專利名稱：生長素釋放肽受體的大環(huán)調(diào)節(jié)劑的制作方法
相關(guān)申請信息
本申請是按照35 U.S.C.§120的規(guī)定，目前未決的于2004年6月18日提交的第10/872,142號美國專利申請的部分繼續(xù)申請，該未決申請按照35 U.S.C.§119(e)的規(guī)定，要求于2003年6月18日提交的第60/479,223號美國臨時專利申請的優(yōu)先權(quán)。該部分繼續(xù)申請還按照35 U.S.C.§119(e)的規(guī)定，要求以下申請的優(yōu)先權(quán)于2004年10月26日提交的第60/621,642號美國臨時專利申請，于2004年10月27日提交的第60/622,055號美國臨時專利申請，和于2005年1月7日提交的第60/642,271號美國臨時專利申請。
發(fā)明領(lǐng)域 本發(fā)明涉及新的構(gòu)象限度的大環(huán)化合物，所述化合物結(jié)合于生長素釋放肽(生長激素促分泌劑)受體，包括GHS-R1a及其亞型、同種型和/或變體，和/或是該受體的功能調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明還涉及這些化合物的中間體，含有這些化合物的藥物組合物，以及使用這些化合物的方法。這些新的大環(huán)化合物可用于治療多種適應(yīng)癥。特別是，這些化合物可用于治療和預(yù)防胃腸道病癥，包括但不限于手術(shù)后腸梗阻，胃輕癱，包括糖尿病型胃輕癱，阿片樣物質(zhì)腸機能障礙、慢性腸假梗阻、短腸綜合征和功能性胃腸障礙。

背景技術(shù)：
由于在基因?qū)W和蛋白學(xué)方面的努力研究，對于各種生理調(diào)節(jié)途徑的了解得到不斷提高，由此開始影響新的藥劑的發(fā)現(xiàn)。特別是，關(guān)鍵受體及其內(nèi)源性配體的鑒定已經(jīng)產(chǎn)生了新的機會來開發(fā)作為治療靶向的受體/配體對。例如，生長素釋放肽是最近鑒定的28氨基酸肽激素，最初是從大鼠胃中分離出來的，與隨后在人中鑒定的具有直向同源性(Kojima，M.；Hosoda，H.等人.Nature 1999，402，656-660)。在多種其它物質(zhì)中存在該肽意味著在正常身體功能中的保守和重要作用。已經(jīng)證實了該肽是先前的孤獨G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)，1型生長激素促分泌劑受體(hGHS-R1a)的內(nèi)源性配體(Howard，A.D.；Feighner，S.D.；等人.A receptor in pituitary and hypothalamus thatfunctions in growth hormone release.Science 1996，273，974-977.)，該受體主要是在腦(在下丘腦、海馬和黑質(zhì)中的宮刑核和腹內(nèi)側(cè)核)和垂體中發(fā)現(xiàn)的(U.S.專利6,242,199；國際專利申請WO 97/21730和WO 97/22004)。已經(jīng)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的其它區(qū)域和周圍組織例如腎上腺、甲狀腺、心臟、肺、腎和骨骼肌中檢測到了該受體。在分離和表征內(nèi)源性配體之前鑒定和克隆出了該受體，其并且與涉及生長激素(GH)分泌的其它受體，特別是生長激素釋放(GHRH)激素受體不同。
大鼠和人類肽的獨特特征是在Ser3上存在正辛酰基(Oct)部分。然而，這種去?；问街饕嬖谟谘h(huán)中，其中約90％的激素是這種形式。該組是從翻譯后修飾衍生來的，并且似乎與生物活性有關(guān)，可能還與轉(zhuǎn)運到CNS內(nèi)有關(guān)(Banks，W.A.；Tschp，M.；Robinson，S.M.；Heiman，M.L.Extent and direction of ghrelin transport acrossthe blood-brain barrier is determined by its unique primary structure.J.Pharmacol. Exp.Ther.2002，302，822-827.)。在GH-釋放測定中，該激素的去辛酰基形式的效力比其母肽弱至少100倍，雖然已經(jīng)表明該去?；问娇赡苁且鹉承┡c生長素釋放肽有關(guān)的其它生物作用的原因。已經(jīng)假定該去?；问街饕鹕L素釋放肽的心血管和細胞增殖作用，而?；问絽⑴c維持能量平衡和生長激素釋放(Baldanzi，G.；Filighenddu，N.；Cutrupi，S.；等人.Ghrelin and des-acyl ghrelininhibit cell death in cardiomyocytes and endothelial cells throughERK1/2 and PI-3 kinase/AKT.J.Cell Biol.2002，159，1029-1037)。類似地，已經(jīng)分離出了內(nèi)源激素形式的des-Gin14-生長素釋放肽及其辛酰化衍生物，其是通過生長素釋放肽基因的可變剪切而產(chǎn)生的，但是二者在體內(nèi)對于刺激GH釋放都沒有活性(Hosoda，H.；Kojima，M.；Matsuo，H.；Kangawa，K.Purification and characterization of ratdes-Gln14-ghrelin，a second endogenous ligand for the growth hormonesecretagogue receptor.J.Biol.Chem.2000，275，21995-2120.)。已經(jīng)在血漿中觀察到了通過翻譯后加工產(chǎn)生的其它次要形式的生長素釋放肽，雖然它們沒有帶來任何特別活性(Hosoda，H.；Kojima，M.；等人.Structural divergence of human ghrelin.Identification ofmultiple ghrelin-derived molecules produced by post-translationalprocessing.J.Biol.Chem.2003，278，64-70.)。
即使在分離出該受體及其內(nèi)源性肽配體之前，也已經(jīng)進行了大量研究來發(fā)現(xiàn)能夠刺激GH分泌的物質(zhì)。人GH的適當調(diào)節(jié)不僅對于適當身體生長很重要，而且對于很多其它關(guān)鍵生理作用很重要。因為GH和其它GH-刺激性肽例如GHRH和生長激素釋放因子(GRF)及其衍生物和類似物是通過注射給藥的，以更好地利用這些積極效果，注意力是集中于開發(fā)能夠提高HG分泌，成為GH促分泌劑(GHS)的口服有效的治療劑。此外，預(yù)計使用這些治療劑能更近似地模擬GH的搏動性生理釋放。
在二十世紀七十年代后期，從鑒定出生長激素釋放肽(GHRP)開始(Bowers，C.Y.Growth hormone-releasing peptidesphysiologyand clinical applications.Curr.Opin.Endocrinol.Diabetes 2000，7，168-174；Camanni，F(xiàn).；Ghigo，E.；Arvat，E.Growth hormone-releasingpeptides and their analogs.Front.Neurosci.1998，19，47-72；Locatelli，V.；Torsello，A.Growth hormone secretagoguesfocus on thegrowth hormone-releasing peptides.Pharmacol.Res.1997，36，415-423.)，已經(jīng)研究了一些物質(zhì)作為GHS的潛力。除了其刺激GH釋放以及在這方面的伴隨積極效果以外，有人設(shè)計GHS可用于治療多種其它病癥，包括如在HIV患者中發(fā)現(xiàn)的消耗病癥(惡病質(zhì))和癌癥誘導(dǎo)的厭食、老年肌肉骨骼虛弱和生長激素缺乏疾病。在過去二十五年里面的很多努力已經(jīng)產(chǎn)生了多種有效的可口服利用的GHS(Smith，R.G.；Sun，Y.X.；Beatancourt，L.；Asnicar，M.Growth hormonesecretagoguesprospects and pitfalls.Best Pract.Res.Clin.Endocrinol.Metab.2004，18，333-347；Fehrentz，J.-A.；Martinez，J.；Boeglin，D.；Guerlavais，V.；Deghenghi，R.Growth hormone secretagoguesPast，present and future.IDrugs 2002，5，804-814；Svensson，J.Exp.Opin.Ther.Patents2000，10，1071-1080；Nargund，R.P.；Patchett，A.A.；等人.Peptidomimetic growth hormone secretagogues.Designconsiderations and therapeutic potential.J.Med.Chem.1998，41，3103-3127；Ghigo，E；Arvat，E.；Camanni，F(xiàn).Orally active growthhormone secretagoguesstate of the art and clinical perspective.Ann.Med.1998，30，159-168；Smith，R.G.；Van der Ploeg，L.H.T.；Howard，A.D.；Feighner，S.D.；等人.Peptidomimetic regulation of growthhormone secretion.Endocr.Rev.1997，18，621-645.)。這些當中包括小肽，例如hexarelin(Zentaris)和ipamorelin(Novo Nordisk)，和胸苷類似物，以及小分子例如carpomorelin(Pfizer)、L-252，564(Merck)、MK-0677(Merck)、NN703(Novo Nordisk)、G-7203(Genentech)、S-37435(Kaken)和SM-130868(Sumitomo)，設(shè)計用來對于生長激素刺激是口服活性的。然而，用這樣的活性劑進行的臨床試驗已經(jīng)得到了令人失望的結(jié)果，這是因為缺乏長期治療效力或不利的副作用，包括不可逆地抑制細胞色素P450酶(Zdravkovic M.；Olse，A.K.；Christiansen，T.；等人.Eur.J.Clin.Pharmacol.2003，58，683-688.)。因此，需要能夠有效地靶向此受體來實現(xiàn)治療作用的藥劑。
盡管其參與GH調(diào)節(jié)，生長素釋放肽主要是在胃的胃酸腺中合成的，雖然其也以較小量在其它器官，包括腎、胰腺和下丘腦中產(chǎn)生(Kojima，M.；Hsoda，H.；Kangawa，K.Purification and distributionof ghrelinthe natural endogenous ligand for the growth hormonesecretagogue receptor.Horm.Res.2001，56(Suppl.1)，93-97；Ariyasu，H.；Takaya，K.；Tagami，T.；等人.Stomach is a major source ofcirculating ghrelin，and feeding state determines plasma ghrelin-likeimmunoreactivity levels in humans.J.Clin.Endocrinol.Metab.2001，86，4753-4758)。除了其在刺激GH釋放中的作用以外，該激素還具有多種其它內(nèi)分泌和非內(nèi)分泌功能(Broglio，F(xiàn).；Gottero，C.；Arvat，E.；Ghigo，E.Endocrine and non-endocrine actions of ghrelin.Horm.Res.2003，59，109-117)，并且已經(jīng)表明其與多種其它系統(tǒng)相互作用，從而在保持適當能量平衡中起作用(Horvath，T.L.；Diano，S.；Sotonyi，P.；Heiman，M.；Tschp，M.Ghrelin and the regulation ofenergy balance-a hypothalamic perspective.Endocrinology 2001，142，4163-4169；Casanueva，F(xiàn).F.；Dieguez，C.Ghrelinthe linkconnecting growth with metabolism and energy homeostasis.Rev.Endocrinol. Metab.Disord.2002，3，325-338)。特別是，生長素釋放肽作為開胃信號在控制進食中起作用，其作用是抵抗leptin的作用。實際上，其是第一個被證實具有這樣開胃特性的腸肽(Kojima，M.；Kangawa，K.Ghrelin，an orexigenic signaling molecule from thegastrointestinal tract.Curr.Opin.Pharmacology 2002，2，665-668.)。該激素還參與涉及食欲和進食行為的多種其它神經(jīng)肽的合成和分泌的下丘腦調(diào)控。作為對禁食或延長的食物限制的響應(yīng)，生長素釋放肽的水平提高(Nakazato，M.；Murakami，N.；Date，Y.；Kojima，M.；等人.A role for ghrelin in the central regulation of feeding.Nature2001，409，194-198)。例如，患有厭食或食欲旺盛的個體表現(xiàn)出提高的生長素釋放肽水平。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，該激素的循環(huán)水平在進餐前升高，在進餐后降低。此外，飲食誘導(dǎo)的體重下降導(dǎo)致生長素釋放肽水平增高，雖然已經(jīng)進行過胃旁路手術(shù)的肥胖個體不同樣經(jīng)歷這樣的增高(Cummings，D.E.；Weigle，D.S.；Frayo，R.S.；等人.Plasma ghrelinlevels after diet-induced weight loss or gastric bypass surgery.N.Engl.J.Med.2002，346，1623-1630)。
生長素釋放肽緊密參與食物攝取和食欲控制已經(jīng)使其成為肥胖研究的有吸引力的靶目標。實際上，很少有其它天然物質(zhì)被證實既參與GH分泌的調(diào)節(jié)，又參與食物攝取的調(diào)節(jié)。
迄今為止，還沒有被用于治療目的的生長素釋放肽的另外作用是調(diào)節(jié)胃能動性和胃酸分泌。前動力學(xué)活性似乎獨立于GH-分泌作用，并且可能通過迷走神經(jīng)膽堿能毒蕈堿途徑而介導(dǎo)。需要的劑量水平與對于激素的GH和食欲刺激作用所需的劑量水平相等。值得注意的是，與其對于生長素釋放肽的其它作用的無活性相反，des-Gln14肽也表現(xiàn)出促進能動性(Trudel，L.；Bouin，M.；Tomasetto，C.；Eberling，P.；St-Pierre，S.；Bannon，P.；L’Heureux，M.C.；Poitras，P.Two newpeptides to improve post-operative gastric ileus in dog.Peptides 2003，24，531-534；Trudel，L.；Tomasetto，C.；Rio，M.C.；Bouin，M.；Plourde，V.；Eberling，P.；Poitras，P.Ghrelin/motilin-related peptideis a potent prokinetic to reverse gastric postoperative ileus in rats.Am.J.Physiol.2002，282，G948-G952；Peeters，T.L.Central and peripheralmechanisms by which ghrelin regulates gut motility.J.Physiol.Pharmacol.2003，54(Supp.4)，95-103.)。
據(jù)表明，生長素釋放肽還參與生殖和新生期發(fā)育的各個方面(Arvat，E.；Gianotti，L.；Giordano，R.；等人.Growth hormone-releasing hormone and growth hormone secretagogue-receptor ligands.Focus on reproductive system.Endocrine 2001，14，35-43)。生長素釋放肽的心血管作用也是顯著的，因為該肽是強效血管舒張劑。這樣，生長素釋放肽激動劑具有治療慢性心力衰竭的潛力(Nagaya，N.；Kangawa，K.Ghrelin，a novel growth hormone-relasing peptide，in thetreatment of chronic heart failure.Regul.Pept.2003，114，71-77；Nagaya，N.；Kangawa，K.Ghrelin improves left ventriculardysfunction and cardiac cachexia in heart failure.Curr.Opin.Pharmacol.2003，3，146-151；Bedendi，I.；Alloatti，G.；Marcantoni，A.；Malan，D.；Catapano，F(xiàn).；Ghé，C.；等人.Cardiac effects of ghrelinand its endogenous derivatiyes des-octanoyl ghrelin and des-Gln14-ghrelin.Eur.J.Pharmacol.2003，476，87-95)。國際專利申請公開WO 2004/014412描述了生長素釋放肽激動劑在以下方面的應(yīng)用在心肌細胞中保護細胞免于死亡，以及作為心臟保護劑用于治療導(dǎo)致心力衰竭的病癥。最后，已經(jīng)獲得證據(jù)表明，生長素釋放肽可能涉及焦慮癥和其它CNS病癥以及記憶力改善(Carlini，V.P.，Monzon，M.E.，Varas，M.M.，Cragnolini，A.B.，Schioth，H.B.，Scimonelli，T.N.，de Barioglio，S.R.Ghrelin increases anxiety-like behavior and memoryretention in rats.Biochem.Biophys.Res.Commun.2002，299，739-743)。
生長素釋放肽在人類中的種種作用已經(jīng)暗示存在其受體的亞型，雖然迄今為止尚未鑒定出來(Torsello，A.；Locatelli，Y.；Melis，M.R.；Succu，S.；Spano，M.S.；Deghenghi，R.；Muller，E.E.；Argiolas，A.；Torsello，A.；Locatelli，V.；等人.Differential orexigenic effects ofhexarelin and its ahalogs in the rat hypothalamusindication formultiple growth hormone secretagogue receptor subtypes.Neuroendocrinology2000，72，327-332.)。然而，分離出了稱為GHS-R1b的GHS-R1a的截短的無活性形式，并且在最初表征的同時進行了鑒定。證據(jù)表明，在不同組織中可能存在另外的受體亞型以解釋由內(nèi)源性肽和合成GHS所表現(xiàn)出的多種不同作用。例如，已經(jīng)在乳腺癌細胞系、心肌細胞和豚鼠心臟中發(fā)現(xiàn)了對于生長素釋放肽和脫?；L素釋放肽的高親和力結(jié)合位點，其參與介導(dǎo)這些肽的抗增殖、心臟保護和負心臟肌收縮力作用。類似地，已經(jīng)在前列腺癌細胞中發(fā)現(xiàn)了除GHS-R1a和GHS-R1b以外的特異性GHS結(jié)合位點。此外，在前列腺癌細胞系中，生長素釋放肽和脫?；L素釋放肽對于細胞增殖施加不同影響(Cassoni，P.；Ghé，C.；Marrocco，T.；等人.Expressionof ghrelin and biological activity of specific receptors for ghrelin anddes-acyl ghrelin in human prostate neoplasms and related cell lines.Eur.J.Endocrinol.2004，150，173-184)。于是這些不同受體亞型可獨立地參與由內(nèi)源性肽和合成GHS所表現(xiàn)出的多種生物活性。實際上，最近，提出了受體亞型的存在，來解釋通過生長素釋放肽促進脂肪聚集，盡管其強效刺激脂肪分解激素、生長激素(Thompson，N.M.；Gill，D.A.S.；Davies，R.；Loveridge，N.；Houston，P.A.；Robinson，I.C.A.F.；Wells，T.Ghrelin and des-octanoyl ghrelin promoteadipogenesis directly in vivo by a mechanism independent of the type1a growth hormone secretagogue receptor. Endocrinology 2004，145，234-242.)。此外，這項研究表明，生長素釋放肽和脫?；L素釋放肽的比例可有助于幫助調(diào)控作為對營養(yǎng)狀態(tài)的反應(yīng)的脂肪形成和脂肪分解之間的平衡。
將生長素釋放肽的GH調(diào)節(jié)作用與對于體重和食欲的影響分隔開的生長素釋放肽的肽類似物的成功產(chǎn)生提供了很強的證據(jù)表明其它受體亞型的存在和生理相關(guān)性(Halem，H.A.；Taylor，J.E.；Dong，J.Z.；Shen，Y.；Datta，R.；Abizaid，A.；Diano，S.；Horvath，T.；Zizzari，P.；Bluet-Pajot，M.-T.；Epelbaum，J.；Culler，M.D.Novel analogs ofghrelinphysiological and clinical implications.Eur. J.Endocrinol.2004，151，S71-S75.)。BIM-28163作為GHS-R1a受體拮抗劑起作用，并且抑制天然生長素釋放肽對受體的激活作用。然而，在刺激體重增加和食物攝取方面，該同一分子是完全激動劑。此外，已經(jīng)根據(jù)結(jié)合實驗，提出了在表現(xiàn)出肽類和非肽類GHS之間差異的不同組織中，仍然存在未表征的受體亞型(ong，H.；Menicoll，N.；Escher，F(xiàn).；Collu，R.；Deghenghi，R.；Locatelli，V.；Ghigo，E.；Muccioli，G.；Boghen，M.；Nilsson，M.Endocrinology 1998，139，432-435.)。已經(jīng)報道了大鼠睪丸中整個GHS-R表達和GHS-R1a亞型表達之間的差異(Barreiro，M.L.；Suominen，J.S.；Gaytan，F(xiàn).；Pinilla，L.；Chopin，L.K.；Casanueva，F(xiàn).F.；Dieguez，C.；Aguilar，E.；Toppari，J.；Tena-Sempere，M.Developmental，stage-specific，and hormonallyregulated expression of growth hormone secretagogue receptormessenger RNA in rat testis.Biol.Reproduction 2003，68，1631-1640)。有人假設(shè)膽堿能神經(jīng)上的GHS-R亞型來解釋在胃動素受體結(jié)合實驗期間觀察到的生長素釋放肽和肽類GHS對神經(jīng)收縮反應(yīng)的不同作用(Depoortere，I.；Thijs，T.；Thielemans，L.；Robberecht，P.；Peeters，T.L.Interaction of the growth hormone-releasing peptides ghrelin andgrowth hormone-releasing peptide-6 with the motilin receptor in therabbit gastric antrum.J.Pharmacol.Exp.Ther.2003，305，660-667.)。
與生長素釋放肽受體有關(guān)的多種不同活性還可能是因為激活不同信號傳導(dǎo)途徑的不同激動劑，例如關(guān)于生長素釋放肽和腺苷所表明的，二者都作為GHS-R1a的激動劑相互作用(Carreira，M.C.；Camina，J.P.；Smith，R.G.；Casanueva，F(xiàn).F.Agonist-specific couplingof growth hormone secretagogue receptor type 1a to differentintracellular signaling systems.Role of adenosine.Neuroendocrinology2004，79，13-25.)。
已經(jīng)表明GPCR的功能活性經(jīng)常需要與其自身或其它蛋白形成二聚體或其它多聚體(Park，P.S.；Filipek，S.；Wells，J.W.；Palczewski，K.Oligomerization of G protein-coupled receptorspast，present，andfuture.Biochemistry 2004，43，15643-15656；Rios，C.D.；Jordan，B.A.；Gomes，I.；Devi，L.A.G-protein-coupled receptor dimerizationmodulation of receptor function.Pharmacol.Ther.2001，92，71-87；Devi，L.A.Heterodimerization of G-protein-coupled receptorspharmacology，signaling and trafficking.Trends Pharmacol.Sci.2001，22，532-537.)。同樣，生長素釋放肽受體的活性可能也被這樣的復(fù)合物至少部分地控制。例如，一些報道表明了GHS-R1a與GHRH的相互作用(Cunha，S.R.；Mayo，K.E.Ghrelin and growth hormone(GH)secreatagogues potentiate GH-releasing hormone(GHRH)-induced cyclic adenosine 3’，5’-monophosphate production in cellsexpressing transfected GHRH and GH secretagogue receptors.Endocrinology 2002，143，4570-4582；Malagón，M.M.；Luque，R.M.；Ruiz-Guerrero，E.；Rodríguez-Pacheco，F(xiàn).；García-Navarro，S.；Casanueva，F(xiàn).F.；Gracia-Navarro，F(xiàn).；

J.P.Intracellularsignaling mechanisms mediating ghrelin-stimulated growth hormonerelease in somatotropes Endocrinology 2003，144，5372-5380)或受體亞型之間的相互作用(Chan，C.B.；Cheng，C.H.K.Identification andfunctional characterization of two alternatively spliced growthhormone secretagogue receptor transcripts from the pituitary of blackseabream Acanthopagrus schlegeli.Mol.Cell. Endocrinol.2004，2714，81-95)可能涉及調(diào)節(jié)受體功能。
所報道的利用生長素釋放肽受體來進行治療的絕大部分方法是把注意力集中于調(diào)節(jié)代謝功能。類似地，關(guān)于GHS的絕大部分文獻把注意力集中于可以通過其GH促進作用來治療的病癥。本文描述的本發(fā)明的某些實施方案特別利用了生長素釋放肽受體的選擇性激活，以提供治療特征是GI能動性障礙的疾病的途徑。采用生長素釋放肽觀察到的改進的GI能動性證實了生長素釋放肽激動劑可用于治愈與能動性減弱或受限有關(guān)的病癥(Murray，C.D.R.；Kamm，M.A.；Bloom，S.R.Emmanuel，A.V.Ghrelin for the gastroenterologisthistory andpotential.Gastroenterology 2003，125，1492-1502；Fujino，K.；Inui，A.；Asakawa，A.；Kihara，N.；Fujimura，M.；Fujimiya，M.Ghrelininduces fasting motor activity of the gastrointestinal tract in consciousfed rats.J.Physiol.2003，550，227-240；Edholm，T.；Levin，F(xiàn).；Hellstrm，P-M.；Schmidt，P.T.Ghrelin stimulates motility in the smallintestine of rats through intrinsic cholinergic neurons.Regul.Pept.2004，121，25-30.)。
這些病癥包括手術(shù)后腸梗阻(PoI，Luckey，A.；Livingston，E.；Taché，Y．Mechanisms and treatment of postoperative ileus．Arch.Surg.2003，138，206-214；Baig，M.K.；Wexner，S.D.Postoperative ileusa review.Dis.Colon Rectum 2004，47，516-526)。POI定義為GI能動性削弱，一般是在腹部、腸、婦科和骨盆手術(shù)后發(fā)生的。僅在美國，每年有四百三十萬例手術(shù)引起POI，需要花費十億美元以上。POI被認為是對手術(shù)操作的有害反應(yīng)，持續(xù)時間不等，通常會持續(xù)72小時。其特征是疼痛、腹部膨脹或腫脹、惡心和嘔吐、腸中積聚氣體和液體以及糞便延遲通過?；颊呒炔荒芙?jīng)口進食，也不能進行腸運動直至恢復(fù)腸功能。POI導(dǎo)致很多不利的后果，包括患者發(fā)病率增加、高花費的長期住院，此外，是再次住院的主要原因。另外，在手術(shù)后作為鎮(zhèn)痛劑給予的阿片類藥物會加重該病癥，這是由于這些藥物的眾所周知的抑制腸功能的副作用。
胃和腸的手術(shù)操作引起腸-腦信號途徑的結(jié)構(gòu)破壞，削弱了GI活性和引起POI。生長素釋放肽在胃中局部起作用，并且刺激和協(xié)調(diào)迷走神經(jīng)傳入神經(jīng)元，由此調(diào)節(jié)腸能動性。因此，生長素釋放肽促進人中的胃排空，并且是證明能治療動物模型中POI的有效物質(zhì)。生長素釋放肽激動劑加倍了生長素釋放肽的作用，由此直接靶向POI的機理性原因，以促進腸道功能的正?；湍軌蚋斓爻鲈骸ｌo脈內(nèi)給藥經(jīng)常是治療POI的優(yōu)選途徑，因為在這些患者中削弱的GI能動性妨礙口服治療。U.S.FDA目前沒有批準專門用于治療POI的任何藥物。
另一主要能動性病癥是胃輕癱，這是I型和II型糖尿病所具有的特別問題(Camilleri，M.Advances in diabetic gastroparesis.Rev.Gastroenterol.Disord.2002，2，47-56；Tack等人.Gastroenterology2004；126A485；Moreaux，B.；VandenBerg，J.；Thielmans，L.；Meulemans，A.；Coulie，B.Activation of the GHS receptor acceleratesgastric emptying in the dog.Digestive Disease Week，15-20 May 2004，New Orleans，LA，USA Abstract M1009；Tack等人.Gastroenterology2004，126A74)Gastroparesis(“stomach paralysis”)是一種綜合征，特征是在不存在任何機械梗阻的情況下胃排空延遲。其可變特征是腹部疼痛、惡心、嘔吐、體重下降、食欲缺乏、早飽、營養(yǎng)不良、胃食管反流、痙攣和脹氣。該慢性病癥可導(dǎo)致頻繁住院、無力加重和降低生命質(zhì)量。在糖尿病個體中，癥狀性胃輕癱是常見的，僅在美國，對于全部100萬患者，影響5-10％糖尿病患者。神經(jīng)病是糖尿病的頻繁發(fā)生的衰弱性并發(fā)癥。內(nèi)臟神經(jīng)病導(dǎo)致GI機能障礙，尤其是涉及胃的GI機能障礙，并且導(dǎo)致胃能動性削弱。生長素釋放肽通過刺激迷走神經(jīng)和通過在胃粘膜上的直接激肽原作用來促進胃排空。此外，最近的臨床試驗表明，在糖尿病胃輕癱患者中，靜脈內(nèi)給予天然生長素釋放肽肽是有效的急性治療。因此，生長素釋放肽激動劑能有效地克服胃輕癱患者所面對的基本能動性障礙和治愈該病癥。就象POI一樣，對于胃輕癱，沒有可接受的或有效的治療，并且大部分目前的治療的目標是僅提供癥狀的緩解。此外，很多正在開發(fā)的治療劑具有類似于已經(jīng)在該適應(yīng)癥中失敗的早期產(chǎn)品的作用機理。手術(shù)可緩解該疾病過程，但是不能治愈。
阿片類藥物誘導(dǎo)的腸機能障礙(OBD，Kurz，A.；Sessler，D.J.Opioid-Induced Bowel Dysfunction.Drugs 2003，63，649-671.)是一個術(shù)語，其應(yīng)用于癥狀集合，該癥狀集合涉及由于用阿片類止痛劑治療而導(dǎo)致的GI能動性減弱。在使用阿片類藥物來控制疼痛的患者當中，大約有40-50％的患者會發(fā)生OBD。其特征是大便干硬、排泄用力、排泄不完全、氣脹、腹部膨脹和反胃加重。除了明顯的短期痛苦以外，在接受長期阿片類藥物治療的患者中該病癥還導(dǎo)致身體和心理方面的惡化。另外，該機能障礙可能會很嚴重以至于變成劑量限制性不利作用，從而實際上阻止了充分的疼痛控制。就象對POI一樣，預(yù)計生長素釋放肽激動劑能夠抵抗由于使用阿片類藥物而導(dǎo)致的能動性障礙。
通過生長素釋放肽和生長素釋放肽激動劑的GI能動性刺激作用，兩種較不常見的綜合征還可以得到幫助。短腸綜合征是一種病癥，其在切除腸的大部分以后開始，并且特征是營養(yǎng)不良。觀察到患者具有降低的生長素釋放肽水平，這是由于產(chǎn)生生長素釋放肽的腸的神經(jīng)內(nèi)分泌細胞損失所致的。短腸可能在釋放激素時反饋(Krsek，M.；Rosicka，M.；Haluzik，M.；等人.Plasma ghrelin levels in patients withshort bowel syndrome.Endocr.Res.2002，28，27-33.)。慢性腸假梗阻是通過在不存在機械梗阻或炎癥的情況下存在慢性腸擴張和能動性障礙限定的綜合征。已知遺傳和獲得的原因?qū)е略摬“Y，在全球其每年影響大量個體(Hirano，I.；Pandolfino，J.Chronic intestinalpseudo-obstruction.Dig.Dis.2000，18，83-92.)。
可通過生長素釋放肽受體刺激來治療的其它病癥和疾病是嘔吐，例如由于癌癥化療引起的嘔吐，便泌，例如與腸易激綜合征(IBS)的能動性減弱期有關(guān)的便泌，與消耗性病癥有關(guān)的胃排空延遲，胃食管反流疾病(GERD)，胃潰瘍(Sibilia，V.；Rindi，G.；Pagani，F(xiàn).；Rapetti，D.；Locatelli，V.；Torsello，A.；Campanini，N.；Degenghi，R.；Netti，C.Ghrelin protects against ethanol-induced gastric ulcers inratsstudies on the mechanism of action.Endocrinology 2003，144，353-359.)和克羅恩病。
此外，在其它哺乳動物中，GI能動性障礙也是顯著問題。例如，稱為腸梗阻或絞痛的能動性機能障礙是引起馬死亡的第一位原因。此外，腸梗阻是馬的腸手術(shù)的主要常見并發(fā)癥之一，換句話說，稱為手術(shù)后腸梗阻。該病癥還可以具有非手術(shù)病因。根據(jù)其消化道的解剖學(xué)和功能，某些馬可能易患腸梗阻。實際上，任何馬都易患腸梗阻，在年齡、性別和生育之間僅有很小差異。此外，腸梗阻可影響其它動物例如犬科動物(Roussel，A.J.，Jr.；Cohen，N.D.；Hooper，R.N.；Rakestraw，P.C.Risk factors associated with development ofpostoperative ileus in horses.J.Am Vet.Med.Assoc.2001，219，72-78；Van Hoogmoed，L.M.；Nieto，J.E.；Snyder，J.R.；Harmon，F(xiàn).A.Surveyof prokinetic use in horses with gastrointestinal injury.Vet.Surg.2004，33，279-285.)。
重要的是，對于大部分上述病癥，現(xiàn)在沒有任何專門批準的治療劑，并且大部分治療劑僅僅是針對癥狀緩解。然而，生長素釋放肽受體的特定調(diào)節(jié)將提供機會來直接靶向病生理紊亂位點，以更好地治療病癥和改善臨床效果。此外，與在GHS-R1a受體上相互作用的其它物質(zhì)不同，據(jù)信本發(fā)明化合物不刺激同時發(fā)生的GH分泌。對于該受體的任何調(diào)節(jié)劑，這種胃腸和GH作用的分離以前沒有報道過。然而，如上所述，最近已經(jīng)報道了存在能將與生長素釋放肽有關(guān)的食欲控制和GH調(diào)節(jié)作用分離開的類似物(Eur.J.Endocrinol.2004，151，S71-S75.)。
WO 01/00830報道了分泌生長激素以及促進GI能動性的短胃腸肽(SGIP)，但是沒有證實這是因為在生長素釋放肽受體上的作用。U.S.專利6,548,501公開了作為GHS的可用于刺激GI能動性的特異性化合物。此外，已知其它內(nèi)源性因子可刺激GH分泌，但是不促進GI能動性。實際上，很多實際上抑制該生理功能。特異性受體激動劑例如本發(fā)明化合物具有好得多的潛力來成為選擇性有效治療劑。
人們繼續(xù)開發(fā)有效的選擇性GHS，如最近已經(jīng)綜述的那樣，多種小分子衍生物現(xiàn)在是已知的(Carpino，P.Exp.Opin.Ther. Patents2002，12，1599-1618.)。特異性GHS描述在下列文件中U.S.專利和國際專利申請公開 WO 89/07110；WO 89/07111；WO 92/07578；WO 93/04081；WO 94/11012；WO 94/13696；WO 94/19367；WO95/11029；WO 95/13069；WO 95/14666；WO 95/17422；WO 95/17423；WO 95/34311；WO 96/02530；WO 96/15148；WO 96/22996；WO 96/22997；WO 96/24580；WO96/24587；WO 96/32943；WO 96/33189；WO 96/35713；WO 96/38471；WO 97/00894；WO 97/06803；WO 97/07117；WO 97/09060；WO 97/11697；WO 97/15191；WO97/15573；WO 97/21730；WO 97/22004；WO 97/22367；WO 97/22620；WO 97/23508；WO 97/24369；WO 97/34604；WO 97/36873；WO 97/38709；WO 97/40023；WO97/40071；WO 97/41878；WO 97/41879；WO 97/43278；WO 97/44042；WO 97/46252；WO 98/03473；WO 98/10653；WO 98/18815；WO 98/22124；WO 98/46569；WO98/51687；WO 98/58947；WO 98/58948；WO 98/58949；WO 98/58950；WO 99/08697；WO 99/09991；WO 99/36431；WO 99/39730；WO 99/45029；WO 99/58501；WO99/64456；WO 99/65486，WO 99/65488；WO 00/01726；WO 00/10975；WO 01/47558；WO 01/92292；WO 01/96300；WO 01/97831； U.S.專利3,239,345；U.S.專利4,036,979；U.S.專利4,411,890；U.S.專利5,492,916；U.S.專利5,494,919；U.S.專利5,559,128；U.S.專利5,663,171；U.S.專利5,721,250；U.S.專利5,721,251；U.S.專利5,723,616；U.S.專利5,726,319；U.S.專利5,767,124；U.S.專利5,798,337；U.S.專利5,830,433；U.S.專利5,919,777；U.S.專利6,034,216；U.S.專利6,548,501；U.S.專利6,559,150；U.S.專利6,576,686；U.S.專利6,686,359；和U.S.專利申請?zhí)?002/0168343；2003/100494；2003/130284；2003/186844。
盡管做了大量工作，但是很少發(fā)現(xiàn)在該受體起作用的環(huán)狀化合物。當其被發(fā)現(xiàn)時，拮抗劑活性更流行。例如，14-氨基酸化合物伐普肽-一種SRIH-14激動劑和生長抑素模擬物被證實是生長素釋放肽拮抗劑(Deghenghi R，Papotti M，Ghigo E，等人.Somatostatinoctapeptides(lanreotide，octreotide，vapreotide，and their analogs)share the growth hormone-releasing peptide receptor in the humanpituitary gland.Endocrine 2001，14，29-33.)。已經(jīng)報道了非選擇性地結(jié)合生長抑素受體、生長激素促分泌劑受體的cortistatin-一種環(huán)神經(jīng)肽的類似物的結(jié)合和拮抗活性(Intl.Pat.Appl.WO 03/004518).(Deghenghi R，Broglio F，Papotti M，等人.Targeting the ghrelinreceptor-Orally active GHS and cortistatin analogs.Endocrine2003，22，13-18)。特別是，這些類似物當中的一種，EP01492(cortistatin-8)已經(jīng)進入臨床前試驗來作為生長素釋放肽拮抗劑治療肥胖癥。這些化合物表現(xiàn)出24-33 nM的IC50值。此外，已經(jīng)描述了這些環(huán)狀化合物和其衍生物及其與金屬結(jié)合劑的應(yīng)用，它們能夠作為放射診斷和放射治療用于腫瘤和肢端肥大癥的治療中。
生長激素的環(huán)狀和直鏈類似物177-191已經(jīng)作為肥胖癥治療劑進行了研究(WO 99/12969)，一種具體化合物AOD9604已進入該適應(yīng)癥的臨床應(yīng)用中。已經(jīng)研究過的類似于本發(fā)明分子的化合物是GHS，G-7203(EC50＝0.43 nM)，生長激素釋放肽的環(huán)肽類似物，GHRP-2(Elias，K.A.；Ingle，G.S.；Burnier，J.P.；Hammonds，G.；McDowell，R.S.；Rawson，T.E.；Somers，T.C.；Stanley，M.S.；Cronin，M.J.Invitro characterization of four novel classes of growth hormone-releasing peptide.Endocrinol.1995，136，5694-5699)。然而，該環(huán)狀衍生物的簡化導(dǎo)致仍然有效的直鏈化合物，而對于本發(fā)明化合物，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)直鏈類似物缺乏生長素釋放肽受體活性。
本發(fā)明的大環(huán)化合物具有激動劑活性。然而，如上所述，與hGHS-R1a受體的其它激動劑不同，對于生長激素釋放，本發(fā)明化合物出人意料地具有不顯著的刺激作用。因此，本發(fā)明化合物可在GI道或代謝病癥中表現(xiàn)出選擇性作用，同時沒有由于GH釋放的副作用。
發(fā)明概述 本發(fā)明提供新的構(gòu)象定義的大環(huán)化合物。這些化合物能夠起生長素釋放肽(生長激素促分泌劑)受體(GHS-R1a)的調(diào)節(jié)劑尤其是激動劑的作用。
按照本發(fā)明的方面，本發(fā)明涉及式I、II和/或III的合物
或者其旋光異構(gòu)體、對映體、非對映體、外消旋體或立體化學(xué)混合物， 其中 R1是氫或氨基酸的側(cè)鏈，或者R1和R2共同形成任選在環(huán)上包含O、S或N原子的4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代，或者R1和R9共同形成任選在環(huán)上包含O、S或另外的N原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代； R2是氫或氨基酸的側(cè)鏈，或者R1和R2共同形成任選在環(huán)上包含O、S或N原子的4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代，或者R2和R9共同形成任選在環(huán)上包含O、S或另外的N原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代； R3是氫或氨基酸側(cè)鏈，或者R3和R4共同形成任選在環(huán)上包含O或S原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代，或者R3和R7或R3和R11共同形成任選在環(huán)上包含O、S或另外的N原子的4、5、6、7或8元雜環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代； R4是氫或氨基酸側(cè)鏈，或者R4和R3共同形成任選在環(huán)上包含O或S原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代，或者R4和R7或R4和R11共同形成任選在環(huán)上包含O、S或另外的N原子的4、5、6、7或8元雜環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代； R5和R6各自獨立地是氫或氨基酸側(cè)鏈，或者R5和R6共同形成任選在環(huán)上包含O、S或N原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代； R7是氫、低級烷基、取代的低級烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基或取代的雜環(huán)基，或者R3和R7或R4和R7共同形成任選在環(huán)上包含O、S或另外的N原子的3、4、5、6、7或8元雜環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代； R8在3、4、5、6、7或8元環(huán)結(jié)構(gòu)上取代了一個或多個氫原子，并且獨立地選自烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氧代基、氨基、鹵素、甲酰基、酰基、羧基、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、氨基甲?；?、胍基、脲基、脒基、巰基、亞磺酰基、磺?；蛠喕酋０被蛘?，在取代兩個相鄰原子上的氫原子時，R8是稠合環(huán)烷基、取代的稠合環(huán)烷基、稠合雜環(huán)、取代的稠合雜環(huán)、稠合芳基、取代的稠合芳基、稠合雜芳或取代的稠合雜芳基環(huán)； X是O、NR9或N(R10)2+； 其中R9是氫、低級烷基、取代的低級烷基、磺酰基、亞磺酰氨基或脒基，并且R10是氫、低級烷基或取代的低級烷基，或者R9和R1共同形成任選在環(huán)上包含O、S或另外的N原子的3、4、5、6和7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被上面定義的R8取代； Z1是O或NR11， 其中R11是氫、低級烷基或取代的低級烷基，或者R3和R11共同或者R4和R11共同形成任選在環(huán)上包含O、S或另外的N原子的4、5、6、7或8元雜環(huán)，其中所述環(huán)任選被上面定義的R8取代； Z2是O或NR12，其中R12是氫、低級烷基或取代的低級烷基； M、n和p各自獨立地是0、1或2； T是式IV的二價基團 -U-(CH2)d-W-Y-Z-(CH2)e-(IV) 其中d和e各自獨立地是0、1、2、3、4或5；Y和Z是各自任選地存在的；U是-CR21R22-或-C(＝O)-并且是鍵合到式I的X上的；W、Y和Z各自獨立地選自-O-、-NR23-、-S-、-SO-、-SO2-、-C(＝O)-O-、-O-C(＝O)-、-C(＝O)-NH-、-NH-C(＝O)-、-SO2-NH-、-NH-SO2-、-CR24R25-、具有Z或E構(gòu)型的-CH＝CH-、-C≡C-和下面所示的環(huán)結(jié)構(gòu)


