專利名稱：：用于溶酶體貯積癥的腦室內(nèi)酶輸注系統(tǒng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及溶酶體貯積癥領(lǐng)域。特別地，涉及這些疾病的通過酶補(bǔ)償療法的治療和/或預(yù)防。
發(fā)明內(nèi)容稱為溶酶體貯積癥(LSDs)的一組代謝性疾病包括超過四十種遺傳病，其中很多涉及各種溶酶體水解酶的遺傳缺陷。在表l中列舉了典型的溶酶體貯積癥和相關(guān)缺陷酶。表1溶酶體貯積癥天冬氨酰葡糖胺尿癥法布里病嬰兒期巴藤病MCNL1)典型嬰兒后期巴藤病*(CNL2)少年巴藤病^CNL3)巴藤病，其他形式*(CNL4-CNL8)胱氨酸貯積癥Faber氏癥巖藻糖苷貯積癥Galactosidosialidosis綜合癥缺陷酶天冬氨酰氨基葡糖苷酶a.-半乳糖苷酶A軟脂酰蛋白硫酯酶三肽基肽酶溶酶體跨膜蛋白多種基因產(chǎn)物半胱氨酸運(yùn)載蛋白酸性神經(jīng)酰胺酶酸性.a.-L-巖藻糖苷酶保護(hù)性蛋白/組織蛋白酶A1、2*、3*型戈謝病G.sub.Ml神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥*亨特綜合癥*胡-射二氏綜合征*球形細(xì)胞型白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良*a.-甘露糖苷貯積癥*P.-甘露糖苷貯積癥*Maroteai)x-Lamy綜合癥異染性腦白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良*酸性.卩.-葡萄糖苷酶，或者酸性.(3.-半乳糖苷酶艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶a.-L-艾杜糖苷酶半乳糖腦苷脂酶酸性.a,甘露糖苷酶酸性.卩，甘露糖苷酶芳基硫酸酯酶B芳基硫酸酯酶A溶酶體貯積癥MorquioA綜合癥MorquioB綜合癥粘多糖癥n/in*神經(jīng)鞘磷脂沉積病A型*,B型神經(jīng)鞘磷脂沉積病c型*蓬佩病*山德霍夫病*乙酰氨基葡糖苷酶缺乏綜合征A*乙酰氨基葡糖苷酶缺乏綜合征B*乙酰氨基葡糖苷酶缺乏綜合征C*乙酰氨基葡糖苷酶缺乏綜合征D*Schindler病*Schindler-Kanzaki病涎酸貯積癥Sly病承Tay-Sachs病*.沃耳曼氏綜合征**影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)溶酶體貯積癥的標(biāo)志性特征為溶酶體中代謝產(chǎn)物異常積累，其導(dǎo)致核周體中大量膨脹的溶酶體出現(xiàn)。治療溶酶體貯積癥(和治療器官特異的酶病如肝臟特異酶病不同)的主要挑戰(zhàn)在于需要在多種不同組織中逆轉(zhuǎn)溶酶體貯積的病狀。一些溶酶體貯積癥能夠通過靜脈輸注缺失的酶(酶補(bǔ)償療法，ERT)進(jìn)行有效地治療。比如，戈謝病一型患者僅有內(nèi)臟疾病，對(duì)使用重組葡萄糖腦苷脂酶(Cerezyme,GenzymeCorp.)進(jìn)行補(bǔ)償療法反應(yīng)良好。但是，患有影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的代謝疾病(如戈謝病二型或三型)的患者對(duì)這種采用靜脈輸注重組酶的補(bǔ)償療法只有部分有反應(yīng)，因?yàn)檠a(bǔ)償用酶無法通過血腦屏障(BBB)進(jìn)入腦部。此外，通過直接注射向腦部輸注補(bǔ)償用酶的試圖部分被限制，原因?yàn)槟X中局部高濃度酶的細(xì)胞毒性和有限的實(shí)質(zhì)擴(kuò)散速率(Partridge,PeptideDrugDeliverytotheBrain,RavenPress,1991)。A型神經(jīng)鞘磷脂沉積病(NPA)是一種典型的溶酶體貯積癥。根據(jù)UniProtKB/Swiss-Prot進(jìn)入號(hào)P17405,A型神經(jīng)鞘磷脂沉積病(NPA)由11號(hào)染色體(Ilpl5.4-pl5.1)上SMPD1基因缺陷引起，也稱為這種疾病的早期的典型癥9缺陷酶N-乙酰半乳糖胺-6-硫酸鹽酸性.(i-半乳糖苷酶N-乙酰氨基葡萄糖-l-酸性鞘磷脂酶NPC-1.CL-葡萄糖苷酶.卩.-己糖胺酶B乙酰肝素N-硫酸酯酶.(X.-N-乙酰氨基葡糖苷酶乙酰輔酶A:a.-氨基葡萄糖苷N-乙酰氨基葡萄糖-6-硫酸鹽.a.-N-乙?；肴樘擒彰竌,N-乙酰基半乳糖苷酶.a,神經(jīng)醇胺酶.p.-葡糖醛酸糖苷酶.P.-己糖胺酶A酸性脂肪狀。神經(jīng)鞘磷脂沉積病是臨床和遺傳不同的隱性遺傳病。由溶酶體內(nèi)鞘磷脂和其他代謝相關(guān)的類脂異常積累所引起，從而導(dǎo)致從早年開始的神經(jīng)退行性病變?；颊呖赡艹霈F(xiàn)黃瘤、色素沉積、肝脾肥大、淋巴結(jié)病和智力低下。相比于普通人群，神經(jīng)鞘磷脂沉積病在北歐猶太人家系出現(xiàn)的頻率更高。NPA的特點(diǎn)表現(xiàn)為嬰兒期非常早地發(fā)病，病程進(jìn)展很快，導(dǎo)致患者三年內(nèi)死亡。NPA患者缺乏酸性鞘磷脂酶(ASM)，該酶能夠?qū)⑶柿字D(zhuǎn)化成神經(jīng)酰胺。ASM對(duì)1,2-二酰基甘油磷酸膽堿(1,2-diacylglycerolphosphocholine)和1,2-二?；视土姿岣视?1，2-diacylglycerolphosphoglycerol)還具有磷脂酶C活性。該酶能夠?qū)⑶柿字退D(zhuǎn)化成為N-?；窠?jīng)鞘氨醇和磷酸膽堿。依照本發(fā)明，如上述表1中鑒定的任何疾病的溶酶體C積癥如A型或B型祌經(jīng)鞘磷脂沉積病，可以采用腦室內(nèi)輸注此種疾病中缺乏的酶進(jìn)行治療和/或預(yù)防。慢速輸注可以達(dá)到最高的效應(yīng)。在血腦屏障兩側(cè)都看到了效應(yīng)，這使腦室內(nèi)輸注成為影響大腦和/或臟器的溶酶體貯積癥的有用的輸注方法。因此，在第一個(gè)方面，本發(fā)明提供了治療或預(yù)防患者中因酶缺陷引起的溶酶體貯積癥的方法，該方法包含通過腦室內(nèi)輸注將酶給予到患者的腦部。在相關(guān)的方面，本發(fā)明提供酶在制備用于治療或預(yù)防患者中由患者中酶缺陷引起的溶酶體貯積癥的藥物中的用途，其中治療或預(yù)防包含酶腦室內(nèi)輸注到腦。引起酶缺陷的原因例如酶表達(dá)缺乏、造成的活性水平下降(如酶失活)的酶突變或者體內(nèi)酶清除/分解速率升高。酶缺陷引起酶底物累積，酶的輸注可以減少腦中酶底物水平。溶酶體忙積癥可能是上述表1中鑒定的任意一種，酶可能是一種溶酶體水解酶。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，治療了A型或B型神經(jīng)鞘磷脂沉積病患者。經(jīng)由腦室內(nèi)輸注將足以降低所述腦中鞘磷脂水平的酸性鞘磷脂酶輸注到患者腦中。本發(fā)明的另一個(gè)方面是用于治療或預(yù)防患者中因酶缺陷引起的溶酶體貯積癥的試劑盒。試劑盒包括存在缺陷的酶以及用于將酶輸注到腦中一個(gè)或多個(gè)腦室的導(dǎo)管和/或泵。這些導(dǎo)管或泵經(jīng)過特殊設(shè)計(jì)和/或改造，適用于腦室內(nèi)輸注。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供用于治療A型或B型祌經(jīng)鞘磷脂沉積病患者的試劑盒。試劑盒包含酸性鞘磷脂酶和將所述酸性鞘磷脂酶輸注入患者腦室的導(dǎo)管。仍是本發(fā)明的另一個(gè)方面是用于治療A型或B型神經(jīng)鞘磷脂沉積病患者的試劑盒。試劑盒包含酸性鞘磷脂酶和將所述酸性鞘磷脂酶輸注入患者腦室的泵。