專利名稱：中藥龍血竭黃酮類提取物的制備工藝方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種中藥龍血竭黃酮類提取物的制備工藝方法，屬中草藥制備工藝技術領域。
背景技術：
研究中藥龍血竭降血糖活性成分及生物功能，是充分利用國產資源發(fā)揮傳統醫(yī)藥優(yōu)勢，進行藥物研究自主創(chuàng)新的一條有效途徑。
發(fā)明人在大量實驗的基礎上，首次發(fā)現龍血竭(Dragon′s Blood)具有很強的α-葡萄糖苷酶抑制活性，降血糖功能顯著。為降血糖純中藥藥物的研制，提供了理論依據。申請了有關專利(03151455.3，03151456.1，200410067070.5，200510025259.25，200510025261.X，200510028232.9，200510028234.8)。在此基礎上，作了進一步改進，提取出活性更強的降血糖部位。創(chuàng)建了具有強α-葡萄糖苷酶抑制活性、胰島素促泌作用顯著的龍血竭黃酮類提取物的工藝方法。

發(fā)明內容
本發(fā)明目的在于提供一種用于降血糖的中藥龍血竭黃酮類提取物的制備工藝方法。其特征在于具有以下的過程和步驟a.龍血竭的超臨界萃取將龍血竭磨碎、過篩，隨后將其裝入超臨界萃取裝置的萃取釜中，用超臨界CO2為溶劑，進行血竭的超臨界萃取，萃取壓力為10～30MPa，溫度為40～50℃，萃取時間為1～5小時，CO2流量為25～35kg/h；萃取流出物的解析過程為兩級，第一級解析壓力7～11MPa，解析溫度為50～60℃，第二級解析壓力4～10MPa，解析溫度為40～50℃，棄去提取部分，收集萃取殘余物，萃取釜中的萃取殘余物即為除去部分無效組分的龍血竭有效部位；(參照《超臨界流體萃取中藥血竭有效成分》專利申請?zhí)?3151456.1)b.超臨界萃余物的丙酮抽提自制一個放大的仿索氏抽提器的循環(huán)回流裝置，將上述超臨界萃余物放入自制的循環(huán)回流裝置的浸出器內，然后加入5～8倍重量的丙酮溶液，水浴加熱溫度為70～80℃，反復抽提4～8小時，抽提完全后，提取物回收溶劑并濃縮至干；將所得提取物再置于真空干燥器中50～70℃減壓干燥2～3小時，取出，粉碎、過篩；c.丙酮提取物的正丁醇溶及堿液萃取將上述丙酮提取物溶于20～30倍重量的正丁醇，超聲波助溶，待完全溶解后，裝入分液裝置中，加入與正丁醇同體積的1～3％NaOH溶液，振搖20～40分鐘，進行液液萃取，靜置30～60分鐘，分層后，收集下層NaOH萃取液；重復上述液液萃取操作3～5次，合并NaOH萃取液；用1∶1鹽酸溶液調pH至2～2.5；待沉淀完全，抽濾，用蒸餾水洗滌沉淀物，至pH中性；減壓干燥所得沉淀物，溫度控制在50～70℃，干燥時間為3～5小時，取出后，粉碎、過六號篩，得到中藥龍血竭黃酮類提取物。
本發(fā)明方法所制得的龍血竭黃酮類提取物，其用途可用作降血糖藥物。
本發(fā)明方法從龍血竭中有針對性的提取分離得到了黃酮類提取物，具有強α-葡萄糖苷酶抑制活性與促胰島素分泌功能，它能使來自碳水化合物的葡萄糖降解和吸收入血液的速度變緩，降低餐后血糖的升高，使平均血糖值下降，促進胰島素的分泌，進而起到降血糖的作用。
具體實施例方式
現將本發(fā)明的具體實施例進一步敘述于后。
實施例1本實施例龍血竭黃酮類提取物的具體制備工藝步驟如下(1)龍血竭的超臨界萃取將龍血竭磨成過四號篩的中粉，稱取2.5kg，將其裝入超臨界萃取裝置的萃取釜中，用超臨界CO2為溶劑，進行龍血竭的超臨界萃取，萃取壓力為20MPa，溫度為45℃，萃取時間為2小時，CO2流量為30kg/h；超臨界萃取流出物的解析過程為兩級，第一級解析壓力7MPa，解析溫度為60℃，第二級解析壓力6.4MPa，解析溫度為40℃，棄去提取部分，萃取釜中的萃取殘余物即為除去部分無效組分的龍血竭有效部位，收集萃取殘余物2.36kg作為活性成分的粗提物。
(2)超臨界萃余物的丙酮抽提自制一個放大的仿索氏抽提器的循環(huán)回流裝置，將上述超臨界萃余物300g放入自制的循環(huán)回流裝置的浸出器內，加入6倍重量的丙酮溶液，水浴鍋溫度為80℃，抽提8小時；抽提完全后，提取物回收溶劑并濃縮至干，將所得提取物再置于真空干燥器中60℃減壓干燥2小時，取出，粉碎至過六號篩，該細粉即為以黃酮類化合物為主的龍血竭粗提物，粗提物為285g。
5、質量對比研究及質量控制指標


