專利名稱：用于治療尿失禁的疫苗組合物及方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包含抗-LHRH疫苗的組合物用于控制或治療尿失禁的 用途。本發(fā)明還涉及治療或控制哺乳動(dòng)物(特別是經(jīng)過(guò)手術(shù)閹割的哺 乳動(dòng)物，例如經(jīng)切除卵巢的雌狗)尿失禁的方法。
背景技術(shù)：
尿失禁為因膀胱或尿道括約肌功能異常而發(fā)生的尿液不自主流失 或流出。在尿液正常儲(chǔ)存期間，當(dāng)膀胱充滿尿液時(shí)，尿道括約肌會(huì)緊 閉以防滲漏。然后，當(dāng)要排空尿液時(shí)，尿道括約肌會(huì)松弛并讓尿液通 過(guò)尿道。尿失禁經(jīng)常是尿道括約肌失去正常張力的結(jié)果，其減少其緊 縮能力。在這類情況下，當(dāng)膀胱內(nèi)的壓力超過(guò)關(guān)閉尿道所需的壓力時(shí)， 尿失禁就會(huì)以無(wú)法控制的方式發(fā)生。該問(wèn)題較常發(fā)生于哺乳動(dòng)物放松 時(shí)，例如在深層睡眠期間，或當(dāng)膀胱上的壓力瞬間增加時(shí)，例如當(dāng)哺 乳動(dòng)物咳嗽或打噴噢時(shí)。
熟習(xí)此項(xiàng)情況者應(yīng)了解，尿失禁在成年女性中很常見(jiàn)。因?yàn)槟蚴?禁在社會(huì)上的污名，很多罹患者甚至不會(huì)向健康照顧提供者報(bào)告該問(wèn) 題。結(jié)果，該醫(yī)學(xué)問(wèn)題廣泛地未得到診斷并且受到低估。
狗的尿失禁亦相當(dāng)常見(jiàn)。通常發(fā)生在雌狗，且最常是于經(jīng)切除卵 巢的雌狗。雄狗也同樣會(huì)發(fā)生該情況，但相對(duì)于雌狗較不常見(jiàn)。先前 曾認(rèn)為，切除卵巢或經(jīng)閹割狗的尿失禁的根本機(jī)制，是卵巢或睪丸切 除后的低手術(shù)后雌激素或睪酮濃度所造成。在雌狗情況下，雌激素被 認(rèn)為是負(fù)責(zé)尿道括約肌的張力。切除卵巢后，雌激素荷爾蒙的制造量 顯著低于卵巢切除前的制造量。雖然腎上腺可制造少量雌激素荷爾蒙， 但一般認(rèn)為其制造量不足以提供括約肌張力。在這類情況下，可能會(huì) 發(fā)生尿失禁，而需要某些治療形式以支持括約肌張力。同樣地，雄狗
可能會(huì)在閹割后發(fā)生尿失禁，因其主要睪酮來(lái)源的睪丸被切除了 。
尿失禁的治療傳統(tǒng)上主要針對(duì)改善尿道閉合的壓力。在這方面，
是使用可增加尿道或膀胱頸的抗力的物質(zhì)。特別是，這類藥物包括a-腎上腺素能物質(zhì)，例如麻黃堿或苯基丙醇胺("PPA")。以上的治療典型 上是需要長(zhǎng)期使用該藥物，并已顯示在人類會(huì)造成嚴(yán)重的心臟電生理 副作用。這類有害副作用包括(但不限于)心室纖維顫動(dòng)和心律失常。 這類潛在致命的心臟副作用造成數(shù)種用于人類的藥物下市，包括最近 被美國(guó)食品和藥品管理局("FDA")撤銷的PPA。 a-腎上腺素能物質(zhì)亦被 禁止用于治療青光眼和進(jìn)行性腎病。
作為替代療法，可以采用各種形式的雌激素或雌二醇，例如二乙 基己烯雌酚(或在雄狗中為睪酮)替代療法(replacement therapy)， 其可改善尿道兒茶酚胺受體的反應(yīng)性。然而，雌激素治療廣泛地被認(rèn) 為比使用a-腎上腺素能物質(zhì)不安全，因其可能造成狗的骨髓抑制，而 這可能會(huì)致命。
最近，已有假說(shuō)認(rèn)為成年婦女和卵巢切除雌狗發(fā)生尿失禁的原因 為促性腺激素促卵泡激素("FSH")和促黃體素("LH")的血清濃度增加， 而不是雌激素本身的降低。Reichler， I.M.等人的77 ef/Te" C/l 〃
Theriogenology， 60: pp. 1207-1216 (2003);美國(guó)專利申請(qǐng)公開文 本第US MO5/0043342號(hào)(下文中通稱為"Reichler等人")。據(jù)報(bào)告， 腦垂體可釋放出LH和FSH到系統(tǒng)中，以響應(yīng)促黃體素釋放激素的產(chǎn)生 ("LHRH"，亦常稱為促性腺激素釋放激素或"GnRH"，或促性腺激素釋放 因子"GnRF")。 LHRH由下丘腦以脈動(dòng)方式釋放至血流中，以響應(yīng)廣泛 的因子，且其控制一般認(rèn)為復(fù)雜。其釋放受到下丘腦神經(jīng)元活性的正 向影響，并受到水平雌激素和其它性類固醇和激素例如抑制素A和B 的負(fù)向控制。釋放的LHRH行經(jīng)血液至腦垂體。在腦垂體前葉的受體細(xì) 胞會(huì)藉由釋放促性腺激素FSH和LH以回應(yīng)LHRH的升高。隨著整個(gè)動(dòng) 情周期過(guò)程改變的FSH和LH相對(duì)量，反過(guò)來(lái)會(huì)刺激卵巢制造雌激素。 在經(jīng)閹割的雌狗中，由于切除卵巢(即主要的雌激素來(lái)源)，雌激素只
