專利名稱：從藤茶中提取二氫楊梅素、藤茶多糖和藤茶多酚的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從藤茶中提取二氫楊梅素、藤 茶多糖和藤茶多酚的方法。
背景技術(shù)：
藤茶，一種以葡萄科蛇葡萄屬植物——顯齒蛇葡萄[Ampelopsis-grossedentata (Hand-Mazz)W. Τ. Wang]的嫩莖葉為原料制作的代用茶。該植物主要分布于湖北、湖南、廣 東、廣西、江西、福建等省，資源豐富。民間對藤茶的傳統(tǒng)應(yīng)用歷史和現(xiàn)代藥理研究表明，藤 茶中含有豐富的黃酮(以二氫楊梅素為主)、藤茶多糖、藤茶多酚等成分，并具有較強(qiáng)的抗 氧化、降血糖等生物活性。目前關(guān)于藤茶生物活性成分的提取及生物活性研究主要集中在 藤茶黃酮及其分離成分二氫楊梅素方面，相關(guān)的專利文獻(xiàn)有一種從藤茶中提取二氫楊梅 素的方法CN200510032918. 5，含有二氫楊梅素和楊梅素的組合物CN03138054. 9，藤茶黃酮 微囊的制備方法CN200510114557，等；非專利文獻(xiàn)則較多(覃潔萍等，中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜 志，2000，No. 3;李衛(wèi)等，食品科學(xué)，2004，No. 11，等)；其次是藤茶多糖方面的相關(guān)文獻(xiàn)(羅 祖友等，食品科學(xué)，2007，No. 1，等)；關(guān)于藤茶多酚的研究報(bào)道不多(熊皓平等，中國食品學(xué) 報(bào)，2004，No. 3)。以藤茶為原料進(jìn)行二氫楊梅素、藤茶多糖、藤茶多酚中的任何一種成分的單獨(dú)提 取，資源利用率不高，勢必影響綜合開發(fā)利用藤茶資源的經(jīng)濟(jì)效益。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的問題是提供一種采用同批原料分步提取分離二氫楊梅素、藤茶多 糖和藤茶多酚的方法。本發(fā)明一種從藤茶中提取二氫楊梅素、藤茶多糖和藤茶多酚的方法，加工步驟中 包含有a.原料粉碎將新鮮藤茶莖葉干燥、粉碎；b.浸提用原料粉末清水以1 8 12料液比，在溫度為90 100°C浸泡30 40min，過濾收集上清液I ；c.濃縮將上清液I 減壓濃縮靜置結(jié)晶，分別收集沉淀A和上清液II ；d.提取二氫楊梅素將沉淀A加水重結(jié)晶 處理，再對結(jié)晶物干燥，得二氫楊梅素產(chǎn)品；e.加醇將濃縮步驟的上清液II加入乙醇，邊 加乙醇邊攪拌，靜置后，分別收集沉淀B和上清液III ；f.提取粗多糖將沉淀B經(jīng)乙醇洗 滌后，得藤茶水溶性粗多糖；g.提取藤茶多酚將加醇步驟的上清液III減壓濃縮，回收乙 醇，收集濃縮的水溶液，用乙酸乙酯萃取，再將乙酸乙酯萃取相濃縮、干燥可得到藤茶多酚 產(chǎn)品；或?qū)饪s的水溶液，經(jīng)AB-8大孔樹脂吸附一洗脫去雜一洗脫，收集洗脫液并減壓濃 縮，回收乙醇，濃縮液干燥得到藤茶多酚產(chǎn)品。本發(fā)明一種從藤茶中提取二氫楊梅素、藤茶多糖和藤茶多酚的方法，其特征在于 所述的加工步驟中包含有a.原料粉碎將新鮮藤茶莖葉干燥、粉碎；b.