-天冬酰胺34-NH2。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其在20位具有選自亮氨酸(Leu)和包含C6-C20烷基側鏈的甘氨酸(Gly)的氨基酸，在本發(fā)明的一個實施方案中該烷基側鏈是辛基鏈；在8位具有選自丙氨酸(Ala)、氨基異丁酸(Aib)、纈氨酸(Val)和甘氨酸(Gly)的氨基酸；和C-端氨基酸序列纈氨酸33-賴氨酸34-天冬酰胺35-NH2。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其在20位具有選自亮氨酸(Leu)和包含C6-C20烷基側鏈的甘氨酸(Gly)的氨基酸，在本發(fā)明的一個實施方案中該烷基側鏈是辛基鏈；在8位具有選自丙氨酸(Ala)、氨基異丁酸(Aib)、纈氨酸(Val)和甘氨酸(Gly)的氨基酸；和C-端氨基酸序列賴氨酸33-天冬酰胺34-NH2。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其在20位具有選自亮氨酸(Leu)和包含C6-C20烷基側鏈的甘氨酸(Gly)的氨基酸，在本發(fā)明的一個實施方案中該烷基側鏈是辛基鏈；在8位具有選自丙氨酸(Ala)、氨基異丁酸(Aib)、纈氨酸(Val)和甘氨酸(Gly)的氨基酸；在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)和谷氨酸(Glu)的氨基酸；和C-端氨基酸序列纈氨酸33-賴氨酸34-天冬酰胺35-NH2。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其在20位具有選自亮氨酸(Leu)和包含C6-C20烷基側鏈的甘氨酸(Gly)的氨基酸，在本發(fā)明的一個實施方案中該烷基側鏈是辛基鏈；在8位具有選自丙氨酸(Ala)、氨基異丁酸(Aib)、纈氨酸(Val)和甘氨酸(Gly)的氨基酸；在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)和谷氨酸(Glu)的氨基酸；和C-端氨基酸序列賴氨酸33-天冬酰胺34-NH2。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其在20位具有選自亮氨酸(Leu)和包含C6-C20烷基側鏈的甘氨酸(Gly)的氨基酸，在本發(fā)明的一個實施方案中該烷基側鏈是辛基鏈；在8位具有選自丙氨酸(Ala)、氨基異丁酸(Aib)、纈氨酸(Val)和甘氨酸(Gly)的氨基酸；在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)和谷氨酸(Glu)的氨基酸；在30位具有選自谷氨酸(Glu)、天冬酰胺(Asn)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酰胺(Gln)和丙氨酸(Ala)的氨基酸；和C-端氨基酸序列纈氨酸33-賴氨酸34-天冬酰胺35-NH2。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其在20位具有選自亮氨酸(Leu)和包含C6-C20烷基側鏈的甘氨酸(Gly)的氨基酸，在本發(fā)明的一個實施方案中該烷基側鏈是辛基鏈；在8位具有選自丙氨酸(Ala)、氨基異丁酸(Aib)、纈氨酸(Val)和甘氨酸(Gly)的氨基酸；在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)和谷氨酸(Glu)的氨基酸；在30位具有選自谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、天冬酰胺(Asn)、丙氨酸(Ala)和谷氨酰胺(Gln)的氨基酸；和C-端氨基酸序列賴氨酸33-天冬酰胺34-NH2。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其在20位具有選自亮氨酸(Leu)和包含C6-C20烷基側鏈的甘氨酸(Gly)的氨基酸，在本發(fā)明的一個實施方案中該烷基側鏈是辛基鏈；在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)和谷氨酸(Glu)的氨基酸；在30位具有選自谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、天冬酰胺(Asn)、丙氨酸(Ala)和谷氨酰胺(Gln)的氨基酸；其中R1是反式-3-己烯酰基；和C-端氨基酸序列賴氨酸33-天冬酰胺34-NH2。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其中R1選自氫、2-羥基苯甲?；头词?3-己烯?；?；在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)和谷氨酸(Glu)的氨基酸；在8位具有選自氨基異丁酸(Aib)、纈氨酸(Val)、丙氨酸(Ala)和甘氨酸(Gly)的氨基酸；在30位具有選自谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、天冬氨酸(Asp)、天冬酰胺(Asn)和丙氨酸(Ala)的氨基酸；和C-端氨基酸序列賴氨酸33-天冬酰胺34-甘氨酸35-NH2。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其具有選自2-羥基苯甲酰基和反式-3-己烯?；腞1；在20位具有選自亮氨酸(Leu)和包含C6-C20烷基側鏈的甘氨酸(Gly)的氨基酸，在本發(fā)明的一個實施方案中該烷基側鏈是辛基鏈；和C-端氨基酸序列纈氨酸33-賴氨酸34-氨基異丁酸35-精氨酸36-NH2。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其在20位具有選自亮氨酸(Leu)和包含C6-C20烷基側鏈的甘氨酸(Gly)的氨基酸，在本發(fā)明的一個實施方案中該烷基側鏈是辛基鏈；在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)和谷氨酸(Glu)的氨基酸；在30位具有選自谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、天冬酰胺(Asn)、丙氨酸(Ala)和谷氨酰胺(Gln)的氨基酸；其中R1是反式-3-己烯酰基；和C-端氨基酸序列賴氨酸33-天冬酰胺34-NH2。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO1)在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物2-羥基苯甲?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO2)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物2-羥基苯甲?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Aib-NH2(SEQ.ID NO3)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Th r-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO4)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO5)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物反式-3-己烯?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO6)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物反式-3-己烯?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO7)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物