在極低血清的濃度可測(cè)量到。通常源起于性腺的其它激素例如由卵巢
中的顆粒細(xì)胞所分泌的抑制素，選擇性地抑制腦垂體FSH的分泌。結(jié) 果，由于不再有反饋機(jī)制，F(xiàn)SH和LH不受阻礙地分泌出，造成這兩種 促性腺激素的濃度增加。Reichler等人主張，承受尿失禁的后更年期 婦女和經(jīng)閹割的雌狗中的FSH和LH量高于正常值。因此，Reichler 等人提出可使用LHRH的類似物，例如激動(dòng)劑、拮抗劑或抗體在藥物中 來(lái)控制或治療尿失禁。
然而，該方法具有顯著的缺點(diǎn)。特別是，典型地需要高劑量的LHRH 拮抗劑或激動(dòng)劑來(lái)實(shí)現(xiàn)希望的抗促性腺作用。再者，由于使用這類類 似物的作用為立即性，所以它們?nèi)狈Τ志眯?，因此需要?jīng)常的投藥。 此外，在某些情況下，大量的這類類似物可能造成不希望或不利的副 作用。這類物質(zhì)亦非常昂貴，因?yàn)槠涫褂谩⒁蚨彩瞧淇色@得性通常 限于激素依賴性腫瘤的治療。同樣地，LHRH抗體除了成本相當(dāng)高以外， 還具有較短半衰期的缺點(diǎn)，這可能造成較短持久性的治療以及多劑量 的潛在需求。因此，使用該方法時(shí)必須經(jīng)常和連續(xù)投藥LHRH抗體的成 本很高且對(duì)狗伺主不方便。因此，LHRH類似物對(duì)于如此的獸醫(yī)應(yīng)用并 不實(shí)用。
因此，盡管目前可得到某些尿失禁治療的報(bào)導(dǎo)，但是關(guān)于這類治 療的完全反應(yīng)或者不常觀察到，伴隨嚴(yán)重副作用，缺乏長(zhǎng)效作用，或 者成本太高或不方便持續(xù)下去。因此需要持續(xù)發(fā)展出新治療方法，特 別是這類可長(zhǎng)期控制并可以具有經(jīng)濟(jì)效益的方法來(lái)治療尿失禁的方 法，同時(shí)降低目前治療方法的潛在致命副作用(例如心律不整或骨髓萎 縮)。本發(fā)明滿足這類需求。
發(fā)明概述
此前未被認(rèn)知的尿失禁治療的一種替代和/或補(bǔ)充方法為通過(guò)使 用疫苗組合物而靶向免疫系統(tǒng)。主動(dòng)免疫治療的潛在好處是，通過(guò)加 強(qiáng)受試者自身的免疫反應(yīng)，為對(duì)不受限制的促性腺激素FSH和LH產(chǎn)生 和釋放的有效和長(zhǎng)效控制提供經(jīng)改善的效率。
因此，本發(fā)明涉及抗-LHRH疫苗及其用于治療或控制哺乳動(dòng)物尿 失禁的用途。特別是，本發(fā)明提供用于在需要該治療的哺乳動(dòng)物中治 療尿失禁的方法，其中該方法包括給哺乳動(dòng)物施用治療上有效量的抗 -LHRH疫苗。在本發(fā)明一方面，需要治療尿失禁的哺乳動(dòng)物為雌性， 優(yōu)選為具有升高血清濃度的促黃體素或促卵泡激素的雌性動(dòng)物。在另 一方面，需要治療尿失禁的哺乳動(dòng)物為雌狗。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案 中，哺乳動(dòng)物為經(jīng)過(guò)手術(shù)閹割的動(dòng)物，例如切除卵巢的雌狗。
在本發(fā)明一方面,抗-LHRH疫苗包含栽體和LHRH間的免疫原性綴 合物(conjugate)。優(yōu)選地，載體包含選自較大范圍的已知載體蛋白質(zhì)， 包括(但不限于)細(xì)菌性類毒素。最優(yōu)選地，栽體包含白喉類毒素。在 另一方面，載體可為合成肽，其包含輔助T-細(xì)胞表位(T-cell helper epitope)。在任何一方面，LHRH肽的有效形式或者經(jīng)由綴合或者在鄰 接T-輔助細(xì)胞-LHRH肽的合成期間和載體結(jié)合在一起。在本發(fā)明另一 方面，抗LHRH疫苗可另外包含佐劑。優(yōu)選地，佐劑包含離子多糖，最 優(yōu)選為二乙基氨基乙基葡聚糖(DEAE葡聚糖)。在特別優(yōu)選的實(shí)施方 案，佐劑為DEAE葡聚糖和免疫刺激性復(fù)合物的組合，免疫刺激性復(fù)合 物包含皂苷和膽固醇。