浸提用原料粉 末清水以1 8 12料液比，在溫度為90 100°C浸泡30 40min，趁熱由濾布過濾 后、再離心(4000rpm，15min)，收集上清液I，對濾渣重復(fù)提取1次，合并上清液I ；c.濃縮將上清液I減壓濃縮，在4°C下靜置10-15小時(shí)，結(jié)晶后以4000rpm離心15min，分別收集沉 淀A和上清液II ；d.提取二氫楊梅素將沉淀A經(jīng)2 3次加水重結(jié)晶處理，再對結(jié)晶物于 35 45°C真空干燥，得二氫楊梅素產(chǎn)品；e.加醇將濃縮步驟的上清液II在50 60°C下 減壓濃縮至原體積的1/3 1/5，再加入3倍體積的95%乙醇，邊加乙醇邊攪拌，放置8 24h后，4000rpm離心15min，分別收集沉淀B和上清液III ；f.提取粗多糖將沉淀B經(jīng)95% 乙醇洗滌后，得藤茶水溶性粗多糖；g.提取藤茶多酚將加醇步驟的上清液III減壓濃縮， 回收乙醇，收集濃縮的水溶液，用乙酸乙酯萃取，再將乙酸乙酯萃取相濃縮、干燥可得到藤 茶多酚產(chǎn)品；或?qū)饪s的水溶液，經(jīng)AB-8大孔樹脂動(dòng)態(tài)吸附一蒸餾水洗脫去雜一70%乙醇 液動(dòng)態(tài)洗脫，或靜置經(jīng)AB-8樹脂靜態(tài)吸附一蒸餾水洗脫去雜一70%乙醇靜態(tài)洗脫，收集洗 脫液并減壓濃縮，回收乙醇，濃縮液經(jīng)低溫真空干燥得到藤茶多酚產(chǎn)品。本發(fā)明一種從藤茶中提取二氫楊梅素、藤茶多糖和藤茶多酚的方法，在加工步驟 f.提取粗多糖中粗多糖可進(jìn)一步進(jìn)行純化處理，粗多糖加水復(fù)溶一sevag法脫蛋白一用 雙氧水脫色一乙醇沉淀一離心，收集沉淀一加水復(fù)溶一乙醇沉淀一離心，收集沉淀于35 45 °C真空干燥或加水溶解后噴霧干燥。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)比較，由于采用同批原料分步提取分離多種成分的綜合提取方 法，該方法成本低，提取得率較高，環(huán)保，適合工業(yè)化連續(xù)生產(chǎn)，可實(shí)現(xiàn)藤茶資源的綜合開發(fā) 利用和經(jīng)濟(jì)效益的提高。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1將新鮮藤茶莖葉干燥、粉碎制取原料粉末500g，加6L蒸餾水，加熱至95°C下提取 30min，趁熱用100目雙層濾布過濾后，再趁熱離心(4000rpm，15min)，收集上清液I，對濾 渣加蒸餾水4L，加熱至95°C下重復(fù)提取1次，合并上清液I ；將上清液I減壓濃縮至1/3體 積，充分冷卻，在4°C下靜置12小時(shí)，結(jié)晶后，離心(4000rpm，15min)，分別收集沉淀A和上 清液II ；沉淀A經(jīng)2次加水重結(jié)晶處理，再對結(jié)晶物于40°C真空干燥，得二氫楊梅素，產(chǎn)品 得率可達(dá)11% (二氫楊梅素作標(biāo)樣，硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法測定，產(chǎn)品二氫楊梅素含量 ^ 85% )；將上清液II在60°C下減壓濃縮至原體積的1/4，再加入3倍體積的95%乙醇， 