反式-3-己烯?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO8)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物反式-3-己烯?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO9)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物，反式-3-己烯?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO10)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物反式-3-己烯?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO11)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.ID NO12)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.ID NO13)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物反式-3-己烯酰基-NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.ID No14)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物反式-3-己烯?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Aib-Arg-NH2(SEQ.ID No15)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物2-羥基苯甲?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-NH2(SEQ.ID NO16)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO17)在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO18)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物反式-3-己烯?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO19)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物反式-3-己烯?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO20)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛烷基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO21)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-[(S)-辛基甘氨酸]-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.IDNO22)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(R)-十八烷基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.ID NO23)。
本發(fā)明也涉及一種組合物，其包含治療有效量的本文所述肽或者其藥學上可接受的鹽，與選自藥學上可接受的載體、稀釋劑和賦形劑的至少一種組分。在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種組合物，其包含治療有效量的本文所述肽或者其藥學上可接受的鹽，其中所述治療有效量為約1mcg-約10mg。
本發(fā)明也涉及一種組合物，其包含預防有效量的本文所述肽或者其藥學上可接受的鹽，與選自藥學上可接受的載體、稀釋劑和賦形劑的至少一種組分。
本發(fā)明還涉及一種治療與葡萄糖代謝紊亂相關的疾病或病癥的方法。此外，本發(fā)明涉及一種防止(即預防)與葡萄糖代謝紊亂相關的疾病或病癥的方法。葡萄糖紊亂的非限制性的例子包括I型或II型糖尿病、胰島素抵抗及并發(fā)的體重疾病和病癥或病況。體重疾病或相關病癥的非限制性的例子包括肥胖、與超重并發(fā)的病況、飽足感異常、血漿胰島素水平下降、血糖水平升高和胰臟β細胞群減少。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種治療I型或II型糖尿病的方法，包括向需要這種治療的患者施用治療有效量的本文所述肽，或者其藥學上可接受的鹽。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種治療胰島素抵抗的方法，包括向需要這種治療的患者施用治療有效量的本文所述肽，或者其藥學上可接受的鹽。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種減輕患者體重的方法，包括向需要減輕體重的患者施用有效量的本文所述肽，或者其藥學上可接受的鹽。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種降低患者飽足感的方法，包括向需要的患者施用治療有效量的本文所述肽，或者其藥學上可接受的鹽。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種升高患者進食后血漿胰島素水平的方法，包括向需要的患者施用治療有效量的本文所述肽，或者其藥學上可接受的鹽。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種降低患者空腹血糖水平的方法，包括向需要的患者施用治療有效量的本文所述肽，或者其藥學上可接受的鹽。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種增加患者胰臟β細胞群的方法，包括向需要的患者施用治療有效量的本文所述肽，或者其藥學上可接受的鹽。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及施用本文所述肽或者其藥學上可接受的鹽的方法。施用所述肽或者其藥學上可接受的鹽的方法的非限制性的例子包括皮下給藥、靜脈給藥、透皮給藥、口服、經口腔和鼻內給藥。
本發(fā)明還涉及GLP-1類似物或者其藥學上可接受的鹽用于治療或預防與葡萄糖代謝相關的疾病或病癥的用途。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽用于治療患者I型或II型糖尿病的用途。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽用于治療患者胰島素抵抗的用途。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽用于減輕患者體重的用途。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽用于降低患者飽足感的用途。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽用于升高患者進食后血漿胰島素水平的用途。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽用于降低患者空腹血糖水平的用途。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽用于增加患者胰臟β細胞群的用途。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽在制備用于治療患者I型或II型糖尿病的藥物中的用途。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽在制備用于治療患者胰島素抵抗的藥物中的用途。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽在制備用于減輕患者體重的藥物中的用途。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽在制備用于增加患者飽足感的藥物中的用途。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽在制備用于升高患者進食后血漿胰島素水平的藥物中的用途。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽在制備用于降低患者空腹血糖水平的藥物中的用途。
在另一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽在制備用于增加患者胰臟β細胞群的藥物中的用途。
通過下文給出的詳細描述，進一步的范圍和可應用性將會變得顯而易見。然而應當明白，下文的詳述，當指出本發(fā)明的優(yōu)選實施方案時僅僅是用于解釋說明，因此在本發(fā)明的實質和范圍內進行各種改變和修飾對于本領域技術人員將是顯而易見的。


上文對本發(fā)明進行了一般性的描述，下面將參照附圖來說明本發(fā)明的優(yōu)選方案，其中圖1顯示的是禁食過夜并喂食30分鐘的CD-1小鼠的血糖水平。將不同的肽，其中包括本發(fā)明的肽(400μg/kg)在30分鐘時皮下給藥，并在接下來的6個小時里測定血糖水平。數(shù)據用平均值±SEM值表示；圖2顯示的是Sprague-Dawley大鼠以15mM施用促血糖升高藥后的血糖水平。將不同的肽，其中包括本發(fā)明的肽(100μg/kg)皮下給藥。橫坐標上顯示出了血糖水平(Δ葡萄糖mM)的改變。數(shù)據用平均值±SEM表示；
