專利名稱：：苦丁茶總苷的應(yīng)用及其制備方法苦丁茶總苷的應(yīng)用及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及苦丁茶總普，特別涉及其在制藥中的新應(yīng)用及其制備方法，屬制藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：苦丁茶為中國(guó)特有的資源物種，迄今為止，作為民間傳統(tǒng)茶飲用已有2000多年的歷史，是我國(guó)特有一類大宗的資源物種。如表所列，苦丁茶的原植物屬5科5屬10種[云南植物研究1992;14(3):328336]。我國(guó)各地苦丁茶的原植物<table>tableseeoriginaldocumentpage3</column></row><table>迄今對(duì)苦丁茶進(jìn)行了各種藥理實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)苦丁茶具有很高的藥用價(jià)值l)對(duì)心腦血管的作用；2)抑制血栓形成、動(dòng)脈硬化的作用；3)抑制血小板凝集；4)降血壓作用；5)實(shí)-驗(yàn)性血;f全的抑制；6)降血脂的作用；7)抗氧化作用；8)P爭(zhēng)血糖作用；9)抗炎作用；10)增強(qiáng)免疫功能的作用；11)拮抗支氣管平滑肌的收縮作用。才艮據(jù)目前的資料顯示，尚未檢索到有關(guān)苦丁茶的抗脂肪肝和酒精肝活性的報(bào)道?？喽〔杩傑盏闹苽浞椒ㄒ话悴捎么罂讟?shù)脂吸附法。但當(dāng)苦丁茶中的油脂、親脂成分或者低極性成分與大孔樹(shù)脂結(jié)合，樹(shù)脂表面就會(huì)被涂上一層油脂層；再者大孔樹(shù)脂的溶劑洗脫為水或親水溶劑，因此當(dāng)樹(shù)脂與油脂結(jié)合時(shí)，就會(huì)大大降低大孔樹(shù)脂的吸附載量。為此在應(yīng)用大孔樹(shù)脂純化總苦時(shí)，一般會(huì)進(jìn)行預(yù)處理除脂。除脂環(huán)節(jié)會(huì)給大生產(chǎn)中帶來(lái)諸多問(wèn)題l)有機(jī)溶劑殘留；2)石油醚為易燃液體，會(huì)帶來(lái)嚴(yán)重的安全問(wèn)題；3)造成生產(chǎn)成本上升；4)延長(zhǎng)生產(chǎn)時(shí)間等；但如不除脂，又會(huì)嚴(yán)重影響分離效果。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提出苦丁茶總苷的新應(yīng)用，特別是苦丁茶總苷在制備治療脂肪肝及酒精肝藥物中的應(yīng)用。申請(qǐng)人研究發(fā)現(xiàn)，苦丁茶總苷可P務(wù)低肝組織丙二醛(MDA)、甘油三酯(TG)含量，增加各劑量組肝組織還原型谷胱甘肽(GSH)含量；降低肝組織谷丙轉(zhuǎn)胺酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)胺酶(AST)含量，具有的抗酒精肝和脂肪肝活性?？喽〔杩傁憧梢栽胖蔽镄蚬Ｅ慫ig2^rwwpedM"cM/flf/-eRehd.、紫莖女貞丄./wpwrasceraY.C.Yang、日本毛女貞丄.7fl/tw/cw附77朋6;由sceraKoidz.、粗壯女貞丄.ra6wrf謂(Roxb.)Bl.、枸骨/feeconmtoLindl.exPaxt.、苦丁茶冬青Zfe^/wctoC,丄Tseng、大葉冬青Z/fl爭(zhēng)/z'aThunb.、毛葉黃牛木Cratex;y/謂，,;/b/z'w附(Kurz)Dyer、厚殼樹(shù)￡7zrc"a//^ray/ora(S.etZ.)Nakai.、石楠i^油'm'aLindl.中的一種或多種作為原料提取。本發(fā)明的另一目的在于提供一種苦丁茶總苷的制備方法，包括如下步驟A、取苦丁茶粉碎、過(guò)20目篩，得原料；B、分別加入苦丁茶原料重量2-10倍量70-99%的乙醇回流提取1-4次，合并提取液；C、將所述提取液過(guò)濾，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.1-1.4,得到乙醇提取浸膏；D、在所述浸膏加入2-10倍量的水充分?jǐn)嚢杼崛?，靜置，取上清夜，進(jìn)行離心過(guò)濾，得離心液；E、將所述離心液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.05~1.2;F、將所述濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，得干燥的苦丁茶總苷粉末。