專利名稱：：與胰高血糖素受體抗體相關的組合物和方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及與胰高血糖素受體抗體相關的組合物和方法
背景技術：
：胰高血糖素是胰a細胞中由激素原轉化酶2的細胞特異表達從其原型加工而成的29氨基酸激素(Furuta等，J.Biol.Chem.276:27197-27202(2001))。在禁食情況下，胰高血糖素分泌增加以響應葡萄糖水平的降低。增加的胰高血糖素分泌通過促進肝糖原分解和葡萄糖異生刺激葡萄糖生產。因此胰高血糖素平衡了胰島素在維持動物正常葡萄糖水平中的作用。胰高血糖素受體(GCGR)是G蛋白偶聯受體(GCGR)促胰液素亞族(B族)的成員。胰高血糖素受體主要在肝(其可調節(jié)肝葡萄糖輸出)和腎(反應其在葡萄糖異生中的作用)表達。胰高血糖素受體在肝臟中的活化刺激腺普酸環(huán)化酶的活性和磷酸肌醇轉活，其可接著引起葡萄糖異生酶表達增加，包括磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)、果糖-l,6-二磷酸酶(FBPase-l)和葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)。此外，胰高血糖素信號可活化糖原磷酸化酶并抑制糖原合成酶。研究顯示更高的基礎胰高血糖素水平和食后胰高血糖素分泌抑制缺乏可促成人糖尿病病癥(Muller等，NEngJMed283:109-115(1970))。耙向胰高血糖素產生或功能可為控制和降低血糖的方法。持續(xù)需要提供n型糖尿病的有效療法。本發(fā)明通過提供治療n型糖尿病和相關疾病的新穎組合物和方法解決了這一需要。發(fā)明概述一方面，本發(fā)明提供了分離的抗原結合蛋白，其包含以下之一a.包含選自以下序列的輕鏈CDR3:i.與選自L1-L23的輕鏈CDR3序列(SEQIDNOs:72;74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97、100)相差總共不超過三個氨基酸添加、替換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；ii.LQX21NSX22PLT(SEQIDNO:208)，iii.QAWDSX23TVX24(SEQIDNO:209);和b.包含選自以下序列的重鏈CDR3序列:i.與選自H1畫H23的重鏈CDR3序列(SEQIDNO:165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199)相差總共不超過四個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDR3序列；ii.EX25X26X27YDILTGYX28X29YYGX30DV(SEQIDNO:210)iii.X31GGGFDY(SEQIDNO:211);或c.(a)的輕鏈CDR3序列和(b)的重鏈CDR3序列；其中X21為組氨酸殘基或谷氨酰胺殘基，X22為天冬酰胺殘基、天冬氨酸殘基或酪氨酸殘基，X23為天冬酰胺殘基或絲氨酸殘基，X24為異亮氨酸殘基或纈氨酸殘基，X25為賴氨酸殘基、谷氨酸殘基或脯氨酸殘基，X26為天冬氨酸殘基、蘇氨酸殘基、谷氨酰胺殘基或脯氨酸殘基，X27為組氨酸殘基或酪氨酸殘基,X28為天冬酰胺殘基、組氨酸殘基、天冬氨酸殘基或苯丙氨酸殘基，X29為酪氨酸殘基、組氨酸殘基或天冬酰胺殘基，X3o為亮氨酸殘基或甲硫氨酸殘基，x^為亮氨酸殘基或曱硫氨酸殘基，其中所述抗原結合蛋白與人胰高血糖素受體特異性結合。另一方面，該分離的結合蛋白進一步包括選自以下的氨基酸序列a.選自以下的輕鏈CDR1序列:i.與L1-L23CDR序列(SEQIDNOs:10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41)相差不超過三個氨基酸添加、替換和/或缺失的輕鏈CDRl;ii.RSXiQSLLDX2X3DGTYTLD(SEQIDNO:200);iii.RASQX4IRNDX5G(SEQIDNO:201);以及iv.SGDKLGDKYX6C(SEQIDNO:202);其中Xi為絲氨酸殘基或蘇氨酸殘基，X2為精氨酸殘基或絲氨酸殘基，X3為天冬氨酸殘基或丙氨酸殘基，X4為甘氨酸殘基或天冬氨酸殘基，X5為亮氨酸殘基或苯丙氨酸殘基，X6為纈氨酸殘基或丙氨酸殘基,b.選自以下的輕鏈CDR2序列i.與L1-L23的CDR2序列(SEQIDNOs:43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70)ii相差不超過兩個氨基酸添加、替換和/或缺失的輕鏈CDR2;ii.AASSLX9S(SEQIDNO:204);和iii.QX10XuKRPS(SEQIDNO:205);其中X9為谷氨酰胺殘基或谷氨酸殘基，X1()為絲氨酸殘基或蘇氨酸殘基，Xn為蘇氨酸殘基或絲氨酸殘基；c.選自以下的重鏈CDR1序列i.與H1-H23的CDRl序列(SEQIDNOs:102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122)相差不超過兩個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDRl,ii.X7YX8MH(SEQIDNO:203),其中X7為絲氨酸殘基或蘇氨酸殘基，X8為甘氨酸殘基或天冬氨酸殘基；以及d.選自以下的重鏈CDR2:與H1-H23的CDR2序列(SEQIDNOs:124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和63)相差不超過三個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDR2;ii.X121WX13DGSX14KYYX15DSVKG(SEQIDNO:206);以及iii.X161SX17DGSX18KYX19X20DSVKG(SEQIDNO:207);其中X12為絲氨酸殘基、苯丙氨酸殘基、纈氨酸殘基或谷氨酸殘基，X13為酪氨酸殘基或天冬酰胺殘基，X14為天冬酰胺殘基或谷氨酸殘基，X15為纈氨酸殘基或丙氨酸殘基，X16為纈氨酸殘基或苯丙氨酸殘基，X17為組氨酸殘基或天冬氨酸殘基或酪氨酸殘基，X^為天冬氨酸殘基、天冬酰胺殘基或組氨酸殘基，Xw為酪氨酸殘基或絲氨酸殘基，X2o為丙氨酸殘基或甘氨酸殘基,其中所述抗原結合蛋白與人胰高血糖素受體特異性結合。在另一方面，該分離的結合蛋白包括選自以下的氨基酸序列a.與L1-L23的CDRl序列(SEQIDNOs:10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41)相差不超過兩個氨基酸添加、替換和/或缺失的輕鏈CDRl;b,與L1-L23的CDR2序列(SEQIDNOs:43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70)相差不超過一個氨基酸添加、替換和/或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與L1國L23的CDR3序歹'J(SEQIDNOs:72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100)相差不超過兩個氨基酸添加、替換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.與H1-H23的CDR1序列(SEQIDNOs:102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122)相差不超過一個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDRl序列；e.與H1-H23的CDR2序列(SEQIDNOs:124、126、128、130、132、134、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163)相差不超過兩個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDR2序列；以及f.與H1國H23的CDR3序列(SEQIDNOs:165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、和199)相差不超過三個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDR3序列，其中所述抗原結合蛋白與人胰高血糖素受體特異性結合。在另一方面，該分離結合蛋白包含選自以下的氨基酸序列a.與L1國L23的CDR序列(SEQIDNOs:10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41)相差不超過一個氨基酸添加、替換和/或缺失的輕鏈CDR1序列；b.L1-L23的輕鏈CDR2序列，SEQIDNOs:43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70;c.與L1-L23的CDR3序列(SEQIDNOs:72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100)相差不超過一個氨基酸添加、替換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.H1-H23的重鏈CDR1序列，SEQIDNOs:102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122;e.與H1曙H23的CDR2序列(SEQIDNOs:124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163)相差不超過一個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和f.與H1-H23的CDR3序列(SEQIDNOs:165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199)相差不超過兩個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDR3序列，其中所述抗原結合蛋白與胰高血糖素受體特異性結合。在另一方面，該分離的結合蛋白包含選自以下的氨基酸序列a.L1-L23的輕鏈CDR1序列，SEQIDNOs:10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41;b.L1國L23的輕鏈CDR3序列，SEQIDNOs:72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100;c.H1-H23的重鏈CDR2序列，SEQIDNOs:124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163;和d.與H1-H23的CDR3序列(SEQIDNOs:165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199)相差不超過一個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDR3序列，其中所述抗原結合蛋白與胰高血糖素受體特異性結合。在又另一方面，該分離的結合蛋白包含選自以下的氨基酸序列a.H1曙H23的重鏈CDR3序列，SEQIDNOs:165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199,其中所述抗原結合蛋白與胰高血糖素受體特異性結合。在另一方面，該分離的結合蛋白包含選自以下的兩個氨基酸序列a.與L1-L23的CDR1序列(SEQIDNOs:10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41)相差不超過三個氨基酸添加、替換和/或缺失的輕鏈CDRl序列；b.與L1-L23的CDR2序列(SEQIDNOs:43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70)相差不超過兩個氨基酸添加、替換和/或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與L1-L23的CDR3序列(SEQIDNOs:72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100)相差不超過三個氨基酸添加、替換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.與H1-H23的CDR1序列(SEQIDNOs:102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122)相差不超過兩個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDR1序列；e.與H1-H23的CDR2序列(SEQIDNOs:124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163)相差不超過三個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和f.與H1-H23的CDR3序列(SEQIDNOs:165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199)相差不超過四個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDR3序列，其中所述抗原結合蛋白與胰高血糖素受體特異性結合。在另一方面，該分離的結合蛋白包含選自以下的三個氨基酸序列a.與L1-L23的CDR1序列(SEQIDNOs:10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41)相差不超過三個氨基酸添加、替換和/或缺失的輕鏈CDR1序列；b.與L1-L23的CDR2序列(SEQIDNOs:43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70)相差不超過兩個氨基酸添加、替換和/或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與L1-L23的CDR3序列(SEQIDNOs:72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100)相差不超過三個氨基酸添14加、替換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.與H1-H23的CDR1序列(SEQIDNOs:102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122)相差不超過兩個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDR1序列；e.與H1畫H23的CDR2序列(SEQIDNOs:124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163)相差不超過三個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和f.與H1-H23的CDR3序列(SEQIDNOs:165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199)相差不超過四個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDR3序列，其中所述抗原結合蛋白與胰高血糖素受體特異性結合。在另一方面，該分離的結合蛋白包含選自以下的四個氨基酸序列a.與L1-L23的CDR1序列(SEQIDNOs:10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41)相差不超過三個氨基酸添加、替換和/或缺失的輕鏈CDR1序列；b.與L1-L23的CDR2序歹寸(SEQIDNOs:43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70)相差最多不超過兩個氨基酸添加、替換和/或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與L1-L23的CDR3序列(SEQIDNOs:72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100)相差不超過三個氨基酸添加、替換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.與H1-H23的CDR1序列(SEQIDNOs:102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122)相差不超過兩個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDR1序列；e.與H1-H23的CDR2序列(SEQIDNOs:124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163)相差不超過三個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和f.與H1-H23的CDR3序列(SEQIDNOs:165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199)相差最多不超過四個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDR3序列，其中所述抗原結合蛋白與胰高血糖素受體特異性結合。