在另一方面，本發(fā)明還涉及治療或控制哺乳動(dòng)物尿失禁的方法， 包括給哺乳動(dòng)物施用包含治療上有效量的載體和LHRH間免疫原性綴 合物的組合物。對(duì)于以蛋白質(zhì)-LHRH肽綴合物為基礎(chǔ)的疫苗來(lái)說(shuō)，有 效量為范圍約100至約300 ug，且對(duì)于以T-輔助細(xì)胞-LHRH肽為基礎(chǔ) 的疫苗來(lái)說(shuō)，有效量為范圍約20至約200 ug。
發(fā)明詳述
本發(fā)明涉及免疫原性組合物和疫苗，其適用于誘發(fā)抗促黃體素釋 放激素(LHRH,或促性腺激素釋放激素或GnRH)的免疫反應(yīng)。本發(fā)明還 涉及該抗-LHRH疫苗或物理化學(xué)穩(wěn)定組合物在引發(fā)哺乳動(dòng)物抗-LHRH 免疫來(lái)控制或治療尿失禁的方法中的用途。
術(shù)語(yǔ)"抗-LHRH疫苗"包括能夠在宿主內(nèi)誘發(fā)對(duì)LHRH的免疫反應(yīng)
的任何疫苗、組合物或藥物制品。更具體地說(shuō)，本發(fā)明的抗-LHRH疫 苗包含至少一種LHRH抗原或免疫原在藥物可接受載體中，其可用于在 該宿主中引發(fā)免疫反應(yīng)。僅為了舉例說(shuō)明，可用于本發(fā)明的抗-LHRH 疫苗，以及制備這類物質(zhì)的方法，包括(但不限于)描述在國(guó)際申請(qǐng)第 PCT/AU99/01167號(hào)(1999年1月21日公開為WO99/02180 ),國(guó)際申 請(qǐng)第PCT/AU98/00532號(hào)(2000年7月20日公開為W0 99/41720 )， 以及美國(guó)專利第6, 685,947號(hào)，它們以引用的方式并入本文中。
術(shù)語(yǔ)"LHRH"應(yīng)視為指所有形式的LHRH及其衍生物，包括(但不 限于)具有LHRH免疫原性的所有肽。術(shù)語(yǔ)"衍生物"包括來(lái)自天然、 合成或重組來(lái)源的片段、局部、部分、化學(xué)同等物、突變體、同系物 及類似物，包括融合蛋白。LHRH可得自任何適當(dāng)?shù)膩?lái)源，且用于產(chǎn)生、 分離和純化天然和合成LHRH的方法為本領(lǐng)域所熟知。在優(yōu)選實(shí)施方案 中，該LHRH包含至少五個(gè)氨基酸的LHRH C-端片段。
因?yàn)長(zhǎng)HRH本身太小而無(wú)法具有免疫原性，因此本發(fā)明中使用的 LHRH必須變成免疫原性形式。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知將本身不具免疫性 的物質(zhì)產(chǎn)生成免疫原性形式的方法。其中一種適當(dāng)方法為將LHRH和免 疫原性載體偶聯(lián)。因此在本發(fā)明中，LHRH可在綴合于免疫原性載體之 后施用給哺乳動(dòng)物，作為抗原以引發(fā)宿主形成抗LHRH抗體。載體發(fā)揮 作用，刺激有效抗體反應(yīng)所必需的T-輔助細(xì)胞。因此，栽體可包含在 長(zhǎng)度上至少9個(gè)氨基酸的、形成輔助T-細(xì)胞表位的小肽。該T-輔助細(xì) 胞表位可衍生自犬痙熱病毒(Canine Distemper Virus; CDV)，其特 別適用于狗，因?yàn)榇蟛糠值墓芬呀?jīng)接受抗CDV疫苗接種。由該疫苗引 發(fā)的抗體隨后將對(duì)抗身體自身的LHRH,由此提供長(zhǎng)期的抗性腺激素效 果。在優(yōu)選實(shí)施方案中，LHRH在綴合于免疫原性載體后經(jīng)由疫苗投藥 給哺乳動(dòng)物，以刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗-LHRH抗體，抗-LHRH抗體可和 LHRH反應(yīng)，以有效降低其在體內(nèi)的濃度。因此可減少或消除由于LHRH 的存在所造成的作用，包括FSH和LH的高血清濃度，后者據(jù)信造成尿 失禁。
用于制備上述LHRH綴合物的免疫原性載體包括能增加LHRH免疫
原性的任何物質(zhì)。本發(fā)明綴合物使用的免疫原性載體可為天然或合成 的。在一方面，該免疫原性載體為蛋白質(zhì)。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的任 何一種免疫原性載體蛋白質(zhì)可用在本發(fā)明的綴合物疫苗中。適當(dāng)?shù)牡?白質(zhì)種類包括致病細(xì)菌的纖毛蛋白質(zhì)、外膜蛋白質(zhì)和分泌的毒素、該 分泌毒素的無(wú)毒性或"類毒素"形式、抗原性相似于細(xì)菌毒素的無(wú)毒 性蛋白質(zhì)及其它蛋白質(zhì)?？紤]使用于本發(fā)明的細(xì)菌類毒素的非限制實(shí)
例包括破傷風(fēng)毒素/類毒素、白喉毒素/類毒素、去毒銅綠假單胞菌CP.