其中，步驟B:乙醇重量為所迷苦丁茶粉末的3-8倍，濃度為80%;回流提取的溫度為60°C;提取次數(shù)為2次，第一次提取時(shí)間為1-5小時(shí)、第二次提取時(shí)間為1-4小時(shí)。步驟C:濃縮至相對(duì)密度為1.1~1.2。步驟D:水的重量為所迷浸膏的3-8倍，提取次數(shù)為l-4次。步驟E:濃縮至相對(duì)密度為1.05~1.10。步驟F:干燥的進(jìn)風(fēng)溫度為175土5。C、出風(fēng)溫度為85土5。C。在苦丁茶總苷的制備方法中，本發(fā)明將現(xiàn)有技術(shù)中的大孔樹(shù)脂吸附提純環(huán)節(jié)替換為加水提純環(huán)節(jié)。因苦丁茶總脊是大極性，親水性的成分，以水加入提取物浸膏中，苷類物質(zhì)^^容易被水溶出，而低極性的水不溶部分就形成沉淀或油脂層，從而將水溶液部分與非水溶部分分離；水溶液部分再經(jīng)濃縮干燥，即可得到純度較高的苦丁茶總苷粉末。這樣避免了有機(jī)溶劑除脂環(huán)節(jié)，省去了大孔樹(shù)脂吸附提純環(huán)節(jié)，大大降低了成本，縮短了時(shí)間，提高了功率。特別是在制藥過(guò)程中，該制備方法更為安全、簡(jiǎn)便并易于質(zhì)量控制。本發(fā)明還提供一種苦丁茶總苦制劑，它是由含有苦丁茶總苷為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成；所述的制劑是指膠嚢劑、片劑、丸劑、顆粒劑、注射劑、口服液劑。本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)而言1、提出了苦丁茶總苷的新應(yīng)用，特別是在制備治療抗脂肪肝及酒精肝藥物時(shí)的應(yīng)用；2、提出了一種苦丁茶總苦的制備方法，其生產(chǎn)工藝安全、節(jié)約成本、功效高并且更為簡(jiǎn)便，易于質(zhì)量控制；3、提出了一種苦丁茶總苷制劑，具體指膠嚢劑、片劑、丸劑、顆粒劑、注射劑、口服液劑。圖l苦丁茶總苷生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)圖具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)明苦丁茶總苷對(duì)脂肪肝和酒精肝的作用。以四氯化碳和酒精肝為模型，研究苦丁茶總普對(duì)小鼠肝組織丙二醛(MDA)、還原型谷胱甘肽(GSH)、甘油三酯(TG)、谷丙轉(zhuǎn)胺酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)胺酶(AST)的作用。實(shí)施例1苦丁茶總苷對(duì)乙醇謙發(fā)昆明種小鼠酒精肝中MDA、GSH、TG水平的影響受試樣品樣品為苦丁茶總苦。劑量設(shè)0.22、0.44、1.32g/kgBW三個(gè)劑量組，為人體推薦日服量的5、10、30倍，另設(shè)空白對(duì)照組、乙醇對(duì)照組。劑量分別為1)空白對(duì)照組0.00g/kgBW;2)乙醇對(duì)照組0.00g/kgBW;3)低劑量組0.22g/kgBW;4)中劑量組0.44g/kgBW;5)高劑量組L32g/kgBW。受試物制備每日用純凈水稀釋2.64g受試樣品至40.0ml制成高劑量組受試物，然后用純凈水分別稀釋5.0、10.0ml高劑量組受試物至30.0ml制成低、中劑量組受試物。給受試物途徑各劑量組按每日一次，每次0.20ml/10gBW灌胃給予受試物，空白對(duì)照組和乙醇對(duì)照組按同等容量灌胃給予純凈水。試驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)昆明中小白鼠，雌性，6-8周齡，體重18-22g,由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。試驗(yàn)方法試驗(yàn)動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)室條件下檢疫三天后，隨機(jī)分成空白對(duì)照組、乙醇對(duì)照組及低、中、高三個(gè)劑量組，每組12只小鼠。三個(gè)劑量組每天分別按不同劑量灌胃給予受試物，空白對(duì)照組和乙醇對(duì)照組按同等容量灌胃給予純凈水。