專利名稱：一種治療實體腫瘤的克拉屈濱緩釋植入劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療實體腫瘤的緩釋植入劑，屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域。(二) 背景技術(shù)關(guān)于癌癥的研究雖已取得了較大進(jìn)展，但其死亡率仍居各種常見死因的前列。最新的數(shù) 據(jù)表明，2006年我國有300萬人死于癌癥。癌癥發(fā)病率逐年上升且呈年輕化趨勢，有資料顯 示，在不到20年的時間里，我國癌癥發(fā)病率上升了69%，死亡率增長了29.4%。據(jù)世界衛(wèi)生組 織最新統(tǒng)計，到2020年全球癌癥發(fā)病率將增加百分之五十，發(fā)病人數(shù)增到一千五百萬。預(yù)計 2020年我國每年將有400萬人死于癌癥因此，探討一種有效的治療癌癥的方法或藥物已經(jīng)成 為目前研究的熱點?？死鼮I(氯法拉賓、Cladribine， clodarabine， Leustatin)是一種抗白血病新藥， 主要用于治療慢性淋巴細(xì)胞性白血病，非霍奇金淋巴肉瘤，皮膚T細(xì)胞淋巴瘤， Waldenstrom' s巨球蛋白血癥和兒童急性髓性細(xì)胞白血病。然而該要單獨用于治療其它腫瘤 的效果不清楚。雖然與其它抗癌藥聯(lián)合對某些腫瘤可能具有一定的作用，但通過常規(guī)途徑給 藥所引起的全身毒副作用限制了其臨床應(yīng)用。(三) 發(fā)明內(nèi)容基于以上對現(xiàn)有技術(shù)的考査，本發(fā)明對其它腫瘤進(jìn)行了比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)克拉屈濱對腦腫 瘤、肝癌、肺癌、食管癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、膀胱癌、睪丸癌、結(jié)腸癌及直腸癌等實 體腫瘤具有較為明顯的作用效果。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)克拉屈濱局部緩釋對甲狀腺癌、鼻咽癌、 卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、子宮頸癌、腎癌及前列腺癌等其它顱外實體腫瘤也具有很好的治療作 用。局部藥物緩釋在保證了局部用藥范圍內(nèi)持久而較穩(wěn)定的藥物濃度的同時，明顯降低了全 身藥物濃度，減輕了毒副作用。本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種緩釋植入劑，用于治療實體腫瘤。 本發(fā)明治療實體腫瘤的緩釋植入劑，其特征在于該緩釋植入劑含抗癌有效量的克拉屈濱 、緩釋輔料和一定量的緩釋調(diào)節(jié)劑，其中各組成成分的重量比為(1) 克拉屈濱 0. 1%-60%(2) 緩釋輔料 40%-99%(3) 緩釋調(diào)節(jié)劑 0-15%緩釋輔料包括下列之一或其組合 (1)生物相容性多聚物，包括生物可降解的或生物不可降解的多聚物及其混合物或共 聚物，(2)水溶性低分子化合物，或/和(3)用于實現(xiàn)針劑和緩釋劑等藥物劑型的合適的添加劑及賦型劑。上述生物可降解的多聚物包括天然的和/或合成的多聚物。合成的多聚物如，但不限于，聚酐類、聚羥基酸、聚酯(polyesters)、聚酰胺(polyamides)、聚原酸酯( polyorthoesters)、聚磷腈(polyphosphazenes)、對羧苯基丙烷(p-CPP)、癸二酸( sebacic acid)、聚苯丙生(對羧苯基丙烷與癸二酸的共聚物)等；天然的多聚物如，但不 限于，蛋白質(zhì)及多糖，包括透明質(zhì)酸、膠原蛋白、軟骨素、明膠、白蛋白等。上述聚酐類可選用，但不限于，芳香聚酐、脂肪族聚酐；其中芳香聚酐將解較慢，熔點 高，有機(jī)溶劑中溶解度低，然而，芳香聚酐與脂肪族聚酐的共聚物卻較為理想(美國專利 4757128)。其中的代表物是聚苯丙生(對羧苯基丙烷(p-CPP)與癸二酸(SA)的共聚物)， 而對羧苯基丙烷為芳香聚酐，癸二酸則是一個芳香二酸與一個脂肪二酸的共聚物?？蛇x用的 其它芳香或脂肪族聚酐的共聚物在其它美國專利中已有詳細(xì)描述(US4857311; 4888176; 4789724)。緩釋輔料優(yōu)選聚乳酸、聚乙醇酸和羥基乙酸的共聚物、聚苯丙生、乙烯乙酸乙烯酯共聚 物；緩釋調(diào)節(jié)劑選自木糖醇、低聚糖、甲殼素、鉀鹽、鈉鹽、甘露醇、山梨醇、透明質(zhì)酸、 膠原蛋白、軟骨素、明膠及白蛋白中的一種或其組合。上述聚羥基酸可選用，但不限于，聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸(PGA)、聚乳酸(PLA)與 聚乙醇酸的混合物、乙醇酸和羥基羧酸的共聚物(PLGA);當(dāng)PLA和PLGA混合時，其含量重 量百分比分別為O. 1-99. 9%和99. 9-0. 1%。聚乳酸的分子量可為，但不限于，5000 100， 000，但以IO， 000 50000為優(yōu)選，以10， 000 20000為最優(yōu)選；聚乙醇酸的分子量可為， 但不限于，5000 100， 000，但以IO， 000 50000為優(yōu)選，以IO， 000 20000為最優(yōu)選；以 上聚羥基酸可單選或多選。