根據(jù)本發(fā)明，因酶缺陷造成酶底物累積從而引起溶酶體貯積癥的患者可以被進(jìn)行治療。這樣的疾病包括戈謝病、I型和II型MPS病、蓬佩病、巴藤病(CLN2)，等。在特定疾病中缺乏的酶被通過腦室內(nèi)輸注輸入患者的腦部。輸注部位可以是側(cè)腦室和/或第四腦室。依照本發(fā)明，酶輸注速率可以是單次劑量快速推注，或者輸注持續(xù)大約1-5分鐘、大約5-10分鐘、大約10-30分鐘、大約30-60分鐘、大約1-4小時(shí)，或者消耗超過4、5、6、7或8小時(shí)。借此所述患者腦腦酶底物水平降低。單劑量輸注可能持續(xù)超過1分鐘、2分鐘、5分鐘、IO分鐘、20分鐘、30分鐘、1小時(shí)、2小時(shí)或者3小時(shí)。在閱讀本說明書后對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的這些和其它實(shí)施方案為該領(lǐng)域提供了治療和/或預(yù)防溶酶體貯積癥，特別是那些既涉及中樞神經(jīng)系統(tǒng)又涉及其他臟器的的溶酶體貯積癥的方法和試劑盒。圖l:顯示被分析鞘磷脂的腦部分的簡(jiǎn)圖。Sl在腦前端，S5在腦后端。圖2:顯示腦室內(nèi)輸注rhASM降低了ASMKO小鼠腦中的SPM水平。圖3:顯示腦室內(nèi)輸注rhASM降低了ASMKO小鼠肝臟、脾臟和肺臟中的SPM水平。圖4:顯示腦室內(nèi)輸注后腦中的hASM染色。圖5:顯示腦室內(nèi)輸注rhASM六小時(shí)后ASMKO小鼠腦中SPM水平降低。圖6:顯示腦室內(nèi)輸注rhASM六小時(shí)后，ASMKO小鼠肝臟、血清和肺臟中SPM水平降低。圖7:顯示已記錄的hASM變體及它們與疾病或酶活性的關(guān)系。圖8:顯示包含標(biāo)明的腦室的腦橫切面圖。圖9A和9B:分別顯示腦室的側(cè)視圖和上面觀。圖10:顯示到側(cè)腦室中的輸注。具體實(shí)施例方式本發(fā)明的實(shí)施將使用，除非另作說明，本領(lǐng)域技術(shù)中的免疫學(xué)、分子生物學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和DNA重組的傳統(tǒng)技術(shù)。參見例如，Sambrook，F(xiàn)ritschandManiatis,MOLECULARCLONING:ALABORATORYMANUAL,2ndedition(1989);CURRENTPROTOCOLSINMOLECULARBIOLOGY(F.M.Ausubel,Wa/,eds.,(1987》；METHODSINENZYMOLOGY(AcademicPress,Inc.):PCR2:APRACTICALAPPROACH(M丄MacPherson,B.D.HamesandG.R.Tayloreds.(1995)),HarlowandLane,eds.(1988)ANTIBODIES,ALABORATORYMANUAL,andANIMALCELLCULTURE(R丄Freshney,ed.(1987))系列.如說明書和權(quán)利要求中所用，如果上下文沒有明確指明，單數(shù)形式"a""an"和"the"都包含復(fù)數(shù)范圍。舉例說明，術(shù)語"acell"包括多個(gè)細(xì)胞，包括其混合物。如本文所用，術(shù)語"包含"指組合物和方法包括所述成分，但是并不排除其他成分。當(dāng)用于定義組合物和方法時(shí)，術(shù)語"基本由……組成"指排除藥物對(duì)組合具有任何基本重要性的其他組分。因此，如本文所定義的，基本由組分組成的組合物將不排除來源于分離和純化方法和藥學(xué)上可接受的載體如磷酸鹽緩沖鹽水、防腐劑等的微量污染物。術(shù)語"由……組成"指排除超出其他成分的微量組分并排除用于給予依照本發(fā)明的組合物或藥物的基本方法歩驟。使用這些過渡術(shù)語定義的實(shí)施方案也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。所有的數(shù)字指標(biāo)，例如pH值、溫度、時(shí)間、濃度和分子量，包括范圍，都是以0.1增量(+)或(-)變動(dòng)的近似值。盡管不總是明確地表明所有的數(shù)字指標(biāo)前都會(huì)加上"大約"這個(gè)術(shù)語，但這是應(yīng)該知道的。盡管不總是明確地表明本文公開的試劑僅是示例性的以及也使用本領(lǐng)域公知的這些試劑的等同物，但這也是應(yīng)該知道的。術(shù)語"治療的""治療有效量"及其同源詞指物質(zhì)如酶或者蛋白質(zhì)的產(chǎn)生阻止或延緩發(fā)病、或者減輕患者一種或多種疾病癥狀或達(dá)到目標(biāo)生物學(xué)效應(yīng)如神經(jīng)病理糾正的量。術(shù)語"治療糾正"指產(chǎn)生阻止或延緩發(fā)病或者減輕患者一種或多種疾病癥狀的糾正程度。有效量可以通過公知實(shí)驗(yàn)方法確定。"組合物""藥物"指包括活性劑的組合，例如酶和載體或其他物質(zhì)，如化合物或組合物，其是無活性的(如可檢測(cè)試劑或標(biāo)記)或者有活性的，例如佐劑、稀釋劑、粘合劑、穩(wěn)定劑、緩沖液、鹽、親脂溶劑、防腐劑、佐劑，等，或兩種或者更多種這些物質(zhì)的混合物。載體優(yōu)選藥學(xué)上可接受的。它們包括藥用輔料、添加劑、蛋白質(zhì)、肽、氨基酸、脂質(zhì)和碳水化合物(例如，糖，包括單糖、二糖、三糖、四糖和低聚糖；衍生糖如糖醇、糖醛酸、酯化糖等；多糖或糖多聚體)，其可以單獨(dú)存在也可以組合存在，按重量或者按體積可以單獨(dú)或組合包含1-99.99%。示例性的蛋白輔料包括血清白蛋白如人血清白蛋白(HSA)、重組人白蛋白(rHA)、明膠、酪蛋白等。代表性的氨基酸/抗體組分，其在緩沖能力中也起作用，包括丙氨酸、甘氨酸、精氨酸、甜菜堿、組氨酸、谷氨酸、天門冬氨酸、半胱氨酸、賴氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、阿斯帕坦，等。碳水化合物輔料也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)，其例子包括但不限于單糖如果糖、麥芽糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖、山梨糖等；二糖如乳糖、庶糖、海藻糖、纖維二糖等；多糖如棉籽糖、松三糖、麥芽糊精、右旋糖苷類、淀粉，等；糖醇如甘露醇、木糖醇、麥芽糖醇、拉客替醇、木糖醇山梨醇(葡糖醇)和肌醇。術(shù)語載體也包括緩沖液或pH調(diào)節(jié)試劑或者包含相同物質(zhì)的組合物。典型地，緩沖液為從有機(jī)酸或者堿制備的鹽。代表性的緩沖液包括有機(jī)酸鹽如擰檬酸、抗壞血酸、葡糖酸、碳酸、酒石酸、琥珀酸、醋酸或鄰苯二甲酸的鹽，Tris，鹽酸氨丁三醇或者磷酸鹽緩沖液。另外的載體包括多聚體輔料/添加劑，如聚乙烯吡咯酮、蔗聚糖(多聚蔗糖)、葡聚糖結(jié)合劑(如，環(huán)糊精，如2-羥丙基-.quadrature.-環(huán)糊精)、聚乙烯乙二醇、調(diào)味劑、抗微生物劑、甜味劑、抗氧化劑、抗靜電劑、表面活性齊1J(如，聚山梨酯如"吐溫20"和"吐溫80")、脂質(zhì)(如磷脂類、脂肪酸)、類固醇(如膽固醇)和螯合劑(如EDTA)。如本文所用，術(shù)語"藥學(xué)上可接受的載體"包括任何標(biāo)準(zhǔn)的藥物載體，例如磷酸鹽緩沖鹽水、水和乳劑，如油/水或水/油乳劑，以及各種類型的濕潤(rùn)劑。依照本發(fā)明生產(chǎn)和/或使用的且其包括特定的其缺陷是要被糾正的酶的組合物和藥物能包括穩(wěn)定劑和防腐劑和任何上面提及的具有可體內(nèi)使用的額外條件的載體。