動(dòng)物每周稱重，以調(diào)整受試樣品劑量，共30天。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)各劑量組和乙醇對(duì)照組以0.12ml/10gBW劑量一次灌胃給予50%乙醇，空白對(duì)照組灌胃給予相同劑量純凈水，各組動(dòng)物禁食16小時(shí)后處死，取肝組織制成肝勻漿，測(cè)定丙二醛(MDA)、還原型谷胱甘肽(GSH)、甘油三酯(TG),并取肝臟左葉水凍切片，蘇丹III染色，光鏡下觀察病理變化。結(jié)論1)受試樣品降低各劑量組肝組織MDA、TG含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性；2)受試樣品增加各劑量組肝組織GSH含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性；3)受試驗(yàn)品各劑量組肝細(xì)胞脂肪變性與乙醇對(duì)照組比較減輕，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)肝臟病理結(jié)果陽(yáng)性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明苦丁茶具有抗酒精肝的活性。實(shí)施例2苦丁茶總苷對(duì)四氯化碳誘發(fā)昆明種小鼠脂肪肝中ALT、AST水平的影響受試樣品樣品為苦丁茶總苷。劑量設(shè)0.22、0.44、1.32g/kgBW三個(gè)劑量組，為人體推薦日服量的5、10、30倍，另設(shè)空白對(duì)照組、乙醇對(duì)照組。劑量分別為1)空白對(duì)照組0.00g/kgBW;2)乙醇對(duì)照組0.00g/kgBW;3)低劑量組0.22g/kgBW;4)中劑量組0.44g/kgBW;5)高劑量組L32g/kgBW.受試物制備每日用純凈7jc稀釋2.64g受試樣品至40.0ml制成高劑量組受試物，然后用純凈水分別稀釋5.0、10.0ml高劑量組受試物至30.0ml制成低、中劑量組受試物。給受試物途徑各劑量組按每.日一次，每次0.20ml/1OgBW灌胃給予受試物，空白對(duì)照組和CC14對(duì)照組按同等容量灌胃給予純凈水。試驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)昆明中小白鼠，雌性，6-8周齡，體重18-22g,由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。試驗(yàn)方法試驗(yàn)動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)室條件下檢疫三天后，隨機(jī)分成空白對(duì)照組、CCU對(duì)照組及低、中、高三個(gè)劑量組，每組11只小鼠。三個(gè)劑量組每天分別按不同劑量灌胃給予受試物，空白對(duì)照組和CCl4對(duì)照組按同等容量灌胃給予純凈水。動(dòng)物每周稱重，以調(diào)整受試樣品劑量，共30天。試驗(yàn)結(jié)束前將各組動(dòng)物隔夜禁食16小時(shí)，各劑量組和CCU對(duì)照組以0.1ml/10gBW劑量腹腔注射給予0.125%CC14，空白對(duì)照組注射給予相同劑量玉米油，各受試物劑量組繼續(xù)給予受試樣品至實(shí)驗(yàn)結(jié)束(與CC14腹腔注射間隔4小時(shí)以上)。24小時(shí)后摘眼球取血，分離血清測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)胺酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)胺酶(AST),并取肝臟用10%的中性福爾馬林固定，常規(guī)制作病理切片，HE染色，光鏡下觀察病理變化。結(jié)論l)劑量組ALT、AST含量與CCU對(duì)照組比較輕，差異有非常顯著性意義，ALT和AST結(jié)果陽(yáng)性；2)劑量組肝臟病理改變與CCU對(duì)照組比較輕，差異有非常顯著性意義，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)肝臟病理結(jié)果陽(yáng)性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明苦丁茶具有抗脂肪肝的活性。下面結(jié)合苦丁茶總苷的制備方法。