當(dāng)單選時，以聚乳酸(PLA)或羥基羧酸和乙醇酸的共聚物( PLGA)為優(yōu)選，共聚物的分子量可為，但不限于，1000 100， 000，但以IO， 000 50000為 優(yōu)選；以IO， 000 20000為最優(yōu)選；當(dāng)多選時，以高分子多聚物或不同高分子多聚物組成的 復(fù)合多聚物或共聚物為優(yōu)選，以含不同分子量聚乳酸或癸二酸的復(fù)合多聚物或共聚物為最優(yōu) 選，如，但不限于，分子量為5000到10000的聚乳酸與分子量為20000到50000的聚乳酸混合 、分子量為10000到20000的聚乳酸與分子量為30000到80000的PLGA混合、分子量為5000到 10000的聚乳酸與癸二酸混合、分子量為30000到80000的PLGA與癸二酸混合。上述生物不可降解的多聚物包括，但不限于有機(jī)硅聚合物、乙烯乙酸乙烯酯共聚物( Ethelene-vinyl acetate copolymer, EVAc)、 聚丙烯腈(polyacrylonitriles)， 聚氨基甲 酸酯(polyurethanes)及聚磷腈(polyphosphazenes)等。組合物可通過直接擴(kuò)散的方式將有 效成分釋放出來。為調(diào)節(jié)藥物釋放速度或改變本發(fā)明抗癌緩釋植入劑的其它特性，可以改變聚合物的單體 成分或分子量、添加或調(diào)節(jié)緩釋輔料的組成及配比，添加水溶性低分子化合物，如，但不 限于，各種糖和鹽等。其中糖可為，但不限于，木糖醇、低聚糖及甲殼素等，其中鹽可為但 不限于，鉀鹽和鈉鹽等。本發(fā)明緩釋植入劑所用的緩釋輔料可為上述緩釋輔料中的任何一種或多種物質(zhì)，但以水 溶性高分子聚合物為主選，在各種高分子聚合物中，以聚乳酸、癸二酸、含聚乳酸或癸二酸 的高分子多聚物的混合物或共聚物為首選，混合物和共聚物可選自，但不限于，PLGA、乙醇 酸和羥基羧酸的混合物、癸二酸與芳香聚酐或脂肪族聚酐的混合物或共聚物。乙醇酸和羥基 羧酸的共混比例是10/90-90/10 (重量)，最好是25/75-75/25 (重量)。共混的方法是任意 的。乙醇酸和羥基羧酸共聚時的含量分別為重量百分比10-90%和90-10%。芳香聚酐的代表 物是對羧苯基丙烷(P-CPP)，對羧苯基丙烷(p-CPP)與癸二酸共聚時的含量分別為重量百分比 10-60%和20-90%，共混重量比是10-40: 50-90，最好是重量比15-30: 65-85。緩釋輔料在《緩釋輔料大全》(第123頁，四川科學(xué)技術(shù)出版社1993年出版，羅明生和 高天惠主編)中已有詳細(xì)描述。另外，中國專利(申請?zhí)?6115937.5;91109723. 6;9710703. 3;01803562.0)及美國發(fā)明專利(專利號5， 651， 986)也列舉了某些 緩釋輔料。包括充填劑、增溶劑、吸收促進(jìn)劑、成膜劑、膠凝劑、制(或致)孔劑、賦型劑 或阻滯劑。以上緩釋輔料有的具有多重作用，因此有的同種物質(zhì)被列為不同的類別。本發(fā) 明抗實體腫瘤組合物可選用的支持物可為上述緩釋輔料中的任何一種或多種物質(zhì)，并不完全 根據(jù)其分類或定義來限制組合物的技術(shù)特征。因此，本發(fā)明的緩釋輔料主要選自聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸和羥基乙酸的共聚物( PLGA)、聚苯丙生(對羧苯基丙烷(p-CPP):癸二酸(SA)共聚物)、乙烯乙酸乙烯酯共 聚物(EVAc)、木糖醇、低聚糖、甲殼素、鉀鹽、鈉鹽、透明質(zhì)酸、膠原蛋白、明膠及白蛋 白中的一種或其組合。其中聚乳酸(PLA)的分子量峰值為5000-15000、 10000-20000、 20000-35000或30000-50000;聚乙醇酸和羥基乙酸的共聚物(PLGA)的分子量峰值為 5000-15000、 15000-35000、 35000-45000或45000-80000;聚乙醇酸與羥基乙酸的重量百分 比為10: 90， 20: 80， 30:70， 40: 60， 50: 50或60: 40;聚苯丙生(對羧苯基丙烷(p-CPP):癸二酸(SA)共聚物)中對羧苯基丙烷(p-CPP)與癸二酸(SA)的重量百分比為 10: 90， 20: 80， 30:70， 40: 60， 50: 50或60: 40。本發(fā)明的特點在于所用的緩釋輔料除高分子聚合物外，還含有上述任意一種或多種其它 緩釋輔料。添加的緩釋輔料統(tǒng)稱為添加劑。添加劑可根據(jù)其功能分為充填劑、致孔劑、賦型 劑、分散劑、等滲劑、保存劑、阻滯劑、增溶劑、吸收促進(jìn)劑、成膜劑、膠凝劑等。緩釋輔料還可為流質(zhì)，如，但不限于芝麻油、混懸液、蒸餾水、生理沖液、以及半固態(tài) 物質(zhì)，如(但不限于)果凍、糊劑、軟膏等，上述緩釋輔料適用于含或不含添加劑的組合物為調(diào)節(jié)藥物釋放速度或改變本發(fā)明抗癌體內(nèi)植入劑的其它特性，可以改變聚合物的單體 成分或分子量、添加或調(diào)節(jié)緩釋輔料的組成及配比，添加水溶性低分子化合物，如，但不 限于，各種糖和鹽等。其中糖可為但不限于，木糖醇、低聚糖及甲殼素等，其中鹽可為但不 限于，鉀鹽和鈉鹽等。緩釋植入劑的用量取決于很多因素，如，但不限于，腫瘤體積、病人體重、給藥方式、 病情進(jìn)展情況及治療反應(yīng)。但其原則是在能夠降低腫瘤細(xì)胞的修復(fù)能力，增加化療作用效 果的同時并不明顯增加藥物的毒性反應(yīng)。有效劑量為O. 01-100毫克/患者，以l-50毫克/患 者為理想，以2-30毫克/患者為最理想。本發(fā)明可制成各種形狀，其中有效成份的含量因不同需要而定?？芍瞥筛鞣N劑型，如， 但不限于，針劑、渾懸液、軟膏、膠囊、植入劑、緩釋劑及植入緩釋劑等，其中植入劑主要 為緩釋植入劑、控釋植入劑或遲釋植入劑；呈各種形狀，如，但不限于，顆粒樣、片狀、球 形、塊狀、針狀、棒狀及模樣；可經(jīng)各種途徑給藥，如動脈、皮下、肌肉、皮內(nèi)、腔內(nèi)、瘤 內(nèi)、瘤周等。給藥途徑取決于多種因素，如腫瘤所在部位、是否手術(shù)或轉(zhuǎn)移、腫瘤體積大小 、腫瘤類別、病人年齡、身體狀況、生育狀況及要求等。