3"^//70^2)毒素A、霍亂毒素/類毒素、百曰咳毒素/類毒素和產(chǎn)氣莢
膜梭菌(67os"/cT/咖；7er/V2'/^e/7》外毒素/類毒素。這類細(xì)菌毒素的 類毒素形式為優(yōu)選的。最優(yōu)選地，使用于本發(fā)明LHRH綴合物中的免疫 原性栽體為白喉類毒素。應(yīng)理解，對(duì)白喉類毒素的提及包括所有形式 的白喉類毒素及其衍生物。術(shù)語(yǔ)"衍生物"具有此前定義的相同意義。 例如，衍生物可包括包含白喉類毒素T細(xì)胞表位的分子或分離的T細(xì) 胞表位。
在本發(fā)明另一方面，載體可為包含至少一個(gè)輔助T-細(xì)胞表位的合 成肽。表位可為單個(gè)的或可連接在一起形成一個(gè)多肽。應(yīng)當(dāng)理解，當(dāng) 當(dāng)表位在一個(gè)多肽中連接在一起時(shí)，這些表位可以是連續(xù)的或者通過(guò) 本身并非T輔助細(xì)胞表位一部分的、另外的氨基酸而分隔開來(lái)。在一 實(shí)施方案中，輔助T-細(xì)胞表位包含在肽序列中，肽序列選自描述在美 國(guó)專利第6， 685， 947號(hào)的這類物質(zhì)，該文獻(xiàn)以引用的方式并入本文中。 在優(yōu)選實(shí)施方案中，合成肽疫苗另外包含至少一個(gè)B細(xì)胞表位和/或至 少一個(gè)CTL表位。在最優(yōu)選實(shí)施方案中，合成肽疫苗包含從約3至約 10個(gè)輔助T-細(xì)胞表位，每一個(gè)與2-10型LHRH(2-10 form of LHRH) 處于線性序列中，總肽含量為約每劑量120 pg肽，并和約80 jug的 佐劑組合。優(yōu)選地，該佐劑包含免疫刺激性復(fù)合物。
將LHRH偶聯(lián)至免疫原性載體的適當(dāng)方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟 知。在不意圖限制本發(fā)明到任一種方法，LHRH可例如以Ladd等人 爿/z er/cs/2 /. y e/7rodz;c〃re /邁邁u/2o/o^r 22: 56-63 (1990)或Bonneau 等人/. J/7/鵬/ Scie/7ce 72:14-20 (1994)描述的方法偶聯(lián)至載體。
得到的綴合物可經(jīng)處理而除去任何留存的未結(jié)合肽或其它綴合副產(chǎn) 物。該處理可通過(guò)常規(guī)透析或通過(guò)超過(guò)濾而實(shí)現(xiàn)。
本發(fā)明的疫苗可和佐劑結(jié)合或可進(jìn)一步包含佐劑?？蓪⒆魟┌?在或加入疫苗和其它免疫原性制品中，以增加并在某些情況下引導(dǎo)出 免疫反應(yīng)。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，任何熟知的標(biāo)準(zhǔn)佐劑可用在本發(fā) 明中。適用于本發(fā)明疫苗中的佐劑包括(但不限于)不可溶的鋁鹽，特
別是氫氧化物和磚酸鹽形式(統(tǒng)稱"alum" )、 murabutide、弗氏不完 全佐劑、弗氏完全佐劑、離子多糖，例如二乙基-氨基乙基("DEAE") 基團(tuán)、皂苷、免疫刺激性復(fù)合物及其組合。在優(yōu)選的實(shí)施方案，使用 不會(huì)誘發(fā)副反應(yīng)或只會(huì)誘發(fā)輕微副反應(yīng)的佐劑。其它可用于本發(fā)明的 適當(dāng)佐劑包括(但不限于)描述在國(guó)際申請(qǐng)第PCT/AU99/01167號(hào)，1999 年1月21日公告為W0 99/02180，以及國(guó)際申請(qǐng)第PCT/AU98/00532 號(hào)，2000年7月20日公告為W0 99/41720的佐劑，這些文獻(xiàn)以引用 的方式并入本文中。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，佐劑為DEAE-葡聚糖。 在一更優(yōu)選的實(shí)施方案中，佐劑為DEAE-葡聚糖結(jié)合免疫刺激性復(fù)合 物，免疫刺激性復(fù)合物包含皂苷和膽固醇。