實(shí)施例3本發(fā)明苦丁茶總苷的制備方法，包括如下步驟A、將購(gòu)買來(lái)的符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求的苦丁茶稱重、粉碎，過(guò)20目篩，得原料；B、分別用5倍量80%食用酒精在6(TC條件下回流提取兩次，第一次提取2小時(shí)、第二次提取時(shí)間為1.5小時(shí)，合并兩次提取液；C、將上迷提取液過(guò)濾，進(jìn)行減壓濃縮，控制濃縮溫度為60°C，濃縮壓力為-0.085mPa，濃縮至相對(duì)密度為1.1~1.2的乙醇提取浸膏；D、所得的濃縮浸膏，加入5倍量的純凈水充分?jǐn)嚢?5分鐘，靜置45分鐘后，傾出上清夜,如此進(jìn)行兩次，合并兩次水溶液，并進(jìn)行離心過(guò)濾，得到的離心液進(jìn)行下一部濃縮。E、對(duì)上述所得的離心液進(jìn)行減壓濃縮，控制溫度60。C、濃縮壓力為-0.085mPa,濃縮至相對(duì)密度為1.05-1.10。F、將所得的濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，控制進(jìn)風(fēng)溫度為175±5°C、出風(fēng)溫度為85±5°C。得干燥的苦丁茶總苷粉末。其中，B步驟中提取設(shè)備為多功能提取罐，容積為4立方米；C步驟中使用單效濃縮器；D步驟中的是管式離心機(jī)，轉(zhuǎn)鼓轉(zhuǎn)速16000r/min,功率3000W,流速控制在300400KG/小時(shí)；F步驟中的設(shè)備為離心式噴霧干燥塔，上述生產(chǎn)工藝中簡(jiǎn)便且易于質(zhì)量控制，其中投料、提取、濃縮在一般生產(chǎn)區(qū)進(jìn)行；提取、濃縮通過(guò)管道化操作，避免了人為和環(huán)境的污染；干燥在30萬(wàn)級(jí)潔凈車間進(jìn)行。下面結(jié)合實(shí)施方式說(shuō)明苦丁茶總苷制劑的制備方法。實(shí)施例4膠嚢劑的制備稱取苦丁茶總普14~67g,食用纖維素33~86g，以任意比例混合30分鐘，直到混合均勻；填充膠嚢，膠嚢為0訓(xùn)1嚢，填充規(guī)格為0.44克/粒；將填充好的膠嚢裝入玻璃瓶中，每瓶60粒。其中，G步驟中混合使用EYH二維運(yùn)動(dòng)混合機(jī)，H步驟中的使用自動(dòng)膠囊填充機(jī)(型號(hào)NJP-800)進(jìn)行填充，填充膠嚢以及膠囊裝瓶在30萬(wàn)級(jí)潔凈車間進(jìn)行。實(shí)施例5:片劑稱取9~59克苦丁茶總苷、30~80克微晶纖維去、10~20克乳糖、1克硬脂酸鎂。將苦丁茶總苷、食用纖維素、乳糖以任意比例混合均勻，按公知的片劑制作技術(shù)和裝備制成片劑。產(chǎn)品規(guī)格為0.5克/片，每日服用三次，每次兩片。實(shí)施例6:丸劑將苦丁茶總苷與微晶纖維素分別過(guò)100目篩，并稱取苦丁茶1467克、微晶纖維素3386克，以任意比例混合均勻，往混合好的物料中添加一定比例的煉制蜂蜜，按公知的丸劑制作技術(shù)和裝備制成丸劑。產(chǎn)品規(guī)格為0.25克/粒。實(shí)施例7:顆粒劑分別稱取苦丁茶總普14~67克，微晶纖維素33~86克。部分苦丁茶總苷用水溶液溶解，剩余的苦丁茶總苦與微晶纖維素以任意比例混合均勻，使用噴霧干燥工藝進(jìn)行制粒，噴霧干燥制粒工藝與上述所提到的苦丁茶總苷的噴霧干燥工藝一致。實(shí)施例8:注射劑苦丁茶總苷1580克加注射用水制成1000ml,配制成每ml含1580mg的溶液，過(guò)濾至澄明、罐封，高溫瞬時(shí)滅菌即得。注射劑的溶液配制，濾過(guò)、罐封都在IO萬(wàn)級(jí)以上的車間完成。實(shí)施例9:口il良液制劑稱取苦丁茶總苷515克、蜂蜜10克，用純化水配制成100ml的溶液，過(guò)濾、罐裝，高溫瞬時(shí)滅菌即得。本發(fā)明可用其他的不違背本發(fā)明的精神或主要特征的具體形式來(lái)概述。因此，無(wú)論從哪一點(diǎn)來(lái)看，本發(fā)明的上述實(shí)施方案都只能認(rèn)為是對(duì)本發(fā)明的說(shuō)明而不能限制本發(fā)明，權(quán)利要求書(shū)指出了本發(fā)明的范圍，而上迷的說(shuō)明并未指出本發(fā)明的范圍，因此，在與本發(fā)明的權(quán)利要求書(shū)相當(dāng)?shù)暮x和范圍內(nèi)的任何改變，都應(yīng)認(rèn)為是包括在權(quán)利要求書(shū)的范圍內(nèi)。