為于腫瘤所在部位獲得有效藥物濃 度，可選擇性地動脈灌注，腔內(nèi)灌注(intracavitary),腹腔(intraperitoneal)或胸腔 (intrapleural)及椎管內(nèi)(intraspinal)給藥，也可臟器內(nèi)放置，如腸腔內(nèi)、膀胱內(nèi)、宮腔 內(nèi)、陰道內(nèi)、胃內(nèi)及食道內(nèi)等。在各種途徑中，以局部給藥，如以選擇性動脈、瘤內(nèi)、瘤 周注射為主，以瘤內(nèi)、瘤周或瘤腔放置緩慢釋放的形式為優(yōu)選，如可選用可種緩釋泵、緩釋 膠囊、緩釋劑、植入劑及緩釋植入劑?？捎萌我獾姆椒ㄖ苽洹Ｆ渲饕煞莸陌b方法和步驟在美國專利中(US5651986)已有詳 細(xì)描述，包括若干種制備緩釋制劑的方法:如，但不限于，(i)把載體支持物粉末與藥物混 合然后壓制成植入劑，即所謂的混合法；(ii)把載體支持物熔化，與待包裝的藥物相混合，然后固體冷卻，即所謂的熔融法；(iii)把載體支持物溶解于溶劑中，把待包裝的藥物溶解 或分散于聚合物溶液中，然后蒸發(fā)溶劑，乾燥，即所謂的溶解法；(iv)噴霧干燥法；及(v)冷凍干燥法等。其中溶解法可用以微球的制造，其方法是任意的，抗癌緩釋植入劑也 可包裝脂質(zhì)體中。組合物的有效成分可均勻地包裝于整個緩釋輔料中，也可包裝于載體支持 物中心或其表面；可通過直接擴(kuò)散或經(jīng)多聚物降解的方式或如此兩種方式將有效成分釋放。 緩釋植入劑中各組份及其在組合物中的重量百分含量優(yōu)選下列之一(A) 1%-5%的克拉屈濱和95%-99%的聚乳酸；(B) 5%-10%的克拉屈濱和90%-95%的聚乳酸；(C) 10%-15%的克拉屈濱和85%-90%的聚乳酸；(D) 15%-25%的克拉屈濱和75%-85%的聚乳酸；(E) 25%-40%的克拉屈濱和60%-75%的聚乳酸；(F) 1%-10%的克拉屈濱和90%-99%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物；(G) 10%-20%的克拉屈濱和80%-90%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物；(H) 20%-30%的克拉屈濱和70%-80%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物；(I) 30%-40%的克拉屈濱和60%-70%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物； (J) 5%-15%的克拉屈濱和85%-95%的聚苯丙生；或(K) 15%-35%的克拉屈濱和65%-85%的聚苯丙生。緩釋植入劑中各組份及其在組合物中的重量百分含量進(jìn)一步優(yōu)選下列之一(A) 1%-5%的克拉屈濱和85%-98%的聚乳酸和0. 5%-15%的甘露醇；(B) 5%-10%的克拉屈濱和90%-95%的聚乳酸和0. 5%-10%的山梨醇；(C) 10%-15%的克拉屈濱和85%-90%的聚乳酸和0. 5%-10%的氯化鈉；(D) 15%-25%的克拉屈濱和75%-85%的聚乳酸和0. 25%-5%的甘露醇；(E) 25%-40%的克拉屈濱和60%-75%的聚乳酸0. 1%-8%的山梨醇；(F) 1%-10%的克拉屈濱和90%-99%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物和0. 5%-15%的甘露醇；(G) 10%-20%的克拉屈濱和80%-90%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物和0. 5%-10%的山梨醇;(H) 20%-30%的克拉屈濱和70%-80%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物和0. 5%-10%的氯化鈉;(I) 30%-40%的克拉屈濱和60%-70%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物和0. 25%-5%的甘露醇; (J) 5%-15%的克拉屈濱和85%-95%的聚苯丙生和1%-5%的甘露醇；或(K) 15%-35%的克拉屈濱和65%-85%的聚苯丙生和0. 25%-7. 5%的甘露醇。 緩釋植入劑用于治療實體腫瘤，包括腦腫瘤、肝癌、肺癌、食管癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、甲狀腺癌、鼻咽癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、子宮頸癌、腎癌、前列腺癌、膀胱癌、結(jié) 腸癌、直腸癌、睪丸癌、皮膚癌、頭頸部腫瘤和源于膽囊、口腔、外周神經(jīng)系統(tǒng)、粘膜、腺 體、血管、骨組織、淋巴結(jié)、眼睛、的原發(fā)或繼發(fā)的癌、肉瘤或癌肉瘤。因此，本發(fā)明的應(yīng) 用是用于制造治療上述腫瘤的上述各種藥物制劑，其中以針劑、渾懸液、軟膏、膠囊、植 入劑、緩釋劑及緩釋植入劑為優(yōu)選，以緩釋植入劑、控釋植入劑或遲釋植入劑為最優(yōu)選。該抗癌緩釋植入劑中還可加入其它藥用成分，如，但不限于，抗菌素、止疼藥、抗凝藥 、止血藥等。由于本發(fā)明抗癌緩釋植入劑可使常規(guī)化療、免疫治療、高熱治療、光化學(xué)治療 、電療、生物治療、激素治療、磁療、超聲治療、放療及基因治療等方法的作用效果加強(qiáng)。 因此在局部緩慢釋放的同時可與上述非手術(shù)療法合用，從而使其抗癌效果進(jìn)一步加強(qiáng)。