載體、穩(wěn)定劑和佐劑的例子可參見MartinREMINGTON'SPHARM.SCI,15thEd.(MackPubl.Co"Eastern(1975)和Williams&Williams,(1995),以及"PHYSICIAN'SDESKREFERENCE",52nded.,MedicalEconomics,Montvale,N丄(1998)。"受試者"、"個(gè)體"或者"患者"在本文可交換使用，其指脊椎動(dòng)物，優(yōu)選哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選人。哺乳動(dòng)物包括但不限于小鼠、大鼠、猴、人、農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物、競(jìng)技用動(dòng)物和寵物。如本文所用，術(shù)語"調(diào)節(jié)"指改變效應(yīng)或產(chǎn)出的量或者強(qiáng)度，例如，加強(qiáng)、擴(kuò)大、減少或降低。如本文使用，術(shù)語"改善"和"減輕"同義，指降低或減輕。例如，通過使它們更耐受，可以改善疾病或障礙的癥狀。對(duì)于人腦結(jié)構(gòu)的鑒定，參見例如，TheHumanBrain:Surface,Three-DimensionalSectionalAnatomyWithMRI,andBloodSupply,2nded.,eds.Deuteronetal.,SpringerVela,1999;AtlasoftheHumanBrain,eds.Maietal.,AcademicPress;1997禾口Co-PlanarStereotaxicAtlasoftheHumanBrain:3-DimensionalProportionalSystem:AnApproachtoCerebralImaging,eds.Tamaracketal.,ThymeMedicalPub.1988。對(duì)于小鼠腦結(jié)構(gòu)的鑒定，參見例如，TheMouseBraininStereotaxicCoordinates,2nded.,AcademicPress,2000。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，對(duì)存在溶酶體水解酶缺陷的患者腦室內(nèi)輸注該酶到腦導(dǎo)致改善的大腦和受到影響的臟器(非中樞神經(jīng)系統(tǒng))的代謝情況。相比于快速推注，慢速輸注時(shí)其尤其真實(shí)。因此，由特定酶缺陷引起的溶酶體貯積癥，如上述表1中鑒定的那些疾病，可以通過腦室內(nèi)輸注各自的酶進(jìn)行治療或預(yù)防。一種用于治療A型或B型神經(jīng)鞘磷脂沉積病的特別有用的酶為酸性鞘磷脂酶(ASM)，如顯示在SEQIDNO:l1。一種用于治療戈謝病的特別有用的酶為葡萄糖腦苷脂酶。一種用于治療MPSI病的特別有用的酶為a-L-艾杜糖苷酸酶。一種用于治療MPSII病的特別有用的酶為艾杜糖酸酯-2-硫酸酯酶。一種用于治療蓬佩病或也稱為酸性麥芽糖酶缺乏癥(AMD)的II型糖原貯積病(GSDII)的特別有用的酶為ot-葡萄糖苷酶。一種用于治療典型嬰兒期巴藤病(CLN2)的特別有用的酶為三肽基肽酶。根據(jù)本發(fā)明使用和/或輸注的酶可以是采用本領(lǐng)域公知的方法生產(chǎn)的酶的重組形式。在一個(gè)實(shí)施方案中，酶是重組人酶。可將溶酶體酶類，更特定地溶酶體水解酶輸注到存在所述酶的缺陷的患者的一個(gè)或多個(gè)充滿腦脊液(CSF)的腦室。腦脊液為充滿腦室的清亮液體，存在于蛛網(wǎng)膜下空隙，并圍繞腦和脊髓。腦脊液由脈絡(luò)叢產(chǎn)生，通過腦部組織液的滲出或傳送進(jìn)入腦室。脈絡(luò)叢是順側(cè)腦室底部到第三和第四腦室頂部排列的結(jié)構(gòu)。某些研究表明，這些結(jié)構(gòu)能夠每天產(chǎn)生400-600ccs的液體，相當(dāng)于一天內(nèi)充盈中樞神經(jīng)系統(tǒng)空隙四次的量。在成人中，這種液體的體積被計(jì)算為從125至U50ml(4-5殘基1-46組成了分泌時(shí)切割掉的信號(hào)序列盎司)不等。腦脊液不斷的形成、循環(huán)、吸收。某些研究表明，每天大約產(chǎn)生430到450ml(近似兩杯)的腦脊液。某些計(jì)算估計(jì)，成人中腦脊液的產(chǎn)生速度約為每分鐘0.35ml，嬰兒中約為每分鐘0.15ml。腦脊液主要由側(cè)腦室的脈絡(luò)叢產(chǎn)生。腦脊液從腦室間孔進(jìn)入第三腦室，其中它通過從第三腦室生產(chǎn)被加入，并繼續(xù)下行從腦水導(dǎo)管進(jìn)入第四腦室。第四腦室匯入更多的腦脊液；隨后腦脊液從馬讓迪孔和盧施卡孔流入蛛網(wǎng)膜下間隙。然后循環(huán)流動(dòng)遍及腦基底層，下行環(huán)繞脊髓，上行覆蓋大腦半球。腦脊液通過蛛網(wǎng)膜絨毛和顱內(nèi)血管竇排空進(jìn)入血液，借此傳遞注入腦室的酶不僅進(jìn)入腦還進(jìn)入已知的受溶酶體貯積癥影響的臟器。盡管SEQIDNO:1中顯示了特定的氨基酸序列，保持有活性的此序列的突變體，例如人群中的正常突變體，同樣可以使用。典型地，這些正常突變體和SEQIDNO:1中所示的序列僅有一到兩個(gè)殘基差異。根據(jù)本發(fā)明使用的SEQIDNO:1的突變體，不管是否為自然發(fā)生，與SEQIDNO:1至少95%、96%、97%、98%或99%相同。根據(jù)本發(fā)明，也可以使用其他酶的突變體。然而，與使用的酶無關(guān)，不應(yīng)該使用與疾病或者降低的活性相關(guān)的突變體。典型地，將酶的成熟形式進(jìn)行輸注。在SEQIDNO:1的情況下，酶的成熟形式開始于如SEQIDNO:1中所示的第47個(gè)殘基。與疾病相關(guān)的突變體顯示在圖7中。以相似的方式，人群中這樣的溶酶體貯積癥的酶如葡萄糖腦苷脂酶、cx-L-艾杜糖苷酸酶、艾杜糖酸酯-2-硫酸酯酶、酸性(x-葡萄糖苷酶和三肽基肽酶的保持酶活性的正常突變體同樣可以使用。根據(jù)本發(fā)明的試劑盒由各個(gè)分開的部分組成。雖然它們可以包裝在單個(gè)儲(chǔ)存盒中，它們也可以單獨(dú)分裝。甚至單個(gè)儲(chǔ)存盒也可以分成間隔。典型地，試劑盒中提供一套說明書并提供腦室內(nèi)輸注酶例如溶酶體水解酶的說明。說明書可能是打印格式、電子格式、在光盤、軟盤、具有包裝中提供的因特網(wǎng)地址上的說明書視頻或者DVD，或這些方式的組合。除去酶、一個(gè)或更多個(gè)插管或?qū)Ч芎?或泵以外，還提供其它組分，如稀釋劑、緩沖液、溶劑、條帶、螺絲釘和維護(hù)工具。通過本發(fā)明的方法治療的人群包括但不限于患有神經(jīng)代謝疾病如溶酶體貯積癥，如表1中列舉的疾病，特別是假如這樣的疾病影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)和臟器的患者，或者存在患病可能的高危人群。在示例性的實(shí)施方案中，疾病是A型神經(jīng)鞘磷脂沉積病。ASM或者其他溶酶體水解酶能夠整合入藥物組合物，有助于治療如抑制、減弱、防止或改善特征為溶酶體水解酶活性水平不充分的狀況。這種藥物組合物將被輸注到溶酶體水解酶存在缺陷的巳發(fā)患者和可能出現(xiàn)所述缺陷的高危人群。組合物應(yīng)該在藥學(xué)上可接受的載體中包含治療用量或預(yù)防用量的ASM或者其他溶酶體水解酶。藥學(xué)上可接受的載體可以是任何可配伍的、沒有毒性的、適合將多肽載入患者體內(nèi)的物質(zhì)。無菌水、醇、脂肪和蠟質(zhì)都可以用來作為載體。