專利名稱：：疫苗組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及新的聯(lián)合疫笛制劑。為使賦予抗多種病原體的保護所需的免疫接種次數(shù)最少、降低給藥成本以及增加接受率和覆益率，io聯(lián)合疫苗(提供抗多種病原體的保護)非常理想。有許多資料證實的抗原竟爭(或干擾)現(xiàn)象使多組分疫苗的開發(fā)復(fù)雜化。抗原千擾是指觀察給予時觀測到的免瘦應(yīng)答減'J、。
背景技術(shù)：
：15已知聯(lián)合疫禽可預(yù)防百日咳博德特氏菌(i^rt/eteltope/'^M'i'5)、破傷風(fēng)4復(fù)菌(C7os加iZwwtetowi)、白對囊棒桿菌(C"orj膨toefer/w/wfApM/ierwe)和可逸預(yù)防乙型肝炎病毒和/或b型流感嗜血菌(/fflewo-i7w,s〃#/狄《加6)(參見例如WO93/24148和WO97/00697)。
發(fā)明內(nèi)容20本發(fā)明涉及生產(chǎn)迄今為止最具挑戰(zhàn)性的多價疫苗，給予該疫苗可預(yù)防或治療百日咳博德特氏菌、破傷風(fēng)梭菌、白喉棒桿菌、乙型肝炎病毒和腦膜炎奈瑟氏球菌(Mw附朋g故c&')的感染，優(yōu)選還預(yù)防或治療流感嗜血菌、肺炎鏈J泰菌(SVn尸tococc，歸p/ie冊MOTioe)、甲型肝炎病毒和/或脊髓灰質(zhì)炎病毒的感染，其中所述疫苗的組分不明顯干擾25該疫笛中任一組分的免疫學(xué)功效。因此，在本發(fā)明的一方面，提供一種多,免疫原性組合物，用于給宿主提供保護作用以抵抗百日咳博德特氏菌、破傷風(fēng)梭菌、白喉棒桿菌、乙型肝炎病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒和腦膜炎奈瑟氏球瞎所引起的疾病，該多價免疫原性組合物包含3()(a)或者滅活全細胞百日咳博德特氏翁(Pw)，或者兩種或多種非細胞百日咳組分(Pa)[優(yōu)選后者]，(b)破傷風(fēng)類毒素(TT或T),(c)白喉類毒素(DT或D)，(d)乙型肝炎表面抗原(HepB或麵)，(e)滅活發(fā)髓灰盾炎病毒(IPV),和(f)載體*白和選自以下細菌的莢膜多糖的任一種或二者的綴合物Y型腦膜炎奈暴氏球菌(MenY)和C型驗?zāi)ぱ啄?瑟氏球菌(MenC),以及(g)可逸載體憂白和B型流感嗜血翁(Hft))莢膜多糖的綴合物以上的免疫原性組合物還可含有1、2、3、4、5或6種逸自以下的組分A型腦膜炎條瑟氏球菌多糖[MenA](優(yōu)逸綴合型)、W型io腦膜炎奈瑟氏球菌多糖[MenW〗(優(yōu)逸綴合型)、傷寒沙門氏菌f，/H)Vi多糠、腦膜炎奈瑟氏球菌(優(yōu)逸B血清型)外膜小泡、一種或多種腦膜炎奈瑟氏球菌(優(yōu)逸B血清型)外膜(表面暴露的)蛋白以及滅活、減毒甲型肝炎病毒(HepA-優(yōu)逸稱為《HawixTM"[SmitliKHneBeeeh纖Biologicak〗的制品)，這些組分對組合物中的任D—種抗原都不存在顯著干擾問題在本發(fā)明第二方面，提供各種各樣的含有2種或3種多價免疫原性組合物的高級藥盒，所述藥盒能夠保護宿主抵抗百日咳博德特氐菌、破傷風(fēng)梭菌、白喉捧軒菌、乙型肝炎病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒和肺炎鏈球菌以及可逸的腦膜炎奈瑟氏球菌和流感嗜血翁所？)起的20疾病。在本發(fā)明第二方面的第一個實施方案中，提供一種含2#多價免疫原性組合物的藥盒，用f保護宿主抵抗百日i博緣特氏菌、破傷風(fēng)梭菌、白喉棒軒菌、乙型肝炎病毒、脊髓灰廣炎病毒和肺炎鏈球菌以及可逸的腦膜炎奈瑟氏球菌和流慼嗜血菌所引起的疾病。25所述藥盒含有的第一個容器包含(a)或者滅活全細胞百日咳博德特氏菌(Pw)，或者兩種或多種非細胞百日咳組.分(Pa)[優(yōu)逸后者]，(b)破傷風(fēng)類毒素(TT或T)，(e)白喉類毒素(DT或D)，(d)乙型肝炎表面抗原(HepB或HB)，和(e)滅活脊髓灰盾炎病毒(IPV)，'所述藥盒含有的第二個容器包含5(2a)載體蛋白和肺炎鏈球菌莢膜多糖的一種或多種綴合物，〖其中所迷笑膜多糖優(yōu)逸得ljrt下肺炎球菌血滂型L2、3、4、5、6A、6B、7F、8、亂亂墜、區(qū)、12F、14、15B、i7F、18C、進、亂20、22F、23F和33F〗。在本發(fā)明以上藥盒的其它有利實施方案中，第一個容器還含有-.10(f)載體蛋白和選自以下細菌的莢膜多糖的任一種或二者的綴合物Y型腦膜炎奈瑟氏球菌(MenY)和C型腦膜炎奈瑟氏球籙(MenC)，和(g)載體蛋白和B型流感嗜血菌(Hib)英膜多糖的綴合物；或者笫二個容器還含有(2b)載體蚤白和選自以下細菌的笑膜多糖的任一種或二者的綴合物Y型腦膜炎奈瑟氏球菌(MenY)和C型腦膜炎奈瑟氏球菌15(MenC),和(2c)載體蛋白和B型流感嗜血菌(ffib)莢膜多糖的綴合物；或者第一個容器還含有(f)栽體蛋白和逸自以下細菌的笑膜多糖的任一種或二者的綴合物Y型腦膜炎奈瑟氏球菌(MenY)和C型腦膜炎奈瑟氏球菌(MenC)，而第二個容器還含有(2b)載體蛋白和B型流感嗜血菌(Hib)莢膜多糖的綴合物；或者第一個容器還含有(f)載體20蛋白和B型流感嗜血菌(ffib)莢膜多糖的綴合物，而第二個容器還含有(2b)載體蛋白和逸自以下細菌的英膜多糖的任一種或二者的綴合物Y型腦膜炎奈瑟氏球菌OlenY)和C型腦膜炎奈瑟氏球菌(MenC)。