在另一方面，該分離的結合蛋白包含選自以下的五個氨基酸序列a.與L1-L23的CDR1序列(SEQIDNOs:10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41)相差不超過三個氨基酸添加、替換和/或缺失的輕鏈CDR1序列；b.與L1-L23的CDR2序列(SEGIDNOs:43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70)相差不超過兩個氨基酸添加、替換和/或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與L1-L23的CDR3序歹'J(SEQIDNOs:72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100)相差不超過三個氨基酸添加、替換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.與H1-H23的CDR1序列(SEQIDNOs:102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122)相差不超過兩個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDR1序列；e.與H1畫H23的CDR2序列(SEQIDNOs:124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163)相差不超過三個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和f.與H1-H23的CDR3序列(SEQIDNOs:165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199)相差不超過四個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDR3序列，其中所述抗原結合蛋白與胰高血糖素受體特異性結合。在另一方面，該分離的結合蛋白包含a.與L1-L23的CDR1序列(SEQIDNOs:10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41)相差不超過三個氨基酸添加、替換和/或缺失的輕鏈CDR1序列；b.與L1-L23的CDR2序列(SEQIDNOs:43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70)相差不超過兩個氨基酸添加、替換和/或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與L1-L23的CDR3序歹寸(SEQIDNOs:72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100)相差不超過三個氨基酸添加、替換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d,與H1隱H23的CDR1序列(SEQIDNOs:102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122)相差不超過兩個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDR1序列；e.與H1-H23的CDR2序歹'J(SEQIDNOs:124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163)相差不超過三個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和f.與H1-H23的CDR3序列(SEQIDNOs:165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199)相差不超過四個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDR3序列，其中所述抗原結合蛋白與胰高血糖素受體特異性結合。16在另一方面，該分離抗原結合蛋白包含以下之一a.包含以下的輕鏈可變結構域i.選自SEQIDNOs:10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41的輕鏈CDR1序列；選自SEQIDNOs:43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70的輕鏈CDR2序列；和iii.選自SEQIDNOs:72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100的輕鏈CDR3序列；b.包含以下的重鏈可變結構域i.選自SEQIDNOs:102、104、106、108、111、113、U5、117、118、120和122的重鏈CDR1序列；ii.選自SEQIDNOs:124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163的重鏈CDR2序列;和iii.選自SEQIDNOs:165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199的重鏈CDR3序列；或c.(a)的輕鏈可變結構域和(b)的重鏈可變結構域，其中所述抗原結合蛋白與人胰高血糖素受體特異性結合。在另一方面，該分離的抗原結合蛋白包含選自以下的輕鏈可變結構域i.包含與選自Ll-L23(SEQIDNOs:213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255和257)的輕鏈可變結構域序列具有至少80%同一性的序列的氨基酸；ii.由與編碼Ll-L23(SEQIDNOs:212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254和256)的輕鏈可變結構域序列的多聚核苦酸至少80%同一性的多聚核普酸序列編碼的氨基酸序列；iii.由在中等嚴格條件下與由L1-L23(SEQIDNOs:212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254和256)的輕鏈可變結構域序列組成的多聚核苷酸的互補序列雜交的多聚核苷酸序列編碼的氨基酸序列；b.選自以下的重鏈可變結構域序列i.與H1-H23(SEQIDNOs:259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301和303)的重鏈可變結構域序列至少80%相同的氨基酸序列；ii.由與編碼H1-H23(SEQIDNOs:258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300、17和302)的重鏈可變結構域序列的多聚核苷酸序列至少80%相同的多聚核苷酸序列編碼的氨基酸序列；iii.由可在中等嚴格條件下與由H1-H23(SEQIDNOs:258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300和302)的重鏈可變結構域序列組成的多聚核苷酸的互補序列雜交的多聚核苷酸序列編碼的氨基酸序列；或c.(a)的輕鏈結構域和(b)的重鏈結構域，其中所述抗原結合蛋白與人胰高血糖素受體特異性結合。在一個實施方案中，該分離的抗原結合蛋白包含a.選自L1-L23(SEQIDNOs:213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255和257)的輕鏈可變結構域序列b.選自Hl-H23(SEQIDNOs:259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301和303)的重鏈可變結構域序列；或c，(a)的輕鏈結構域和(b)的重鏈結構域，其中所述抗原結合蛋白與人胰高血糖素受體特異性結合。在另一個實施方案中，該分離的抗原結合蛋白包含選自以下的輕鏈可變結構域和重鏈可變結構域的組合L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、LIOHIO、LllHll、U2H12、L13H13、L14H14、L15H15、L固16、L17H17、L18H18、L19H19、L20腦、L21H21、L22H22和L23H23,其中所述抗原結合蛋白與人胰高血糖素受體特異性結合。在一個實施方案中，該分離的抗原結合蛋白進一步包括SEQIDNO:305的輕鏈恒定序列；SEQIDNO:307的輕鏈恒定序列；SEQIDNO:309的重鏈恒定序列；SEQIDNO:305的輕鏈恒定序列；SEQIDNO:309的重鏈恒定序列；或SEQIDNO:307的輕鏈4艮頂序歹'J以及SEQIDNO:309的重鏈恒定序列。一方面，該分離的抗原結合蛋白選自人類抗體、人源化抗體、嵌合抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、重組抗體、抗原-結合抗體片段、單鏈抗體、雙鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體、Fab片段、F(fa，)x片段、結構域抗體、IgD抗體、IgE抗體、IgM抗體、IgGl抗體、IgG2抗體、IgG3抗體、IgG4抗體和IgG4抗體，其在絞鏈區(qū)至少具有一處可減少形成內H鏈二硫鍵趨勢的突變。在一個實施方案中，該抗原結合蛋白為人類4元體。另一方面，該分離的抗原結合蛋白當與人胰高血糖素受體結合時a.以與參比抗體基本相同的Kd與人胰高血糖素受體結合；b.以與所述參比抗體基本相同的IC5o抑制人胰高血糖素受體的胰高血糖素激活或c.與所述參比抗體竟爭結合，其中所述參比抗體包含選自L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、LllHll、L12H12、L13H13、L15H15、L21H21和L22H22的輕鏈和重鏈可變結構域序列的組合。另一方面，提供了分離的人類抗體，當其與人胰高血糖素受體結合時a.以與參比抗體基本相同的Kd與人胰高血糖素受體結合；b.以與所述參比抗體基本相同的IC5o抑制人胰高血糖素受體的胰高血糖素激活或c.與所述參比抗體竟爭結合，其中所述參比抗體包含選自A-l、A國2、A國3、A國4、A-5、A-6、A畫7、A國8、A-9、A國ll、A-12、A-13、A-15、A-21和A-22的輕鏈和重鏈可變結構域序列的組合。另一方面，提供了分離的人類抗體，當其與人胰高血糖素受體結合時a.特異性結合至人胰高血糖素的Ser80至Serll9;b.以90nM或更低的ICs。值降低胰高血糖素信號傳導；c.降低動物模型的血糖；d.a和b，或e.a、b和c。在一個實施方案中，該動物才莫型為ob/ob動物才莫型。在另一方面，提供了包含該抗原結合蛋白與藥學可接受的載體混合的藥用組合物。在另一個實施方案中，該藥用組合物包含與藥學可接受載體混合的分離的人類抗體。在另一方面，提供了包含編碼本發(fā)明抗原結合蛋白的輕鏈可變結構域、重鏈可變結構域或二者的多聚核香酸的分離的核酸分子。在一個實施方案中，該多聚核苦酸包含輕鏈可變結構域多聚核苦酸序列L1-L23,SEqiDNOs:212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254和256,重鏈可變結構域多聚核苷酸序列Hl-H23，SEQIDNO:258、260、262、264、266、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300、302,或二者。也提供了包含本發(fā)明多聚核苷酸的載體。在一個實施方案中該載體為表達載體。也提供了包含該載體的宿主細胞。也提供了可生產本發(fā)明抗原結合蛋白質的雜交瘤。進一步提供了制備本發(fā)明抗原結合蛋19白的方法，其包括在允許細胞表達本發(fā)明抗原結合蛋白的條件下培養(yǎng)該宿主細月包。也提供了降低受試者血糖的方法，包括給予受試者治療有效量的藥用組合物。也提供了提高受試者葡萄糖耐受的方法，包括給予受試者治療有效量的藥用組合物。也提供了通過給予受試者治療有效量的藥用組合物治療受試者中II型糖尿病和相關病癥的方法。在另一個實施方案中，該相關病癥選自高血糖癥、空腹血糖受損、葡萄糖耐量降低、脂肪代謝障礙和代謝綜合癥。也提供了本發(fā)明藥用組合物在制備用于降低血糖、預防或治療II性糖尿病包括高血糖癥、空腹血糖受損、葡萄糖耐量降低、脂肪代謝障礙和代謝綜合癥的藥物中的應用。附圖簡述圖1顯示了以1或3mg/kg(n=10動物/組)的劑量單次注射抗體A-3或抗體A-4后與注射緩沖液相比14周雄性ob/ob小鼠中的血糖水平。在注射后0以及24、48、96、120、144、192和240小時測量血糖。圖2顯示了以1或3mg/kg(n=10動物/組)的劑量單次注射抗體A-3或抗體A-9后與注射緩沖液相比14周雄性ob/ob小鼠中的血糖水平。在注射后0以及24、72、120、192和240小時測量血糖。圖3顯示了口服葡萄糖耐量試驗(GTT)的結果，顯示了單次皮下注射溶媒(vehicle)和抗體9(A9)之前(GTT1和GTT2)和之后(GTT3、4和5)的曲線下(AUC)葡萄糖水平。圖4顯示了可與標記抗體A-3(可克服(surmountable)抗體)竟爭結合的未標記抗體。圖5顯示了可與標記抗體A-3(部分可克服抗體)部分竟爭結合的未才示"i己抗體。圖6顯示了不可與標記抗體A-3(可克服抗體)竟爭結合的未標記抗體。圖7顯示了四種抗GCGR抗體與構建自人GCGR和人GLP-1受體的嵌合受體的結合研究結果。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及抗原結合蛋白例如可與人胰高血糖素受體(GCGR)特異性結合的抗體。這些包括可抑制或阻斷胰高血糖素與人GCGR結合并降低胰高血糖素經受體信號傳導的抗原結合蛋白。在一個實施方案中提供了包括拮抗性抗體的可降低動物模型血糖的人類抗體。該抗原結合蛋白可用于治療糖尿病和相關疾病。本發(fā)明進一步提供與可特異性結合至人胰高血糖素受體的抗原結合蛋白相關的組合物、試劑盒和方法。也提供了核酸分子及其衍生物和片段，其包含編碼與胰高血糖素受體結合的多肽的全部或部分的多聚核苷酸，例如編碼全部或部分抗胰高血糖素受體抗體、抗體片段或抗體衍生物的核酸。本發(fā)明進一步提供包含該類核酸的載體和質粒以及包含該類核酸和/或載體和質粒的細胞和細胞系。所提供方法包括，例如，制備、鑒定或分離與人GCGR結合的抗原結合蛋白例如抗GCGR抗體的方法，測定該抗原結合蛋白是否與GCGR結合的方法、制備包含與人GCGR結合的抗原結合蛋白的組合物例如藥用組合物的方法，以及將與GCGR結合的抗原結合蛋白給予受試者的方法，治療由GCGR介導的病癥以及體內或體外調節(jié)與胰高血糖素信號傳導相關的生物活性的方法。定義使用標準的單字母或三字母縮寫表明多聚核苷酸和多肽序列。除非另外指明，多肽序列的氨基端在左而它們的羧基端在右，單鏈核酸序列和雙鏈核酸序列的上游鏈的5'端在左而它們的3'端在右。多肽的具體部分可由氨基酸殘基編號表示，例如氨基酸80至119,或由該位點的實際殘基表示例如Ser80至Serl19。也可通過解釋其與參比序列的差異描述具體的多肽或多聚核苷酸序列。具體輕鏈和重鏈可變結構域的多聚核苷酸和多肽可表示為Ll("輕鏈可變結構域1"),Hl("重鏈可變結構域1")。包含輕鏈和重鏈的抗原結合蛋白或抗體可通過結合輕鏈的名稱和重鏈可變結構域的名稱表示。例如，"L4H7"表示包含L4輕鏈可變結構域和H7重鏈可變結構域的抗體。除非本文另外定義，與本文相關的科學和技術術語應具有本領域普通技術人員所理解的含義。進一步，除非上下文另有要求，單數術語應包括復數并且復數含義術語應包括單數含義。通常，與本文所述細胞和組織培養(yǎng)、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學和蛋白質核酸化學以及雜交相關的命名法和技術為本領域熟知和經常使用的。本發(fā)明的方法和技術通常根據本領域已知的常規(guī)方法以及本說明書引用和討論的各種普通和更具體的參考文獻所描述的進行，除非另外說明。參見，例如,Sambrook等,MolecularCloning:ALaboratoryManual,第2版.，ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.(1989)和Ausubel等，CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePublishingAssociates(1992),以及HarlowandLaneAntibodies:ALaboratoryManualColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.(19卯)，均以參考形式并于本文。酶反應和純化技術根據操作說明進行，如本領域通常完成或本文所述。與本文描述的分析化學、合成有機化學和醫(yī)學和藥學化學相關的術語學以及實驗操作和技術均為本領域熟知和普遍使用者。標準技術可用于化學合成、化學分析、藥物制備、制劑和給藥以及患者的治療。以下術語，除非另外指明，應理解為具有以下含義術語"分離的分子"(其中所述分子為例如多肽、多聚核苷酸或抗體)為就其來源或衍生源而言(1)與在天然狀態(tài)下與其相伴的天然相關組分分離，(2)基本與同種的其它分子游離(3)由不同種細胞表達或(4)不天然存在。因此，化學合成或由與其天然來源的細胞不同的細胞體系表達的分子將與天然相關組分"分離"。也可使用本領域已知的純化技術通過分離使分子基本與其天然相關組分游離。例如，可使用聚丙烯酰胺凝膠電泳測定多肽樣品的純度并使用本領域熟知的技術將凝膠染色以觀察該多肽。