藥學(xué)上可接受的佐劑、緩沖劑、分散劑等也可以摻入藥物組合物中。載體可與ASM或者其他溶酶體水解酶結(jié)合成任何適合于腦室內(nèi)注射或輸注或其它的形式(這種形式可能也適合于靜脈注射或者鞘內(nèi)注射)。合適的載體包括，例如，生理鹽水、抑菌水、Crem叩horEL.TM.(BASF,Parsippany,N丄)、磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)、其它鹽溶液、葡萄糖溶液、甘油溶液、水和例如用石油、動(dòng)物油、植物油或者合成來源的油(花生油、大豆油、礦物油或者芝麻油)制成的油乳劑。人造腦脊液也可以作為載體。載體優(yōu)選無菌和無致熱原。藥物組合物中ASM或者其他溶酶體水解酶濃度變化很廣，即從按重量至少占總組合物的大約0.01%、0.1%、1%至多達(dá)20%或更多。對(duì)于ASM或者其他溶酶體水解酶的腦室內(nèi)輸注，組合物必須無菌并且為液體。組合物在生產(chǎn)和儲(chǔ)存條件下必須穩(wěn)定，并能抵御微生物如細(xì)菌和真菌的污染行為。避免微生物污染行為可以使用不同的抗細(xì)菌和抗真菌劑，例如對(duì)羥苯甲酸酯、氯丁醇、石炭酸、硫汞柳酸鈉等獲得。在許多情況下，在組合物中優(yōu)選包括等滲物質(zhì)如糖、多元醇如甘露醇、山梨醇等、氯化鈉。ASM或者其他溶酶體水解酶的劑量因個(gè)體不同有些變化，這取決于特定的酶及其體內(nèi)活性的特異性、給藥途徑、醫(yī)療條件，患者的年齡、體重或性別、患者對(duì)ASM、其他溶酶體水解酶或者載體成分的敏感性以及其他主治醫(yī)師能很容易考慮到的因素。雖然藥物劑量由于患者和疾病的原因可能變化，通常輸注給患者的酶用量約為從每月每50公斤患者體重O.lmg到大約1000mg。在一個(gè)實(shí)施方案中，輸注給患者的酶用量約為每月每50公斤患者體重lmg到500mg。在另一個(gè)實(shí)施方案中，輸注給患者的酶用量約為每月每50公斤患者體重5mg到300mg，或者約為每月每50公斤患者體重10mg到200mg。輸注速率可以是單次劑量輸注以快速推注輸注。單劑量也可輸注持續(xù)大約1-5分鐘、5-10分鐘、10-30分鐘、30-60分鐘、1-4小時(shí)或者持續(xù)超過4、5、6、7或8小時(shí)。它可能花費(fèi)超過l分鐘、2分鐘、5分鐘、IO分鐘、20分鐘、30分鐘、1小時(shí)、2小時(shí)或者3小時(shí)。申請(qǐng)人觀察到，雖然腦室內(nèi)快速推注是有效的，但是慢速輸注非常有效。雖然申請(qǐng)人不希望被任何特定操作所束縛，據(jù)認(rèn)為，由于腦脊液的代謝回轉(zhuǎn)，慢速輸注更加有效。雖然文獻(xiàn)中估計(jì)的和計(jì)算的不同，據(jù)認(rèn)為人類腦脊液代謝回轉(zhuǎn)的時(shí)間大約在4、5、6、7或8小時(shí)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的慢速輸注時(shí)間需要測(cè)定，以便輸注時(shí)間與腦脊液代謝回轉(zhuǎn)的時(shí)間相等或者更長(zhǎng)。代謝回轉(zhuǎn)時(shí)間取決于物種、大小及年齡，但可通過使用本領(lǐng)域公知方法進(jìn)行測(cè)定。輸注可能持續(xù)一天或者更多天的周期?；颊呖赡苊吭陆邮芤淮?、兩次、三次或者更多次的治療，例如每周一次或者每?jī)芍芤淮?。如被患者腦部和其他臟器中疾病底物重新累積所指明地，患者可能在其生命期內(nèi)需要重復(fù)輸注?？刹捎帽绢I(lǐng)域公知的任何鑒定和定量相關(guān)底物的技術(shù)，該技術(shù)可能在取自腦部和/或一個(gè)或多個(gè)臟器的一份或多份樣品上進(jìn)行，對(duì)重新累積進(jìn)行測(cè)定。這樣的技術(shù)包括酶實(shí)驗(yàn)和/或免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)，例如放射免疫測(cè)定法或酶聯(lián)免疫測(cè)定法。腦脊液通過蛛網(wǎng)膜絨毛和顱內(nèi)血管竇排空進(jìn)入血液，借此傳遞輸注的酶進(jìn)入已知受溶酶體貯積癥影響的臟器。通常受神經(jīng)鞘磷脂沉積病影響的臟器包括肺臟、胰臟、腎臟和肝臟。腦室內(nèi)慢速輸注至少在腦和潛在地在臟器中提供了針對(duì)輸注的酶的降低的底物含量。在腦部、肺臟、胰臟、腎臟和/或肝臟中累積的底物的減少可以很明顯。減少能夠超過10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%。不同患者或者同一患者的不同臟器中的減小可不必相同。減少可以通過任何的本領(lǐng)域公知技術(shù)進(jìn)行測(cè)定，例如通過酶實(shí)驗(yàn)和/或免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，如本文其它地方所討論的。假如需要，能將人類大腦結(jié)構(gòu)和其他哺乳動(dòng)物的大腦的相似結(jié)構(gòu)聯(lián)系起來。例如，大多數(shù)哺乳動(dòng)物，包括人類和嚙齒類，顯示了相似的內(nèi)嗅區(qū)-海馬體投射的組織結(jié)構(gòu)(topographicalorganization),具有投射至海馬體背側(cè)或者中隔的內(nèi)嗅皮層外側(cè)和內(nèi)側(cè)中的神經(jīng)元，而至海馬體腹側(cè)的投射神經(jīng)元主要從內(nèi)嗅皮層內(nèi)側(cè)部中的神經(jīng)元起源(PrinciplesofNeuralScience,4thed.,edsKandeletal.McGraw-Hill,1991;TheRatNervousSystem,2nded.,ed.Paxinos，AcademicPress,1995)。此夕卜，內(nèi)嗅皮層中的第二層細(xì)胞投射至齒狀回，終止于齒狀回分子層外三分之二處。來源于第三層細(xì)胞的軸突兩側(cè)投射至海馬體的CA1和CA3海馬角區(qū)域，終止于多孔層(stratumlacunose)分子層。在示例性實(shí)施方案中，LSD酶被輸注進(jìn)入受治者或患者一個(gè)或兩個(gè)側(cè)腦室。通過輸注進(jìn)入側(cè)腦室，酶能到達(dá)腦部產(chǎn)生最大量腦脊液的部位。酶也可以被輸注進(jìn)入一個(gè)以上的腦室。治療可以由每個(gè)耙位單次輸注組成，也可以重復(fù)進(jìn)行?？梢允褂枚鄠€(gè)靶位進(jìn)行輸注/注射。例如，酶被輸注進(jìn)入的腦室可以包括側(cè)腦室和第四腦室。在一些實(shí)施方案中，除了第一個(gè)輸注靶位之外，含有LSD酶的組合物可被輸注到第一個(gè)耙位對(duì)側(cè)或者同側(cè)的另一個(gè)靶位。注射/輸注可以是單次或者多次，單側(cè)或者雙側(cè)。為了特異性地輸注含酶溶液或組合物到中樞神經(jīng)系統(tǒng)的特定位置，例如到特定腦室，比如到側(cè)腦室或者第四腦室，可以采用腦功能區(qū)定位的顯微注射方法。舉例來說，手術(shù)當(dāng)天，患者腦部具有固定在位的立體定位架(擰緊固定于頭蓋骨)。使用高分辨率的核磁共振對(duì)帶有立體定位架(MRI相匹配的可信標(biāo)記)的腦部進(jìn)行成像。核磁共振圖像傳送到運(yùn)行立體定位的電腦。使用一系列冠狀、矢狀和軸向圖像確定載體注射的靶位和軌跡。這個(gè)軟件能直接將軌跡轉(zhuǎn)換成與立體定位架相匹配的三維形式。在頭顱進(jìn)入部位上方鉆孔，立體定位儀用植入在設(shè)定深度的針定位。在藥學(xué)上可接受的載體中的酶溶液被注射。