專利名稱：二氫楊梅素在制備藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及二氫楊梅素在制備藥物中的應(yīng)用，具體用于制備治療口腔潰瘍、口腔炎癥和胃潰瘍、胃炎的藥物。同時涉及從顯齒蛇葡萄中制備二氫楊梅素的方法。

背景技術(shù)：
從葡萄科植物中提取二氫楊梅素的方法已經(jīng)99119123.4號專利公開，但該專利沒有公開低溫處理重結(jié)晶制備二氫楊梅素的方法；其他文獻公開了二氫楊梅素有降血糖(參見覃潔萍、中藥與天然藥物2001；18(5)351)、護肝(參見鐘正賢、周桂芬、陳學芬，等。中國中醫(yī)藥科技2002；9(3)155)和鈣拮抗(參見周雪仙、周天達、譚春生.現(xiàn)代應(yīng)用藥學1997；14(2)8)作用；沒有專利或文獻公開二氫楊梅素制備成藥物治療口腔潰瘍、口腔炎癥、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、急性或慢性咽炎、盆腔炎和/或附件炎、慢性胃炎和/或腸炎。
二氫楊梅素的分子式為C15H12O8，結(jié)構(gòu)式為


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供二氫楊梅素在制備藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的藥物是含二氫楊梅素的制劑，可以是片劑、膠囊劑、顆粒劑或注射劑。
本發(fā)明的藥物是指含二氫楊梅素單一成分的制劑或與其他成分配伍的組合制劑。
本發(fā)明所述的組合制劑是指含二氫楊梅素之外，或還含有其他動、植物(包括中藥)提取物，或還含有其他中藥藥粉。
本發(fā)明的藥物，是指二氫楊梅素或含二氫楊梅素的組合物，可與藥學上能接受的載體混合，用于制備治療口腔潰瘍、口腔炎癥和胃潰瘍、胃炎的藥物。
本發(fā)明的另一個目的是低溫處理重結(jié)晶法從顯齒蛇葡萄中制備二氫楊梅素，處理過程與公開的方法有明顯區(qū)別，而且令人意外地發(fā)現(xiàn)用這種方法獲得了高純度的二氫楊梅素。關(guān)鍵步驟為用顯齒蛇葡萄干燥嫩莖葉的常規(guī)水提濃縮液在4℃及其以下放置12至48小時，重結(jié)晶1次或多次，干燥；加乙醇、活性炭，加熱回流，抽濾，濾液回收乙醇，減壓濃縮，室溫放置，析出結(jié)晶后，抽濾，干燥；重結(jié)晶1次或多次，得到含量達95％以上的二氫楊梅素。
加入合適的輔料和/或其他成分，壓制成片劑，或制成膠囊劑，或制成顆粒劑，或制成注射劑。
為了更好地理解本發(fā)明的實質(zhì)，通過實施例詳細說明。但是應(yīng)該理解這些實施例只是說明本發(fā)明，而不是在任何方面限制本發(fā)明的范圍。