圖3顯示的是由本發(fā)明的GLP-1類似物對125I-GLP-1(7-36)NH2的替換百分比。用對放射性標記肽結合的半數(shù)最大抑制作用來確定IC50；圖4顯示的是對CD-1小鼠進食后血糖水平的影響。將動物禁食過夜，然后喂食30分鐘。該動物在喂食后立即皮下注射載體(20mM乙酸)、GLP-1類似物(400μg/kg)和Exendin-4TM(40μg/kg)。進食后6小時葡萄糖水平的AUC用棒條表示(平均值±SEM；n＝動物數(shù)，如棒條上方的數(shù)字所示)。經測定，空腹葡萄糖水平平均為4.11±0.07mmol/L(n＝189)，對應于空腹AUC 1615±29.7mmol/L/6h，從所有數(shù)據中減去該值，所得剩余的就是進食后葡萄糖水平。通過ANOVA分析，*P＜0.05vs載體；圖5、6、7和8顯示的是所選擇的類似物對CD-1小鼠進食后葡萄糖水平的影響(劑量應答)。將動物禁食過夜，然后喂食30分鐘。該動物在喂食后立即皮下注射載體(20mM乙酸)或不同劑量的GLP-1類似物(劑量應答從40-400μg/kg)。在注射后的6個小時里測定血糖水平(平均值±SEM；上面的圖)。6個小時的葡萄糖AUC用棒條表示(平均值±SEM；下面的圖；n是動物的數(shù)目，如下面圖中棒條上方的數(shù)字所示)；圖9和10顯示的是對施用了固定(clamped)葡萄糖(15mmol/L)的Sprague-Dawley大鼠中血糖清除率的評價。實驗前將Sprague-Dawley大鼠在12∶12的明∶暗周期下飼養(yǎng)并禁食12小時(過夜)。在給動物輸注葡萄糖后開始的90分鐘獲得Δ葡萄糖值，當血糖水平達到平穩(wěn)的水平時，在該時間點給動物皮下注射載體、GLP-1或GLP-1類似物(GLP-1、TH0384和TH0385的劑量為300μg/kg；TH0395、TH0396、TH0424和TH0426的劑量為100μg/kg)。數(shù)據用平均值±SEM表示；n是動物的數(shù)目，如下面圖中棒條上方的數(shù)字所示。
圖11顯示的是注射鏈脲霉素的CD-1小鼠中促血糖增高曲線的形成。在試驗期間隨意喂食該CD-1小鼠，將其在12∶12的明∶暗周期下飼養(yǎng)，并監(jiān)測總共50小時。將鏈脲霉素(400μg/kg)施用于兩組動物，允許其某些時間重疊，并盡可能完整地給出葡萄糖譜。用便攜式血糖測定儀測定血糖，評價糖尿病模型中高血糖的時間依賴性情況(平均值±SEM；每個時間點n＝8)。
圖12、13和14顯示的是GLP-1類似物對喂食STZ-誘導的糖尿病CD-1小鼠中葡萄糖譜的影響；圖12(2小時)和圖13、14(6小時)。用鏈脲霉素處理CD-1小鼠，24小時后(血糖大于20mmol/L)用類似物處理，并允許動物在實驗期間(2和6小時)隨意進食。在10:00am，向該動物皮下注射載體或GLP-1類似物。在注射后2和6小時內測定血糖水平(平均值±SEM；上面的圖)。2或6小時內的葡萄糖AUC用棒條表示(平均值±SEM；下面的圖；n是動物數(shù)，如下面圖中棒條上方的數(shù)字所示)；圖15顯示的是GLP-1類似物對喂食STZ-誘導的糖尿病CD-1小鼠中葡萄糖譜的影響；圖15(12小時)。為評價所選擇類似物效應的持續(xù)時間，用鏈脲霉素處理CD-1小鼠并在24小時后(血糖大于20mmol/L)用類似物處理，允許動物在實驗期間(12小時)隨意進食。在上午10:00，向該動物皮下注射載體或GLP-1類似物。在注射后12小時測定血糖水平(平均值±SEM；上面的圖)。12小時內的葡萄糖AUC是減去正常小鼠的喂食葡萄糖AUC后的(平均值±SEM；下面的圖；n是動物數(shù)，如下面圖中棒條上方的數(shù)字所示)；圖16顯示的是喂食STZ-誘導的糖尿病CD-1小鼠中在12小時的時間點上TH0396和Exendin-4TM的比較。為了比較TH0396和Exendin-4TM的效應持續(xù)時間，用劑量依賴性方式分析在觀測最后一小時的葡萄糖水平。用鏈脲霉素處理CD-1小鼠并在24小時后(血糖大于20mmol/L)用TH0396(40、80和400μg/kg)或Exendin-4TM(40和80μg/kg)處理，并允許動物在實驗期間(12小時)隨意進食。在上午10:00，向該動物皮下注射藥劑。在注射后12小時測定血糖水平(平均值±SEM；上面的圖)。11和12小時內的平均葡萄糖水平是減去正常小鼠的喂食葡萄糖水平后的(n是動物數(shù)，如下面圖中棒條上方的數(shù)字所示)；圖17顯示的是STZ-誘導的糖尿病CD-1小鼠中不同GLP-1類似物的影響。按400μg/kg的劑量皮下注射所述肽；n＝3或6，如棒條上方數(shù)字所示；數(shù)據用平均值±SEM表示。
圖18顯示的是不同GLP-1類似物對CD-1小鼠中進食后血糖水平的影響。按400μg/kg的劑量皮下注射所述肽；n＝4-8，如棒條上方數(shù)字所示；數(shù)據用平均值±SEM表示。
通過閱讀下文對參考非限制性的優(yōu)選實施方案的描述和示例性的附圖，本發(fā)明的其他目的、優(yōu)點和特征將會變得更加顯而易見，同時下述描述不應視為對本發(fā)明的范圍進行限定。
具體實施例方式
在本說明書的全文中使用下列縮寫DMFN，N-二甲基甲酰胺；DIEA二異丙基乙胺；TFA三氯乙酸；BOP六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧-三(二甲氨基)磷；MALDI-TOF基質輔助的激光解析/電離質譜；HPLC高效液相色譜；BHA二苯甲基胺樹脂；Boc叔丁氧羰基；Aib氨基異丁酸；Pbf2，2，4，6，7-戊甲基二羥苯并呋喃-5-磺酰；AUC曲線下面積；Nle正亮氨酸。
本文所用的“芳基”是指包含6-10個碳原子的芳香碳環(huán)基團或取代芳香碳環(huán)基團。其非限制性的例子是苯基或萘基。其取代基的非限制性的例子是C1-C6；直鏈或支鏈烷基例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、戊基、己基；和烯基、羥基、烷氧基、氨基、鹵素。
本文所用的“烷基”是指直鏈或支鏈的C1-C6脂肪族烴基。其取代基的非限制性的例子是C1-C6；直鏈或支鏈烷基例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、戊基、己基；和烯基、羥基、烷氧基、氨基、鹵素。
本文所用的“不飽和?；笔侵赶┗驶?，其中烯基是指包含碳-碳雙鍵或三鍵并在線性鏈上有2-5個碳原子的烷基。其非限制性的例子包括反式-3-己烯酰基。
本文所用的“芳烷基”是指其所包含的氫被芳基取代后的烷基。其非限制性的例子包括苯甲基和3-苯丙基。
本文所用的“環(huán)烷基”是指包含3-10個碳原子的非芳香族環(huán)。其非限制性的例子是環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、環(huán)壬基和環(huán)癸基，這些環(huán)烷基可以是部分不飽和的。
本文所用的術語“載體”、“稀釋劑”、“賦形劑”和“藥學上可接受的鹽”如下列參考手冊中所定義″Handbook of Pharmaceutical Excipients″，第三版，Arthur H.Kibbe，American Pharmaceutical Association，Pharmaceutical Press，2000。
到目前為止還不可能使GLP-1(7-36)在沒有非共價或共價結合到白蛋白上時具有延長的藥理活性。如本文所述，我們發(fā)現(xiàn)在8、20、27、30或33位的一個或多個位置有氨基酸取代和任選的N-末端取代基R1的較短的GLP-1類似物(長度為28或29個氨基酸)提供了GLP-1(7-34)和GLP-1(7-35)衍生物，其在體內具有延長的藥理活性(6小時)。制備該較短的GLP-1類似物(長度為28或29個氨基酸)的方法包括將天然的GLP-1(7-36)酰胺截短并進行氨基酸置換。在8、20、27、30或33位的一個或多個位置進行了修飾的GLP-1類似物適于對糖尿病患者每日一次或每日兩次給藥。
本發(fā)明涉及全新的GLP-1類似物，包括在8、20、27、30或33位的一個或多個位置有氨基酸取代基和任選的N-末端取代基R1。
本發(fā)明涉及具有改善的生物效能和對血糖水平具有更長作用時間的新型GLP-1類似物。此外，本發(fā)明涉及不僅顯示DPPIV抗性、而且與Exendin-4TM相比具有延長的藥理學作用的新型GLP-1類似物。
所述氨基酸用常用的三個字母縮寫來表示，參見下面的表1，其在肽領域是被廣泛接受的，并由IUPAC-IUB生物化學命名委員會推薦。
表1氨基酸代碼

按照慣例，活性GLP-1的第一個氨基酸(His)定為7位，依次類推。