在本發(fā)明笫二方面的笫二個實施方案中，提供一種含2#多價免疫原性組合物的藥盒,用于保護宿主抵抗百日咳博德特氏菌、破25傷風(fēng)梭菌、白喉棒桿菌、.乙型肝炎病毒、脊髓灰質(zhì)炎痛毒、腦膜炎奈瑟氏球菌和流感嗜血菌所引起的疾病。所述藥盒含有的第一個容器包含(a)或者滅活全細胞百日咳博德特氏菌(Pw)，或者兩種或多種非細胞百日咳組分(Pa)[優(yōu)逸后者]，(b)破傷風(fēng)類毒素(TT或T),'(e)白喉類毒素(DT或D),(d)乙型肝炎表面抗原(HepB或腦)，和5(e)滅活脊髓灰應(yīng)炎病毒(IPV),所述藥盒含有的第二個容器包含(2a)載體蛋白和逸自以下細菌的笑膜多糠的任一種或二者的緩合物Y型腦膜炎奈瑟氏球菌(MenY)和C型腦膜炎奈瑟氏球菌(MenC),和io(2b)載體蛋白和B型流感嗜血菌(Hib)英膜多糖的綴合物。—在本發(fā)明第二方面的第三個實施方案中，提供一種含3種多價免疫原性組合物的藥盒，用于保護宿主抵抗百日咳博德特氏菌、破傷風(fēng)梭菌、甶喉棒桿菌、乙型肝炎病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒和腦膜炎奈瑟氐球菌、流感嗜血菌和肺炎健球翁所引起的疾病。15所述藥盒含有的第一個容器包含(a)或者滅活的全細胞百日咳博德特氏菌(Pw),或者,種或'多種非細胞百日咳組分(Pa)[優(yōu)選后者，(b)破傷風(fēng)類毒素(TT或T),(e)白喉類毒素(DT或D)，加(d)乙型肝炎表面抗原(HepB或HB),和(e)滅活脊髓灰質(zhì)炎病毒(IPV)，所述藥盒含有的第二個容器包含(2a)載體蛋白和肺炎鏈球菌笑膜多糖的一#或多種綴合物，[其中所述莢膜多糖優(yōu)逸得自以下肺炎球菌血清型1、2、253、4、5、驗、6B、7F、8、置亂亂亂12F、14、15B、HF、18C,19A—、19F、20、22F,23F和33F，所述藥盒含有的第三個容.器包含(3a)載體蛋白和逸自以下細菌的英膜多糖的任一種或二者的綴合物Y型腦膜炎奈瑟氏球菌(MenY)和C型腦膜炎奈瑟氏J恭菌(MenC)，和(3b)栽體蛋白和B型流感嗜血菌(Hib)芙膜多糖的綴合物。以上本發(fā)明藥盒的任一種容器或上述容器還可含有i、2、3、4、55、6或7種選自以下的組分A型腦胰炎奈瑟氏球菌多糖[Mei:iA](優(yōu)選綴合型)、W型腦膜炎奈瑟氏^jt菌多糖[MenW](優(yōu)選綴合型)、傷寒沙門氐菌Vi多糖、腦膜炎奈瑟氐球萌(優(yōu)逸B血清型)外膜小泡、—種或多種腦膜炎奈瑟氏球菌(優(yōu)逸B血清型)外膜(表面暴露的)蛋白、HepA(如上所述)和一種或多種肺炎鏈球菌蛋白(優(yōu)逸表面暴露的)，i(》這些組分對組合物中的任一種抗原都不存在顯著干擾問題。所述藥盒的容器可牟獨包裝，或者優(yōu)選一起包裝。所述藥盒最好在兩個或兩個以上容器中提供一張疫苗給藥說明書。其中，藥盒中的一個容器包含某一多糖綴合物，優(yōu)選藥盒中的其它容器沒有相同綴合物。!5本發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，以上述方式提供的藥盒有利地以最佳方式將各種抗原呈遞給宿主免疫系統(tǒng)。所述藥盒給執(zhí)業(yè)醫(yī)師提供最佳的宿主免疫接種方法，該方法其有以下一種或多種優(yōu)勢(優(yōu)逸2種或3種，最優(yōu)選全部)全部抗原的保護效力、最小的反應(yīng)原性、最小的栽體抑制f擾、最小的佐劑/抗原干擾或最小的抗原/抗原千擾。按20此方法以最少次數(shù)(2次)給予可實現(xiàn)這些目標，優(yōu)選就醫(yī)時同時給予。盡管在優(yōu)選實施方案中第一個和第二個容器(追用時的第三個容器)的疫苗在不同部位(如下所迷)同時給予，但在一個選擇性實施方案中，本發(fā)明人設(shè)想可將第一個和第二個容器的內(nèi)含物混合(優(yōu)逸臨用前混合)，然后作為單劑疫苗給予。25具體實施例方式本發(fā)明的抗原破傷風(fēng)類毒素(TT)的制備方法是本領(lǐng)域公知的。例如，優(yōu)逸通過從破傷風(fēng)梭歸培秦物純化毒素然后化學(xué)解毒生,TT，扭可選地通過純化所述毒素的重組或基因工穉解毒類似物(如EP209281所述)制備。"破傷風(fēng)類毒素，，也包括全長蛋白的免疫原性片段(例如片段O參見EP478602)。白喉類毒素(DT)的制備方法也是本領(lǐng)域公知的。例如，優(yōu)逸通5過從白喉棒軒菌培養(yǎng)物純化毒素然后化學(xué)解毒生產(chǎn)DT,《旦可逸地通過纟t化所述毒素的重組或基因工程解毒類似物(例如CRM197,或US4,709,017、US5，843,711、US5,601,827和US5,917,017所述的其它突變體)制備。非細胞百日咳組分(Pa)是本領(lǐng)域/厶知的。實例包括百曰咳類毒素w(PT)、絲狀血細胞凝集素(FHA)、pertaet雄(P畫)和凝集原2和3。這些抗原部分純化或高度純化。