對于某些目的，可使用HPLC或其它本領域熟知的純化方法提供更高的分辨率。術語"胰高血糖素抑制劑"和"胰高血糖素拮抗劑"可交替使用。均為可檢測地抑制胰高血糖素信號傳導的分子。由抑制劑引起的抑制不需為完全抑制只要可使用測定法檢測。例如，下文實施例4中描述的基于細胞的測定法顯示了可用于測定胰高血糖素信號傳導抑制的測定法。術語"肽"、"多肽，，和"蛋白"均指包含兩個或多個通過肽鍵相互連接的氨基酸的分子。這些術語涵蓋例如天然和人工蛋白、蛋白片段和蛋白序列的多肽類似物(例如突變蛋白、變異體和融合蛋白)22以及轉錄后或否則為共價或非共價修飾的蛋白。肽、多肽或蛋白可為單體或多聚體。如本文使用的術語"多肽片段"指與對應的全長蛋白相比具有氨基端和/或羧基端缺失的多肽。片段長度可為例如至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、50、70、80、90、100、150或200個氨基酸。片段長度可為例如最多1000、750、500、250、200、175、150、125、100、90、80、70、60、50、40、30、20、15、14、13、12、11或IO個氨基酸。片段可在其一端或兩端進一步包含一個或多個附加氨基酸，例如，來自不同天然蛋白質的氨基酸序列(例如，Fc或亮氨酸拉鏈結構域)或人工氨基酸序列(例如，人工接頭序列)。本發(fā)明多肽包括以任何原因和經任何方法修飾的多肽，例如，以(1)降低蛋白水解敏感性，(2)降低氧化敏感性，(3)改變形成蛋白復合物的親和性，(4)改變結合親和性以及(4)賦予或修飾其它物理化學或功能性質。類似物包含多肽的突變蛋白。例如，可在天然序列(例如在形成分子內接觸的結構域之外的多肽部分)中進行單個或多個氨基酸替換(例如，保守氨基酸替換)。"保守氨基酸替換"為不顯著改變母體序列結構特性者(例如，替換氨基酸不應破壞母體序列中出現的螺旋或干擾其它賦予母體序列特性或對其功能是必須的二級結構類型)。領域公認的多肽二級和三級結構的實例描述于Proteins,StructuresandMolecularPrinciples(Creighton編輯，W.H.FreemanandCompany,NewYork(1984》；IntroductiontoProteinStructure(C.BrandenandJ.Tooze,eds.,GarlandPublishing,NewYork,N.Y.(1991));和Thornton等,Nature354:105(1991),均以參考形式并于本文。本發(fā)明也提供了GCGR抗原結合蛋白的非肽類似物。非肽類似物普遍用于提供與模板肽具有相似性質的藥物。這些非肽化學物類型被稱作"模擬肽(peptidemimetics)"或"擬肽(peptidomimetics)"。Fauchere,J.Adv.DrugRes.15:29(1986);Veber和FreidingerTINS笫392頁(1985);以及Evans等，J.Med.Chem.30:1229(1987),均以參考形式并于本文。與治療用肽結構相似的模擬肽可用于產生相等的治療或預防效果。通常，擬肽與范例多肽的結構相似(即具有期望生物化學性質或藥理學活性的多肽)，例如人類抗體，但是具有一個或多個任選23被選自—CH2NH.....CH2S.....CH2—CH2—、畫畫CHK:H-(順式和反式)、—COCH2.....CH(OH)CH2—、和—CH2SO—的連接通過本領域熟知的方法取代的肽連接。用相同類型的D-氨基酸系統(tǒng)取代一致序列的一個或多個氨基酸(例如，D-賴氨酸取代L-賴氨酸)也可用于生成更穩(wěn)定的肽。此夕卜，可通過本領域已知的方法(RizoandGieraschAnn.Rev.Biochem.61:387(1992)，以參考形式并于本文)例如通過添加可形成將肽環(huán)化的分子間二硫鍵的內部半胱氨酸殘基生成包含一致序列或基本相同的一致序列變異體的拘束肽(constrainedpeptides)。多肽(例如抗體)的"變異體"包含相對于另一多肽序列在氨基酸序列中插入、缺失和/或替換了一個或多個氨基酸殘基的氨基酸序列。本發(fā)明的變異體包括融合蛋白。多肽的"衍生物"為經化學修飾的多肽(例如，抗體)，例如通過與其它化學部分例如聚乙二醇、白蛋白(例如人血清白蛋白)結合、磷酸化和糖基化。除非另外說明，術語"抗體"包括除包含兩個全長重鏈和兩個全長輕鏈的抗體外的其衍生物、變異體、片段和突變蛋白，其實例見下文。"抗原結合蛋白"為包含與抗原結合部分并任選為允許抗原結合部分采取促進該抗原結合蛋白與該抗原結合的構象的支架或框架部分的蛋白?？乖Y合蛋白的實例包括抗體、抗體片段(例如抗體的抗原結合部分)、抗體書f生物和抗體類似物。該抗原結合蛋白可包含例如可選擇的蛋白支架或具有移植CDRs或CDRs衍生物的人工支架。該支架包括但不限于包含被引入的例如以穩(wěn)定化該抗原結合蛋白的三維結構的抗體衍生支架以及包含例如生物相容性多聚體的全合成支架。參見，侈寸戈口,Korndorfer等，2003,Proteins:Structure,Function,andBioinformatics,Volume53,Issue1:121-129;Roque等，2004,Biotechnol.Prog.20:639-654。此外，可使用模擬肽抗體("PAMs")以及基于模擬抗體的支架，其如支架一樣利用纖維蛋白連接素。抗原結合蛋白可具有例如天然免疫球蛋白的結構。"免疫球蛋白"為四聚體分子。在天然的免疫球蛋白中，各四聚體由兩個相同的多肽鏈對組成，各對具有一個"輕"(約25kDa)和一個"重"鏈(約50-70kDa)。各鏈的氨基端包括約100至110或更多氨基酸的可變結構域，主要與抗原識別相關。各鏈的羧基端部分確定了主要與效應器作用相關的恒定區(qū)。人的輕鏈分為K和X輕鏈。重鏈分為p、3、a或s,并確定了抗原的同種型，例如分別為IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在輕鏈和重鏈中，可變和恒定區(qū)由約12或更多個氨基酸的"J"區(qū)連接，重鏈也包括約10多個氨基酸的"D"區(qū)。參見，FundamentalImmunologyCh.7(Paul,W.,編輯，第2版.RavenPress,N.Y.(1989))(其完整內容以參考形式并于本文用于任何目的)。各輕/重鏈對的可變區(qū)形成抗體結合位點，這樣一個完整的免疫球蛋白具有兩個結合位點。天然免疫球蛋白鏈顯示出由三個高度可變區(qū)連接的相對保守骨架區(qū)(FR)的相同基本結構，也被稱作互補決定區(qū)或CDRs。從N端到C端，輕和重鏈均包含結構域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。各結構域氨基酸的分配與Kabat等在SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版.，USDept.ofHealthandHumanServices,PHS，NIH,NIHPublicationno.91-3242,1991中的定義一致。除非另外指明，"抗體"指完整的免疫球蛋白或其可與完整抗體竟爭特異性結合的抗原結合部分。可由重組DNA技術或通過酶或化學裂解完整抗體生產抗原結合部分?？乖Y合部分包括，尤其是，Fab、Fab'、F(ab，)2、Fv、結構域抗體(dAbs),包括互補決定區(qū)(CDRs)的片段、單鏈抗體(scFv)、嵌合抗體、雙鏈抗體(diabodies)、三鏈抗體(triabodies)、四鏈抗體(tetrabodies)和至少包含足以賦予多肽特異抗原結合的免疫球蛋白的一部分的多肽。Fab片段為具有VL、VH、Cl和CH1結構域的單價片段；F(ab，)2片段為具有兩個在鉸鏈區(qū)由二硫鍵連接的Fab片段的二價片段；Fd片段具有Vh或Vl結枸域；dAb片段具有Vh結構域、VL結構域，或Vh或Vl結構域的抗原結合片段(美國專利號6846634、6696245,美國專利申請公開號05/0202512、04/0202995、04/0038291、04/0009507、03/0039958,Ward等，Nature341:544-546,1989)。單鏈抗體(scFv)為其中的Vl和Vh區(qū)由接頭(例如，合成的氨基酸殘基序列)連接以形成連續(xù)蛋白質的抗體，其中該接頭足夠長以允許該蛋白鏈折疊回自身并形成單價抗原結合位點(參見，例如，Bird等,1988,Science242:423-26andHustonetal.,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-83)。雙鏈抗體為包含兩個多肽鏈的二價抗體，其中各多肽鏈包含由接頭連接的VH和VL結構域，該接頭^f艮短以致于不允許兩25個結構域在相同鏈上的配對，因此允許各結構域與另一多肽鏈上的互補結構域配對(參見，例如，Holliger等，1993,Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-48,和Poljaketal.,1994,Structure2:1121-23)。如果雙鏈抗體的兩個多肽鏈是相同的，那么由它們配對得到的雙鏈抗體將具有相同的抗原結合位點。具有不同序列的多肽鏈可用于制備具有不同抗原結合位點的雙鏈抗體。相似地，三鏈抗體和四鏈抗體分別為包含三個和四個多肽鏈的抗體并分別形成三個和四個抗原結合位點，其可相同或不同。可使用Kabat等在SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版.，USDept.ofHealthandHumanServices,PHS，NIH,NIHPublicationno.91-3242,1991中描述的方法鑒定給定抗體的互補決定區(qū)(CDRs)和骨架區(qū)(FR)?？上蚍肿又泄矁r或非共價并入一個或多個CDRs使其成為抗原結合蛋白?？乖Y合蛋白可以較大多肽鏈并入CDR(s)?？蓪DR(s)共價連接至另一多肽鏈，或非共價并入CDR(s)。CDRs允許抗原結合蛋白與具體的相關抗原特異性結合?？乖Y合蛋白可有一個或多個結合位點。如果多于一個結合位點，該結合位點可與另一個相同或不同。例如，天然人免疫球蛋白通常具有兩個相同的結合位點，而"雙特異性"或"雙功能"抗體具有兩個不同的結合位點。術語"人類抗體"包括具有一個或多個來源于人免疫球蛋白序列的可變和恒定區(qū)的所有抗體。在一個實施方案中，所有的可變和恒定結構域均來源于人免疫球蛋白序列(全人類抗體)?？山浂喾N方法制備這些抗體，其實例描述于下文，包括通過用相關抗原免疫小鼠，該小鼠被基因修飾以表達來源于人重和/或輕鏈編碼基因的抗體。人源化抗體含有與來源于非人種抗原序列具有一個或多個氨基酸替換、缺失和/或添加差異的序列，這樣與非人種抗體相比當給予人受試者時人源化抗體較不會誘導免疫應答，和/或誘導較不嚴重的免疫應答。在一個實施方案中，突變非人種抗原的重和/或輕鏈的骨架和恒定結構域的某些氨基酸以產生人源化抗體。在另一個實施方案中，來自人類抗體的恒定結構域與非人種的可變結構域融合。在另一個實施方案中，改變非人類抗體的一個或多個CDR序列中的一個或多個氨基酸殘基以降低給予人受試者時非人類抗體可能的免疫原性，其中改變的氨基酸殘者對氨基顯著差于非人類抗體與該抗原的結合。如何制備人源化抗體的實例見美國專利號6054297、5886152和5877293。術語"嵌合抗體"指包含來自一種抗體的一個或多個區(qū)域和來自一個或多個其它抗體的一個或多個區(qū)域的抗體。在一個實施方案中，一個或多個CDRs來源于人抗GCGR抗體。在另一實施方案中，所有的CDRs來源于人抗GCGR抗體。在另一個實施方案中，將來自多于一個人抗GCGR抗體的CDRs混合并在嵌合抗體中配對。舉例而言，嵌合抗體可包含來自第一個人抗GCGR抗體輕鏈的CDR1，第二個人抗GCGR抗體輕鏈的CDR2和CDR3,以及第三個人抗GCGR抗體的CDRs。進一步，該骨架區(qū)可來源于相同的抗GCGR抗體之一，來自一個或多個不同的抗體，例如人類抗體或來自人源化抗體。在嵌合抗體的一個實例中，重和/或輕鏈的一部分與來自具體物種的抗體相同、同源或由其衍生，或屬于具體的抗體類別或亞類，而該鏈的剩余部分與來自另一物種的抗體或多個抗體相同、同源或由其衍生，或屬于另一抗體類別或亞類。也包括顯示期望生物學活性(即與人胰高血糖素受體特異性結合的能力)的該類抗體的片段。"中和抗體"或"抑制抗體"指經例如實施例4描述的基于細胞的測定法檢測抑制胰高血糖素與人胰高血糖素受體結合，和/或抑制或降低胰高血糖素信號傳導的抗體。該抑制不需為完全抑制，在一個實施方案中，其可將結合或信號傳導降低至少20%。在進一步的實施方案中，結合或信號傳導至少降低了30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、97%、99%和99.9%。術可輕易制備抗體片段或類似物。優(yōu)選的片段或類似物的氨基和羧基端出現在功能結構域交界的附近?？赏ㄟ^與將核苷酸和/或氨基酸序列數據與公共或專有序列數據庫對比鑒定結構和功能結構域。計算機對比方法可用于鑒定序列基序或預測在其它結構和/或功能已知的蛋白質中出現的蛋白構象結構域。鑒定折疊成已知三維結構的蛋白序列的方法為已知。參見，例如，Bowie等，1991,Science253:164。"CDR移植抗體"為包含一個或多個來源于具體物種或同種型的頃域熟知的技27抗體的CDRs以及相同物種或同種型的另一抗體的骨架的抗體。"多特異性抗體"為可識別一個或多個抗原上的多于一種表位的抗體。該類型抗體的亞類為可識別相同或不同抗原上的兩個不同表位的"雙特異抗體"。包括與抗原"特異性結合"抗體的抗原結合蛋白質，如果以1(T7M或更低(IOOnM或更低)的解離常數(Kd或對應Kb,如下文所述)測定的高結合親和力與抗原結合。與人胰高血糖素受體特異性結合的抗原結合蛋白可與其它物種的胰高血糖素受體以相同或不同的親和力結合。"抗原結合結構域"、"抗原結合區(qū)"或"抗原結合位點"為包含與抗原相互作用的氨基酸殘基(或其它部分)并有助于抗原結合蛋白對抗原的特異性和親和力的抗原結合蛋白質的部分。對與其抗原特異性結合的抗體而言，這將包括至少部分的至少一個其CDR結構域。"表位"為與抗原結合蛋白(例如，通過抗體)結合的分子部分。表位可包含分子的非連續(xù)部分(例如，在多肽中，在多肽的一級序列中不連續(xù)的氨基酸殘基在該多肽的三級和四級結構中相互足夠接近以致于被一個抗原結合蛋白結合)。兩個多聚核苷酸或兩個多肽序列的"相同百分比"由使用GAP計算機程序(GCGWisconsinPackage,version10.3(Accelrys,SanDiego,CA)的一部分)使用其默認參數比較序列測定。術語"多聚核苷酸"、"寡聚核苷酸"和"核酸"可在全文中交替使用并包括DNA分子(例如，cDNA或基因組DNA)、RNA分子(例如mRNA)、使用核苷酸類似物(例如，肽核酸和非天然核苦酸類似物)生成的DNA或RNA類似物及其雜交體。核酸分子可為單鏈或雙鏈。在一個實施方案中，本發(fā)明的核酸分子包含編碼本發(fā)明抗體或其片段、衍生物、突變蛋白或變異體連續(xù)的開放閱讀框。如果它們的序列可反向平行排列則兩個單鏈多聚核苷酸是相互"互補的"，這樣一個多聚核苷酸中的各核苷酸與另一多聚核苷酸中的互補核苷酸相反，不會引入空隙并且各序列的5'或3'端沒有未配對的核香酸。如果兩個多聚核苷酸可在中等嚴格條件下相互雜交那么一個多聚核苷酸與另一多聚核苷酸"互補"。因此，一個多聚核苷酸可與另一多聚核普酸互補，但并不是它的互補序列。28"載體"為可用于將與其相連的另一核酸引入細胞的核酸。載體的一種類型為"質粒"，其指可連接附加核酸區(qū)段的線性或環(huán)狀雙鏈DNA分子。載體的另一類型為病毒載體(例如，復制缺陷逆轉錄病毒、腺病毒和腺病毒伴隨病毒)，其中可將附加DNA區(qū)段引入病毒基因組。某些載體可在它們被引入的宿主細胞中自主復制(例如，包含細菌復制起點的細菌載體以及游離型哺乳動物載體)。其它載體(例如，非游離型哺乳動物載體)在引入宿主細胞時整合入宿主細胞的基因組中并因此與宿主基因組一起復制。"表達載體"為可引導所選多聚核苷酸表達的載體類型。如果調控序列影響核苷酸序列的表達(例如，表達水平、時間或位點)那么核苷酸序列與調控序列"可操作地相連"。"調控序列"為可影響與其可操作相連的核酸的表達(例如，表達水平、時間或位點)的核酸。調控基因，例如，直接對受調控核酸發(fā)揮作用或通過一個或多個其它分子(例如，與調控序列和/或核酸結合的多聚核苷酸)的作用。調控序列的實例包括啟動子、增強子和其它表達控制元件(例如，多腺苷酸化信號)。調控序列的進一步實例描述于例如Goeddel,1990,GeneExpressionTechnology:MethodsinEnzymology185,AcademicPress,SanDiego,CAandBaronetal.,1995,NucleicAcidsRes.23:3605-06。"宿主細胞"為用于表達核酸例如本發(fā)明核酸的細胞。宿主細胞可為原核生物，例如大腸桿菌，或者其可為真核生物，例如單細胞真核生物(例如，酵母或其它真菌)、植物細胞(例如煙草或番茄植物細胞)、動物細胞(例如，人細胞、猴細胞、倉鼠細胞、大鼠細胞、小鼠細胞或昆蟲細胞)或雜交瘤。通常，宿主細胞為可用多肽編碼核酸轉化或轉染的培養(yǎng)細胞，其可接著在宿主細胞中表達。短語"重組宿主細胞"可用于表述用預期表達的核酸轉化或轉染的宿主細胞。宿主細胞也可為包含該核酸但是不以期望水平表達的細胞，除非向該宿主細胞引入了調控序列這樣其與核酸可操作地相連。應理解的是術語宿主細胞不僅指具體的受試者細胞也指該細胞的子代或可能的子代。由于例如突變或環(huán)境影響后續(xù)世代會出現某些修飾，該子代事實上可能與母體細胞不同但是仍然屬于本文使用的術語范圍。胰高血糖素受體胰高血糖素受體(GCGR)屬于7-跨膜受體家族，其通過異源三聚體鳥。票呤核苷酸結合蛋白(G蛋白)與一個或多個胞內信號傳導途徑偶聯(Jelinek等，Science259:1614-1616(1993),Segreetal.,TrendsEndocrinol.Metab4:309-314(1993))。如本文所使用"胰高血糖素受體"和"GCGR，，可交替使用。