或
其中G1和G2各自獨立地是共價鍵或者選自下列的二價基團-O-，-NR39-、-S-、-SO-、-SO2-、-C(＝O)-、-C(＝O)-O-、-O-C(＝O)-、-C(＝O)NH-、-NH-C(＝O)-、-SO2-NH-、-NH-SO2-、-CR40R41-、具有Z或E構(gòu)型的-CH＝CH-和-C≡C-；其中G1與基團U最近地鍵合，其中除非另有說明，否則環(huán)中的任何碳原子可以被N替換，條件是所述環(huán)不能含有多于4個的N原子；K1、K2、K3、K4和K5各自獨立地是O、NR42或S，其中R42如下面所定義； R21和R22各自獨立地是氫、低級烷基或取代的低級烷基，或者R21和R22共同形成任選包含一個或多個選自O(shè)、S和N的雜原子的3-12元環(huán)，其中所述環(huán)任選被上面定義的R8取代； R23、R39和R42各自獨立地是氫、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、甲?；?、?；?、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、脒基、磺?；蛠喕酋０被?； R24和R25獨立地是氫、低級烷基、取代的低級烷基、RAA，其中RAA是氨基酸例如標準或不常見氨基酸的側(cè)鏈，或者R24和R25共同形成任選包含一個或多個選自O(shè)、S和N的雜原子的3-12元環(huán)；或者R24或R25中的一個是羥基、烷氧基、芳氧基、氨基、巰基、氨基甲酰基、脒基、脲基或胍基，而另外一個是是氫、低級烷基或取代的低級烷基，除了當與R24和R25鍵合的碳原子也鍵合到另一個雜原子上時； R26、R31、R35和R38是各自任選存在的，而在存在時，在指定的環(huán)上一個或多個氫原子被取代，并且各自獨立地選自鹵素、三氟甲基、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氨基、甲酰基、?；Ⅳ然?、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、氨基甲?；㈦一?、脲基、脒基、氰基、硝基、巰基、亞磺?；?、磺?；蛠喕酋０被? R27是任選存在的，并且在指定的環(huán)上一個或多個氫原子被取代，并且各自獨立地選自烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氧代基、氨基、甲?；Ⅴ；Ⅳ然?、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、氨基甲酰基、胍基、脲基、脒基、巰基、亞磺?；?、磺?；蛠喕酋０被?； R28、R29、R30、R32、R33、R34、R36和R37是各自任選存在的，并且，當在環(huán)中其所鍵合的碳原子上不存在雙鍵時，任選存在兩個基團，且當其存在時，環(huán)上的一個氫原子被取代，或者當在環(huán)中其所鍵合的碳原子上不存在雙鍵時，環(huán)上的一個或兩個氫原子被取代，并且取代基各自獨立地選自烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氧代基、氨基、甲?；Ⅴ；?、羧基、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、氨基甲?；?、胍基、脲基、脒基、巰基、亞磺?；⒒酋；?、亞磺酰氨基，以及(只有當其連接的碳原子上存在雙鍵時)鹵素；并且 R40和R41各自獨立地是氫、低級烷基、取代的低級烷基，RAA如上面所定義，或者R40和R41共同形成任選包含一個或多個選自O(shè)、S和N的雜原子的3-12元環(huán)，其中所述環(huán)任選被上面定義的R8取代，或者R40和R41中的一個是羥基、烷氧基、芳氧基、氨基、巰基、氨基甲酰基、脒基、脲基或胍基，而另外一個是氫、低級烷基或取代的低級烷基，除了當與R40和R41鍵合的碳原子也鍵合到另一個雜原子上的時候； 條件是T不是氨基酸殘基、二肽片段、三肽片段或包括標準氨基酸在內(nèi)的更高級肽片段；
或者其旋光異構(gòu)體、對映體、非對映體、外消旋體或立體化學(xué)混合物，其中 R50是-(CH2)ssCH3、-CH(CH3)(CH2)ttCH3、-(CH2)uuCH(CH3)2、-C(CH3)3、-(CHR55)vv-R56或-CH(OR57)CH3，其中ss是1、2或3；tt是1或2；uu是0、1或2；并且vv是0、1、2、3或4；R55是氫或C1-C4烷基；R56是氨基、羥基、烷氧基、環(huán)烷基或取代的環(huán)烷基；并且R57是氫、烷基、?；?、氨基酰基、磺?；?、羧基烷基或羧基芳基； R51是氫、C1-C4烷基或者被羥基或烷氧基取代的C1-C4烷基； R52是-(CHR58)wwR59其中ww是0、1、2或3；R58是氫、C1-C4烷基、氨基、羥基或烷氧基；R59是芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、環(huán)烷基或取代的環(huán)烷基； R53是氫或C1-C4烷基； X2是O、NR9或N(R10)2+； 其中R9是氫、低級烷基、取代的低級烷基、磺酰基、亞磺酰氨基或脒基并且R10是氫、低級烷基或取代的低級烷基； Z5是O或NR12，其中R12是氫、低級烷基或取代的低級烷基；并且 T2是式V的二價基團 -Ua-(CH2)d-Wa-Ya-Za-(CH2)e-(V) 其中d和e獨立地是0、1、2、3、4或5；Ya和Za是各自任選地存在的；Ua是-CR60R61-或-C(＝O)-并且是鍵合到式II的X2上的，其中R60和R61各自獨立地是氫、低級烷基或取代的低級烷基，或者R21和R22共同形成任選包含一個或多個選自O(shè)、S和N的雜原子的3-12元環(huán)，其中所述環(huán)任選被上面所定義的R8取代；Wa、Ya和Za各自獨立地選自-O-、-NR62-、-S-、-SO-、-SO2-、-C(＝O)-O-、-O-C(＝O)-、-C(＝O)-NH-、-NH-C(＝O)-、-SO2-NH-、-NH-SO2-、-CR63R64-、具有Z或E構(gòu)型的-CH＝CH-、-C≡C-以及如下所示的環(huán)結(jié)構(gòu)
或
其中G1和G2如上面所定義，并且其中環(huán)上的任何碳原子任選被N替代，條件是該芳環(huán)不能含有多于4個的N原子，并且環(huán)烷基環(huán)不能含有多于2個的N原子； R62是氫、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、甲?；Ⅴ；?、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、脒基、磺酰基或亞磺酰氨基； R63和R64各自獨立地是氫、低級烷基、取代的低級烷基或RAA；或者R63和R64共同形成任選包含一個或多個選自O(shè)、S和N的雜原子的3-12元環(huán)；或者R63和R64中的一個是羥基、烷氧基、芳氧基、氨基、巰基、氨基甲酰基、脒基、脲基或胍基，而另外一個是是氫、低級烷基或取代的低級烷基，除了當與R63和R64鍵合的碳原子也鍵合到另一個雜原子時；并且RAA表示氨基酸例如標準或不常見氨基酸的側(cè)鏈； R65和R68是各自獨立地任選存在的，并且，當存在時，取代環(huán)上的一個或多個氫原子，并且各自獨立地是鹵素、三氟甲基、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氨基、甲酰基、酰基、羧基、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、氨基甲?；?、胍基、脲基、脒基、氰基、硝基、巰基、亞磺?；?、磺酰基或亞磺酰氨基； R66和R67是各自任選存在的，并且當其所鍵合的環(huán)中碳原子上不存在雙鍵時，任選存在兩個基團，并且，當其存在的時候，每個基團取代環(huán)上的一個氫原子，或者當在其所鍵合的環(huán)中碳原子上不存在雙鍵時，其取代環(huán)上的一個或兩個氫原子，并且每個基團獨立地是烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氧代基、氨基、甲酰基、?；Ⅳ然?、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、氨基甲?；?、胍基、脲基、脒基、巰基、亞磺?；⒒酋；?、磺酰胺，以及(只有當其所鍵合的碳原子上存在雙鍵時)鹵素； R69是任選存在的，并且當其存在的時候，取代環(huán)上的一個或多個氫原子，并且每個基團各自獨立地是烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氧代基、氨基、甲?；?、酰基、羧基、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、氨基甲酰基、胍基、脲基、脒基、巰基、亞磺?；⒒酋；騺喕酋０被?； K6是O或S；并且 ff是1、2、3、4或5； 條件是T2不是氨基酸殘基、二肽片段、三肽片段或包括標準氨基酸在內(nèi)的更高級肽片段； 或者
或者其旋光異構(gòu)體、對映體、非對映體、外消旋體或立體化學(xué)混合物，其中 R70是氫、C1-C4烷基，或者R70和R71共同形成任選在環(huán)上包含O、N或S原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面所定義的R8a取代； R71是氫、-(CH2)aaCH3、-CH(CH3)(CH2)bbCH3、-(CH2)ccCH(CH3)2、-(CH2)dd-R76或-CH(OR77)CH3，或者，R71和R70共同形成任選在環(huán)上包含O、N或S原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面所定義的R8a取代；其中aa是0、1、2、3、4或5；bb是1、2或3；cc是0、1、2或3；并且dd是0、1、2、3或4；R76是芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、環(huán)烷基或取代的環(huán)烷基；R77是氫、烷基、酰基、氨基酰基、磺?；?、羧基烷基或羧基芳基； R72是C1-C4烷基；或者R72和R73共同形成任選在環(huán)上包含O或S原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面所定義的R8b取代； R73是氫，或者R73和R72共同形成任選在環(huán)上包含O、S或N原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面所定義的R8b取代； R74是氫或C1-C4烷基，或者R74和R75共同形成任選在環(huán)上包含O、N或S原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面所定義的R8c取代； R75是-(CHR78)R79，或者R75和R74共同形成任選在環(huán)上包含O、N或S原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面所定義的R8c取代；其中R78是氫、C1-C4烷基、氨基、羥基或烷氧基，并且R79選自下面結(jié)構(gòu)的基團


和
其中E1、E2、E3、E4和E5是各自任選存在的，并且當存在時各自獨立地選自鹵素、三氟甲基、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氰基、亞磺?；⒒酋；蛠喕酋０被?，并且代表單環(huán)或二環(huán)芳環(huán)上一個或多個可被取代的位置上的取代，其中所示取代是被相同或不同的所選擇的基團成員取代，并且J1和J2各自獨立地是O或S； R8a、R8b和R8c各自獨立地取代3、4、5、6或7元環(huán)結(jié)構(gòu)上的一個或多個氫原子，并且獨立地選自烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氧代基、氨基、鹵素、甲?；?、酰基、羧基、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、氨基甲?；㈦一?、脲基、脒基、巰基、亞磺?；?、磺?；蛠喕酋０被蛘?，當取代兩個相鄰原子上的氫原子時，R8a、R8b和R8c各自獨立地是稠合環(huán)烷基、取代的稠合環(huán)烷基、稠合雜環(huán)、取代的稠合雜環(huán)、稠合芳基、取代的稠合芳基、稠合雜芳基或取代的稠合雜芳基環(huán)； X3是O、NR9或N(R10)2+； 其中R9是氫、低級烷基、取代的低級烷基、磺?；喕酋０被螂呋?，并且R10是氫、低級烷基或取代的低級烷基； Z10是O或NR12，其中R12是氫、低級烷基或取代的低級烷基；并且 T3與T2的定義相同，只是Ua鍵合到式III的X3上。
按照本發(fā)明的另外方面，化合物是生長素釋放肽受體激動劑或GHS-R1受體激動劑。
本發(fā)明的另外方面提供藥物組合物，所述藥物組合物包含(a)本發(fā)明化合物；和(b)可藥用載體、賦形劑或稀釋劑。
本發(fā)明的另外方面提供具有一個或多個容器的藥盒，所述容器裝有包含有效量的一種或多種本發(fā)明化合物藥物的劑量單位，并任選附帶使用說明書。
本發(fā)明的方面還提供在哺乳動物中刺激腸胃運動、調(diào)節(jié)GHS-R1a受體活性和/或治療腸胃病癥的方法，所述方法包括向有此需要的個體給藥有效量的調(diào)節(jié)哺乳動物GHS-R1a受體的調(diào)節(jié)劑。在特定的實施方案中，調(diào)節(jié)劑與GHS-R1a受體的相互作用不會導(dǎo)致大量的生長激素的釋放。在其它的實施方案中，調(diào)節(jié)劑是式I、II和/或III化合物。
本發(fā)明的另外方面提供診斷腫瘤和/或肢端肥大癥的方法，所述方法包括給予本發(fā)明化合物和放射性標記的金屬結(jié)合劑，并探測組合物與生物學(xué)靶位的結(jié)合，以及治療腫瘤和/或肢端肥大癥的方法，所述方法包括給藥治療有效量的包含本發(fā)明化合物的組合物 本發(fā)明的另外方面涉及制備式I、II和/或III化合物的方法。
本發(fā)明的方面還涉及預(yù)防和/或治療本文所述病癥尤其是腸胃病癥的方法，所述病癥包括手術(shù)后腸梗阻，胃輕癱，例如糖尿病性和手術(shù)后胃輕癱，阿片樣物質(zhì)誘導(dǎo)的腸功能不良，慢性腸假梗阻，短腸綜合征，嘔吐，例如由癌癥化療引起的嘔吐，便秘，例如與腸易激綜合征(IBS)的運動減弱期有關(guān)的便秘，與消耗病有關(guān)的延遲胃排空，胃食管反流病(GERD)，胃潰瘍，克羅恩病，以能動性障礙為特點的胃腸病癥和其它胃腸道疾病和病癥。
本發(fā)明還涉及用于制備預(yù)防和/或治療本文所述病癥的藥物的式I、II和/或III化合物。
下面給出的說明書對本發(fā)明前述和其它方面進行更為詳細的說明。
附圖的簡要描述

圖1顯示表示提供本發(fā)明構(gòu)型定義的大環(huán)的一般合成策略的方案。
圖2顯示制備本發(fā)明大環(huán)化合物的一般硫代酯策略。
圖3顯示本發(fā)明大環(huán)化合物的一般閉環(huán)轉(zhuǎn)位(RCM)策略。
圖4(方格A到E)顯示本發(fā)明例示性化合物結(jié)合到hGHS-R1a受體的競爭結(jié)合曲線。
圖5(方格A到E)顯示關(guān)于由本發(fā)明例示性化合物產(chǎn)生的hGHS-R1a受體激活作用的濃度-響應(yīng)曲線。
圖6顯示描述特別是口服給藥8mg/kg化合物298(方格A)后、皮下注射2mg/kg化合物298與環(huán)糊精(方格B)后、靜脈內(nèi)給藥2mg/kg化合物25與環(huán)糊精(方格C)后和靜脈內(nèi)給藥2mg/kg化合物298與環(huán)糊精(方格D)后，本發(fā)明例示性化合物的藥動學(xué)參數(shù)。
圖7(方格A和B)顯示表示本發(fā)明例示性化合物對胃排空的作用的曲線圖。
圖8顯示表示本發(fā)明例示性化合物對手術(shù)后腸梗阻的作用的曲線圖。
圖9(方格A到D)顯示表示本發(fā)明例示性化合物對搏動(pulsatile)生長激素釋放作用的曲線圖。
圖10顯示本發(fā)明例示性化合物結(jié)合到hGHS-R1a受體的競爭性結(jié)合曲線。
圖11顯示證明本發(fā)明例示性化合物激動作用的激活曲線。
圖12顯示描述本發(fā)明例示性化合物的激動作用和缺乏生長激素釋放的曲線圖。
圖13顯示描述與本發(fā)明例示性化合物結(jié)合到hGHS-R1a受體相關(guān)聯(lián)的受體減敏感作用的曲線圖。
圖14(方格A和B)顯示表示本發(fā)明例示性化合物對胃排空作用的曲線圖。
圖15顯示表示本發(fā)明例示性化合物對手術(shù)后腸梗阻的作用的曲線圖。
圖16顯示描述本發(fā)明例示性化合物的嗎啡延遲的胃排空(方格A)和嗎啡延遲的胃腸通過(方格B)的逆轉(zhuǎn)。
圖17(方格A和B)顯示描述本發(fā)明例示性化合物對胃輕癱的作用的曲線圖。
發(fā)明詳述 現(xiàn)在將根據(jù)本文所述其它實施方案，對本發(fā)明前述和其它方面進行更為詳細的描述。應(yīng)當理解，本發(fā)明能夠以不同的形式進行實施，因而不應(yīng)當解釋為限制于本文給出的實施方案。相反，提供這些實施方案是為了使本公開得以透徹和完整，并將本發(fā)明范圍完全傳遞給本領(lǐng)域的技術(shù)人員。
本發(fā)明描述中使用的術(shù)語是只是為了描述特定的實施方案，而非意圖限制本發(fā)明。如本發(fā)明描述和所附權(quán)利要求中所使用，單數(shù)形式“一種”、“一個”和“該”，除非另外明確指示，也意指包括復(fù)數(shù)形式。另外，如本文所用，術(shù)語“和/或”包括一個或多個相關(guān)聯(lián)的所列項目的任何和全部組合，并且可以縮略為“/”。
除非另外定義，本文所用的全部技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所一般理解的相同的含義。
本文所引用的所有公開、U.S.專利申請、U.S.專利和其它參考文獻將其在整體上收入作為參考。
術(shù)語“烷基”是指具有1-20個碳原子、在某些實例中具有1-8個碳原子的直鏈或支鏈飽和或部分不飽和烴基。術(shù)語“低級烷基”是指含有1-6個碳原子的烷基。烷基的實例包括，但不限于，甲基、乙基、異丙基、叔丁基、3-己烯基和2-丁炔基。所謂“不飽和的”是指存在1、2或3個雙或三鍵或者兩者的組合。這樣的烷基也可以如下面所述被取代。
當下標是用于描述本文定義的烷基或其它烴基時，所述下標是指該基團可以含有的碳原子的數(shù)目。例如，C2-C4烷基表示具有2、3或4個碳原子的烷基。
術(shù)語“環(huán)烷基”是指具有3-15個碳原子、在某些實例中具有3-7個碳原子的飽和或部分不飽和環(huán)狀烴基，并且是指含有所述環(huán)狀烴基的烷基。環(huán)烷基的實例包括，但不限于，環(huán)丙基、環(huán)丙基甲基、環(huán)戊基、2-(環(huán)己基)乙基、環(huán)庚基和環(huán)己烯基。本文定義的環(huán)烷基也包括具有多個碳環(huán)的基團，每個碳環(huán)可以是飽和的或部分不飽和的，例如萘烷基、[2.2.1]-二環(huán)庚基或金剛烷基。所有這樣的環(huán)烷基也可以如下面所述任選被取代。
術(shù)語“芳族的”是指具有共軛π電子系統(tǒng)的不飽和環(huán)狀烴基，所述共軛π電子系統(tǒng)含有4n+2個電子，其中n是大于或等于1的整數(shù)。芳族分子通常是穩(wěn)定的，并且作為原子的平面環(huán)描繪，所述原子的平面環(huán)具有由交替雙鍵和單鍵構(gòu)成的共振結(jié)構(gòu)，例如苯或萘。
術(shù)語“芳基”是指具有6-15個環(huán)原子、在某些實例中具有6-10個環(huán)原子的單一或稠合碳環(huán)系統(tǒng)的芳族基團，并且是指含有所述芳族基團的烷基。芳基的實例包括，但不限于，苯基、1-萘基、2-萘基和芐基。本文定義的芳基也包括具有多芳基環(huán)的基團，所述多芳基環(huán)可以是稠合的，如萘基和蒽基中的多芳基環(huán)，或者是非稠合的，如聯(lián)苯基和三聯(lián)苯基中的多芳基環(huán)。芳基也指二環(huán)或三環(huán)碳環(huán)，其中一個環(huán)是芳族的而其它環(huán)可以是飽和的、部分不飽和的或芳族的，例如，2，3-二氫化茚基或四氫萘基(1，2，3，4-四氫化萘基)。所有這樣的芳基也可以如下面所述任選被取代。
術(shù)語“雜環(huán)”或“雜環(huán)的”是指具有3-15個原子、在某些實例中具有3-7個原子，并且至少一個環(huán)中含有至少一個雜原子，所述雜原子選自O(shè)、S或N的飽和的或部分不飽和的單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)基團。雜環(huán)基的每個環(huán)可以含有一個或兩個O原子、一個或兩個S原子、一至四N原子，條件是每個環(huán)中的雜原子總數(shù)是四個或少于四個，并且每個環(huán)含有至少一個碳原子。形成二環(huán)或三環(huán)雜環(huán)基的稠環(huán)可以只含有碳原子并且可以是飽和的或部分不飽和的。N和S原子可以任選是氧化的并且N原子可以任選是季銨化的。雜環(huán)也指含有所述單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)雜環(huán)基的烷基。雜環(huán)的實例包括，但不限于，2-或3-哌啶基、2-或3-哌嗪基、2-或3-嗎啉基。所有這樣的雜環(huán)基也可以如下面所述被取代。
術(shù)語“雜芳基”是指具有5-15個環(huán)原子、在某些實例中具有5-10個環(huán)原子的單環(huán)或稠環(huán)系統(tǒng)，所述單環(huán)或稠環(huán)系統(tǒng)在至少一個環(huán)中含有至少一個雜原子，所述雜原子選自O(shè)、S或N。雜芳環(huán)的每個環(huán)可以含有一個或兩個O原子、一個或兩個S原子、一至四個N原子，條件是每個環(huán)中的雜原子的總數(shù)是四個或少于四個，并且每個環(huán)含有至少一個碳原子。形成二環(huán)或三環(huán)基團的稠環(huán)可以只含有碳原子，并且可以是飽和的、部分不飽和的或芳族的。在其中氮原子的未共用電子對沒有參與完成芳族pi電子系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)中，N原子可以任選被季銨化或氧化為N-氧化物。雜芳基也指含有所述環(huán)基的烷基。單環(huán)雜芳基的實例包括，但不限于，吡咯基、吡唑基、吡唑啉基、咪唑基、唑基、異唑基、噻唑基、噻二唑基、異噻唑基、呋喃基、噻吩基、二唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基和三嗪基。二環(huán)雜芳基的實例包括，但不限于，吲哚基、苯并噻唑基、苯并唑基、苯并噻吩基、喹啉基、四氫異喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、中氮茚基、苯并呋喃基、異苯并呋喃基、色酮基、豆香素基、苯并吡喃基、噌啉基、喹喔啉基、吲唑基、嘌呤基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶基、噻吩并吡啶基、二氫異吲哚基和四氫喹啉基。三環(huán)雜芳基的實例包括，但不限于，咔唑基、苯并吲哚基、菲咯啉基、吖啶基、菲啶基和呫噸基。所有這樣的雜芳基也可以如下面所述任選被取代。
術(shù)語“羥基”是指基團-OH。
術(shù)語“烷氧基”是指基團-ORa，其中Ra是烷基、環(huán)烷基或雜環(huán)基。實例包括，但不限于，甲氧基、乙氧基、叔丁氧基、環(huán)己基氧基和四氫吡喃基氧基。
術(shù)語“芳氧基”是指基團-ORb，其中Rb是芳基或雜芳基。實例包括，但不限于，苯氧基、芐氧基和2-萘基氧基。
術(shù)語“酰基”是指基團-C(＝O)-Rc，其中Rc是烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)、芳基或雜芳基。實例包括，但不限于，乙?；?、苯甲?；涂孵；?br> 術(shù)語“氨?；北硎居砂被嵫苌孽；?br> 術(shù)語“氨基”是指-NRdRe基團，其中Rd和Re獨立地選自氫、烷基、環(huán)烷基，雜環(huán)、芳基和雜芳基。或者，Rd和Re共同形成3-8元雜環(huán)，所述雜環(huán)任選被下列基團取代未取代的烷基、未取代的環(huán)烷基、未取代的雜環(huán)基、未取代的芳基、未取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、酰基、氨基、酰胺基、羧基、羧基烷基、羧基芳基、巰基、亞磺?；?、磺?；喕酋０被?、脒基、氨基甲?；?、胍基或脲基，并且任選含有1-3個另外的選自O(shè)、S或N的雜原子。
術(shù)語“酰氨基”是指-C(＝O)-NRfRg，其中Rf和Rg獨立地選自氫、烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)、芳基和雜芳基?；蛘撸琑f和Rg共同形成3-8元雜環(huán)，所述雜環(huán)任選被下列基團取代未取代的烷基、未取代的環(huán)烷基、未取代的雜環(huán)、未取代的芳基、未取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、?；?、氨基、酰胺基、羧基、羧基烷基、羧基芳基、巰基、亞磺?；?、磺?；?、亞磺酰氨基、脒基、氨基甲?；?、胍基或脲基，并且任選含有1-3個另外的選自O(shè)、S或N的雜原子。
術(shù)語“脒基”是指基團-C(＝NRh)NRiRj，其中Rh選自氫、烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)、芳基和雜芳基；并且Ri和Rj獨立地選自氫、烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)、芳基和雜芳基。或者Ri和Rj共同形成3-8元雜環(huán)，所述雜環(huán)任選被下列基團取代未取代的烷基、未取代的環(huán)烷基、未取代的雜環(huán)、未取代的芳基、未取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、酰基、氨基、酰胺基、羧基、羧基烷基、羧基芳基、巰基、亞磺?；?、磺酰基，亞磺酰氨基、脒基、氨基甲?；?、胍基或脲基，并且任選含有1-3個另外的選自O(shè)、S或N的雜原子。
術(shù)語“羧基”是指基團-CO2H。
術(shù)語“羧基烷基”是指基團-CO2Rk，其中Rk是烷基、環(huán)烷基或雜環(huán)基。
術(shù)語“羧基芳基”是指基團-CO2Rm、其中Rm是芳基或雜芳基。
術(shù)語“氰基”是指基團-CN。
術(shù)語“甲?；笔侵富鶊F-C(＝O)H，也指-CHO。
術(shù)語“鹵代”、“鹵素”或“鹵化物”是分別指氟代、氟或氟化物，氯代、氯或氯化物，溴代、溴或溴化物，和碘代、碘或碘化物。
術(shù)語“氧代基”是指二價基團＝O，其代替同一碳原子上的兩個氫原子以形成羰基。
術(shù)語“巰基”是指基團-SRn，其中Rn是氫，烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)、芳基或雜芳基。
術(shù)語“硝基”是指基團-NO2。
術(shù)語“三氟甲基”是指基團-CF3。
術(shù)語“亞磺酰基”是指基團-S(＝O)Rp，其中Rp是烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)、芳基或雜芳基。
術(shù)語“磺?；笔侵富鶊F-S(＝O)2-Rq1，其中Rq1是烷基、環(huán)烷基，雜環(huán)、芳基或雜芳基。
術(shù)語“氨基磺?；笔侵富鶊F-NRq2-S(＝O)2-Rq3，其中Rq2是氫、烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)、芳基或雜芳基；并且Rq3是烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)、芳基或雜芳基。
術(shù)語“亞磺酰氨基”是指基團-S(＝O)2-NRrRs，其中Rr和Rs獨立地選自氫、烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)、芳基或雜芳基?；蛘逺r和Rs共同形成3-8元雜環(huán)，所述雜環(huán)任選被下列基團取代未取代的烷基、未取代的環(huán)烷基、未取代的雜環(huán)、未取代的芳基、未取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、?；?、氨基、酰胺基、羧基、羧基烷基、羧基芳基、巰基、亞磺酰基、磺酰基，亞磺酰氨基、脒基、氨基甲?；?、胍基或脲基，并且任選含有1-3個另外的選自O(shè)、S或N的雜原子。
術(shù)語“氨基甲?；笔侵甘?N(Rt)-C(＝O)-ORu基團，其中Rt選自氫、烷基、環(huán)烷基，雜環(huán)、芳基或雜芳基；并且Ru選自烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基或雜芳基。
術(shù)語“胍基”是指式-N(Rv)-C(＝NRw)-NRxRy基團，其中Rv、Rw、Rx和Ry獨立地選自氫、烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)、芳基或雜芳基?；蛘撸琑x和Ry共同形成3-8元雜環(huán)，所述雜環(huán)任選被下列基團取代未取代的烷基、未取代的環(huán)烷基、未取代的雜環(huán)、未取代的芳基、未取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、?；被?、酰胺基、羧基、羧基烷基、羧基芳基、巰基、亞磺?；⒒酋；瑏喕酋０被?、脒基、氨基甲?；?、胍基或脲基，并且任選含有1-3個另外的選自O(shè)、S或N的雜原子。
術(shù)語“脲基”是指式-N(Rz)-C(＝O)-NRaaRbb基團，其中Rz、Raa和Rbb獨立地選自氫、烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)、芳基或雜芳基?；蛘?，Raa和Rbb共同形成3-8元雜環(huán)，所述雜環(huán)任選被下列基團取代未取代的烷基、未取代的環(huán)烷基、未取代的雜環(huán)、未取代的芳基、未取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、酰基、氨基、酰胺基、羧基、羧基烷基、羧基芳基、巰基、亞磺酰基、磺酰基，亞磺酰氨基、脒基、氨基甲?；?、胍基或脲基，并且任選含有1-3個另外的選自O(shè)、S或N的雜原子。
術(shù)語“任選取代的”是指，所規(guī)定的基團被一個或多個適宜的取代基取代或未取代，除非任選取代基是明確規(guī)定的，在此情況下該術(shù)語表示基團是未取代的或被規(guī)定的取代基取代。如上面所定義，各種基團可以是取代的或未取代的(即所述基團是任選取代的)，除非本文另外指示(例如通過指示規(guī)定的基團是未取代的)。
當與術(shù)語烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)、芳基和雜芳基一起使用時，術(shù)語“取代的”是指烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)、芳基或雜芳基，所述基團的一個或多個氫原子被獨立地選自下列的的基團替代未取代的烷基、未取代的環(huán)烷基、未取代的雜環(huán)、未取代的芳基、未取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、?；被Ⅴ０坊?、羧基、羧基烷基、羧基芳基、鹵素、氧代基、巰基、亞磺?；⒒酋；?、亞磺酰氨基、脒基、氨基甲?；?、胍基、脲基和式-NRccC(＝O)Rdd、-NReeC(＝NRff)Rgg、-OC(＝O)NRhhRii、-OC(＝O)Rjj、-OC(＝O)ORkk、-NRmmSO2Rnn或-NRppSO2NRqqRrr的基團，其中Rcc、Rdd，Ree、Rff、Rgg、Rhh、Rii、Rjj、Rmm、Rpp、Rqq和Rrr獨立地選自氫、未取代的烷基、未取代的環(huán)烷基、未取代的雜環(huán)、未取代的芳基或未取代的雜芳基；并且其中Rkk和Rnn獨立地選自未取代的烷基、未取代的環(huán)烷基，未取代的雜環(huán)、未取代的芳基或未取代的雜芳基。另外，Rgg和Rhh、Rjj和Rkk或Rpp和Rqq共同形成3-8元雜環(huán)，所述雜環(huán)任選被下列基團取代未取代的烷基、未取代的環(huán)烷基、未取代的雜環(huán)、未取代的芳基、未取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、?；?、氨基、酰胺基、羧基、羧基烷基、羧基芳基、巰基、亞磺?；⒒酋；瑏喕酋０被?、脒基、氨基甲?；?、胍基或脲基，并且任選含有1-3個另外的選自O(shè)、S或N的雜原子。另外對于芳基和雜芳基，術(shù)語“取代的”包括其中該基團上的一個氫原子被氰基、硝基或三氟甲基替代的選擇。
形成取代條件是任何原子的正常價不被超過，并且取代產(chǎn)生穩(wěn)定的化合物。通常，當基團的取代形式存在時，所述取代的基團優(yōu)選不被進一步取代，或者如果被取代，該取代基只包含有限數(shù)目的被取代的基團，在某些實例中有1、2、3或4個這樣的取代基。
當任何變量在本文任何構(gòu)分或在任何式中出現(xiàn)一次以上時，其在每一次出現(xiàn)時的定義與其在每一次其它出現(xiàn)時的定義無關(guān)。同樣，取代基和/或變量的組合是可允許的，唯一的條件是這樣的組合產(chǎn)生穩(wěn)定的化合物。
“穩(wěn)定化合物”或“穩(wěn)定結(jié)構(gòu)”是指足夠穩(wěn)定以經(jīng)得起分離至有用純度和配制成有效治療劑的化合物。
術(shù)語“氨基酸”是指本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的普通天然的(基因編碼的)或合成的氨基酸及其普通衍生物。當應(yīng)用于氨基酸時，“標準的”或“蛋白生成性”是指具有其天然構(gòu)型的遺傳編碼的20種氨基酸。同樣，當應(yīng)用于氨基酸時，“非天然的”或“不常見”的是指各種非天然的、罕見的或合成的氨基酸，例如Hunt，S.in Chemistry and Biochemistryof the Amino Acids，Barrett，G.C.，Ed.，Chapman and HallNewYork，1985描述的那些氨基酸。
相對于氨基酸或氨基酸衍生物，術(shù)語“殘基”是指下式的基團
其中RAA是氨基酸側(cè)鏈，并且在該情況下，n＝0、1或2。
相對于二肽、三肽或高級肽衍生物，術(shù)語“片段”是指分別含有兩個、三個或多個氨基酸殘基的基團。
術(shù)語“氨基酸側(cè)鏈”是指標準或不常見的氨基酸的側(cè)鏈，并且由RAA表示。例如，丙氨酸的側(cè)鏈是甲基，纈氨酸的側(cè)鏈是異丙基，色氨酸的側(cè)鏈是3-吲哚基甲基。
術(shù)語“激動劑”是指加倍蛋白質(zhì)、受體、酶等的內(nèi)源性配體的至少某些作用的化合物。
術(shù)語“拮抗劑”是指抑制蛋白質(zhì)、受體、酶等的內(nèi)源性配體的至少某些作用的化合物。
術(shù)語“生長激素促分泌劑”(GHS)是指在動物尤其是人中，直接或間接刺激或增加生長激素、生長激素釋放激素或生長激素抑制素的內(nèi)源性釋放的任何外源性給予的化合物或藥劑。GHS在性質(zhì)上可以是肽或非肽，在某些情況下，具有可口服給予的物質(zhì)。在某些情況下，所述物質(zhì)可誘導(dǎo)脈動響應(yīng)。
術(shù)語“調(diào)節(jié)劑”是指對生物學(xué)或化學(xué)過程或機制產(chǎn)生作用的化合物。例如調(diào)節(jié)劑可以提高、促進、上調(diào)、激活、抑制、降低、阻斷、防止、延遲、脫敏、滅活、下調(diào)等生物學(xué)或化學(xué)過程或機制。因此，調(diào)節(jié)劑可以是“激動劑”或“拮抗劑”。由調(diào)節(jié)劑影響的代表性生物學(xué)過程和機制包括，但不限于，受體結(jié)合和激素釋放或分泌。由調(diào)節(jié)劑影響的代表性化學(xué)過程和機制包括，但不限于催化和水解。
當應(yīng)用于受體時，術(shù)語“變異體”意指包括二聚體、三聚體、四聚體、五聚體和其它含有多種組分的生物學(xué)復(fù)合體。這些組分可以相同或不同。
術(shù)語“肽”是指包含共價聯(lián)接在一起的兩個或多個氨基酸的化學(xué)化合物。
術(shù)語“肽模擬物”是指設(shè)計成能模擬肽的化學(xué)化合物，但是其通過加成上或取代一個多個肽的官能團而具有結(jié)構(gòu)的不同，以便調(diào)節(jié)其活性或其它特性，例如溶解度、代謝穩(wěn)定性、口服生物利用度、親脂性、滲透性等。這種設(shè)計包括取代肽鍵、側(cè)鏈修飾、截短、加成上官能團等。當化學(xué)結(jié)構(gòu)不是由肽衍生，但模擬肽的活性時，通常將其稱作“非肽模擬物”。
術(shù)語“肽鍵”是指酰胺[-C(＝O)-NH-]官能團，通過此官能團使肽中單個氨基酸彼此之間一般共價鍵合。
術(shù)語“保護基”是指可以用來避免，在分子中的其它地方發(fā)生化學(xué)改變時，分子上的潛在反應(yīng)性官能團例如胺、羥基或羧基進行化學(xué)反應(yīng)的任何化學(xué)化合物。許多這樣的保護基是本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的，實例可參見“Protective Groups in Organic Synthesis，”TheodoraW.Greene and Peter G.Wuts，editors，John Wiley & Sons，NewYork，3rdedition，1999[ISBN 0471160199]。氨基保護基的實例包括，但不限于，苯二酰亞胺基、三氯乙?；⑵S氧基羰基、叔丁氧基羰基和金剛烷基氧基羰基。在某些實施方案中，氨基保護基是氨基甲酸酯氨基保護基，其在結(jié)合到氨基上以形成氨基甲酸酯時被定義為氨基保護基。在其它實施方案中，氨基的氨基甲酸酯保護基是烯丙氧基羰基(Alloc)、芐氧基羰基(Cbz)、9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)、叔丁氧基羰基(Boc)和α，α-二甲基-3，5-二甲氧基芐氧基羰基(Ddz)。較新的氨基保護基的近來論述Theodoridis，G.Tetrahedron 2000，56，2339-2358。羥基保護基的實例包括，但不限于，乙?；?、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)、三苯甲基(Trt)、叔丁基和四氫吡喃基(THP)。羧基保護基的實例包括，但不限于，甲基酯、叔丁基酯、芐基酯、三甲基甲硅烷基乙基酯和2，2，2-三氯乙基酯。
術(shù)語“固相化學(xué)”是指進行這樣的化學(xué)反應(yīng)，其中將一個反應(yīng)組分與聚合材料(如下所定義的固體載體)共價鍵合。用于在固相上進行化學(xué)反應(yīng)的反應(yīng)方法已經(jīng)是眾所周知的，并且在肽和寡核苷酸化學(xué)的傳統(tǒng)領(lǐng)域之外建立。
術(shù)語“固體載體”、“固相”或“樹脂”是指用于進行固相化學(xué)的機械和化學(xué)穩(wěn)定的聚合基質(zhì)。這由“樹脂”、“P-”或下列符號表示
適宜的多聚材料的實例包括但不限于聚苯乙烯、聚乙烯、聚乙二醇、接枝到或共價鍵合到聚苯乙烯上的聚乙二醇(也稱作PEG-聚苯乙烯，TentaGelTM，Rapp，W.；Zhang，L.；Bayer，E.In Innovationsand Persepctives in Solid Phase Synthesis.Peptides，Polypeptides andOligonucleotides；Epton，R.，Ed.；SPCC Ltd.Birmingham，UK；p 205)、聚丙烯酸酯(CLEARTM)、聚丙烯酰胺、聚氨基甲酸酯、PEGA[聚乙二醇聚(N，N-二甲基丙烯酰胺)共聚物，Meldal，M.TetrahedronLett.1992，33，3077-3080]、纖維素等。這些材料可以任選含有形成交聯(lián)鍵以機械穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的另外的化學(xué)劑，例如與二乙烯基苯交聯(lián)的聚苯乙烯(DVB，通常0.1-5％，優(yōu)選0.5-2％)。這些固體載體可包括，作為非限制性實例，氨基甲基聚苯乙烯、羥基甲基聚苯乙烯、二苯甲基胺聚苯乙烯(BHA)、甲基二苯甲基胺(MBHA)聚苯乙烯和包含用于進一步衍生化或反應(yīng)的游離化學(xué)官能團(最典型地是-NH2或-OH)的其它聚合骨架。該術(shù)語還意指包括具有高比例(“載量”)這些官能團的“超樹脂”，例如由聚乙烯亞胺和交聯(lián)分子制得的那些(Barth，M.；Rademann，J.J.Comb.Chem.2004，6，340-349)。雖然例如在Frechet，J.M.J.；Haque，K.E.Tetrahedron Lett.1975，16，3055中已經(jīng)被證明能夠再生，但是合成結(jié)束，通常還是將樹脂丟棄。
通常，用作樹脂的材料是不能溶解的聚合物，但某些聚合物具有不同溶解性，視溶劑而定，并且也可以用于固相化學(xué)。例如，聚乙二醇可以被如此使用，因為聚乙二醇在很多能夠在其中進行化學(xué)反應(yīng)的有機溶劑中是可溶的，但是聚乙二醇在其它溶劑例如乙醚中是不能溶解的。因此，反應(yīng)可以在溶液中均勻地進行，然后通過加入乙醚來讓聚合物上的產(chǎn)物沉淀出來，并且作為固體加工。這被稱為“液相”化學(xué)。
當用于固相化學(xué)時，術(shù)語“連接基團”是指共價鍵合到固體載體上，并且連接在載體與反應(yīng)物之間，以通常容許反應(yīng)物從固體載體上釋放(裂解)下來的化學(xué)基團。然而，其還可用于給固體載體的鍵施加穩(wěn)定性或者僅作為間隔基團。很多已經(jīng)聯(lián)接了連接基團的固體載體是可以商購獲得的。
用于氨基酸和肽的定義的縮寫遵循IUPAC-IUB Commission ofBiochemical Nomenclature in J.Biol.Chem.1972，247，977-983的規(guī)則。該文獻已經(jīng)更新Biochem.J.，1984，219，345-373；Eur.J.Biochem.，1984，138，9-37；1985，152，1；Internat.J.Pept.Prot.Res.，1984，24，following p 84；J.Biol.Chem.，1985，260，14-42；Pure Appl.Chem.，1984，56，595-624；氨基酸和肽，1985，16，387-410；和在Biochemical Nomenclature and Related Documents，2nd edition，Portland Press，1992，pp 39-67。該規(guī)則的擴展發(fā)表于JCBN/NC-IUBNewsletter 1985，1986，1989；參見Biochemical Nomenclature andRelated Documents，2nd edition，Portland Press，1992，PP 68-69。
術(shù)語“有效量”或“有效的”意指，如通過臨床試驗和評價、患者觀察等所指出那樣引起疾病或病癥的減輕的劑量，和/或引起生物學(xué)或化學(xué)活性的可檢測的變化的劑量?？砂l(fā)現(xiàn)的變化是可以檢測的和/或可以由本領(lǐng)域的技術(shù)人員進一步量化相關(guān)機理或過程。如本領(lǐng)域所一般理解的那樣，劑量將根據(jù)給藥途徑、患者的癥狀和體重而變化，但是也取決于給藥的化合物。
“聯(lián)合”給藥兩種或多種化合物，是將兩種化合物在時間上足夠接近地給藥，以至一種化合物的存在會改變另外一種化合物的生物學(xué)作用。兩種化合物可以同時(并行)或相續(xù)給藥。同時給藥可以通過在給藥前將化合物混合在一起進行，或者通過在相同的時間點，但在不同的解剖學(xué)位置或用不同的給藥途徑來進行。如本文所用，短語“并行給藥”、“聯(lián)合給藥”、“同時給藥”或“同時給藥的”是指將化合物在相同的時間點或者彼此緊接跟隨地給藥。在后者的情況下，兩種化合物在時間上充分接近地給藥，以至觀察到的結(jié)果與在同一時間點給藥所觀察到的結(jié)果是不能辨別的。
術(shù)語“可藥用活性代謝物”意指規(guī)定的化合物通過體內(nèi)代謝產(chǎn)生的可藥用活性產(chǎn)物。
術(shù)語“溶劑化物”意指保持化合物的生理學(xué)效力的規(guī)定化合物的可藥用溶劑化物形式。溶劑化物的實例包括，但不限于，與水、異丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸或乙醇胺結(jié)合的本發(fā)明化合物。
1.化合物 本發(fā)明新的大環(huán)化合物包括含有構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)的大環(huán)化合物，所述構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)包括進行環(huán)合形成大環(huán)化合物的系鏈(tether)組元。該構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)包括氨基酸(標準的和不常見的)、羥基酸、肼基酸、氮雜氨基酸、像在肽替代物和同配體的引入中起作用的那樣的特定部分和本文所述的系鏈(tether)組元。系鏈(tether)組元選自以下