優(yōu)選在疫苗中使用2種或多種非細胞百曰咳組分。更優(yōu)逸在疫笛中捧入以上示例非細胞百日咳組分中的2、3、4種或全部5種。最優(yōu)逸包括PT、FHA和P麗。PT可通過多種方式生產(chǎn)，例如通過從百日咳博德特氏菌培養(yǎng)物純化毒素然后15化學(xué)解毒制備，或者通過純化PT的基因工耀解毒類似物(例如US5,085,862所迷)制備。.WO93/Ml48公開了途f本發(fā)明的滅活全細胞百日咳博穩(wěn)特氏菌(Pw)制備方法，也公開了遞于生產(chǎn)DT-TT-Pw-HepB和DT-TT-Pa-HepB疫苗的配制方法。20滅潘脊髓灰質(zhì)炎病毒(IPV)優(yōu)逸包舍疫笛領(lǐng)城梘為麵準的1、2和3型。最優(yōu)逸的是Salk脊髓灰質(zhì)炎疫翁。通常，本發(fā)明的肺炎鏈球菌疫翁包含多糖抗原(優(yōu)逸綴合型)，其中所述多糖得自選自以下的至少4種肺炎球菌血清型1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、IOA、IIA、12F、14、15B、17F、18C、2519A,19F、20、22F、23F和33F。4種血清型優(yōu)選包括6B、14、19F和23F。史優(yōu)逸在組合輛中包括至少7種血清型，例如得自血清型4、6B、9V、14、18C、19F和23F。更優(yōu)逸在組合物中還包括7種以上的血清型，例如至少11種血清型。例如，一個實施方案中的組合物包括ll種得自血清型1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F和23F的莢膜多糖(優(yōu)選綴合型)。盡管本發(fā)明還考慮了其它的多糖抗原，例如23價抗原(例如血清型1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、IOA、IIA、12F、14、15B、!7F、18C、19A、19F、20、22F、23F5和33F),扭在本發(fā)明的優(yōu)逸實施方案中，包括至少13種多糖抗原(優(yōu)逸級合型、對f老年人接種疫苗(例如為了預(yù)防肺炎)，上途的優(yōu)選11價抗原組合物中包括血清型8和12F(最優(yōu)選還有15和22)形成13/15價疫苗是有利的，而對于嬰兒和學(xué)步幼兒(更關(guān)注中耳炎),包含血清型io6A和19A形成13價疫苗有利。綴合物細菌莢膜多糖綴合物可包含任何含至少一種T輔助表位的載體肽、多肽或*白使用的載體蛋白優(yōu)逸逸自破傷風(fēng)類毒素、白喉15類毒素、CRM197、重組白喉毒素(如US4,709,017、WO93/25210、WO95/33481或WO00/48638任一個所述)、肺炎鏈球菌的肺炎球菌溶血素(優(yōu)逸化學(xué)解毒的或解毒突變體)、腦膜炎奈瑟氏球菌OMPC和流感嗜血菌D蛋白(EP594610).由于已知的栽體抑制作用,如果在本發(fā)明的每種組合物中將其中所包含的多糖抗原("n"抗原)與一20種以上的栽體綴合是有利的。因此,可在一種栽體上(獨立地)攜帶(ll-l)種多糖，而在不同的載體上揭?guī)?種多糖，或在一種載體上攜帶(n-2)種多糖，而在兩種不同的載體上攜帶2種多糖，依此類推。例如，在含4種細菌多糖綴合物的疫笛中，1種、2種或全部4種綴合物都可以綴合至不同的栽體。然而，D蛋白在本發(fā)明的組合物中用作栽25體有利，@為D蛋白可用于組合物中的各種(2、3、4或更多種)多糖而沒有顯著的栽體抑制作用。最優(yōu)逸是以Hib作為TT後合物，肺炎球菌多糠作為D蛋白、DT或CRM197綴合物，而MenA、MenC、丄MenY和MenW作為TT或PD的綴合物。D蛋白還是一種有用的載體，因為它還提供了另一種可提供抗流感嗜血菌保護的抗原?？刹捎萌魏我阎姆椒?例如Likhite的美國專利4，372，945和Armor等的美國專利4,474,757)，將所途多糖與所述載體發(fā)白遂摟。優(yōu)選的是進行CDAP綴合(WO95/08348)。5在CDAP申，優(yōu)選的是使用氛化劑四歡，酸l，氰基,二甲基氛基吡啶鐨(CD人P)來合成多糖-蛋白綴合物。氰化反應(yīng)可在相對溫和的條件下進行，這避免了減敏感性多糠的水解。該合成方法允許直接與載體蛋白偶聯(lián)。本發(fā)明免疫原性組合物優(yōu)逸配制為疫苗，以下述方式體內(nèi)給予宿主所述組合物的各種組分經(jīng)配制使各種組分的免疫原性基本不被組合物中的其它各種組分所削弱。所述基本不被削弱是指在免疫接種時，所f臭得的4十對每種組分的抗體效價(例如IgG)超過該抗原單15獨給予時所褒得效價的60%,優(yōu)逸超過70%，更優(yōu)選超過80%,番更優(yōu)逸超過卯％,最優(yōu)逸超過95400%。令人感^趣的是，對于上述的藥盒組合，在免疫接種時所荻得的抗ffib莢膜多糖或某些肺炎球翁多糖的抗體效價有可能接近或超過該抗原單獨給子時所荻得效《介的100%/20EMM本發(fā)明免疫原性組合物優(yōu)逸S5制為體內(nèi)給予宿主的疫苗，使得療者中的血清保護標準。這在整個群體的疫苗功效評價中走一個重25要的試獫。高于所迷抗原血清轉(zhuǎn)化型宿主的相關(guān)抗體效價是眾所周知的，這種效價由WHO之類的組織公布。