這一家族的其它成員包括胰泌素、胰高血糖素樣肽(GLP-1)、血管活性腸肽(VIP)和生長激素釋放因子的受體。這些受體具有高度同源的結構特點包括相對較大的胞外N端結構域以及一系列的跨膜、胞內和胞外結構域。在一個實施方案中，可選擇本發(fā)明的抗原結合劑結合表達于細胞上的膜結合胰高血糖素受體并通過胰高血糖素受體抑制或阻斷胰高血糖素信號傳導。在一個實施方案中，本發(fā)明的抗原結合劑與人胰高血糖素受體特異性結合。在進一步的實施方案中，與人胰高血糖素受體結合的抗原結合蛋白也可與其它物種的胰高血糖素受體結合。下文中的實施例提供生成與人膜結合胰高血糖素受體結合的全人類抗體，在進一步的實施方案中與其它物種的胰高血糖素受體結合。已知數個物種的胰高血糖素受體的多聚核苷酸和多肽序列。表1顯示了人、小鼠和大鼠的序列。本文鑒定了食蟹猴(cynomolgus)的胰高血糖素受體序列并列于下文。表l:胰高血糖素受體人(Homosapiens)多聚核苷酸(SEQIDNO:1)登錄號BC1048541gtgcagcccctgccagatgtggg鄉(xiāng)cagctagctgcccagaggcatgcccccctgccag61ccacagcgacccctgctgctgttgctgctgctgctggcctgccagccacaggtcccctcc121gctcaggtgatggacttcctgtttgagaagtggaagctctacggtgaccagtgtcaccac181aacctgagcctgctgccccctcccacggagctggtgtgcaacagaaccttcgacaagtat241tcctgctggccggacacccccgccaataccacggccaacatctcctgcccctggtacctg301ccttggcaccacaaagtgcaacaccgcttcgtgttcaagagatgcgggcccgacggtcag361tgggtgcgtggaccccgggggcagccttggcgtgatgcctcccagtgccagatggatggc421gaggagattgaggtccagaaggaggtggccaagatgtacagcagcttccaggtgatgtac481acagtgggctacagcctgtccctgggggccctgctcctcgccttggccatcctggggggc541ctcagcaagctgcactgcacccgcaatgccatccacgcgaatctgtttgcgtccttcgtg601ctgaaagccagctccgtgctggtcattgatgggctgctcaggacccgctacagccagaaa661attggcgacgacctcagtgtcagcacctggctcagtgatggagcggtggctggctgccgt721gtggccgcggtgttcatgcaatatggcatcgtggccaactactgctggctgctggtggag781ggcctgtacctgcacaacctgctgggcctggccaccctccccgagaggagcttcttcagc841ctctacctgggcatcggctggggtgcceccatgctgttcgtcgtcccctgggcagtggtc901aagtgtctgttcgagaacgtccagtgctggaccagcaatgacaacatgggcttctggtgg961atcctgcggttccccgtcttcctggccatcctgatcaacttcttcatcttcgtccgcatc1021gttcagctgctcgtggccaagctgcgggcacggcagatgcaccacacagactacaagttc1081cggctggccaagtccacgctgaccctcatccctctgctgggcgtccacgaagtggtcttc1141gccttcgtgacggacgagcacgeccagggcaecctgcgctccgccaagctcttcttcgac1201ctcttcctcagctccttccagggcctgctggtggctgtcctctactgcttcctcaacaag1261gaggtgcagtcggagctgcggcggcgttggcaccgctggcgcctgggcaaagtgctatgg1321gaggagcggaacaccagc肌ccacagggcctcatcttcgcccggccacggccctcccagc1381aaggagctgcagtttgggaggg魄gtggcagccaggattcatctgcggagacccccttg1441gctggtggcctccctagattggctgagagccccttctgaaccctgctgggaccccagcta1501gggctggactctggcaccc人(Homosapiens)氨基酸(SEQIDNO:2)477aa;登錄號.EAW89684MetProProCysGinProGinArgProLeuLeuLeuLeuLeuLeuLeuLeuAlaCysGinProGinValProSerAlaGinValMetAspPheLeuPheGluLysTrpLysLeuTyrGlyThrPheAspLysTyrSerCysTrpProAspThrProAlaAsnThrThrAlaAsnlieSerCysProTrpTyrLeuProTrpHisHisLysValGinHisArgPheValPheLysArgCysGlyProAspGlyGinTrpValArgGlyProArgGlyGinProTrpArgAspAlaSerGinCysGinMetAspGlyGluGlulieGluValGinLysGluValAlaLysMetTyrSerSerPheGinValMetTyrThrValGlyTyrSerLeuSerLeuGlyAlaLeuLeuLeuAlaLeuAlalieLeuGlyGlyLeuSerLysLeuHisCysThrArgAsnAlalieHisAlaAsnLeuPheAlaSerPheValLeuLysAlaSerSerValLeuValHeAspGlyLeuLeuArgThrArgTyrSerGinLyslieGlyAspAspLeuSerValSerThrTrpLeuSerAspGlyAlaValAlaGlyCysArgValAlaAlaValPheMetGinTyrGlyHeValAlaAsnTyrCysTipLeuLeuValGluGlyLeuTyrLeuHisAsnLeuLeuGlyLeuAlaThrLeuProGluArgSerPhePheSerLeuTyrLeuGlylieGlyTipGlyAlaProMetLeuPheValValProTipAlaValValLysCysLeuPheGluAsnValGinCysTipThrSerAsnAspAsnMetGlyPheTrpTrplieLeuArgPheProValPheLeuAlalieLeulieAsnPhePheliePheValArglieValGinLeuLeuValAlaLysLeuArgAlaArgGinMetHisHisThrAspTyrLysPheArgLeuAlaLysSerThrLeuThrLeulieProLeuLeuGlyValHisGluValValPheAlaPheValThrAspGluHisAlaGinGlyThrLeuArgSerAlaLysLeuPhePheAspLeuPheLeuSerSerPheGinGlyLeuLeuValAlaValLeuTyrCysPheLeuAsnLysGluValGinSerGluLeuArgArgArgTrpHisArgTrpArgLeuGlyLysValLeuTrpGluGluArgAsnThrSerAsnHisArgAlaSerSerSerProGlyHisGlyProProSerLysGluLeuGinPheGlyArgGlyGlyGlySerGinAspSerSerAlaGluThrProLeuAlaGlyGlyLeuProArgLeuAlaGluSerProPhe小鼠(Musmusculus)多聚核香酸(SEQIDNO:3)登錄號BC50579881cgcgaggagcgcagccctagccccggcgactgagcacacctgaggagaggtgcacacact61ctgaggacctaggtgtgcaacctctgccagatgtggggcgtggctacccagaggcatgcc121cctcacccagctccactgtccccacctgctgctgctgctgttggtgctgtcatgtctgcc181agaggcaccctctgcccaggtaatggactttttgtttgagaagtggaagctctatagtga241ccaatgccaccacaacctaagcctgctgcccccacctactgagctggtctgtaacagaac301cttcgacaagtactcctgctggcctgacacccctcccaacaccactgccaacatttcctg361cccctggtacctaccttggtaccacaaagtgcagcaccgcctagtgttcaagaggtgtgg421gcccgatgggcagtgggttcgagggccacgggggcagccgtggcgcaacgcctcccaatg481tcagttggatgatgaagagatcgaggtccagaagggggtggccaagatgtatagcagcca541gcaggtgatgtacaccgtgggctacagtctgtccctgggggccttgctccttgcgctggt601catcctgctgggcctcaggaagctgcactgcacccgaaactacatccatgggaacctgtt661tgcgtcctttgtgctcaaggctggctctgtgttggtcatcgattggctgctgaagacacg721gtacagccagaagattggcgatgacctcagtgtgagcgtetggctcagtgacggggcgat781ggccggctgcagagtggccacagtgatcatgcagtacggcatcatagccaactattgctg841gttgctggtagagggcgtgtacctgtacagcctgctgagccttgccaccttctctgagag901gagcttcttttccctctacctgggcattggctggggtgcgcccctgctgtttgtcatccc32961etgggtggtggtcaagtgtctgtttgagaatgttcagtgctggaccagcaatgacaacat1021gggattctggtggatcctgcgtattcctgtcttcctggccttactgatcaattttttcat1081ctttgtccacatcattcaccttcttgtggccaagctgcgtgcccatcagatgcactatgc1141tgactataagttccggctggccaggtccacgctgaccctcatccctctgctgggggtcca1201cgaggtggtctttgcctttgtgactgacgagcatgcccaaggcaccctgcgctccaccaa1261gctcttttttgacctgttcctcagctccttccagggtctgctggtggctgttctctactg1321tttcctcaacaaggaggtgcaggcagagctgatgcggcgttggaggcaatggcaagaagg1381caaagctcttcaggaggaaaggttggccagcagccatggcagccacatggccccagcagg1441gccttgtcatggtgatccctgtgagaaacttcagcttatgagtgcaggcagcagcagtgg1501gactggctgtgtgccctctatggagacctcgctggccagtagtctcccaaggttggctga1561cagccccacctgaatctccactggagcctagccaggctgcgttcagaaagggcctcagag1621gacaacccagagccagatgcccggccaaggctgaagagacaaagcagcaagacagcagct1681tgtactgtgcacactcccctaacctgtcctagcctggcacaggccacagtgacagagtag1741gggttggatatgatggagaagccatgttatctatgaactctgagtgttcccatgtgtgtt1801gacatggtccctgtacccagatatgtccttcagtaaaaagctcgagtgggagctgctgca1861caaaaa肌肌aaaaaa肌aa小鼠(Musmusculus)氨基酸(SEQIDNO:4)485aa登錄號AAH57988MetProLeuThrGinLeuHisCysProHisLeuLeuLeuLeuLeuLeuValLeuSerCysLeuProGluAlaProSerAlaGinValMetAspPheLeuPheGluLysTrpLysLeuTyrSerAspGinCysHisHisAsnLeuSerLeuLeuProProProThrGluLeuValCysAsnArgThrPheAspLysTyrSerCysTipProAspThrProProAsnThrThrAlaAsnlieSerCysProTrpTyrLeuProTrpTyrHisLysValGinHisArgLeuValPheLysArgCysGlyProAspGlyGinTrpValArgGlyProArgGlyGinProTrpArgAsnAlaSerGinCysGinLeuAspAspGluGlulieGluValGinLysGlyValAlaLysMetTyrSerSerGinGinValGlyLeuArgLysLeuHisCysThrArgAsnTyrlieHisGlyAsnLeuPheAlaSerPheValLeuLysAlaGlySerValLeuVallieAspTrpLeuLeuLysThrArgTyrSerGinLyslieGlyAspAspLeuSerValSerValTrpLeuSerAspGlyAlaMetAlaGlyCysArgValAlaThrVallieMetGinTyrGlylielieAlaAsnTyrCysTrpLeuLeuValGluGlyVal33SerLeuAlaThrPheSerGluArgSerPhePheSerLeuTyrLeuGluAsnValGinCysTrpThrSerAsnAspAsnMetGlyPheTrpTrplieLeuArglieProValPheLeuAlaLeuLeulieAsnPhePheliePheValHislielieHisLeuLeuValAlaLysLeuArgAlaHisGinMetHisTyrAlaAspTyrLysPheArgLeuAlaArgSerThrLeuThrLeulieProLeuLeuGlyValHisGluValValPheAlaPheValThrAspGluHisAlaGinGlyThrLeuArgSerThrLysLeuPhePheAspLeuPheLeuSerSerPheGinGlyLeuLeuValAlaValLeuTyrCysPheLeuAsnLysGluValGinAlaGluLeuMetArgArgTrpArgGinTrpGinGluGlyLysAlaLeuGinGluGluArgLeuAlaSerSerHisGlySerHisMetAlaProAlaGlyProCysHisGlyAspProCysGluLysLeuGinLeuMetSerAlaGlySerSerSerGlyThrGlyCysValProSerMetGluThrSerLeuAlaSerSerLeuProArgLeuAlaAspSerProThr大鼠(Rattusnorvegicus)多聚核香酸(SEQIDNO:5)登錄號.NM1720921gaattcgcggccgccgccgggccccagatcccagtgcgcgaggagcccagtc加gaccc61agcaacctgaggagaggtgcacacacccccaaggacccaggcacccaacctctgccagat121gtgggggggtggctacccagaggcatgctcctcacccagctccactgtccctacctgctg181ctgctgctggtggtgctgtcatgtctgccaaaggcaccctctgcccaggtaatggacttt241ttgtttgagaagtggaagctctatagtgaccagtgccaccacaacctaagcctgctgccc301ccacctactgagctggtctgcaacagaactttcgacaagtactcctgctggcctgacacc361cctcccaacaccactgccaacatttcctgcccctggtacctaccttggtaccacaaagtg421cagcaccgcctagtgttcaagaggtgtgggcctgatgggcagtgggttcgagggccacgg481gggcagtcatggcgcgacgcctcccaatgtcagatggatgatgacgagatcgaggtccag541aagggggtagccaagatgtatagcagctaccaggtgatgtacactgtgggctacagtctg601tccctgggggccttgctcctggcgctggtcatcctgctgggcctcaggaagctgcactgc661acccggaactacatccacgggaacctgttcgcgtccttcgtgctcaaggctggctctgtg721ctggtcattgattggctgctcaagacacgctatagccagaagattggagatgacctcagt781gtgagcgtctggctcagtgatggggcggtggctggctgcagagtggccacagtgatcatg841cagtacggcatcatagccaactactgctggttgctggtggagggtgtgtacctgtacagc<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>nsi勾o々￡>Byynsicxyqini。