此處的術語“患者”應該理解為包括任何的哺乳動物。在本發(fā)明的一個實施方案中，所述的患者是人。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及包含如下序列的GLP-1類似物R1-His-X8-Glu-Gly-Th r-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-X20-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-X27-Phe-Ile-X30-Trp-Leu-X33其中R1選自氫、線性或支化的不飽和C1-C6?；?、任選取代的芳基羰基、任選取代的環(huán)烷基羰基和任選取代的芳基烷基羰基；在本發(fā)明的一個實施方案中，R1是氫、2-羥基苯甲?；蚍词?3-己烯?；?；X8選自Ala、Aib、Val和Gly；X20選自Leu和Gly，Gly具有C6-C20烷基側鏈；在本發(fā)明的一個實施方案中，X20優(yōu)選是S-辛基甘氨酸；X27選自Ala、Leu、Val、Ile和Glu；
X30選自Glu、Asp、Asn、Gln和Ala；并且X33選自Lys-Asn-Aib-OH、Lys-Asn-Aib-NH2、Val-Lys-Asn-OH、Val-Lys-Asn-NH2、Lys-Asn-OH、Lys-Asn-NH2和Val-Lys-Gly-Arg-NH2、Val-Lys-Aib-Arg-OH、Val-Lys-Aib-Arg-NH2、Lys-Asn-Gly-OH和Lys-Asn-Gly-NH2；前提是該序列不是His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)和谷氨酸(Glu)的氨基酸；在8位具有選自丙氨酸(Ala)、氨基異丁酸(Aib)、纈氨酸(Val)和甘氨酸(Gly)的氨基酸；在30位具有選自谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、天冬酰胺(Asn)、天冬氨酸(Asp)和丙氨酸(Ala)的氨基酸；和C-端氨基酸序列纈氨酸33-賴氨酸34-天冬酰胺35-NH2。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其具有選自氫和2-羥基苯甲?；腞1；在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)和谷氨酸(Glu)的氨基酸；在8位具有選自丙氨酸(Ala)、氨基異丁酸(Aib)、纈氨酸(Val)和甘氨酸(Gly)的氨基酸；在30位具有選自谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、丙氨酸(Ala)、天冬酰胺(Asn)和天冬氨酸(Asp)的氨基酸；和C-端氨基酸序列纈氨酸33-賴氨酸34-天冬酰胺35-NH2。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其具有選自2-羥基苯甲?；头词?3-己烯?；腞1；在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)和谷氨酸(Glu)的氨基酸；在30位具有選自谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、丙氨酸(Ala)、谷氨酰胺(Gln)和天冬酰胺(Asn)的氨基酸；和C-端氨基酸序列賴氨酸33-天冬酰胺34-NH2。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其具有選自2-羥基苯甲酰基和反式-3-己烯?；腞1；在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、谷氨酸(Glu)和異亮氨酸(Ile)的氨基酸；在30位具有選自谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、天冬氨酸(Asp)、天冬酰胺(Asn)和丙氨酸(Ala)的氨基酸；和C-端氨基酸序列賴氨酸33-天冬酰胺34-氨基異丁酸35-NH2。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其具有選自氫、2-羥基苯甲?；头词?3-己烯?；腞1；在8位具有選自氨基異丁酸(Aib)、丙氨酸(Ala)、纈氨酸(Val)和甘氨酸(Gly)的氨基酸；在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、谷氨酸(Glu)和異亮氨酸(Ile)的氨基酸；在30位具有選自谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酰胺(Gln)和丙氨酸(Ala)的氨基酸；和C-端氨基酸序列賴氨酸33-天冬酰胺34-氨基異丁酸35-NH2。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其具有選自氫和反式-3-己烯?；腞1；在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)和谷氨酸(Glu)的氨基酸；在8位具有選自氨基異丁酸(Aib)、纈氨酸(Val)、丙氨酸(Ala)和甘氨酸(Gly)的氨基酸；在30位具有選自谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、天冬氨酸(Asp)、天冬酰胺(Asn)和丙氨酸(Ala)的氨基酸；和C-端氨基酸序列賴氨酸33-天冬酰胺34-NH2。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其在20位具有選自亮氨酸(Leu)和包含C6-C20烷基側鏈的甘氨酸(Gly)的氨基酸，其中在本發(fā)明的一個實施方案中該烷基側鏈是辛基鏈；在8位具有選自丙氨酸(Ala)、氨基異丁酸(Aib)、纈氨酸(Val)和甘氨酸(Gly)的氨基酸；和C-端氨基酸序列纈氨酸33-賴氨酸34-天冬酰胺35-NH2。
在另一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其在20位具有選自亮氨酸(Leu)和包含C6-C20烷基側鏈的甘氨酸(Gly)的氨基酸，其中在本發(fā)明的實施方案中該烷基側鏈是辛基鏈；在8位具有選自丙氨酸(Ala)、氨基異丁酸(Aib)、纈氨酸(Val)和甘氨酸(Gly)的氨基酸；和C-端氨基酸序列賴氨酸33-天冬酰胺34-NH2。
在另一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其在20位具有一個選自亮氨酸(Leu)和包含C6-C20烷基側鏈的甘氨酸(Gly)的氨基酸，其中在本發(fā)明的一個實施方案中該烷基側鏈是辛基鏈；在8位具有選自丙氨酸(Ala)、氨基異丁酸(Aib)、纈氨酸(Val)和甘氨酸(Gly)的氨基酸；在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)和谷氨酸(Glu)的氨基酸；和C-端氨基酸序列纈氨酸33-賴氨酸34-天冬酰胺35-NH2。
在另一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其在20位具有選自亮氨酸(Leu)和包含C6-C20烷基側鏈的甘氨酸(Gly)的氨基酸，其中在本發(fā)明的一個實施方案中該烷基側鏈是辛基鏈；在8位具有選自丙氨酸(Ala)、氨基異丁酸(Aib)、纈氨酸(Val)和甘氨酸(Gly)的氨基酸；在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)和谷氨酸(Glu)的氨基酸；和C-端氨基酸序列賴氨酸33-天冬酰胺34-NH2。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其在20位具有選自亮氨酸(Leu)和包含C6-C20烷基側鏈的甘氨酸(Gly)的氨基酸，其中在本發(fā)明的一個實施方案中該烷基側鏈是辛基鏈；在8位具有選自丙氨酸(Ala)、氨基異丁酸(Aib)、纈氨酸(Val)和甘氨酸(Gly)的氨基酸；在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)和谷氨酸(Glu)的氨基酸；在30位具有選自谷氨酸(Glu)、天冬酰胺(Asn)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酰胺(Gln)和丙氨酸(Ala)的氨基酸；和C-端氨基酸序列纈氨酸33-賴氨酸34-天冬酰胺35-NH2。
在另一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其在20位具有選自亮氨酸(Leu)和包含C6-C20烷基側鏈的甘氨酸(Gly)的氨基酸，其中在本發(fā)明的一個實施方案中該烷基側鏈是辛基鏈；在8位具有選自丙氨酸(Ala)、氨基異丁酸(Aib)、纈氨酸(Val)和甘氨酸(Gly)的氨基酸；在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)和谷氨酸(Glu)的氨基酸；在30位具有選自谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、天冬酰胺(Asn)、丙氨酸(Ala)和谷氨酰胺(Gln)的氨基酸；和C-端氨基酸序列賴氨酸33-天冬酰胺34-NH2。