統(tǒng)計學(xué)顯箸的受治療者樣品優(yōu)選超過80%血清粉化型，更優(yōu)選超過90%，再更優(yōu)逸超過93%，最優(yōu)逸為96400%。本發(fā)明的免疫原性組合物優(yōu)逸加有佐劑》合遞的佐劑包括鋁鹽，例如氛氧化4S凝股(alum)或褲脧鋁，但也可以是倆鹽、鐵鹽或姅鹽，或者可以是酰化酪氛酸或?；恰㈥栯x子或F月離子橋生化多糖或聚辦腈的不溶性懸浮液。5還可以逸摔為THi型應(yīng)答優(yōu)先if導(dǎo)物的佐劑，從而有助于免疫應(yīng)答的細胞介導(dǎo)分支。高水平的Thl型細胞B予往往利于箭導(dǎo)由對給定杭原的細胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，而髙^c平的Th2型細胞國子往往利于餘導(dǎo)出對所途抗原的體激免疫應(yīng)答。io促進主要為Thl應(yīng)答的合遞佐劑系統(tǒng)包括單褲酰脂展A或其衍生物，特別是1脫4>?；瘑?酰脂質(zhì)A，以及單褲酰脂質(zhì)A(優(yōu)逸3，脫-O?；瘑?酰脂廣A(3D-MPL))和^鹽的I且合。一種增強系統(tǒng)包括羊褲酰脂質(zhì)A和鬼瞽衍生物的組合，特別是WO94/00153公開的QS21和3D自MPL的組合，或者如WO96/33739公開的用膽固15醇將QS21lf滅從而反應(yīng)原性收弱的一種組合物。WO95/17210描述了—種特別有效的佐劑制劑，其在水包油扎劑中含有QS21、3D-MPL和生育酚。疫翁可還含有息瞽，更優(yōu)選QS21。制劑還可含有氷包油乳劑和生育酚(WO95/17210)。包含寡核番酸的未甲基化CpG(WO96/02555)也是TH1應(yīng)答的優(yōu)先講導(dǎo)物，途合癥用f本發(fā)明20在上述免疫原性組合物中鋁鹽是優(yōu)選的佐劑。#體地說》HepB優(yōu)選應(yīng)當吸附到礴酸45上，然后和其它組分混會。Pertactm優(yōu)逸吸附到氫氧化鋁上，然后和其它組分混合。為了使本發(fā)明組合物中的佐劑(特別是4S鹽)氷平最小化，多糖綴合物可以不進行佐劑化。本發(fā)明還提供一種生產(chǎn)疫苗制劑的方法,》該方法包挺將疫苗組25分和藥學(xué)上可接受的賦形劑混合在一起的步驟。特別優(yōu)逸的本發(fā)明DTPa組合物(羊獨使用或者作為上述藥盒之一的第一個容器的內(nèi)含物)包含TT、DT、Pa(優(yōu)選包含PT、FHA和PRN-PRN優(yōu)選吸附到氣氣化4S上)、HepB(優(yōu)逸吸附到磷酸凝上)、IPV、MenC(優(yōu)選綴合D蛋白、TT、DT或C畫197)以及可選的MenY(優(yōu)選綴合D蛋白、TT、DT或CRM197)。所述組合物還可以可選地含有扭b(優(yōu)選綴合TT和/或未吸附佐劑)所述疫苗優(yōu)選以2小瓶提供，第一瓶含液體形式的DTPa-lPV-HepB,而第二瓶含凍千形式的5MenC(以及可選的MenY和/或Hib),最好有蔑糖、乳糖或海藻糖之類的抗結(jié)塊劑。所述小瓶內(nèi)容物可在臨使用前混合在一個容器中，然后以一次給藥/注射給予宿主。該組合物也可以用于上迷藥盒(第一個容器的內(nèi)含物)。因包含Hib(優(yōu)逸綴合TT和/或未吸附佐劑)和/或MenC和MenY10(優(yōu)選綴合D蛋白、TT、DT或CRM197和/或束吸附佐劑)的任一種或二者的容器的藥盒起見，該組合物優(yōu)選以凍干形式儲存，最好有蔑糖、孔糖或海藻糖之類的抗結(jié)決劑。因含本發(fā)明DTPa組合物(單獨使用或作為上述藥盒之一的第一個容器的內(nèi)含物)的容器包含DTPa和Hib和/或Men,C和MenY的任15—種或二者(其中Hib和/或Men組分綴合TT)起見，優(yōu)選平衡疫苗中的TT含量，使得單個容器中的總TT舍量不超過臨界l，值(例如40、45、50、60、70或80貼TT)，以降低、最小化或防止TT綴合多糖的TT免疫干擾或載體抑制。該閾值優(yōu)逸為50pg。本發(fā)明人友現(xiàn)上述綴合物中的多糖:TT比率可降低旦1:0.5-1,5(重量)(優(yōu)逸1:0,64.2,20最優(yōu)選大約1:1)，在此范圍有益。例如在DTPa-HB-IPV-Hib(TT)-MenC(TT)疫苗中，DTPa中T的量優(yōu)逸應(yīng)當降至通常的標準量以下(優(yōu)逸約常規(guī)量的1/4至3/4，最優(yōu)選約常規(guī)量的1/2)，例如降低至10-30嗎TT,優(yōu)選20,25pgTT。例如，如果綴合扭b的TT量大約為12薄TT，而綴合MenC的TT量大約為5貼TT，未綴合TT的量為24f丄g、則25總TTf約為41歸。特別優(yōu)選的扭b/肺炎球菌多糖組合物(羊獨使用或作為上述藥盒之一的第二個容器的內(nèi)含物)包含Hib(優(yōu)i4級合TT和/或束吸附佐劑)和多種(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11種以上)肺炎球菌多糖綴合物(例如以上"本發(fā)明的肺炎鏈球菌疫—段所述的那些組合物)。最優(yōu)選包括11種多糖(得自血清型1、3、4、5、6B,7F、9V、14、18C、19F和23F)。