當(dāng)與 上述非手術(shù)療法合用時，本發(fā)明抗癌緩釋植入劑可與非手術(shù)療法同時應(yīng)用，也可在非手術(shù)療 法實施前幾天內(nèi)應(yīng)用，其目的在于盡可能增強(qiáng)腫瘤的敏感性，從而為根治各種人體及動物原 發(fā)和轉(zhuǎn)移實體腫瘤提供一種更有效的新的方法，具有非常高的臨床應(yīng)用價值及顯著的經(jīng)濟(jì)和 社會效益。當(dāng)局部應(yīng)用時，該組合物可直接置于原發(fā)或轉(zhuǎn)移的實體腫瘤周圍或瘤體內(nèi)，也可直接置 于原發(fā)或轉(zhuǎn)移的實體腫瘤全部或部分切除后所形成的腔內(nèi)。本發(fā)明的主要成份以生物可容性物質(zhì)為支持物，故不引起異物反應(yīng)。支持物體內(nèi)放置 后可降解吸收，故不再手術(shù)取出。因在腫瘤局部釋放所含藥物，從而選擇性地提高并延長局部 藥物濃度，同時可降低由常規(guī)途徑給藥所造成的全身毒性反應(yīng)。對顱外實體腫瘤具有明顯的 治療作用。本發(fā)明抗癌組合物可通過許多方案予以實施，其目的只是為了進(jìn)一步說明，并非對本發(fā) 明的實施加以任何限制。試驗一、克拉屈濱對腫瘤細(xì)胞生長的抑制作用。為驗證克拉屈濱對其它腫瘤細(xì)胞生長的抑制作用，本試驗將克拉屈濱(15 ug/ml)加到 體外培養(yǎng)24小時的各種腫瘤細(xì)胞中(表1)，繼續(xù)培養(yǎng)48小時后計數(shù)細(xì)胞總數(shù)并計算其對腫 瘤細(xì)胞生長的抑制率(％)。腫瘤細(xì)胞生長的抑制率(％)=((對照組細(xì)胞數(shù)-試驗組細(xì)胞數(shù))/對照組細(xì)胞數(shù))X100%表1腫瘤細(xì)胞抑制率(％)肝癌88肺癌72食管癌76冃3出86乳腺癌84胰腺癌80甲狀腺癌78鼻咽癌72卵巢癌80子宮內(nèi)膜癌88子宮頸癌78腎癌80前列腺癌82膀胱癌82結(jié)腸癌82直腸癌80皮膚癌68睪丸癌72試驗一的結(jié)果表明，與對照組相比，克拉屈濱對所試腫瘤的生長均有明顯抑制作用(p〈0.05)，其中對。這一意外發(fā)現(xiàn)構(gòu)成本發(fā)明的主要技術(shù)特征，為實體腫瘤的治療提供了新 的選擇。含有克拉屈濱的緩釋植入劑可制成任意劑型或形狀，但以植入的緩慢釋放劑為優(yōu)選。本發(fā)明緩釋植入劑的制備方法如下1、 將稱重的緩釋輔料放入容器中，加一定量的有機(jī)溶劑溶解均勻，有機(jī)溶劑的量不嚴(yán)格 限定，以充分溶解為宜。2、 加入稱重之抗癌有效成份重新?lián)u勻?？拱┯行С煞菖c緩釋輔料的用量比例因具體要 求而定。3、 去除有機(jī)溶劑。真空干燥或低溫干燥法均可。4、 將干燥后的固體組合物根據(jù)需要制成各種形狀。5、 分裝后射線滅菌(射線劑量因體積而異)備用。也可用其它方法滅菌。 具體實施方式
實施例一、將稱重(90mg)的緩釋輔料(分子量為10000-20000的聚乳酸(PLA))放入容器中，力口 一定量的有機(jī)溶劑溶解混勻(以充分溶解為準(zhǔn))后，加入10毫克克拉屈濱，重新?lián)u勻后真空干 燥去除有機(jī)溶劑。將干燥后的固體組合物立即成形，分裝后射線滅菌，得到緩釋植入劑含 10%克拉屈濱。該緩釋植入劑在體外生理鹽水中的釋藥時間為14-20天，在小鼠皮下的釋藥時 間為20-30天。實施例二按實施例一所述方法制成緩釋植入劑，但所含之抗癌有效成分為下列之一(A) 1%的克拉屈濱和和99%的聚乳酸；(B) 5%的克拉屈濱和和95%的聚乳酸；(C) 10%的克拉屈濱和90%的聚乳酸；(D) 15%的克拉屈濱和85%的聚乳酸；(E) 20%的克拉屈濱和80%的聚乳酸。 實施例三將稱重(85mg)的緩釋輔料(分子量為l 5000-30000的PLGA， 50: 50)放入容器中，加 一定量的有機(jī)溶劑溶解混勻(以充分溶解為準(zhǔn))后，加入15mg克拉屈濱，重新?lián)u勻后真空干燥 去除有機(jī)溶劑。將干燥后的固體組合物立即成形，分裝后射線滅菌，得到緩釋植入劑含15% 克拉屈濱。該緩釋植入劑在體外生理鹽水中的釋藥時間為14-22天，在小鼠皮下的釋藥時間 為20-26天。實施例四按實施例三所述方法制成緩釋植入劑，所不同的是所含之抗癌有效成分為下列之一(1) 1%-10%的克拉屈濱和90%-99%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物；(2) 10%-20%的克拉屈濱和80%-90%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物；(3) 20%-30%的克拉屈濱和70%-80%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物；(4) 30%-40%的克拉屈濱和60%-70%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物；(5) 5%的克拉屈濱和95%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物；(6) 10%的克拉屈濱和90%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物；(7) 20%的克拉屈濱和80%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物；(8) 30%的克拉屈濱和70%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物。 實施例五將稱重(85mg)的緩釋輔料(分子量為20000-30000的PLGA， 75:25)放入容器中，加一 定量的有機(jī)溶劑溶解混勻(以充分溶解為準(zhǔn))后，加入10mg克拉屈濱和5mg甘露醇，重新?lián)u勻 后真空干燥去除有機(jī)溶劑。