具體實施例方式 實施例1從顯齒蛇葡萄制備二氫楊梅素 取10kg顯齒蛇葡萄干燥嫩莖葉，加入100kg水，溫浸0.5-1小時，壓濾；藥渣再加入80kg水，溫浸0.5-1小時，壓濾；合并濾液，減壓濃縮至相對密度1.05-1.08(60-70℃熱測)，4℃以下放置24小時，抽濾、收集固體部分，干燥、研細，得到粗總黃酮1.6kg； 取1.5kg粗總黃酮，加入15000ml 95％乙醇、300 g活性炭，加熱回流0.5小時，抽濾，濾液回收乙醇，減壓濃縮至3500ml左右，室溫放置，待析出結(jié)晶后，抽濾，干燥，得到粗結(jié)晶1.18kg； 取1.0kg粗結(jié)晶，加入10000ml 95％乙醇、200g活性炭，加熱回流0.5小時，抽濾，濾液回收乙醇，減壓濃縮至2500ml左右，室溫放置，待析出結(jié)晶后，抽濾，干燥，得到精制結(jié)晶0.83kg； 取精制結(jié)晶樣品，以二氫楊梅素為對照品，HPLC法測定，樣品中二氫楊梅素含量為96.8％。
實施例2二氫楊梅素對兔免疫性口腔粘摸潰瘍的作用 取家兔30只，體重1.77±0.15kg，雌雄兼用，按性別體重分層隨機分為3組，背部脊柱兩側(cè)脫毛，酒精消毒，每只動物于脫毛處取20個點，第1組注射弗氏佐劑，其他2組注射免疫佐劑，每點0.05ml，每2周1次，共5次。于第5次免疫注射后第7天，口腔給藥，第1、2組給蒸餾水，第3組給二氫楊梅素250mg/kg，給藥體積為2.0ml/kg，1日內(nèi)分4次給予，間隔3小時，共給藥4天。試驗期間每天觀察動物口腔粘膜發(fā)生潰瘍的情況；末次給藥后第2天，耳緣靜脈取血，分離血清，檢測血清抗口腔粘膜抗體滴度；然后耳緣靜脈注入空氣處死動物，取口腔粘膜發(fā)生潰瘍部位的組織，用4％甲醛溶液固定做病理學檢查。
注射弗氏佐劑的動物，給蒸餾水前后均沒有觀察到口腔粘膜潰瘍。注射免疫佐劑4次后，80％以上的動物數(shù)量不一、程度不同地出現(xiàn)口腔粘膜潰瘍，潰瘍多發(fā)下唇粘膜；給藥前，各組動物發(fā)生口腔粘膜潰瘍的情況無明顯差異。給二氫楊梅素250mg/kg后口腔粘膜出現(xiàn)潰瘍的動物數(shù)明顯減少(表1)。
表1二氫楊梅素對家兔口腔粘膜潰瘍的影響(

，n＝10) 與弗氏佐劑對照比較+++p＜0.01；與免疫佐劑對照比較*p＞0.05，**p＜0.05 弗氏佐劑對照組家兔血清抗口腔粘膜抗體滴度為0.404-0.52。免疫佐劑對照組家兔血清抗口腔粘膜抗體滴度明顯升高，二氫楊梅素250mg/kg能明顯降低家兔血清抗口腔粘膜抗體滴度(表2)。
表2二氫楊梅素對血清中抗口腔粘膜抗體滴度值的影響(

，n＝10) 與弗氏佐劑對照比較+++p＜0.01；與免疫佐劑對照比較**p＜0.05 組織病理學鏡檢顯示，弗氏佐劑對照組家兔口腔粘膜上皮未見潰瘍，組織結(jié)構(gòu)清晰。免疫佐劑對照組全部家兔口腔粘膜上皮出現(xiàn)壞死脫落，形成潰瘍，潰瘍底部及上皮下有小血管擴張充血，潰瘍底部、潰瘍表面和小血管周有中性粒細胞、淋巴細胞及單核細胞浸潤。給二氫楊梅素的家兔，部分動物口腔粘膜可見上皮形成淺表潰瘍，潰瘍表面被覆少量中性白細胞，潰瘍上皮下偶見小血管擴張和中性粒細胞、淋巴細胞或單核細胞浸潤。
實施例3二氫楊梅素對兔表皮葡萄球菌所致口腔潰瘍的作用 取新西蘭兔20只，體重1.83±0.17kg，雌雄兼用，按體重分層隨機分為2組，分別按0.03ml/只將15億CFU/ml的表皮葡萄球菌菌液注射到新西蘭兔口腔頰粘膜下，24小時后形成膿瘡且自行破潰成潰瘍。自潰瘍形成開始，2組分別給蒸餾水2.0ml/kg、二氫楊梅素250mg/kg，口腔給藥，體積均為2.0ml/kg，1日內(nèi)分4次給予，間隔3小時，共給藥3天。給藥前和給藥后第3天，分別用分規(guī)測量潰瘍直徑和潰瘍周圍紅暈大小，判斷炎癥指數(shù)；從第3天開始，每天觀察2次，間隔12小時，記錄潰瘍愈合時間。
與蒸餾水比較，二氫楊梅素250 mg/kg明顯減少表皮葡萄球菌所致兔口腔瘍直徑(表3)。
表3.二氫楊梅素對表皮葡萄球菌所致兔口腔潰瘍直徑的影響(