肺炎球菌多糖優(yōu)選級合至PD、DT、CRMi97或TT。在一個優(yōu)選實施方案中，ffib多糖抗原未吸附到佐5劑上，具體地說是鋁鹽上。盡管肺炎球菌多糖抗原可進行佐劑化(優(yōu)選吸附到磷酸鋁上),但它們也沒有吸附到佐劑上，具體地說是鋁鹽上。在一個具體的實施方案中，組合物中不存在鋁鹽佐劑。本發(fā)明組合物可以包括其它抗原(例如腦膜炎奈瑟氏球菌C型莢膜多糖綴合物[優(yōu)選綴合到D蛋白、TT、DT或CRM197上和/或未吸附佐劑)，io但在一個選擇性實施方案中，ffib和肺炎球菌多糖綴合物是組合物中僅存的抗原。在以上制劑的其它具體實施方案中，Hib和肺炎球菌多糖未綴合至同一載體(具體地說該載體是CRM197)。所述疫翁可以以1個容器(內(nèi)容物或者為液體形式或者為凍干形式)或2個小瓶提供，第一瓶含扭b(優(yōu)選凍干的)，第二瓶含肺炎球15菌抗原(優(yōu)逸液體形式)。凍千組合物最好有,、糖、乳糖或海藻糖之類的抗結(jié)塊劑。所述小瓶的內(nèi)容物可在臨使用前混合在一個容器中，然后以一次給藥/注射給予#主。對于這樣的制劑，在免疫接種時所獲得的抗Hib笑膜多糖的抗體效價有可能接近或最常見是超過該抗原羊獨給予時所襲得效價的100%在優(yōu)逸的實施方案中，組合物中20的肺炎球菌多糖綴合物與其單獨給予相比沒有出現(xiàn)(明顯的)有害作用(就保護性功效而論)這可根椐測量最后初次劑量(初次劑量通常為出生后第一年中給予3次免疫接種)后1個月抗多糖抗體的初次后幾何平均濃度(GMC)評價。本發(fā)明疫苗的GMC(ng/mi)優(yōu)逸應(yīng)i超過未綴合Hib的肺炎球菌多糖給予時的GMC的55%(更優(yōu)逸超過60%、2570%、80%或90%)。另一個無有害作用發(fā)生的指標是在給子免疫接種后1個月對比本發(fā)明疫苗和未綴合扭b的疫苗時，抗體濃度不低于0,5pg/mi的受治療者百分比差異不超過l(m(優(yōu)逸低于9%、7%、5%、3%或1%)。l管上文擬到了Hib、肺炎球菌和腦膿炎球菌"多糠'，，但設(shè)想本發(fā)明可延伸至疫苗領(lǐng)城眾所周知的Hib和肺炎球菌"分級多糖"和"寡糠"(多糠火小減小至易處理的程度，仍能夠if導(dǎo)宿主的保護性免疫應(yīng)答)(參見例如FP497525)。有利的是，MenY可與天然多糠5分子量0,1、0.2、0丄0.4、0.5、0,6、0,7、0,8或0,9倍的騰作為Sl唐綴合物l在。在本發(fā)明*—方面，提供一種如本文所述用亍藥物的免疫原性組合物或疫笛。在本發(fā)明再一方面，提供本發(fā)明免疫原性組合物在藥物生,中io的用途，所述藥物用于治療或預(yù)防由百日咳博德特氏菌、i皮傷風(fēng)梭菌、白喉棒軒菌、乙型肝炎病毒、.魯髓灰廣炎病毒和腦膜炎奈瑟氏球菌(和可逸流感嗜血歸)感染所？l起的疾病。而且，還提供本發(fā)明免疫原性組合物在疫苗藥盒生產(chǎn)中的用途，所述疫笛藥盒用于治療或預(yù)防由百日咳博緣特氏菌、破傷風(fēng)梭菌、白喉棒軒菌、乙型肝炎病15毒、脊髓灰艱炎病毒、流感嗜血菌、肺炎鏈球菌和腦膜炎奈瑟氏球菌感染所引起的疾病。另外，還提供免疫人類宿主抵抗百日咳博德特氏菌、破傷風(fēng)梭菌、白喉棒桿菌、乙型肝炎病毒、務(wù)髓灰質(zhì)炎痛毒和腦膜炎奈瑟氐球菌(和可逸流感嗜血菌)所歉疾病的方法，該方法包栝給予所途宿主20免疫保護劑量的本發(fā)明免疫原性組合物。本發(fā)明#—方面涉及用上述本發(fā)明藥盒免疫人類宿主抵抗百日咳博德特氏菌、破傷風(fēng)梭菌、白喉棒軒菌、乙型肝炎病毒和脊髓灰廣炎病毒以及一種或多種流感嗜血菌、肺炎鏈球菌和腦膜炎奈瑟氏球菌所致疾病的方法》該方法包括如下所述的同時給藥方案。25同時給藥方案該方案包括以下步雞給予宿主免疫保護劑量的藥盒(例如本發(fā)明的一種藥盒)第一個容器的免疫原性組合物，給予部位與給予該藥10152025盒第二今(或第三個)容器的免疫原性組合物的部位不同，這些部《立由不同的淋巴結(jié)引流。所述不同部位優(yōu)逸為不同肢體。疫翁給予優(yōu)逸為互相之間在24小Bt之內(nèi)，更優(yōu)逸為同一天，最優(yōu)逸為宿主就醫(yī)時同時給予。優(yōu)逸宿主隨恭用兩種(或4^)疫禽以相同的方式再1次或多次(優(yōu)逸2次)免疫接種，每次間隔2-12周(優(yōu)逸大約1個月)a經(jīng)常在第二次給予后的2周和7個月之間可以給f笫三次免疫接神。例如，可按照正常的DTP疫笛給藥方案如上給予疫苗(例如三次接種體系》毎次接種相P惑1個月，如3、4和5月齡方案；或3、5和11.月齡方案；或3、5和12月齡方案)。這樣的給藥方案使4十對藥盒的,個(或全部)容器中的抗原的免疫應(yīng)答最佳?？梢韵嗤姆绞接沙錾蟮诙曛脸赡甑娜魏螘r候給予疫苗加強盡管接種優(yōu)逸通辻肌內(nèi)途徑進行，但可逸地在粘膜佐劑(優(yōu)逸.大腸軒菌的laureth9或熱不穩(wěn)定毒素[LT]1其突變體或片段)存在下由粘膜進行加強可能有利，(例如鼻內(nèi)給予疫翁易于給藥，特別是當宿主胃腸外接種時可非常好地起作用)，疫苗的給藥部位不需要引流至不同的淋巴結(jié)'。明疫笛藥盒生產(chǎn)方'法中的用途。