ByyJ3SJ3SdsvWOJ3S々￡)々0Siy々oui￡)n"s人isXq々9(xy々。u[9々{)oldb[vj"o:yiqis下husvJ3S々￡)SiynI。nI。WOn3lPA々9ti3i3iydi丄Siy<^丄s]H3jySiyn3i1q9p3八ni。sXiusysqjsXqi/^lt\3i[B八BjvPAn"ti3i々{)u[。3qjJ3SJ"sqdnsqdsv叫dti3isX，Biv3qd3jvn3im々owoBivs!hniodsvjqipa叫dbtv3iw3iipani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22NAaggtctagtcagagcctcttggatagagatgatggagacacctatttggac(SEQIDNO:9)acgctttcctatcgggcctct(SEQIDNO:42)atgcaacgtatagagtttccattcactt(SEQIDNO:98)AARSSQSLLDRDDGDTYLD(SEQIDNO:10)TLSYRAS(SEQIDNO:43)MQRIEFPFT(SEQIDNO:72)A-23NAcgggcgagtcagggtattagcagctggttagccactgcatccactttgcaaagt(SEQIDNO:69)caacagtctaacagtttcccgctcact42<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>A-9NAagctatggcatgcac(SEQIDNO:101)gttatgtggtatgatggaagtaataaagactatgtagactccgtgaagggc(SEQIDNO:127)gaaaaagatcattacgacattttgactggttataactactactacggtctggacgtc(SEQIDNO:168)AASYGMH(SEQIDNO:102)VMWYDGSNKDYVDSVKG(SEQIDNO:128)EKDHYDILTGYNYYYGLDV(SEQIDNO:169)A-10NAagcaactatgctgcttggaac(SEQIDNO:107)aggacatactacaggtccaagtggtataatgattatgcagtatctgtgagaagt(SEQIDNO:137)gaagatggcagtggctggtacggtgcttttgacatc(SEQIDNO:178)AASNYAA額(SEQIDNO:108)RTYYRSKWYNDYAVSVRS(SEQIDNO:138)EDGSGWYGAFDI(SEQIDNO:179)A-llNAagctatgacatgcac(SEQIDNO:109)tttatatcagatgatggaagtaataaatactatggagactccgtgaagggc(SEQIDNO:139)gatcaatacgatattttgactggttattcttctgatgcttttgatatc(SEQIDNO:180)AASYDMH(SEQIDNO:闊FISDDGSNKYYGDSVKG(SEQIDNO:140)DQYDILTGYSSDAFDI(SEQIDNO:181)A-12NAagctatgacatgcac(SEQIDNO:109)tttatatcagatgatggaagtaataaatattatggagactccgtgaagggc(SEQIDNO:141)gatcaatacgatattttgactggttattcttctgatgcttttgatatc(SEQIDNO:180)AASYDMH(SEQIDNO:106)FISDDGSNKYYGDSVKG(SEQIDNO:140)DQYDILTGYSSDAFDI(SEQIDNO:181)A-13NAagctatgacatgcac(SEQIDNO:109)gttatatcatatgatggaagtaataaatactatggagactccgtgaagggcgatcaatacgatattttgactggttattcttctgatgcttttgatatc(SEQIDNO:180)45<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>115)(SEQIDNO:151)A-18NAaagtctagtcagagcctcctgcatagtgatggaaagaact3tttgttt(SEQIDNO:116)gaagtttcctaccggttctct(SEQIDNO:152)atgcaaaatatacagcctcctctc(SEQIDNO:190)AAKSSQSLLHSDGKNYLF(SEQIDNO:117)VIWYDGSHKYYEDSVKG(SEQIDNO:153)VGYGSGWYEYYYHYGMDV(SEQIDNO:191)A-19NAagctatggcatgcac(SEQIDNO:101)attatatggtctgatggaattaacaaatactatgcagactccgtgaagggc(SEQIDNO:154)gagagaggcctctacgatattttgactggttattataactactacggtattgacgtc(SEQIDNO:192)AASYGMH(SEQIDNO:102)而SDGINKYYADSVKG(SEQIDNO:155)ERGLYDILTGYYNYYGIDV(SEQIDNO:193)A-20NAggctataccttgaac(SEQIDNO:117)aacattaatagtaggagtagtctcatatactacacagaetctgtgaagggc(SEQIDNO:156)gatcagtataactggaactactactacggtatggacgtc(SEQIDNO:194)AAGYTLN(SEQIDNO:118)N歸RSSLIYYTDSVKG(SEQIDNO:157)DQYN顆YYYGMDV(SEQIDNO:195)A-21NAagctatgceatgaac(SEQIDNO:119)tacattggtagtagtagtagtgccatatactacggagactctgtg肌gggc(SEQIDNO:158)tatagaagtggctggtcccccctctttgacttc(SEQIDNO:196)AASYAMN(SEQIDNO:闊YIGSSSSAIYYGDSVKG(SEQIDNO:159)YRSGWSPLFDF(SEQIDNO:197)A-22agctatggcatgcactctatatggtatgatggaagtaacttggtggtggttttgactac47<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>CDR—致序列輕鏈CDR11組RSSQSLLDRDDGDTYLD(SEQIDNO:10)RSSQSLLDSADGDTYLD(SEQIDNO:12)RSTQSLLDSDDGDTYLD(SEQIDNO:20)XiX2X3RSSQSLLDRDDGTYTLDTSAi.RSXiQSLLDX^DGTYTLD(SEQIDNO:200)為絲氨酸殘基或蘇氨酸殘基，X2為精氨酸殘基或絲氨酸殘基，x3為天冬氨酸殘基或丙氨酸殘基，2組RASQDIRNDFG(SEQIDNO:18)RASQGIRNDLG(SEQIDNO:14)X4X5RASQGIRNDLGDFii.RASQX41RNDX5G(SEQIDNO:201)X4為甘氨酸殘基或天冬氨酸殘基，X5為亮氨酸殘基或苯丙氨酸殘基.3組SGDKLGDKYVC(SEQIDNO:24)SGDKLGDKYAC(SEQIDNO26)X6SGDKLGDKYVCAiii.SGDKLGDKYX6C(SEQIDNO:202)X6為纈氨酸殘基或丙氨酸殘基重鏈CDR11組TYGMH-(SEQIDNO:104)SYGMH畫(SEQIDNO:102)SYDMH-(SEQIDNO:106)x7x849sYGMHTDi.X7YX8MH(SEQIDNO:203)X7為絲氨酸殘基或蘇氨酸殘基，x8為甘氨酸殘基或天冬氨酸殘基，輕鏈CDR21組AASSLQS(SEQIDNO:45)AASSLES(SEQIDNO:50)X9AASSLQSEi.AASSLX9S(SEQIDNO:204)X9為谷氨酰胺殘基或谷氨酸殘基，2組QTSKRPS(SEQIDNO:54)QSTKRPS(SEQIDNO:56)XioXiiQTSKRPSSTii.QXk)XhKRPS(SEQIDNO:205)X10為絲氨酸殘基或蘇氨酸殘基，xu為蘇氨酸殘基或絲氨酸殘基，50重鏈CDR21組SIWYDGSNKYYVDSVKG(SEQIDNO:124)FIWYDGSEKYYVDSVKG(SEQIDNO:126)VIWYDGSNKYYADSVKG(SEQIDNO:145)EIWNDGSNKYYADSVKG(SEQIDNO:132)X12X13X14X"SIWYDGSNKYYVDSVKGFNEAVEi.X12IWX13DGSX14KYYX15DSVKG(SEQIDNO:206)X12為絲氨酸殘基、苯丙氨酸殘基、纈氨酸殘基或谷氨酸殘基，x13為酪氨酸殘基或天冬酰胺殘基，x14為天冬酰胺殘基或谷氨酸殘基，x15為纈氨酸殘基或丙氨酸殘基，2組VISHDGSDKYYADSVKG(SEQIDNO:134)FISDDGSNKYYGDSVKG(SEQIDNO:140)VISYDGSNKYYGDSVKG(SEQIDNO:143)VISDDGSHKYSADSVKG(SEQIDNO:130)Xi6XnXi8X19X20VISHDGSDKYYADSVKGFDNSGYHii.X16ISX17DGSX18KYX19X20DSVKG(SEQIDNO:207)X16為丙氨酸殘基或苯并氨酸殘基，X17為組氨酸殘基、天冬氨酸殘基或酪氨酸殘基，x18為天冬氨酸殘基、天冬酰胺殘基或組氨酸殘基,x19為酪氨酸殘基或絲氨酸殘基，x20為丙氨酸殘基或甘氨酸殘基，輕鏈CDR31組LQHNSDPLT(SEQIDNO:76)LQQNSYPLT(SEQIDNO:80)LQHNSNPLT(SEQIDNO:74)X21X22LQHNSNPLTQDYi.LQX21NSX22PLT(SEQIDNO:208)X21為組氨酸殘基或谷氨酰胺殘基，x22為天冬酰胺殘基、天冬氨酸殘基或酪氨酸殘基,2組QAWDSNTVI(SEQIDNO:78)QAWDSSTVV(SEQIDNO:80)X23X:24QAWDSNTVISVii.QAWDSX23TVX24(SEQIDNO:209)X23為天冬酰胺殘基或絲氨酸殘基，x24為異亮氨酸殘基或纈氨酸殘基，重鏈CDR31組EKDHYDILTGYNYYYGLDV(SEQIDNO:169)EETYYDILTGYHHYYGMDV(SEQIDNO:171)EPQYYDILTGYDNYYGMDV(SEQIDNO:173)EKPYYDILTGYFYYYGMDV(SEQIDNO:175)X25X26X27EKDHYETYPQPX28X29X30DILTGYNYYYGLDVHHMDNFi.EX25X26X27YDILTGYX28X29YYGX30DV(SEQIDNO:210)X25為賴氨酸殘基、谷氨酸殘基或脯氨酸殘基，X26為天冬氨酸殘基、蘇氨酸殘基、谷氨酰胺殘基或脯氨酸殘基,x27為組氨酸殘基或酪氨酸殘基，x28為天冬酰胺殘基、組氨酸殘基、天冬氨酸殘基或苯丙氨酸殘基x29為酪氨酸殘基、組氨酸殘基或天冬酰胺殘基，x30為亮氨酸殘基或曱硫氨酸殘基，2組LGGGFDY(SEQIDNO:165)MGGGFDY(SEQIDNO:167)X31LGGGFDYMii.X31GGGFDY(SEQIDNO:211)X31為亮氨酸殘基或甲硫氨酸殘基。另一方面，本發(fā)明提供包含選自L1-L23的輕鏈可變區(qū)或選自H1-H23的重鏈可變區(qū)及其片段、衍生物、突變蛋白或變異體的抗原結合蛋白?？捎妹Q"LxHy"表示該類抗原結合蛋白，其中"x"對應于輕鏈可變區(qū)并且"y"對應于重鏈可變區(qū)。例如，L2H1指具有包含如下文表3所示L2氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含H1氨基酸序列的重鏈可變區(qū)的抗原結合蛋白。本發(fā)明抗原結合蛋白包括例如包含選自組合L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L麗IO、LllHll、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H16、H17H17、L18H18、L19H19、L20H20、L21H21、L22H22和L23H2的輕鏈和重鏈可變結構域的組合。在一個實施方案中，該抗體為人類抗體。表3也提供了編碼示例性GCGR抗體的可變輕鏈和可變重鏈結構域的氨基酸序列的多聚核苷酸(DNA)序列。表3抗GCGR可變區(qū)多聚核苷酸序列和氨基酸序列輕鏈可變區(qū)多聚核苷酸和氨基酸序列Ll(A-l)gatatt.gtgct.gacccagactccactctccctgcccgtcacccctggagagccggcctccatctcctgca^gtofcagtcagage^ettggataga幼tg戰(zhàn)醉gag恥aixt汰tttggactggtacctgcagaagccagggcagtctccacagctcctgatctatacgefflcc鉍tcgggcct"ggagtcccagacaggttcagtggcagtgggtcaggcactgatttctcactgaaaatcagcagggtggaggctgaggatgttggagtttattactgc射gf^解gt射船船附W汰撫,賊fttcggccctgggaccaaagtggatatcaaa(SEQIDNO:212)IYTLSYRASGVPDRFSGSGSGTDFSLKISRVEAEDVGVYYCMOHCTPFTFGPGTKVDIK(SEQIDNO:213)L2(A-2)agactccactctccctgcccgtcacccctggagagccggcctccatctcctgcaggtctagtcagagcctcttggatag|gg|ggJggagi￡a￡￡lStttEgMtggtacctgcagaagccagggcagtctccacagctcctgatctata￡￡e|||^latcggg<xtctggagtcccagacaggttcagtggcagtg.ggtcagacactgatttctcactgaaaatcagcagggtggaggctgaggatgttggagtttattactgcstgpa汰t^樹agag裕p,cat1^併tcggccctgggaccaaagtggatatcaaa(SEQIDNO:214)IYTLSYRASGVPDRFSGSGSDTDFSLKISRVEAEDVGVYYCMOIUB符FTFGPGTKVDIK(SEQIDNO:215)L3(A-3)gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgcsggggaigjg;agggcattagaaatgattt解g"ggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagcgcctgatctatgctgcatecaglHg2gaagtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcacaatcagcagtgtgcagcctga犯attttgtaacttattactgtet織gcat膽t敏謝cctctc狄tttcggcggagggaccaaggtggagatcaaa(SEQIDNO:216)DIOMTOSPSSLSASVGDRVTITCRASOG畫DmWYOOKPGKAPKRLIYAASK(SEQIDNO:217)L4(A-4)gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgc|]||i^iJ||^，g爐汰gaa鄉(xiāng)誠tt欲,tggtatcagcagaaacca卿aaagcccctaagcgcctgatcta，.