將干燥后的固體組合物立即成形，分裝后射線滅菌，得到緩釋植 入劑含10%克拉屈濱。該緩釋植入劑在體外生理鹽水中的釋藥時間為18-25天，在小鼠皮下的 釋藥時間為25-30天。實施例六按實施例五所述方法制成緩釋植入劑，所不同的是所含之抗癌有效成分為下列之一(1) 1%-10%的克拉屈濱和90%-99%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物和0. 5%-15%的甘露醇；(2) 10%-20%的克拉屈濱和80%-90%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物和O. 5%-10%的山梨醇；(3) 20%-30%的克拉屈濱和70%-80%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物和0. 5%-10%的氯化鈉；(4) 30%-40%的克拉屈濱和60%-70%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物和O. 25%-5%的甘露醇；(5) 5%的克拉屈濱和92%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物和2%的氯化鈉；(6) 10%的克拉屈濱和85%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物和5%的甘露醇；(7) 20%的克拉屈濱和75%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物和5%的甘露醇；(8) 30%的克拉屈濱和75%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物和5%的甘露醇。 實施例七將85mg聚苯丙生(對羧苯基丙烷(p-CPP):癸二酸(SA)為50: 50)放入容器中，加入 IOO毫升二氯甲烷溶解混勻后，加入15mg克拉屈濱，重新?lián)u勻后真空干燥去除有機(jī)溶劑。將干 燥后的固體組合物立即成形，分裝后射線滅菌，得含重量百分比15%克拉屈濱緩釋植入劑。 該緩釋植入劑在體外生理鹽水中的釋藥時間為15-25天，在小鼠皮下的釋藥時間為25-35天。實施例八按實施例七所述方法制成緩釋植入劑，但所不同的是所含抗癌有效成分為下列之一(1) 1%-15%的克拉屈濱和85%-95%的聚苯丙生；(2) 15%-35%的克拉屈濱和65%-85%的聚苯丙生；(3) 5%的克拉屈濱和95%的聚苯丙生；(4) 10%的克拉屈濱和90%的聚苯丙生；(5) 15%的克拉屈濱和85%-95%的聚苯丙生；(6) 20%的克拉屈濱和80%的聚苯丙生。 實施例九將80 mg聚苯丙生(對羧苯基丙烷(p-CPP):癸二酸(SA)為20: 80)和5mg氯化鈉放入 容器中，加入IOO毫升二氯甲烷溶解混勻后，加入15mg克拉屈濱，重新?lián)u勻后真空干燥去除有 機(jī)溶劑。將干燥后的固體組合物立即成形，分裝后射線滅菌，得含重量百分比15%克拉屈濱 緩釋植入劑。該緩釋植入劑在體外生理鹽水中的釋藥時間為15-25天，在小鼠皮下的釋藥時 間為25-35天。實施例十按實施例十所述方法制成緩釋植入劑，但所不同的是所含抗癌有效成分為下列之一(1) 5%-15%的克拉屈濱和85%-95%的聚苯丙生和1%-5%的甘露醇；或(2) 15%-35%的克拉屈濱和65%-85%的聚苯丙生和0. 25%-7. 5%的甘露醇。 實施例十一將85mg緩釋輔料(分子量為15000-30000的聚乳酸(PLA))和10mg甘露醇放入容器中， 加一定量的有機(jī)溶劑溶解混勻(以充分溶解為準(zhǔn))后，加入5毫克克拉屈濱，重新?lián)u勻后真空 干燥去除有機(jī)溶劑。將干燥后的固體組合物立即成形，分裝后射線滅菌，得到緩釋植入劑含 5%克拉屈濱。該緩釋植入劑在體外生理鹽水中的釋藥時間為18-20天，在小鼠皮下的釋藥時 間為20-30天。實施例十二按實施例十一所述方法制成緩釋植入劑，所用緩釋輔料選自下列之一或其組合(A) 1%的克拉屈濱和和95%的聚乳酸和4%的甘露醇；(B) 5%的克拉屈濱和和93%的聚乳酸和2%的甘露醇；(C) 10%的克拉屈濱和85%的聚乳酸和5%的甘露醇；(D) 15%的克拉屈濱和82%的聚乳酸和3%的氯化鈉；(E) 20%的克拉屈濱和78%的聚乳酸和2%的氯化鈉。 實施例十三按實施例l到十一所述方法制成緩釋植入劑，所用緩釋輔料選自下列之一或其組合a) 分子量為5000-15000、 10000-20000、 20000-35000或30000-50000的聚乳酸(PLA)b) 分子量為5000-15000、 15000-35000、 35000-45000或45000-80000的聚乙醇酸和羥基 乙酸的共聚物(PLGA);c) 聚苯丙生(對羧苯基丙烷(p-CPP):癸二酸(SA)共聚物)，對羧苯基丙烷( p-CPP)與癸二酸(SA)的重量百分比為10: 90、 20: 80、 30:70、 40: 60、 50: 50或60: 40在上述緩釋的基礎(chǔ)上，本發(fā)明進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)體內(nèi)植入克拉屈濱對腦腫瘤、肝癌、肺癌、食 管癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、膀胱癌、睪丸癌、結(jié)腸癌、直腸癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、 子宮頸癌、腎癌及前列腺癌等其它實體腫瘤也具有很好的治療作用。局部藥物緩釋在保證了 局部用藥范圍內(nèi)持久而較穩(wěn)定的藥物濃度的同時，明顯降低了全身藥物濃度，減輕了毒副作 用。