在兩個或酌個以上容器中包含TT的藥盒本發(fā)明另一方面涉及用于國時給藥(如上定義)的疫翁藥盒，其中兩個或兩個以上容器的TT含量平衡至有利于減少、最小化或預(yù)防TT綴合多糖的TT免疫干擾或載體抻制。TT是一種特別好的載體，但是已知它如果在疫翁組合物中過量使用，特別是如果還存在游離的TT，那么它具有限制作用。如果過f使用，所有綴合TT的抗原都表現(xiàn)出抗體效價下降。B此，本領(lǐng)城存在一個在火聯(lián)合疫苗的許多不同領(lǐng)城(例如作為游離抗原或作為許多多糖抗原的載體)中如何使用TT而沒有以上缺點的問題。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了解決該問題的最佳方法；通過使用藥盒同a于給藥方案(如上定義)，可給予第一個容器含有的tt量不超過發(fā)生免疫千擾或載體抑制的核界閾值的疫翁和笫二個容器(以及飫逸的第三個容器)含有的TTf不趦過發(fā)生免疫f擾或載體押制的臨界闊值的疫苗，使得同時給予的總TT量高于該臨界閾值，免5疫f擾(或載體抻制)減到最小(即低于如果該組分以一次注射給予)，優(yōu)逸裉本不發(fā)生。臨界閾值可為40、45、50、60、70或80隨TT優(yōu)選約SOfigTX因此，可給予的最大總TT最高約為藥盒容器數(shù)(2或3)乘以臨界闊值所襲得的f。H此，本發(fā)明提供一種用f同時給予的含2(或3)個容器的藥盒，io所述容器含有2(或3)種免疫原性組合物，每種組合物含有游離和/或級合形式的TT，其中每個容器的TT量不超過臨界閾值，以預(yù)防或最小化TT免疫干擾(或載體押制)作用，《旦所有容器中的總TT超過所述臨界閾值。優(yōu)逸i少一個容器應(yīng)當含有游I(非綴合型)TT,最優(yōu)逸應(yīng)當包15含在DTPa或DTPw多*疫籥中盡管存在的游離TT量可在火約42,的正常水平左右，但本發(fā)明的另一優(yōu)勢使存在量降低(10，30或10，20jig，例如10、15、20、25或30^g),但仍可激發(fā)最佳的抗TT抗體效價，而免疫干擾或載體押制作用減至最小(或沒有)》優(yōu)逸至少1個(但可能是2或3個)容器應(yīng)當包括至少1(但可能20是2、3、4、5、6、7或更多)種TT綴合多糖。當游離TT存在于1個容器中時，優(yōu)逸在葯盒的一個其它容器中應(yīng)當有至少一種TT綴合多糖所述多糖可以為本申請所述的任何一種，優(yōu)選為一種或多種肺炎球菌多糠(如上所途)或MenC、MenY或ffik所述藥盒優(yōu)逸為如上所述的任一種本發(fā)明藥盒。25藥盒中存在的1、2、3或^多糖^TT綴合物優(yōu)逸使多糖:TT比率降低(與極、準綴合物相》匕)至1:0,5-1J(重量)(優(yōu)逸1:0,6，1.2,最優(yōu)逸大約1:1),使得所述綴合物仍有免疫學(xué)功能，偉容易將TT免疫f擾或載體抑制作:用減至最小或杜絶，還提供使用上述藥盒免疫人類宿主的方法，該方法&括在第一個部位給予竊主免疫保護劑量的笫一個容器的免疫原性組合物，在笫二個部位給予德主免疫保護劑量的第二個容器的免疫原性組會物.(以及任選在第三個部位給予宿主免疫保妒劑量的第三個容器的免疫5原性組合物)，其中所述第一和笫二(和笫三)個部位通過不同的淋巳結(jié)引流。同時給藥應(yīng)當如上所途進行第一和第二(和第三)個部位優(yōu)逸為宿主的不同肢體。第一和第二(和第三)個容器的免疫原性組合物優(yōu)逸在同一天給予。優(yōu)逸隨后以相同的方式再1次或多次免疫接種宿主，io每次間隔242周，更優(yōu)逸再免疫接種2次，每次間P函大約個月的周期。在兩個或兩個以上容器舍DT或CRM197的蕩盒本發(fā)明的孫一方面涉及同時給予(如上定義)的疫翁藥盒，其中兩15個或兩個以上容器的DT含量(包括DT和任一免疫學(xué)等同突變體，如CRM197)平衡至有利于增強DT(或CM197)級合多糖的抗體效價，西反應(yīng)原性減至最小(即反應(yīng)原性比容器中的組分單次注射給予低)。DT和CRM197是非常好的載體，但是已知DT很大程度上促成了包含其的疫苗的反應(yīng)原性。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)通過使用藥盒同時給藥方案(如20上定義)，第一個容器中含高量(40450,，優(yōu)逸《M20兩，更優(yōu)逸70400最優(yōu)逸大約95,)存在的DT(和/或CRM197)的疫笛有利，其中第二個容器(和任選的第三個容器)中含D卩或CRM197^綴合多糖的疫笛同時給予。本發(fā)明的優(yōu)勢在亍a)l管第一個容器中的DT含f高，《旦高得25不足以i秀發(fā)DT免疫f擾或載體押制作用，b)DT，或CRM，197多糖綴合物與第一個容器分開，使得笫一個容器疫禽的反應(yīng)原性沒有增力a，另c)針對緩合DT或CRM197的多糖的抗體效價沒有降低，并可能增加(與所述綴合物單獨給予相比或與笫一個容器中存在較低fDT相比效價較高)。本發(fā)明固此提供一種用于同時給藥(如上定義)的含2(或3)個容器的藥龕，容器含有2(或3)種免疫原性組合物，其中第一個容器含有高量(如上定義)存在的DT內(nèi)容物(DT加CRM197;優(yōu)逸游離或非5綴會型)》而第二(和第三)個容器包含一種或多種綴合DT和/或.CRM197的多糖。