爭站oda55g|gggg§§gtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcacaatcagcagtctgcagcctgaagattttgcaacttattactgtctacagcafaatagtaaecctfitcacl;ttcggcggagggaccaaggtggagatcaaa(SEQIDNO:218)D懸TOSPSSLSASVGDRVTITC脇OG腿DLGWYOOKPGKAPKRLIYAASSL0SGVPSRFSGSGSGTEFTLT1SSL0PEDFATYYCL0HNS，LTFGGGTKVE1K(SEQIDNO:219)L5(A-5)gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatttgtaggagacagagtcaccatcacttgct^ggeaagte汰朋解爐解aa汰tga付t賴^tggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagcgcctgctctatg^路^^賴ggigSiaigJggggtcccatcaaggttcagcggcagtgggtctgggtcagaattcactctcacaatcagcagcctgcagcctgaagattttgcaacttattactgtcta^g9ataata一gacecgctoaccttcggccaagggacacgactggagattaaa(SEQIDNO:220)DIgMTOSPSSLSAFVGDRVTITCRASOGmNDLGAVYOOKPGKAPKRLLYAASSLOSGVPSRFSGSGSGSEFTLTISSLOPEDFATYYCLQHNSDPLTFGOGTRLEIK(SEQIDNO:221)L6(A-6)gaaatt辨tt導ac夢ca雖tctcca競caccctgtctttgtttccaggggaaagagccaccctctcctgcilimi^agigtgtti^gfiaggMEtifill5gSStggtaccagcagaaatctggccaggctcccaggctcctcatctat^lllilleeagfeagggfifiastggcatcccagacaggttca!t競ca!t驟tct,acagacttcactctcaccatcagcagactggagcctgaagattttgcagtgtattactgte汰aeaatat解taact&汰ccattcactttcggccctgggaccaatgtggatotca肌(SEQIDNO:222)EIVLTOSPGTLSLFPGERATLSCM糾S腦NY^LAWYOOKSGOAPRLLIY,恵SRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQOY,鄉(xiāng)TFGPGTNVDIK(SEQIDNO:223)56L7(A-7);|acatcca|.at|acccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccgtcacttgcj^^p|^aggg￡il||lgaMtgiltttgB6tggtatcagcaaaaaccagggaaagcccctaagcgcctgatctatgfiJg￡g$^§gHlag^gl^Iggggtcccatcaaggttcagc縣ca爽.gatctg路acagaattcactctcacaatcagcagcctgcagcctgaagattttgcaacttattactgtetacageaa汰ataf[ttaeccgctcadttcgggggagggaccaaggtggaaatcaaa(SEQIDNO:224)(SEQIDNO:225)L8(A-8)gatatt魏at蔡acccagactccactctccct雖cccgtcacccctggagagccggcctccatctcctgcaggjglaslsaga總ectcttggatagt^t故atggaaaca(Xita傲ggactggtacctgcagaagccggggcagtctccacagctcctgatctatacg鄉(xiāng)cct站cgggcctctggagtcccagacaggttcagtg.gcagt戀tca^cactgatttcacactgaaaatcagcagggtggaggctgaggatgttggagtttattactgcatgcaacgtat船agtttecattcaetttcggccctgggaccaaagtggatatcaaa(SEQIDNO:226)DIVMTOTPLSLPVTPGEPASISCRS麗L固DDGDTTL誇YLOKPGOSPOLLIYTLSYKASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMOiaEFPFTFGPGTKVDIK(SEQIDNO:227)L9(A-9)...............................gacatcca.gatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgc6i酵輕,，agggfiMa8M§tgMfegg￡tggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagcgcctgatctat^gM^g辨ggaaagtggggtcccatcaaggttcag;cg;gcagt.ggatctg.g;gacagaattcactctcacaatcagcagtgtgcagcctgaagattttgtaacttattactgtc重acagc站aat豐aacc鄉(xiāng)c鄉(xiāng)tcggcggagggaccaaggtggagatcaaa(SEQIDNO:228)囊I:…ETGGGl纖IRKpAGi，p綴懇Q爨.QoYoos纖TTcYYADEpssTT爪EQTGGVsyGAsLssFTsI,pMsQo_I-flsQKL10(A誦IO)gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtgggagacagagtcaccatcacttgc￡ggg￡g§;gj￡aggg￡§Ulgtiagt§ISlaa|tggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagctcctcatctacg§igg§|￡￡a§|MSSiMeiggggtcccatcaaggttcagtggaagtggatctgggacagattttactttcaccatcagcagcctgcagcctgaagatattgcaacatattactgt&aac解tatggt效atctcecg汪tea(^ttcggccaagggacacgactggagagt(SEQIDNO:230)NLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLOPEDIATYYCQQYGNLPITFGOGTRLESK(SEQIDNO:231)Lll(A誦ll)tcctatgagctgactcagccaccctcagtgtccgtgtccccaggacagacagccagcatcacctgc|gjggagaliaattggp:gatoa醉atgtttgctggtatcagcagaagccaggccagtcccctgtgctggtcatctatcaaacttccaagc戰(zhàn)g^t^igggatccctgagcggttctctggctccaactctgggaacacagccactctgaccatcagcgggacccaggctatggatgaggctgactattactgtea戰(zhàn)&gteggaeaacaacactgt薩tfflcggcggagggaccaagctgaccgtceta(SEQIDNO:232)碗GIPERFSGSNSGNTATLTISGTOAMDEADYYCi隱kJ毅國FGGGTKLTVL(SEQIDNO:233)L12(A-12)tcctatgagctgactca.gccaccctcagtgtccgtgtccccaggacagacagccagcatcacctgc|g|gggg||guitgggggMaMMgS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YFCARDQYN額YYYGMDVWGOGTTVTVSS(SEQIDNO:297)H21(A-21)gaggtgcggctggtg經a多tct多ggg多agacttggtacagcctggggggtccctgagactctcctgtgca辱cctctggattcaccttcagta釋c鄉(xiāng)CG鄉(xiāng)aaqt卿tccgccaggctccaggg鄉(xiāng)gggctggagtggatttcatac鄉(xiāng)gtagtagtagta^tgc^at站actacgga移汰etdtgtgaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaactcact|^tct|c，^tgaacagcctgagagacgaggacacggctgtgtattactgtgcgagaMaSMg|gS￡tSgte￡￡￡l￡jHg^t|gtggggccagggaagcctggtcaccgtctcctca(seqidno:298)EVRLVESGGDLVOPGGSLRLSCAASGFTFSSYA應WVROAPGKGLEWISY^GSSSSAIYYCH)SVKGRFTISRDNAKNSLYLOMNSLRDEDTAVYYCARYRSGWSPLFDFWGOGSLVTVSS(seqidno:299)h22(a-22)caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgtggtccagcctgggaggtccctgagactctcctgtgcag^tc;接gaatcaccttcagtagctatggcatge效欲gggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcatet被汰tgg衞g辨gg縣gto存tM射鵬糾gta斜ct^g1;g種gggficgattcaccatcttcagagacaattccaagaaaacgctgtatctgcaaatgaacaggctgagagccgaggacacggctgtgtattactgtgcgagacttggtggtggttttgaetaetggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca(seqidno:300)ovolvesgggvvopgrslrlscaasgitfssygmhwvroapgkglewvasiwydgsnkyyvdsvk:orftifrdnskktlylo畫rlraedtavyycarlgggFpYWGOGTLVTVSS(SEQIDNO:301)h23(a-23)gaggtgcggctggtggagtctgggggaggcttggtacagcctggggggtccctgagactctcctgtacagcctctggattccccttcaat統(tǒng)gat汰tgce汰取a汰etgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtttcatacatt叫t汰g賣汰gtagt&gt:gc,(atatac.faegg.agae.tetgt:ga汰ggjgi&cgattcaccatctccagagacaatgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagatgaagacacggctgtgtattactgtgcgagaj^lag^igl^j^ll^gSSMg^Sj^gtggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca(seqidno:302)EVRLVESGGGLVOPGGSLRLSCTASGFPFNJJl^liwVROAPGKGLEWVS隱醫(yī)國圖,圖I圖圖RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCAR圖國磁M戰(zhàn)WGOGTLVTVSS(seqidno:303)71本發(fā)明抗原結合蛋白的具體實施方案包含與一個或多個上文所列CDRs和/或FRs(骨架區(qū))的氨基酸序列相同的一個或多個氨基酸序列。在一個實施方案中，該抗原結合蛋白包含上文所列輕鏈CDR1序列。在另一個實施方案中，該抗原結合蛋白包含上文所列的輕鏈CDR2序列。在另一個實施方案中，該抗原結合蛋白包含上文所列的輕鏈CDR3序列。在另一個實施方案中，該抗原結合蛋白包含上文所列的重鏈CDR1序列。在另一個實施方案中，該抗原結合蛋白包含上文所列的重鏈CDR2序列。在另一個實施方案中，該抗原結合蛋白包含上文所列的重鏈CDR3序列。在另一個實施方案中，該抗原結合蛋白包含上文所列的輕鏈FR1序列。在另一個實施方案中，該抗原結合蛋白包含上文所列的輕鏈FR2序列。在另一個實施方案中，該抗原結合蛋白包含上文所列輕鏈FR3序列。在另一個實施方案中，該抗原結合蛋白包含上文所列輕鏈FR4序列。在另一個實施方案中，該抗原結合蛋白包含上文所列重鏈FR1序列。在另一個實施方案中，該抗原結合蛋白包含上文所列重鏈FR2序列。在另一個實施方案中，該抗原結合蛋白包含上文所列重鏈FR3序列。在另一個實施方案中，該抗原結合蛋白包含上文所列重鏈FR4序列。在另一個實施方案中，至少一個抗原結合蛋白的CDR3序列與來自A1-A23的CDR3序列的差異最多不超過6、5、4、3、2、1或0個單氨基酸添加、替換和/或缺失，如上文表2和3所示。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白的輕鏈CDR3序列與上述A1-A23的輕鏈CDR3序列的差異不得超過6、5、4、3、2、l或O個單氨基酸添加、替換和/或缺失并且抗原結合蛋白的重鏈CDR3序列與上文所述A1-A23的重鏈CDR3序列的差異最多不超過6、5、4、3、2、1或0個單氨基酸添加、替換和/或缺失。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白進一步包含1、2、3、4或5個CDR序列，各序列獨自與A1-A23的CDR序列的差異最多不超過6、5、4、3、2、l或O個單氨基酸差異。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白包含上文所列輕鏈可變區(qū)的CDRs和重鏈可變區(qū)的CDRs。在另一實施方案中，抗原結合蛋白包含上文所述的1、2、3、4、5和/或6個一致CDR序列。在進一步的實施方案中，該抗原結合蛋白包含L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、LIOHIO、LllHll、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H16、L17H17、L18H18、Ll懇9、L20H20、L21H21、L22H22和L23H23中任何之一的CDRs。在一個實施方案中，該抗原結合蛋白為人類抗體。在一個實施方案中，該抗原結合蛋白(例如抗體或抗體片段)包含輕鏈可變結構域，其包含與選自L1-L23的輕鏈可變結構域序列存在15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1或0個氨基酸差異的氨基酸序列，其中各該序列的差異獨立為一個氨基酸殘基的缺失、插入或替換。在另一個實施方案中，該輕鏈可變結構域包含與選自L1-L23的輕鏈可變結構域至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%或99°/。相同的氨基酸序列。在另一個實施方案中，該輕鏈可變結構域包含與下文所列L1-L23多聚核苷酸序列至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%或99%相同的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。在另一個實施方案中，該輕鏈可變結構域包含在中等條件下與編碼選自L1-L23的輕鏈可變結構域的多聚核苷酸互補序列雜交的多聚核苷酸編碼的氨基酸序列。在另一個實施方案中，該輕鏈可變結構域包含在嚴才各條件下與編碼選自L1-L23的輕鏈可變結構域的多聚核苷酸的互補序列雜交的多聚核苷酸編碼的氨基酸序列。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供包含重鏈可變結構域的抗原結合蛋白，該可變結構域包含選自H1-H23的重鏈可變結構域序列存在15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1或0個殘基存在差異的氨基酸序列，其中各該序列差異獨立為一個氨基酸的缺失、插入或替換。在另一個實施方案中，該重鏈可變結構域包含與選自H1-H23的重鏈可變結構域序列至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%或99%相同的氨基酸序列。在另一個實施方案中，該重鏈可變結構域包含在中等嚴格條件下與編碼選自H1-H23的重鏈可變結構域的多聚核苷酸互補序列雜交的多聚核苷酸編碼的氨基酸序列。在一個實施方案中，該重鏈可變結構域包含在嚴格條件下與編碼選自H1-H23的重鏈可變結構域的多聚核苷酸互補序列雜交的的多聚核苦酸編碼的氨基酸序列。附加實施方案包括包含組合L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、LllHll、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H16、L17H17、L18H18、L19H19、L20H20、73L21H21、L22H22和L23H23的抗原結合蛋白。本發(fā)明的抗原結合蛋白(例如，抗體、抗體片段和抗體衍生物)可包含本領域已知的任何恒定區(qū)。輕鏈恒定區(qū)可為例如k或X型輕鏈恒定區(qū)，例如人k或X型輕鏈恒定區(qū)。重鏈恒定區(qū)可為例如a、S、s、y或H型重鏈恒定區(qū)，例如人a、8、s、y或iLi型重鏈恒定區(qū)。在一個實施方案中，該輕鏈或重鏈恒定區(qū)為天然恒定區(qū)的片段、衍生物、變異體或突變蛋白。已知從相關抗體衍生不同亞類或同種型抗體的技術，即亞類轉換(subclassswitching)。因此，可從IgM抗體4汙生IgG抗體，反之亦然。這類技術允許制備具有給定抗體(母體抗體)的抗原結合性質的新抗體，但是也顯示與母體抗體不同的抗體同種型或亞類相關的生物學性質。也可應用重組DNA4支術。可在該操作中應用編碼具體抗體多肽的已克隆DNA,例如編碼期望同種型的抗體恒定結構域的DNA。也可參見Lanitto等，MethodsMol.Biol.178:303-16(2002)。在一個實施方案中，本發(fā)明的抗原結合蛋白進一步包含恒定輕鏈k或X結構域或這些的片段。輕鏈恒定區(qū)序列和它們的編碼多聚核苦酸提供于表4。在另一個實施方案中，本發(fā)明抗原結合蛋白進一步包含重鏈恒定結構域或其片段，例如提供于表4的IgG重鏈恒定區(qū)。在一個實施方案中，人輕鏈IgG2形式和抗體A-9和A-3的重鏈氨基酸序列列于下文的SEQIDNO:310、SEQIDNO:311、SEQIDNO:312和SEQIDNO:311。