以下體內(nèi)試驗用于說明而非對本發(fā)明的限制。實施例十四、腫瘤內(nèi)植入克拉屈濱對實體腫瘤的抑制作用方法和步驟腫瘤細(xì)胞接種于小鼠的右側(cè)腋窩皮下，當(dāng)腫瘤直徑生長至O. 8cm左右時( 接種后第8天)，將動物隨機(jī)分為7組，每組10只。即生理鹽水組、克拉屈濱腹腔注射組(以 下簡稱克拉屈濱腹腔組)、克拉屈濱局部注射組(簡稱克拉屈濱局部組)、高分子聚合物組(簡稱高聚組)、克拉屈濱緩釋植入劑組用實施例四所制的緩釋植入劑(5%組、10%組，和 20%組，簡稱植入劑5%、植入劑10%、植入劑20%)。用70%酒精消毒腫瘤表面皮膚，選擇距腫 瘤下緣lcm處，剪開lmm長切口，用穿刺針將克拉屈濱植入劑植入腫瘤組織中，不含藥高分子 聚合物、克拉屈濱植入劑5%、克拉屈濱植入劑10%、克拉屈濱植入劑20%?？p合切口防止植入 劑漏出。每3天用游標(biāo)卡尺測量腫瘤大小，植入劑包埋后15天處死動物，稱體重后完整剝離 腫瘤并稱瘤重。計算腫瘤抑制率％， DAS . verl.O藥理學(xué)軟件做統(tǒng)計學(xué)處理。腫瘤抑制率=(i-給藥組平均瘤重/生理鹽水組平均瘤重)X100%實施例十五腫瘤內(nèi)植入克拉屈濱汀緩釋植入劑對小鼠Lewis肺癌的抑瘤作用 按照實施例十四所述方法和步驟檢驗克拉屈濱緩釋植入劑對小鼠Lewis肺癌的抑瘤作用 。所用的植入劑輔料為PLGA(分子量為15000-30000，乙醇酸和羥基乙酸的共混比為50: 50) ，源自實施例四。本次實驗結(jié)果證明不同劑量的克拉屈濱植入劑能明顯抑制腫瘤生長，腫瘤抑制率與藥物劑量呈明顯量效關(guān)系?？死鼮I植入劑腫瘤抑制率分別為43%、 72%、 82%，與 克拉屈濱局部注射組比較，P值均小于0.001。重復(fù)實驗?zāi)[瘤抑制率分別為44%、 70%、 80% ，與局部注射組比較，P值均小于0.001。差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義。克拉屈濱腹腔注射組和 克拉屈濱局部注射組與生理鹽水組比較腫瘤抑制率為16%和8. 5%，重復(fù)實驗?zāi)[瘤抑制率為 11. 8%和11. 2%。克拉屈濱植入劑的抑瘤率明顯超過克拉屈濱腹腔注射組和局部注射組，兩次 實驗結(jié)果重復(fù)性好。實施例十六腫瘤內(nèi)植入克拉屈濱緩釋植入劑對小鼠乳腺癌的抑瘤作用 按照實施例十四所述方法和步驟檢驗克拉屈濱緩釋植入劑對小鼠乳腺癌的抑瘤作用，所 用的植入劑來自實施例一。實驗結(jié)果表明1%、 10%和25%克拉屈濱植入劑的腫瘤抑制率分別為 37%、 70%、 78%，與克拉屈濱局部注射組比較，P值均小于0.001。重復(fù)實驗表明腫瘤抑制率 分別為36%、 72%、 82%，與克拉屈濱局部注射組比較，P值均小于0.001。差異有高度統(tǒng)計學(xué) 意義?？死鼮I腹腔注射組和局部注射組與生理鹽水組比較腫瘤抑制率為14%和10%，重復(fù)實 驗?zāi)[瘤抑制率為13%和8%?？死鼮I植入劑的抑瘤率明顯超過克拉屈濱腹腔注射組和局部 注射組，兩次實驗結(jié)果重復(fù)性好。實施例十七腫瘤內(nèi)植入克拉屈濱緩釋植入劑對小鼠肝癌的抑瘤作用 按照實施例十五所述方法和步驟檢驗克拉屈濱緩釋植入劑對小鼠肝癌的抑瘤作用，所用 的植入劑為5%、 10%和20%聚苯丙生(對羧苯基丙烷(p-CPP)與癸二酸(SA)的重量百分比 為50: 50)，來自實施例八。實驗結(jié)果證明不同劑量的克拉屈濱植入劑植入小鼠肝癌(H22 )實體腫瘤中能明顯抑制腫瘤生長，腫瘤抑制率與藥物劑量呈明顯量效關(guān)系?？死鼮I植入 劑腫瘤抑制率分別為50%、 60%、 74%，與克拉屈濱局部注射組比較，低劑量組P值等于O. 001 ，中、高劑量組P值均小于O.OOl。重復(fù)實驗表明腫瘤抑制率分別為47%、 60%、 72%，與克拉 屈濱局部注射組比較，低劑量組P值小于0.05，而中、高劑量組P值均小于O.OOl。差異有高 度統(tǒng)計學(xué)意義?？死鼮I腹腔注射組和克拉屈濱局部注射組與生理鹽水組比較腫瘤抑制率為 30%和20%，重復(fù)實驗?zāi)[瘤抑制率為27%和20%?？死鼮I植入劑的抑瘤率明顯超過克拉屈濱 腹腔注射組和局部注射組，兩次實驗結(jié)果重復(fù)性好。實施例十八腫瘤內(nèi)植入克拉屈濱緩釋植入劑對小鼠食道癌的抑瘤作用 按照實施例十五所述方法和步驟檢驗克拉屈濱緩釋植入劑對小鼠食道癌的抑瘤作用，所 用的植入劑選自實施例六。實驗結(jié)果證明不同劑量的克拉屈濱植入劑植入裸鼠模型人食管癌 (9706)實體腫瘤中，均能明顯抑制腫瘤生長，腫瘤抑制率與藥物劑量呈明顯量效關(guān)系?？?拉屈濱植入劑腫瘤抑制率分別為40%、 64%、 70%，與克拉屈濱局部注射組比較，P值均小于0.001。重復(fù)實驗發(fā)現(xiàn)腫瘤抑制率分別為50%、 60%、 68% ，與克拉屈濱局部注射組比較，P值 均小于0.001。差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義?？死鼮I腹腔注射組和局部注射組與生理鹽水組比 較腫瘤抑制率為13%和5. 5%，重復(fù)實驗表明腫瘤抑制率為12%和14%?？死鼮I植入劑的抑瘤 率明顯超過腹腔注射組和局部注射組，兩次實驗結(jié)果重復(fù)性好。實施例十九 腫瘤內(nèi)植入克拉屈濱緩釋植入劑對小鼠胰腺癌的抑瘤作用 按照實施例十五所述方法和步驟檢驗克拉屈濱緩釋植入劑對小鼠胰腺癌的抑瘤作用，所 用的植入劑輔料為PLGA(分子量為20000-35000，乙醇酸和羥基乙酸的共混比為50: 50)?？死?屈濱在緩釋植入劑中的含量為2. 5%、 7. 5%和12. 5%.