也可能使用額外的給藥途徑，例如可直接目視下的皮質(zhì)表層給藥方式，或其他非腦功能區(qū)定位應(yīng)用。慢速輸注的一種方法是使用泵。這樣的泵都可通過購(gòu)買獲得，例如購(gòu)自Alzet(Cupertino,CA)或者M(jìn)edtronic(Minneapolis,MN)。這種泵可以為可植入式的。輸注酶的另外一種便利的方法是使用插管或者導(dǎo)管。插管或者導(dǎo)管可用于不同時(shí)間的多次輸注?？赏ㄟ^腦功能定位植入插管和導(dǎo)管。仔細(xì)考'慮的是，使用多次輸注治療典型的溶酶體貯積癥患者。導(dǎo)管和泵可以單獨(dú)使用也可以聯(lián)合使用。溶酶體貯積癥(LSD)包括超過四十種遺傳病，其中很多涉及各種溶酶體水解酶的遺傳缺陷。在表l中列舉了典型的溶酶體貯積癥和相關(guān)的存在缺陷的酶。戈謝病是由溶酶體水解酶葡萄糖腦苷脂酶(GC)存在遺傳缺陷所引起，導(dǎo)致其底物葡萄糖苷(脂)酰鞘氨醇(GL-1)在組織細(xì)胞溶酶體中累積。在各種組織中出現(xiàn)組織巨噬細(xì)胞(戈謝細(xì)胞)中的GL-1的進(jìn)行性累積。這種累積的范圍部分依賴于基因型。臨床上己經(jīng)鑒定了三種不同的戈謝病表型，非神經(jīng)性1型，其最常見，發(fā)病時(shí)間從幼童時(shí)期到成年；神經(jīng)性2型和3型，分別在嬰兒期和幼童時(shí)期呈現(xiàn)。任何這些表型都可以依照本發(fā)明進(jìn)行治療。所有類型戈謝病共同的主要臨床表現(xiàn)為肝脾肥大、血細(xì)胞減少、病理性骨折，并且，偶爾地，肺衰竭。戈謝病的詳細(xì)論述可以參照OnlineMetabolic&MolecularBasesofInheritedDiseases,Part16,Chapter146and146.1(2007)。在明顯涉及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的2型和3型戈謝病患者中，通過腦室內(nèi)輸注缺陷的LSD酶可以改善腦部和潛在受影響臟器(非中樞神經(jīng)系統(tǒng))的代謝狀況。在患有1型戈謝病的患者中的腦室內(nèi)輸注存在缺陷的LSD酶可以改善受影響臟器(非中樞神經(jīng)系統(tǒng))的代謝情況。從通過靶向斷裂相關(guān)的小鼠基因制造的小鼠模型制備了戈謝病的動(dòng)物疾病模型。例如，存在在小鼠GC基因座包含D409V突變的戈謝疾病小鼠(Xu,Y-Hetal.(2003).Am.J.Pathol.163:2093-2101)。雜合小鼠g6"D409V/null顯示了在內(nèi)臟組織中正常小鼠GC活性的約5%，并在四月齡時(shí)在肝臟、脾臟、肺臟和骨髓中發(fā)展了充盈脂質(zhì)的巨噬細(xì)胞(戈謝細(xì)胞)。這個(gè)動(dòng)物模型可作為評(píng)價(jià)戈謝病患者腦室內(nèi)輸注存在缺陷的LSD酶的益處、測(cè)定輸注條件的合適系統(tǒng)。尼曼-匹克病(NPD)是溶酶體貯積癥，為遺傳性的神經(jīng)代謝異常，特征是遺傳性的酸性鞘磷脂酶缺陷(ASM;鞘磷脂膽堿磷酸水解酶，EC3丄3.12)。功能性ASM蛋白的缺少導(dǎo)致整個(gè)腦內(nèi)的神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)的溶酶體內(nèi)鞘磷脂底物的累積。這導(dǎo)致核周體內(nèi)大量膨脹的溶酶體形成，其是A型NPD的標(biāo)志性特征和主要的細(xì)胞表型。膨脹溶酶體的存在與正常細(xì)胞功能的丟失和進(jìn)行性的祌經(jīng)變性過程相關(guān)，其導(dǎo)致受影響個(gè)體在幼童時(shí)期死亡(TheMetabolicandMolecularBasesofInheritedDiseases,eds.Scriver"a/"McGraw-Hill,NewYork,2001,pp.3589-3610)。-次級(jí)細(xì)胞表型(例如其他代謝異常)也與此疾病相關(guān)，特別是溶酶體間隔中膽固醇的高水平累積。鞘磷脂對(duì)膽固醇有很強(qiáng)的親和性，其導(dǎo)致ASMKO小鼠和患者的溶酶體中大量的膽固醇的分離(Leventhale/a/.(2001)J.Biol.Chem.，276:44976-44983;Slotte(1997)Subcell.Biochem.,28:277-293;和Viana"(19卯)J.Med.Genet"27:499-504.)。NPD病詳細(xì)的論述可能于OnlineMetabolic&MolecularBasesofInheritedDiseases,Part16，Chapter144(2007)找到。存在NPD的動(dòng)物模型。例如，ASMKO小鼠是認(rèn)可的A和B型尼曼-匹克病模型(Horinouchietal.(1995)Nat.Genetics,10:288-293;Jinetal.(2002)J.Clin.Invest"109:1183-1191;和Otterbach(1995)Cell,81:1053-1061)。腦室內(nèi)輸注缺陷的LSD酶導(dǎo)致腦和受影響的臟器(非CNS)的代謝狀態(tài)改善。粘多糖貯積病(MPS)是一組溶酶體貯積異常，其由催化葡萄糖胺聚糖(粘多糖)變性的酶缺陷引起。存在ll種已知酶缺陷，其產(chǎn)生7種不同的MPS，包括MPSI(胡氏，射氏和胡-射二氏綜合癥)和MPSII(亨特綜合癥)。依照本發(fā)明任何MPS均可被治療。MPS詳細(xì)的論述可能于OnlineMetabolic&MolecularBasesofInheritedDiseases,Part16，Chapter136(2007)中找到。存在多種MPS動(dòng)物模型，其可來源于狗、貓、大鼠、小鼠和山羊中自然發(fā)生的突變，也可以是通過耙向破壞相關(guān)小鼠基因而創(chuàng)建的小鼠模型。這些動(dòng)物模型的生物化學(xué)和代謝特征一般與發(fā)現(xiàn)于人類的特征極為相似；但是，臨床癥狀可能較輕。例如，MPSI認(rèn)可的模型包括鼠模型[Clark，LAetal.,Hum.Mol.Genet.(1997),6:503]和犬模型[Menon,KPetal.,Gewwz/c^(1992),14:763]。例如，MPSII認(rèn)可的模型包括小鼠模型[Muenzer,丄etal.,(2002),ActaPaediatr.Suppl.;91(439):98-9]。在涉及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的MPS中，如同在MPSI和MPSII患者中發(fā)現(xiàn)的那樣，腦室內(nèi)輸注缺陷的LSD酶導(dǎo)致腦和潛在受影響的臟器(非CNS)代謝狀態(tài)改善。蓬佩病，或II型糖原貯積病(GSDII)，也稱為酸性麥芽糖酶缺乏癥(AMD),是遺傳性的糖原代謝異常，由受影響個(gè)體的所有組織中溶酶體水解酶酸性cc-糖苷酶活性缺陷引起。酶的缺乏導(dǎo)致許多組織中正常結(jié)構(gòu)的溶酶體內(nèi)糖原的累積。這種累積最顯著的特征是心肌、骨骼肌和嬰兒的肝臟組織的廣泛異常。在遲發(fā)型GSDII中，溶酶體內(nèi)糖原的累積事實(shí)上僅限于骨骼肌，且程度較輕。提示診斷的肌電圖異常包括假性肌強(qiáng)直性放電和興奮性增強(qiáng)，但在青少年和成年發(fā)病的患者中，這種異?？稍诓煌募∪饨M織中不同。CAT掃描可以顯示受影響的肌肉的位置。大多數(shù)患者血漿中肌酸激酶(CK)升高，肝的酶升高，尤其見于成年發(fā)病的患者。存在幾種自然發(fā)生的嬰兒期發(fā)病和遲發(fā)型動(dòng)物模型。