邊加乙醇邊攪拌，放置24h后，離心(4000rpm，15min)，分別收集沉淀B和上清液III ；沉淀 B經(jīng)95%乙醇洗滌后，加水復(fù)溶得多糖液，以sevag法脫蛋白，即以3 1 (ν/ν)的糖液混 合液(4氯仿1正丁醇，ν/ν)脫蛋白1次，再調(diào)節(jié)多糖溶液ρΗ至ρΗ8，于50°C下滴加20% 雙氧水脫色后，加入3倍體積的95%乙醇沉淀多糖，離心，收集沉淀；再加水復(fù)溶后，加入3 倍體積的95 %乙醇沉淀多糖，離心，收集沉淀，于40°C真空干燥，得初步純化的藤茶水溶性 多糖，產(chǎn)品得率約4% (葡萄糖作標(biāo)樣，硫酸苯酚法測定，產(chǎn)品多糖含量約60%)；將上清液 III經(jīng)減壓濃縮，回收乙醇，收集濃縮的水溶液，對水溶液用乙酸乙酯萃取(1 1.2, V/V), 再將乙酸乙酯相減壓濃縮，回收乙酸乙酯，濃縮物經(jīng)真空干燥得到藤茶多酚，產(chǎn)品得率5% 以上(沒食子酸作標(biāo)樣，酒石酸亞鐵比色法測定，產(chǎn)品多酚含量41% )。實(shí)施例2將新鮮藤茶莖葉干燥、粉碎制取原料粉末lOOOg，加入12L蒸餾水，加熱至95°C下 提取30min，趁熱用100目雙層濾布過濾后，再趁熱離心(4000rpm，15min)，收集上清液I，對濾渣加蒸餾水8L，加熱至95°C下重復(fù)提取1次，合并上清液I ；將上清液I減壓濃縮至1/3 體積，充分冷卻，在4°C下靜置12小時(shí)，結(jié)晶后，離心(4000rpm，15min)，分別收集沉淀A和 上清液II ；沉淀A經(jīng)2次加水重結(jié)晶處理，再對結(jié)晶物于40°C真空干燥，得二氫楊梅素產(chǎn) 品，產(chǎn)品得率可達(dá)11% ( 二氫楊梅素作標(biāo)樣，硝酸鋁_亞硝酸鈉比色法測定，產(chǎn)品二氫楊梅 素含量> 85% )；將上清液II在60°C下減壓濃縮至原體積的1/4，再加入3倍體積的95% 乙醇，邊加乙醇邊攪拌，放置24h后，離心(4000rpm，15min)，分別收集沉淀B和上清液III ； 沉淀B經(jīng)95%乙醇洗滌后，加水復(fù)溶得多糖液，以sevag法脫蛋白，即以3 1 (ν/ν)的糖 液混合液(4氯仿1正丁醇，ν/ν)脫蛋白1次，再調(diào)節(jié)多糖溶液ρΗ至ρΗ8，于50°C下滴 加20%雙氧水脫色后，加入3倍體積的95%乙醇沉淀多糖，離心，收集沉淀；再加水復(fù)溶后， 加入3倍體積的95 %乙醇沉淀多糖，離心，收集沉淀，再復(fù)溶后，水溶液經(jīng)噴霧干燥(180°C 進(jìn)口溫度，80°C出口溫度)，得淺灰色粉末狀藤茶水溶性多糖，產(chǎn)品得率約4% (葡萄糖作標(biāo) 樣，硫酸苯酚法測定，產(chǎn)品多糖含量約60% )；將上清液III減壓濃縮，回收乙醇，濃縮的水 溶液經(jīng)AB-8樹脂靜態(tài)吸附過夜——蒸餾水洗脫去雜——70%乙醇靜態(tài)洗脫，收集洗脫液并 減壓濃縮，回收乙醇，濃縮液經(jīng)低溫真空干燥得到藤茶多酚，產(chǎn)品得率可達(dá)3% (沒食子酸 作標(biāo)樣，酒石酸亞鐵比色法測定，產(chǎn)品多酚含量34% )。