實驗結(jié)果證明不同劑量的克拉屈濱植入 劑植入裸鼠模型人胰腺癌(JF305)實體腫瘤中，能明顯抑制腫瘤生長，腫瘤抑制率與藥物 劑量呈明顯量效關(guān)系?？死鼮I植入劑腫瘤抑制率分別為35%、 47%、 66%，與克拉屈濱局部 注射組比較，P值均小于O.OOl。重復(fù)實驗表明腫瘤抑制率分別為58%、 65%、 70% ，與克拉屈 濱局部注射組比較，P值均小于O.OOl。差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義?？死鼮I腹腔注射組和局部 注射組與生理鹽水組比較腫瘤抑制率為21%和6. 6%。重復(fù)實驗發(fā)現(xiàn)腫瘤抑制率為12%和9%?？?拉屈濱植入劑的抑瘤率明顯超過腹腔注射組和局部注射組，兩次實驗結(jié)果重復(fù)性好。 實施例二十 腫瘤內(nèi)植入克拉屈濱緩釋植入劑對小鼠直腸癌的抑瘤作用 按照實施例十五所述方法和步驟檢驗克拉屈濱緩釋植入劑對小鼠直腸癌的抑瘤作用，所 用的植入劑輔料為PLGA(分子量為20000-35000，乙醇酸和羥基乙酸的共混比為50: 50)?？死?屈濱在緩釋植入劑中的含量為7. 5%、 15%和25%.實驗結(jié)果證明不同劑量的克拉屈濱植入劑， 能明顯抑制腫瘤生長，腫瘤抑制率與藥物劑量呈明顯量效關(guān)系?？死鼮I植入劑腫瘤抑制率 分別為54%、 67%、 78%，與克拉屈濱局部注射組比較，P值均小于O.OOl。重復(fù)實驗表明腫瘤 抑制率分別為50%、 68%、 76% ，與克拉屈濱局部注射組比較，P值均小于O.OOl。差異有高度 統(tǒng)計學(xué)意義?？死鼮I腹腔注射組和局部注射組與生理鹽水組比較腫瘤抑制率為21%和6.6% 。重復(fù)實驗發(fā)現(xiàn)腫瘤抑制率為12%和9%?？死鼮I植入劑的抑瘤率明顯超過腹腔注射組和局 部注射組，兩次實驗結(jié)果重復(fù)性好。另外，腫瘤內(nèi)植入克拉屈濱緩釋植入劑對胃癌、膀胱癌、睪丸癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、 子宮內(nèi)膜癌、子宮頸癌、腎癌及前列腺癌等其它實體腫瘤也具有很好的治療作用，其作用明 顯超過克拉屈濱腹腔注射組和局部注射組。這一意外發(fā)現(xiàn)構(gòu)成本發(fā)明的又一主要技術(shù)特征， 為實體腫瘤的治療提供了又一新的選擇。
權(quán)利要求
1. 一種治療實體腫瘤的緩釋植入劑，其特征在于該緩釋植入劑含抗癌有效量的克拉屈濱、緩釋輔料和一定量的緩釋調(diào)節(jié)劑，其中各組成成分的重量比為(1)克拉屈濱 0.1％-60％(2)緩釋輔料 40％-99％(3)緩釋調(diào)節(jié)劑0-15％其中，緩釋輔料選自聚乳酸、聚乙醇酸和羥基乙酸的共聚物、聚苯丙生、乙烯乙酸乙烯酯共聚物中的一種或其組合；緩釋調(diào)節(jié)劑選自木糖醇、低聚糖、甲殼素、鉀鹽、鈉鹽、甘露醇、山梨醇、透明質(zhì)酸、膠原蛋白、軟骨素、明膠及白蛋白中的一種或其組合。
2.根據(jù)權(quán)利要求l所述之緩釋植入劑，其特征在于該緩釋植入劑的抗 癌有效成分中各組份及其在植入劑中的重量百分含量為下列之一(A) 1%-5%的克拉屈濱和95%-99%的聚乳酸；(B) 5%-10%的克拉屈濱和90%-95%的聚乳酸；(C) 10%-15%的克拉屈濱和85%-90%的聚乳酸；(D) 15%-25%的克拉屈濱和75%-85%的聚乳酸；(E) 25%-40%的克拉屈濱和60%-75%的聚乳酸；(F) 1%-10%的克拉屈濱和90%-99%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物；(G) 10%-20%的克拉屈濱和80%-90%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物；(H) 20%-30%的克拉屈濱和70%-80%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物；(I) 30%-40%的克拉屈濱和60%-70%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物； (J) 5%-15%的克拉屈濱和85%-95%的聚苯丙生；或(K) 15%-35%的克拉屈濱和65%-85%的聚苯丙生。
3.根據(jù)權(quán)利要求l所述之緩釋植入劑，其特征在于該緩釋植入劑的抗癌有效成分中各組份及其在植入劑中的重量百分含量為下列之一(A) 1%-5%的克拉屈濱和85%-98%的聚乳酸和0. 5%-15%的甘露醇；(B) 5%-10%的克拉屈濱和90%-95%的聚乳酸和0. 5%-10%的山梨醇；(C) 10%-15%的克拉屈濱和85%-90%的聚乳酸和0. 5%-10%的氯化鈉；(D) 15%-25%的克拉屈濱和75%-85%的聚乳酸和0. 25%-5%的甘露醇；(E) 25%-40%的克拉屈濱和60%-75%的聚乳酸0. 1%-8%的山梨醇；(F) 1%-10%的克拉屈濱和90%-99%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物和0. 5%-15%的甘露醇；(G) 10%-20%的克拉屈濱和80%-90%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物和0. 5%-10%的山梨醇(H) 20%-30%的克拉屈濱和70%-80%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物和0. 5%-10%的氯化鈉(I) 30%-40%的克拉屈濱和60%-70%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物和0. 