或
其中(Z2)是T與Z2共價結(jié)合位點，Z2如下面對式I所定義，并且其中(X)是T與X的共價結(jié)合位點，X如下面對式I所定義；L7是-CH2-或-O-；U1是-CR101R102-或-C(＝O)-；R100是低級烷基；R101和R102各自獨立地是氫、低級烷基或取代的低級烷基；xx是2或3；yy是1或2；zz是1或2；并且aaa是0或1。
本發(fā)明大環(huán)化合物還包括式I、式II和/或式III的大環(huán)化合物
或者其旋光異構(gòu)體、對映體、非對映體、外消旋體或立體化學(xué)混合物，其中 R1是氫或氨基酸的側(cè)鏈，或者R1和R2共同形成任選在環(huán)上包含O、S或N原子的4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代，或者R1和R9共同形成任選在環(huán)上包含O、S或另外的N原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代； R2是氫或氨基酸的側(cè)鏈，或者R1和R2共同形成任選在環(huán)上包含O、S或N原子的4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代，或者R2和R9共同形成任選在環(huán)上包含O、S或另外的N原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代； R3是氫或氨基酸側(cè)鏈，或者R3和R4共同形成任選在環(huán)上包含O或S原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代，或者R3和R7或R3和R11共同形成任選在環(huán)上包含O、S或另外的N原子的4、5、6、7或8元雜環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代； R4是氫或氨基酸側(cè)鏈，或者R4和R3共同形成任選在環(huán)上包含O或S原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代，或者R4和R7或R4和R11共同形成任選在環(huán)上包含O、S或另外的N原子的4、5、6、7或8元雜環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代； R5和R6各自獨立地是氫或氨基酸側(cè)鏈，或者R5和R6共同形成任選在環(huán)上包含O、S或N原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代； R7是氫、低級烷基、取代的低級烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基或取代的雜環(huán)基，或者R3和R7或R4和R7共同形成任選在環(huán)上包含O、S或另外的N原子的3、4、5、6、7或8元雜環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代； R8在3、4、5、6、7或8元環(huán)結(jié)構(gòu)上取代了一個或多個氫原子，并且獨立地選自烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氧代基、氨基、鹵素、甲酰基、酰基、羧基、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、氨基甲?；?、胍基、脲基、脒基、巰基、亞磺?；?、磺?；蛠喕酋０被?，或者，當在取代兩個相鄰原子上的氫原子時，R8是稠合環(huán)烷基、取代的稠合環(huán)烷基、稠合雜環(huán)、取代的稠合雜環(huán)、稠合芳基、取代的稠合芳基、稠合雜芳基或取代的稠合雜芳基環(huán)； X是O、NR9或N(R10)2+； 其中R9是氫、低級烷基、取代的低級烷基、磺酰基、亞磺酰氨基或脒基，并且R10是氫、低級烷基或取代的低級烷基，或者R9和R1共同形成任選在環(huán)上包含O、S或另外的N原子的3、4、5、6和7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被上面定義的R8取代； Z1是O或NR11， 其中R11是氫、低級烷基或取代的低級烷基，或者R3和R11共同或者R4和R11共同形成在環(huán)上包含O、S或另外的N原子的4、5、6、7或8元雜環(huán)，其中所述環(huán)任選被上面定義的R8取代； Z2是O或NR12，其中R12是氫、低級烷基或取代的低級烷基； M、n和p各自獨立地是0、1或2； T是式IV的二價基團 -U-(CH2)d-W-Y-Z-(CH2)e-(IV) 其中d和e各自獨立地是0、1、2、3、4或5；Y和Z是各自獨立地任選存在的；U是-CR21R22-或-C(＝O)-并且是鍵合到式I的X上的；W、Y和Z各自獨立地選自-O-、-NR23-、-S-、-SO-、-SO2-、-C(＝O)-O-、-O-C(＝O)-、-C(＝O)-NH-、-NH-C(＝O)-、-SO2-NH-、-NH-SO2-、-CR24R25-、具有Z或E構(gòu)型的-CH＝CH-、-C≡C-和下面所示的環(huán)結(jié)構(gòu)


或
其中G1和G2各自獨立地是共價鍵或者選自下列的二價基團-O-，-NR39-、-S-、-SO-、-SO2-、-C(＝O)-、-C(＝O)-O-、-O-C(＝O)-、-C(＝O)NH-、-NH-C(＝O)-、-SO2-NH-、-NH-SO2-、-CR40R41-、具有Z或E構(gòu)型的-CH＝CH-和-C≡C-；其中G1與基團U最接近地鍵合，其中除非另有說明，否則環(huán)中的任何碳原子可以被N替換，條件是所述環(huán)不能含有多于4個的N原子；K1、K2、K3、K4和K5各自獨立地是O、NR42或S，其中R42如下面所定義； R21和R22各自獨立地是氫、低級烷基或取代的低級烷基，或者R21和R22共同形成任選包含一個或多個選自O(shè)、S和N的雜原子的3-12元環(huán)，其中所述環(huán)任選被上面定義的R8取代； R23、R39和R42獨立地是氫、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、甲?；Ⅴ；?、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、脒基、磺?；蛠喕酋０被?； R24和R25獨立地是氫、低級烷基、取代的低級烷基、RAA，其中RAA是氨基酸例如標準或不常見氨基酸的側(cè)鏈，或者R24和R25共同形成任選包含一個或多個選自O(shè)、S和N的雜原子的3-12元環(huán)；或者R24或R25中的一個是羥基、烷氧基、芳氧基、氨基、巰基、氨基甲?；?、脒基、脲基或胍基，而另外一個是是氫、低級烷基或取代的低級烷基，除了當與R24和R25鍵合的碳原子也鍵合到另外的雜原子上時； R26、R31、R35和R38是各自任選存在的，而在存在時，在指定的環(huán)上取代一個或多個氫原子，并且各自獨立地選自鹵素、三氟甲基、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氨基、甲?；Ⅴ；?、羧基、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、氨基甲?；㈦一?、脲基、脒基、氰基、硝基、巰基、亞磺?；⒒酋；蛠喕酋０被? R27是任選存在的，并且在指定的環(huán)上取代一個或多個氫原子，并且各自獨立地選自烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氧代基、氨基、甲酰基、酰基、羧基、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、氨基甲?；?、胍基、脲基、脒基、巰基、亞磺?；⒒酋；蛠喕酋０被?； R28、R29、R30、R32、R33、R34、R36和R37是各自任選存在的，并且，當在環(huán)中其所鍵合的碳原子上不存在雙鍵時，任選存在兩個基團，而在存在時，環(huán)上的一個氫原子被其取代，或者當在環(huán)中其所鍵合的碳原子上不存在雙鍵時，環(huán)上的一個或兩個氫原子被其取代，并且取代基各自獨立地選自烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氧代基、氨基、甲酰基、酰基、羧基、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、氨基甲酰基、胍基、脲基、脒基、巰基、亞磺?；?、磺?；喕酋０被?，以及(只有當其連接的碳原子存在雙鍵時)鹵素；并且 R40和R41各自獨立地是氫、低級烷基、取代的低級烷基，如上面所定義的RAA，或者R40和R41共同形成任選包含一個或多個選自O(shè)、S和N的雜原子的3-12元環(huán)，其中所述環(huán)任選被上面定義的R8取代，或者R40和R41中的一個是羥基、烷氧基、芳氧基、氨基、巰基、氨基甲?；?、脒基、脲基或胍基，而另外一個是氫、低級烷基或取代的低級烷基，除了當與R40和R41鍵合的碳原子也鍵合到另外的雜原子上的時候； 條件是T不是包括標準氨基酸在內(nèi)的氨基酸殘基、二肽片段、三肽片段或高級肽片段；
或者其旋光異構(gòu)體、對映體、非對映體、外消旋體或立體化學(xué)混合物，其中 R50是-(CH2)ssCH3、-CH(CH3)(CH2)ttCH3、-(CH2)uuCH(CH3)2、-C(CH3)3、-(CHR55)vv-R56或-CH(OR57)CH3，其中ss是1、2或3；tt是1或2；uu是0、1或2；并且vv是0、1、2、3或4；R55是氫或C1-C4烷基；R56是氨基、羥基、烷氧基、環(huán)烷基或取代的環(huán)烷基；并且R57是氫、烷基、?；?、氨基酰基、磺酰基、羧基烷基或羧基芳基； R51是氫、C1-C4烷基或者被羥基或烷氧基取代的C1-C4烷基； R52是-(CHR58)wwR59，其中ww是0、1、2或3；R58是氫、C1-C4烷基、氨基、羥基或烷氧基；R59是芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、環(huán)烷基或取代的環(huán)烷基； R53是氫或C1-C4烷基； X2是O、NR9或N(R10)2+； 其中R9是氫、低級烷基、取代的低級烷基、磺酰基、亞磺酰氨基或脒基，并且R10是氫、低級烷基或取代的低級烷基；Z5是O或NR12，其中R12是氫、低級烷基或取代的低級烷基；并且 T2是式V的二價基團 -Ua-(CH2)d-Wa-Ya-Za-(CH2)e-(V) 其中d和e獨立地是0、1、2、3、4或5；Ya和Za是各自任選地存在的；Ua是-CR60R61-或-C(＝O)-并且是鍵合到式II的X2上的，其中R60和R61獨立地是氫、低級烷基或取代的低級烷基，或者R21和R22共同形成任選包含一個或多個選自O(shè)、S和N的雜原子的3-12元環(huán)，其中所述環(huán)任選被上面所定義的R8取代；Wa、Ya和Za各自獨立地選自-O-、-NR62-、-S-、-SO-、-SO2-、-C(＝O)-O-、-O-C(＝O)-、-C(＝O)-NH-、-NH-C(＝O)-、-SO2-NH-、-NH-SO2-、-CR63R64-、具有Z或E構(gòu)型的-CH＝CH-、-C≡C-以及如下所示的環(huán)結(jié)構(gòu)
其中G1和G2如上面所定義，并且其中環(huán)上的任何碳原子任選被N替代，條件是該芳環(huán)不能含有多于4個的N原子，并且環(huán)烷基環(huán)不能含有多于2個的N原子； R62是氫、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、甲?；Ⅴ；Ⅳ然榛?、羧基芳基、酰胺基、脒基、磺?；騺喕酋０被?； R63和R64各自獨立地是氫、低級烷基、取代的低級烷基或RAA；或者R63和R64共同形成任選包含一個或多個選自O(shè)、S和N的雜原子的3-12元環(huán)；或者R63和R64中的一個是羥基、烷氧基、芳氧基、氨基、巰基、氨基甲酰基、脒基、脲基或胍基，而另外一個是氫、低級烷基或取代的低級烷基，除了當與R63和R64鍵合的碳原子也鍵合到另外的雜原子時；并且RAA表示標準或不常見氨基酸的側(cè)鏈； R65和R68是各自任選存在的，并且，當存在時，取代環(huán)上的一個或多個氫原子，并且各自獨立地是鹵素、三氟甲基、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氨基、甲?；?、酰基、羧基、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、氨基甲酰基、胍基、脲基、脒基、氰基、硝基、巰基、亞磺?；⒒酋；騺喕酋０被?； R66和R67是各自任選存在的，并且當在環(huán)中其所鍵合的碳原子上不存在雙鍵時，任選存在兩個基團，并且，在存在的時候，每個基團取代環(huán)上的一個氫原子，或者當在環(huán)中其所鍵合的碳原子上不存在雙鍵時，取代環(huán)上的一個或所有兩個氫原子，并且每個基團獨立地是烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氧代基、氨基、甲?；?、?；Ⅳ然Ⅳ然榛?、羧基芳基、酰胺基、氨基甲?；?、胍基、脲基、脒基、巰基、亞磺?；?、磺?；⒒酋０?，以及(只有當其所鍵合的碳原子上存在雙鍵時)鹵素； R69是任選存在的，并且在存在的時候，取代環(huán)上的一個或多個氫原子，并且每個基團各自獨立地是烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氧代基、氨基、甲?；?、?；?、羧基、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、氨基甲?；?、胍基、脲基、脒基、巰基、亞磺?；⒒酋；騺喕酋０被?； K6是O或S；并且 ff是1、2、3、4或5； 條件是T2不是包括標準氨基酸在內(nèi)的氨基酸殘基、二肽片段、三肽片段或更高級肽片段；或者
或者其旋光異構(gòu)體、對映體、非對映體、外消旋體或立體化學(xué)混合物，其中 R70是氫、C1-C4烷基，或者R70和R71共同形成任選在環(huán)上包含O、N或S原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面所定義的R8a取代； R71是氫、-(CH2)aaCH3、-CH(CH3)(CH2)bbCH3、-(CH2)ccCH(CH3)2、-(CH2)dd-R76或-CH(OR77)CH3，或者，R71和R70共同形成任選在環(huán)上包含O、S或N原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面所定義的R8a取代；其中aa是0、1、2、3、4或5；bb是1、2或3；cc是0、1、2或3；并且dd是0、1、2、3或4；R76是芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、環(huán)烷基或取代的環(huán)烷基；R77是氫、烷基、?；?、氨基?；?、磺?；?、羧基烷基或羧基芳基； R72是C1-C4烷基；或者R72和R73共同形成任選在環(huán)上包含O或S原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面所定義的R8b取代； R73是氫，或者R73和R72共同形成任選在環(huán)上包含O、S或N原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面所定義的R8b取代； R74是氫或C1-C4烷基，或者R74和R75共同形成任選在環(huán)上包含O、S或N原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面所定義的R8c取代； R75是-(CHR78)R79，或者R75和R74共同形成任選在環(huán)上包含O、S或N原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面所定義的R8c取代；其中R78是氫、C1-C4烷基、氨基、羥基或烷氧基，并且R79選自下面結(jié)構(gòu)的基團


和
其中E1、E2、E3、E4和E5是各自任選存在的，并且當存在時各自獨立地選自鹵素、三氟甲基、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氰基、亞磺酰基、磺?；蛠喕酋０被?，并且代表單環(huán)或二環(huán)芳環(huán)上一個或多個可被取代的位置上的取代，其中所述取代是被相同或不同的所選擇的基團取代，并且J1和J2各自獨立地是O或S； R8a、R8b和R8c各自獨立地取代3、4、5、6或7元環(huán)結(jié)構(gòu)上的一個或多個氫原子，并且獨立地選自烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氧代基、氨基、鹵素、甲?；Ⅴ；?、羧基、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、氨基甲?；?、胍基、脲基、脒基、巰基、亞磺?；?、磺?；蛠喕酋０被?，或者，當取代兩個相鄰原子上的氫原子時，R8a、R8b和R8c各自獨立地是稠合環(huán)烷基、取代的稠合環(huán)烷基、稠合雜環(huán)、取代的稠合雜環(huán)、稠合芳基、取代的稠合芳基、稠合雜芳基或取代的稠合雜芳基環(huán)； X3是O、NR9或N(R10)2+； 其中R9是氫、低級烷基、取代的低級烷基、磺?；?、亞磺酰氨基或脒基，并且R10是氫、低級烷基或取代的低級烷基； Z10是O或NR12，其中R12是氫、低級烷基或取代的低級烷基；并且 T3與T2的定義相同，只是Ua鍵合到式III的X3上。
在本發(fā)明的某些實施方案中，化合物可以具有下列結(jié)構(gòu)




或
或其旋光異構(gòu)體、對映體、非對映體、外消旋體或立體化學(xué)混合物。
本發(fā)明化合物包括分離的化合物。分離的化合物是指，在某些實施方案中，化合物占混合物的至少10％、至少25％、至少50％或至少70％。在某些實施方案中，當在人生長素釋放肽受體上進行生物學(xué)分析試驗時，該化合物、其可藥用鹽或含有該化合物的藥物組合物表現(xiàn)出統(tǒng)計學(xué)有意義的結(jié)合和/或拮抗活性。
在化合物、鹽或溶劑化物是固體的的情況下，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，本發(fā)明化合物、鹽和溶劑化物可以不同的晶體和多晶型形式存在，所有這些形式都在本發(fā)明和所規(guī)定的式的范圍之內(nèi)。
本文公開的式I、II和/或III化合物具有不對稱中心。本發(fā)明化合物可以作為單一立體異構(gòu)體、外消旋體、和/或?qū)τ丑w和/或非對映體的混合物存在。所有這樣的單一立體異構(gòu)體、外消旋體及其混合物意指屬于本發(fā)明的范圍之內(nèi)。然而，在特定的實施方案中，本發(fā)明化合物是以光學(xué)純的形式使用的。本文所用的術(shù)語“S”和“R”構(gòu)型是由IUPAC 1974 Recommendations for Section E，F(xiàn)undamentals ofStereochemistry(Pure Appl.Chem.1976，45，13-30.)定義的。
除非描繪成特定方向，本發(fā)明包括所有立體異構(gòu)形式。可以將化合物制備為單一的立體異構(gòu)體或立體異構(gòu)體的混合物。通過合成或拆分可以獲得非外消旋形式?？梢?，例如，通過標準技術(shù)可把化合物拆分成組分對映體，例如通過成鹽來形成非對映體對。也可以通過共價鍵合到手性部分上來拆分化合物。然后通過色譜法分離和/或結(jié)晶分離將非對映體拆分。對于采用手性輔助部分的情況，之后可將其除去?；蛘撸梢酝ㄟ^使用手性色譜法將化合物拆分。在某些情況下也可以使用酶拆分方法。
如本領(lǐng)域的技術(shù)人員所一般理解的那樣，“光學(xué)純”化合物是只含有單一對映體的化合物。如本文所用，術(shù)語“旋光性的”意指，相對于另一種對映體，包含至少足夠過量的一種對映體，致使該混合物使得平面偏振光旋轉(zhuǎn)。旋光性化合物具有旋轉(zhuǎn)平面偏振光的能力。一種對映體對另外一種對映體的過量通常表示為對映體過量(e.e.)。在描述旋光性化合物時，前綴D和L或R和S用來表示分子關(guān)于其手性中心的絕對構(gòu)型。前綴“d”和“l(fā)”或(+)和(-)用來表示化合物的旋光性(即，其中平面偏振光被旋光性化合物旋轉(zhuǎn)的方向)?！發(fā)”或(-)前綴表示化合物是左旋的(即，使平面偏振光向左或逆時針方向旋轉(zhuǎn))，而“d”或(+)前綴意指化合物是右旋的(即，使平面偏振光向右或順時針方向旋轉(zhuǎn))。旋光性的符號，(-)和(+)與分子的絕對構(gòu)型R和S無關(guān)。
具有所需藥理學(xué)特性的本發(fā)明化合物將是旋光性的，并且可以包含至少90％(80％e.e.)、至少95％(90％e.e.)、至少97.5％(95％e.e.)或至少99％(98％e.e.)的單一異構(gòu)體。
同樣，很多雙鍵的幾何異構(gòu)體等也可以存在于本文描述的化合物中，并且除非另外規(guī)定，所有這樣穩(wěn)定的異構(gòu)體包括在本發(fā)明之內(nèi)。式I、II和/或III的互變異構(gòu)體和旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體也包括在本發(fā)明之內(nèi)。
在右邊使用下列符號是表示所示環(huán)上的一個或多個氫原子被定義的取代基R取代。

下面符號的使用表示單鍵或任選雙鍵
本發(fā)明實施方案還提供通過本文所述合成方法形成的、用來形成式I、II和/或III化合物的中間體化合物。中間體化合物可用作本文所述適應(yīng)癥的治療劑和/或作為試劑用于進一步合成方法和反應(yīng)。
2.合成方法 可以用常規(guī)溶液合成技術(shù)或固相化學(xué)方法來合成式I、II和/或III化合物。在所述兩種方法中，構(gòu)建包括四個階段首先，合成包含生物靶向受體的識別元素的構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)，加上一個系鏈(tether)部分，主要用于控制和限度構(gòu)象。在第二階段中，使用標準化學(xué)轉(zhuǎn)化，通常以依次的方式，將這些構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)裝配在一起。然后在第三階段中，將由裝配獲得的前體進行環(huán)合，形成大環(huán)結(jié)構(gòu)。最后，包括除去保護基和任選純化的環(huán)合后處理的第四階段，獲得所需的最終化合物。這種一般類型的大環(huán)結(jié)構(gòu)的合成方法描述于國際專利申請WO01/25257，WO 2004/111077，WO 2005/012331和WO 2005/012332，包括WO 2004/111077和WO 2005/012331中描述的純化方法。
在本發(fā)明的某些實施方案中，可以用先前定義的在可溶和不可溶的聚合物基體上的固相化學(xué)，來合成式I、II和/或III大環(huán)化合物。對于固體化學(xué)來說，包括第一構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)與樹脂的連接，也稱作“負載”的預(yù)備階段是必須進行的。本發(fā)明使用的樹脂優(yōu)選已經(jīng)連接上了連接基團部分L。通過本領(lǐng)域已知的標準反應(yīng)方法，例如用于形成酯或酰胺鍵而開發(fā)的多種反應(yīng)條件，將這些連接基團連接到基本樹脂上的合適的游離化學(xué)官能團，通常是醇或胺上，雖然其它官能團也是可能的。對于本發(fā)明，設(shè)計某些連接基團部分，以在一般稱為“環(huán)合-釋放”的過程中，在形成大環(huán)的同時從樹脂上裂解下來(vanMaarseveen，J.H.Solid phase synthesis of heterocycles bycyclization/cleavage methodologies.Comb.Chem.High ThroughputScreen.1998，1，185-214；Ian W.James，linkers for solid phase organicsynthesis.Tetrahedron 1999，55，4855-4946；Eggenweiler，H.-M.linkersfor solid-phase synthesis of small moleculescoupling and cleavagetechniques.Drug Discovery Today 1998，3，552-560；Backes，B.J.；Ellman，J.A.Solid support linker strategies.Curr.Opin.Chem.Biol.1997，1，86-93)。對于本發(fā)明化合物，特別有用的是3-硫代丙酸連接基團(Hojo，H.；Aimoto，S.Bull.Chem.Soc.Jpn.1991，64，111-117；Zhang，L.；Tam，J.J.Am.Chem.Soc.1999，121，3311-3320.)。
這樣的方法提供了高純度產(chǎn)物，因為只有環(huán)狀產(chǎn)物從固體載體上釋放下來，并且沒有摻雜直鏈前體，而在液相中則會發(fā)生這樣的直鏈前體摻雜。在使用已知或標準反應(yīng)化學(xué)將所有構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)和系鏈(tether)裝配成直鏈前體之后，通過是系鏈(tether)構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)一部分的適當親核性官能團對連接到該連接基團上的羰基發(fā)生堿介導(dǎo)的分子內(nèi)攻擊，形成酰胺或酯鍵，完成所示的環(huán)狀結(jié)構(gòu)(反應(yīng)方案1)。也可以采用適于溶液相的類似方法，對于較大規(guī)模應(yīng)用，這可能是優(yōu)選的。
反應(yīng)方案1.環(huán)合-釋放策略
雖然該描述精確地代表一種本發(fā)明方法的途徑，即硫代酯策略，但是閉環(huán)復(fù)分解(RCM)的本發(fā)明另一種方法是通過修飾的方法進行，其中系鏈(tether)組分實際上是在環(huán)合步驟期間裝配的。然而，在RCM方法中，構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)的裝配是依次進行的，之后進行環(huán)合(如果是固相的話，從樹脂上釋放下來)。需要另一環(huán)合后加工步驟來除去RCM反應(yīng)的特定副產(chǎn)物，但是以與硫代酯相同的方式或者按照類似于堿介導(dǎo)的環(huán)合策略的方式來進行隨后的加工。
此外，應(yīng)當理解，包括本文提供的方法的步驟可以獨立地進行，或者可以將至少兩個步驟聯(lián)合進行。另外，當獨立地或聯(lián)合進行時，包括本文提供的方法的步驟可以在相同溫度或不同溫度下進行，而不背離本發(fā)明的教導(dǎo)。
本發(fā)明新的大環(huán)化合物包括通過新方法形成的那些，所述新方法包括將構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)環(huán)合，以形成包含本文所述系鏈(tether)組分的大環(huán)化合物。因此，本發(fā)明提供了制備本發(fā)明化合物的方法，所述方法包括(a)裝配構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)，(b)化學(xué)轉(zhuǎn)化構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)，(c)環(huán)合包括系鏈(tether)組分的構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)，(d)從構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)中除去保護基，和(e)任選純化由步驟(d)獲得的產(chǎn)物。在某些實施方案中，構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)的裝配可以是依次進行的。在另外的實施方案中，合成方法是用傳統(tǒng)溶液合成技術(shù)或固相化學(xué)技術(shù)進行的。
A.氨基酸 氨基酸，Boc-和Fmoc-保護的氨基酸和側(cè)鏈保護的衍生物，包括N-甲基和非天然氨基酸是得自商業(yè)供應(yīng)商[例如Advanced ChemTech(Louisville，KY，USA)，Bachem(Bubendorf，Switzerland)，ChemImpex(Wood Dale，IL，USA)，Novabiochem(subsidiary ofMerck KGaA，Darmstadt，Germany)，PepTech(Burlington，MA，USA)，Synthetech(Albany，OR，USA)]，或者是通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標準方法合成的。Ddz-氨基酸是從Orpegen(Heidelberg，Germany)或Advanced ChemTech(Louisville，KY，USA)商購獲得的，或者是用標準方法，使用Ddz-Oph或Ddz-N3制得的(Birr，C.；Lochinger，W.；Stahnke，G.；Lang，P.Theα，α-dimethyl-3，5-dimethoxybenzyloxycarbonyl(Ddz)residue，an N-protecting grouplabile toward weak acids and irradiation.Justus Liebigs Ann.Chem.1972，763，162-172.)。Bts-氨基酸是通過已知方法合成的(Vedejs，E.；Lin，S.；Klapara，A.；Wang，J.“Heteroarene-2-sulfonyl Chlorides(BtsCl，ThsCl)Reagents for Nitrogen Protection and＞99％Racemization-Free Phenylglycine Activation with SOCl2.”J.Am.Chem.Soc.1996，118，9796-9797.還有WO 01/25257，WO2004/111077)。N-烷基氨基酸，特別是N-甲基氨基酸，是從多個供應(yīng)商商購獲得的(Bachem，Novabiochem，Advanced ChemTech，ChemImpex)。此外，N-烷基氨基酸衍生物是通過文獻方法制得的(Hansen，D.W.，Jr.；Pilipauskas，D.J.Org.Chem.1985，50，945-950.)。
B.系鏈(tether) 系鏈(tether)是由國際專利申請WO 01/25257、WO 2004/111077、WO 2005/012331和U.S.臨時專利申請60/622,055中描述的方法獲得的。用于合成本文描述的系鏈(tether)的方法在下列實施例中呈現(xiàn)。示例性系鏈(tether) (T)包括但不限于下列