存在基因敲除小鼠模型[BijvoetAGetal.,Hum.Mol.Genet.(1998);7:53-62.]。酶治療的改善作用被描述于基因敲除小鼠模型[Raben,Netal.,Mol.Genet.Metab.(2003);80:159-69]和鵪鶉模型中。腦室內(nèi)輸注缺陷的LSD酶導(dǎo)致腦和潛在受影響的器官(非-CNS)代謝狀態(tài)改善。神經(jīng)元蠟樣褐脂質(zhì)沉積癥(NCL)是一組神經(jīng)變性疾病，通過在腦和其他組織有自發(fā)熒光物質(zhì)("老化色素")的沉積區(qū)別于其他神經(jīng)變性疾病。主要臨床特征包括癲癇發(fā)作、精神運(yùn)動(dòng)退化、失明和早年死亡。NCL的不同亞型已經(jīng)被識(shí)別，其在癥狀出現(xiàn)的年齡和電子顯微鏡顯示儲(chǔ)存物質(zhì)的出現(xiàn)上不同。三種主要類型-嬰兒型(INCL)、典型的嬰兒晚期(LINCL)和青少年型(JNCL，也稱為巴藤病)分別由CLN1、CLN2和CLN3基因的常染色體隱性突變引起。CLNl(軟脂酰蛋白硫酯酶)禾口CLN2(三肽基肽酶或肽酶(pepinase))基因的蛋白產(chǎn)物為可溶性的溶酶體酶，然而CLN3蛋白(巴藤素(battenin))為溶酶體膜蛋白，CLN5蛋白亦同(暫時(shí)的)。在幾種形式的NCL中鑒定編碼溶酶體蛋白基因突變可以識(shí)別褐脂質(zhì)沉積癥是真性溶酶體貯積病。根據(jù)本發(fā)明，NCL的任何一個(gè)亞型均可治療。關(guān)于NCL疾病詳細(xì)的論述可能于OnlineMetabolic&MolecularBasesofInheritedDiseases,Part16，Chapter154(2007)中找到。自然發(fā)生的NCL疾病被描述于綿羊、狗和靶向破壞某相關(guān)小鼠基因而衍生的小鼠模型[參見例如Katz,MLetal.,J.Ne畫ci.Res.(1999);57:551-6;Cho,SKetal.,Glycobiology(2005);15:637-48.]。腦室內(nèi)輸注缺陷的LSD酶可使腦和可能受影響的的臟器(非CNS)的代謝狀態(tài)改善。公開在表l中的其他溶酶體貯積癥的詳細(xì)論述見，其中腦室內(nèi)輸注缺陷的LSD酶，可能在OnlineMetabolic&MolecularBasesofInheritedDiseases,Part16，(2007)中找到。上述內(nèi)容大致公開了本發(fā)明。本文列出的所有參考文獻(xiàn)均通過引用整合。更全面的了解可參照以下特定實(shí)施例獲得，實(shí)施例僅供說明之用，并不意味著限定發(fā)明的范圍。實(shí)施例1動(dòng)物模型ASMKO小鼠是被認(rèn)可的A和B型尼曼-匹克病動(dòng)物模型(Horinouchietal.(1995)Nat.Genetics,10:288-293;Jinetal.(2002)J.Clin.Invest.,109:1183-1191;和Otterbach(1995)Cell,81:1053-1061)。尼曼-匹克病(NPD)被歸類于溶酶體貯積癥，為遺傳性的神經(jīng)代謝異常，特征是遺傳性的酸性鞘磷脂酶缺陷(ASM;鞘磷脂膽堿磷酸水解酶，EC3丄3.12)。功能性ASM蛋白的缺乏導(dǎo)致整個(gè)腦部神經(jīng)元和祌經(jīng)膠質(zhì)溶酶體內(nèi)鞘磷脂底物的累積。這導(dǎo)致核周體內(nèi)大量膨脹溶酶體的形成，是A型NPD的標(biāo)志性特征和主要的細(xì)胞表型。膨脹溶酶體的存在與正常的細(xì)胞功能的丟失和進(jìn)行性的神經(jīng)變性過程相關(guān)，導(dǎo)致幼童時(shí)期受影響的個(gè)體死亡(TheMetabolicandMolecularBasesofInheritedDiseases,eds.Scriver"a/.，McGraw-Hill,NewYork,2001,pp.3589-3610)。次級(jí)細(xì)胞表型(例如其他代謝異常)也與此疾病相關(guān)，特別是溶酶體分隔中膽固醇的高水平累積。鞘磷脂對(duì)膽固醇有很強(qiáng)的親和性，其導(dǎo)致ASMKO小鼠和患者溶酶體中大量的膽固醇的分離(LeventhalWd(2001)J.Biol.Chem.,276:44976-44983;Slotte(1997)Subcell.Biochem.，28:277-293;和VianaWa/.(1990)J.Med.Genet"27:499-504.)。實(shí)施例2"ASMKO小鼠中rhASM的連續(xù)性腦室內(nèi)輸注"目的測(cè)定腦室內(nèi)輸注重組人ASM(rhASM)對(duì)ASMKO小鼠腦中的貯積病理(即鞘磷脂和膽固醇貯積)有何種影響。方法通過腦功能定位向12到13周齡間的的ASMKO小鼠移植留置導(dǎo)管。14周齡時(shí)通過使用與泵連接的輸注探針(安裝在導(dǎo)管內(nèi))每隔24h向小鼠輸注.250mghASM(n=5)(.01mg/h)，連續(xù)4天(共給藥lmg)。輸注前將凍干的hASM用人造腦脊液(aCSF)溶解。輸注結(jié)束3天后處死小鼠。在處死時(shí)，小鼠被注射過量的戊巴比妥(>150mg/kg)后灌注PBS或413/。多聚甲醛。取下腦、肝、肺和脾進(jìn)行鞘磷脂(SPM)水平分析。在進(jìn)行SPM分析前將腦組織分成5部分(S^前腦，85=后腦；見圖.l)表2.<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>結(jié)果總結(jié)連續(xù)4天以.250mg/24h腦室內(nèi)輸注hASM(共lmg)導(dǎo)致整個(gè)ASMKO腦內(nèi)hASM染色和菲里平(即膽固醇r:存)清除。生物化學(xué)分析顯示腦室內(nèi)輸注hASM也會(huì)導(dǎo)致整個(gè)腦內(nèi)的SPM水平的總體減少。SPM水平降低至野生型(WT)水平。SPM的顯著降低也見于肝臟和脾臟(肺臟中也見下降趨勢(shì))。實(shí)施例3"ASMKO小鼠中hASM的腦室內(nèi)輸注II"目的測(cè)定在6h輸注時(shí)間的最低有效劑量。方法通過腦功能定位向12到13周齡間的ASMKO小鼠移植留置導(dǎo)管。14周齡時(shí)在6小時(shí)周期按以下劑量之一向小鼠輸注hASM:10mg/kg(.250mg;n=12)、3mg/kg(.075mg;n=7)、1mg/kg(.025mg;n=7)、.3mg/kg(.0075mg;11=7)或aCSF(人造腦脊液；n=7)。6h輸注后立即從每個(gè)劑量水平組取兩只小鼠用4%多聚甲醛灌注以獲得腦內(nèi)酶的分布情況(也從這些鼠收集血液來確定血清hASM的水平)。每組剩余的小鼠于輸注后1周處死。來源于這些小鼠的腦、肝和肺組織用于分析SPM水平，同研究(study)05-0208。表3.<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>結(jié)果總結(jié)無論何種劑量，在6h期間內(nèi)向腦室內(nèi)輸注hASM導(dǎo)致整個(gè)腦內(nèi)SPM水平顯著降低。用劑量>.025mg處理的小鼠腦SPM水平降低至野生型水平。臟器SPM水平呈劑量依賴性的顯著降低(但是未至野生型水平)。為支持此發(fā)現(xiàn)，也檢測(cè)了輸注了hASM蛋白的ASMKO小鼠血清中的hASM蛋白水平。組織學(xué)分析顯示腦室內(nèi)給予hASM后hASM蛋白在整個(gè)腦廣泛分布(從Sl到S5)。