第一個容器優(yōu)逸應(yīng)當包含游離(非綴合型)DT,最優(yōu)選應(yīng)當包含在DTPa或DTPw多*疫禽中。綴合DT/CRM197的多糖可以是本申請描迷的任一種；優(yōu)逸以10下的一種或多種肺炎球菌多糖1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、IOA、IIA、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F或33F、MenC、MenY或扭b。按照本發(fā)明，維持的針對當》最優(yōu)逸增強》15優(yōu)逸所述藥盒是如上所述的本發(fā)明藥盒的任一種藥盒中存在的1、2、3或全部多糖-DT(CRM197)緩合物優(yōu)逸使多糖:DT/CRM197比率降低(與標準級合物相比)至l:0,515(f:量)(優(yōu)逸1:0.6-1,2,最優(yōu)逸大約1:1)。還提供使用上述藥盒免疫人類lt主的方法，該方法包括在第一20個部位給予宿主免疫保護劑量的第一個容器的免疫原性組合物，在第二個部位給予宿主免疫保護剤f的第二個容器的免疫原性組合物(以及任逸在第三個部位給予宿主免疫保護劑量的第三個容器的免疫原性組合物)，其中所述第一和笫二(和第三)個部位通過不同的淋巴結(jié)引流。25同時給藥應(yīng)當如上所述進行。第一和第二(和第三)個部位優(yōu)逸為宿主的不同肢體。第一和第二(和第三)個容器的免疫原性組合物優(yōu)逸在同一天給予。優(yōu)逸隨后以相同的方式番1次或多次免疫4晏種宿主，每次間隔2-12周，更優(yōu)逸獸免疫接種2〗夂，每次間隔大約W個月的周期。本發(fā)明的疫翁制劑可用來保護或治療易感染哺扎#物，方法是將所述疫苗級全身或鉆膜途徑給藥。這些給藥方法可包括經(jīng)肌內(nèi)、腹腹內(nèi)、皮內(nèi)或皮下途徑注射；或通過口腔/消化道、呼吸道(例如鼻5內(nèi))、泌尿生殖道黏膜給藥。每劑疫笛的抗原f可裉椐在典型疫苗中誘發(fā)免疫保護應(yīng)答《旦不造成明顯副作用的量進行選擇。這種量根椐所用特定免疫原及其怎樣提呈而有所變化。一般認為每劑包含O丄IOO離多糖，優(yōu)逸0丄S0兩，優(yōu)逸0.1-10pg，其中1-5gg是最優(yōu)選的劑量范BKw疫苗中發(fā)白抗原的含f通常在I，IOO歸的范B內(nèi)，優(yōu)逸5-50歸，最通常在弘25叫的范,內(nèi)8在初次免疫后，受治療者可接受一次或數(shù)次途當間隔的加強免疫。在《疫1t設(shè)計》中對疫苗的制備方'法進行了綜合論迷("亞基及15佐劑方法"(PowellM.F.&Newm纖M,J,編輯)(1995)PienumPressNewYork)。Fuilerton的美國專利4，235,877描述了脂質(zhì)體包隸化。實施例提供實施例僅用以說明本發(fā)明，無意限制本發(fā)明的范圍》20實施例復(fù)DT-TT-P錢-IPV4IepB(DTP錢IPVIfcpB)疫苗的制備如WO93/24148所述進行。所述疫翁按照商品名Irf證ix，PeNTa(SmitliKlineBeechamBiologicals)商購》25實施例2:MenC或MenCMeiiY疫苗的制備MenC:腦膜炎奈瑟氏球菌C型莢膜多糖綴合至D*白或TT(使用CDAP技術(shù))，每0,5ml人劑量綴合物中存在的多膽量為5ggpH調(diào)節(jié)至6.1，在蘼糖存在下凍干MenCMenY:將綴合至D蛋白或TT(使用CDAP挾術(shù))的腦膜炎奈瑟氏球菌C型莢膜多糖和綴合至D蛋白或TT的腦膜炎條瑟氏球菌Y型莢fli多糖混合在一起，毎0,5mi人剤量每種綴會物申的多糖量為5,pH調(diào)節(jié)至6.1，并在蔑糖存在下凍f。實施例3:DT-TT-Pa鵬IPV-HepB-Me鼓C-MenY(DTFaffVHeiiB層eiiCMeiiY)或DT-TT-Pa-夏PV-HepB鵬M緩C(DTPaIPVHepB細enC)疫翁的制備使用前(同一天)臨時混合實施例1和實施例2的疫苗。10實施例4:Hib-l1價肺炎球菌綴合(Hib/Strepl1V)疫苗的制備b型流感嗜血菌莢膜多糖綴合至TT(每劑綴合物中的多糖為10jig)，于pH6。1、扎糖存在下凍干[HiberkT滅(SmithKlineBeechamBiologicak)〗，將其臨時(使用的同一天)溶解在綴合PD(每劑每種綴15合物中的多糖為1,)的ll價肺炎球菌英膜多糖(血清型1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F和23F)的液體溶液中。先前肺炎球菌疫*已經(jīng)吸附到0.5mgAJ3+(A1K)4)上。實施例5:臨床試驗20以三劑(:3、4、5月齡)方隸給f德國嬰兒實施例4的疫翁和對感疫笛。免疫應(yīng)答結(jié)果(最恭1次初次給藥后1個月測f的結(jié)果)如下?？