表4輕鏈恒定區(qū)多聚核苷酸(k)cgaactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctg3cgctgagca肌gcagactacg3g肌acacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt(SEQIDNO:304)氨基酸(k)GLSSPVTKSFNRGEC(SEQIDNO:305)多聚核苷酸(AOggtcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccgccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggagtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctatctgagcctgacgcctgagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttca(SEQIDNO:306)氨基酸(X)STVEKTVAPTECS(SEQIDNO:307)重鏈恒定區(qū)多聚核苷酸gcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaac75gtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa(SEQIDNO:308)氨基酸ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVGK(SEQIDNO:309)輕鏈A-9IgG2形式GEC(SEQIDNO:310)重鏈A-9IgG2形式FTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVMWYDGSNKDYVDSVKGRFTITCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDHNHYTQKSLSLSPGK(SEQIDNO:311)輕鏈A-3IgG2形式GEC(SEQIDNO:312)重鏈A-3IgG2形式TCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDHNHYTQKSLSLSPGK(SEQIDNO:311)本發(fā)明抗原結合蛋白(例如抗體)包括例如包含組合LlHl、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、LllHll、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H15、L17H17、L18H18、L19脂、L20腦、L21H21、L22H22和L23H23并具有期望表型(例如，IgA、IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgE和IgD)以及其Fab或F(ab，)2片段的那些。而且，如果期望IgG4，也需要如Bloom等，1997,ProteinScience6:407(以參考形式并于本文)77所述在鉸鏈區(qū)引入一個點突變以減輕形成IgG4抗體中不均一性的內H鏈二硫鍵的趨勢?？贵w和抗體片殺:在一個實施方案中該抗原結合蛋白為抗體。術語"抗體，，指完整抗體或其抗原結合片段，如定義部分所廣泛描述?？贵w可包含完整的抗體分子(包括具有全長重和/或輕鏈的多克隆、單克隆、嵌合、人源化或人類抗體)或包含其抗原結合片段。抗體片段包括F(ab，)2、Fab、Fab，、Fv、Fc和Fd片段，并可整合入單結構域抗體、單鏈抗體、最大抗體(maxibodies)、孩史抗體(minibodies)、內4元體(intrabodies)、二鏈4元體、三鏈抗體、四鏈抗體、v-NAR和bis-scFv(參見，例如HollingerandHudson,2005,NatureBiotechnology,23,9,1126-1136)。也包括抗體多肽例如美國專利號6703199中所公開的那些，包括纖維結合素多肽單抗體。其它抗體多肽公開于美國專利出版物2005/0238646，其為單鏈多肽。在一個實施方案中，本發(fā)明該抗體包含上文表2所列的至少一個CDR或一致CDR。在一個實4方案中，人源化單克隆;元體包含鼠;元體的可變結構域(全部或部分其抗原結合位點)和人類抗體的恒定結構域?；蛘?，人源化抗體可包含鼠單克隆抗體的抗原結合位點和來源于人類抗體的可變結構域片段(缺失抗原結合位點)?；蚬こ虇慰寺】贵w的生產方法包括Riechmann等，1988,Nature332:323,Liu等，1987,Proc.NatAcad.Sci.USA84:3439,Larrick等，1989,Bio/Technology7:934和Winter等,1993,TIPS14:139中所述。在一個實施方案中，該嵌合抗體為CDR移植抗體。人源化抗體的技術描述于例如美國專利號5869619、5225539、5821337、5859205、6881557,Padlan等，1995,FASEBJ.9:133-39,Tamura等，2000,J.Immunol.164:1432-41，Zhang,W等，MolecularImmunology.42(12):1445畫1451,2005;HwangW.等，Methods.36(1):35畫42,2005;Dall，AcquaWF等，Methods36(l):43-60，2005;和Clark,M.,ImmunologyToday.21(8):397-402,2000。本發(fā)明抗體也可為全長人單克隆抗體?？赏ㄟ^本領域普通技術人員熟悉的技術生成全長人單克隆抗體。該類方法包括但是不限于EpsteinBarrVirus(EBV)轉染人外周血細胞(例如包含B淋巴細胞)、體外免疫人B細胞、攜帶被插入的人免疫球蛋白基因的經免疫轉基因小鼠的脾細胞融合、從人免疫球蛋白V區(qū)噬菌體文庫中分離或其它本領域已知并基于本文公開內容的操作。已研發(fā)出在非人動物中生成人單克隆抗體的方法。舉例而言，已制備了通過各種途徑將一個或多個內源免疫球蛋白基因滅活的小鼠。已將人免疫球蛋白基因引入小鼠取代被滅活的小鼠基因。在這一技術中，將人重和輕鏈基因座的元件引入來源于包含內源重鏈和輕鏈基因座的靶向斷裂的胚胎干細胞的小鼠抹(也可參見Bruggemann等，Curr.Opin.Biotechnol.8:455-58(1997)。例如，人免疫球蛋白轉基因可為小基因構建體或酵母人工染色體上的轉位子，其經過在小鼠淋巴樣組織中的B細胞特異DNA重排和超突變。動物中生產的抗體整合了由引入動物中的人遺傳物質編碼的人免疫球蛋白多肽鏈。在一個實施方案中，用適當的GCGR免疫原免疫非人類動物例如轉基因小鼠。適當GCGR免疫原的實例為如下文實施例中描述的富含受體的細胞膜部分。另一實例為SEQIDNO:2的胞外結構域。生產技術實例和使用轉基因動物生產人或部分人類抗體描述于美國專利5814318、5569825和5545806,Davis等，Productionofhumanantibodiesfromtransgenicmice,Lo,ed.AntibodyEngineering:MethodsandProtocols,HumanaPress,NJ:191-200(2003),Kelle醒nn等，2002,CurrOpinBiotechnol.13:593-97,Russeletal.,2000,InfectImmun.68:1820-26,Galloetal.,2000,EurJImmun.30:534-40,Davis等，1999,CancerMetastasisRev.18:421-25,Green,1999,JImmunolMethods.231:11-23,Jakobovits,1998,AdvancedDrugDeliveryReviews31:33-42,Greenetal.,1998,JExpMed.188:483-95,JakobovitsA,1998,Exp.Opin.InvestDrugs.7:607-14,Tsuda等，1997,Genomics.42:413-21,Mendez等，1997，NatGenet.15:146-56,Jakobovits,1994,CurrBiol.4:761-63,Arbones等，1994,Immunity.1:247-60,Green等，1994,NatGenet.7:13-21,Jakobovits等，1993,Nature.362:255-58,Jakobovits等，1993,ProcNatlAcadSciUSA.90:2551-55.Chen,J.，M.Trounstine,F.W.Alt,F.Young,C.Kurahara,J.Loring,D.Huszar."ImmunoglobulingenerearrangementinB-celldeficientmicegeneratedbytargeteddeletionof79theJHlocus"InternationalImmunology5(1993):647-656,Choi等，1993,NatureGenetics4:117-23,Fishwild等，1996,NatureBiotechnology14:845-51,Harding等，1995,AnnalsoftheNewYorkAcademyofSciences,Lonberg等，1994,Nature368:856-59,Lonberg,1994,TransgenicApproachestoHumanMonoclonalAntibodiesinHandbookofExperimentalPharmacology113:49-101,Lonberg等，1995,InternalReviewofImmunology13:65-93,Neuberger,1996,NatureBiotechnology14:826,Taylor等，1992,NucleicAcidsResearch20:6287-95,Taylor等，1994,InternationalImmunology6:579-91,Tomizuka等，1997,NatureGenetics16:133-43,Tomizuka等，2000,ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesUSA97:722-27,Tuaillon等，1993,ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesUSA90:3720-24,andTuaillon等，1994,JournalofImmunology152:2912-20.;Lonberg等，Nature368:856,1994;Taylor等，Int.Immun.6:579,1994;美國專利號5877,97;Bruggemann等，1997Curr.Opin.Biotechnol.8:455-58;Jakobovits等，1995Ann.N.Y.Acad.Sci.764:525-35。此外，涉及XenoMouse(Abgenix,nowAmgen,Inc.)的方案4笛述于例如U.S.05/0118643以及WO05/694879、WO98/24838、WO00〃6310和美國專利7064244。例如將被免疫轉基因小鼠的淋巴樣細胞與骨髓瘤細胞融合以生產雜交瘤。用于生成雜交瘤的融合方法的骨髓瘤細胞優(yōu)選為非抗體生產，其具有高融合效率以及使它們可可在僅支持期望融合細胞(雜交瘤)生長的選擇培養(yǎng)基中生長的酶缺陷。用于該類融合的適當細胞系的實例包括Sp國20、P3-X63/Ag8、P3-X63-Ag8.653、NSl/l.Ag41、Sp210-Ag14、FO、NSO/U、MPC-11、MPC11-X45-GTG1.7和S194/5XX0Bul;用于大鼠融合的細胞系實例包括R210.RCY3、Y3-Ag1.2.3、IR983F和4B210。用于細胞融合的其它細胞系為U-266、GM1500國GRG2、LICR畫LON畫HMy2和UC729-6。淋巴樣(例如脾)細胞和雜交瘤細胞可在膜融合促進劑(例如聚乙二醇或非離子去污劑)存在下結合數分鐘，然后低密度接種至支持雜交瘤而不支持未融合骨髓瘤細胞生長的選擇性培養(yǎng)基上。一種篩選培養(yǎng)基為HAT(次黃噤呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶)。經過足夠時間之后，通常約一至兩周，可觀察到細胞集落。分離單集落，可使用各種本領域已知即本文描述的免疫測定法檢測細胞產生抗體與人GCGR的結合活性?？寺≡撾s交瘤(例如，通過有限稀釋克隆或通過軟瓊脂挑斑分離)，篩選并培養(yǎng)可生產對人GCGR具有特異性的抗體的陽性克隆。可從雜交瘤培養(yǎng)物的上清中分離來自雜交瘤培養(yǎng)物的單克隆抗體。另一種生成本發(fā)明人類抗體的方法包括通過EBV轉化永生化人外周血細胞。參見，例如美國專利號4464456?？赏ㄟ^本文提供的免疫檢測方法例如ELISA鑒定生可特異性結合人GCGR的單克隆抗體的永生化B細胞系(或類成淋巴細胞)，然后通過標準的克隆技術分離?？蓪⒁艳D化細胞系與鼠雜交瘤融合提高可生產抗GCGR抗體的類成淋巴細胞的穩(wěn)定性(參見，例如，Glasky等，Hybridoma8:377-89(1989))。又另一種生成人單克隆抗體的方法為體外免疫，其包括用人GCGR初次免疫人脾B細胞，然后將已初次免疫的B細胞和雜交融合配體融合。參見。例如1991J.Immunol,147:86-95。在一些實施方案中，篩選生產抗人GCGR抗體的B細胞并根據本領域已知(WO92/02551;美國專利5627052;Babcook等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA93:7843-48(1996))及本文所述的分子生物學技術從B細胞克隆輕鏈和重鏈可變區(qū)。可從脾、淋巴結或外周血樣品中通過篩選生產與GCGR特異性結合的抗體從被免疫小鼠分離B細胞。也可從人例如外周血樣品中分離B細胞。檢測生產具有期望特異性的抗體的單個B細J包的方法為本領域已知，例如，通過空斑形成、熒光激活細胞分選術、體內激活然后檢測特異抗體及類似方法。篩選特異抗體生產B細胞的方法包括例如在包含人GCGR的軟瓊脂中制備B細胞的單細胞混懸液。由B細胞生產的特異抗體的結合導致復合物的形成，其可以免疫沉淀物可見。篩選了生產期望抗體的B細胞后，可根據本領域已知或本文描述的方法通過分離或擴增DNA或mRNA克隆特異抗體基因。獲得本發(fā)明抗體的附加方法為噬菌體展示。參見，例如，Winter等，1994A醒.Rev.Immunol.12:433-55;Burton等，1994Adv.Immunol.57:191-280?？稍谑删w載體中建立人或鼠免疫球蛋白可變區(qū)基因組合文庫，該噬菌體載體可用于篩選與TGF-卩結合蛋白或其變異體或片段特異性結合的Ig片段(Fab、Fv、sFv或其多聚體)。參見，例如，美國專利號5223409;Huse等，1989Science246:1275-81;Sastry等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:5728-32(1989);Alting畫Mees等，StrategiesinMolecularBiology3:1-9(19%);Kang等，1991Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:4363-66;Hoogenboom等，1992J.Molec.Biol.227:381-388;Schlebusch等，1997Hybridoma16:47-52以及本文引用的參考文獻。例如，可將包含編碼Ig可變區(qū)的多個多聚核普酸序列的文庫插入絲狀噬菌體例如M13或其變異體的基因組中，與編碼噬菌體衣殼蛋白的序列在同一框架中。融合蛋白可為衣殼蛋白與輕鏈可變區(qū)結構域和/或重鏈可變區(qū)結構域的融合。根據具體的實施方案，免疫球蛋白Fab片段也可展示于噬菌體顆粒(參見，例如美國專利號5698426)。也可在X噬菌體中制備重鏈和輕鏈免疫球蛋白cDNA表達文庫，例如使用人lmmunoZapTM(H)和？JmmunoZapTM(L)載體(Stmtagene,LaJolla,California)。簡而言之，從B細胞群中分離mRNA并用于在JmmunoZap(H)和XImmunoZap(L)載體中生成重鏈和輕鏈免疫球蛋白cDNA表達文庫?？蓡为毢Y選這些載體或共表達以形成Fab片段或抗體(參見上文的Huse等；也參見上文的Sastry等)。接著可將陽性空斑轉化成允許從大腸桿菌高水平表達單克隆抗體片段的非裂解質粒。在一個實施方案中，使用核苷酸引物擴增在雜交瘤中表達相關單克隆抗體的基因的可變區(qū)。這些引物可由本領域普通技術人員合成或從商業(yè)來源購買(參見,例如Stratagene(LaJolla,California),其銷售鼠和人可變區(qū)引物包括VHa、Vnb、VHc、VHd、Cm、Vl和Cl區(qū)的引物)。這些引物可用于擴增重鏈或輕鏈可變區(qū)，然后將其分別插入載體例如ImmunoZAPTMH或ImmunoZAPTML(Stratagene)中。然后將這些載體引入大腸桿菌、酵母或哺乳動物為基礎的表達系統(tǒng)?？墒褂眠@些方法生產大量包含Vh和VL結構域融合的單鏈蛋白(參見，Bird等,Science242:423-426,1988).細胞，可根據本文所述標準方法通過分離并從其擴增DNA或mRNA將特異抗體基因克隆。測序從其生產的抗體并鑒定CDRs，可如之前所述對編碼CDRs的DNA進行操作以生成根據本發(fā)明的其它抗體。本發(fā)明的抗原結合蛋白優(yōu)選在本文描述的基于細胞的測定法中和/或本文描述的體內測定法中調節(jié)胰高血糖素信號傳導和/或交叉阻斷本82申請所述抗體之一的結合和/或經本申請所述抗體之一被結合GCGR交叉阻斷。因此可使用本文所述測定法鑒定該類結合劑。在一些實施方案中，通過首先鑒定在本文描述的基于細胞的和/或體內測定法中與過表達GCGRs的細胞結合和/或中和和/或交叉阻斷本申請描述的抗體和/或經本申請描述的抗體之一凈皮結合GCGR交叉阻斷的抗體以生成抗體。本領域技術人員應理解的是一些蛋白質，例如抗體，可能進行可多種轉錄后修飾。這些修飾的類型和程度取決于用于表達該蛋白的宿主細胞系以及培養(yǎng)條件。該類修飾包括糖基化作用、甲硫氨酸氧化、二酮哌。秦形成、天冬氨酸異構化和天冬酰胺脫酰胺作用的變化。由于羧肽酶的作用頻繁修飾導致羧端堿性殘基(例如賴氨酸或精氨酸)的丟失(如Harris,R丄JournalofChromatography705:129-134,1995中所述)。