實(shí)施例4"ASMKO小鼠中rhASM的腦室內(nèi)輸注III"目的測(cè)定(1)6h輸注hASM后(劑量二.025mg)SPM在腦內(nèi)(和脊髓)重新累積所需的時(shí)間；(2)hASM腦室內(nèi)給藥效果是否存在性別差異(先前的試驗(yàn)顯示在肝臟底物的積累存在性別差異，這種現(xiàn)象在腦內(nèi)是否存在還不清楚)。方法通過腦功能定位向12到13周齡間的ASMKO小鼠移植留置導(dǎo)管。14周齡時(shí)在6h期間內(nèi)向小鼠輸注.025mghASM。小鼠腦室內(nèi)輸注hASM后，小鼠在輸注后1周(n=7雄性，7雌性)或2周(n=7雄性，7雌性)或3周(n=7雄性，7雌性)處死。在處死時(shí)，取其腦、脊髓、肝臟和肺用于SPM分析。表4.<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>為用于SPM分析，組織標(biāo)本被準(zhǔn)備。實(shí)施例5"腦室內(nèi)輸注rhASM對(duì)ASMKO小鼠認(rèn)知能力的影響"目的測(cè)定腦室內(nèi)注射rhASM是否減輕ASMKO小鼠疾病導(dǎo)致的認(rèn)知缺陷。方法通過腦功能定位向9到10周齡間的ASMKO小鼠移植留置導(dǎo)管。13周齡時(shí)在6小時(shí)期間內(nèi)向小鼠輸注.025mghASM。在14和16周齡時(shí)，用Barnes迷宮對(duì)小鼠進(jìn)行認(rèn)知能力測(cè)驗(yàn)。實(shí)施例6"腦室內(nèi)輸注后hASM蛋白在ASMKO小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的分布"目的測(cè)定腦室內(nèi)輸注hASM后ASMKO小鼠腦和脊髓內(nèi)hASM蛋白(作為時(shí)間功能)的分布。方法通過腦功能定位向12到13周齡間的ASMKO小鼠移植留置導(dǎo)管。14周齡時(shí)在6h期間內(nèi)向小鼠輸注.025mghASM。輸注程序后立刻處死小鼠或于1周、2周或3周后處死。表5.顯示了可與用于治療如表1中所示的酶在其中缺陷的疾病的特定酶使用的輸注時(shí)間。輸注時(shí)間<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>參考文獻(xiàn)所引用的每個(gè)參考文獻(xiàn)均清楚的整合與此。1)BelichenkoPV，DicksonPI，PassageM,JunglesS,MobleyWC,KakkisED.Penetration,diffusion,anduptakeofrecombinanthumanalpha-1-iduronidaseafterintraventricularinjectionintotheratbrain.MolGenetMetab.2005;86(1-2》141-9.2)KakkisE,McEnteeM,VoglerC，LeS,LevyB,BelichenkoP，MobleyW，DicksonP,HansonS,PassageM.IntrathecalenzymereplacementtherapyreduceslysosomalstorageinthebrainandmeningesofthecaninemodelofMPSI.MolGenetMetab.2004;83(1-2):163-74.3)BembiB,CianaG,ZanattaM,etal.Cerebrospinal-fluidinfusionofalgluceraseinthetreatmentforacuteneuronopathicGaucher'sdisease.PediatrRes1995;38:A425.4)LonserRR,WalbridgeS，MurrayGJ,AizenbergMR，VortmeyerAO,AertsJM，BradyRO,OldfieldEH.ConvectionperfusionofglucocerebrosidaseforneuronopathicGaucher'sdisease.AnnNeurol.2005Apr;57(4):542-8.權(quán)利要求1、治療A或B型尼曼-匹克病患者的方法，包括下述步驟經(jīng)由腦室內(nèi)輸注向患者腦內(nèi)給予足以降低所述腦內(nèi)鞘磷脂水平的酸性鞘磷脂酶。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中給予的量足以降低患者肝臟中的鞘磷脂水平。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中給予的量足以降低患者肺臟中的鞘磷脂水平。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中給予的量足以降低患者脾臟中的鞘磷脂水平。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中給予的量足以降低患者腎臟中的鞘磷脂水平。6、根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的方法，其中給予的量足以將患者腦內(nèi)的鞘磷脂水平降低至少10%。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中給予的量足以將患者腦內(nèi)的鞘磷脂水平降低至少20%。8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中給予的量足以將患者腦內(nèi)的鞘磷脂水平降低至少30%。9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中給予的量足以將患者腦內(nèi)的鞘磷脂水平降低至少40%。10、根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中給予的量足以將患者腦內(nèi)的鞘磷脂水平降低至少50%。11、根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中給予的量足以將患者腦內(nèi)的鞘磷脂水平降低至少60%。12、根據(jù)權(quán)利要求l-ll任一項(xiàng)所述的方法，其中給藥步驟使用泵。13、根據(jù)權(quán)利要求1-12任一項(xiàng)所述的方法，其中酸性鞘磷脂酶通過留置導(dǎo)管給藥。14、根據(jù)權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)所述的方法，其中對(duì)患者體內(nèi)的鞘磷脂水平進(jìn)行監(jiān)測(cè)，并根據(jù)測(cè)定的鞘磷脂水平給予額外的酸性鞘磷脂酶。15、根據(jù)權(quán)利要求l-14任一項(xiàng)所述的方法，其中酸性鞘磷脂酶是人酸性鞘磷脂酶。16、根據(jù)權(quán)利要求l-14任一項(xiàng)所述的方法，其中酸性鞘磷脂酶與SEQIDNO:1所示的酸性鞘磷脂酶分享至少95%的氨基酸序列同一性。17、根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中酸性鞘磷脂酶與SEQIDNO:1所示的酸性鞘磷脂酶分享至少96%的氨基酸序列同一性。18、根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中酸性鞘磷脂酶與SEQIDNO:1所示的酸性鞘磷脂酶分享至少97%的氨基酸序列同一性。19、根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中酸性鞘磷脂酶與SEQIDNO:1所示的酸性鞘磷脂酶分享至少98%的氨基酸序列同一性。20、根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中酸性鞘磷脂酶與SEQIDNO:1所示的酸性鞘磷脂酶分享至少99%的氨基酸序列同一性。