在不限制本發(fā)明于任一理論或作用模式下，本發(fā)明的有效量抗 LHRH疫苗的投藥引發(fā)對(duì)于LHRH的免疫反應(yīng)，且與此避免激素LH和FSH 來(lái)自腦垂體腺前葉的釋放。優(yōu)選地，該抗-LHRH疫苗量可通過(guò)降低接 受疫苗投藥的雌性哺乳動(dòng)物體內(nèi)的循環(huán)FSH和/或LH血清濃度，有效 改善卵巢切除相關(guān)的副作用或生殖器官衰老(reproductive senescence)相關(guān)的癥狀，特別是尿失禁。應(yīng)當(dāng)理解，有效性為一種 功能性測(cè)量，且并非僅定義為抗-LHRH抗體效價(jià)，因?yàn)閱螁窝h(huán)抗體 的存在并不必然指示所述循環(huán)抗體控制尿失禁的能力。因此，就像用 于誘發(fā)抗體的所有免疫原性組合物一樣，本發(fā)明疫苗的免疫有效量必 須依經(jīng)驗(yàn)而加以確定?？紤]的因子包括佐劑的選擇、與LHRH偶聯(lián)的免 疫原性分子、投藥途徑以及投藥劑量數(shù)。這類因子為熟習(xí)疫苗技藝者 已知，且本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠做出該確定而不需要過(guò)度實(shí)驗(yàn)。
因此，通過(guò)本發(fā)明的方法可治療或控制雌性哺乳動(dòng)物(例如經(jīng)閹
割的雌狗)卵巢切除的副作用或生殖器官衰老相關(guān)的癥狀，特別是尿 失禁。在一優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療或控制哺乳動(dòng)物尿失禁
的方法，該方法包括投予該哺乳動(dòng)物有效量的抗-LHRH疫苗。優(yōu)選地， 抗-LHRH疫苗為L(zhǎng)HRH-免疫原性載體綴合物的形式。在一更優(yōu)選實(shí)施方 案中，綴合物包含LHRH-白喉類毒素綴合物。在另一實(shí)施方案中，抗 -LHRH疫苗以合成肽的形式存在，該合成肽包含輔助T-細(xì)胞表位。優(yōu) 選地，合成肽疫苗包含從約3至約10個(gè)輔助T-細(xì)胞表位，每一個(gè)與 2-10型LHRH處于線性序列中，總肽含量為約每劑量120pg肽，并和 約80 jug的免疫刺激性復(fù)合物組合。接受本發(fā)明疫苗治療的優(yōu)選哺乳 動(dòng)物為雌性，更優(yōu)選為具有升高的FSH或LH或兩者的血清水平的雌性 哺乳動(dòng)物。在一最優(yōu)選實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物為雌狗，且特別是經(jīng)過(guò) 手術(shù)切除卵巢或閹割的雌狗。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供通過(guò)閹 割后投予狗有效量的抗-LHRH疫苗，預(yù)防經(jīng)閹割狗發(fā)生尿失禁的方法。 本發(fā)明的疫苗可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何適當(dāng)方法而投 藥，包括(但不限于)口服投藥或通過(guò)注射投藥。適用于注射用途的藥 物形式包括無(wú)菌水溶液(水可溶時(shí))或分散體以及用于臨時(shí)制備無(wú)菌注 射溶液或分散體的無(wú)菌粉劑。這類物質(zhì)在制造和儲(chǔ)存條件下必須為物 理和化學(xué)上穩(wěn)定的，且必須得到保存而不受例如細(xì)菌或真菌等微生物 的污染作用。載體可為溶劑或分散介質(zhì)，含有例如水、乙醇、多元醇(例 如甘油、丙二醇和液體聚乙二醇及其類似物)、其適當(dāng)?shù)幕旌衔?，及?物油?？赏ㄟ^(guò)例如包衣例如卵磷脂的使用，通過(guò)在分散體的情況下所 需顆粒大小的維持，以及通過(guò)表面活性劑的使用，來(lái)維持適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng) 性。微生物作用的預(yù)防可通過(guò)各種抗細(xì)菌劑和抗真菌劑例如對(duì)羥基苯 甲酸酯類(parabens)、氯丁醇、酚、山梨酸、石危柳汞(thimerosal) 及其類似物而完成。在很多情況下，優(yōu)選包括等滲劑，例如糖類或氯
遲吸收劑例如單硬脂酸鋁和明膠而完成。