或
及其在制備中的中間體，其中(Z)是T與Z2、Z5或Z10與Z2的共價鍵位點，Z5和Z10分別如上述式I、II和III中所定義，并且其中(X)是T與X、X2或X3與X的共價鍵位點，X2和X3分別如上述式I、II和III中所定義，L7是-CH2-或-O-；U1是-CR101R102-或-C(＝O)-；R100是低級烷基；R101和R102分別獨立地為氫、低級烷基或取代的低級烷基；xx是2或3；yy是1或2；zz是1或2；且aaa是0或1。
C.固相技術(shù) 用于本發(fā)明大環(huán)化合物合成的具體固相技術(shù)已經(jīng)描述在WO01/25257、WO 2004/111077、WO 2005/012331和WO 2005/012332中。固相合成途徑，包括適于大規(guī)模制備的方法描述在U.S.臨時專利申請60/622,055和60/642,271中。
然而，在一些情況下，保護基的不穩(wěn)定性使得在上述硫代酯策略中不能使用標準堿性介質(zhì)進行環(huán)化。在這些情況下，采用兩種酸性方法中的一種來提供在酸性條件下的大環(huán)合。一種方法使用HOAc，而另一種方法使用HOAt(反應(yīng)方案2)。例如，對于化合物219，使用乙酸環(huán)合。
在系鏈(tether)上將Ddz或Boc基團脫保護后，將樹脂依次用DCM(2×)、DCM-MeOH(1∶1，2×)、DCM(2×)和DIPEA-DCM(3∶7，1×)洗滌。將樹脂真空干燥10分鐘，然后立即加到HOAc在脫氣DMF(5％v/v)內(nèi)的溶液中。將該反應(yīng)混合物在50-70℃ 過夜攪拌。將樹脂過濾，用THF洗滌，將合并的濾液和洗滌液減壓蒸發(fā)(水泵，然后是油泵)，以獲得大環(huán)化合物。
反應(yīng)方案2另一種環(huán)合方法
對于具有系鏈(tether)T1，AA3＝Leu，AA2＝Leu，AA1＝Phe的代表性大環(huán)化合物，應(yīng)用如反應(yīng)方案2所示的HOAt方法，以10％的產(chǎn)率提供了環(huán)合肽模擬物，而乙酸方法是更有效的，并且以24％的總產(chǎn)率獲得相同大環(huán)化合物。對于含有His(Mts)殘基的化合物，后一方法是特別有效。例如，以20％總產(chǎn)率獲得了具有系鏈(tether)T8，AA3＝Phe，AA2＝Acp，AA1＝His(Mts)的大環(huán)化合物，但是大部分產(chǎn)物在組氨酸中不再具有Mts基團(15∶1對仍然保護的)。
下面實施例中顯示了本發(fā)明代表性大環(huán)化合物的合成。下表1A呈現(xiàn)了228種本發(fā)明代表性化合物的合成總結(jié)。用于構(gòu)建大環(huán)分子的反應(yīng)方法列在欄2中，并且涉及合成方案的具體方案，例如使用如圖2所示的硫代酯策略或如圖3所示的RCM方法。欄3顯示了NBB1上是否存在任何取代基。欄4-6和8顯示了用于每一化合物的各個構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)、氨基酸。羥基酸或系鏈(tether)，他們使用標準命名法或采用本申請別處所給出的構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)命名。欄7顯示了用于連接系鏈(tether)的方法，Mitsunobu反應(yīng)(之前描述在WO 01/25257中)或還原胺化(之前描述在WO 2004/111077中)。適于構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)的性質(zhì)的相關(guān)保護和偶聯(lián)方案采用標準方法以及在WO 2004/111077中描述的用于裝配環(huán)合前體的方法。以相反順序列出構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)，以這種順序加入構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)以使得構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)編號與標準肽命名法關(guān)聯(lián)。因此，首先加入BB3，然后加入BB2，之后加入BB1，最后加入系鏈(tether)(T)。對于RCM的情況，系鏈(tether)沒有完全形成直至環(huán)合步驟，但是在此方法的該步驟仍然加入與BB1連接的系鏈(tether)部分。施用合適的脫保護方法后，獲得了最后的大環(huán)化合物。如果環(huán)合后需要進行任何反應(yīng)，則其列在欄9中。表1A中所示的所有大環(huán)化合物都是純化的，并且滿足內(nèi)部接受標準。產(chǎn)率(欄10)是分離的或者基于CLND分析而計算的。應(yīng)當注意，化合物58和99沒有環(huán)合，以分別提供化合物10和133的直鏈類似物。用這些直鏈類似物觀察到缺乏結(jié)合效力，這表明大環(huán)結(jié)構(gòu)特征對于所需活性是很重要的。
表1A本發(fā)明代表性化合物的合成 表1A本發(fā)明代表性化合物的合成 表1A本發(fā)明代表性化合物的合成 表1A本發(fā)明代表性化合物的合成 表1A本發(fā)明代表性化合物的合成 表1A本發(fā)明代表性化合物的合成 下表1B呈現(xiàn)了122種本發(fā)明代表性化合物的合成概述，表1C呈現(xiàn)了另外15種代表性化合物的合成。對于表1B，采用的構(gòu)建大環(huán)分子的反應(yīng)方法顯示在欄2中，并且涉及合成策略的具體方案。欄3-6顯示了用于每一化合物的各個構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)、氨基酸或系鏈(tether)，他們使用標準命名法或者采用在本申請別處給出的構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)命名。欄7表明了用于連接系鏈(tether)的方法。以相反順序列出構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)，以這種順序加入構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)以使得構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)編號與標準肽命名法關(guān)聯(lián)。欄8顯示，如果施加任何另外的反應(yīng)化學(xué)，例如以除去輔助保護或把雙鍵還原(如用很多RCM中間產(chǎn)物來進行)。表1B和1C中的所有大環(huán)化合物是純化的，并且滿足接受標準。產(chǎn)率(欄9-10)是分離的或者基于CLND分析而計算的。
表1B本發(fā)明代表性化合物的合成 表1B本發(fā)明代表性化合物的合成 表1B本發(fā)明代表性化合物的合成 表1C本發(fā)明代表性化合物的合成 下表呈現(xiàn)了獲得的化合物1-197、199-216、218-230(表2A)、化合物298、299、301、303、304-403、405-410、415、417和430-432(表2B)以及化合物435-449(表2C)的，通過純化產(chǎn)物的LC-MS分析所確定的分析數(shù)據(jù)。使用下面描述的生物測定方法，進一步測定這些化合物在人生長素釋放肽受體上相互作用的能力。
表2A本發(fā)明代表性化合物的分析特征 表2A本發(fā)明代表性化合物的分析特征 表2A本發(fā)明代表性化合物的分析特征 表2A本發(fā)明代表性化合物的分析特征 表2A本發(fā)明代表性化合物的分析特征 表2A本發(fā)明代表性化合物的分析特征 表2A本發(fā)明代表性化合物的分析特征 表2A本發(fā)明代表性化合物的分析特征 表2B本發(fā)明代表性化合物的分析特征 表2B本發(fā)明代表性化合物的分析特征 表2B本發(fā)明代表性化合物的分析特征 表2B本發(fā)明代表性化合物的分析特征 表2C本發(fā)明代表性化合物的分析特征 D.手性純度測定 用于通過HPLC測定立體異構(gòu)體純度的一般方法是根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)進行的，并且對于本發(fā)明化合物進行優(yōu)化。
手性方法AGrad35A-05(柱Chiralcel AS-RH，0.46cm×15cm) 1.40分鐘的等度平臺，在35％ACN，65％50mM CH3COONH4在H2O水的溶液。
2.5分鐘梯度至70％ACN，30％50mM CH3COONH4在H2O中的溶液。
3.10分鐘的等度平臺，在70％ACN，30％50mM CH3COONH4在H2O中的溶液。
4.5分鐘梯度至35％ACN，65％50mM CH3COONH4在H2O中的溶液. 5.10分鐘的等度平臺，在35％ACN，65％50mM CH3COONH4在H2O中的溶液。
6.流速0.5mL/min 7.柱溫室溫 8.樣本溫度室溫 手性方法BGrad40A-05(柱Chiralcel OD-RH，0.46cm×15cm) 1.40分鐘的等度平臺，在40％ACN，60％50mM CH3COONH4在H2O中的溶液 2.5分鐘梯度至70％ACN，30％50mM CH3COONH4在H2O中的溶液 3.10分鐘的等度平臺，在70％ACN，30％50mM CH3COONH4在H2O中的溶液 4.5分鐘梯度至40％ACN，60％50mM CH3COONH4在H2O中的溶液 5.10分鐘的等度平臺，在40％ACN，60％50mM CH3COONH4在H2O中的溶液 6.流速0.5mL/min 7.柱溫室溫 8.樣本溫度室溫 手性方法CGrad 55A-05(柱Chiralcel OD-RH，0.46cm×15cm) 1.40分鐘等度55％/45％ACN/50mM CH3COONH4在H2O中的溶液 2.5分鐘梯度至70％/30％ACN/50mM CH3COONH4在H2O中的溶液 3.10分鐘等度70％/30％ACN/50mM CH3COONH4在H2O中的溶液 4.5分鐘梯度至55％/44％ACN/50mM CH3COONH4在H2O中的溶液 5.10分鐘等度55％/45％ACN/50mM CH3COONH4在H2O中的溶液 6.流速0.5mL/min 7.柱溫室溫 8.樣本溫度室溫 手性方法DGrad Iso100B 05(柱Chiralcel OD-RH，0.46cm×15cm) 1.40分鐘等度27％/73％ACN/50mM CH3COONH4在H2O中的溶液 2.5分鐘梯度至70％/30％ACN/50mM CH3COONH4在H2O中的溶液 3.10分鐘等度70％/30％ACN/50mM CH3COONH4在H2O中的溶液 4.5分鐘梯度至27％/73％ACN/50mM CH3COONH4在H2O中的溶液 5.10分鐘等度27％/73％ACN/50mM CH3COONH4在H2O中的溶液 6.流速0.5mL/min 7.柱溫室溫 8.樣本溫度室溫 3.生物方法 使用如下所述的競爭性放射性配體結(jié)合試驗，熒光試驗或水母蛋白功能試驗評估本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上相互作用的能力。這些方法可以以高通量方式進行以允許同時評估多種化合物。
關(guān)于人(GHS-R1a)、豬和大鼠GHS-受體(U.S.專利6,242,199，國際專利申請WO 97/21730和97/22004)以及犬GHS-受體(U.S.專利6,645,726)的特定測定方法及其通常在鑒定激動劑和拮抗劑中的應(yīng)用是已知的。
下面還描述了測定在人生長素釋放肽受體上相互作用的本發(fā)明化合物的功能活性的適當方法。
A.競爭性放射性配體結(jié)合測定(生長素釋放肽受體) 在人生長激素促分泌劑受體(hGHS-R1a)上的競爭性結(jié)合測定是按照類似于文獻中描述的測定而進行的(Bednarek MA等人.Structure-function studies on the new growth hormone-releasingpeptide ghrelinminimai sequence of ghrelin necessary for activationof growth hormone secretagogue receptor 1a；J.Med.Chem.2000，43，4370-4376；Palucki，B.L.等人.Spiro(indoline-3，4’-piperidine)growthhormone secretagogues as ghrelin mimetics；Bioorg.Med.Chem.Lett.2002，11，1955-1957.)。
材料 膜(GHS-R/HEK 293)是由用人生長素釋放肽受體(hGHS-R1a)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的HEK-293細胞制備的。這些膜是由PerkinElmer BioSignal(#RBHGHSM，lot#1887)提供的，并且以0.71μg/測定點的量使用。1.[125I]-生長素釋放肽(PerkinElmer，#NEX-388)；終濃度0.0070-0.0085nM 2.生長素釋放肽(Bachem，#H-4864)；終濃度1μM 3.Multiscreen Harvest板-GF/C(Millipore，#MAHFC1H60) 4.深孔聚丙烯滴定板(Beckman Coulter，#267006) 5.TopSeal-A(PerkinElmer，#6005185) 6.底部封條(Millipore，#MATAH0P00) 7.MicroScint-0(PerkinElmer，#6013611) 8.結(jié)合緩沖液25mM Hepes(pH 7.4)，1mM CaCl2，5mM MgCl2，2.5mM EDTA，0.4％BSA 測定體積 競爭性試驗是在300μl過濾測定格式板中進行的。
1.220μL在結(jié)合緩沖液中稀釋的膜 2.40μL在結(jié)合緩沖液中稀釋的化合物 3.40μL在結(jié)合緩沖液中稀釋的放射性配體([125I]-生長素釋放肽) 本發(fā)明化合物的最終測定濃度(N＝1) 10、1、0.5、0.2、0.1、0.05、0.02、0.01、0.005、0.002、0.001μM. 化合物處理 將化合物以在100％DMSO中稀釋的10mM貯備液濃度在干冰上冷凍，在-80℃貯存直至測定當天。在測定當天，讓化合物在室溫過夜融化，然后根據(jù)所需測定濃度在測定緩沖液中稀釋。在這些條件下，在測定中的最大最終DMSO濃度是0.1％。
測定方案 在深孔平板中，將220μL稀釋的細胞膜(終濃度0.71μg/孔)與40μL結(jié)合緩沖液(總結(jié)合，N＝5)、1μM生長素釋放肽(非特異性結(jié)合，N＝3)或適當濃度的測定化合物(對于每一測定濃度N＝2)合并。通過向每個孔中加入40μL[125I]-生長素釋放肽(終濃度0.0070-0.0085nM)來開始反應(yīng)。將平板用TopSeal-A密封，輕微渦旋，并且在室溫培養(yǎng)30分鐘。通過以下操作來停止反應(yīng)使用TomtecHarvester將樣本經(jīng)由Multiscreen Harvest平板(在0.5％聚乙烯亞胺)過濾，用500μL冷的50mM Tris-HCl(pH 7.4，4℃)洗滌9次，然后將平板在通風廚中風干30分鐘。給平板施加底部封條，然后向每個孔中加入25μL of MicroScint-0。用TopSeal-A將平板密封，在TopCount Microplate Scintillation and Luminescence Counter(PerkinElmer)上，使用60秒的計數(shù)延遲，每個孔進行30秒計數(shù)。結(jié)果以每分鐘計數(shù)(cpm)表示。
通過GraphPad Prism(GraphPad Software，San Diego，CA)，使用可變斜率非線性回歸分析來對數(shù)據(jù)進行分析。對于[125I]-生長素釋放肽，使用0.01nM的Kd值(之前在膜表征期間確定的)來計算Ki值。
使用下列公式來計算Dmax值 Dmax＝1-(最大置換的測定濃度-非特異性結(jié)合)×100/(總結(jié)合-非特異性結(jié)合) 其中總結(jié)合和非特異性結(jié)合分別代表不在或在1μM生長素釋放肽存在下獲得的cpm。
表3A-3D在下面顯示了本發(fā)明代表性化合物在gherlin受體上的結(jié)合活性，表3A、3B和3D的化合物結(jié)構(gòu)是用如通式I一般結(jié)構(gòu)所定義的不同基團呈現(xiàn)的。對于表3B和3D，在所有條目中，m、n和p是0；X、Z1和Z2分別是NH。對于表3B，在所有條目中，R1是H。系鏈(T)是用所示的與X和Z2的鍵合顯示的。對于表3C，顯示的是化合物自身。圖4中顯示了代表性化合物1、2、3、4和25的競爭性結(jié)合曲線。
表3A本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3A本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3A本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3A本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3A本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3A本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3A本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3A本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3A本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3A本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3A本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3A本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3A本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3A本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3A本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3A本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3B本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3B本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3B本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3B本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3B本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3B本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3B本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3B本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3B本發(fā)明化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3C本發(fā)明代表性化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3C本發(fā)明代表性化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3C本發(fā)明代表性化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3C本發(fā)明代表性化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3D本發(fā)明代表性化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3D本發(fā)明代表性化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性
表3E本發(fā)明代表性化合物在人生長素釋放肽受體上的結(jié)合活性




使用標準方法測定的結(jié)合活性，表示為A＝0.1-10nM；B＝10-100nM； C＝0.1-1.0μM；D＝1-10μM；E＞500nM(最高測試濃度)；F＞1μM(最高測試濃度)；G＞10μM(或者在最高測試濃度無活性) B.水母蛋白功能測定(生長素釋放肽受體) 發(fā)現(xiàn)能結(jié)合GHS-R1a受體的本發(fā)明化合物的功能活性可使用下述方法來確定，該方法還可以以高通量方式用作生長素釋放肽受體活性的初步篩選(LePoul，E.；等人.Adaptation of aequorin functionalassay to high throughput screening.J.Biomol.Screen.2002，7，57-65；Bednarek，M.A.；等人.Structure-function studies on the new growthhormone-releasing peptide ghrelinminimal sequence of ghrelinnecessary for activation of growth hormone secretagogue receptor 1a.J.Med.Chem. 2000，43，4370-4376；Palucki，B.L.；等人.Spiro(indoline-3，4’-piperidine)growth hormone secretagogues asghrelin mimetics.Bioorg.Med.Chem.Lett.2001，11，1955-1957.)。
材料 膜是使用表達人生長素釋放肽受體的AequoScreenTM(EUROSCREEN，Belgium)細胞系(細胞系ES-410-A；受體登記號#60179)制得的。該細胞系一般通過將人生長素釋放肽受體轉(zhuǎn)染到CHO-K1細胞內(nèi)來構(gòu)建，所述細胞共表達Gα16和線粒體靶向的水母蛋w白(Ref#ES-WT-A5)。
1.生長素釋放肽(參照激動劑；Bachem，#H-4864) 2.測定緩沖液含有0.1％BSA(牛血清白蛋白；pH 7.0)的DMEM(Dulbecco’s Modified Eagles Medium)。
3.Coelenterazine(Molecular Probes，Leiden，The Netherlands). 本發(fā)明化合物的最終測試濃度(N＝8) 10、1、0.3、0.1、0.03、0.01、0.003、0.001μM。
化合物處理 在使用之前，將化合物的貯備液(10mM在100％DMSO中的溶液)在干冰上冷凍并于-20℃貯存。通過在26％DMSO中進行20倍稀釋而由貯備液制備濃度為500μM的母液。然后通過在含有0.1％BSA的DMEM培養(yǎng)基中進行合適的稀釋來準備測定平板。在這些條件下，測定中的最大DMSO終濃度＜0.6％。
細胞制備 使用補充有5mM EDTA的不含Ca2+和Mg2+的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)從培養(yǎng)平板中收集AequoScreenTM細胞，以1000×g離心2分鐘，以5×106個細胞/mL的密度重懸在含有0.1％BSA的DMEM-Ham’s F12中，在過夜室溫在5μM coelenterazine存在下培養(yǎng)。負載后，將細胞用測定緩沖液稀釋至濃度為5×105個細胞/mL。
測定方案 對于激動劑測定，將50μL細胞懸浮液與50μL適當濃度的測試化合物或生長素釋放肽(參照激動劑)在96-孔板(雙重樣本)中混合。將生長素釋放肽(參照激動劑)以幾個濃度與測試化合物平行進行，以驗證試驗。使用Hamamatsu FDSS 6000讀數(shù)器(HamamatsuPhotonics K.K.，Japan)記錄作為對于生長素釋放肽或測試化合物的反應(yīng)的受體激活所導(dǎo)致的發(fā)光。
分析和表達結(jié)果 結(jié)果以相對光單位(RLU)表示。使用GraphPad Prism(GraphPadSoftware，San Diego，CA)，通過非線性回歸分析(乙狀劑量-反應(yīng))，基于方程E＝Emax/(1+EC50/C)n來分析濃度曲線，其中E是在給定的激動劑濃度(C)測定的RLU值，Emax是最大反應(yīng)，EC50是產(chǎn)生50％刺激的濃度，n是斜率指數(shù)。對于激動劑的測定，每一濃度的測試化合物的結(jié)果都是作為激活百分比表示的，所述百分比是相對于通過等于EC80的濃度(即3.7nM)的生長素釋放肽所誘導(dǎo)的信號而計的。報道EC50、Hill斜率和％Emax值。
數(shù)據(jù)表明’所測定的代表性化合物在生長素釋放肽受體上作為激動劑起作用，并且在所測定的濃度沒有拮抗劑活性。此外，相對于其最接近的類似物促胃動素受體(其具有52％序列同源性)，這些化合物對于生長素釋放肽受體具有高選擇性。
(Feighner，S.D.；Tan，C.P.；McKee，K.K.；Palyha，O.C.；Hreniuk，D.L.；Pong，S.-S.；Austin，C.P.；Figueroa，D.；MacNeil，D.；Cascieri，M.A.； Nargund，R.；Bakshi，R.；Abramovitz，M.；Stocco，R.；Kargman，S.；O’Neill，G.；van der Ploeg，L.H.T.；Evans，J.；Patchett，A.A.；Smith，R.G.；Howard，A.D.Receptor for motilin identified in thehuman gastrointestinal system.Science 1999，284，2184-2188.) 該內(nèi)源性肽自身具有36％的共有殘基，并且生長素釋放肽在一個點鑒定為胃動素受體相關(guān)肽。
(Tomasetto，C.；Karam，S.M.；Ribieras，S.；Masson，R.；Lefebvre，O.；Staub，A.；Alexander，G.；Chenard，M.P.；Rio，M.C.Identification andcharacterization of a novel gastric peptide hormonethe motilin-related peptide.Gastroenterology 2000，119，395-405.) 生長素釋放肽在胃動素受體上沒有明顯地相互作用，雖然GHRP-6有這樣的作用。
(Depoortere，I.；Thijs，T.；Thielemans，L.；Robberecht，P.；Peeters，T.L.Interaction of the growth hormone-releasing peptides ghrelinand growth hormone-releasing peptide-6 with the motilin receptor in the rabbit gastricantrum.J. Pharmacol.Exp.Ther.2003，305，660-667.) 另一方面，已經(jīng)證實了胃動素自身具有某些GH釋放作用 (Samson，W.K.；Lumpkin，M.D.； Nilaver，G.；McCann，S.M.Motilina novel growth hormone releasing agent.Brain Res.Bull.1984，12，57-62.) 表4中顯示了本發(fā)明代表性化合物的激動劑活性和選擇性水平。
圖5顯示了關(guān)于實施例化合物1-5的濃度反應(yīng)結(jié)果。
表4在人生長素釋放肽受體上的功能分析和選擇性結(jié)果 表4在人生長素釋放肽受體上的功能分析和選擇性結(jié)果 表4在人生長素釋放肽受體上的功能分析和選擇性結(jié)果 C.關(guān)于生長激素釋放的細胞培養(yǎng)測定 可以采用如Cheng等人.Endocrinology1989，124，2791-2798中所述的用于確定生長激素釋放的細胞培養(yǎng)測定。特別是，從雄性Sprague-Dawley大鼠中獲得垂體前葉腺，并且放置在冷的培養(yǎng)基中。將這些垂體切開，例如切成1/8切片，然后用胰蛋白酶消化。消化后收集細胞，匯集，轉(zhuǎn)移到24孔平板中(每個孔最少200,000個細胞)。已經(jīng)形成了單層細胞后，通常培養(yǎng)至少4天后，將細胞用培養(yǎng)基洗滌，然后暴露于受試樣本和對照。將不同濃度的測試化合物和作為陽性對照的生長素釋放肽加到培養(yǎng)基中。將細胞在37℃放置15分鐘，然后除去培養(yǎng)基，把細胞冷凍貯存。使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標準放射免疫分析來測定GH釋放的量。
D.本發(fā)明代表性化合物的藥動學(xué)分析 本發(fā)明化合物的藥動學(xué)特性可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的方法來確定 (Wilkinson，G.R.“PharmacokineticsTheDynamics of Drug Absorption，Distribution，and Elimination”in Goodman & Gilman′sThe Pharmacological Basis of Therapeutics，Tenth Edition，Hardman，J.G.；Limbird，L.E.，Eds.，McGraw Hill，Columbus，OH，2001，Chapter 1.) 使用下列方法來評估關(guān)于本發(fā)明化合物的靜脈內(nèi)、皮下和口服給藥的藥動學(xué)參數(shù)(消除半衰期、總血漿清除率等)。
收集血漿 大鼠；雄性Sprague-Dawley(～250g) 大鼠/治療組6(兩個亞組，每個亞組3只大鼠，交替取血) 將在溶液中的測試化合物的每個樣本配制成適于給藥的制劑(例如用環(huán)糊精配制)。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當理解，可以按照需要對該方案進行適當修飾以充分測試所分析的化合物的特性。
典型劑量 1.靜脈內(nèi)(i.v.)2mg/kg 2.皮下(s.c)2mg/kg 3.口服(p.o.)8mg/kg 表5代表性靜脈內(nèi)血樣采集程序 表6代表性皮下和口服血樣采集程序 血漿收集 1.對于所有給藥組的相同方案 2.對于每個組，有2個亞組(A和B)，3只大鼠/亞組 在上述時間間隔，從每只動物中收集0.7mL血液。預(yù)計該體積的血液將產(chǎn)生至少0.3mL血漿。使用EDTA作為用于收集全血的抗凝劑。將血液樣本冷凍，并且通過離心來立即加工以獲得血漿。
將血漿樣本冷凍(-70℃)直至分析。在合適的制備方案之后，通過LC-MS進行血漿樣本中母化合物的分析檢測使用固相提取(SPE)筒(Oasis MCX，Oasis HLB)或液-液提取進行提取。
HPLC-MS方法 柱Atlantis dC18，得自Waters 2.1×30mm流動相 A95％MeOH，5％水，0.1％TFA B95％水，5％MeOH，0.1％TFA 流速0.5mL/分鐘 梯度(線性) 分析物是基于標準曲線進行定量測定，并且使用內(nèi)標對方法進行驗證。
表7.本發(fā)明代表性化合物的藥動學(xué)參數(shù) ai.v.＝靜脈內(nèi)(10個時間點，在150分鐘內(nèi))；s.c.＝皮下(10個時間點，在360分鐘內(nèi))，p.o.＝口服(10個時間點，在240分鐘內(nèi)) bna＝不適用的 對于這些試驗的時間過程結(jié)果列在圖6A-6D中。
E.胃排空 為了測定本發(fā)明化合物在胃輕癱中的作用，在禁食大鼠中評估本發(fā)明化合物對于胃排空中的可能作用。例如，相對于載體對照組，100μg/kg的化合物25和298引起胃排空顯著增加(≥30％)。100μg/kg i.v.的化合物25和298的相對效力(39％增加)類似于20μg/kg i.v.目前使用的陽性參照活性劑GHRP-620μg/kg i.v.(40％增加)和10mg/kgi.v.甲氧氯普胺(41％增加)。因此，證實了100μg/kg化合物25和298在大鼠中的胃動力活性，其效力類似于20μg/kg的GHRP-6和10mg/kg的甲氧氯普胺。此外，還證實了30μg/kg化合物25表現(xiàn)出胃排空作用。其比其它化合物更有效，以前發(fā)現(xiàn)這些其它化合物與該受體相互作用，以提高GI能動性，其在100μg/kg不能促進胃排空(U.S.專利6,548,501)。
測試物質(zhì)和給藥方式 將GHRP-6和測試樣本溶解在9％HPBCD/0.9％NaCl載體中。之后立即口服給予含有酚紅(0.05％)的甲基纖維素(2％)(2mL/大鼠)，將測試物質(zhì)或載體(9％HPBCD/0.9％NaCl)分別以5mL/kg的劑量靜脈內(nèi)(i.v.)給藥。
動物 雄性Wistar大鼠由LASCO(A Charles River LicenseeCorporation，Taiwan)提供。用于6只大鼠的空間分配是45×2×15cm。將動物在APEC籠子中飼養(yǎng)，并且在使用之前，在實驗室中保持在控制溫度(22℃-24℃)和濕度(60％-80％)環(huán)境中，具有12小時光照、12小時黑暗循環(huán)，至少一周。讓大鼠自由獲得標準實驗室大鼠食物(Lab Diet，Rodent Diet，PMI Nutrition International，USA)，并且給予自來水。包括飼養(yǎng)、實驗和處置的該工作的所有方面都依據(jù)Guide for the Care and Use of Laboratory Animals(National AcademyPress，Washington，D.C.，1996)來進行。
化學(xué)試劑 葡萄糖(Sigma，USA)、甲氧氯普胺-HCl(Sigma，USA)、甲基纖維素(Sigma，USA)、NaOH(氫氧化鈉，Wako，Japan)，不含熱原的鹽水(Astar，Taiwan)、酚紅-鈉鹽(Sigma，USA)和三氯乙酸(Merck，USA)。
裝置 8-孔條帶(Costar，USA)，96-孔平板(Costar，USA)，動物箱(ShinTeh，R.O.C.)，離心分離器(Kokusan，H-107，Japan)，玻璃注射器(1mL，2mL，Mitsuba，Japan)，皮下針頭(25G×1″，TOPCorporation，Japan)，微管(Treff，Switzerland)，pH-計(Hanna，USA)，Pipetamam(P100，Gilson，F(xiàn)rance)，吸移管尖(Costar，USA)，大鼠口服針頭(Natsume，Japan)，Spectra Fluor plus(Austria)，不銹鋼剪刀(Klappencker，Germany)和不銹鋼鉗子(Klappencker，Germany)。
測定 在口服給予2mL/動物的含有酚紅(0.05％)的甲基纖維素(2％)之后，立即給測試物分別靜脈內(nèi)給予一組5過夜-禁食Wistar雄性大鼠，重200±20g。15分鐘后，將動物殺死。立即取出胃，在0.1N NaOH(5mL)中勻化并且離心。使用20％三氯乙酸(0.5mL)將蛋白沉淀，并且將上清液用0.1N NaOH再堿化之后，通過比色法在560nm測定胃中保留的全部酚紅。檢測到胃排空有30％或更多(≥30％)增加視為顯著，這是通過測定相對于載體對照組，胃中酚紅濃度的降低來確定的。
關(guān)于本發(fā)明兩個代表性化合物的結(jié)果如圖7和下面的實施例所示。
F.手術(shù)后腸梗阻大鼠模型中的胃排空和腸通過 該POI的臨床相關(guān)模型是對Kalff的模型進行改進而得到的 (Kalff， J.C.；Schraut，W.H.；Simmons，R.L.；Bauer，A.J.Surgical manipulation of the gut elicits anintestinal muscularis inflammatory response resulting in postsurgical ileus.Ann.Surg.1998，228，652-663.) 也可以使用其它已知模型來研究本發(fā)明化合物的作用 (Trudel，L.；Bouin，M.；Tomasetto，C.；Eberling，P.；St-Pierre，S.；Bannon，P.；L’Heureux，M.C.；Poitras，P.Two new peptides to improve post-operative gastric ileus in dog.Peptides 2003，24，531-534；(b)Trudel，L.；Tomasetto，C.；Rio，M.C.；Bouin，M.；Plourde，V.；Eberling，P.；Poitras，P.Ghrelin/motilin-related peptideis a potent prokinetic to reverse gastric postoperative ileus in rats.Am.J.Physiol.2002，282，G948-G952.) 動物 1.大鼠，Sprague-Dawley，雄性，～300g。
2.在實驗之前禁食過夜。
誘導(dǎo)手術(shù)后腸梗阻(POI) 1.在無菌條件下的異氟烷麻醉。
2.中線腹部切開。
3.切除腸和盲腸并且用鹽水潤濕。
4.用濕潤棉花涂藥器，以類似于臨床設(shè)備中“腸流動”方式，將腸和盲腸在潤濕下沿著其整個長度操作。該操作定時以持續(xù)10分鐘。
5.將腸輕輕地放置到腹部內(nèi)，在無菌條件下把腹部傷口縫合。
給藥 1.讓大鼠從異氟烷麻醉中恢復(fù)。
2.將測試化合物(或載體)通過之前植入的頸靜脈插管靜脈內(nèi)給藥。
3.立即通過管飼法對胃內(nèi)給予用放射性99mTc，t＝0標記的甲基纖維素(2％)。
實驗 1.在t＝15分鐘，將動物用CO2安樂死。
2.將胃和沿著小腸的10cm切口立即結(jié)扎，切成段，并置于管中以在γ計數(shù)器中測定99mTc。
3.通過幾何平均值來衡量胃排空和小腸通過。
幾何平均值＝∑(％總放射性×切段數(shù))/100 結(jié)果在圖8中表示，并且表明，與POI+載體治療大鼠相比，100μg/kg(i.v.n＝5)的化合物298顯著改善了手術(shù)后腸梗阻。另外的結(jié)果在下面的實施例中呈現(xiàn)。
G.對于測試化合物的生長激素反應(yīng) 本發(fā)明化合物同樣可以在多種動物模型中測定其對于GH釋放的作用。例如，大鼠(Bowers，C.Y.；Momany，F(xiàn).；Reynolds，G.A.；Chang，D.；Hong，A.；Chang，K.Endocrinology 1980，106，663-667)，狗(Hickey，G.；Jacks，T.；Judith，F(xiàn).；Taylor，J.；Schoen，W.R.；Krupa，D.；Cunningham，P.；Clark，J.；Smith，R.G.Endocrinology 1994，134，695-701；Jacks，T.；Hickey，G.；Judith，F(xiàn).；Taylor，J.；Chen，H.；Krupa，D.；Feeney，W.；Schoen，W.R.；Ok，D.；Fisher，M.；Wyvratt，M.；Smith，R.J.Endocrinology 1994，143，399-406；Hickey，G.J.；Jacks，T.M.；Schleim，K.D.；Frazier，E.；Chen，H.Y.；Krupa，D.；Feeney，W.；Nargund，R.P.； Patchett，A.A.；Smith，R.G.J.Endocrinol.1997，152，183-192)，和豬(Chang，C.H.；Rickes，E.L.；Marsilio，F(xiàn).；McGuire，L.；Cosgrove，S.；Taylor，J.；Chen，H.Y.；Feighner，S.；Clark，J.N.；Devita，R.；Schoen，W.R.；Wyvratt，M.；Fisher，M.；Smith，R.G.；Hickey，G.Endocrinology 1995，136，1065-1071；(b)Peschke，B.；Hanse，B.S.Bioorg.Med.Chem.Lett.1999，9，1295-1298) 都已經(jīng)成功地用于在體內(nèi)研究GHS的作用，并且同樣可用于評估生長素釋放肽激動劑對GH水平的影響。在適當?shù)亟o予本發(fā)明化合物之后，可以使用放射免疫分析通過本領(lǐng)域已知的標準方法來進行生長素釋放肽對GH水平的影響的測定(Deghenghi，R.；等人.Life Sciences 1994，54，1321-1328.)。在對動物給予含有放射性標記物的測試物質(zhì)之后，使用全體放射自顯影法來測定與組織的結(jié)合(Ahnfelt-Rnne，I.；Nowak，J.；Olsen，U.B.Do growth hormone-releasing peptides act asghrelin secretagogues？Endocrine 2001，14，133-135.)。
采用下列方法來測定對于測試化合物的生長激素(GH)反應(yīng)的暫時方式和大小，所述化合物是系統(tǒng)給藥或中樞給藥。證實了其缺乏對于GH釋放的作用的化合物298的結(jié)果如圖9所示?；衔?5給出了類似結(jié)果。另外的結(jié)果如下面的實施例中所示。
用于GH釋放體內(nèi)試驗的給藥和取樣方案 成年雄性Sprague Dawley大鼠(225-300g)購自Charles RiverCanada(St.Constant，Canada)，并且基于12小時光照、12小時黑暗循環(huán)(光照時間0600-1800)在控制溫度(22±1℃)-和控制濕度的室中單獨飼養(yǎng)。讓其自由攝取Purina大鼠食物(Ralston PurinaCo.，St.Louis，MO)和自來水。對于這些實驗，使用已知技術(shù)，在戊巴比妥鈉(50mg/kg，ip)麻醉下植入長期腦室(icv)和心臟內(nèi)靜脈插管。通過在手術(shù)后第一天對于icv卡巴膽堿(100ng/10μl)注射的正飲水反應(yīng)以及在殺死時通過亞甲藍染色來證實插管的放置。手術(shù)后，將大鼠直接放置在具有可自由獲得的食物和水分的隔離試驗室中直至體重恢復(fù)至手術(shù)前水平(通常在5-7天內(nèi))。在該期間，每日操作大鼠以把與實驗當天操作有關(guān)的任何緊張降至最小。在試驗當天，在開始取樣前1.5天取出食物，并且在結(jié)束時放回食物。在6小時取樣期間，在兩個不同時間點，給可自由移動的大鼠靜脈內(nèi)注射不同水平(3、30、300、1000μg/kg)的樣本或標準鹽水。選擇時間1100和1300，因為如以前所證明的那樣，他們反映典型峰值和GH分泌期。在實驗中，使用人生長素釋放肽肽(5μg，Phoenix Pharmaceuticals，Inc.，Belmont，CA)作為陽性對照，并且在臨用前在標準鹽水中稀釋。為了評估測試化合物對于脈動式GH釋放的中樞作用，在相同時間點1100和1300icv給予低10倍劑量的測試化合物或標準鹽水。在6小時取樣期(時間1000-1600)，每15分鐘從測試動物中取血樣(0.35mL)。為了證實對于測試化合物的GH反應(yīng)的迅速程度，每次注射后5分鐘獲得另外的血樣。立即離心所有血樣，分離出血漿，并且在-20℃貯存用于隨后的GH分析。為了避免血液動力學(xué)障礙，把血紅細胞在標準鹽水中重懸，并且在取出下一血樣之前返回動物。在動物保護監(jiān)督委員會批準的操作下進行所有動物試驗。
GH試驗方法 使用NIDDK Hormone Distribution Program(Bethesda，MD)提供的材料，通過雙抗體RIA來測定血漿GH濃度。對于每組5-6只大鼠，根據(jù)大鼠GH參照制劑，報道平均血漿GH值。標準曲線在所關(guān)注的范圍內(nèi)是直線的，并且在所用條件下，血漿GH的可檢測濃度是約1ng/mL。將具有上述關(guān)注范圍的值的所有樣本在1∶2-1∶10的稀釋度下進行再測定。對于一式兩份的含有已知GH濃度的收集的血漿樣本，測定內(nèi)和測定間變異系數(shù)是可接受的。
4.藥物組合物 可將本發(fā)明大環(huán)化合物或其可藥用鹽配制成不同劑型的藥物組合物。為了制備本發(fā)明藥物組合物，將作為活性組分的一種或多種化合物，包括其旋光異構(gòu)體、對映體、非對映體、外消旋體或立體化學(xué)混合物或其可藥用鹽與合適的載體和調(diào)節(jié)劑根據(jù)藥物制劑領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)充分混合。
可藥用鹽是指本發(fā)明化合物的鹽形式，容許其使用或作為藥物的制劑，并且保持指定化合物的游離酸和堿的生物有效性，以及在生物學(xué)或其它方面是有利的。這樣的鹽的實例描述在Handbook ofPharmaceutical SaltsProperties，Selection，and Use，Wermuth，C.G.and Stahl，P.H.(eds.)，Wiley-Verlag Helvetica Acta，Ziirich，2002[ISBN 3-906390-26-8]中。這樣的鹽的實例包括堿金屬鹽以及游離酸和堿的加成鹽?？伤幱名}的實例包括但不限于硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、丁炔-1，4-二酸鹽、己炔-1，6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、二甲苯磺酸鹽、苯基乙酸鹽、苯基丙酸鹽、苯基丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、γ-羥基丁酸鹽、乙醇酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、丙磺酸鹽、甲苯磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2磺酸鹽和扁桃酸鹽。
如果本發(fā)明化合物是堿性的，可取的鹽可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何合適的方法制得，包括用無機酸或有機酸處理游離堿，所述無機酸是例如但不限于鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、碳酸、硫酸、硝酸、磷酸等，所述有機酸包括但不限于甲酸、乙酸、丙酸、馬來酸、琥珀酸、扁桃酸、富馬酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、硬脂酸、抗壞血酸、乙醇酸、水楊酸，吡喃糖酸(pyranosidyl acid)例如葡糖醛酸或半乳糖醛酸，α-羥基酸例如檸檬酸或酒石酸，氨基酸例如天冬氨酸或谷氨酸，芳族酸例如苯甲酸或檸檬酸，磺酸例如對甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、2-羥基乙磺酸、苯磺酸、環(huán)己基-氨基磺酸等。
如果本發(fā)明化合物是酸，可取的鹽可通過本領(lǐng)域已知的任何合適的方法制得，包括用下列堿處理游離酸而制得無機堿或有機堿，例如胺(伯胺、仲胺或叔胺)；堿金屬或堿土金屬氫氧化物等。合適的鹽的示例性實例包括衍生自下列物質(zhì)的鹽氨基酸例如甘氨酸、賴氨酸和精氨酸；氨；伯胺、仲胺和叔胺，例如乙二胺；N，N’-二芐基乙二胺、二乙醇胺、膽堿和普魯卡因，以及環(huán)狀胺例如哌啶、嗎啉和哌嗪；以及衍生自鈉、鈣、鉀、鎂、錳、鐵、銅、鋅、鋁和鋰的無機鹽。
用于這樣的藥物組合物的載體和添加劑可呈多種形式，這取決于預(yù)期的給藥方式。因此，用于口服給藥的組合物可以是例如固體制劑，例如固體制劑如片劑、糖包衣片劑、硬膠囊、軟膠囊、粒劑、分解等，合適的載體和添加劑是淀粉、糖、粘合劑、稀釋劑、制粒劑、崩解劑等。由于其易于使用和較好的患者配合性，對于很多病癥來說，片劑和膠囊是最有利的口服劑型。
類似地，用于液體制劑的組合物包括溶液、乳劑、分散液、懸浮液、糖漿劑、酏劑等，合適的載體和添加劑是水、醇、油、二醇、防腐劑、矯味劑、著色劑、懸浮劑等。典型的胃腸外給藥用制劑包含活性組分與載體例如無菌水或胃腸外可接受油，包括聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、卵磷脂、花生油或芝麻油，還可以包括用于幫助溶解或防腐的其它添加劑。對于溶液，可以將其冷凍干燥成粉末，然后在臨用前重新配制。對于分散液和懸浮液，合適的載體和添加劑包括含水樹膠、纖維素、硅酸鹽或油。
根據(jù)本發(fā)明實施方案的藥物組合物包括適用于下列給藥的那些口服給藥、直腸給藥、局部給藥、吸入給藥(例如通過氣霧劑)、頰給藥(例如舌下)、陰道給藥、局部給藥(即皮膚和粘膜表面，包括氣道表面)，透皮給藥和胃腸外給藥(例如皮下、肌內(nèi)、真皮內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、胸膜內(nèi)、腹膜內(nèi)、鞘內(nèi)、腦內(nèi)、顱內(nèi)、動脈內(nèi)或靜脈內(nèi))，雖然在任何給定情況下，最合適的途徑取決于所治療病癥的性質(zhì)和嚴重性，以及所用具體活性劑的性質(zhì)。
注射用組合物將包括活性組分以及合適的載體，包括丙二醇-醇-水、等滲水、注射用無菌水(USP)、emulPhorTM-醇-水、cremophor-ELTM或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它合適的載體。這些載體可以單獨使用或者與其它常規(guī)助溶劑例如乙醇、丙二醇或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它物質(zhì)結(jié)合。
當本發(fā)明大環(huán)化合物以溶液或注射劑形式使用時，化合物可以通過溶解或懸浮在任何常規(guī)稀釋劑中來使用。稀釋劑可以包括例如生理鹽水、林格溶液、葡萄糖水溶液、葡萄糖的含水溶液、醇、脂肪酸酯、甘油、二醇、衍生自植物或動物來源的油、烷烴等。這些制劑可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何常規(guī)方法來制得。
用于鼻給藥的組合物可以配制成氣霧劑、滴劑、粉劑和凝膠劑。氣霧劑通常包含活性組分在生理可接受水或非水溶劑中的容易或細懸浮液。這樣的制劑通常以無菌形式在密封容器中以單劑量或多劑量呈送。密封容器可以是通過霧化裝置來使用的藥筒或再填充劑?；蛘撸芊馊萜骺梢允菃卧渌脱b置例如單一使用的鼻吸入器、泵霧化器或氣霧劑配送器，其裝配有計量閥門以遞送治療有效量，一旦內(nèi)容物已經(jīng)使用完，其即被處理掉。當劑型包括氣霧劑配送器時，其將含有推進劑例如壓縮氣體例如空氣，或有機推進劑，包括氟氯烴或氟代烴。
適用于頰或舌下給藥的組合物包括片劑、錠劑和軟錠劑，其中用載體例如糖和阿拉伯膠、黃蓍膠或明膠和甘油配制活性組分。
用于直腸給藥的組合物包括栓劑，所述栓劑含有常規(guī)栓劑基質(zhì)例如椰子油。
適于透皮給藥的組合物包括膏劑、凝膠劑和貼劑。
本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它組合物也可用于透皮或皮下給藥，例如硬膏劑。
此外，在制備包含活性組分以及與其混合的配制組合物所需的組分的藥物組合物時，可以摻入其它常規(guī)可藥用添加劑，例如賦形劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、潤濕劑、乳化劑、潤滑劑、甜味劑、著色劑、矯味劑、等滲劑、緩沖劑、抗氧化劑等。作為添加劑，可提及的有例如淀粉、蔗糖、果糖、葡萄糖、乳糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、沉淀碳酸鈣、結(jié)晶纖維素、羧甲基纖維素、糊精、明膠、阿拉伯膠、EDTA、硬脂酸鎂、滑石粉、羥丙基甲基纖維素、焦亞硫酸氫鈉等。
在某些實施方案中，組合物是以單位劑型例如片劑和膠囊劑提供的。
在另外的實施方案中，本發(fā)明提供具有一個或多個容器的藥盒，所述藥盒裝有包含有效量的一種或多種本發(fā)明化合物的藥物劑量單位。
本發(fā)明還提供包含本文所述化合物的前藥。術(shù)語前藥是指在生理條件下通過水解或代謝轉(zhuǎn)化為藥物活性的特定化合物的化合物。“前藥”可以是本發(fā)明化學(xué)衍生的化合物，這樣(i)前藥保持母藥化合物的某些、全部生物活性或不具有母藥化合物的活性，并且(ii)前藥在個體中代謝產(chǎn)生母藥化合物。本發(fā)明前藥也可以是“部分前藥”，因為該化合物是化學(xué)衍生的，這樣(i)前藥保持母藥化合物的某些、全部生物活性或不具有母藥化合物的活性，并且(ii)前藥在個體中代謝產(chǎn)生化合物的生物學(xué)活性的衍生物。用于衍生化合物以提供前藥的已知技術(shù)是可以使用的。這樣的方法可以使用可水解的與化合物偶聯(lián)的形成。
本發(fā)明還提供可以與用于預(yù)防和/或治療下列疾病的治療藥劑聯(lián)合給藥的本發(fā)明化合物代謝和內(nèi)分泌病癥，胃腸病癥，心血管病，肥胖癥和肥胖癥相關(guān)病癥，中樞神經(jīng)系統(tǒng)病癥，遺傳病癥，高增生病癥和炎性病癥。代表性藥劑包括止痛劑(包括阿片類止痛劑)，麻醉劑，抗真菌劑，抗生素，消炎藥(包括非類固醇消炎藥)，驅(qū)蟲藥，止吐藥，抗組胺藥，抗高血壓藥，安定藥，抗關(guān)節(jié)炎藥，鎮(zhèn)咳藥，抗病毒藥，作用于心臟的藥物，瀉藥，化療藥物(例如DNA-相互作用藥物、抗代謝藥物、微管蛋白-相互作用藥物、激素藥物和像天冬酰胺酶或羥基尿類的藥物)，腎上腺皮質(zhì)激素(類固醇)，抗抑郁劑，鎮(zhèn)靜劑，利尿劑，安眠藥，礦物質(zhì)，營養(yǎng)補充劑，擬副交感神經(jīng)藥，激素(例如促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素、促腎上腺皮質(zhì)激素、生長激素釋放激素、生長激素、thyrptropin-釋放激素和甲狀腺刺激激素)，鎮(zhèn)靜劑，磺胺藥物，興奮劑，擬副交感神經(jīng)藥，安定藥，血管收縮藥，血管舒張藥，維生素和黃嘌呤衍生物。
按照本發(fā)明適合于治療的個體包括，但不限于，鳥類和哺乳動物個體，并且優(yōu)選哺乳動物。本發(fā)明哺乳動物包括，但不限于，犬科動物，貓科底物，牛類動物，山羊類動物，馬類動物，綿羊類動物，豬類動物，嚙齒類動物(例如松鼠和鼠)，兔類動物，靈長類動物，人等和子宮內(nèi)動物(mammals in utero)。任何需要按照本發(fā)明治療的哺乳動物個體都是適宜的。人個體為優(yōu)選。兩性和任何發(fā)育階段的人個體(即新生兒、嬰兒、少兒、青少年、成人)都可以按照本發(fā)明被治療。
按照本發(fā)明例證性鳥類包括雞、鴨、火雞、鵝、鵪鶉、野雞、平胸雞(例如鴕鳥)和馴化的鳥類(例如鸚鵡和金絲雀)和卵內(nèi)鳥類(birdsin ovo)。
本發(fā)明主要涉及治療人個體，本發(fā)明可以用于動物個體，尤其是哺乳動物個體例如小鼠、大鼠、犬、貓、家畜和馬，用于獸藥目的和藥物篩選和藥物開發(fā)目的。
在用于其中生長素釋放肽受體的調(diào)節(jié)劑例如激動劑是有效的哺乳動物(即人或動物)中的治療病癥的治療應(yīng)用中，可以有效量給藥本發(fā)明化合物或其藥物組合物。因為化合物的活性和治療效果的程度是變化的，所以基于通常確定的因素來給藥實際的劑量，所述因素例如年齡、個體的狀態(tài)、遞送途徑和個體的體重。劑量可以在約0.1-約100mg/kg之間，每日口服給藥1-4次。另外，可以大約0.01-20mg/kg/劑的劑量注射給藥化合物，每日給藥1-4次。治療可以持續(xù)數(shù)周、月或更長時間。特定情況的最佳劑量的確定屬于本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力之內(nèi)。
5.使用方法 本發(fā)明式I、II和/或III化合物可以用于預(yù)防和治療若干內(nèi)科病癥，包括但不限于，代謝和內(nèi)分泌病癥、胃腸病癥、心血管病、肥胖癥和肥胖癥相關(guān)病癥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)病癥、遺傳病癥、高增生病癥和炎性病癥和所述疾病的組合，其中所述病癥可以是多種潛在疾病的結(jié)果。在特定的實施方案中，疾病或病癥是腸易激綜合征(IBS)、非潰瘍性消化不良、克羅恩病、胃食管反流病、便秘、潰瘍性結(jié)腸炎、胰腺炎、先天性肥厚性幽門狹窄、類癌綜合征、吸收不良綜合征、腹瀉、糖尿病包括糖尿病(diabetes mellitus)(II型糖尿病)、肥胖癥、萎縮性腸炎、胃炎、胃郁積、腸胃傾倒綜合征、胃切除術(shù)后綜合征(postgastroenterectomy syndrome)、腹腔綜合征(celiac disease)、進食障礙或肥胖癥。在其它實施方案中，疾病或病癥是充血性心力衰竭、局部缺血性心臟病或慢性心臟病。在還其它的實施方案中，疾病和病癥是骨質(zhì)疏松癥和/或虛弱(frailty)、充血性心力衰竭、加快骨折修復(fù)、代謝綜合征、減弱蛋白質(zhì)分解代謝反應(yīng)、惡病質(zhì)、蛋白喪失、損害傷口愈合或損害傷口愈合的風險、損害燒傷痊愈或損害燒傷痊愈的風險、損害手術(shù)痊愈或損害手術(shù)痊愈的風險、損害肌肉力量或損害肌肉力量的風險、損害運動性或損害運動性的風險、alterted or risk ofaltered skin thickness、損害代謝體內(nèi)平衡或損害代謝體內(nèi)平衡的風險或損害腎臟體內(nèi)平衡或損害腎臟體內(nèi)平衡的風險。在其它的實施方案中，疾病或病癥包括促進新生期發(fā)育、刺激人中生長激素釋放、保持人的肌肉力量和功能、逆轉(zhuǎn)或預(yù)防人的虛弱(frailty)、預(yù)防糖皮質(zhì)激素的代謝副作用、治療骨質(zhì)疏松癥、刺激和增加肌肉群和力量、刺激免疫系統(tǒng)、加快傷口愈合、加快骨折修復(fù)、治療腎衰竭或?qū)е律L遲緩的腎功能不全、治療矮小身材(short stature)、治療肥胖癥和生長遲緩、加快燒傷患者的痊愈和減少燒傷患者的住院期、治療子宮內(nèi)發(fā)育遲緩、治療股骨發(fā)育不良、治療皮質(zhì)醇過多癥、治療Cushing′s綜合征、誘導(dǎo)搏動生長激素(pulsatile growth hormone)釋放、替代應(yīng)激患者中的生長激素、治療Noonans綜合征、治療抑郁癥、治療Alzheimer′s病、治療嘔吐、治療記憶喪失、治療生殖病癥、治療遲緩的傷口愈合、治療社會心理剝奪、治療肺功能不良、治療通風機依賴(ventilator dependency)、減弱蛋白質(zhì)分解代謝反應(yīng)、減輕惡病質(zhì)和蛋白喪失、治療高胰島素血癥、排卵誘導(dǎo)的輔助治療、刺激胸腺發(fā)育、預(yù)防胸腺功能衰竭、治療抑制免疫的患者、改善肌肉可動性、保持皮膚厚度、代謝體內(nèi)平衡、腎臟體內(nèi)平衡、刺激成骨細胞、刺激骨再造、刺激軟骨生長、刺激companion動物的免疫系統(tǒng)、治療companion動物的老化病癥、促進家畜生長和/或促進綿羊的羊毛生長。
按照本發(fā)明的另外方面，提供治療手術(shù)后腸梗阻、惡病質(zhì)(消耗綜合征)的方法，例如由下列疾病引起的惡病質(zhì)癌癥，艾滋病，心臟病和腎病，胃輕癱，例如由I型或II型糖尿病引起的胃輕癱，其它胃腸病癥，生長激素缺乏，骨喪失和人或動物遭受的其它年齡相關(guān)的病癥，所述方法包括向所述患者給藥有效量的至少一種選自本文公開的具有調(diào)節(jié)生長素釋放肽受體能力的化合物。本文公開的化合物治療的其它疾病或病癥包括短腸綜合征、胃腸傾倒綜合征、胃切除術(shù)后綜合征(postgastroenterectomy syndrome)、腹腔綜合征(celiac disease)，和高增生性疾病例如腫瘤、癌癥和瘤形成病癥，以及惡化前的和非瘤形成的或非惡性的高增生性疾病。特別是，能夠由本發(fā)明治療的腫瘤、癌癥和瘤形成組織包括，但不限于，惡性病癥例如乳腺癌，骨肉瘤，血管肉瘤，纖維肉瘤和其它肉瘤，白血病，淋巴瘤，sinus tumors，卵巢癌，輸尿管、膀胱、前列腺和其它泌尿生殖器癌癥，結(jié)腸、食管和胃癌和其它胃腸癌癥，肺癌，骨髓瘤，胰腺癌，肝癌，腎癌，內(nèi)分泌癌，皮膚癌和腦或中樞和外周神經(jīng)(CNS)系統(tǒng)腫瘤，惡性或良性的，包括神經(jīng)膠質(zhì)瘤和成神經(jīng)細胞瘤。
在特定的實施方案中，本發(fā)明大環(huán)化合物可以用于治療手術(shù)后腸梗阻。在其它的實施方案中，本發(fā)明化合物可以用于治療胃輕癱。在還另外的的實施方案中，本發(fā)明化合物可以用于治療糖尿病性胃輕癱。在另外的實施方案中，本發(fā)明化合物可以用于治療阿片類引起的腸機能障礙。在另外的實施方案中，本發(fā)明化合物可以用于治療慢性間質(zhì)性假梗阻。
本發(fā)明還提供治療馬或犬科動物的胃腸病癥的方法，所述方法包括給藥治療有效量的具有式I、II和/或III結(jié)構(gòu)的調(diào)節(jié)劑。在某些實施方案中，胃腸病癥是腸梗阻和絞痛。
如本文所用，“治療”并非必然意指治愈或完全消除病癥或與之相關(guān)的癥狀。
本發(fā)明化合物還可以用來制備用于治療若干內(nèi)科病癥的藥物，所述病癥包括，但不限于，代謝和/或內(nèi)分泌病癥，胃腸病癥，心血管病癥，肥胖癥和肥胖癥相關(guān)的病癥，遺傳病癥，高增生性病癥和炎性病癥。
現(xiàn)在將根據(jù)下面的實施例對本發(fā)明另外的實施方案進行描述。應(yīng)當理解，這些實施例目的在于例證說明本發(fā)明的實施方案而不是限制本發(fā)明的范圍。
實施例1 合成系鏈(tethers) A.合成系鏈(tether)T9的標準方法
步驟T9-1向2-碘代酚(T9-0，200g，0.91mol，1.0eq)在DMF(DriSolv，560mL)中的溶液中分批加入氫化鈉60％在礦物油(3.64g，0.091mol，0.1eq)中的混合物(看到氫氣逸出)。將反應(yīng)在氮氣氛下于100℃加熱1小時，然后加入碳酸亞乙酯，并將反應(yīng)混合物在100℃加熱過夜。用TLC監(jiān)測反應(yīng)(條件25/75 EtOAc/己烷；Rf0.15，檢測UV，CMA)。使反應(yīng)冷卻，然后把溶劑減壓蒸發(fā)。將殘余油狀物在Et2O(1.5L)中稀釋，然后相繼用1N氫氧化鈉(3×)和鹽水(2×)洗滌，用MgSO4干燥，過濾，并將濾液減壓蒸發(fā)。把粗產(chǎn)物在真空下(200μmHg)于110-115℃蒸餾，獲得T9-1。
步驟T9-2將T9-1(45.1g，0.171mol，1.0eq)和Ddz-炔丙基胺(通過標準保護方法合成的，59.3g，0.214mol，1.25eq)在乙腈(DriSolv，257mL)中的溶液通過向該溶液中通入氬氣10-15分鐘來脫氣。向該溶液中加入Et3N(85.5mL，與CaH2攪拌過夜，然后蒸餾)，并且通過通入氬氣來將該混合物再次凈化，通入氬氣5分鐘。加入重結(jié)晶的碘化銅(I)(1.14g，0.006mol，0.035eq)和反式-二氯-二(三苯膦)鈀(II)(Strem Chemicals，3.6g，0.0051mol，0.03eq)，并將反應(yīng)混合物在氬氣氛下于室溫攪拌4小時。5-10分鐘后，反應(yīng)混合物變成黑色。用TLC監(jiān)測反應(yīng)(條件55/45 EtOAc/己烷)。當反應(yīng)完成時，減壓除去溶劑至干，然后將殘余物用1L 15％DCM在Et2O中的溶液稀釋。將有機相用檸檬酸鹽緩沖液pH 4-5(3×)、飽和碳酸氫鈉水溶液(2×)和鹽水(1×)洗滌，然后用MgSO4干燥，過濾，并將濾液減壓蒸發(fā)。將由此獲得的粗產(chǎn)物通過干燥填塞柱純化，開始用30％EtOAc/己烷(4-8L)洗脫，然后以5％EtOAc的增量增加直至達到55％EtOAc/己烷，獲得了T9-2，為棕色漿狀物(產(chǎn)率65.8g，93.2％)。
步驟T9-3在氮氣氛下向Ddz-氨基-醇T9-2(65.8g，0.159mol，1.0eq)在95％乙醇中的溶液中加入氧化鉑(IV)(3.6g，0.016mol，0.1eq)，然后向溶液中通入氫氣2小時。將該混合物攪拌過夜，使用氣囊保持在氫氣氛下。用1H NMR監(jiān)測反應(yīng)直到完成為止。當反應(yīng)完成時，通入氮氣10分鐘來除去過量氫氣。減壓蒸去溶劑，然后用EtOAc稀釋，通過硅膠墊過濾，將硅膠用EtOAc洗滌直至TLC(55/45 EtOAc/己烷)表明不再洗脫下來任何物質(zhì)。將合并的濾液減壓濃縮。把殘余物溶解于DCM(500mL)，加入4eq清除劑樹脂，并將懸浮液攪拌過夜。對于后面的步驟，可以使用三種不同的樹脂中的任何一種。MP-TMT樹脂(Argonaut Technologies，F(xiàn)oster City，CA，0.73mmol/g)為優(yōu)選，但是其它樹脂，例如，PS-TRIS(4.1mmol/g)和Si-Triamine(Silicycle，Quebec City，QC，1.21mmol/g)也是可以有效使用的。把樹脂過濾并用DCM洗滌，減壓除去溶劑，然后在真空下干燥(油泵)，獲得產(chǎn)物。由65 g T9-0獲得了60.9 g Ddz-T9(91％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.19-7.01，(m，2H)，6.92-9.83(m，2H)，6.53(bs，2H)，6.34(t，1H)，5.17(bt，1H)，4.08(m，2H)，3.98(m，2H)，3.79(s，6H)，3.01(bq，2H)，2.66(t，3H)，1.26(bs，8H)； 13C NMR(CDCl3)δ160.9，156.8，155.6，149.6，130.4，127.5，121.2，111.7，103.2，98.4，80.0，69.7，61.6，55.5，40.3，30.5，29.3，27.4 ppm. 系鏈(tether)T9還可以由另一個系鏈(tether)分子，通過如步驟T9-3中所述的還原，或者采用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它合適的氫化催化劑而合成。
B.合成系鏈(tether)T33a和T33b的標準方法
該系鏈(tether)的(R)-異構(gòu)體(T33a)的構(gòu)建是由2-碘代酚(33-0)和(S)-乳酸甲酯(33-A)完成的。33-0與33-A的Mitsunobu反應(yīng)在進行時發(fā)生構(gòu)型反轉(zhuǎn)，以良好產(chǎn)率獲得33-1。該酯還原成相應(yīng)的醇(33-2)也以高產(chǎn)率發(fā)生，之后與Ddz-丙炔基胺發(fā)生Sonagashira反應(yīng)。用催化氫化還原所得偶聯(lián)產(chǎn)物33-3中的炔。用清除劑樹脂后處理，獲得所需產(chǎn)物Ddz-T33a。
(S)-對映體(Ddz-T33b)的合成是以相同方式，以相差不大的產(chǎn)率，由(R)-乳酸甲酯(33-B)進行的。