21、根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中酸性鞘磷脂酶的序列是如SEQIDNO:1所示的序列。22、根據(jù)權(quán)利要求1-21任一項(xiàng)所述的方法，其中給藥步驟包括多次輸注。23、根據(jù)權(quán)利要求1-21任何一項(xiàng)所述的方法，其中給予單次劑量的步驟以使單次劑量給藥耗時(shí)多于4小時(shí)的速率進(jìn)行。24、根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中給予單次劑量的步驟以使單次劑量給藥耗時(shí)多于5小時(shí)的速率進(jìn)行。25、根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中給予單次劑量的步驟以使單次劑量給藥耗時(shí)多于6小時(shí)的速率進(jìn)行。26、根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中給予單次劑量的步驟以使單次劑量給藥耗時(shí)多于7小時(shí)的速率進(jìn)行。27、根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中給予單次劑量的步驟以使單次劑量給藥耗時(shí)多于8小時(shí)的速率進(jìn)行。28、用于治療A或B型尼曼-匹克病患者的試劑盒，其包括酸性鞘磷脂酶；和向患者腦室輸注所述酸性鞘磷脂酶的導(dǎo)管。29、用于治療A或B型尼曼-匹克病患者的試劑盒，其包括酸性鞘磷脂酶；和向患者腦室輸注所述酸性鞘磷脂酶的泵。30、根據(jù)權(quán)利要求28所述的試劑盒，進(jìn)一歩包括向患者腦室輸注所述酸性鞘磷脂酶的泵。31、根據(jù)權(quán)利要求28或29所述的試劑盒，其中酸性鞘磷脂酶是人酸性鞘磷脂酶。32、根據(jù)權(quán)利要求28或29所述的試劑盒，其中酸性鞘磷脂酶與SEQIDNO:1所示的酸性鞘磷脂酶分享至少95%的氨基酸序列同一性。33、根據(jù)權(quán)利要求28或29所述的試劑盒，其中酸性鞘磷脂酶與SEQIDNO:1所示的酸性鞘磷脂酶分享至少96%的氨基酸序列同一性。34、根據(jù)權(quán)利要求28或29所述的試劑盒，其中酸性鞘磷脂酶與SEQIDNO:1所示的酸性鞘磷脂酶分享至少97%的氨基酸序列同一性。35、根據(jù)權(quán)利要求28或29所述的試劑盒，其中酸性鞘磷脂酶與SEQIDNO:1所示的酸性鞘磷脂酶分享至少98%的氨基酸序列同一性。36、根據(jù)權(quán)利要求28或29所述的試劑盒，其中酸性鞘磷脂酶與SEQIDNO:1所示的酸性鞘磷脂酶分享至少99%的氨基酸序列同一性。37、根據(jù)權(quán)利要求28或29所述的試劑盒，其中酸性鞘磷脂酶序列是如SEQIDNO:l所示的序列。38、治療患有由于酶缺陷引起的溶酶體貯積癥的患者的方法，該方法包括通過腦室內(nèi)輸注向患者腦部給予酶。39、根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法，其中酶缺陷導(dǎo)致酶底物的累積且給藥后所述腦中的底物水平降低。40、根據(jù)權(quán)利要求38-40任一項(xiàng)所述的方法，其中溶酶體貯積癥為A型尼曼-匹克病，酶為鞘磷脂酶。41、根據(jù)權(quán)利要求38-40任一項(xiàng)所述的方法，其中溶酶體貯積癥為B型尼曼-匹克病，酶為鞘磷脂酶。42、根據(jù)權(quán)利要求38-40任一項(xiàng)所述的方法，其中溶酶體C積癥是I型粘多糖IC積癥綜合癥，酶是cx-L-艾杜糖醛酸酶。43、根據(jù)權(quán)利要求38-40任一項(xiàng)所述的方法，其中溶酶體ie積癥是II型粘多糖IC積癥綜合癥，酶是艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶。44、根據(jù)權(quán)利要求38-40任一項(xiàng)所述的方法，其中溶酶體貯積癥為戈謝病，酶為葡糖腦苷脂酶。45、根據(jù)權(quán)利要求38-40任一項(xiàng)所述的方法，其中溶酶體貯積癥為蓬佩病，酶為a-葡糖苷酶。46、根據(jù)權(quán)利要求38-40任一項(xiàng)所述的方法，其中溶酶體貯積癥為典型嬰兒后期巴藤病(CLN2)，酶為三肽基肽酶。47、根據(jù)權(quán)利要求38-46任一項(xiàng)所述的方法，其中以使單次劑量給藥耗時(shí)多于4小時(shí)的速率給予酶。48、根據(jù)權(quán)利要求47所述的方法，其中速率為使單次劑量給藥耗時(shí)多于5小時(shí)。49、根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中速率為使單次劑量給藥耗時(shí)多于6小時(shí)。50、根據(jù)權(quán)利要求49所述的方法，其中速率為使單次劑量給藥耗時(shí)多于7小時(shí)。51、根據(jù)權(quán)利要求50所述的方法，其中速率為使單次劑量給藥耗時(shí)多于8小時(shí)。52、酶在制備預(yù)防或治療患者中溶酶體貯積癥的藥物中的用途，該疾病由患者體內(nèi)酶的缺陷引起，其中所述的治療或預(yù)防包括腦室內(nèi)給予酶。53、根據(jù)權(quán)利要求52所述的用途，其中缺陷導(dǎo)致酶底物的累積且給予該酶導(dǎo)致腦內(nèi)底物水平降低。54、根據(jù)權(quán)利要求52或53所述的用途，其中缺陷導(dǎo)致酶底物的累積且給予該酶導(dǎo)致腦和一個(gè)或多個(gè)臟器內(nèi)底物水平降低。55、根據(jù)權(quán)利要求52-54任一項(xiàng)所述的用途，其中酶是溶酶體水解酶。56、根據(jù)權(quán)利要求52-55任一項(xiàng)所述的用途，其中溶酶體貯積癥是一種在表1中鑒定的疾病。57、根據(jù)權(quán)利要求56所述的用途，其中疾病選自A型尼曼-匹克病、B型尼曼-匹克病、I型粘多糖貯積病綜合癥、II型粘多糖貯積病綜合癥、戈謝病、蓬佩病或典型嬰兒晚期巴藤病(CLN2)。58、根據(jù)權(quán)利要求52-57任一項(xiàng)所述的用途，其中以給藥耗時(shí)多于4小時(shí)、優(yōu)選多于5小時(shí)、更優(yōu)選多于6小時(shí)、更優(yōu)選多于7小時(shí)、最優(yōu)選多于8小時(shí)的速率給予單次劑量的酶。59、根據(jù)權(quán)利要求52-58任一項(xiàng)所述的用途，其中所述的治療或預(yù)防包括向腦的側(cè)腦室和/或第四腦室給予該酶。60、用于治療或預(yù)防由溶酶體酶缺陷引起的溶酶體貯積癥的試劑盒，所述試劑盒包括酶和特別適應(yīng)腦室內(nèi)給予酶的導(dǎo)管和/或泵。61、根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其中酶是溶酶體水解酶。全文摘要采用腦室內(nèi)輸注疾病病因上所缺陷的酶能夠成功地治療溶酶體貯積癥。慢速輸注可以達(dá)到最大的效應(yīng)。令人驚訝的是，血腦屏障兩側(cè)都能觀察到效應(yīng)，這使它成為影響大腦和臟器的溶酶體貯積癥的理想的輸注方法。文檔編號(hào)A61F2/00GK101431960SQ200780006925公開日2009年5月13日申請(qǐng)日期2007年1月22日優(yōu)先權(quán)日2006年1月20日發(fā)明者J·道奇,L·謝哈布丁,M·帕西尼,S·鄭申請(qǐng)人:建新公司