無(wú)菌注射溶液可通過(guò)將活性化合物以需要量加入適當(dāng)溶劑中，如 有必要可包括上列各種其它成分，接著通過(guò)過(guò)濾除菌作用制備而得。 一般而言，分散體可通過(guò)將各種經(jīng)殺菌活性化合物加入無(wú)菌賦形劑中 制備而得，賦形劑含有基本分散介質(zhì)及上文列舉成分中的所需其它成 分。在用于制備無(wú)菌注射溶液的無(wú)菌粉劑情況下，優(yōu)選制備方法為真 空干燥、冷凍干燥技術(shù)以及噴霧干燥技術(shù)，其可從其先前經(jīng)除菌過(guò)濾 的溶液產(chǎn)生活性成分加上其它期望成分的粉劑。
當(dāng)活性成分適當(dāng)?shù)亟?jīng)保護(hù)，其可和例如惰性稀釋劑或可同化的食 用載體一起口服投藥，或其可能包含在硬膠嚢或軟膠囊中，或壓制成 片劑，或直接并入飲食中。對(duì)于口服投藥來(lái)說(shuō)，活性化合物可和賦形 劑合并并以可攝取片劑、口含片劑、錠劑、膠嚢、酏劑、懸浮液、糖
漿、wafers及其類似物的形式使用。這類組合物和制備物應(yīng)含有至少 1%重量的活性化合物。這類組合物和制備物的百分比當(dāng)然可改變且方 便地可介于約5至約80°/。單位重量之間。在這類有用的組合物中活性 成分的量使得將獲得適當(dāng)劑量。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選組合物或制備物可 制備成口服劑量單位形式包含介于約0.1 pg和2000 pg間的活性成 分。
片劑、錠劑、丸劑、膠嚢及其類似物亦可能含有下列的成分粘 合劑，例如膠、阿拉伯樹膠(acacia)、玉米淀粉或明膠；賦形劑，例 如磷酸氫鈣；崩解劑，例如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、藻酸及其類似物； 及潤(rùn)滑劑，例如硬脂酸鎂。當(dāng)劑量單位形式為膠囊時(shí)，其除了含有以 上類型的物質(zhì)外還可含有液體載體。各種其它物質(zhì)可以作為包衣而存 在或以其它方式修飾劑量單位的物理形式。糖漿或酏劑可含有活性化 合物、對(duì)羥基苯曱酸乙酯和對(duì)羥基苯甲酸丙酯作為防腐劑、和染料。 當(dāng)然，用于制備任何劑量單位形式的任何物質(zhì)在其使用量上應(yīng)為獸醫(yī) 上純的且為實(shí)質(zhì)上無(wú)毒。此外，活性化合物可并入持續(xù)釋放的制備物 和制劑中。
藥物可接受載體和/或稀釋劑包括任何和所有溶劑、分散介質(zhì)、包 衣劑、抗細(xì)菌和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑及其類似物。這類用 于獸醫(yī)上活性物質(zhì)的介質(zhì)和試劑的使用為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。除 了任何常規(guī)介質(zhì)或藥劑不能和活性物質(zhì)兼容外，考慮將其使用在治療
組合物中。輔助性活性成分亦可并入組合物中。
由于易于投藥和劑量均勻，配制胃腸外組合物劑量單位形式特別 有好處。對(duì)于家畜的投藥來(lái)說(shuō)，使用連接至重復(fù)疫苗接種槍的多劑量 容器特別有好處。本文中使用的劑量單位形式是指適于待接受治療的 受試者單次投藥的物理上不連續(xù)的單位，每個(gè)單位含有預(yù)定量的活性 物質(zhì)結(jié)合需要的藥物栽體，該量是經(jīng)計(jì)算可產(chǎn)生所希望的治療效果的 量。用于本發(fā)明的新穎劑量單位形式的說(shuō)明書由下列事項(xiàng)來(lái)規(guī)定，并
直接取決于下列事項(xiàng)(a)活性物質(zhì)的獨(dú)特性質(zhì)和待實(shí)現(xiàn)的特定治療效 果，以及(b)在配制這類活性物質(zhì)用于治療活體受試者疾病的領(lǐng)域中內(nèi) 在的限制，該受試者具有身體健康如本文詳細(xì)揭示的方式受到損害的 患病狀況。
為方便且有效投藥，主要活性成分以有效量和適當(dāng)?shù)乃幬锟山邮?栽體配制在劑量單位形式中，如前文中所公開。例如劑量單位形式可 含有主要活性化合物，含量范圍從約0.5 pg至約2000 pg。以比例 表示，活性化合物一般以每毫升載體約0.5 in g至約2000 yg的量 存在。在本發(fā)明的藥物組合物中，活性成分、藥物可接受載體和任何 其它成分的相對(duì)量將會(huì)改變，視接受治療的受試者的特性、大小和狀 況而定，并另視該組合物的投藥路徑而定。