在另一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其在20位具有選自亮氨酸(Leu)和包含C6-C20烷基側鏈的甘氨酸(Gly)的氨基酸，其中在本發(fā)明的實施方案中該烷基側鏈是辛基鏈；在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)和谷氨酸(Glu)的氨基酸；在30位具有選自谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、天冬酰胺(Asn)、丙氨酸(Ala)和谷氨酰胺(Gln)的氨基酸；其中R1是反式-3-己烯酰基；和C-端氨基酸序列賴氨酸33-天冬酰胺34-NH2。
在另一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其具有選自氫、2-羥基苯甲?；头词?3-己烯?；腞1；在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)和谷氨酸(Glu)的氨基酸；在8位具有選自氨基異丁酸(Aib)、纈氨酸(Val)、丙氨酸(Ala)和甘氨酸(Gly)的氨基酸；在30位具有選自谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、天冬氨酸(Asp)、天冬酰胺(Asn)和丙氨酸(Ala)的氨基酸；和C-端氨基酸序列賴氨酸33-天冬酰胺34-甘氨酸35-NH2。
在另一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其具有選自2-羥基苯甲酰基和反式-3-己烯?；腞1；在20位具有選自亮氨酸(Leu)和包含C6-C20烷基側鏈的甘氨酸(Gly)的氨基酸，其中在本發(fā)明的一個實施方案中該烷基側鏈是辛基鏈；和C-端氨基酸序列纈氨酸33-賴氨酸34-氨基異丁酸35-精氨酸36-NH2。
在另一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及GLP-1類似物，其在20位具有選自亮氨酸(Leu)和包含C6-C20烷基側鏈的甘氨酸(Gly)的氨基酸，其中在本發(fā)明的一個實施方案中該烷基側鏈是辛基鏈；在27位具有選自丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)和谷氨酸(Glu)的氨基酸；在30位具有選自谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、天冬酰胺(Asn)、丙氨酸(Ala)和谷氨酰胺(Gln)的氨基酸；其中R1是反式-3-己烯酰基；和C-端氨基酸序列賴氨酸33-天冬酰胺34-NH2。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO1)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物
2-羥基苯甲?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO2)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物2-羥基苯甲?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Aib-NH2(SEQ.ID NO3)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO4)在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO5)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物反式-3-己烯?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO6)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物反式-3-己烯?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO7)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物反式-3-己烯?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-NH2(SEQ.IDNO8)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物
反式-3-己烯?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO9)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物，反式-3-己烯?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO10)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物反式-3-己烯酰基-NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO11)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.ID NO12)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.ID NO13)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物；反式-3-己烯?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.ID No14)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物反式-3-己烯?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Aib-Arg-NH2(SEQ.ID No15)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物2-羥基苯甲酰基-NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-NH2(SEQ.ID NO16)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO17)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO18)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種GLP-1類似物，具有如下序列反式-3-己烯?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO19)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物，反式-3-己烯?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO20)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO21)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-[(S)-辛基甘氨酸]-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.IDNO22)。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的GLP-1類似物
His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(R)-十八烷基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.ID NO23)。
本發(fā)明也涉及所述肽的鹽形式。本發(fā)明的肽類似物可以具有顯著的酸性或顯著的堿性，以與許多無機堿或無機酸和有機酸反應生成鹽。