權(quán)利要求1、苦丁茶總苷在制備治療脂肪肝藥物中的應(yīng)用。2、苦丁茶總苷在制備治療酒精肝藥物中的應(yīng)用。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的苦丁茶總苷，其特征在于提取原料為序梗女貞LigustrumpedunculareRehd.、紫莖女貞LpurpurascensY.C.Yang、日本毛女貞L.japonicumThunbvar.pubescensKoidz.、粗壯女貞L.robustum(Roxb.)Bl.、枸骨llexcornutaLindl.exPaxt.、苦丁茶冬青L.kudinchaC.J.Tseng大葉冬青I.latifoliaThunb.、毛葉黃牛木Cratoxylumprunifolium(Kurz)Dyer、厚殼樹(shù)Ehretiathyrsiflora(S.et.Z)Nakai\石楠PhotiniaserrulataLindl.中的至少一種。4、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的苦丁茶總苷的制備方法，其特征在于A、取苦丁茶粉碎、過(guò)20目篩，得原料；B、分別加入苦丁茶原料重量2-10倍量70-99%的乙醇回流提取1-4次，合并提取液；C、將所述提取液過(guò)濾，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.1-1.4,得到乙醇提取浸膏；D、在所述浸膏加入2-10倍量的水充分?jǐn)嚢杼崛?，靜置，取上清夜，進(jìn)行離心過(guò)濾，得離心液；E、將所述離心液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.05-1.2;F、將所述濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，得干燥的苦丁茶總苷粉末。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的苦丁茶總苷的制備方法，其特征在于所述步驟B:乙醇重量為所述苦丁茶粉末的3-8倍，濃度為80%;回流提取的溫度為60°C;提取次數(shù)為2次，第一次提取時(shí)間為1-5小時(shí)、第二次提取時(shí)間為1-4小時(shí)。6、根據(jù)權(quán)利要求4所述的苦丁茶總香的制備方法，其特征在于所述步驟C:濃縮至相對(duì)密度為1.1~1.2。7、根據(jù)權(quán)利要求4所述的苦丁茶總苷的制備方法，其特征在于所述步驟D:水的重量為所述浸膏的3-8倍，提取次數(shù)為l-4次。8、根據(jù)權(quán)利要求4所述的苦丁茶總苷的制備方法，其特征在于所述步驟E:濃縮至相對(duì)密度為1.05~1.10。9、根據(jù)權(quán)利要求4所述的苦丁茶總苷的制備方法，其特征在于所述步驟F:干燥的進(jìn)風(fēng)溫度為175±5。C、出風(fēng)溫度為85±5°C。10、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的苦丁茶總苷制劑，其特征在于所述的制劑是膠嚢劑、片劑、丸劑、顆粒劑、注射劑、口服液劑。全文摘要本發(fā)明涉及苦丁茶總苷的應(yīng)用及其制備方法。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，苦丁茶總苷可降低肝組織丙二醛(MDA)、甘油三酯(TG)含量，增加各劑量組肝組織還原型谷胱甘肽(GSH)含量；降低肝組織谷丙轉(zhuǎn)胺酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)胺酶(AST)含量，具有的抗酒精肝和脂肪肝活性。本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)而言1.提出了苦丁茶總苷的新應(yīng)用，特別是在制備治療脂肪肝和酒精肝藥物中的應(yīng)用；2.提出了一種苦丁茶總苷的制備方法，其生產(chǎn)工藝安全、節(jié)約成本、功效高并且更為簡(jiǎn)便，易于質(zhì)量控制；3.提出了一種苦丁茶總苷制劑。文檔編號(hào)A61K9/08GK101361766SQ20071007558公開(kāi)日2009年2月11日申請(qǐng)日期2007年8月10日優(yōu)先權(quán)日2007年8月10日發(fā)明者賀震旦申請(qǐng)人:賀震旦