，n＝10) 與蒸餾水比較*P＞0.05，***P＜0.01 與蒸餾水比較，二氫楊梅素250mg/kg明顯減輕表皮葡萄球菌所致兔口腔潰瘍炎癥指數(shù)(表4)。
表4.二氫楊梅素對表皮葡萄球菌所致兔口腔潰瘍炎癥指數(shù)的影響(

，n＝10) 與蒸餾水比較*P＞0.05，***P＜0.01 與蒸餾水比較，二氫楊梅素250mg/kg明顯縮短表皮葡萄球菌所致兔口腔潰瘍的愈合時間(表5)。
表5.二氫楊梅素對表皮葡萄球菌所致兔口腔潰瘍愈合時間的影響(

，n＝10) 與蒸餾水比較**P＜0.05 實施例4二氫楊梅素對大鼠幽門結(jié)扎型胃潰瘍的作用 取SD大鼠20只，體重200±11g，雌雄各半，隨機分為2組，分別給蒸餾水10ml/kg和二氫楊梅素0.5g/kg灌胃7天，第5天開始禁食不禁水，末次給藥后3小時，乙醚麻醉，腹中線打開腹腔，結(jié)扎幽門后縫合腹腔，禁食禁水，18小時后處死，結(jié)扎賁門取出全胃，10％福爾馬林固定15min后沿胃大彎剪開，用水沖洗胃內(nèi)容物后，觀察前胃部粘膜面潰瘍發(fā)生的情況，用顯微鏡測量潰瘍面積，判斷潰瘍指數(shù)(11-12mm2；213-25mm2；326-37mm2；438-50mm2；5≥50mm2或穿孔)，計算潰瘍抑制百分率。
與蒸餾水比較，二氫楊梅素能顯著降低潰瘍指數(shù)，明顯抑制胃潰瘍的發(fā)生(表6)。
表6.二氫楊梅素對大鼠幽門結(jié)扎型胃潰瘍的影響(

，n＝10) 注與蒸餾水比較，***p＜0.01 實施例5二氫楊梅素對大鼠角叉菜膠足跖腫脹性炎癥的作用 取雄性大鼠20只，體重143±9g，按體重分層隨機分為2組，分別給蒸餾水5ml/kg、二氫楊梅素0.50g/kg灌胃，體積為5ml/kg，每日1次，共給藥3天。末次給藥同時，分別按0.1ml/只注射1％角叉菜膠至大鼠右后足跖致炎。致炎前和致炎后2、4、6小時分別用游標卡尺測量右后足跖厚度，計算腫脹率。
與蒸餾水比較，二氫楊梅素0.50g/kg能明顯降低大鼠角叉菜膠足跖腫脹率(表7)。
表7.二氫楊梅素對大鼠角叉菜膠足跖腫脹的影響(

，n＝10) 與蒸餾水比較*p＞0.05，**p＜0.05，***p＜0.01 實施例6二氫楊梅素對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響 取雄性小鼠20只，體重20.3±1.1g，按體重分層隨機分為2組，分別給蒸餾水10ml/kg、二氫楊梅素0.70g/kg灌胃，體積為10ml/kg，每日1次，共給藥3天。末次給藥1小時后，每鼠尾靜脈注射0.5％依文思蘭5ml/kg，5分鐘后腹腔注射0.7％醋酸10ml/kg，再過30分鐘后頸椎脫臼處死動物，用8.0ml生理鹽水分4次沖洗腹腔，收集沖冼液稀釋至10ml，加0.1N NaOH 0.1ml，放置30分鐘后用7230型分光光度計于590nm波長處測光密度，從依文思蘭標準曲線上讀沖洗液中依文思蘭含量。
與蒸餾水比較，二氫楊梅素0.70g/kg明顯降低小鼠腹腔毛細血管通透性(表8)。
表8.二氫楊梅素對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響(

，n＝10) 與蒸餾水比較**p＜0.0權(quán)利要求
1.二氫楊梅素在制備治療胃潰瘍和胃炎的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開了二氫楊梅素在制備治療胃潰瘍和胃炎的藥物中的用途。
文檔編號A61P1/00GK101081221SQ200710106278
公開日2007年12月5日 申請日期2003年10月30日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月30日
發(fā)明者陳立峰, 蔡光先, 王實強 申請人:湖南省中醫(yī)藥研究院