*P＜0.05，**P＜0.01v.s.模型組由表1可知，與糖尿病模型組比較，龍血竭黃酮類提取物低、中、高劑量組都能顯著降低四氧嘧啶糖尿病模型小鼠的血糖(P＜0.01)，與陽性對照組acarbose具相似降糖效果。實驗中糖尿病模型組采用四氧嘧啶選擇性的破壞胰島β細胞，從而造成小鼠血糖升高。這表明龍血竭黃酮類提取物具有減弱四氧嘧啶對胰島β細胞的損傷或改善受損傷細胞的功能，從而緩解糖尿病小鼠的癥狀。
(3)龍血竭黃酮類提取物對正常小鼠血清胰島素的影響取65只正常昆明小鼠隨機分為5組，每組13只，即龍血竭黃酮類提取物三個劑量組(100mg/kg、300mg/kg、500mg/kg)，陽性對照組(糖適平，12mg/kg)及陰性對照組(Control，生理鹽水)。均按0.10ml/10g體積灌胃給藥，每日1次，連續(xù)14d，末次給藥前禁食8h，給藥1h后眼眶靜脈竇采血，分離血清供試樣品液。將血清受試樣品用放射免疫分析法測定胰島素(INS)，所得數據進行組間t檢驗。結果見表2。
表2 龍血竭黃酮類提取物對正常小鼠血清胰島素的影響

*P＜0.05，**P＜0.01v.s.正常對照組傳統的胰島素增敏劑，經血液吸收后轉運到胰腺，選擇性地作用于胰島β細胞的KATP通道，不僅刺激胰島素早期相釋放，從而抑制餐后胰升糖素的釋放及由之引起的內源性餐后高血糖，使餐時及總體血糖獲得更好的控制，又減輕胰島負荷，避免慢性高胰島素血癥及其引起的諸多不良反應。而且可使肌肉及脂肪細胞的葡萄糖轉運體(Glut)-4去磷酸化，易于向細胞膜移位，提高Glut-4的表達，增強胰島素介導的葡萄糖攝取。
根據胰島素測定結果表2表明給藥小鼠血清中胰島素比空白小鼠高，尤其是中劑量組和高劑量組胰島素分泌量有明顯的提高(P＜0.01)。中劑量組和高劑量組胰島素分泌量接近糖適平(格列喹酮，gliquidone)，促胰島素分泌效果與糖適平相近。由上述可知，龍血竭黃酮類提取物具有促進胰島素分泌的效果，所以增加胰島素的分泌可能是其降血糖作用機理之一。
龍血竭黃酮類提取物α-葡萄糖苷酶抑制活性優(yōu)于拜糖蘋，胰島素促泌試驗效果接近糖適平。由于α-葡萄糖苷酶抑制活性與胰島素促泌活性的共同作用，使龍血竭黃酮類提取物龍血竭黃酮類提取物有很強的降血糖作用，為臨床治療糖尿病提供了科學依據。
權利要求
1.一種中藥龍血竭黃酮類提取物的制備工藝方法。其特征在于具有以下的過程和步驟a.龍血竭的超臨界萃取將龍血竭磨碎、過篩，隨后將其裝入超臨界萃取裝置的萃取釜中，用超臨界CO2為溶劑，進行血竭的超臨界萃取，萃取壓力為10～30MPa，溫度為40～50℃，萃取時間為1-5小時，CO2流量為25～35kg/h；萃取流出物的解析過程為兩級，第一級解析壓力7～11MPa，解析溫度為50～60℃，第二級解析壓力4～10MPa，解析溫度為40～50℃，棄去提取部分，收集萃取殘余物，萃取釜中的萃取殘余物即為除去部分無效組分的龍血竭有效部位；b.超臨界萃余物的丙酮抽提自制一個放大的仿索氏抽提器的循環(huán)回流裝置，將上述超臨界萃余物放入自制的循環(huán)回流裝置的浸出器內，然后加入5～8倍重量的丙酮溶液，水浴加熱溫度為70～80℃，反復抽提4～8小時，抽提完全后，提取物回收溶劑并濃縮至干，將所得提取物再置于真空干燥器中50～70℃減壓干燥2～3小時，取出，粉碎、過篩；c.丙酮提取物的正丁醇溶解及堿液萃取將上述丙酮提取物溶于20～30倍重量的正丁醇，超聲波助溶，待完全溶解后，裝入分液裝置中，加入與正丁醇同體積的1～3％NaOH溶液，振搖20～40分鐘，進行液液萃取，靜置30～60分鐘，分層后，收集下層NaOH萃取液；重復上述液液萃取操作3～5次，合并NaOH萃取液；用1∶1鹽酸溶液調pH至2～2.5；待沉淀完全，抽濾，用蒸餾水洗滌沉淀物，至pH中性；減壓干燥所得沉淀物，溫度控制在50～70℃，干燥時間為3～5小時，取出后，粉碎、過六號篩，得到中藥龍血竭黃酮類提取物。
2.權利要求1所述的一種中藥龍血竭黃酮類提取物的制備工藝方法所制得的龍血竭黃酮類提取物，因其具有強α-葡萄糖苷酶抑制活性與促胰島素分泌功能，其用途是用作降血糖藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種中藥龍血竭黃酮類提取物的制備工藝方法，屬中草藥制備工藝技術領域。該工藝方法的特征在于具有以下的工藝過程和步驟(1)龍血竭的超臨界萃取將龍血竭磨碎、過篩，隨后用超臨界CO
文檔編號A61P3/10GK1857570SQ20061002524
公開日2006年11月8日 申請日期2006年3月30日 優(yōu)先權日2006年3月30日
發(fā)明者呂敬慈, 雍克嵐, 劉培培, 陳旭, 顧惠娟 申請人:上海大學