通常用于形成酸加成鹽的酸包括無機酸，例如但不限于鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、磷酸等，和有機酸，例如但不限于對甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、對溴苯磺酸、碳酸、琥珀酸、檸檬酸、苯甲酸、乙酸等。這些鹽的例子包括硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙酸鹽(propiolate)、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、延胡索酸鹽、馬來酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、磺酸鹽、苯乙酸鹽、苯丙酸鹽、苯丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、扁桃酸鹽、羥乙酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、丙磺酸鹽等。
堿加成鹽包括來自于無機堿的鹽，例如但不限于銨、堿金屬或者堿土金屬的氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽等。因此這些堿包括氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、碳酸鉀等。
所述肽類似物的鹽形式是特別優(yōu)選的。應該理解，本發(fā)明的肽類似物當用于治療目的時，也可以是鹽形式。但是，該鹽必須是藥學上可接受的鹽。
本發(fā)明也涉及一種組合物，其包含治療有效量的本文所述肽或者其藥學上可接受的鹽，與選自藥學上可接受的載體、稀釋劑和賦形劑的至少一種組分。在一個具體實施方案中，本發(fā)明涉及一種組合物，其包含治療有效量的本文所述肽或者其藥學上可接受的鹽，其中所述治療有效量為約1mcg-約10mg。
本發(fā)明也涉及一種組合物，其包含治療有效量的本文所述肽或者其藥學上可接受的鹽，與選自藥學上可接受的載體、稀釋劑和賦形劑的至少一種組分。
本發(fā)明還涉及一種治療與葡萄糖代謝紊亂相關的疾病或病癥的方法。此外，本發(fā)明涉及一種防止(即預防)與葡萄糖代謝紊亂相關的疾病或病癥的方法。葡萄糖紊亂的非限制性的例子包括I型或II型糖尿病、胰島素抵抗以及并發(fā)的體重疾病和病癥或病況。體重疾病或相關病況的非限制性的例子包括肥胖、與超重并發(fā)的病況、飽足感異常、血漿胰島素水平下降、血糖水平升高和胰臟β細胞群減少。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種治療I型或II型糖尿病的方法，包括向需要這種治療的患者施用治療有效量的本文所述肽或者其藥學上可接受的鹽。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種治療胰島素抵抗的方法，包括向需要這種治療的患者施用治療有效量的本文所述肽或者其藥學上可接受的鹽。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種減輕患者體重的方法，包括向需要減輕體重的患者施用治療有效量的本文所述肽或者其藥學上可接受的鹽。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種降低患者飽足感的方法，包括向需要的患者施用治療有效量的本文所述肽或者其藥學上可接受的鹽。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種升高患者進食后血漿胰島素水平的方法，包括向需要的患者施用治療有效量的本文所述肽或者其藥學上可接受的鹽。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種降低患者空腹血糖水平的方法，包括向需要的患者施用治療有效量的本文所述肽或者其藥學上可接受的鹽。
在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種增加患者胰臟β細胞群的方法，包括向需要的患者施用治療有效量的本文所述肽或者其藥學上可接受的鹽。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及施用所述肽或者其藥學上可接受的鹽的方法。施用本文所述肽或者其藥學上可接受的鹽的方法的非限制性的例子包括皮下給藥、靜脈給藥、透皮給藥、口服、經口腔和鼻內給藥。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽用于治療患者I型或II型糖尿病的用途。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽用于治療患者胰島素抵抗的用途。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽用于減輕患者體重的用途。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽用于降低患者飽足感的用途。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽用于升高患者進食后血漿胰島素水平的用途。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽用于降低患者空腹血糖水平的用途。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽用于增加患者胰臟β細胞群的用途。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽在制備用于治療患者I型或II型糖尿病的藥物中的用途。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽在制備用于治療患者胰島素抵抗的藥物中的用途。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽在制備用于減輕患者體重的藥物中的用途。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽在制備用于增加患者飽足感的藥物中的用途。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及如上所述的肽或者其藥學上可接受的鹽在制備用于升高患者進食后血漿胰島素水平的藥物中的用途。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽在制備用于降低患者空腹血糖水平的藥物中的用途。
在一個進一步的進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及本文所述的肽或者其藥學上可接受的鹽在制備用于增加患者胰臟β細胞群的藥物中的用途。
下面用非限制性的實施例對本發(fā)明進一步的說明。
實施例1固相合成GLP-1類似物并在His7處偶聯(lián)R1部分本發(fā)明肽類似物通過使用標準自動化和/或手工固相肽合成技術、用具有氟烯基甲氧羰基保護和適當側鏈保護的氨基酸、用二苯甲基胺(BHA)樹脂來制備。在合成完成后，將該肽類似物從固相支持物切割，同時使其側鏈脫保護。任選地，用適于氨基酸偶聯(lián)的相同方法把水楊酸或反式-3-己烯酸偶聯(lián)到His7的N-端。粗制肽通過制備性HPLC純化，然后真空干燥并凍干。通過分析性HPLC評價肽的純度，用MALDI-TOF MS分析法測定肽質量。把所述肽制備成TFA鹽并溶解在20mM乙酸中用于動物的給藥。GLP-1類似物的代表性實例如下表2所示。
表2代表性的GLP-1類似物





1L-BipL-二苯基丙氨酸；Aib氨基異丁酸；Nie正亮氨酸實施例2GLP-1類似物對CD-1小鼠進食后血糖水平的影響使禁食過夜的CD-1正常雌性小鼠(6周，Charles River，Montreal，Canada)隨意進食30分鐘。在30分鐘時皮下注射GLP-1肽(100-400μg/kg)。用尾靜脈切除法抽取血液樣本，并在接下來的6小時里用One-TouchTM血糖測量儀測定血糖水平(mmol/L)。用梯形法計算“曲線下面積”(葡萄糖AUC[mmol/L/120分鐘])。
如圖1所示，天然的GLP-1和GLP-1的DPPIV抗性類似物[2-羥基芐基-GLP-1(7-36)NH2(TH0318)]在2小時內顯示降血糖作用，而經修飾的類似物TH0322和TH0368的降血糖作用延長到至少4小時，與Exendin-4TM類似。
實施例3GLP-1類似物對低血糖Sprague-Dawley大鼠的血糖水平的影響。
將動物(Sprague-Dawley大鼠)在標準實驗室中在12∶12的明∶暗周期下飼養(yǎng)。在禁食12小時后，將這些動物麻醉(2％異氟烷)，插入頸動脈和頸靜脈導管以分別抽取血液和注射葡萄糖(先推注1.0g/kg，然后輸注1.4g/kg/hr)。在葡萄糖推注和輸注開始90分鐘后，向動物皮下注射不同濃度(300μg/kg)的該類似物，在此期間血糖濃度達到平穩(wěn)水平。在開始注射葡萄糖之前和30、60、90、100、110、120、135、150、180、210分鐘后，有時還在240和300分鐘后測定血糖。