本發(fā)明另以參考下列實(shí)驗(yàn)實(shí)施例而加以詳細(xì)描述。這類實(shí)施例的 提供僅用于舉例說(shuō)明的目的，除非另有說(shuō)明否則并非意圖限制本發(fā)明。 因此，本發(fā)明不會(huì)以任何方式解釋成受限于下列實(shí)施例，而是應(yīng)解釋 為涵蓋由于本文所提供的教導(dǎo)而明顯的任何和所有變化形式。
盡管已經(jīng)通過(guò)提及具體實(shí)施方案公開了本發(fā)明，顯而易見(jiàn)的是， 本發(fā)明的其它實(shí)施方案和變化形式可由其它本領(lǐng)域技術(shù)人員加以設(shè)計(jì) 而不會(huì)背離本發(fā)明的真實(shí)精神和范圍。所附權(quán)利要求旨在解釋成包括 所有這類實(shí)施方案及等同變化形式。
實(shí)施例1
臨 床研究的范疇
經(jīng)手術(shù)切除卵巢或閹割的雌狗(母狗)經(jīng)常罹患尿失禁。該疾病的
罹患率經(jīng)報(bào)導(dǎo)有20%高。目前的治療方式依賴于每日投予藥物例如合 成雌激素，且長(zhǎng)期給藥，這既昂貴又不方便。長(zhǎng)效性疫苗的使用將是 對(duì)經(jīng)卵巢切除雌狗的這種常見(jiàn)狀況治療的顯著改善。 考慮
用于治療狗尿失禁的制劑包括任何有效的抗-LHRH疫苗。很多這 類疫苗描述在現(xiàn)有技術(shù)中，盡管其中大部分都沒(méi)有提供足夠高的有效 性和安全性進(jìn)而可用于市售上。目前有極少的有效疫苗實(shí)例描述在狗 類的文獻(xiàn)中。有數(shù)種LHRH疫苗實(shí)例為目前市售可得，特別是在澳洲和 新西蘭。這類疫苗包括IMPR0VAC ,可用于控制雄豬中的boar taint, 以及EQUITY ,可用于控制雌馬和小雌馬的發(fā)情相關(guān)行為，兩種產(chǎn)品 都可從輝瑞動(dòng)物健康中心(Pfizer Animal Health)購(gòu)得。這類制劑用 于大型動(dòng)物，因此預(yù)期對(duì)于小型動(dòng)物例如狗是不安全的，且為了在犬 類和其它陪伴動(dòng)物中安全和有效使用，預(yù)期需要修正。另一制劑已經(jīng) 有條件地注冊(cè)于美國(guó)USDA，可用于治療未經(jīng)閹割的成年雄性犬的良性 前列腺增生。該疫苗經(jīng)證實(shí)對(duì)于雄性成年犬為安全且有效，并意圖用 于本發(fā)明以控制犬類的尿失禁(CUI)，如下
研究的進(jìn)行為雙盲研究，有兩組動(dòng)物， 一組接受CUI疫苗，另一 組接受安慰劑，安慰劑只含有佐劑。主人和臨床獸醫(yī)師皆不知其所給 予的治療。 動(dòng)物
社區(qū)人員居家豢養(yǎng)的寵物母狗(多達(dá)35只)是從臨床注冊(cè)選擇的 而沒(méi)有限制，例如在Melbourne大學(xué)/獸醫(yī)臨床中心登記的寵物。該研 究?jī)H選擇年齡大于2年的閹割母狗，其具有長(zhǎng)期尿失禁的臨床狀況并 已先(利用其它公認(rèn)的治療，例如己烯雌酚，雌激素的一種合成形式) 對(duì)該狀況進(jìn)行過(guò)治療，或利用a-腎上腺素能刺激物，例如PPA，進(jìn)行 了治療。 疫苗
在一實(shí)施方案中，該疫苗包含由USDA臨時(shí)許可輝瑞動(dòng)物健康中心
用于治療良性前列腺增生的疫苗，其含有每個(gè)劑量200 ug綴合物，該 綴合物由2-IO型LHRH肽與作為載體的白喉類毒素綴合而成，并具有 由10 mg DEAE葡聚糖和80 ug免疫刺激性復(fù)合物組合的佐劑系統(tǒng)，如 國(guó)際申請(qǐng)第PCT/AU99/01167號(hào)(1999年1月21日公開為WO 99/02180 ) 中所描述。在另一實(shí)施方案中，該疫苗含有合成肽疫苗，包含從約3 至約10個(gè)輔助T-細(xì)胞表位，每個(gè)表位與2-10型LHRH處于線性序列 中，總肽含量為每劑量120 pg肽，并和80 pg免疫刺激性復(fù)合物組 合。
在該研究中將該疫苗以28天的間隔投予每只狗至少兩次。 在每次疫苗接種后立即測(cè)量下列參數(shù)體溫、行為包括昏睡、注 射部位的疼痛以及注射部位的腫脹。此外，采取血清樣本以測(cè)量LH 水平和對(duì)于LHRH的抗體反應(yīng)。在各母狗中尿失禁的評(píng)分由各狗主人根 據(jù)常用的評(píng)分系統(tǒng)進(jìn)行，在第一次疫苗接種前2星期開始。以此方式， 每只狗充當(dāng)其自身在治療后發(fā)生的改變的對(duì)照。
權(quán)利要求