實(shí)施例3將新鮮藤茶莖葉干燥、粉碎作為提取原料；原料粉末1500g，加18L蒸餾水，加熱至 95°C下提取30min，趁熱用100目雙層濾布過濾后，再趁熱離心(4000rpm，15min)，收集上清 液I，對濾渣加蒸餾水12L，加熱至95°C下重復(fù)提取1次，合并上清液I ；將上清液I減壓濃縮 至1/3體積，充分冷卻，在4°C下靜置12小時(shí)，結(jié)晶后，離心(4000rpm，15min)，分別收集沉 淀A和上清液II ；沉淀A經(jīng)2次加水重結(jié)晶處理，再對結(jié)晶物于40°C真空干燥，得二氫楊梅 素，產(chǎn)品得率可達(dá)11% ( 二氫楊梅素作標(biāo)樣，硝酸鋁_亞硝酸鈉比色法測定，產(chǎn)品二氫楊梅 素含量> 85% )；將上清液II在60°C下減壓濃縮至原體積的1/4，再加入3倍體積的95% 乙醇，邊加乙醇邊攪拌，放置24h后，離心(4000rpm，15min)，分別收集沉淀B和上清液III ； 沉淀B經(jīng)95%乙醇洗滌后，加水復(fù)溶得多糖液，以sevag法脫蛋白，即以3 1 (ν/ν)的糖 液混合液(4氯仿1正丁醇，ν/ν)脫蛋白1次，再調(diào)節(jié)多糖溶液ρΗ至ρΗ8，于50°C下滴 加20%雙氧水脫色后，加入3倍體積的95%乙醇沉淀多糖，離心，收集沉淀；再加水復(fù)溶后， 加入3倍體積的95%乙醇沉淀多糖，離心，收集沉淀，于40°C真空干燥，得初步純化的藤茶 水溶性多糖，產(chǎn)品得率約4% (葡萄糖作標(biāo)樣，硫酸苯酚法測定，產(chǎn)品多糖含量約60%)；將 上清液III經(jīng)減壓濃縮，回收乙醇，收集濃縮的水溶液，對水溶液用乙酸乙酯萃取(1 1.2， V/V)，再將乙酸乙酯相減壓濃縮，回收乙酸乙酯，濃縮物經(jīng)真空干燥得到藤茶多酚，產(chǎn)品得 率5%以上(沒食子酸作標(biāo)樣，酒石酸亞鐵比色法測定，產(chǎn)品多酚含量41% )。
權(quán)利要求
一種從藤茶中提取二氫楊梅素、藤茶多糖和藤茶多酚的方法，其特征在于加工步驟中包含有a.原料粉碎將新鮮藤茶莖葉干燥、粉碎；b.浸提用原料粉末∶清水以1∶8～12料液比，在溫度為90～100℃浸泡30～40min，過濾收集上清液I；c.濃縮將上清液I減壓濃縮靜置結(jié)晶，分別收集沉淀A和上清液II；d.提取二氫楊梅素將沉淀A加水重結(jié)晶處理，再對結(jié)晶物干燥，得二氫楊梅素產(chǎn)品；e.加醇將濃縮步驟的上清液II加入乙醇，邊加乙醇邊攪拌，靜置后，分別收集沉淀B和上清液III；f.提取粗多糖將沉淀B經(jīng)乙醇洗滌后，得藤茶水溶性粗多糖；g.提取藤茶多酚將加醇步驟的上清液III減壓濃縮，回收乙醇，收集濃縮的水溶液，用乙酸乙酯萃取，再將乙酸乙酯萃取相濃縮、干燥可得到藤茶多酚產(chǎn)品；或?qū)饪s的水溶液，經(jīng)AB 8大孔樹脂吸附→洗脫去雜→洗脫，收集洗脫液并減壓濃縮，回收乙醇，濃縮液干燥得到藤茶多酚產(chǎn)品。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種從藤茶中提取二氫楊梅素、藤茶多糖和藤茶多酚的方 法，其特征在于所述的加工步驟中包含有a.原料粉碎將新鮮藤茶莖葉干燥、粉碎；b.