C.合成系鏈(tether)母體RCM-TA1的標準方法
步驟A1-1向二醇A1-0(50g，567mmol，1.0eq)在CH2Cl2(1.5L)中的溶液中加入Et3N(34.5mL，341mmol，0.6eq)和DMAP(1.73g，14.2mmol，0.025eq)。在室溫下用4個小時將TBDMSCl(42.8g，284mmol，0.5eq)在CH2Cl2(100mL)中的溶液用注射泵加到該混合物中。用TLC監(jiān)測反應(yīng)[EtOAc/己烷(30∶70)；檢測KMnO4；Rf＝0.39]，其表明存在原料、單保護的化合物和雙保護的化合物。將混合物攪拌過夜，用H2O、飽和NH4Cl溶液(aq)和鹽水洗滌，然后用MgSO4干燥，過濾，并減壓蒸發(fā)。將殘余物通過快速色譜法進行純化(EtOAc/己烷，30∶70)，獲得所需的單保護的醇A1-1(產(chǎn)率31％)。
步驟A1-2在0℃向醇A1-1(26.5g，131mmol，1.0eq)在THF (130mL)中的溶液中加入PPh3(44.7g，170mmol，1.3eq)。把新制備并且滴定的1.3M HN3溶液(149mL，157mmol，1.5eq)緩慢加到該混合物中，然后同樣緩慢加入DIAD(32mL，163mmol，1.25eq)。這是放熱反應(yīng)。將所得混合物在0℃攪拌1小時，同時用TLC[EtOAc/己烷(30∶70)；檢測KMnO4；Rf＝0.77]監(jiān)測反應(yīng)。獲得了化合物A1-2，但是沒有分離出來，而是直接在溶液中用于下一步驟。
步驟A1-3把PPh3(51g，196mmol，1.5eq)分批加到A1-2的溶液中，并將所得混合物在0℃攪拌2小時，溫熱至室溫并保持3小時，然后加入H2O(24mL，1331mmol，10eq)。把該混合物在60℃加熱過夜。用TLC監(jiān)測反應(yīng)[EtOAc/己烷(1∶9)；檢測KMnO4；Rf＝基準]。冷卻后，加入2N HCl溶液(327mL，655mmol，5.0eq)，并將所得混合物在室溫攪拌2小時，獲得在溶液中的化合物A1-3，將其直接用于下一步驟。TLC[DCM/MeOH/30％NH4OH(7∶3∶1)；檢測KMnO4；Rf＝0.32]。
步驟A1-4對于下一步轉(zhuǎn)化，將THF從上面的反應(yīng)混合物中減壓蒸發(fā)，并用Et2O(5×150mL)和CHCl3(3×150mL)萃取殘余水相。用TLC監(jiān)測有機相，并且如果觀察到任何A1-3，就用2N HCl萃取有機相。將水相謹慎地用10N NaOH中和至pH 8。把CH3CN(400mL)加到該水溶液中，并用50分鐘緩慢加入Fmoc-OSu(41.9g，124mmol，0.95eq)在CH3CN(400mL)中的溶液。將溶液在室溫攪拌過夜。用TLC監(jiān)測反應(yīng)過程[EtOAc/己烷(1∶1)；檢測茚三酮；Rf＝0.27]。用Et2O萃取水相，然后將合并的有機相用MgSO4干燥，并減壓濃縮。將獲得的固體殘余物與H2O(120mL)混合，攪拌30分鐘，過濾(以除去琥珀酰亞胺副產(chǎn)物)，并在真空下(油泵)干燥過夜。將該固體通過快速色譜法進行純化[梯度EtOAc/己烷(50∶50)-EtOAc/己烷(70∶30)，一旦通過TLC表明Fmoc-OSu被除去，即改變洗脫劑]，獲得化合物TA1，為白色固體(產(chǎn)率71％)。
1H NMR(CDCl3，ppm)7.8(d，2H)，7.6(d，2H)，7.4(t，2H)，7.3(t，2H)，5.9-5.7(1H，m)，5.6-5.5(1H，m)，5.0(1H，寬)，4.4(2H，d)，4.2(2H，d)，3.9(2H，寬)，2.1(1H，寬). 13C NMR(CDCl3，ppm)156.8，144.1，141.5，131.9，128.3，127.9，127.3，125.2，120.2，67.0，58.0，47.4，38.0. D.合成系鏈(tether)母體RCM-TA2的標準方法
該產(chǎn)物是通過所示交叉復(fù)分解反應(yīng)來構(gòu)建碳骨架而獲得的。把所得腈還原為胺，在連接到樹脂之前用Fmoc或其它適宜的保護基將腈原位保護起來，所述還原是用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標準固相化學(xué)方法進行的。該標準方法也可以適用于TA2的同系化合物。
E.合成系鏈(tether)母體RCM-TB1的標準方法
步驟B1-1.向2-溴芐基醇(B1-0，30g，160mmol)在DCM(DriSolv，530mL)中的大約0.3M溶液中，加入二氫吡喃(B1-A，22mL，241mmol)。加入對甲苯磺酸吡啶(PPTS，4.0g，16mmol)并將反應(yīng)混合物在室溫攪拌過夜。然后加入飽和Na2CO3溶液(水溶液，200mL)，并將化合物攪拌30分鐘。將DCM層分離，相繼用飽和Na2CO3溶液(水溶液，2×100mL)和鹽水(2×50mL)洗滌，并用無水MgSO4干燥。將溶劑減壓蒸發(fā)，通過干燥填塞的硅膠柱來純化殘余粗產(chǎn)物[EtOAc/己烷(1∶9)；之后負載粗產(chǎn)物，通過用1％Et3N在DCM中的溶液沖洗來中和硅膠]，獲得B1-1，為無色油狀物(42g，97％)。TLC[EtOAc/己烷(1∶9)；Rf＝0.56]。
步驟B1-2. 在氮氣氛下把鎂屑(2.21g，90mmol)加到B1-1(將幾份甲苯從B1-1中蒸發(fā)以除去微量水，22.14g，81.8mmol)在無水THF(從二苯甲酮羰游基鈉中蒸餾的，100mL)中的大約0.8M溶液中。通過加入碘屑(50mg，0.002equiv)來開始反應(yīng)。將反應(yīng)混合物加熱回流2小時，在此期間大部分鎂屑消失。把反應(yīng)冷卻至室溫。在單獨的火焰干燥的圓底燒瓶中，將剛蒸餾的烯丙基溴(6.92mL，81.8mmol)在氮氣氛下用無水THF(50mL)稀釋，并用冰水浴冷卻至0℃。使用插管，用20-30分鐘向其中逐漸加入剛冷卻的格式試劑溶液，以保證未反應(yīng)的鎂屑保留在源燒瓶中。將格式制劑燒瓶的內(nèi)容物洗滌(2×5mL無水THF)，經(jīng)由插管把洗滌液轉(zhuǎn)移到烯丙基溴溶液中。將所得混合物在N2氣氛下攪拌過夜，同時使其逐漸溫熱至室溫。通過加入飽和NH4Cl(水)溶液將反應(yīng)中止，然后用100mL Et2O稀釋，并將層分離。用Et2O(3×100mL)萃取水層，并將合并的有機層用MgSO4干燥，然后減壓濃縮，獲得B1-2(18.54g，98％)。TLC[EtOAc/己烷(1∶9)，Rf＝0.53]。將該材料用于下一步驟而無需進一步純化。
步驟B1.3.2-(2-丙烯基)芐基醇(TB1).把粗THP醚B1-2 (18.54g，80mmol)溶解于MeOH(160mL)，并加入對甲苯磺酸一水合物(PTSA，1.52g，8mmol)。將所得混合物在室溫攪拌過夜，然后減壓濃縮，并將殘余物用Et2O(100mL)稀釋。把有機層相繼用5％NaHCO3(水)溶液(3×50mL)和鹽水(1×50mL)洗滌，然后用MgSO4干燥。將溶劑減壓蒸發(fā)，并將殘余物通過快速色譜法進行純化(EtOAc/己烷，1∶9)，獲得TB1，為淺黃色油狀物(9.2g，78％)。TLC[EtOAc/己烷(1∶9)，檢測UV，PMA；Rf＝0.24] F.合成系鏈(tether)母體RCM-TB2的標準方法
步驟B2-1向MePPh3Br (85.7g，240mmol，2.2eq)在THF(500mL)中的懸浮液中分批加入t-BuOK(26.9g，240mmol，2.2eq)，并將所得混合物在室溫攪拌2小時，在此期間混合物變成黃色。把反應(yīng)混合物冷卻至-78℃，用10分鐘加入2-羥基苯甲醛(B2-0，11.6mL，109mmol，1.0eq)，然后將其在室溫攪拌過夜。用TLC監(jiān)測反應(yīng)進程[EtOAc/己烷(20∶80)；檢測UV，CMA；Rf＝0.25]。加入飽和NH4Cl(水)溶液，并用Et2O(3×)萃取所得水相。將合并的有機相用MgSO4干燥，并減壓濃縮。將殘余物通過快速色譜法純化(EtOAc/己烷，30∶70)，獲得B2-1，為黃色油狀物。用1H NMR證實結(jié)構(gòu)和純度(產(chǎn)率100％)。
步驟B2-2于0℃向醇B2-1(2.0g，16.7mmol，1.0eq)在DMF中的溶液中加入碳酸銫(1.1g，3.34mmol，0.2eq)，并將混合物在0℃攪拌15分鐘。把反應(yīng)溫熱至100℃，并加入碳酸亞乙酯。將所得混合物在100℃攪拌過夜。用TLC監(jiān)測反應(yīng)[EtOAc/己烷(30∶70)；檢測UV，CMA；Rf＝0.21]。把溶液冷卻至室溫，并加入H2O。將所得水層用Et2O(3×)萃取。將有機層用鹽水洗滌(3×)，用MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮。獲得黃色漿液(TB2)(產(chǎn)率96％)，所述產(chǎn)物對于進一步使用來說純度(由NMR評定)是足夠的而無需進一步純化。注意在酸存在的情況下該產(chǎn)物被證明是不穩(wěn)定的。
1H NMR(CDCl3，ppm)7.50(1H，dd，Ph)，7.22(1H，td，Ph)，7.05(dd，1H，PhCH＝CH2)，6.98(1H，t，Ph)，7.90(1H，d，Ph)，5.75(1H，dd，PhCH＝CHH)，5.30(1H.dd，PhCH＝CHH)，4.15-4.10(2H，m，PhOCH2CH2OH)，4.05-3.95(2H，m，PhOCH2CH2OH)，2.05(1H，s，OH). G.合成系鏈(tether)母體RCM-TB3的標準方法
向2’-溴苯乙醇(B3-0，2.0mL，14.9mmol，1.0eq)在甲苯(50mL)中的溶液中加入四(三苯膦)鈀(0)[Pd(PPh3)4，347mg，0.30mmol，0.02eq)和乙烯基三丁基錫(6.5mL，22.4mmol，1.5eq)。將混合物在N2氣氛下回流攪拌24小時。因為原料和產(chǎn)物具有相同Rf，所以用TLC監(jiān)測反應(yīng)進程是很困難的[EtOAc/己烷(30∶70)]。把反應(yīng)混合物冷卻至室溫并加入飽和KF(水)溶液，在此期間形成沉淀物。任選通過過濾除去固體，并用DCM(4x)萃取水相。將合并的有機相用鹽水萃取，用MgSO4干燥并減壓濃縮。將殘余物通過快速色譜法進行純化(EtOAc/己烷，30∶70)，獲得TB3，為無色油狀物。用1H NMR確定結(jié)構(gòu)和純度(產(chǎn)率100％)。
1H NMR(CDCl3，ppm)7.57-7.45(1H，m，Ph)，7.30-7.1 5(3H，m，Ph)，7.05(dd，1H，PhCH＝CH2)，5.65(1H，dd，PhCH＝CHH)，5.32(1H.dd，PhCH＝CHH)，4.85(2H，t，PhCH2CH2OH)，2.98(2H，t，PhCH2CH2OH)，1.50(1H，s，OH). H.合成系鏈(tether)母體RCM-TB4的標準方法
步驟B4-1.把1，2-二氫萘(B4-0，5.0g，38.4mmol，1.0eq)溶解于200mLDCMMeOH(1∶1)中，并將溶液冷卻至-78℃。把臭氧(O3)通入溶液中，直到蘭色出現(xiàn)為止。用TLC監(jiān)測反應(yīng)[EtOAc/己烷(30∶70)；檢測UV，CMA；Rf＝0.25]。然后通過向溶液中通入N2除去過量的O3直到蘭色消失為止。把硼氫化鈉(2.9g，76.8mmol，2.0eq)緩慢加到混合物中，然后將其在室溫攪拌1小時。用TLC監(jiān)測反應(yīng)[EtOAc/己烷(30∶70)；檢測UV，CMA；Rf＝0.06]。緩慢加入飽和NH4Cl(水)溶液，然后用DCM(3×)萃取水相。把合并的有機相用MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮。獲得B4-1，為黃色油狀物(產(chǎn)率100％)。用NMR分析確定結(jié)構(gòu)和純度，并且通常具有足夠純度來使用而無需進一步處理。
步驟B4-2.向二醇B4-1(6.38g，38.4mmol，1.0eq)在苯(200mL)中的溶液中加入MnO2(85％，16.7g，192mmol，5.0eq)，并將所得混合物在室溫攪拌1小時。用TLC監(jiān)測反應(yīng)[EtOAc/己烷(50∶50)；檢測UV，CMA；Rf＝0.24]，每間隔1個小時加入1次MnO2(5eq)直到反應(yīng)完成為止，通常需要2-3次這樣的加入。把MnO2通過硅藻土墊過濾，然后將其用EtOAc洗滌。把合并的濾液和洗滌液減壓蒸發(fā)，獲得B4-2。用1H NMR檢驗所得化合物的純度，所得化合物典型地含有少量雜質(zhì)。然而，對于用于下一步驟來說這是足夠純的，而下一步驟優(yōu)選在同一天進行，因為醛產(chǎn)物(B4-2)具有有限的穩(wěn)定性。
步驟B4-3.向MePPh3Br(30.2g，84.5mmol，2.2eq)在THF(200mL)中的懸浮液中分批加入t-BuOK(9.5g，84.5mmol，2.2eq)，并將所得混合物在室溫攪拌2小時，在此期間溶液變成黃色。把反應(yīng)混合物冷卻至-78℃，用10分鐘加入B4-2[6.3g，38.4mmol，1.0eq(以理論產(chǎn)率為基礎(chǔ))]，然后將混合物在室溫攪拌過夜。用TLC監(jiān)測反應(yīng)[EtOAc/己烷(50∶50)；檢測UV，CMA；Rf＝0.33]。加入飽和NH4Cl(水)溶液，并用EtOAc(3×)萃取所得水相。把合并的有機相用MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮。將殘余物通過快速色譜法進行純化(EtOAc/己烷，40∶60)，獲得TB4，為黃色油狀物。用NMR確定產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)和純度(產(chǎn)率73％，2步)。
1H NMR(CDCl3，ppm)7.55-7.45(1H，m，Ph)，7.25-7.10(3H，m，Ph)，7.05(dd，1H，PhCH＝CH2)，5.65(1H，dd，PhCH＝CHH)，5.30(1H.dd，PhCH＝CHH)，3.70(2H，t，PhCH2CH2CH2OH)，2.80(2H，t，PhCH2CH2CH2OH)，1.90-1.80(2H，m，PhCH2CH2CH2OH)，1.45(1H，s，OH). I.合成系鏈(tether)T45的標準方法
該系鏈(tether)的保護的變型是通過標準轉(zhuǎn)化獲得的，所述轉(zhuǎn)化包括三亞乙基二醇(45-0)的單保護，然后將剩余醇轉(zhuǎn)化成甲磺酸酯，用疊氮化物置換，并且在二碳酸二叔丁酯存在下進行催化還原。
J.合成系鏈(tether)T65的標準方法
參見T9-2的制備，因為該系鏈(tether)實際上是合成系鏈(tether)T9的中間體。
1H NMR(CDCl3)δ7.38-7.35(bd，1H)，7.30-7.19(m，1H)，6.92(dd，2H)，4.88(bs，1H)，4.16-4.11(bt，4H)，3.98-3.95(t，2H)，1.46(s，9H). 13C MR(CDCl3)δ156.7，155.8，133.6，130.0，121.3，114.8，113.1，112，9，90.2，70.8，61.4，28.6 K.合成系鏈(tether)T66的標準方法
在N2氣氛下向炔(Boc-T65，13.1g，45.1mmol，1.0eq)在EtOH/AcOEt(5∶1)中的溶液中加入喹啉(106μl，0.9mmol，0.02eq)和Lindlar催化劑(1.3g，10％wt)，然后向混合物中通入氫氣。用1H NMR監(jiān)測反應(yīng)(每30-40分鐘)直到反應(yīng)完成為止。然后，將反應(yīng)通過硅藻土墊過濾并用AcOEt洗滌直到不再有物質(zhì)洗脫下來為止。減壓除去溶劑。將粗產(chǎn)物通過快速色譜法進行純化，用15％AcOEt/Hex-40％AcOEt/Hex洗脫，獲得Boc-T66，為油狀物。(產(chǎn)率7.8g，59％) TLC(45/55 AcOEt/Hex)Rf0.15；檢測UV，KMnO4。
1H NMR(CDCl3)δ7.27-7.21(td，1H)，7.15-7.10(dd，1H)，7.00.6.85，(m，2H)，6.62-6.58(bd，1H)，5.77-5.70(dt，1H)，4.13-4.03(m，2H)，3.97-3.95(m，2H)，3.9-3.88(bd，2H)，1.46，(s，9H) L.合成系鏈(tether)T67的標準方法
于-20℃向Et2Zn(1 M在己烷中的溶液，153mL，153.6mmol，3.0eq)在CH2Cl2(150mL)中的溶液中加入CH2I2(12.4mL，153.6mmol，3.0eq)(小心可以產(chǎn)生壓力)，并將混合物在-20℃攪拌15分鐘。然后加入Boc-T8(15.0g，51.2mmol，1.0eq)在CH2Cl2(100mL)中的溶液，并將混合物在室溫攪拌過夜。用TLC監(jiān)測反應(yīng)[(60％AcOEt40％己烷)；檢測UV和CMA；Rf＝0.39]。將溶液用NH4Cl(飽和)水溶液處理，并用CH2Cl2萃取水相。將有機相用MgSO4干燥并減壓濃縮。將殘余物通過快速色譜法進行純化(60％AcOEt40％己烷)，獲得Boc-T67，為黃色油狀物(產(chǎn)物57％)。
1H NMR(CDCl3，ppm)7.18(1H，t)，7.03(1H，d)，6.88(2H，t)，4.23-4.04(4H，m)，3.73-3.70(2H，m)，1.48(1H，寬)，1.28(9H，s)，1.12-1.06(1H，m)，1.0-0.93(1H，m)，0.76(2H，dt). M.合成系鏈(tether)T68的標準方法
于-20℃向Et2Zn(1M在己烷中溶液，49.2mL，49.2mmol，3.0eq)在CH2Cl2(30mL)中的溶液中加入CH2I2(3.9mL，49.2mmol，3.0eq)，并將混合物在-20℃攪拌15分鐘。然后緩慢加入烯(Boc-T66，4.8g，16.4mmol，1.0eq)在CH2Cl2(50mL)中的溶液，并將混合物在室溫攪拌2小時。將溶液用NH4Cl(飽和)水溶液處理，并將水相用CH2Cl2(1x)萃取，然后用鹽水(1x)洗滌。將有機相用MgSO4干燥，過濾并減壓除去溶劑。將粗產(chǎn)物通過快速色譜法進行純化(梯度40％，然后50％，最后60％AcOEt在己烷中的混合物)，獲得Boc-T68，為黃色油狀物(產(chǎn)率90.7％)。TLC(60％AcOEt40％己烷)Rf0.4；檢測UV，茚三酮。
1H NMR(CDCl3)δ7.32-7.20(td，2H)，7.10-6.85，(m，2H)，4.25-4.13(m，2H)，4.10-3.99(m，2H)，3.41-3.36(dd，1H)，2.15-2.02(m，1H)，1.38(s，9H)，1.04-0.96(dq，1H)，0.78-0.73(q，1H) 13CNMR(CDCl3)δ158.0，130.7，130.4，127.9，127.5，127.1，121.2，121.0，111.6，111.2，79.5 69.8，61.5，28.7，17.8，16.8，7.2 N.合成系鏈(tether) T69的標準方法
TLC(25/75 AcOEt/Hex)Rf0.03；檢測UV，茚三酮 1H NMR(CDCl3)δ7.06-7.00(bt，1H)，6.61-6.52(m，4H)，6.35(m，1H)，5.12(bt，1H)，4.03(m，2H)，3.95(m，2H)，3.77(s，6H)，3.11-3.04(bq，2H)，2.60(bt，2H)，1.75(m，8H) 13C NMR(CDCl3)δ163.9，160.9，160.6，157.6，157.5，155.6，149.5，130.8，130.6，125.9，107.26，106.9，103.2，98，4，80.8，77.5，69.9，61，3，60.9，60.6，55，4，40.3，30.4，29.3，26.9， LC-MS(Grad_A4)tR8.37min O.合成系鏈(tether)T70的標準方法
TLC(25/75 AcOEt/Hex)Rf0.03；檢測UV，茚三酮 1H NMR(CDCl3)δ6.84-6.75(m，3H)，6.52(bs，2H)，6.34(m，1H)，5.17(bt，1H)，4.01(M，2H)，3.93(M，2H)，3.77(s，6H)，3.10(bq，2H)，2.63(BT，2H)，1.74(m，8H) 13C NMR(CDCl3)δ160.9，158.9，155.8，155.6，152.9，152.9，149.5，132.4，132.3，117.1，116.8，112.7，112.6，103.2，98.4，80.8，70.4，61.6，55.5，40.2，30.3，29.3，27.4. LC-MS(Grad_A4)tR8.29min P.合成系鏈(tether)T71的標準方法
TLC(25/75 AcOEt/Hex)Rf0.03；檢測UV，茚三酮 1H NMR(CDCl3)δ7.12-7.08(bd，2H)，6.76-6.73(d，1H)，6.52(m，2H)，6.33(bs，1H)，5.15(bt，1H)，4.02(m，2H)，3.95(m，2H)，3.79(s，6H)，3.09(bq，2H)，2.61(bt，2H)，1.74(m，8H) 13C NMR(CDCl3)δ160.8，155.6，155.4，149.5，132.4，130.1，127.0，126.0，112.8，103.2，98.4，80.8，70.0，61.4，55.5，40.3，30.2，29.3，24.5，27.4LC-MS(GraD_A4)tR9.60min Q.合成系鏈(tether) T72的標準方法
TLC(1/1，Hex/AcOEt)Rf 0.16 1H NMR(ppm)1.49(Boc)，1.8(CH2)，2.7(CH2)，3.1(CH2)，4.0(CH2)，4.1(CH2)，4.9(NH)，6.9(CH芳族)，7.35(CH芳族)，7.4(CH芳族) 13C NMR(ppm)29，30，40，61，70，110，124，128，132，160 R.合成系鏈(tether) T73的標準方法
TLC(60/40 AcOEt/Hex)Rf0.11；檢測UV，茚三酮 1H NMR(CDCl3)δ7.06-6.99，(m，2H)，6.84-6.81(M，1H)，6.5(m，2H)，6.32(m，1H)，5.11(bt，1H)，4.07(m，2H)，3.90(bt，2H)，3.79(s，6H)，3.39(s，3H)，3.09(bt，2H)，2.64(bt，2H)，1.85-1.74(m，8H)，1.46(bs，9H) 13C NMR(CDCL3)δ160.8，157.1，155.6，151.9，149，5，131.3，131.0，128.43，128.37，111.6，103.2，98.4，84.8，80.8，69.9，61.4，60.6，55.5，41.8，40.2，30.0，29.3，28.1，27.3ppm. LC-MS(Grad_A4)tR8.26min. S.合成系鏈(tether)T74標準方法
TLC(50/50 AcOEt/Hex)R-f0.09；檢測UV，CMA 1H NMR(DMSO-d6)δ7.14(bd，1H)，6.76-6.71(M，2H)，6.53(m，2H)，6.33(bs，1H)，5.15(bt，1H)，4.08(m，2H)，3.95(m，2H)，3.79(s，6H)，3.41(s，3H)，3.01(bq，2H)，2.64(bt，2H)，1.75(m，8H)，1.47(s，9H) 13C NMR(DMSO-d6)δ156.1，152.3，150.8，147.0，144.7，129.8，126.9，125.6，116.8，108.4，98.5，93.6，80.3，76.1，65.1，56.7，50.7，37.1，35.6，25.3，24.5，23.4，22.6 LC-MS(Grad_A4)tR8.21min T.合成系鏈(tether) T75a和T75b的標準方法
從33-A[(S)-乳酸甲酯]和適當取代的酚75-0開始，用與相關(guān)系鏈(tether)T33類似的方法，進行氟化衍生物系鏈(tether)T75的制備，獲得4.1g Ddz-T75a，為淺黃色固體。雖然第一個兩步，Mitsunobu反應(yīng)和DIBAL還原是高產(chǎn)率的，分別為91％和98％，但是在Sonagashira偶聯(lián)和氫化后，最終產(chǎn)物的分離證明是很困難的，使總產(chǎn)率降低至17％。而且，通過在上面方法中用(R)-乳酸甲酯(33-B)代替，可以獲得相應(yīng)的(R)-對映體，Ddz-T75b。