取樣(0.3-0.4ml；如果需要)后立即將血滴置于血糖測量儀上測定葡萄糖。在進行胰島素和/或任何其他測定所需的血漿分離(離心)之前測定葡萄糖。
如圖2所示，我們發(fā)現(xiàn)，GLP-1類似物TH0384比GLP-1或2-羥基芐基-GLP-1類似物TH0318更為有效。
實施例4使用RINm5F細胞用GLP-1類似物取代125I-GLP-1(7-36)NH2按照操作說明書培養(yǎng)RINm5F細胞(ATCC#CRL-2058)。實驗前，先將細胞在融合燒瓶中保持4天。然后打碎細胞并收集在15ml圓錐試管中，然后超聲，并評價蛋白質水平。稀釋所述細胞膜，以在每個測試管中獲得400μg等份的蛋白質。
包含400μg蛋白質的RINm5F細胞等份在22℃(室溫)下在包含100μl磷酸鈉緩沖液(10mM，pH 7.4)和不同濃度的GLP-1類似物(10-10-10-5)和100000cpm的I125GLP-1(7-36)NH2(3nM)的玻璃管中培養(yǎng)45分鐘，該磷酸鈉緩沖液包含100mMNaCl、2mM MgCl2、微蛋白酶抑制劑混合物(mini protease inhibitor cocktail)(1片/100ml，Roche diagnostics GmbH)。用100mM Tris-HCl(3×3mL，pH 7.4)終止反應，溶液用GF/C Whatman玻璃微纖維過濾器過濾。接著將溶液置于玻璃管中并用Packard COBRA IIγ計數(shù)器計數(shù)。描繪出替換等溫線并用PrismTM(GraphPad，Ca)分析。
如圖3所示，在Rinm5F細胞中GLP-1類似物TH0322和TH0384在替換受體結合配體方面比GLP-1更為有效。
實施例5在RINm5F細胞中對應答GLP-1和類似物的cAMP體外分泌的影響按照操作說明書培養(yǎng)RINm5F細胞(ATCC#CRL-2058)。使來自近似90％融合燒瓶中的細胞用胰蛋白酶處理并計數(shù)。然后將細胞接種在含培養(yǎng)基(RPMI 1640，10％FBS，2mM谷氨酰胺，0.5％ Pen-Strep；100μl)的96-孔板中(具有透明平底的ClearSarstedt plateTM)并在達到融合后4天測定。
用20mM的乙酸配制濃度為1mg/ml的GLP-1和類似物母液。然后將母液樣品按每份體積100μl(100μg)分成等份，再加入400μl H2O。然后把等份冷凍并凍干過夜。該凍干樣品保持在-80℃直到使用。僅在實驗進行前才將上述的樣品制備成濃度為1mM(利于肽純度和肽含量)。在包含0.1mM IBMX的RPMI中從2×母液測定劑量應答(10-1M-10-5M)。在測定開始前少于30分鐘內制備GLP-1稀釋液。
將細胞培養(yǎng)基輕輕地從孔中吸出。然后在37℃下在100μl RPMI 0.1mM IBMX中預培養(yǎng)細胞10分鐘。預培養(yǎng)之后，向孔中加入100μl每種2×GLP-1稀釋液，設三個重復，并在37℃下培養(yǎng)30分鐘。在培養(yǎng)期結束時，收集上清液并用放射免疫分析試劑盒(DPC)分析cAMP的濃度。用標準曲線將放射性計數(shù)轉變?yōu)閏AMP的量。用考馬斯亮藍測定法把所獲得的cAMP值折算成在相應孔中的蛋白總量。cAMP的值以pmol/mg蛋白為單位表示為平均值±SEM(表3)。用GraphPad Prism 3.02TM把cAMP的劑量應答擬合至S型的曲線模型(固定斜度)。
當進行蛋白測定時，需要測定每個樣品在每個孔中蛋白質的量。用NaOH(0.1N)裂解該細胞，并用10μl的等份測定蛋白質含量。上述方法是在考馬斯亮藍(Pierce)和自動化的平板讀數(shù)器Emax ProTM(Molecular Devices)中完成的。
表3GLP-1和GLP-1類似物對RINm5F細胞中cAMP產生的效應。平均值±SEM；n＝劑量應答曲線的數(shù)目，設3個重復。

實施例6GLP-1類似物降低已喂食的CD-1小鼠進食后葡萄糖的效應將動物(CD-1小鼠)在標準實驗室中在12∶12的明∶暗周期下飼養(yǎng)。把動物分組，每個籠子里4只小鼠。在禁食12小時(隨意提供水)后，讓動物進食30分鐘。監(jiān)測所食用的食物量。然后移走食物，給動物皮下注射待試驗的載體或GLP-1類似物。在整個實驗中的-30分鐘、0、30、60、120、180、240、300和360分鐘時測定葡萄糖水平。
用手術刀切除CD-1小鼠尾尖的一小片，用拇指從尾根部向尾尖輕壓出一滴血。將滴出的血置于血糖測計儀(AccucheckTMcompact，Roche)上并讀數(shù)。清除該斑點并用相同的方法對后面的每一組進行測定。
如圖4所示，我們發(fā)現(xiàn)，在已喂食的CD-1小鼠中GLP-1類似物TH0395、TH0396、TH0397和TH0424能夠有效降低進食后的葡萄糖。
實施例7在固定的Sprague-Dawley大鼠模型中GLP-1類似物降低葡萄糖的效應將動物(Sprague-Dawley大鼠)在標準實驗室中在12∶12的明∶暗周期下飼養(yǎng)。在禁食12小時后，使這些動物隨意進食10分鐘然后麻醉(2％異氟烷)。插入頸動脈和頸靜脈導管以分別抽取血液和注射葡萄糖(先推注1.0g/kg，然后輸注1.4g/kg/hr)。在葡萄糖推注和輸注開始90分鐘后，向動物皮下注射不同濃度(300μg/kg)的供試類似物，在此期間血糖濃度達到平穩(wěn)。在開始注射葡萄糖前和30、60、90、100、110、120、135、150、180、210分鐘后，有時還在240和300分鐘后測定血糖。
在所有的方法中，葡萄糖的測定都是在抽取樣本(0.3-0.4ml；如果需要)后立即進行。將血滴置于血糖測量儀(AccucheckTMcompact，Roche)上測定，并在進行胰島素和/或任何其他測定所需的血漿分離(離心)之前讀數(shù)。
如圖10和15所示，我們發(fā)現(xiàn)，在給予固定葡萄糖的Sprague-Dawley大鼠和經STZ治療的CD-1小鼠中，類似物TH0395、TH0396和TH0424具有相似的葡萄糖清除譜。這些結果證明，TH0395和TH0396的作用持續(xù)時間要長于TH0424。
實施例8GLP-1類似物降低已喂食的鏈脲霉素誘導的糖尿病CD-1小鼠的葡萄糖的效應將動物(CD-1小鼠)在標準實驗室中在12∶12的明∶暗周期下飼養(yǎng)。把動物分組，每個籠子里4只小鼠。然后向CD-1小鼠腹腔內注射400mg/kg鏈脲霉素，24小時后皮下注射載體或所選的GLP-1類似物。在實驗期間監(jiān)測所食用的食物量。預先測定葡萄糖濃度，并在施用GLP-1類似物后6-12小時中按照下列時間表測定葡萄糖濃度0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12小時。
用手術刀切除CD-1小鼠尾尖的一小片，用拇指從尾根部向尾尖輕壓出一滴血。將滴出的血置于血糖測計儀(AccucheckTMcompact，Roche)上并讀數(shù)。清除該斑點并用相同的方法對后面的每一組進行測定。
如圖12、13、14、15和16所示，在該項研究中顯示三種類似物TH0395、TH0396和TH0424具有較長的作用持續(xù)時間。這些類似物把鏈脲霉素誘導的糖尿病CD-1小鼠的葡萄糖水平降低到正常喂食小鼠的水平。讓人感興趣的是，在STZ誘導的糖尿病小鼠中TH0395顯示出比Exendin-4TM更為有效，至少在研究的最初6小時如此(圖14)。而TH0396在研究的最初12小時也是這種情況(圖16)。
雖然本發(fā)明已經用上文中的優(yōu)選實施方案進行了描述，但是它也可以在不脫離本發(fā)明的實質和性質的情況下進行改變，而這些改變也將落在所附的權利要求限定的范圍內。
權利要求
1.一種GLP-1類似物，其包含如下序列R1-His-X8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-X20-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-X27-Phe-Ile-X30-Trp-Leu-X33其中R1選自氫、線性或支化的不飽和C1-C6?；?、任選取代的芳基羰基、任選取代的環(huán)烷基羰基和任選取代的芳基烷基羰基；X8選自Ala、Aib、Val和Gly；X20選自Leu和具有C6-C20烷基側鏈的Gly；X27選自Ala、Leu、Val、Ile和Glu；X30選自Glu、Asp、Asn、Gln和Ala；并且X33選自Lys-Asn-Aib-OH、Lys-Asn-Aib-NH2、Val-Lys-Asn-OH、Val-Lys-Asn-NH2、Lys-Asn-OH、Lys-Asn-NH2和Val-Lys-Gly-Arg-NH2、Val-Lys-Aib-Arg-OH、Val-Lys-Aib-Arg-NH2、Lys-Asn-Gly-OH和Lys-Asn-Gly-NH2，前提是所述序列不是His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg。