浸提用原料粉末清水以1 8 12料液比，在溫度為90 100°C浸泡30 40min，趁熱由濾布過濾后、再離心(4000rpm，15min)，收集上清液I，對濾渣重復(fù)提取1次， 合并上清液I ；c.濃縮將上清液I減壓濃縮，在4°C下靜置10-15小時(shí)，結(jié)晶后以4000rpm離心 15min，分別收集沉淀A和上清液II ；d.提取二氫楊梅素將沉淀A經(jīng)2 3次加水重結(jié)晶處理，再對結(jié)晶物于35 45°C真 空干燥，得二氫楊梅素產(chǎn)品；e.加醇將濃縮步驟的上清液II在50 60°C下減壓濃縮至原體積的1/3 1/5，再 加入3倍體積的95%乙醇，邊加乙醇邊攪拌，放置8 24h后，4000rpm離心15min，分別收 集沉淀B和上清液III ；f.提取粗多糖將沉淀B經(jīng)95%乙醇洗滌后，得藤茶水溶性粗多糖；g.提取藤茶多酚將加醇步驟的上清液III減壓濃縮，回收乙醇，收集濃縮的水溶液， 用乙酸乙酯萃取，再將乙酸乙酯萃取相濃縮、干燥可得到藤茶多酚產(chǎn)品；或?qū)饪s的水溶 液，經(jīng)AB-8大孔樹脂動(dòng)態(tài)吸附一蒸餾水洗脫去雜一70%乙醇液動(dòng)態(tài)洗脫，或靜置經(jīng)AB-8樹 脂靜態(tài)吸附一蒸餾水洗脫去雜一70%乙醇靜態(tài)洗脫，收集洗脫液并減壓濃縮，回收乙醇，濃 縮液經(jīng)低溫真空干燥得到藤茶多酚產(chǎn)品。
3.按照權(quán)利要求2所述的一種從藤茶中提取二氫楊梅素、藤茶多糖和藤茶多酚的方 法，其特征在于所述的加工步驟f.提取粗多糖中粗多糖可進(jìn)一步進(jìn)行純化處理，粗多糖加 水復(fù)溶一sevag法脫蛋白一用雙氧水脫色一乙醇沉淀一離心，收集沉淀一加水復(fù)溶一乙醇 沉淀一離心，收集沉淀于35 45°C真空干燥或加水溶解后噴霧干燥。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從藤茶中提取二氫楊梅素、藤茶多糖和藤茶多酚的方法，加工步驟中包含有a.原料粉碎將新鮮藤茶莖葉干燥、粉碎；b.浸提熱水提取、離心收集上清液；c.濃縮將上清液I減壓濃縮后，冷卻靜置，離心收集沉淀和上清液II；d.提取二氫楊梅素將沉淀經(jīng)重結(jié)晶真空干燥，得二氫楊梅素；e.加醇將上清液II減壓濃縮，醇沉，離心收集沉淀和上清液III；f.提取粗多糖將沉淀經(jīng)純化、真空干燥或噴霧干燥，得藤茶多糖；g.提取藤茶多酚將上清液III減壓濃縮，以乙酸乙酯萃取、濃縮、干燥得藤茶多酚，或以AB-8樹脂吸附、蒸餾水洗脫后，以乙醇洗脫收集洗脫液，濃縮、真空干燥得藤茶多酚。該方法成本低，產(chǎn)品得率較高環(huán)保，適合工業(yè)化連續(xù)生產(chǎn)，可實(shí)現(xiàn)藤茶資源的綜合開發(fā)利用和經(jīng)濟(jì)效益的提高。
文檔編號C07G99/00GK101973976SQ201010284838
公開日2011年2月16日 申請日期2010年9月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月16日
發(fā)明者劉金龍, 向東山, 向班貴, 周大寨, 唐巧玉, 李世榮, 武蕓, 程超, 羅祖友, 肖強(qiáng), 肖浩, 趙玉宏, 鄭小江 申請人:湖北民族學(xué)院