U.合成系鏈(tether)T76的標準方法
步驟T76-1.3-溴-2-羥基-苯甲醛。用類似于文獻(Hofslokken等人.Acta.Chemica Scand.1999，53，258)的方法，將攪拌著的2-溴苯酚(76-0，3.5g，20mmol)和多聚甲醛(8.1g，270mmol)在100mL無水乙腈中的懸浮液于室溫用MgCl2(2.85g，30mmol)和三乙胺(TEA，10.45ml，75mmol)處理。將混合物劇烈攪拌回流過夜。在此時間以后，把混合物冷卻至室溫，然后加入30mL 5％HCl，并將產(chǎn)物用Et2O提取，獲得4.0g(95％)76-1。
TLC(己烷/二氯甲烷，3∶1)Rf＝0.3；檢測CMA和UV步驟76-2.2-溴-6-乙烯基-酚. 于室溫用5分鐘向攪拌著的CH3PPh3Br(72g，0.033mol)的溶液加入tBuOK(4.1g，0.03mol)在THF(50mL)中的溶液。將混合物冷卻至-78℃，并用15分鐘滴加76-1(3g，0.015mol)。把反應(yīng)混合物溫熱至室溫并攪拌24小時。在此時間以后，真空中除去溶劑，并將殘余物通過快速色譜法純化，用己烷/二氯甲烷(3∶1)作為洗脫劑，獲得76-2，為無色油狀物(2.2g，75％)。
TLC(己烷/二氯甲烷，3∶1)Rf＝0.5；檢測CMA和UV步驟76-3.用文獻方法(Buono等人.Eur.J.Org.Chem.1999，1671)合成甲苯磺酸鹽76-A，并用于制備76-3(Manhas，M.S.J.Am.Chem.Soc.1975，97，461-463.Nakano，J.Heterocycles 1983，20，1975-1978)。向76-2(2.5g，12mmol)、Ph3P(4.6g，18mmol)和76-A(4.3g，18mmol)在150mL THF中的溶液中，于室溫緩慢加入偶氮二羧酸二乙酯(DEAD，3.5mL，18mmol)。將混合物在室溫攪拌6小時，直到TLC分析指示反應(yīng)完成為止(己烷/乙酸乙酯，8∶2；Rf＝0.6；檢測CMA和UV)。在高真空下除去溶劑，并將殘余物通過快速色譜法進行純化，獲得76-3，為淺褐色液體(4.6g，88％)。
步驟76-4.將76-3(3.4g，8mmol)用第二代Grubbs催化劑(0.02mol％)在50mL DCM中處理(Grubbs，R.J.Org.Chem.1998，63，864-866.Gross，J.Tet.Lett.2003，44，8563-8565.Hoveyda，A.J.Am.Chem. Soc.1998，120，2343-2351)。將所得混合物在室溫攪拌12小時。然后在高真空下除去溶劑，并將殘余物通過快速柱色譜法進行純化，獲得76-4，為淺褐色液體(2.15g，70％)。TLC(己烷/乙酸乙酯，8∶2；Rf＝0.4；檢測CMA和UV)。
步驟76-5.在氬氣氛下向76-4(1.43g，0.023mol)在無水DMF(50mL)中的溶液中加入乙酸銫(2.09g，0.0109mol)。將溶液在50℃攪拌過夜。在此時間以后，在高真空下除去溶劑，并將殘余物通過快速色譜法進行純化，獲得76-5，為淺褐色液體(0.7g，70％)。TLC(己烷/乙酸乙酯，8∶2；Rf＝0.6；檢測CMA和UV)。
步驟76-6.(8-溴-2H-色烯-2-基)-甲醇.在氬氣氛下向76-5(5.5g，0.023mol)在無水MeOH(150mL)中的溶液中加入催化量的鈉金屬。然后將溶液在室溫攪拌60分鐘。在此時間后，加入Amberlite IRA-120(H+)樹脂以中和(Ph＝7)過量的甲醇鈉，并將混合物劇烈攪拌10分鐘。過濾除去樹脂，并將濾液真空蒸發(fā)。獲得純的化合物76-6，為無色油狀物(4.5g，98％)。
TLC(己烷/乙酸乙酯，7∶3)Rf＝0.3；檢測CMA和UV步驟76-7.把76-6(4.5g，18mmol)和Ddz-炔丙胺(76-B，15.16g，55.8mmol)溶解于二烷(150mL)和二異丙基胺(27mL)中。通過向溶液中通入氬氣將該反應(yīng)混合物脫氣。加入PdCl2(PhCN)2(430mg，1.11mmol，0.06eq)、CuI(220mg，1.11mmol，0.06eq)和三丁膦(10％己烷中的溶液，4.4mL，2.23mmol)，將混合物溫熱至70℃并攪拌過夜。在高真空下去除溶劑，并將殘余物通過快速柱色譜法進行純化，獲得76-7為淺褐色液體(3.2g，80％)。
TLC(己烷/乙酸乙酯，1∶1)Rf＝0.3；檢測CMA和UV步驟76-8.把乙炔76-7(4.5g，0.2mol)溶解于EtOH(150mL)中，然后用氮氣吹掃10分鐘。加入PtO2(10mol％，450mg)，并將混合物用充滿氫氣的氣囊吹掃。然后將該混合物加到Parr彈內(nèi)，用氫氣吹掃(用60psi的氫氣簡單填充，然后釋放和再填充，重復(fù)該填充—釋放—再填充循環(huán)3次)，并在60psi下于室溫與氫氣反應(yīng)過夜。將反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾(用甲醇洗滌硅藻土墊)，并將濾液濃縮，以定量產(chǎn)率獲得基本上純的(干凈的1H NMR)但有色的Ddz-T76的樣本。將該材料通過快速色譜法進行進一步純化。TLC(己烷/乙酸乙酯，1∶1；Rf＝0.3；檢測CMA和UV)。因為產(chǎn)物Ddz-T76具有與起始材料(76-7)相同的Rf，所以1H NMR是辨別它們的最佳方式。
1H NMR(CDCl3)δ1.73(s，6H)，1.75-1.95(m，4H)，2.60(m，2H)，2.70-2.90(m，2H)，3.10(m，2H)，3.72(s，6H)，3.75(m，2H)，4.12(m，1H)，5.20(m，1H)，6.35(s，1H)，6.50(s，2H)，6.80(m，1H)，6.90(m，2H). 13C NMR(CDCl3)δ23.93(CH2)，24.97(CH2)，27.07(CH2)，29.35(CH3)，30.45(CH2)，40.23(CH2)，55.47(CH3)，65.76(CH2)，80.72(CH)，98.44(CH)，103.22(CH，120.29(CH)，121.90(Cq)，127.76(CH)，128.14(CH)，129.42(Cq)，149.56(Cq)，152.55(Cq)，155.56(Cq)，160.84(Cq). LC-MS(Grad_A4)tR9.46分；質(zhì)量實測值443 V.合成系鏈(tether) T77的標準方法
步驟T77-1.3-溴-吡啶-2-醇.將攪拌著的2-吡啶酮(77-0，19g，200mmol)在200mL 1M KBr水溶液中的懸浮液，于室溫用15分鐘加入溴(32g，200mmol；當心大量的Br2應(yīng)當謹慎地操作！)在200mL1M KBr水溶液中的混合物來進行處理，然后在室溫劇烈攪拌過夜。24小時后，該溶液沉淀出晶體，過濾去晶體，然后從乙腈中重結(jié)晶，獲得27.2g(78％)3-溴-吡啶-2-醇(77-1)[J.Am. Chem.Soc.1982，104，4142-4146；Bioorg.Med.Chem.Lett.2002，12，197-200；JMed Chem.1979，22，1284-1290.] C5H4BrNO的計算分子量173；(M+H)+實測值174步驟T77-2.于室溫向3-溴-吡啶-2-醇(77-1，5g，0.028mol)、Ph3P(11g，0.04mol)和2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-乙醇(77-A，7g，0.04mol)在50mL THF中的溶液中，緩慢加入疊氮二羧酸二乙酯(8.1g，0.04mol)。該反應(yīng)進程可以很容易地用TLC進行監(jiān)測[己烷/乙酸乙酯(4∶1)；Rf＝0.5；檢測CMA]。將混合物在室溫攪拌24小時，在此時間點TLC指示反應(yīng)完成。在高真空下除去溶劑，并將殘余物通過快速色譜法進行純化，獲得77-2，為淺褐色液體(6.3g，68％).[Tetrahedron Lett.1994，35，2819-2822；Tetrahedron Lett.1995，36，8917-8920；Synlett，1995，845-846.Heetrocycles 1990，31，819-824. C13H22BrNO2Si的計算分子量331；(M+H)+實測值332步驟T77-3。把保護的醇77-2(3g，9.1mmol)溶解于二異丙基胺(50mL)中，并通過向溶液中通入氬氣將反應(yīng)混合物脫氣。加入PdCl2(PPh3)2(410mg，0.61mmol，0.06eq)、CuI(74mg，0.4mmol，0.04eq)和三苯膦(310mg，1.12mmol)，然后把混合物溫熱至70℃并攪拌過夜。在高真空下除去溶劑，并將殘余物通過快速色譜法進行純化，獲得77-3，為淺褐色液體(3.36 g，70％)[Org.Lett.2003，5，2441-2444；J.Chem.Soc.Perkin.Trans I 1999，1505-1510；J.Org.Chem..1993，58，2232-2243；J Org.Chem.1 999，58，95-99；Org.Lett.2000，2，2291-2293；Org.Lett. 2002，4，2409-2412] TLC(己烷/乙酸乙酯，1∶3)Rf；＝0.3；檢測CMA C28H40N2O6Si分子量的計算值528；(M+H)+實測值529步驟T77-4.把乙炔77-3(3g，5.67mmol)溶解于EtOH(30mL)中，并用氮氣吹掃10分鐘。加入PtO2(10mol％，300mg)，并將混合物用充滿氫氣的氣囊吹掃。然后將該混合物加到Parr彈內(nèi)，用氫氣吹掃(用80psi的氫氣簡單填充，然后釋放和再填充，重復(fù)該填充—釋放—再填充循環(huán)3次)，，并在80psi下于室溫用氫氣保持過夜。將反應(yīng)混合物通過硅藻土墊過濾(用甲醇洗滌硅藻土上的殘余物)，并將濾液和洗滌液減壓濃縮，以定量產(chǎn)率獲得基本上純的(干凈的1H NMR)但是有色的77-4樣本。通過快速色譜法將材料進行進一步純化。產(chǎn)物77-4具有與起始材料(77-3)相同的Rf。所以，1H NMR是辨別它們的最佳方式。
TLC[(己烷/乙酸乙酯，1∶3)；Rf；＝0.3；檢測CMA] C28H44N2O6Si的計算分子量532，(M+H)+實測值533步驟T77-5.把77-4(3g，5.6mmol)溶解于無水THF(200mL)中。向該清澈溶液中加入TBAF(6.7mmol，7mL)，并將混合物在室溫攪拌2小時。然后溶液倒入冰水中。將該水溶液用二氯甲烷(3×200mL)萃取。將有機層相繼用飽和檸檬酸鹽緩沖液(1×200mL)、水(200mL)和鹽水(200mL)洗滌。把洗滌的有機萃取液用無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓蒸發(fā)至干，獲得油狀殘余物。將該漿液通過快速色譜法進行純化(己烷/AcOEt，1∶2)，獲得Ddz-T77，為漿液狀物(2.10g，產(chǎn)率90％)。
TLC(己烷/AcOEt，1∶2)Rf＝0.3；檢測茚三酮 1H NMR(CDCl3)δ1.73(s，6H)，1.75(m，2H)，2.65(m，2H)，3.15(m，2H)，3.75(s，6H)，3.90(m，2H)，4.50(m，2H)，5，01(sb，1H)，6.30(s，1H)，6.50(s，2H)，6.80(m，1H)，7.40(m，1H)，8.01(m，1H). 13C NMR(CDCl3)δ27.23(CH2)，29.24(CH3)，29.71(CH2)，40.17(CH2)，55.44(CH3)，62.76(CH2)，69.11(CH2)，80.76(Cq)，98.24(CH)，103.24(CH)，117.54(CH)，124.68(Cq)，138.82(CH)，144.17(CH)，149.45(Cq)，155.50(Cq)，160.84(Cq)，162.03(Cq). C22H30N2O6的計算分子量418；(M+H)+實測值419 實施例2 合成代表性大環(huán)化合物 下面提供本發(fā)明大環(huán)化合物的代表性實例。對于固相方法來說，除非另外指示，所有產(chǎn)率都是從300-325mg PS-氨基甲基樹脂(負載量2.0mmol/g)開始報道的。對于更困難的殘基，第一個構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)，BB3的連接在100％至55％之間變化，通常是立體阻礙結(jié)構(gòu)例如Ile或Val。 BB2和BB1的其余偶聯(lián)以80-90％的平均產(chǎn)率進行。使用Mitsunobu反應(yīng)的系鏈(tether)的連接以50-90％的產(chǎn)率得到所需直鏈前體。大環(huán)合本身以20-50％的平均產(chǎn)率進行。在環(huán)合后加工中發(fā)生最小程度的產(chǎn)率損失。
本文中給出的所有保留時間值都是基于HPLC數(shù)據(jù)的UV部分。在HPLC操作中，也獲得ELSD和CLND數(shù)據(jù)(未列出)來進一步評估終產(chǎn)物的純度和用于定量分析(CLND)。所有化合物是用相同HPLC條件分析的。關(guān)于所用HPLC的細節(jié)如下柱XTerra MS C18 4.6×50mm，3.5μm，得自Waters，HPLCAlliance 2695，得自Waters；MSPlatform LC from Micromass/Waters；CLND8060，得自Antek；PDA996，得自Waters；梯度_B4(i)0-50％MeOH0.1％TFA水溶液，6分鐘，(ii)3分鐘，50％MeOH0.1％TFA水溶液；(iii)50-90％MeOH0.1％TFA水溶液，5分鐘；(iv)3分鐘，90％MeOH0.1％TFA水溶液。列出化合物的保留時間(tR)。
對于化合物58、99、201、203和215，對標準方法進行改變。
化合物1 產(chǎn)率獲得33.4mg純大環(huán)(CLND定量分析)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.53，8.41，8.34(二重峰J＝8.7Hz for all，1H)；8.13-8.06，7.82-7.75(多重峰，1H)；7.30-7.05(M，8h)；6.90-6.77(M，2H)；4.58-4.46，4.40-4.29，4.27-4.16(多重峰，1H)；4.09-3.99，3.97-3.82(多重峰，2H)；3.77-3.44(m，2H)；3.37-3.19(m，4H)；3.15，3.08(2s，2H)；2.98-2.86(m，5H)；2.52(s，3H)；1.94-1.75，1.60-1.30(多重峰，2H)；1.22(br s，4H)；0.86-0.75(m，3H). HRMS計算 C29H40N4O4；508.3049；實測508.3040±0.0015. HPLC tR＝8.94min. 化合物3 產(chǎn)率獲得33.0mg純大環(huán)(CLND定量分析)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.54(d，J＝9.4Hz)，8.43-8.36(m)，和8.12(brt，J＝5.65 Hz)(1H)；7.90(d，J＝6.6Hz)，7.79-7.72(m)(1H)；7.30-7.05(m，6H)；6.90-6.76(m，3H)；4.60-4.50(m)，4.43(d，J＝18.3Hz)，4.26-4.16(m)(1H)；4.13-4.02(m，1H) ；4.01-3.84(m，2H)；3.74-3.41(m，2H)；3.17，3.09(2s，3H)；2.99-2.86(m，5H)；2.43-2.18(m，1H)；97-1.75(m，3H)；1.72-1.39(m，1H)；0.96(d，5.76Hz，3H)；0.93-0.77(m，2H)；0.68(d，5.76Hz，3H). HRMS計算 C28H38N4O4；494.2893；實測494.2888±0.0015. HPLC tR＝8.11min. 化合物4 產(chǎn)率獲得15.3純大環(huán)(CLND定量分析)。
1H NMR(300MHz，CD3CN)δ7.48-7.19(m，6H)；7.13-6.98(m，3H)；4.71-4.51(m，3H)；4.48-4.32(m，1H)；4.26-4.01(m，1H)；3.79-3.57(m，2H)；3.48-3.20(m，3H)；3.19-3.06(m，5H)；3.01-2.89(m，2H)；2.80-2.62(m，2H)；2.09-1.96(m，3H)；1.94-1.70(m，1H)；1.57-1.36(m，4H)；1.32-1.26(m，1H)；1.08-0.97(m，3H). HRMS計算C29H40N4O4；508.3049；實測508.3045±0.0015 HPLC tR＝8.37min 化合物6 產(chǎn)率獲得28.2mg純大環(huán)(CLND定量分析)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.80(s，1H)；8.46(d，J＝9.65Hz)，8.36-8.28(m)，8.14-8.07(m)，和8.02(d，J＝9.65Hz)(1H)；7.73-7.65(m)，7.59(d，8.2Hz)，和7.51(d，J＝8.2Hz)(1H)；7.3(d，J＝8.2Hz，1H)；7.16-6.91(m，5H)；6.89-6.76(m，2H)；4.62-4.49(m)和4.42-4.24(m)(1H)；4.15-3.81(m，2H)；3.77-3.43(m，2H)；3.41-3.19(m，6H)；3.22-2.85(m，6H)；2.52(s，3H)；1.89-1.69(m，1H)；1.59-1.02(m，4H)；0.88-0.74(m，3H). HRMS計算 C30H39N5O4；533.3002；實測533.2990±0.0016. HPLC tR＝8.22min. 化合物8 產(chǎn)率由600-650mg起始樹脂獲得74.9mg純大環(huán)(CLND定量分析)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.47(br s)，9.07(s)(1H)和8.32(br s)(2H)；7.94(d，6.6Hz，1H)；7.60-7.42(m，2H)；7.38(d，9.0Hz，1H)；7.28-7.04(m，7H)；6.93(t，8.1Hz，1H)；6.60(d，J＝14.4Hz)和6.39-6.27(m)(1H)；4.51-4.38(m，1H)；4.29-4.08(m，2H)；3.87-3.63(m，2H)；3.40-3.13(m，2H)；2.94(t，J＝14.1Hz，1H)；2.53-2.50(m，1H)；2.32-2.17(m，1H)；1.86-1.06(m，10H)；0.95-0.79(m，6H). HRMS計算 C32H42N4O4；546.3206；實測546.3198±0.0016. HPLC tR＝9.02min. 化合物9 產(chǎn)率獲得33.7mg純大環(huán)(CLND定量分析)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ 8.48(s，1H)；7.92(d，J＝5.3Hz，1H)；7.81(d，J＝8.5 Hz，1H)；7.26-7.08(m，7H)；6.88-6.75(m，2H)；4.30(br t，J＝10.1Hz，1H)；4.0(t，J＝8.6Hz，1H)；3.87(br d，J＝8.6Hz，1H)；3.70-3.58(m，1H)；3.4-3.25(m，1H)；3.04-2.85(m，3H)；2.73(d，7.67Hz，1H)；2.53(s，3H)；2.35-2.09(m，2H)；1.92-1.44(m.8H)；1.42-1.18(m，2H)；0.85，0.81(2二重峰，J＝6.76Hz，6H). 13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ176.15；173.20；171.27；157.18；140.08；130.72；130.52；129.71；128.64；127.87；126.62；120.88；111.44；68.29；67.10；66.99；55.24；48.42；41.11；41.03；39.36；36.93；35.77；34.65；32.38；30.55；29.96；23.83；22.65；19.87. HRMS 計算C31H42N4O4；534.3206；實測534.2139±0.0016. HPLC tR＝9.29min. 化合物10 產(chǎn)率獲得19.2mg純大環(huán)(CLND定量分析)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.53，8.41，8.38(二重峰，J＝8.8，8.5，8.5Hz，1H)；8.16-8.05，7.87-7.71(多重峰，1H)；7.31-7.04(m，7H)；6.91-6.75(m，2H)；4.60-4.45，4.39-4.30，4.28-4.16(m，1H)，4.10-4.00，3.97-3.83(m，2H)；3.73-3.46(m，2H)；3.22-3.20(m 1H)，3.16，3.09(2s，3H)，2.45-2.39(m，1H)；2.99-2.86(m，1H)；2.85-2.58(m，5H)；2.48-2.22(m，1H)；2.07(s，1H)，1.95-1.78(m，1H)，1.75-1.42(m，1H)，1.42-1.17(m，4H)，0.88-0.77(m，3H). HRMS計算C28H38N4O4；494.2893；實測494.2888±0.0015 HPLC tR＝8.27min. 化合物221 產(chǎn)率獲得50.3mg純大環(huán)(CLND定量分析)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.86(d，J＝6.7Hz)和7.65-7.58(m)(1H)；7.28-7.06(m，7H)；6.88(d，8.06Hz，1H)；6.81(t，J＝6.7Hz，1H)；4.07-3.91(m，3H)；3.77-3.65(m，1H)；3.56-3.38(m，2H)；3.35-3.25(m，3H)；3.25-3.07(m，2H)；3.04-2.63(m，3H)；2.52(s，3H)；2.01-1.71(m，4H)；1.66-1.49(m，2H)；1.47-1.17(m，4H)；0.90-0.78(m，3H). 13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ172.15；170.81；170.74；157.29；139.62；130.76；130.56；129.56；128.82；61.73；59.29；56.37；47.90；41.11；41.03；39.36；35.81；35.43；30.23；30.03；29.63；25.12；19.15；14.66. HRMS 計算C30H40N4O4；520.3049；實測520.3041±0.0016. HPLC tR＝8.30分. 實施例3 另外的合成策略 下面論述適合于本發(fā)明化合物的大規(guī)模合成的另外的合成策略。
A.典型大規(guī)模合成本發(fā)明化合物的方法LS1
步驟LS1-A合成LS1-8
向醇Cbz-T33a(2.4g，7.0mmol，1.0eq)在CH2Cl2(50mL)中的溶液加入NBS(1.5g，8.4mmol，1.2eq)和PPh3(2.2g，8.4mmol，1.2eq)。將該混合物在室溫攪拌過夜，并加入飽和NH4Cl水溶液。用CH2Cl2(2x)萃取水相，并用飽和NH4Cl水溶液萃取合并的有機相以除去琥珀酰亞胺副產(chǎn)物。將有機相用MgSO4干燥，并減壓濃縮。將殘余物通過快速色譜法進行純化(20％AcOEt，80％己烷)，獲得溴化物LS1-8a，為黃色油狀物(2.6g，91％)。
TLC(30％AcOEt，70％ 己烷)；Rf＝0.56；檢測UV和CMA 1H NMR(CDCl3)δ 7.37-7.26(5H，m，Ph)，7.19-7.13(2H，m，Ph)，6.90(1H，t，Ph)，6.83(1H，d，Ph)，5.10(2H，s，NHC(O)OCH2Ph)，4.96(1H，寬，NHCbz)，4.59(1H，六重峰，PhOCH(CH3)CH2Br)，3.58-3.47(2H，m，CH2Br)，3.19(2H，q，CH2NHCbz)，2.67(2H，t，PhCH2CH2)，1.78(2H，五重峰，PhCH2CH2)，1.44(3H，d，CHCH3). LC/MS(Grad_A4)tR＝11.15分 步驟LS1-B1合成LS1-10
把H-Nva-OMe的鹽酸鹽溶解于Na2CO3水溶液(1M)中，用NaCl飽和以保證提取出所有游離胺。用AcOEt(3×)萃取水溶液。將合并的有機相用鹽水萃取，用MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮。以90％的產(chǎn)率收集到了游離胺H-Nva-OMe。用游離胺(H-Nva-OMe)進行烷基化，以消除作為副反應(yīng)的氯化物的形成(OTs轉(zhuǎn)化成Cl)是重要的。在干燥的圓底燒瓶中，加入溴化物LS1-8a(740mg，1.83mmol，1.0eq)和H-Nva-OMe(479mg，3.60mmol，2.0eq)。加入脫氣的(通過在真空下攪拌30分鐘)DMF(3.7mL)、無水Na2CO3(232mg，2.19mmol，1.2eq)和KI(61mg，0.37mmol，0.2eq)，并將化合物在110℃攪拌過夜。加入水，并用Et2O(3×)萃取水相。將合并的有機相用水(2×)然后用鹽水(1x)萃取。將有機相用MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮。將殘余物通過快速色譜法進行純化(30％AcOEt70％己烷)，獲得仲胺LS1-10，為黃色油狀物(709 mg，85％)。
TLC(30％AcOEt，70％己烷 )；Rf＝0.32；檢測UV和CMA， 1H NMR(CDCl3)δ7.35-7.29(5H，m，Ph)，7.17-7.12(2H，m，Ph)，6.91-6.84(2H，m，Ph)，5.51(1H，寬 ，CH2NHCHRR’)，5.09(2H，s，OCH2Ph)，4.67-4.51(1H，m，PhOCH(CH3)R)，3.65(3H，s，C(O)OCH3)，3.24-3.10(3H，m，NHCH(Pr)CO2Me和CH2NHCbz)，2.87-2.41(4H，m，PhCH2CH2和NHCH2CH(Me)OPh)，1.86-1.76(2H，m，PhCH2CH2)，1.70-1.63(2H，m，CH3CH2CH2)，1.36-1.28(2H，m，CH3CH2CH2)，1.23(3H，d，CHCH3)，0.90(3H，t，CH3CH2CH2). 13C NMR(CDCl3)δ176.44，156.88，155.58，137.14，131.16，130.57，128.68，128.34，128.21，127.33，120.79，112.62，73.16，66.62，61.30，54.21，51.95，40.86，36.02，30.60，27.88，19.20，17.80，14.07. LC/MS(Grad_A4)tR＝6.76分 步驟LS1-B2LS1-10的其它合成方法 向醇Cbz-T33a(8.5g，24.7mmol，1.0eq)在CH2Cl2(125mL)的溶液中加入Et3N(10.4mL，74.1mmol，3.0eq)、TsCl(5.2g，27.2mmol，1.1eq)和DMAP(302mg，2.47mmol，0.1eq)。將混合物在室溫攪拌過夜，然后加入飽和NH4Cl水溶液。用CH2Cl2(2x)萃取水相，并將合并的有機相用MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮。將殘余物通過快速色譜法進行純化(30％AcOEt，70％己烷)，獲得甲苯磺酸鹽LS1-8b，為油狀物(9.4g，90％)。
TLC(50％AcOEt，50％己烷 )；Rf＝0.47；檢測UV和CMA 1H NMR(CDCl3)δ7.74(2H，d，Ph)，7.36-7.26(7H，m，Ph)，7.1 4-7.08(2H，m，Ph)，6.88(1H，t，Ph)，6.74(1H，d，Ph)，5.10(2H，s，NHC(O)OCH2Ph)，4.97(1H，寬，NHCbz)，4.61-4.55(1H，m，PhOCH(CH3)CH2OTs)，4.19-4.05(2H，m，CH2OTs)，3.15(2H，q，CH2NHCbz)，2.56(2H，td，PhCH2CH2)，2.42(3H，s，PhCH3)1.74(2H，五重峰，PhCH2CH2)，1.27(3H，d，CHCH3) 13C NMR(CDCl3)δ156.67，155.05，145.20，137.04，133.02，131.16，130.65，130.11，128.72，128.28，128.23，128.10，127.39，121.50，112.87，71.99，71.42，66.68，40.79，30.32，27.57，21.87，16.74. LC-MS(Grad_A4)tR＝11.02分 用步驟LS1-B1中的方法，用甲苯磺酸鹽LS1-8b作為烷基化劑，以73％的產(chǎn)率獲得LS1-10，并且2當量H-Nva-OMe。
步驟LS1-C1合成LS1-7
向胺LS1-10(697mg，1.53mmol，1.0eq)在THF/H2O(1∶1，15mL)中的溶液中于0℃加入Na2CO3(244mg，1.68mmol，1.5eq)和(Boc)2O(366mg，1.68mmol，1.1eq)，然后將混合物在室溫攪拌36-48小時。將THF減壓蒸發(fā)，并用Et2O(3×)萃取水相。將合并的有機相用鹽水萃取，用MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮。獲得Boc化合物，為黃色油狀物，將其無需純化用于下一步反應(yīng)。
TLC(30％AcOEt，70％己烷)Rf＝0.49；檢測UV和CMA 向粗Boc化合物在THF/H2O(1∶1，15mL)中的溶液中加入LiOH(309mg，7.35mmol，5.0eq)，并將混合物在室溫攪拌過夜。將THF減壓蒸發(fā)，然后將剩余堿性水相用1M HCl酸化至pH 3(pH試紙)。用AcOEt萃取水相，并將合并的有機相用水和鹽水萃取。將有機相用MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮。獲得羧酸LS1-7，為黃色油狀物(687mg，83％，2步)。
TLC(50％AcOEt，50％己烷)；Rf＝0.32；檢測UV和CMA 13C NMR(CDCl3)δ176.11，156.81，155.51，155.18，136.93，131.13，130.37，128.72，128.31，127.44，121.20，113.70，81.36，73.40，66.79，61.99，40.80，32.83，31.56，30.33，28.48，27.48，20.10，17.53，14.11. LC/MS(Grad_a4)tR＝12.50分 步驟LS1-C2另一合成途徑(沒有胺保護)
把H-Nva-OtBu·HCl溶解于Na2CO3水溶液(1M)中，并且用NaCl飽和以保證提取出所有游離胺。用AcOEt(3×)萃取該水溶液。將合并的有機相用鹽水萃取，用MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮。以約90％的產(chǎn)率收集到了游離胺H-Nva-OtBu。用游離胺(H-Nva-OtBu)進行烷基化，以消除作為副反應(yīng)的氯化物的形成(OTs-＞Cl)是重要的。
在干燥的圓底燒瓶中，加入甲苯磺酸鹽LS1-8b(1.0 g，2.01mmol，1.0eq)和H-Nva-OtBu(752mg，4.02mmol，2.0eq)。加入脫氣的(通過在真空下攪拌30分鐘)DMF(4mL)和無水Na2CO3(256mg，2.41mmol，1.2eq，注意其它堿的有效性較差)，并將化合物在110℃攪拌過夜。加入水，并用Et2O(3×)萃取水相。將合并的有機相用水(2x)和鹽水(1x)萃取。將有機相用MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮。將殘余物通過快速色譜法進行純化(30％AcOEt70％己烷)，獲得胺LS1-12，為黃色油狀物(683mg，75％)。把該粗仲胺(1.0eq)溶解于4M HCl/二烷(10eq)，并將混合物在室溫攪拌過夜。將溶劑減壓蒸發(fā)，并把Et2O加到殘余物中。把己烷加到該混合物中，白色沉淀形成。將沉淀物過濾，并用冷的己烷洗滌，獲得所需的氨基酸LS1-13，為白色固體。
TLC(50％AcOEt，50％己烷)；Rf＝0.71；檢測UV和CMA 盡管存在游離胺，LS1-13已經(jīng)在合成方案的剩余部分中使用以成功地獲得所需大環(huán)。
步驟LS1-D合成二肽LS1-6
把H-(D)Phe-OBn的甲苯磺酸鹽溶解于1M Na2CO3水溶液中，并將該水溶液用AcOEt(3×)萃取。將合并的有機相用鹽水萃取，用MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮。以90％的產(chǎn)率收集到了游離胺H-(D)Phe-OBn。向H-(D)Phe-OBn(3.0g，11.76mmol，1.0eq)在THF/CH2Cl21/1(60mL)中的溶液中加入Boc-(D)NMeAla-OH(2.5 g，12.35mmol，1.05eq)、6-ClHOBt(2.0g，11.76mmol，1.0eq)和DIPEA(10.2mL，58.8mmol，5.0eq)。把混合物冷卻至0℃并加入EDCI(2.48g，12.94mmol，1.1eq)。將混合物在0℃攪拌1小時，并在室溫攪拌過夜。將溶劑減壓蒸發(fā)，并把殘余物溶解于AcOEt。將有機相用1M檸檬酸鹽水溶液緩沖液(pH 3.5，2x)、飽和NaHCO3水溶液(2x)和鹽水(1x)相繼洗滌。將有機相用MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮。獲得二肽，為黃色油狀物，并以獲得的形式用于下一步驟(5.3g，100％)。把二肽溶解于HCl/二烷溶液(4M，30mL，10eq)中，然后加入50mL二烷以促進攪拌，并將混合物在室溫攪拌1小時；獲得不均勻溶液。將該混合物減壓濃縮，并用機械真空泵進一步干燥。得到二肽鹽酸鹽LS1-6，為淺黃色固體(4.4g，100％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ9.40-8.70(3H，d和2寬，C(O)NH和CH3NH2+Cl-)，7.39-7.17(10H，m，Ph)，5.11(2H，s，C(O)OCH2Ph)，4.69-4.61(1H，m，CHCH3)，3.69(1H，dd，CHCH2Ph)，3.31(3H，s，CH3NH2+Cl-)，3.17-3.11和2.97-2.90(CHCH2Ph)，1.28(3H，d，CHCH3) 13C NMR(DMSO-d6)δ171.33，169.18，137.63，136.31，129.92，129.11，128.95，128.83，128.63，127.30，67.00，56.57，54.38，36.98，31.11，16.47. LC/MS(Grad_A4)tR＝6.17分 步驟LS1-E合成氨基酸LS1-5
向酸LS1-7(1.45g，2.67mmol，1.05 eq)在THF/CH2Cl21/1(13mL)中的溶液中于0℃加入鹽酸鹽LS1-6(958mg，2.55mmol，1.0eq)、DIPEA(2.2mL，12.8mmol，5.0eq)和HATU(1.07g，2.81mmol，1.1eq)。將混合物在室溫攪拌過夜。將溶劑蒸發(fā)，并把殘余物溶解于AcOEt。將有機相用1M檸檬酸鹽水溶液緩沖液(pH＝3.5，2x)、飽和NaHCO3水溶液(2x)鹽水(1x)相繼洗滌。將有機相用MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮。將殘余物通過快速色譜法進行純化(梯度20％AcOEt，80％己烷-30％AcOEt，70％己烷)，獲得所需的充分保護的三肽，為淺黃色粘性泡沫狀物(1.6g，73％)。
TLC(50％AcOEt，50％ 己烷)Rf＝0.78；檢測UV和CMA LC/MS(Grad_A4)tR＝15.15分 向保護的、烷基化的三肽(1.5g，1.75mmol，1.0eq)在AcOEt(23mL)中的溶液中加入10％Pd/C(20％by weight，315mg)，然后向該溶液中通入氫氣。將混合物在氫氣氛下攪拌過夜。向溶液中通入氮氣，然后將混合物用硅藻土墊過濾，并用AcOEt洗滌。將合并的濾液減壓蒸發(fā)，獲得LS1-5，為白色固體(1.1g，定量)。
TLC(50％AcOEt，50％己烷)Rf＝0.52；檢測UV和CMA LCMS(Grad_A4)tR＝8.23分 步驟LS1-F大環(huán)合和最終脫保護
向環(huán)合前體LS1-5(50mg，0.08mmol，1.0eq)在THF(3.2mL，使?jié)舛葹?5mM)中的溶液中，加入DIPEA(68μL，0.39mmol，5.0eq)和DEPBT(28mg，0.094mmol，1.2eq)，并將混合物在室溫攪拌過夜。將溶劑減壓蒸發(fā)，并將殘余物通過快速色譜法進行純化(1％MeOH，99％CH2Cl2)，獲得Boc-保護的大環(huán)LS1-11，為白色固體(40mg，0.064mmol，80％)。對于1g規(guī)模前體LS1-5以25mM的反應(yīng)濃度，產(chǎn)率為73％。
TLC(595 MeOHDCM)Rf＝0.43；檢測UV和CMA 1H NMR(DMSO-d6 60℃)δ7.62(1H，d，NH)，7.47(1H，寬，NH)，7.27-7.08(7H，m，Ph)，6.85-6.79(2H，m，Ph)，4.78(1H，寬)，4.51-4.38(1H，m)，4.11-4.02(2H，m)，3.62-3.56(1H，m)，3.32-3.04(5H，m)，2.92(3H，s，N-CH3)，2.72-2.46(2H，m)，1.90-1.59(4H，m)，1.46(9H，s，C(CH3)3)，1.28-1.06(8H，m)，0.65(3H，t，CH2CH3). 13C NMR(DMSO-d6)δ172.03，171.07，155.83，155.60，139.69，131.82，130.82，129.69，128.73，127.73，126.75，121.06，1 13.40，80.66，74.75，57.22，56.66，50.49，35.88，33.72，32.71，30.41，28.68，19.35，18.44，14.95，14.19. LC-MS(Grad_A4)tR＝12.82分 把大環(huán)LS1-11(565mg，0.91mmol，1.0eq)溶解于4M HC/二烷(4.6mL，20eq)溶液中，并將混合物在室溫攪拌2小時。將混合物減壓濃縮并置于真空下(油泵)，獲得最終的大環(huán)合物410，為白色固體(508mg，100％)。
當與其AA3位上的(L)-對映體比較時，手性HPLC指示沒有發(fā)生外消旋化。
1H NMR(DMSO-d6，60℃)δ9.38(1H，寬)，8.28(1H，d)，8.13(1H，寬)，7.81(1H，t)，7.28-7.13(7H，m，Ph)，6.93-6.87(2H，m，Ph)，4.84-4.77(1H，m)，4.54-4.40(3H，m)，3.35-3.07(6H，m)，2.94(3H，s，N-CH3)，2.90-2.81和2.64-2.47(2H，m)，1.85-1.64(4H，m)，1.38-1.21(5H，m)，1.10(3H，d，CH3)，0.88(3H，t，CH2CH3). 13C NMR(CDCl3)δ171.92，171.46，170.44，155.11，139.07，131.68，130.47，129.87，128.67，127.54，126.90，121.50，112.94，69.83，67.03，58.14，56.33，55.61，55.29，53.88，50.48，37.29，32.29，31.08，29.70，28.58，18.15，17.89，15.20，14.55. LC-MS(Grad_A4)tR＝6.23分 LC手性(Grad35A-05)tR＝26.49分 LC手性(Grad40A-05)tR＝26.54分 B.典型大規(guī)模合成本發(fā)明化合物的方法LS2
步驟LS2-A合成二肽LS2-21
將攪拌著的H-(D)Phe-OtBu.HCl(5g，0.02mol，1eq)和Z-(D)NMeAla-OH(4.98g，0.021mol，1.05eq)在130mL無水THF-DCM(1∶1)中的懸浮液于室溫用DIPEA(17.50mL，0.1mol，5eq)和6-Cl-HOBt(3.40g，0.02mol，1eq)處理。將混合物在室溫劇烈攪拌幾分鐘，用冰浴冷卻，然后加入EDCI(4.20g，0.022mol，1.1eq)，攪拌混合物1小時。在該時間以后，移去冰浴，并將反應(yīng)在室溫攪拌過夜。減壓除去溶劑，把殘余物溶解于100mL AcOEt，并用檸檬酸鹽緩沖液(1N，2×100mL)、飽和NaHCO3溶液(2×100mL)和鹽水洗滌。把有機層用無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓蒸發(fā)至干，獲得9.25g(100％)無色油狀物LS2-24。
TLC(己烷/乙酸乙酯，1∶1)Rf＝0.3；檢測CMA和UV 1H NMR(CDCl3)δ1.25(m，2h)，1.40(s，9H)，2.66(s.3H)，2.85(dd，1H)，3.15(dd，1H)，4.70(q， 2H)，5.15(s，2H)，6.50(sb，1H)，7.15(m，2H)，7.20(m，3H)，7.35(m，5H). 13C NMR(CDCl3)δ28.18，38.23，53.61，53.61，67.87，127.12，128.40，128.19，128.40，128.61，128.8，129.53，170.01. LC/MS(Grad_A4)；tR＝9.73分；質(zhì)量實測值440 把二肽LS2-24(6.9g，0.015mol)溶解于AcOEt(100mL)，然后用氮氣吹掃10分鐘。加入10％Pd-C(690mg)，并將混合物用充滿氫氣的氣囊吹掃。然后將混合物在大氣壓力下用H2氣囊氫化。12小時后，將反應(yīng)混合物通過短硅藻土墊過濾，并用AcOEt洗滌濾餅。把合并的濾液和洗滌液減壓濃縮，獲得基本上純的(干凈的NMR)無色固體化合物LS2-21(4.30g，90％)，將其用于下一步驟而無需進一步純化。
TLC(100％AcOEt)Rf＝0.1；檢測CMA和UV. 1H NMR(CDCl3)δ1.20(d J＝7.03Hz，3H)(s，9H)，2.40(s，/H)，3.01-3.20(m，3H)，4.80(q，1H)，7.20(m，5H)，7.60(m，1H). 13C NMR(CDCl3)δ19.64，28.18，35.12，38.46，53.06，60.42，82.29，127.05，128.50，129.71，136.61，170.85，174.28. LC-MS(Grad_A4)tR＝5.86分；質(zhì)量實測值306 步驟LS2-B合成三肽LS2-22
將攪拌著的二肽LS2-21(2g，6.50mmol，1eq)和Bts-Nva-OH(LS2-28，2.15g，6.85mmol，1.05eq)在32mL無水DCM中的懸浮液于0℃用DIPEA(4.50mL，0.026mol，4eq)和HATU(2.72g，7.18mmol，1.1eq)處理。將混合物在0℃劇烈攪拌1小時。在該時間以后，移去冰浴，并將反應(yīng)在室溫攪拌過夜。真空除去溶劑，并把殘余物溶解于30mL AcOEt。將有機相用1N檸檬酸鹽緩沖液(2×30mL)、飽和NaHCO3溶液(2×30mL)和鹽水(1×30mL)洗滌。將有機層用無水硫酸鈉干燥、過濾并減壓蒸發(fā)至干。將殘余物通過快速色譜法進行純化[乙酸乙酯/己烷(1/1)]，獲得LS2-22，為無色固體(3.13g，80％)。
TLC(己烷/乙酸乙酯，3∶2)Rf＝0.3；檢測CMA和UV 1H NMR(CDCl3)δ0.95(m，3H)，1.20(d，2H)，1.40(s，9H)，1.42-1.70(m，4H)，2.60(m，2H)，2.90(s，3H)，4.40(m，1H)，4.80(m，1H)，4.92(m，1H)，6.10(m，1H)，6.30(M，1H)，6.40(m，1H)，6.90(m，2H)，7.20(m，3H)，7.40-7.60(m，2H)，7.90(m，1h)，8.10(m，1H). 13C NMR(CDCl3)δ23.42，26.32，33.12，48.63，49.10，49.85，77.56，117.63，120.67，122.35，122.93，123.11，123.80，124.13，124.68，124.75，131.45，147.67，165.16，165.68，167.66. LC-MS(Grad_A4)tR＝11.48分；質(zhì)量實測值602 步驟LS2-C；合成LS2-23
將攪拌著的三肽LS2-22(0.4g，0.66mmol)和系鏈(tether)溴化物LS2-9(0.5g，1.32mmol，如在步驟中LS1-A關(guān)于相應(yīng)的Cbz衍生物所述合成的)在1.33mL無水DMF中的懸浮液在室溫下用KI(0.12g，0.66mmol)和K2CO3(0.185g，1.32mmol)處理。將混合物在80℃劇烈攪拌24小時。在該時間以后，將該混合物冷卻至室溫，然后加入20ml水，并將該產(chǎn)物用Et2O(3×30mL)萃取。將合并的有機層用鹽水(2×30mL)洗滌，用硫酸鎂干燥，并在真空下濃縮。將殘余物通過快速色譜法進行純化[己烷/乙酸乙酯(1∶2)]，獲得LS2-25，為白色固體(70％)。
TLC(己烷/乙酸乙酯，2∶1)Rf＝0.4；檢測CMA和UV 1H NMR(DMSO-d6)δ0.5(m，1H)，0.70(m，1H)，1.01-1.40(m，)1.60(m，3H)，1.80(m，1H)，2.55(m，)，2.95(m，4H)，3.1(m，2)，3.30(m，2H)，3.60(m，1H)，3.90(m，1H)，4.30(m，1H)，4.80(m，)，6.80(m，3H)，7.05(m，6H)，7.60(2H)，7.95(m，1H)，8.20(m，1H)，8.25(m，1H)，8.90(s，2H). 13C NMR(CDCl3)δ13.84，15.36，17.40，17.70，19.40，22.17，27.52，28.14，28.67，30.29，31.27，33.27，38.01，40.35，51.02，53.08，54.35，56.72，70.25，73.13，81.10，113.49，120.94，122.28，125.44，127.01，127.19，127.19，127.68，127.68，127.79，128，64，129.57，130.06，136.2，137.10，165.10，170.10，171.10. LC-MS(Grad_A4)tR＝15.10分；質(zhì)量實測值892 將100mg烷基化的三肽LS2-25(100mg，0.11mmol)用2mL 50％TFA，3％三乙基硅烷(TES)在DCM中的溶液處理，然后將混合物在室溫攪拌1小時。在該時間以后，減壓除去全部溶劑。將粗化合物LS2-23用真空泵干燥1小時，并直接用于下一步驟無需進一步純化。
LC/MS(Grad_A4)tR＝8.55分；質(zhì)量計算值737 步驟LS2-D合成LS2-26(大環(huán)合)
向攪拌著的烷基化的三肽23(0.12mmol)和DIPEA(0.100mL，0.56mmol)在11.22mL無水THF中的懸浮液中于室溫加入DEPBT(41mg，0.14mmol)。將混合物在室溫劇烈攪拌過夜。然后將反應(yīng)減壓濃縮至干，并把殘余物溶解于10mL AcOEt。將該有機溶液相繼用檸檬酸鹽緩沖液(1N，2×30mL)、飽和NaHCO3溶液(2×30mL)和鹽水(1×30mL)處理。將有機層用無水硫酸鈉干燥，過濾并減壓蒸發(fā)至干。將殘余物通過快速色譜法進行純化[乙酸乙酯/己烷(3∶1)]，獲得LS2-26(Bts-410)，為白色固體(80mg，98％)。
TLC(乙酸乙酯/己烷，3∶1)Rf＝0.3；檢測CMA和UV 1H NMR(CDCl3)δ0.64(m，3H)，0.87(m，1H)，1.02(m，2H)，1.20(m，6H)，1.40(m，3H)，1.60(m，4H)，1.80(m，1H0，2.01(m，1H)，2.40(m，1H)，2.80(m，1H)，3.15(s，3H)，3.20(m，2H)，3.45(m，1H)，3.60-3.80(m，2H)，4.40-4.60(dd，2H)，4.70(m，2H)，5.01(m，1H)，5.90(m，1H)，6.80(m，2H)，6.90(m，1H)，7.15-7.25(m，7H)，7.60(m，2H)，8.01(m，1H)，8.10(m，1H). 13C NMR(CDCl3)δ13.28，13.55，18.75，18.98，28.89，29.92，29.92，33.19，36.81，36.98，39.55，51.94，53.83，55.25，59.51，74.64，111.66，120.64，122.51，125.15，127.10，127.37，127.84，128.07，128.86，129.47，130.51，136.55，137.30，152.58，155.86，165.33，169.75，170.09，171.66. LC/MS(Grad_A4)tR＝13.17分；質(zhì)量實測值719 LC手性(柱ODRH，Grad 55A-05)tR＝42.059. 步驟LS2-E合成化合物410
于室溫向攪拌著的大環(huán)LS2-26(40mg，0.003mmol)在0.110mLDMF中的懸浮液中加入23mg K2CO3和10μl巰基丙酸，然后將反應(yīng)放置過夜。將反應(yīng)減壓濃縮至干，并把粗殘余物溶解于10mL AcOEt。將該有機溶液用飽和NaHCO3溶液(2×30mL)然后用鹽水(1×30mL)洗滌。將有機層用無水硫酸鈉干燥、過濾并減壓蒸發(fā)至干。由此以90％的產(chǎn)率分離到了化合物410。
TLC(100％AcOEt)Rf＝0.2；檢測MA和UV 1H NMR(DMSO-d6)δ0.79(m，3H)，1.20(m，9H)，1.30(M，1H)，1.60(m，1H)，1.90(m，1H)，2.10(sb，1H)，2.35(ddd，J＝4.98，4.95，4.69 Hz，1H)，2.56(sb，1H)，2.63(m，1H)，2.80(ddd，J＝4.99，4.69，4.40Hz，1H)，3.01-3.15(m，5H)，3.25(dd，J＝4.69，4.11Hz，1H)，3.30(s，2H)，3.55(sb，1H)，3.95(q，J＝7.33，7.04Hz，1H)，4.50(sb，1H)，6.80(m，1H)，6.90(m，1H)，7.10-7.30(m，7H)，7.70(m，2H). 13C NMR(DMSO-d6)δ14.60，14.84，18.46，18.85，29.80，29.96，34.03，35.84，36.31，40.68，54.79，55.67，57.77，58.11，73.42，1 12.26，120.58，126.84，127.81，128.80，129.73，131.10，140.10，158.10，172.10，172.40，176.10. LC/MS(Grad_A4)tR＝6.19分；質(zhì)量實測值522 實施例4 代表性化合物298的合成和生物結(jié)果 A.化合物298的溶液合成
步驟LS3-1.合成環(huán)丙基甘氨酸甲酯鹽酸鹽.向H-Cpg-OH(LS3-A，20.0g，174mmol，1.0eq)在無水MeOH(350mL)中的懸浮液中于0℃用45分鐘緩慢加入剛蒸餾(從PCl5)的乙酰氯(185mL，2.6mol，15eq)。將混合物溫熱至室溫并攪拌16-18小時。用TLC監(jiān)測反應(yīng)[MeOH/NH4OH/AcOEt(10∶2∶88)；檢測茚三酮；Rf＝0.50]。然后將混合物在真空下濃縮，與甲苯共沸(3×)，并在高真空下干燥16-18小時，獲得LS3-1，為淺黃色固體(30.0g，＞100％粗產(chǎn)率)。
1H NMR(CD3OD)δ4.88(3H，s，NH3+)，3.85(3H，s，CH3O)，3.36-3.33(1H，d，NH3+CHCH3O)，1.19-1.10(1H，m，CH(CH2)2)，0.83-0.53(4H，m，CH(CH2)2). 步驟LS3-2.合成系鏈(tether)溴化物. 向醇粗產(chǎn)物Cbz-T33a(21.5g，62.6mmol，1.0eq)在無水CH2Cl2(250mL)中的溶液中加入NBS(12.8g，72.0mmol，1.15eq，大量的NBS產(chǎn)生二溴化副產(chǎn)物)和PPh3(18.9g，72.0mmol，1.15eq)。將圓底燒瓶用箔隔絕光線，并將混合物在室溫攪拌16-18小時，同時用TLC進行監(jiān)測[AcOEt/己烷(3∶7)；檢測UV和CMA；Rf＝0.42]。加入飽和NH4Cl水溶液(200mL)，并將水相用CH2Cl2(2×150mL)萃取。將合并的有機相用飽和NH4Cl水溶液(2×200mL)洗滌，用MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮。將殘余物通過快速色譜法進行純化(AcOEt己烷，梯度，595-1585)，獲得溴化物LS3-2，為淡黃色油狀物(22.2g，88.4％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.37-7.26(5H，m，Ph)，7.19-7.13(2H，m，Ph)，6.92-6.88(1H，t，Ph)，6.84-6.81(1H，d，Ph)，5.10(2H，s，NHC(O)OCH2Ph)，4.96(1H，寬，NHCbz)，4.62-4.56(1H，六重峰，PhOCH(CH3)CH2Br)，3.58-3.45(2H，m，CH2Br)，3.22-3.16(2H，q，CH2NHCbz)，2.69-2.64(2H，t，PhCH2CH2)，1.83-1.78(2H，五重峰，PhCH2CH2)，1.45(3H，d，CHCH3). 13C NMR(CDCl3)δ156.66，155.08，136.99，131.28，130.77，128.75，128.32，128.28，127.49，121.56，113.03，73.12，66.76，40.69，36.12，30.45，27.48，19.00.LC/MS(Grad_A4)tR＝11.04分 步驟LS3-3.把鹽酸鹽LS3-1溶解于Na2CO3水溶液(1M，275mL，0.272mol，1.5eq)中。將堿性水相用NaCl飽和，并用AcOEt/CH2Cl2(2∶1)(5×100mL)萃取。TLC[MeOH/NH4OH/AcOEt(10∶2∶88)；檢測茚三酮；Rf＝0.50]。將合并的有機相用MgSO4干燥，過濾并于室溫在低真空下濃縮，獲得游離氨基-酯LS3-3，為黃色油狀物(19.1g，85％，2步)。LS3-3是揮發(fā)性的，因而不應(yīng)當在機械真空泵中長時間放置。為了使二酮基哌嗪的形成最小化，分離LS3-3后應(yīng)當立即進行步驟LS3-4。
1H NMR(CDCl3)δ3.70(3H，s，CH3O)，2.88-2.85(1H，d，NH2CHCH3O)，1.54(1H，s，NH2)，1.04-0.97(1H，m，CH(CH2)2)，0.56-0.27(4H，m，CH(CH2)2). 步驟LS3-4.在干燥的圓底燒瓶中，加入溴化物LS3-2(47.2g，117mmol，1.0eq)和剛制備的LS3-3(19.1g，148mmol，1.2eq)。加入脫氣的無水DMF(117mL)、無水Na2CO3(14.8g，140mmol，1.2eq)和KI(19.4g，117mmol，1.0eq)，并將混合物于100℃在氮氣氛下攪拌16-18小時。用LC-MS和/或TLC監(jiān)測反應(yīng)進程。把混合物冷卻至室溫，加入水(200mL)，并將水相用MTBE(3×100mL)萃取。將合并的有機相用水(2×100mL)和鹽水(1×100mL)相繼洗滌，用MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮。將殘余物用快速色譜法進行純化[己烷/AcOEt/DCM，梯度(85∶10∶5)-(50∶45∶5)]，獲得LS3-4，為橙色油狀物(43.1g，81％)。
TLC[己烷/AcOEt(1∶1)]Rf＝0.35；檢測UV和CMA 1H NMR(CDCl3)δ7.3 1-7.22(5H，m，Ph)，7.07-7.03(2H，m，Ph)，6.80-6.74(2H，m，Ph)，5.48(1H，寬，CH2NHCHRR’)，5.00(2H，s，OCH2Ph)，4.49-4.43(1H，m，PhOCH(CH3)R)，3.56(3H，s，C(O)OCH3)，3.18-3.11(3H，m，NHCH(Pr)CO2Me和CH2NHCbz)，2.75-2.50(4H，m，PhCH2CH2和NHCH2CH(Me)OPh)，1.76-1.68(2H，m，PhCH2CH2)，1.19-1.14(3H，d，PhOCH(CH3)R)，0.88-0.80(1H，m，CH(CH2)2)，0.46-0.13(4H，m，CH(CH2)2). LC/MS(Grad_A4)tR＝6.63分 步驟LS3-5.向仲胺LS3-4(43.0g，94.7mmol，1.0eq)在THF/H2O(1∶1，475mL)中的溶液中于0℃加入Na2CO3(15.1g，113.7mmol，1.5eq)和(Boc)2O(24.8g，142.1mmol，1.2eq)。使混合物溫熱至室溫并攪拌24小時。用LC/MS和/或TLC監(jiān)測反應(yīng)。將THF在真空下蒸發(fā)，并將殘余水相用MTBE(3×100mL)萃取。將合并的有機相用鹽水(1×100mL)洗滌，用MgSO4干燥，過濾并在真空下濃縮，獲得粗LS3-5，為橙色油狀物(59.1g，＞100％粗產(chǎn)率)。
TLC[己烷/AcOEt(1∶1)]Rf＝0.57；檢測UV和CMA LC/MS(Grad_A4)12.98分. 步驟LS3-6.向LS3-5(52.5g，94.7mmol，1.0eq.)在THF/H2O(1∶1，475 mL)中的溶液中于室溫加入LiOH一水合物(19.9g，474 mmol，5.0eq.)。將混合物在室溫攪拌16-18小時。用LC/MS監(jiān)測反應(yīng)(Grad_A4)tR＝12.21min.TLC[己烷/AcOEt(1∶1)；檢測UV和CMA；Rf＝基準]。將反應(yīng)混合物用檸檬酸鹽緩沖液酸化(1M，pH 3.5)，然后將THF在真空下蒸發(fā)。將殘余物水相用AcOEt(3×150mL)萃取，然后將合并的有機相用鹽水(1×100mL)洗滌，用MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮，獲得羧酸LS3-6，為白色粘性固體(47.3g，93％2步)。
LC/MS(Grad_A4)tR＝12.16min 步驟LS3-7.向H-(D)Phe(4F)-OH(LS3-B，55.6g，0.30mol，1.0eq) 在苯(1.2L)中的懸浮液中加入p-TSA(69.4g，0.37mol，1.2eq)和芐醇(157mL，1.52mol，5.0eq)。將混合物在迪安-斯達克裝置中回流攪拌16-18小時，在此期間獲得均勻溶液。將混合物冷卻至室溫并形成白色沉淀物。將該沉淀物用Et2O(500mL)稀釋，過濾并用Et2O(3×500mL)研制。將固體在真空下干燥，獲得LS3-7，為白色固體(126g，93.1％)。用甲苯替代苯，使得反應(yīng)時間減少，為2-3小時。
1H NMR(DMSO-d6)δ8.40(3H，bs，NH3Cl)，7.47-7.36(2H，d，Ph)，7.37-7.06(11H，m，Ph)，5.15(2H，s，OCH2Ph)，4.37(1H，bt，CHCH2Ph)，3.09-3.05(2H，m，CHCH2Ph)，2.27(3H，s，CH3Ph). 13C NMR(DMSO-d6)δ169.52 163.83，160.62，140.01，138.56，135.48，132.16，132.04，131.33，131.28，129.09，129.05，128.84，128.72，127.09，126.20，116.18，115.89，67.83，53.88，35.83，21.47. LC/MS(Grad_A4)tR＝6.12分 熔點(未校正的)165-167℃. 步驟LS3-8.把甲苯磺酸鹽LS3-7(122g)溶解于Na2CO3水溶液(1M，500mL)中。將所得堿性水溶液用AcOEt(4×500mL)萃取，并將合并的有機相用鹽水(1×250mL)洗滌，用MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮，獲得氨基酯LS3-8，為白色固體(74.4g，99％)。
1H NMR(CDCl3)δ7.38-7.28(5H，m，OCH2Ph)，7.10-7.06(2H，m，Ph(4F))，6.96-6.90(2H，m，Ph(4F))，5.13(2H，d，OCH2Ph)，3.76-3.71(1H，t，CHCH2Ph)，(2H，dq，CHCH2Ph)，1.53(2H，s，NH2) 步驟LS3-9.向LS3-8(74.4g，0.27mol，1.0eq)在無水THF/CH2Cl2(1∶1，1120mL)中的溶液中加入Boc-(D)NMeAla-OH(LS3-C，57.1g，0.28mol，1.03 eq)、6-Cl-HOBt(46.2g，0.27mol，1.0eq)和DIPEA(238mL，1.37mol，5.0eq)。把混合物冷卻至0℃，并加入EDCI(57.6g，0.3mol，1.1eq)。將混合物在4℃攪拌1小時，溫熱至室溫并攪拌18小時。將溶劑真空蒸發(fā)，并把殘余物溶解于AcOEt(1000mL)。將有機相用檸檬酸鹽水溶液緩沖劑(1M，pH 3.5，2×500mL)、H2O(1×500mL)、飽和NaHCO3水溶液(當心CO2逸出，2×500mL)和鹽水(1×500mL)相繼洗滌。將有機相用MgSO4(180g)干燥，過濾并減壓濃縮，獲得粗制二肽LS3-9，為黃色油狀物。(127g，＞100％粗產(chǎn)率)。
步驟LS3-10。把油LS3-9溶解于150mL二烷中，然后加入4M HCl在二烷(1360mL，20eq)中的溶液，并將混合物在室溫攪拌1小時。用TLC監(jiān)測反應(yīng)[AcOEt/己烷(3∶2)]；Rf＝基準；檢測UV和茚三酮]。將混合物減壓濃縮，并將所得殘余物與Et2O(2×500mL)共沸，然后在真空下干燥。獲得粗LS3-10為淡黃色固體(96g，89.7％)。將其溶解于熱95％EtOH(200mL)中，然后加入MTBE(900mL)。把混合物冷卻至室溫，然后在冰箱(-20℃)中放置18小時。過濾收集所得晶體，并用MTBE(2×200mL)洗滌，然后在真空下干燥，獲得結(jié)晶狀二肽鹽酸鹽LS3-10(62g，64.5％回收)。
1H NMR(DMSO-d6)δ9.3 1-9.28(1H，d，C(O)NH)，7.38-7.26(7H，m，Ph)，7.09-7.04(2H，m，Ph)，5.10(2H，s，C(O)OCH2Ph)，4.65-4.57(1H，m，CHCH3)，3.76-3.69(1H，d，CHCH2Ph)，3.15-3.08和2.99-2.91(CHCH2Ph)，2.221(3H，s，CH3NH2+Cl-)，1.31-1.28(3H，d，CHCH3). 13C NMR(DMSO-d6)δ171.33，169.18，137.63，136.31，129.92，129.11，128.95，128.83，128.63，127.30，67.00，56.57，54.38，36.98，31.11，16.47. LC/MS(Grad_A4)tR＝6.26分 LC手性(Iso100B_05)tR＝29.6分.97％UV 熔點(未校正的)140-142℃ 步驟LS3-11.向羧酸LS3-6(47.3g，87.6mmol，1.0eq)和二肽鹽酸鹽LS3-10(36.2g，91.9mmol，1.05eq)在無水THF/CH2Cl2(1∶1)(438mL)中的溶液中于0℃加入DIPEA(92mL，526mmol，6.0eq)和HATU(34.9g，91.9mmol，1.05eq)。把混合物溫熱至室溫并攪拌16-18小時。用TLC監(jiān)測反應(yīng)[AcOEt/Hex(1∶1)；Rf＝0.48；檢測UV和CMA]。將混合物減壓濃縮，并把殘余物溶解于AcOEt(250mL)。將有機相用檸檬酸鹽水溶液緩沖劑(1M，pH 3.5，3×150mL)、H20(1×150mL)、飽和NaHCO3水溶液(2×150mL)和鹽水(1×150mL)相繼洗滌。將有機相用MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮。將殘余物通過快速色譜法進行純化[AcOEt∶己烷，梯度(10∶90)-(50∶50)]，獲得LS3-11，為白色粘性固體(70.0g，90％)。
LC/MS(Grad_A4)tR＝15.06分 步驟LS3-12.向10％Pd/C(13.8g，20％by weight)在AcOEt(150mL)中的懸浮液中加入烷基化三肽LS3-11(69.0g，78.4mmol，1.0eq)在AcOEt(375mL)中的溶液，然后向該溶液中通入氫氣16-18小時。
用TLC監(jiān)測反應(yīng)[AcOEt/己烷(1∶1)；Rf＝0.22；檢測UV和CMA]。將混合物通入氮氣吹掃，通過硅藻土墊過濾，并用AcOEt(3×)洗滌。把合并的濾液和洗滌液減壓蒸發(fā)，獲得LS3-12，為白色固體(51.4g，100％). LC/MS(Grad_A4)tR＝8.05分 步驟LS3-13.向LS3-12(51.4g，78.4mmol，1.0eq)中加入3.0 M HCl在二烷/H2O(75∶25，525mL，1.57mol，20eq)中的溶液，并將混合物在室溫攪拌1.5小時。將溶劑在真空下蒸發(fā)，然后在真空下與甲苯(3×)共沸并真空干燥，獲得粗LS3-13，灰白色固體(58.0g，＞100％產(chǎn)率)。
LC/MS(Grad_A4)tR＝5.38分。
步驟LS3-14.向大環(huán)母體LS3-13(78.4mmol基于LS3-12，1.0eq)在無水THF(1.57L，50mM)中的溶液中加入DIPEA(68.0mL，392mmol，7.0eq)和DEPBT(25.8g，86.2mmol，1.1eq)。將混合物在室溫攪拌16-18小時。用TLC監(jiān)測反應(yīng)[MeOH/AcOEt(1∶9)；Rf＝0.38；檢測UV和CMA]。在反應(yīng)結(jié)束時，大量的DIPEA鹽懸浮在溶液中。蒸發(fā)前，將這些鹽過濾并用THF洗滌以防止在蒸發(fā)期間溶液過度沸騰。將溶劑減壓蒸發(fā)，并將殘余物溶解于Na2CO3水溶液(1M，500mL)和AcOEt(250mL)中。將分離的堿性水相用AcOEt(2×250mL)萃取。將合并的有機相用鹽水(2×250mL)洗滌，用MgSO4干燥，過濾并減壓濃縮。將如此獲得的粗制材料通過快速色譜法進行純化[AcOEt∶MeOH，梯度(100∶0)-(90∶10)]，獲得大環(huán)化合物298，為淺黃色固體(35.0g，83％，2步)。
LC/MS(Grad_A4)tR＝6.19分。
步驟LS3-15.向粗化合物298(18.5g，34.4mmol，1.0eq)在無水EtOH(100mL)中的溶液中緩慢加入1.25M HCl在EtOH(41.2mL，51.5mmol，1.5eq)中的溶液。將混合物攪拌5分鐘，冷卻至0℃，并在依然冷的狀態(tài)下過濾。將白色沉淀物用冷的的無水EtOH(3×75mL)洗滌，并在真空下干燥，獲得化合物298鹽酸鹽，為非晶形白色固體(15.3g，88％回收率，校正的)。
化合物298的純化.把非晶形化合物298鹽酸鹽(14.2g，24.7mmol)溶解于EtOH/H2O(9∶1，215mL)的熱的混合物中。把溶液冷卻至室溫，然后在冰箱(-20℃)中放置16-18小時。將晶體過濾收集，并用冷的無水EtOH(3×75mL)洗滌，獲得化合物298鹽酸鹽，為結(jié)晶狀白色固體(12.4g，86％回收率)。
將結(jié)晶狀化合物298鹽酸鹽(11.4g，19.9mmol)溶解于1MNa2CO3/AcOEt(1∶1，200mL)中并攪拌直到固體完全溶解為止。把分離的堿性水相用AcOEt(2×50mL)萃取。把合并的有機相用鹽水(1×50mL)洗滌，用MgSO4干燥，過濾并在真空下蒸發(fā)。把油狀殘余物溶解于最小量的AcOEt中，然后加入己烷直到沉淀物形成為止。將混合物蒸發(fā)并在真空下干燥，獲得化合物298，為白色非晶形固體(11.1g，100％回收率)。
LC/MS(Grad_A4)6.18分；純度(UV/ELSD/CLND)100/100/100。
LC/MS(Grad_A4)6.18分；純度(UV/ELSD/CLND)100/100/100 將該反應(yīng)順序從1kg Cbz-T33a、518g LS3-A和1kg LS3-B開始以同等產(chǎn)率重復(fù)，獲得400g以上所需大環(huán)產(chǎn)物化合物298和/或相應(yīng)的HCl形式。可以將類似的方法應(yīng)用于本發(fā)明的其它化合物。
作為另外的方法，如步驟LS3-4中所述，可以使用在標準條件下制備的Cpg(LS3-14)叔丁基酯，通過與Cbz-T33a反應(yīng)，獲得烷基化的Cpg LS3-15。然后，在對通過LS3-15叔丁基酯的標準酸脫保護產(chǎn)生的LS3-16上的仲胺不進行保護的情況下，與二肽LS3-10進行化學(xué)選擇性偶聯(lián)來制備LS3-17。然后，以避免兩個步驟的更為有效的方法，直接同時氫解Cbz和芐基保護基，產(chǎn)生中間體LS3-13。