1.用于給需要尿失禁治療的哺乳動(dòng)物治療尿失禁的方法，該方法包括給該哺乳動(dòng)物施用治療上有效量的抗-LHRH疫苗。
2. 權(quán)利要求l的方法，其中該哺乳動(dòng)物為雌性哺乳動(dòng)物。
3. 權(quán)利要求1的方法，其中該哺乳動(dòng)物為具有升高的促性腺激 素血清濃度的雌性哺乳動(dòng)物。
4. 權(quán)利要求3的方法，其中該促性腺激素選自促黃體素和促卵 泡激素。
5. 權(quán)利要求1的方法，其中該哺乳動(dòng)物是經(jīng)手術(shù)閹割的。
6. 權(quán)利要求5的方法，其中該哺乳動(dòng)物為經(jīng)切除卵巢的雌狗。
7. 權(quán)利要求l的方法，其中該抗-LHRH疫苗包含載體和LHRH之 間的免疫原性綴合物。
8. 權(quán)利要求7的方法，其中該載體包含蛋白質(zhì)。
9. 權(quán)利要求8的方法，其中該蛋白質(zhì)包含細(xì)菌類毒素。
10. 權(quán)利要求9的方法，其中該細(xì)菌類毒素為白喉類毒素。
11. 權(quán)利要求7的方法，其中該載體包含含有至少一個(gè)輔助T-細(xì) 胞表位的合成肽。
12. 權(quán)利要求l的方法，其中該疫苗進(jìn)一步包含佐劑。
13. 權(quán)利要求12的方法，其中該佐劑包含DEAE-葡聚糖。
14. 權(quán)利要求13的方法，其中該佐劑進(jìn)一步包含免疫刺激性復(fù)合 物，其中該免疫刺激性復(fù)合物包含皂苷和膽固醇成分。
15. 權(quán)利要求7的方法，其中該免疫原性綴合物包含LHRH-白喉 類毒素綴合物。
16. 治療或控制哺乳動(dòng)物尿失禁的方法，其包括給該哺乳動(dòng)物 施用組合物，該組合物包含治療上有效量的、載體和LHRH之間的免疫 原性綴合物。
17. 權(quán)利要求16的方法，其中該載體包含蛋白質(zhì)。
18. 權(quán)利要求17的方法，其中該栽體包含白喉類毒素。
19. 權(quán)利要求16的方法，其中該載體包含T-細(xì)胞表位。
20. 權(quán)利要求16的方法，其中該組合物進(jìn)一步包括佐劑。
21. 用于治療或控制雌性哺乳動(dòng)物尿失禁的疫苗，該疫苗包含治 療上有效量的LHRH。
22. 權(quán)利要求21的疫苗，其進(jìn)一步包含佐劑。
23. 權(quán)利要求21的疫苗，其中該LHRH與免疫原性栽體綴合。
24. 權(quán)利要求23的疫苗，其中該免疫原栽體包含蛋白質(zhì)。
25. 權(quán)利要求23的疫苗，其中該免疫原性載體包含輔助T-細(xì)胞 表位。
26. 權(quán)利要求24的疫苗，其中該蛋白質(zhì)包含白喉類毒素。
27. 權(quán)利要求21的疫苗，其中該雌性哺乳動(dòng)物包含手術(shù)切除卵巢 的狗。
28. 增強(qiáng)患有尿失禁的哺乳動(dòng)物免疫反應(yīng)的方法，該尿失禁是由 于不受限制地產(chǎn)生和釋放促性腺激素而造成的，該方法包括給該哺乳 動(dòng)物施用治療上有效量的LHRH。
29. 權(quán)利要求28的方法，其中該LHRH以抗原形式施用。
30. 權(quán)利要求28的方法，其中該LHRH以疫苗形式施用。
31. 治療經(jīng)手術(shù)閹割或切除卵巢狗的尿失禁的方法，包括給該狗 施用治療上有效量的抗-LHRH疫苗。
32. 權(quán)利要求31的方法，其中該狗為雌性。
33. 預(yù)防經(jīng)切除卵巢的雌狗發(fā)生尿失禁的方法，該方法包括在切 除卵巢后給該經(jīng)切除卵巢的雌狗施用治療上有效量的抗-LHRH疫苗。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含抗-LHRH疫苗的組合物用于控制或治療尿失禁的用途。本發(fā)明還涉及治療或控制哺乳動(dòng)物(特別是經(jīng)過(guò)手術(shù)閹割的哺乳動(dòng)物，例如經(jīng)切除卵巢的雌狗)尿失禁的方法。
文檔編號(hào)A61K39/00GK101189026SQ200680019407
公開日2008年5月28日 申請(qǐng)日期2006年5月22日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月1日
發(fā)明者B·J·奈特萊頓, J·沃爾克, S·Z·哈什米 申請(qǐng)人:輝瑞產(chǎn)品公司