25%-5%的甘露醇(J) 5%-15%的克拉屈濱和85%-95%的聚苯丙生和1%-5%的甘露醇；或(K) 15%-35%的克拉屈濱和65%-85%的聚苯丙生和0. 25%-7. 5%的甘露醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求l所述之緩釋植入劑，其特征在于該緩釋植入劑的抗 癌有效成分中各組份及其在植入劑中的重量百分含量為下列之一(A) 1%的克拉屈濱和和99%的聚乳酸；(B) 5%的克拉屈濱和和95%的聚乳酸；(C) 10%的克拉屈濱和90%的聚乳酸；(D) 15%的克拉屈濱和85%的聚乳酸；(E) 20%的克拉屈濱和80%的聚乳酸；(F) 5%的克拉屈濱和95%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物；(G) 10%的克拉屈濱和90%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物；(H) 20%的克拉屈濱和80%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物；(I) 30%的克拉屈濱和70%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物； (J) 5%的克拉屈濱和95%的聚苯丙生；或(K) 15%的克拉屈濱和85%的聚苯丙生。
5. 根據(jù)權(quán)利要求l所述之緩釋植入劑，其特征在于該緩釋植入劑的抗 癌有效成分中各組份及其在植入劑中的重量百分含量為下列之一(A) 1%的克拉屈濱和和95%的聚乳酸和4%的甘露醇；(B) 5%的克拉屈濱和和93%的聚乳酸和2%的甘露醇；(C) 10%的克拉屈濱和85%的聚乳酸和5%的甘露醇；(D) 15%的克拉屈濱和82%的聚乳酸和3%的氯化鈉；(E) 20%的克拉屈濱和78%的聚乳酸和2%的氯化鈉；(F) 5%的克拉屈濱和92%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物和2%的氯化鈉；(G) 10%的克拉屈濱和85%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物和5%的甘露醇；(H) 20%的克拉屈濱和75%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物和5%的甘露醇；(I) 30%的克拉屈濱和75%的乙醇酸和羥基乙酸的共聚物和5%的甘露醇； (J) 5%的克拉屈濱和92. 5%的聚苯丙生和2. 5%的甘露醇；或(K) 15%的克拉屈濱和75%的聚苯丙生和10%的甘露醇。6據(jù)權(quán)利要求l-5所述之抗癌緩釋植入劑，其特征在于聚乳酸的分子 量峰值為5000-15000、 10000-20000、 20000-35000或30000-50000。7據(jù)權(quán)利要求l-5所述之抗癌緩釋植入劑，其特征在于乙醇酸和羥基 乙酸的共聚物的分子量峰值為5000-15000、 15000-35000、 35000-45000或45000-80000;聚 乙醇酸與羥基乙酸的重量百分比為10: 90， 20: 80， 30:70， 40: 60， 50: 50或60: 40。8據(jù)權(quán)利要求l-5所述之抗癌緩釋植入劑，其特征在于聚苯丙生(對 羧苯基丙烷-癸二酸共聚物)中對羧苯基丙烷與癸二酸的重量百分比為10: 90， 20: 80， 30:70， 40: 60， 50: 50或60: 40。9權(quán)利要求l-5所述之緩釋植入劑，其特征在于該緩釋植入劑為緩釋 注射劑和固體緩釋植入劑。10根據(jù)權(quán)利要求l所述之緩釋植入劑，其特征在于所述緩釋植入劑 用于制備治療腦腫瘤、肝癌、肺癌、食管癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、甲狀腺癌、鼻咽癌、 卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、子宮頸癌、腎癌、前列腺癌、膀胱癌、結(jié)腸癌、直腸癌、睪丸癌、皮 膚癌、頭頸部腫瘤和起源于膽囊、口腔、外周神經(jīng)系統(tǒng)、粘膜、腺體、血管、骨組織、淋巴 結(jié)、眼睛的原發(fā)或繼發(fā)的癌、肉瘤或癌肉瘤的藥物制劑。
全文摘要
一種治療實體腫瘤的緩釋植入劑，其特征在于該緩釋植入劑含抗癌有效量的克拉屈濱和緩釋輔料。實體腫瘤包括腦腫瘤、肝癌、肺癌、食管癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、甲狀腺癌、鼻咽癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、子宮頸癌、腎癌、前列腺癌、膀胱癌、結(jié)腸癌、直腸癌、皮膚癌、頭頸部腫瘤和源于外周神經(jīng)系統(tǒng)、粘膜、腺體、血管、骨組織、淋巴結(jié)的原發(fā)或繼發(fā)的癌、肉瘤或癌肉瘤。緩釋輔料主要為生物可容性可降解吸收的高分子多聚物，在其降解吸收的過程中能將卡莫司汀緩慢釋放于腫瘤局部，因此在明顯降低其全身毒性反應(yīng)的同時還可于腫瘤局部維持有效藥物濃度。腫瘤局部放置該抗緩釋植入劑不僅能夠降低卡莫司汀的全身毒性反應(yīng)，同時還能選擇性地提高腫瘤局部的藥物濃度，增強(qiáng)化療藥物及放射治療等非手術(shù)療法的治療效果。
文檔編號A61K9/00GK101219104SQ20071020297
公開日2008年7月16日 申請日期2007年12月11日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月11日
發(fā)明者孔慶忠, 孔慶新 申請人:山東藍(lán)金生物工程有限公司;孔慶忠