2.權利要求1的肽，其中R1是2-羥基苯甲?；蛘邭?；X8是Ala或Gly；X27是Ala或者Leu；X30是Glu或者Gln；X33是Val-Lys-Asn-NH2。
3.權利要求1的肽，其中R1是2-羥基苯甲酰基或者氫；X8是Ala或者Gly；X27是Ala或者Leu；X30是Glu；X33是Lys-Asn-NH2。
4.權利要求1的肽，其中R1是2-羥基苯甲?；?、反式-3-己烯?；蛘邭?；X8是Ala或者Gly；X27是Leu；X30是Glu；X33是Lys-Asn-Aib-NH2。
5.權利要求1的肽，其中R1是反式-3-己烯?；蛘邭洌籜8是Ala或者Gly；X27是Ala或者Leu；X30是Glu；X33是Lys-Asn-NH2。
6.權利要求1的肽，其中R1是反式-3-己烯酰基或者氫；X8是Ala或者Gly；X20是(S)-辛基甘氨酸；X27是Ala或者Leu；X30是Glu、Gln或者Asp；X33是Lys-Asn-NH2或者Val-Lys-Asn-NH2。
7.權利要求1的肽，具有如下序列His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO1)。
8.權利要求1的肽，具有如下序列2-羥基苯甲?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO2)。
9.權利要求1的肽，具有如下序列2-羥基苯甲?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Aib-NH2(SEQ.ID NO3)。
10.權利要求1的肽，具有如下序列His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO4)。
11.權利要求1的肽，具有如下序列His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO5)。
12.權利要求1的肽，具有如下序列反式-3-己烯?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO6)。
13.權利要求1的肽，具有如下序列反式-3-己烯?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO7)。
14.權利要求1的肽，具有如下序列反式-3-己烯?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO8)
15.權利要求1的肽，具有如下序列反式-3-己烯?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO9)。
16.權利要求1的肽，具有如下序列反式-3-己烯?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO10。
17.權利要求1的肽，具有如下序列反式-3-己烯?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO11)。
18.權利要求1的肽，具有如下序列His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.ID NO12)。
19.權利要求1的肽，具有如下序列His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.ID NO13)。
20.權利要求1的肽，具有如下序列反式-3-己烯酰基-NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-CONH2(SEQ.ID NO14)。
21.權利要求1的肽，具有如下序列反式-3-己烯?；?NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Aib-Arg-NH2(SEQ.ID NO15)。
22.權利要求1的肽，具有如下序列2-羥基苯甲酰基-NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-NH2(SEQ.ID NO16)。
23.權利要求1的肽，具有如下序列His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO17)。
24.權利要求1的肽，具有如下序列His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-G ly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO18)。
25.權利要求1的肽，具有如下序列反式-3-己烯酰基-NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO19)。
26.權利要求1的肽，具有如下序列反式-3-己烯酰基-NH-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Val-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO20)。
27.權利要求1的肽，具有如下序列His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(S)-辛基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO21)。
28.權利要求1的肽，具有如下序列His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-[(S)-辛基甘氨酸]-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Ala-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-NH2(SEQ.ID NO22)。
29.權利要求1的肽，具有如下序列His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-[(R)-十八烷基甘氨酸]-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.ID NO23)。
30.一種藥物組合物，包含治療有效量的權利要求1-29中任一項所述的GLP-1類似物或者其藥學上可接受的鹽，和一種或多種藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
31.如權利要求30所述的藥物組合物，包含約1mcg至約10mg GLP-1類似物或其藥學上可接受的鹽。
32.一種治療I型或II型糖尿病的方法，包括向需要這種治療的患者施用藥學有效量的權利要求1到29中任一項所述的GLP-1類似物，或者其藥學上可接受的鹽。
33.一種治療胰島素抵抗的方法，包括向需要這種治療的患者施用藥學有效量的權利要求1到29中任一項所述的GLP-1類似物，或者其藥學上可接受的鹽。
34.一種治療肥胖的方法，包括向需要這種治療的患者施用藥學有效量的權利要求1到29中任一項所述的GLP-1類似物，或者其藥學上可接受的鹽。
35.一種控制飽足感的方法，包括向需要這種治療的患者施用藥學有效量的權利要求1到29中任一項所述的GLP-1類似物，或者其藥學上可接受的鹽。
36.如權利要求32所述的方法，其中所述治療I型或II型糖尿病使進食后血漿胰島素水平提高至少10％。
37.如權利要求32所述的方法，其中所述治療I型或II型糖尿病使空腹血糖水平降低至少10％。
38.如權利要求32所述的方法，其中所述治療I型或II型糖尿病使胰臟β細胞群增加至少10％。
38.如權利要求34所述的方法，其中所述治療肥胖使體重減輕至少1Kg。
39.如權利要求35所述的方法，其中所述控制飽足感使饑餓和食物攝取減少至少10％。
40.權利要求1-29中任一項所述的GLP-1類似物或者其藥學上可接受的鹽用于治療與葡萄糖代謝相關的疾病或病癥的用途。
41.權利要求1-29中任一項所述的GLP-1類似物或者其藥學上可接受的鹽用于預防與葡萄糖代謝相關的疾病或病癥的用途。
42.權利要求1-29中任一項所述的GLP-1類似物或者其藥學上可接受的鹽在制備用于治療與葡萄糖代謝相關的疾病或病癥的藥物中的用途。
43.權利要求1-29中任一項所述的GLP-1類似物或者其藥學上可接受的鹽在制備用于預防與葡萄糖代謝相關的疾病或病癥的藥物中的用途。
44.權利要求40-43中任一項所述的用途，其中所述藥物通過選自皮下、靜脈內、透皮、口服、經口腔和鼻內的途徑施用。
全文摘要
本文描述具有更高的生物學效能和更長的藥理學活性的新型GLP－1類似物。更具體地，本發(fā)明涉及GLP－1類似物(長度為28或29個氨基酸)，其在右列一個或多個位置具有氨基酸取代8、20、27、30和33。
文檔編號A61P3/00GK1910201SQ200580002058
公開日2007年2月7日 申請日期2005年1月7日 優(yōu)先權日2004年1月8日
發(fā)明者克里希納·佩里, 丹尼爾·阿布蘭, 阿卜德爾卡里姆·哈比 申請人:瑟瑞技術公司