步驟LS3-17.向羧酸LS3-16的鹽酸鹽(2.1g，4.41mmol，1.0eq)和LS3-10(1.7g，4.59mmol，1.05eq)在無水THF/CH2Cl2(1∶1，22mL)中的溶液中于0℃加入DIPEA(5.3mL，30.6mmol，7.0eq)和HATU(1.7g，4.59mmol，1.05eq)。將混合物溫熱至室溫并攪拌16-18小時。用LC-MS監(jiān)測反應(yīng)。將混合物減壓濃縮，并將殘余物溶解于AcOEt(150mL)。將有機相用檸檬酸鹽水溶液緩沖劑(1M，pH 3.5，3×25mL)、H2O(1×25mL)和飽和NaHCO3水溶液(2×25mL)和鹽水(1×25mL)相繼洗滌。將有機相用MgSO4干燥，過濾并在真空下濃縮，獲得LS3-17，為白色固體(3.5g，＞100％粗產(chǎn)率)。
LC/MS(Grad_A4)tR＝12.09分。
步驟LS3-18.向10％Pd/C(596mg，20％重量)在95％EtOH(10mL)中的懸浮液中加入烷基化三肽LS3-17(3.0g，3.82mmol，1.0eq)在AcOEt(15mL)中的溶液，并向該溶液中通入氫氣2小時。然后將混合物在氫氣氛下攪拌16-18小時。用TLC監(jiān)測反應(yīng)[100％AcOEt；Rf＝基準；檢測UV和CMA]。將混合物通入氮氣進行吹掃，通過硅藻土墊過濾，并用95％EtOH(3×20mL)洗滌。將合并的濾液和洗滌物減壓蒸發(fā)，獲得LS3-13，為白色固體(2.0g，94％)。
LC/MS(Grad_A4)tR＝5.40分。
B.生物結(jié)果 1.對于生長素釋放肽受體(人克隆，hGHS-R1a)的放射性配體結(jié)合試驗 目標 1.為了證實化合物298具有與hGHS-R1a的直接高親合性相互作用方法的關(guān)鍵方面 1.在膜上進行結(jié)合，所述膜是由表達轉(zhuǎn)染的克隆人生長素釋放肽受體(hGHS-R1a)的HEK293制備的。
2.使用[125I]生長素釋放肽作為置換用放射性配體(Kd＝0.01nM，試驗濃度＝0.007nM)。
3.使用生長素釋放肽(未標記，1μM)來測定非特異性結(jié)合。
4.在11點濃度曲線上在一式兩份樣本中測試化合物298。
結(jié)果 化合物298與hGHS-R1a結(jié)合已經(jīng)進行多次。圖10所示的代表性結(jié)合抑制曲線證實了化合物298競爭性地、可逆地并且以高親和力與hGHS-R1a結(jié)合。
2.基于細胞的在生長素釋放肽受體(人克隆，hGHS-R1a)上的功能分析 目標 1.為了證實化合物298是hGHS-R1a上的的完全激動劑。
2.為了測定化合物298在hGHS-R1a上的激動劑活性的效力。
方法的關(guān)鍵方面 1.在表達轉(zhuǎn)染的克隆人生長素釋放肽受體(hGHS-R1a)的CHO-K1細胞和Gα16上進行試驗。
2.將懸浮的細胞與coelenterazine一起培養(yǎng)過夜。
3.刺激hGHS-R1a激活Gα16，引起細胞間Ca2+釋放，最終導(dǎo)致coelenterazine被氧化，并且發(fā)射定量發(fā)光信號。
4.使用生長素釋放肽作為陽性對照。
5.在8點濃度曲線上在一式兩份樣本中測試化合物298。
結(jié)果 如圖11所示，化合物298激活hGHS-R1a，其中EC50＝25nM。基于其與生長素釋放肽肽(陽性對照)類似的最大效力，化合物298是完全激動劑。
3.在意識清醒的可自由移動的大鼠中，化合物298(i.v.)對于生長激素(GH)釋放的作用。
在靜脈內(nèi)給藥后，已知生長素釋放肽(及其類似物)能夠有利地刺激GH從包括大鼠的不同物種的垂體中釋放。
目標 1.為了確定化合物298在大鼠中是否刺激GH釋放。
2.為了確定化合物298是否調(diào)節(jié)大鼠中生長素釋放肽誘導(dǎo)的GH釋放。
方法 1.由Tannenbaum等人.(2003)，Endocrinology 144967-974采用的模型。
2.給大鼠植入慢性靜脈內(nèi)(i.v.)插管。
3.讓大鼠自由移動，甚至在給藥或取樣時，以把壓力誘導(dǎo)的GH釋放變化降至最小。
4.在GH峰值和各個水平給予的化合物298以測定 a.如果有的話，對GH釋放的刺激作用；和 b.采用反復(fù)給藥是否能夠維持任何刺激作用。
5.在試驗當天，以規(guī)定的15分鐘間隔取血樣，并且通過放射性免疫分析來直接測定生長激素(GH)。
6.以3、30、300、1000μg/kg(i.v.，N＝5-6只大鼠/組)測定化合物298。
7.生長素釋放肽(陽性對照)以5μg(i.v.)測定。
結(jié)果 與載體對照(圖12A，對于300μg/kg)相比，最高達1000μg/kg的化合物298沒有引起脈動式GH釋放的任何顯著差異。當以峰值和各個水平給予(陽性對照)時，劑量為5μg的生長素釋放肽引起GH釋放顯著增加。在生長素釋放肽之前10分鐘給予的化合物298既不抑制也不增加生長素釋放肽誘導(dǎo)的GH釋放(圖12B)。作為GH釋放的次級指標，還以1000μg/kg劑量測定化合物298對IGF-1水平的影響。觀察到在用化合物298處理后，IGF-1水平?jīng)]有發(fā)生任何變化。
4.化合物298對于hGHS-R1a受體脫敏的作用 在用激動劑刺激后，G-蛋白偶聯(lián)受體可經(jīng)歷受體脫敏，其中受體脫敏程度是激動劑的部分特征。較弱的受體脫敏是理想的，因為其與長期使用藥物時耐藥性發(fā)展較低有關(guān)。除了其它因素之外，該因素涉及GHS的不良臨床性能。
目標 1.為了確定化合物298引起生長素釋放肽受體(人克隆，hGHS-R1a)脫敏的程度。
方法 1.通過FLIPR(Fluorometric Imaging Plate Reader，MolecularDevices)進行試驗。
2.在表達hGHS-R1a的HEK293細胞上進行試驗。
3.在12點濃度曲線上，使用一式兩份樣本測定化合物298的激動劑效力；確立化合物298的EC50。
4.在單獨的試驗中，將表達hGHS-R1a的細胞暴露于一定范圍濃度的化合物298(1、10、100、1000nM)中3分鐘。將化合物298洗出，然后把細胞用一定濃度的生長素釋放肽(EC100)處理，其在未脫敏受體上引起最大刺激。
5.計算DC50值。DC50值定義為將生長素釋放肽(EC100)反應(yīng)脫敏50％的化合物298的處理前濃度。
結(jié)果 化合物298是完全激動劑(EC50＝5nM；圖13A)。增加的化合物298的處理前濃度將最大反應(yīng)脫敏至EC100生長素釋放肽(DC50＝32nM；圖13B)。DC50值比EC50值的效力低6倍以上，因此，化合物298刺激受體的效力比脫敏受體的效力強?；衔?98脫敏受體的效力比其它生長素釋放肽激動劑(即生長素釋放肽肽和其它GHS卡普瑞林[Pfizer]；圖13C)低大約10倍。
化合物298具有有利的脫敏性質(zhì)，因為其(1)刺激受體的效力比脫敏受體的效力強6倍，以及(2)引起脫敏的效力比內(nèi)源性配體(即生長素釋放肽)和輪替的小分子生長素釋放肽激動劑低10倍。因此，在長期給藥時，化合物298引起的耐藥性比其它生長素釋放肽激動劑弱。
5.化合物298對于固體食物在