狗窝浊蚓鶬gG抗體GMC(^g/ml)(通過ELISA檢測)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>A組41Pn-Pd+Infanrix-HeXaTM(Infaniix-Penta加上加入的ffib綴合物-DTPa鵬膨IPV墨)D組=1IPirfd/Hib+Manrix-PeNTa(DTPa掘-ffV)+表示同時給予(在不同鼓在)，西不是混合給予抗體濃度不低f0.5gg/ml的受治療者百分比<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>100%的受治療者的抗1麼(Hft)多糠)抗體濃度不低于1.0figZmLHibenx(非吸附型Hib-TT級合物)在相似給藥方案后的GMC約為6,/ml換照ELISA抗體測定，接受11PirfD/Hib疫苗的嬰凡的免疫應(yīng)5答與觀測到的接受所有血清型的llPn-PD疫苗的嬰兒的免疫應(yīng)答相似，血清型1、3和9V是例外，因為觀察到llPn-PD/Hib疫笛的幾何平均濃度有下降的趁勢。但是，95%的置信區(qū)間重疊表明，這*羞異不明顯11Pn-PD/Hib疫^誘導(dǎo)出抗全部11種血清型的功能性(調(diào)理素吞io噬作用)抗體。..Hib疫苗和肺炎球露綴合疫苗的混合沒有明顯f擾肺炎球菌免疫應(yīng)答，并且與兩種已注冊的疫翁Infaiirix，HeXa和Hiberix相比5令人驚奇地增強抗PRP應(yīng)答。15i€*4類滋奔3瘦可以評《斧與MenC綴合疫笛混合的Iiifeimx-PeNTa與Hib疫翁給予或與和Hibera混合的11價肺炎球菌疫苗同時給予的安全性和免疫原性?？梢酝瑫r評價PD和TT載體的MenC綴合物。所述疫翁20可4為3劑疫^給子嬰兒?？稍诓煌w、就醫(yī)時同時注射?？梢栽u價與MenOMenY綴合疫笛混合的Infanrix-PeNTa與ffib疫笛給予或與和Hibenx混合的11價肺炎球菌疫苗同時給予的安全25性和免疫原性。可以同時評價PD和TT載體的MenC和MenY緻合物所迷疫苗可作為3劑疫苗給予嬰兒?？稍诓回柚w、就醫(yī)時同時注射。權(quán)利要求1.一種多價免疫原性組合物，其用于保護宿主抵抗由流感嗜血菌和肺炎鏈球菌引起的疾病，所述組合物包含(a)載體蛋白和B型流感嗜血菌莢膜多糖或寡糖的綴合物，(b)載體蛋白和肺炎鏈球菌莢膜多糖或寡糖的7種以上綴合物。2.權(quán)利要求1的免疫原性組合物，其中所述肺炎鏈球菌莢膜多糖或寡糖得自以下血清型1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、〖()9V、IOA、IIA、12F、4、15B、17F、18C、進、19F、20、22F、23F和33F。3.權(quán)利要求2的免疫原性組合物，其包含載體發(fā)白和肺炎鏈球菌血清型1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F和23F莢膜多糖或寡糖的綴合物。154.權(quán)利要求1-3的免疫原性組合物，其還含有佐劑。5.權(quán)利要求1-3的免疫原性組合物，其中所述B型流感嗜血菌莢膜多糖或寡糖未吸附到鋁鹽佐劑上。6.權(quán)利要求5的免疫原性組合物，其中所迷肺炎鏈球—歸莢膜多糖或寡糖吸附到4S鹽佐劑上。207,權(quán)利要求5的免疫原性組合物，其中所述B型流感嗜血菌上。8.權(quán)利要求〗-7的免疫原性組合物，其中所用栽體蛋白選自破傷風(fēng)類毒素、白喉類毒素、CRM197、重組白喉毒素、腦膜炎奈瑟25氏球菌的OMPC、肺炎鏈球菌的肺炎球菌溶血素和流感嗜血菌的D蛋白。9,權(quán)利要求1-8的免疫原性組合物，其中所述B型流感嗜血菌莢膜多糖或寡糖和肺炎鏈球菌莢膜多糖或寡糖未綴合到同一種載體上。10.權(quán)利要求9的免疫原她組合物，其中所述B型流感嗜血菌莢膜多糖或寡糖和肺炎鏈珠菌莢膜多糖或寡糖都來綴合到CRM197上。11.權(quán)利要求8或9的免疫原性組合物，其中用于所述B型流感嗜血菌莢膜多糖或寡糖的載體蛋白是破傷風(fēng)類毒素。12.權(quán)利要求8、9或11的免疫原性組合物，其中用于全部所迷肺炎鏈球菌莢膜多糖或寡糖的載體發(fā)由都是D蛋白。13.權(quán)利要求142的免疫原性組合物，其配制為體內(nèi)給予宿主io的疫苗，其中所述組合物的各種組分經(jīng)配制使各種組分的免疫原性不被組合物中其它各種組分所削弱。14.權(quán)利要求1-12的免疫原性組合物，真配制為體內(nèi)給予宿主的疫lt，其產(chǎn)生的抗體效價高f每種抗原組分在可接受百分比的人類受治療者中的血清保護#準。15.權(quán)利要求1-14的免疫原性組合物，其用于藥物。16.權(quán)利要求1-14的免疫原性組合物在生產(chǎn)用于治療或預(yù)防由流感嗜血菌和肺炎鏈球菌感染引起的疾病的藥物中的應(yīng)用。17.—種制備權(quán)利要求W4的多價免疫原性組合物的方法，該方法包括將所述各種組分混合在一起的步驟。全文摘要本發(fā)明涉及新的高級DTP型聯(lián)合疫苗制劑以及同時給予的聯(lián)合疫苗藥盒。還提供了這些疫苗和藥盒的給藥方法。文檔編號A61K39/385GK101112619SQ20061010741公開日2008年1月30日申請日期2002年3月28日優(yōu)先權(quán)日2001年4月3日發(fā)明者C·卡皮奧,D·勒穆瓦納,D·布特里奧,J·普爾曼,P·M·德斯蒙斯申請人:葛蘭素史密絲克萊恩生物有限公司