大鼠中胃排空的作用 目標 1.為了確定化合物作為促運動劑對于胃排空，一種胃輕癱模型的有效作用的數(shù)據(jù)。
方法 1.通過胃內(nèi)管飼法給予禁食過夜大鼠(雄性，Wistar，～200g，N＝5/組)甲基纖維素(2％)食物。將該食物用酚紅(0.05％)標記。
2.給予食物后，立即將測試物質(zhì)(即載體、化合物298、甲氧氯普胺等)通過靜脈內(nèi)注射給藥。
3.15分鐘后，將動物殺死；立即取出胃，在0.1N NaOH中勻化，并且離心。
4.在560nm通過比色法定量確定保留在胃中的總酚紅。
5.與對照組相比，＞30％的胃排空增加視為顯著，這是基于酚紅濃度測定的。
結(jié)果 甲氧氯普胺(市售胃輕癱產(chǎn)品)、生長素釋放肽和GHRP-6(hGHS-R1a的參照肽激動劑)都被證實具有顯著的胃排空作用(圖14A)?；衔?98以劑量依賴方式引起顯著的胃排空，其效力比甲氧氯普胺強大約100倍(圖14B)。在

大鼠中化合物298有效地刺激固體食物胃排空，其效力比甲氧氯普胺一種目前使用的具有促運動活性的藥物強100倍。
6.化合物298在大鼠手術(shù)后腸梗阻治療中的作用 目標 為了測定化合物298在手術(shù)后腸梗阻(POI)大鼠模型中的治療用途。
方法 1.采用由Klff等人.(1998)，Ann Surg 228652-63的模型。
2.給大鼠(雄性，Sprague-Dawley，250-300g)植入頸靜脈插管以進行測試物質(zhì)的給藥。
3.將大鼠禁食過夜，用異氟烷麻醉，并進行腹部手術(shù)。
4.將腹部切開之后，在15分鐘內(nèi)切除小腸盲腸和大腸，并且用鹽水潤濕。
5.進行“腸流動”，這是臨床相關(guān)操作，特征是首先擠壓上部小腸，并且向下繼續(xù)該操作至通過整個大腸。
6.讓大鼠恢復(fù)15分鐘，從異氟烷麻醉作用消失后開始。
7.對大鼠給予載體或化合物298(30、100或300μg/kg，i.v.，N＝6/組)，然后通過胃內(nèi)管飼給予99mTc甲基纖維素(2％)食物。
8.15分鐘后，將大鼠安樂死，分離出胃和腸的連續(xù)10cm切段。測定每一組織分離物中的放射性(99mTc)，作為測定食物通過情況的手段。
結(jié)果 在圖15中，棒條的分布表示口服管飼后15分鐘食物在胃(‘ST’)和小腸連續(xù)10cm切段中的分布。腹部手術(shù)與腸流動聯(lián)合引起大鼠的顯著腸梗阻，這是通過比較

(即未手術(shù))和POI處理組而確定的。
在100和300μg/kg(i.v.)測試濃度的化合物298顯著提高胃排空和腸通過。圖15顯示了對應(yīng)于100μg/kg劑量的數(shù)據(jù)。與POI+載體治療組相比，在100μg/kg(i.v.)，化合物298顯著把GI通過顯著提高了2.7倍，這是通過食物的幾何學(xué)中心來確定的。在具有手術(shù)后腸梗阻的大鼠中，化合物298顯著提高了胃排空和腸通過。化合物298可有效地治療現(xiàn)有的、手術(shù)后腸梗阻；因此，不需要在手術(shù)之前的預(yù)防性使用，就象臨床開發(fā)的阿片類物質(zhì)拮抗劑那樣。
7.在阿片類物質(zhì)延遲的胃排空模型中，本發(fā)明化合物對于胃排空和腸通過的影響 眾所周知，阿片類鎮(zhèn)痛劑例如嗎啡會延遲胃腸道通過，這是該類藥物的一種重要副作用。該綜合征的臨床術(shù)語是阿片類物質(zhì)腸功能障礙(OBD)。重要地，從腹部手術(shù)恢復(fù)的患者會經(jīng)歷手術(shù)后腸梗阻，針對手術(shù)后疼痛而同時采用的阿片類物質(zhì)治療會加劇腸梗阻。
目標 1.為了確定本發(fā)明化合物是否可用于治療opioOBD。
方法 1.給大鼠(雄性，Sprague-Dawley，250-300g)植入頸靜脈插管以進行測試物質(zhì)的給藥。
2.對禁食過夜的大鼠給予嗎啡(3mg/kg s.c.)。
3.30分鐘后，對大鼠給予載體或化合物298(300或1000μg/kg，i.v.，n＝4-6/組)，然后通過胃內(nèi)管飼法給予99mTc甲基纖維素(2％)食物。4.15分鐘后，將大鼠安樂死，分離出胃和腸的連續(xù)10cm切段。測定每一組織分離物中的放射性(99mTc)，作為測定食物通過的手段。
結(jié)果 嗎啡(3mg/kg，s.c.)顯著延遲大鼠中的胃排空和腸通過(圖16A)。通過用化合物298(i.v.)治療，以劑量依賴性方式有效地逆轉(zhuǎn)阿片類物質(zhì)延遲的胃腸道通過(圖16B)。
8.在人血漿中的代謝穩(wěn)定性 通過各種蛋白酶和酯酶的作用，藥物在血漿中易于發(fā)生酶降解。因此，在藥物開發(fā)的早期階段，經(jīng)常進行血漿穩(wěn)定性測定，以作為代謝篩選。該試驗的目標是測定人血漿中本發(fā)明化合物的代謝穩(wěn)定性。
試驗方法 在2和24小時于37℃測定化合物298在人血漿中的穩(wěn)定性。已經(jīng)測定了兩種形式的化合物298游離胺和相應(yīng)的HCl鹽。此外，已經(jīng)在單獨的血漿和用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)緩沖的血漿中確立了化合物298的穩(wěn)定性，其中血漿與磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)的比例為20∶1。在一式三份樣本中進行測定和分析。使用SPE技術(shù)(Oasis MCX筒)將化合物298從血漿基質(zhì)中提取出來。使用LC-MS以APCI+方式進行樣本分析。比較化合物298在血樣中的水平以及化合物298在摻加樣本中的水平，從收集的相同血漿獲得的摻雜樣本在-60℃貯存。結(jié)果以化合物298的回收百分比表示。
表8.在人血漿(37℃)中培養(yǎng)后化合物298的回收百分比 如表8所示，在37℃，化合物298在人血漿中在至少24小時內(nèi)是穩(wěn)定的，與化合物形式(即游離胺或鹽)無關(guān)，或者與血漿是否用PBS進行pH緩沖無關(guān)。
9.化合物298在9種人細胞色素P450酶亞型上的相互作用特性 在所有試驗用的cyp450酶上，除了cyp3A4，化合物298(0.0457-100μM)都具有最小抑制活性。而在cyp3A4上具有中等抑制活性。沒有預(yù)計到在cyp3A4上觀測到的化合物298的抑制活性是生理相關(guān)的，基于治療活性所需的低劑量化合物298。而且，沒有證據(jù)表明化合物298會發(fā)生與阿片類鎮(zhèn)痛劑的藥物-藥物相互作用，阿片類鎮(zhèn)痛劑可以對POI患者聯(lián)合給藥。
10.化合物298在hERG通道抑制方面的特性 與載體(0.1％DMSO)對照相比，化合物298(1、10μM)對于hERG通道功能沒有顯著影響。在500nM，E-4031(陽性對照)完全抑制hERG通道流。
實施例5 胃輕癱動物模型 眾所周知，高熱量食物阻礙胃排空。該觀察最近已經(jīng)被Megens，A.A.；等人.(未出版的)用來探討開發(fā)大鼠模型來延遲如在胃輕癱中發(fā)生的延遲的胃排空。
材料 Wistar大鼠，雄性，200-250g 巧克力試驗食物2mL Clinutren ISO(1.0kcal/mL，Nestle SA，VeveySwitzerland) 方法 在時間＝0通過口服管飼法對大鼠給予測試食物。60分鐘后，把大鼠殺死，切開胃，并且稱重內(nèi)容物。發(fā)生顯著胃排空延遲的未治療動物通過較高殘余胃含量表示。
在時間＝0，以三個劑量水平(0.08mg/kg；0.30-0.31mg/kg，1.25mg/kg)，把測試化合物作為水溶液或者在標準鹽水中的溶液靜脈內(nèi)給藥。當需要時，加入例如化合物21、299和415，10％環(huán)糊精(CD)以促進物質(zhì)溶解。在時間＝-30分鐘，使用皮下注射給藥測定的測試化合物。每組測定4-5只(4-5只)大鼠，除了在環(huán)糊精對照組中，該組包括十(10)只大鼠。
結(jié)果以相對于僅注射溶劑作為對照的胃重量相比的百分比報道，如圖17A和17B所示，并且證實了本發(fā)明化合物的胃排空能力。這些結(jié)果表明這些化合物可用于預(yù)防和/或治療胃輕癱和/或手術(shù)后腸梗阻。
上面舉例說明了本發(fā)明，但不是對本發(fā)明的限制。本發(fā)明是由權(quán)利要求書限定的，這些權(quán)利要求的等同內(nèi)容包括在本發(fā)明內(nèi)。
權(quán)利要求
1.式(I)化合物
或者其旋光異構(gòu)體、對映體、非對映體、外消旋體或立體化學(xué)混合物，其中
R1是氫或氨基酸的側(cè)鏈，或者R1和R2共同形成任選在環(huán)上包含O、S或N原子的4、5、6、7或8元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代，或者R1和R9共同形成任選在環(huán)上包含O、S或另外的N原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代；
R2是氫或氨基酸的側(cè)鏈，或者R1和R2共同形成任選在環(huán)上包含O、S或N原子的4、5、6、7或8元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代，或者R2和R9共同形成任選在環(huán)上包含O、S或另外的N原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代；
R3是氫或氨基酸側(cè)鏈，或者R3和R4共同形成任選在環(huán)上包含O或S原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代，或者R3和R7或R3和R11共同形成任選在環(huán)上包含O、S或另外的N原子的4、5、6、7或8元雜環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代；
R4是氫或氨基酸側(cè)鏈，或者R4和R3共同形成任選在環(huán)上包含O或S原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代，或者R4和R7或R4和R11共同形成任選在環(huán)上包含O、S或另外的N原子的4、5、6、7或8元雜環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代；
R5和R6各自獨立地是氫或氨基酸側(cè)鏈，或者R5和R6共同形成任選在環(huán)上包含O、S或N原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面定義的R8取代；
R7是氫、低級烷基、取代的低級烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基，或者R3和R7或R4和R7共同形成任選在環(huán)上包含O、S或另外的N原子的4、5、6、7或8元雜環(huán)，其中所述環(huán)任選被R8取代；
R8在3、4、5、6、7或8元環(huán)結(jié)構(gòu)上取代了一個或多個氫原子，并且獨立地選自烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氧代基、氨基、鹵素、甲?；?、?；?、羧基、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、氨基甲?；?、胍基、脲基、脒基、巰基、亞磺酰基、磺酰基和亞磺酰氨基，或者，在取代兩個相鄰原子上的氫原子時R8是稠合環(huán)烷基、取代的稠合環(huán)烷基、稠合雜環(huán)、取代的稠合雜環(huán)、稠合芳基、取代的稠合芳基、稠合雜芳或取代的稠合雜芳基環(huán)；
X是O、NR9或N(R10)2+；
其中R9是氫、低級烷基、取代的低級烷基、磺?；?、亞磺酰氨基或脒基，并且R10是氫、低級烷基或取代的低級烷基，或者R9和R1共同形成任選在環(huán)上包含O、S或另外的N原子的3、4、5、6和7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被上面定義的R8取代；
Z1是O或NR11，
其中R11是氫、低級烷基或取代的低級烷基，或者R3和R11共同或者R4和R11共同形成在環(huán)上包含O、S或另外的N原子的4、5、6、7或8元雜環(huán)，其中所述環(huán)任選被上面定義的R8取代；
Z2是O或NR12，其中R12是氫、低級烷基或取代的低級烷基；
M、n和p各自獨立地是0、1或2；
T是式IV的二價基團
-U-(CH2)d-W-Y-Z-(CH2)e-(IV)
其中d和e各自獨立地是0、1、2、3、4或5；Y和Z是各自任選存在的；U是-CR21R22-或-C(＝O)-并且是鍵合到式I的X上的；W、Y和Z各自獨立地選自-O-、-NR23-、-S-、-SO-、-SO2-、-C(＝O)-O-、-O-C(＝O)-、-C(＝O)-NH-、-NH-C(＝O)-、-SO2-NH-、-NH-SO2-、-CR24R25-、具有Z或E構(gòu)型的-CH＝CH-、-C≡C-和下面所示的環(huán)結(jié)構(gòu)
或
其中G1和G2各自獨立地是共價鍵或者選自下列的二價基團-O-，-NR39-、-S-、-SO-、-SO2-、-C(＝O)-、-C(＝O)-O-、-O-C(＝O)-、-C(＝O)NH-、-NH-C(＝O)-、-SO2-NH-、-NH-SO2-、-CR40R41-、具有Z或E構(gòu)型的-CH＝CH-和-C≡C-；其中G1與基團U最近地鍵合，其中除非另有說明，否則環(huán)中的任何碳原子優(yōu)選地被N替換，條件是所述環(huán)不能含有多于4個的N原子；K1、K2、K3、K4和K5各自獨立地是O、NR42或S，其中R42如下面所定義；
R21和R22各自獨立地是氫、低級烷基或取代的低級烷基，或者R21和R22共同形成任選包含一個或多個選自O(shè)、S和N的雜原子的3-12元環(huán)，其中所述環(huán)任選被上面定義的R8取代；
R23、R39和R42獨立地是氫、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、甲?；?、?；?、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、脒基、磺?；蛠喕酋０被?；
R24和R25獨立地是氫、低級烷基、取代的低級烷基、RAA，其中RAA是氨基酸側(cè)鏈，或者R24和R25共同形成任選包含一個或多個選自O(shè)、S和N的雜原子的3-12元環(huán)；或者R24或R25中的一個是羥基、烷氧基、芳氧基、氨基、巰基、氨基甲?；?、脒基、脲基或胍基，而另外一個是氫、低級烷基或取代的低級烷基，除了當與R24和R25鍵合的碳原子也鍵合到另外的雜原子上時；
R26、R31、R35和R38是各自任選存在的，而當其存在時，在指定的環(huán)上取代一個或多個氫原子，并且各自獨立地選自鹵素、三氟甲基、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氨基、甲?；Ⅴ；Ⅳ然?、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、氨基甲酰基、胍基、脲基、脒基、氰基、硝基、巰基、亞磺?；?、磺?；蛠喕酋０被?br> R27是任選存在的，并且當其存在時，在指定的環(huán)上取代一個或多個氫原子，并且各自獨立地選自烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氧代基、氨基、甲?；Ⅴ；Ⅳ然?、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、氨基甲?；㈦一?、脲基、脒基、巰基、亞磺?；?、磺?；蛠喕酋０被?；
R28、R29、R30、R32、R33、R34、R36和R37是各自任選存在的，并且，當在環(huán)中其所鍵合的碳原子上不存在雙鍵時，任選存在兩個基團，而當其存在時，其各自取代環(huán)上的一個氫原子，或者當在環(huán)中其所鍵合的碳原子上不存在雙鍵時，環(huán)上的一個或兩個氫原子被其取代，并且取代基各自獨立地選自烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氧代基、氨基、甲?；?、酰基、羧基、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、氨基甲?；?、胍基、脲基、脒基、巰基、亞磺?；⒒酋；?、亞磺酰氨基，以及，只有當存在雙鍵時，鹵素；并且
R40和R41各自獨立地是氫、低級烷基、取代的低級烷基，如上面所定義的RAA，或者R40和R41共同形成任選包含一個或多個選自O(shè)、S和N的雜原子的3-12元環(huán)，其中所述環(huán)任選被上面定義的R8取代，或者R40和R41中的一個是羥基、烷氧基、芳氧基、氨基、巰基、氨基甲酰基、脒基、脲基或胍基，而另外一個是氫、低級烷基或取代的低級烷基，除了當與R40和R41鍵合的碳原也鍵合到另外的雜原子上的時候；
條件是T不是包括標準氨基酸在內(nèi)的氨基酸殘基、二肽片段、三肽片段或高級肽片段。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中
R1是H；
R2是包含C2-C6烷基或環(huán)烷基的氨基酸側(cè)鏈；
R3是包含C1-C4烷基、取代的C1-C4烷基的氨基酸側(cè)鏈，或者R3和R4共同形成3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選包含O或S原子，或者R3和R7共同形成4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選包含O或S原子；
R4是氫、包含C1-C4烷基、取代的C1-C4烷基的氨基酸側(cè)鏈，或者R4和R3共同形成3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選包含O或S原子，或者R4和R7共同形成4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選包含O或S原子；
R5和R6中的一個是氫，而另外一個是氨基酸側(cè)鏈，所述氨基酸側(cè)鏈包含C3-C6烷基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基或者被下列基團取代的C1-C4烷基芳基、取代的芳基、雜芳基或取代的雜芳基；并且
R7是氫或低級烷基。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中
X是NR13，其中R13是氫、C1-C4烷基，或者R13和R2共同形成3、4、5、6或7元雜環(huán)，其中所述環(huán)任選包含O、S或另外的N原子，并且其中所述環(huán)任選被上面定義的R8取代；
Z1是NR11，其中R11是氫、C1-C4烷基，或者R11和R3共同形成4、5、6、7或8元雜環(huán)，其中所述環(huán)任選包含O、S或另外的N原子，并且其中所述環(huán)任選被上面定義的R8取代；
Z2是NH；
M、n和p各自獨立地是0；
R1和R6各自獨立地是氫；
R2是包含下列基團的氨基酸側(cè)鏈-(CH2)sCH3、-CH(CH3)(CH2)tCH3、-(CH2)uCH(CH3)2、-C(CH3)3、-(CH2)v-R14或-CH(OR15)CH3，
其中s是1、2、3、4或5；t是1、2或3；u是0、1、2或3；
并且v是0、1、2、3或4；R14是芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、環(huán)烷基或取代的環(huán)烷基；R15是氫、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、?；?、氨基?；?、磺?；?、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、芳基、取代的芳基、雜芳基或取代的雜芳基；或者R2和R13共同形成3、4、5、6或7元雜環(huán)，其中所述環(huán)任選包含O、S或另外的N原子，并且其中所述環(huán)任選被上面定義的R8取代；
R3和R4各自獨立地是氫或氨基酸側(cè)鏈，所述氨基酸側(cè)鏈包含-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH(OR16)R17，其中R16是氫、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、?；被；⒒酋；Ⅳ然榛?、羧基芳基、酰胺基、芳基、取代的芳基、雜芳基或取代的雜芳基；并且R17是氫或低級烷基；或者R3和R4共同形成3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選包含O或S原子，并且其中所述環(huán)任選被上面定義的R8取代；或者R3和R7共同形成4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選包含O或S原子，并且其中所述環(huán)任選被上面定義的R8取代；或者R3和R11共同形成4、5、6、7或8元雜環(huán)，其中所述環(huán)任選包含O、S或另外的N原子，并且其中所述環(huán)任選被上面定義的R8取代；
R5是包含下列基團的氨基酸側(cè)鏈-(CH2)wCH3、-CH(CH3)(CH2)xCH3、-(CH2)yCH(CH3)2、-C(CH3)3或-(CH2)z-R18，其中w是2、3、4或5；x是1、2或3；y是0、1、2或3；z是0、1、2、3或4；R18是芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、環(huán)烷基和取代的環(huán)烷基；并且
R7是H或C1-C4烷基。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中
X、Z1和Z2各自獨立地是NH；
m、n和p各自是0；
R1是氫，或者R1和R2共同形成4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選在環(huán)上包含O、S或N原子，并且其中所述環(huán)任選被上面定義的R8取代；
R2是包含下列基團的氨基酸側(cè)鏈-(CH2)aaCH3、-CH(CH3)(CH2)bbCH3、-(CH2)ccCH(CH3)2、-C(CH3)3、-(CH2)dd-R19或-CH(OR20)CH3，
其中aa是0、1、2、3、4或5；bb是1、2或3；cc是0、1、2或3；并且dd是0、1、2、3或4；R19是芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、環(huán)烷基和取代的環(huán)烷基；R20是氫、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、?；?、氨基酰基、磺?；Ⅳ然榛?、羧基芳基、酰胺基、芳基、取代的芳基、雜芳基或取代的雜芳基；
當R7是C1-C4烷基時R3是C1-C4烷基，或者當R7是氫時R3和R4共同形成3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選包含O或S原子，并且其中所述環(huán)任選被上面定義的R8取代；
當R7是C1-C4烷基時R4是氫，或者當R7是氫時R3和R4共同形成3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選包含O或S原子，并且其中所述環(huán)任選被上面定義的R8取代；
R5是氫；
R6是式-CH2-R21的氨基酸側(cè)鏈，其中R21選自下列
其中
除非另外定義，環(huán)上的任何碳原子任選被N替代，條件是單環(huán)不能含有多于4個N原子，而雙環(huán)不能含有多于6個N原子；E1、E2、E3、E4和E5分別任選作為在芳環(huán)上的一個或多個可被取代位置上的氫的取代基存在，而在存在時各自獨立地是鹵素、三氟甲基、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氨基、甲?；?、?；?、羧基、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、氨基甲?；?、胍基、脲基、脒基、氰基、硝基、巰基、亞磺?；?、磺?；騺喕酋０被?，其中取代是被相同或不同所選取代基取代；
J1和J2各自獨立地是O或S
R7是氫或C1-C4烷基。
5.權(quán)利要求1的化合物，其中T是下列結(jié)構(gòu)中的一種結(jié)構(gòu)
其中(Z2)是T與Z2共價連接的位點，Z2如上面所定義，并且其中(X)是T與X共價連接的位點，X如上面所定義；
L7是-CH2-或-O-；
U1是-CR101R102-或-C(＝O)-；
R100是低級烷基；
R101和R102各自獨立地是氫、低級烷基或取代的低級烷基；
xx是2或3；
yy是1或2；
zz是1或2；并且
aaa是0或1；
6.權(quán)利要求1的化合物，其中
R1是氫；并且
R2是環(huán)丙基、-CH2CH2CH3、-CH2CH2CH2CH3、-CH(CH3)2、-C(CH3)3、-CH2CH(CH3)2或-CH(CH3)CH2CH3。
7.權(quán)利要求1的化合物，其中
R3是氫、-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2、
R4是氫；并且
R7是甲基或乙基。
8.權(quán)利要求1的化合物，其中
R3和R4共同形成3、4、5、6或7元環(huán)，所述環(huán)任選包含O或S原子；并且
R7是氫。
9.權(quán)利要求1的化合物，其中
R5是-CH2-Ar或-CH2CH2-Ar，其中Ar是苯基，獨立地被鹵素、羥基、烷氧基或三氟甲基取代一次或多次的苯基，萘基，或獨立地被鹵素、羥基、烷氧基或三氟甲基取代一次或多次的萘基；并且
R6是氫。
10.權(quán)利要求1的化合物，其中化合物是生長素釋放肽受體激動劑。
11.權(quán)利要求1的化合物，其中化合物是GHS-R1a受體激動劑。
12.式(II)化合物
或者其旋光異構(gòu)體、對映體、非對映體、外消旋體或立體化學(xué)混合物，其中
R50是-(CH2)ssCH3、-CH(CH3)(CH2)ttCH3、-(CH2)uuCH(CH3)2、-C(CH3)3、-(CHR55)vv-R56或-CH(OR57)CH3，
其中ss是1、2或3；tt是1或2；uu是0、1或2；并且vv是0、1、2、3或4；R55是氫或C1-C4烷基；R56是氨基、羥基、烷氧基、環(huán)烷基或取代的環(huán)烷基；并且R57是氫、烷基、?；?、氨基?；?、磺?；?、羧基烷基或羧基芳基；
R51是氫、C1-C4烷基或者被羥基或烷氧基取代的C1-C4烷基；
R52是-(CHR58)wwR59其中ww是0、1、2或3；R58是氫、C1-C4烷基、氨基、羥基或烷氧基；R59是芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、環(huán)烷基或取代的環(huán)烷基；
R53是氫或C1-C4烷基；
X2是O、NR9或N(R10)2+；
其中R9是氫、低級烷基、取代的低級烷基、磺酰基、亞磺酰氨基或脒基，并且R10是氫、低級烷基或取代的低級烷基；
Z5是O或NR12，其中R12是氫、低級烷基或取代的低級烷基；并且
T2是式V的二價基團
-Ua-(CH2)d-Wa-Ya-Za-(CH2)e-(V)
其中d和e獨立地是0、1、2、3、4或5；Ya和Za是各自任選存在的；Ua是-CR60R61-或-C(＝O)-并且是鍵合到式II的X2上的，其中R60和R61各自獨立地是氫、低級烷基或取代的低級烷基，或者R60和R61共同形成任選包含一個或多個選自O(shè)、S和N的雜原子的3-12元環(huán)，其中所述環(huán)任選被上面所定義的R8取代；Wa、Ya和Za各自獨立地選自-O-、-NR62-、-S-、-SO-、-SO2-、-C(＝O)-O-、-O-C(＝O)-、-C(＝O)-NH-、-NH-C(＝O)-、-SO2-NH-、-NH-SO2-、-CR63R64-、具有Z或E構(gòu)型的-CH＝CH-、-C≡C-以及如下所示的環(huán)結(jié)構(gòu)
其中G1和G2如上面所定義，并且其中環(huán)上的任何碳原子任選被N替代，條件是該芳環(huán)不能含有多于4個的N原子，并且環(huán)烷基環(huán)不能含有多于2個的N原子；
R62是氫、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、甲酰基、酰基、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、脒基、磺?；騺喕酋０被?；
R63和R64各自獨立地是氫、低級烷基、取代的低級烷基或RAA；或者R63和R64共同形成任選包含一個或多個選自O(shè)、S和N的雜原子的3-12元環(huán)；或者R63和R64中的一個是羥基、烷氧基、芳氧基、氨基、巰基、氨基甲?；?、脒基、脲基或胍基，而另外一個是氫、低級烷基或取代的低級烷基，除了當與R63和R64鍵合的碳原子也鍵合到另外的雜原子時；并且RAA表示氨基酸的側(cè)鏈；
R65是任選存在的，并且，當其存在時，取代環(huán)上的一個或多個氫原子并且各自獨立地是鹵素、三氟甲基、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氨基、甲?；?、?；?、羧基、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、氨基甲?；?、胍基、脲基、脒基、氰基、硝基、巰基、亞磺?；⒒酋；騺喕酋０被?br> R66和R67是各自任選存在的，并且當在環(huán)中其所鍵合的碳原子上不存在雙鍵時，任選存在兩個基團，并且，在存在的時候，每個基團取代環(huán)上的一個氫原子，或者當在環(huán)中其所鍵合的碳原子上不存在雙鍵時，取代環(huán)上的一個或兩個氫原子，并且每個基團獨立地是烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)、取代的雜環(huán)、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氧代基、氨基、甲酰基、?；?、羧基、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、氨基甲酰基、胍基、脲基、脒基、巰基、亞磺?；?、磺酰基、磺酰胺基，以及，只有當其所鍵合的碳原子上存在雙鍵時，鹵素；
R68是任選存在的，并且，當其存在時，取代環(huán)上的一個或多個氫原子，并且各自獨立地是鹵素、三氟甲基、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氨基、甲?；?、?；Ⅳ然?、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、氨基甲?；?、胍基、脲基、脒基、氰基、硝基、巰基、亞磺?；?、磺?；騺喕酋０被?；
R69是任選存在的，并且，在存在的時候，取代環(huán)上的一個或多個氫原子，并且每個基團各自獨立地是烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氧代基、氨基、甲?；?、?；Ⅳ然?、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、氨基甲酰基、胍基、脲基、脒基、巰基、亞磺酰基、磺?；騺喕酋０被?；
K6是O或S；并且
ff是1、2、3、4或5；
條件是T2不是包括標準氨基酸在內(nèi)的氨基酸殘基、二肽片段、三肽片段或高級肽片段。
13.權(quán)利要求12的化合物，其中T2選自下列
或
其中(Z5)是T2與Z5的共價連接位點，Z5如上面所定義，并且其中(X2)是T2與X2的共價連接位點，X2如上面所定義；
U2是-CR95R96-或-C(＝O)-；
L6a-n是-CH2 or-O-；
R90是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基，并且
R91、R92、R93、R95、R96各自獨立地是氫、低級烷基或取代的低級烷基；并且
R94是氫、低級烷基、取代的低級烷基或氧代基。
14.權(quán)利要求12的化合物，其中化合物是生長素釋放肽受體激動劑。
15.權(quán)利要求12的化合物，其中化合物是GHS-R1a受體激動劑。
16.式(III)化合物
或者其旋光異構(gòu)體、對映體、非對映體、外消旋體或立體化學(xué)混合物，其中
R70是氫或C1-C4烷基，或者R70和R71共同形成任選在環(huán)上包含O、N或S原子的4、5、6、7或8元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面所定義的R8a取代；
R71是氫、-(CH2)aaCH3、-CH(CH3)(CH2)bbCH3、-(CH2)ccCH(CH3)2、-(CH2)dd-R76或-CH(OR77)CH3，或者，R71和R70共同形成任選在環(huán)上包含O、S或N原子的4、5、6、7或8元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面所定義的R8a取代；
其中aa是0、1、2、3、4或5；bb是1、2或3；cc是0、1、2或3；并且dd是0、1、2、3或4；R76是芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、環(huán)烷基或取代的環(huán)烷基；R77是氫、烷基、?；被；⒒酋；?、羧基烷基或羧基芳基；
R72是C1-C4烷基；或者R72和R73共同形成任選在環(huán)上包含O或S原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面所定義的R8b取代；
R73是氫，或者R73和R72共同形成任選在環(huán)上包含O、S或N原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面所定義的R8b取代；
R74是氫或C1-C4烷基，或者R74和R75共同形成任選在環(huán)上包含O、S或N原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面所定義的R8c取代；
R75是-(CHR78)R79，或者R75和R74共同形成任選在環(huán)上包含O、S或N原子的3、4、5、6或7元環(huán)，其中所述環(huán)任選被下面所定義的R8c取代；其中R78是氫、C1-C4烷基、氨基、羥基或烷氧基，并且R79選自下面結(jié)構(gòu)的基團
其中E1、E2、E3、E4和E5是各自任選存在的，并且，當存在時，各自獨立地選自鹵素、三氟甲基、烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氰基、亞磺?；?、磺?；蛠喕酋０被⑶掖韱苇h(huán)或二環(huán)芳環(huán)上一個或多個可被取代的位置上取代氫的取代基，其中所示取代是被相同或不同的選擇的基團取代，并且J1和J2各自獨立地是O或S；
R8a、R8b和R8c各自獨立地取代3、4、5、6、7或8元環(huán)結(jié)構(gòu)上的一個或多個氫原子，并且獨立地選自烷基、取代的烷基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、雜環(huán)基、取代的雜環(huán)基、芳基、取代的芳基、雜芳基、取代的雜芳基、羥基、烷氧基、芳氧基、氧代基、氨基、鹵素、甲?；Ⅴ；?、羧基、羧基烷基、羧基芳基、酰胺基、氨基甲酰基、胍基、脲基、脒基、巰基、亞磺?；?、磺?；蛠喕酋０被?，或者，當取代兩個相鄰原子上的氫原子時，R8a、R8b和R8c各自獨立地是稠合環(huán)烷基、取代的稠合環(huán)烷基、稠合雜環(huán)、取代的稠合雜環(huán)、稠合芳基、取代的稠合芳基、稠合雜芳基或取代的稠合雜芳基環(huán)；
X3是O、NR9或N(R10)2+；
其中R9是氫、低級烷基、取代的低級烷基、磺酰基、亞磺酰氨基或脒基，并且R10是氫、低級烷基或取代的低級烷基；
Z10是O或NR12，其中R12是氫、低級烷基或取代的低級烷基；并且
T3與T2的上述定義相同，只是Ua鍵合到式III的X3上。
17.權(quán)利要求16的化合物，其中T3選自下列
或
其中(Z10)是T3與Z10的共價連接位點，Z10如上面所定義，其中(X3)是T3與X3的共價連接位點，X3如上面定義；并且L8a-n是-CH2或-O-；
U3是-CR85R86-或-C(＝O)-；
R80是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基；
R81、R82、R83、R85和R86各自獨立地是氫、烷基、低級烷基或取代的低級烷基；并且
R84是氫，烷基、低級烷基、取代的低級烷基或氧代基。
18.權(quán)利要求16的化合物，其中化合物是生長素釋放肽受體激動劑。
19.權(quán)利要求16的化合物，其中化合物是GHS-R1a受體激動劑。
20.下列結(jié)構(gòu)表示的化合物
或者其旋光異構(gòu)體、對映體、非對映體、外消旋體或立體化學(xué)混合物。
21.權(quán)利要求20的化合物，其中化合物是生長素釋放肽受體激動劑。
22.權(quán)利要求20的化合物，其中化合物是GHS-R1a受體激動劑。
23.大環(huán)化合物，其包含(a)構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)；和(b)選自下列結(jié)構(gòu)的系鏈(tether)組分
或
其中
(Z2)是與構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)連接的共價鍵的第一個位點；
(X)是與構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)連接的共價鍵的第二個位點；
L5a-f和L6a-k各自獨立地是-CH2-或-O-；
U1是-CR101R102-或-C(＝O)-；
R90是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基；
R92和R93各自獨立地是氫、低級烷基或取代的低級烷基；
R94是氫、低級烷基、取代的低級烷基或氧代基；
R100是低級烷基；
R101和R102各自獨立地是氫、低級烷基或取代的低級烷基；
xx是2或3；
yy是1或2；
zz是1或2；
aaa是0或1；并且其中構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)和系鏈(tether)組分進行環(huán)合以形成大環(huán)化合物。
24.權(quán)利要求23的大環(huán)化合物，其中構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)包含氨基酸、羥基酸、N-烷基化甘氨酸、肼基酸、氮雜氨基酸和含有肽鍵替代物以模擬肽片段的其它二價基團。
25.權(quán)利要求23的大環(huán)化合物，其中構(gòu)建單位結(jié)構(gòu)還包含系鏈(tether)組分。
26.藥物組合物，所述藥物組合物包含權(quán)利要求1的式(I)化合物和；和可藥用載體、賦形劑或稀釋劑。
27.權(quán)利要求26的藥物組合物，所述藥物組合物還包含生長激素促分泌劑。
28.權(quán)利要求27的藥物組合物，其中生長激素促分泌劑是hexarelin、GHRP-1、GHRP-2、GHRP-6、伊帕瑞林、MK-0677、NN703、卡普瑞林、
G7039，G7134，G7203，G7502，SM-130686，RC-1291，L-692429，L-692587，L-739943，L-163255，L-1 63540，L-163833，L-166446，CP-424391，EP-51389，LY-444711，NNC-26-0235，NNC-26-0323，NNC-26-0610，NNC-26-0722，NNC-26-1089，NNC-26-1136，NNC-26-1137，NNC-26-1187，NNC-26-1291，生長激素釋放因子、IGF-I或IGF-II。
29.藥物組合物，所述藥物組合物包含(a)權(quán)利要求12的式(II)化合物；和(b)可藥用載體、賦形劑或稀釋劑。
30.權(quán)利要求29的藥物組合物，所述藥物組合物還包含生長激素促分泌劑。
31.權(quán)利要求30的藥物組合物，其中生長激素促分泌劑是hexarelin、GHRP-1、GHRP-2、GHRP-6、伊帕瑞林、MK-0677、NN703、卡普瑞林、
G7039，G7134，G7203，G7502，SM-130686，RC-1291，L-692429，L-692587，L-739943，L-163255，L-163540，L-163833，L-166446，CP-424391，EP-51389，LY-444711，NNC-26-0235，NNC-26-0323，NNC-26-0610，NNC-26-0722，NNC-26-1089，NNC-26-1136，NNC-26-1137，NNC-26-1187，NNC-26-1291，生長激素釋放因子、IGF-I或IGF-II。
32.藥物組合物，所述藥物組合物包含(a)權(quán)利要求16的式(III)化合物；和(b)可藥用載體、賦形劑或稀釋劑。
33.權(quán)利要求32的藥物組合物，所述藥物組合物還包含生長激素促分泌劑。
34.權(quán)利要求33的的藥物組合物，其中生長激素促分泌劑是hexarelin、GHRP-1、GHRP-2、GHRP-6、伊帕瑞林、MK-0677、NN703、卡普瑞林、
G7039，G7134，G7203，G7502，SM-130686，RC-1291，L-692429，L-692587，L-739943，L-163255，L-163540，L-163833，L-166446，CP-424391，EP-51389，LY-444711，NNC-26-0235，NNC-26-0323，NNC-26-0610，NNC-26-0722，NNC-26-1089，NNC-26-1136，NNC-26-1137，NNC-26-1187，NNC-26-1291，生長激素釋放因子、IGF-I或IGF-II。
35.藥物組合物，所述藥物組合物包含(a)權(quán)利要求20化合物中的任何一種化合物；和(b)可藥用載體、賦形劑或稀釋劑。
36.權(quán)利要求35的藥物組合物，所述藥物組合物還包含生長激素促分泌劑。
37.權(quán)利要求36的藥物組合物，其中生長激素促分泌劑是hexarelin、GHRP-1、GHRP-2、GHRP-6、伊帕瑞林、MK-0677、NN703、卡普瑞林、
G7039，G7134，G7203，G7502，SM-130686，RC-1291，L-692429，L-692587，L-739943，L-163255，L-163540，L-163833，L-166446，CP-424391，EP-51389，LY-444711，NNC-26-0235，NNC-26-0323，NNC-26-0610，NNC-26-0722，NNC-26-1089，NNC-26-1136，NNC-26-1137，NNC-26-1187，NNC-26-1291，生長激素釋放因子、IGF-I或IGF-II。
38.包含一個或多個裝有藥物劑量單位的容器的藥盒，所述藥物劑量單位包含有效量的具有下列結(jié)構(gòu)的一種或多種化合物
或其旋光異構(gòu)體、對映體、非對映體、外消旋體或立體化學(xué)混合物，其中容器任選附帶藥物劑量單位的使用說明書。
39.權(quán)利要求38的藥盒，其中所述藥盒還包含生長激素促分泌劑。
全文摘要
本發(fā)明提供新的構(gòu)象限定的大環(huán)化合物，所述大環(huán)化合物已經(jīng)被證明是生長素釋放肽受體(生長激素促分泌劑GHS-R1a及其亞型、同種型和變體)的選擇性調(diào)節(jié)劑。本文還描述了合成該新化合物的方法。這些化合物用作生長素釋放肽受體激動劑，并且用作治療和預(yù)防醫(yī)療病癥的藥物，所述醫(yī)療病癥包括，但不限于，代謝和/或內(nèi)分泌病癥、胃腸病癥、心血管病癥、肥胖癥和與肥胖有關(guān)的病癥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)病癥、遺傳病癥、高增生性病癥和炎性病癥。
文檔編號A61K38/12GK101111512SQ200580028072
公開日2008年1月23日 申請日期2005年6月13日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月18日
發(fā)明者H·霍維達, M·彼得森, G·弗拉塞爾, M·拉馬塞山 申請人:特蘭齊姆制藥公司