生產鼠單克隆抗體的可選擇方法為將雜交瘤細胞注入同系基因小鼠的腹膜腔，例如經處理(例如姥鮫烷初次免疫)促進形成包含單克隆抗體的腹水的小鼠?？赏ㄟ^多種已確立的技術分離和純化單克隆抗體。該類分離技術包括使用蛋白A-瓊脂糖的親和色譜法、分子排阻色譜法和離子交換色譜法(參見，例如，Coligan第2.7.1-2.7.12頁和第2.9.1-2.9.3頁；Baines等，"PurificationofImmunoglobulinG(IgG),"MethodsinMolecularBiology,第10巻,第79-104頁(TheHumanaPress,Inc.1992))?？墒褂没诳贵w的特殊性質(例如，重鏈或輕鏈同種型、結合特異性等)篩選的適當配基通過親和色譜法純化單克隆抗體。固定化于固體載體的適當配基的實例包括蛋白A、蛋白G、抗恒定區(qū)(輕鏈或重鏈)抗體、抗獨特型抗體以及TGF-卩結合蛋白或其片段或變異體?？墒褂每贵w結合位點中央的互補決定區(qū)(CDRs)的分子進化分離親和性增加的抗體，例如對c-erbB-2親和性增加的抗體，如Schier等,1996,J.Mol.Biol.263:551所述。因此，該類技術可用于制備人胰高血糖素受體的抗體。例如可在檢測是否存在胰高血糖素受體的體外或體內測定法中使用針對人胰高血糖素受體的抗原結合蛋白。盡管人類、部分人類或人源化抗體可適用于許多應用，尤其是涉及將抗體給予人類受試者，但是其它類型的抗原結合蛋白也適用于某些應用。本發(fā)明的非人類抗體可來源于例如任何生產抗體的動物，例如小鼠、大鼠、兔、山羊、驢或非人靈長類(例如猴子，如食蟹猴或獼猴)或猿(例如猩猩))。本發(fā)明的非人類抗體可用于例如體外或基于細胞培養(yǎng)的應用中，或其它任何應用，其中不發(fā)生對本發(fā)明抗體的免疫應答、不顯著、可以預防、不關心或期望。下文的實施例2描述了鼠抗體的生成。在一個實施方案中，將本發(fā)明的非人類抗體給予非人受試者。在另一個實施方案中，該非人類抗體不會在非人受試者中引起免疫應答。在另一個實施方案中，非人類抗體來自與非人受試者相同的種屬，例如將本發(fā)明的小鼠抗體給予小鼠?？赏ㄟ^用期望免疫原免疫該種屬的動物生產具體種屬的抗體或使用人工體系生成該種屬的抗體(例如，細菌或基于噬菌體展示體系用于生成具體物種的抗體)或通過例如用另一物種的恒定區(qū)取代抗體的恒定區(qū)將一個物種的抗體轉化成另一物種的抗體，或通過取代抗體的一個或多個氨基酸殘基這樣其與來自其它物種的抗體序列更相似。在一個實施方案中，該抗體為嵌合抗體，其包含來源于兩個或多個不同物種的抗體的氨基酸序列。也可通過^f壬何傳統(tǒng)技術制備抗體。例如，可從天然表達這些抗體的細胞將其純化(例如，可從生產抗體的雜交瘤將其純化)或使用本領域任何已知的技術在重組表達系統(tǒng)中生產。參見，例如，MonoclonalAntibodies,Hybridomas:ANewDimensioninBiologicalAnalyses,Kennet等(編輯)，PlenumPress,NewYork(1980);和Antibodies:ALaboratoryManual,HarlowandLand(編輯)，ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY,(1988)。這在下文的核酸部分討論?？赏ㄟ^任何已知技術制備抗原結合蛋白并篩選期望性質。一些技術涉及分離編碼相關抗原結合蛋白(例如，抗胰高血糖素受體抗體)的多肽鏈(或其部分)的核酸，并通過重組DNA技術操作核酸。該核酸可與另一相關核酸融合或經修飾(例如通過誘變或其它傳統(tǒng)技術)以添加、缺失或替換一個或多個氨基酸殘基。當需要提高根據本發(fā)明包含一個或多個上述CDRs的抗體的親和性時，可通過多種親和成熟方案包括維持CDRs(Yang等，J.Mol.Biol.,254,392-403,1995)、鏈替換(Marks等，Bio/Technology,10,779-783,1992)、使用大腸桿菌的突變抹(Low等，J.Mol.Biol.,250,350-368,1996)DNA重排(Patten等，Curr.Opin.Biotechnol.,8,724-733,1997)、噬菌體展示(Thompson等，J.Mol.Biol.,256,7-88,1996)以及其它PCR技術(Crameri等，Nature,391,288-291,1998)。所有這些親和力成熟方法討論于Vaughan等，NatureBiotechnology,16,535-539,1998中?？贵w片段在另一方面本發(fā)明提供本發(fā)明抗胰高血糖素受體片段。該片段可完全由抗體衍生序列組成或可包含附加序列?？乖Y合片段的實例包括Fab、F(ab，)2、單鏈抗體、雙鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體和結構域抗體。其它實例提供于Lunde等，2002,Biochem.Soc.Trans.30:500-06?？山洶被針?短肽接頭)連接重鏈和輕鏈可變結構域(Fv區(qū))形成單鏈抗體，從而得到單多肽鏈。已通過將編碼肽接頭的DNA融合在編碼兩個可變結構域多肽(Vt和Vh)的DNAs之間制備該單鏈FVs(scFvs)。所得多肽可折疊回自身形成抗原結合單體，或它們可形成多聚體(例如，二聚體、三聚體或四聚體)，取決于兩個可變結構域之間的柔性接頭的長度(Kortt等，1997,Prot.Eng.10:423;Kortt等，2001,Biomol.Eng.18:95-108)。通過組合包含多肽的不同VL和VH,可形成與不同表型結合的多體scFvs(Kriangkum等，2001，Biomol.Eng.18:31-40)。已研發(fā)的用于生產單鏈抗體的技術包括美國專利號4946778;Bird,1988,Science242:423;Huston等，1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879;Ward等，1989,Nature334:544,deGraaf等，2002,MethodsMolBiol.178:379-87中描述的那些。來源于本文提供的抗體的單鏈抗體包括但不限于包含可變結構域組合L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、U0H10、U皿l、L12H12、U3H13、L14H14、L15H15、L16H16、L17H17、L18H18、L19H19、L20H20、L21H21、L22H22和L23H23的scFvs,均涵蓋于本發(fā)明。也可通過抗體的蛋白水解作用例如根據傳統(tǒng)方法用胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化完整的抗體獲得來源于抗體的抗原結合片段。舉例而言，可用胃蛋白酶酶裂解抗體提供稱作F(ab，)2的5S片段生產抗體片段?？?5使用巰基還原劑進一步裂解這一片段產生3.5SFab，單價片段。可選擇性的，可使用巰基保護基團進行該裂解反應得到二硫鍵的裂解。作為可選擇的，使用木瓜蛋白酶的酶裂解直接產生兩個單價Fab片段和一個Fc片段。這些方法描述于例如Goldenberg,美國專利號4,331,647,Nisonoff等，Arch.Biochem.Biophys.89:230,1960;Porter，Biochem.J.73:119,1959;Edelman等,MethodsinEnzymology1:422(AcademicPress1967);以及Andrews,S.M.和Titus，J.A.CurrentProtocolsinImmunology(ColiganJ.E.等，編輯)，JohnWiley&Sons,NewYork(2003),第2.8.1-2.8.10頁和第2.10A.1-2.10A.5頁。其它裂解抗體的方法，例如制備重鏈以形成單價重-輕鏈片段(Fd),進一步裂解片段或也可使用其它酶、化學或基因技術，只要片段與可被該完整抗體識別的抗原結合。另一種形式的抗體片段為包含一個或多個抗體互補決定區(qū)(CDRs)的肽?？赏ㄟ^構建編碼相關CDR的多肽獲得CDRs。例如可通過使用聚合酶鏈式反應用抗體生成細胞的mRNA作為才莫板合成可變區(qū)制備該類多肽(參見,例如，Larrick等，Methods:ACompaniontoMethodsinEnzymology2:106,1991;Courtenay畫Luck,"GeneticManipulationofMonoclonalAntibodies,"MonoclonalAntibodies:Production,EngineeringandClinicalApplication,Ritter等.(編輯)，166頁(CambridgeUniversityPress1995);和Ward等，"GeneticManipulationandExpressionofAntibodies,"MonoclonalAntibodies:PrinciplesandApplications,Birch等，(編輯)，137頁(Wiley-Liss,Inc.1995))。該抗體片段可進一步包含本文所述抗體的至少一個可變結構域。因此，例如，V區(qū)結構域可為單體并且是Vh或Vl結枸域，其可以如下文所迷的至少等于1x10々M或更低的親和度獨立與胰高血糖素受體結合。該可變區(qū)結構域可為任何天然可變結構域或其基因工程形式。基因工程形式指使用重組DNA工程技術生產的可變區(qū)結構域。該基因工程形式包括例如通過向特異抗體的氨基酸序列插入、缺失或改變從特異抗體可變區(qū)產生的。具體實例包括包含只含一個CDR以及任選來自一個抗體的一個或多個框架氨基酸和來自另一抗體的可變區(qū)結構域剩余部分的基因工程可變區(qū)結構域?？勺儏^(qū)結構域可與至少一個其它抗體結構域或其片段在C端氨基酸共價連接。因此，舉例而言，存在于可變區(qū)結構域的VH結構域可與免疫球蛋白CH1結構域或其片段相連。相似地，結構域可與CK結構域或其片段相連。以這種方式，例如，該抗體可為Fab片段，其中抗原結合結構域包含它們的C端分別與CH1和Ck結構域共價連接的聯合VH和Vl結構域?？捎闷渌被嵫娱LCH1結構域，例如以提供鉸鏈區(qū)或如Fab，片段中的部分鉸鏈結構域或提供其它結構域，例如抗體CH2和CH3結構域。抗原結合蛋白的衍生物和變異體例如可通過隨機誘變或通過定點誘變(例如寡聚核苷酸誘導的定點誘變)改變編碼對應于氨基酸序列A1-A23的核苷酸序列L1-L23和Hl-H23以產生與未突變多聚核苷酸相比包含一個或多個具體核苷酸替換、缺失或插入的經改變的多聚核苷酸。用于產生該類改變的技術實例描述于Walder等，1986，Gene42:133;Bauer等,1985,Gene37:73;Craik,BioTechniques，January1985,12-19;Smith等，1981,GeneticEngineering:PrinciplesandMethods,PlenumPress;以及美國專利號4518584和4737462。這些和其它方法可用于產生例如與未書f生化抗體相比具有期望性質例如親和性、親和力或對胰高血糖素受體的特異性增強、體內或體外活性或穩(wěn)定性增強或體內副作用降低的抗胰高血糖素受體抗體的衍生物。本發(fā)明領域的其它抗胰高血糖素受體抗體衍生物包括抗胰高血糖素受體抗體或其片段與它蛋白或多肽的共價或聚集結合物，例如通過表達包含與抗胰高血糖素受體抗體多肽的N端或C端融合的異源多肽的重組融合蛋白。例如，該結合肽可為異源信號(或引導)多肽，例如酵母a因子前導肽或例如表位標簽的肽。包含融合蛋白的抗原結合蛋白可包含被添加以輔助抗原結合蛋白的純化或鑒定的肽(例如多聚組氨酸)?？乖Y合蛋白也可與FLAG肽連接，如H叩p等，Bio/Technology6:1204,1988和美國專利5011912所述。FLAG肽具有高抗原性并提供被特異單克隆抗體(mAb)可逆結合的表位，允許已表達重組蛋白的快速檢測和方便純化?？缮虡I(yè)購買(Sigma,St.Louis,MO)用于制備其中FLAG肽與給定多肽融合的融合蛋白的試劑。在另一個實施方案中，包含一個或多個抗原結合蛋白的寡聚體可用作胰高血糖素受體拮抗劑或用更高級的寡聚體。寡聚體可以是共價連接的或非共價連接的二聚體、三聚體或更高的寡聚體形式?？墒褂冒瑑蓚€或更多個抗原結合蛋白的寡具體，其中一個實例為同型二聚體。其它寡聚體包括異二聚體、同型三聚體、異三聚體、同型四聚體、雜四聚體等。一個實施方案是針對包含多個抗原結合蛋白的寡聚體，它們通過與抗原結合蛋白融合的肽部分之間的共價或非共價相互作用連接。該類肽可為肽接頭(spacers)或具有促進寡聚化作用性質的肽。亮氨酸拉鏈和某些來源于抗體的多肽為可促進抗原結合蛋白寡聚化的肽，如下文詳細描述。在具體的實施方案中，寡聚體包含兩個至四個抗原結合蛋白。寡聚體的抗原結合蛋白可為任何形式，如上文所述任何形式，例如變異體或片段。優(yōu)選地，該寡聚體包含具有胰高血糖素受體結合活性的抗原結合蛋白。在一個實施方案中，使用來源于免疫球蛋白的多肽制備寡聚體。制備包含一些與抗體衍生多肽(包括Fc結構域)的不同部位融合的異源多肽已描述于例如Ashkenazi等，1991,PNASUSA88:10535;Byrn等，1990,Nature344:677;和Hollenbaugh等，1992"ConstructionofImmunoglobulinFusionProteins",CurrentProtocolsinImmunology,Suppl.4,第10.19.1-10.19.11頁。本發(fā)明的一個實施方案是針對包含兩個由融合抗胰高血糖素受體抗體的胰高血糖素結合片段與抗體的Fc區(qū)產生的融合蛋白的二聚體?？赏ㄟ^以下方式制備二聚體例如在適當的表達載體中插入編碼融合蛋白的基因融合，在用重組表達載體轉化的宿主細胞中表達該融合基因并允許已表達融合蛋白像抗體分子一樣組裝，其中Fc部分之間的鏈間二硫鍵形成二聚體。如本文所使用術語"Fc多肽"包括來源于抗體Fc區(qū)的天然和突變蛋白形式的多肽。也包括包含促進二聚體化的鉸鏈區(qū)的該類多肽的截短形式。包含Fc部分(以及由其形成的寡聚體)的融合蛋白提供了在蛋白A或蛋白G柱子上進行親和層析法方便純化的優(yōu)勢。PCT申請WO93/10151(以參考形式并于本文)中一種適當的Fc多肽為從N端鉸鏈區(qū)延伸至人IgGl抗體的Fc區(qū)的天然C端的單鏈多肽。另一種可用的Fc多肽為美國專利5457035和Baum等，1994,EMBO88J.13:3992-4001中描述的Fc突變蛋白。該突變蛋白的氨基酸序列與WO93/10151中所示天然Fc序列的氨基酸序列相同，除了氨基酸19從亮氨酸變?yōu)楸彼?，氨基?0從亮氨酸變?yōu)楣劝滨０芬约鞍被?2從甘氨酸變?yōu)楸彼?。該突變蛋白表現出對Fc受體的親和力降低。在其它實施方案中，抗胰高血糖素受體抗體的重鏈和/或輕鏈可被取代為抗體重鏈和/或輕鏈的可變部分。或者，該寡聚體為包含多個抗原結合蛋白的融合蛋白，包含或不包含接頭肽(spacerpeptides)。這些適當的接頭肽描述于美國專利4751180和4935233。制備寡聚抗原結合蛋白的另一種方法涉及使用亮氨酸拉鏈。亮氨酸拉鏈結構域為促進它們所存在的蛋白寡聚化作用的肽。最初發(fā)現亮氨酸拉鏈存在于數種DNA結合蛋白中(Landschulz等，1988，Science240:1759),此后發(fā)現存在于各種不同蛋白中。在已知的亮氨酸拉鏈中為可二聚體化或三聚體化的天然肽或其衍生物。適用于生產可溶寡聚蛋白的亮氨酸拉鏈結構域的實例描述于PCT申請WO94/10308，來源于肺表面活性蛋白D(SPD)的亮氨酸拉鏈描述于Hoppe等，1994,FEBSLetters344:191,以參考形式并于本文。允許與其融合的異源蛋白穩(wěn)定三聚體化的經修飾的亮氨酸拉鏈的使用描述于Fanslow等，1994,Semin.Immunol.6:267-78。在一種方法中，在適當的宿主細胞中表達包含與亮氨酸拉鏈肽融合的抗胰高血糖素受體抗體片段或衍生物的重組融合蛋白，從培養(yǎng)物上清中收集可溶寡聚抗胰高血糖素受體抗體片段或其衍生物。在另一個實施方案中，該抗體衍生物可包含至少本文公開的CDRs之一。舉例而言，可將一個或多個CDR整合入已知的抗體骨架區(qū)(IgGl,IgG2等)或與適當的載體結合以增強其半衰期。適當載體包括但不限于Fc、白蛋白、轉鐵蛋及類似物質。這些和其它適當的載體為本領域已知。該結合CDR肽可為單體、二聚體、四聚體或其它形式。在一個實施方案中，一個或多個水溶性多聚體在結合劑的一個或多個特異位點結合，例如在氨基端。在一個實例中，抗體衍生物包含一個或多個水溶性多聚體附著物包括但不限于聚乙二醇、聚氧乙烯二醇或聚丙二醇。參見，例如，美國專利號4640835、4496689、4301144、4670417、4791192和4179337。在一些實施方案中，衍生物包含一個或多個一曱氧基-聚乙二醇、葡聚糖、纖維素或其它基于碳水化合物的聚合物，聚(N-乙烯基吡咯酮)-聚乙二醇、聚氧乙烯多元醇(例如甘油)和聚乙烯醇，以及該類聚合物的混合物。在一些實施方案中，一個或多個水溶性聚合物與一個或多個側鏈隨機結合。在一些實施方案中。PEG可提高結合劑例如抗體的治療作用。一些該類方法描述于例如美國專利號6133426,其以參考形式以任何目的并于本文。應當理解的是本發(fā)明抗體可具有至少一個氨基酸替換，只要該抗體保留了結合特異性。因此，抗體結構的修飾包含于本發(fā)明范疇。這些可包括不破壞抗體胰高血糖素受體結合能力的氨基酸替換，其可為保守或非保守的。保守氨基酸替換可包括非天然氨基酸殘基，其通常經化學肽合成整合而不是生物系統(tǒng)合成。這些包括擬肽和其它反向或倒轉形式的氨基酸部分。保守氨基酸替換也可涉及用非天然殘基替換天然氨基酸殘基這樣對該位點氨基酸殘基的極性或電荷作用很小或沒有作用。非保守替換可涉及一類氨基酸或氨基酸類似物的一個成員與具有不同物理性質(例如，體積、極性、疏水性、電荷)的另一類氨基酸的成員交換。該被替換的殘基可引入與非人類抗體同源的人類抗體區(qū)，或引入該分子的非同源區(qū)。而且，本領域技術人員可生成在各期望氨基酸殘基上包含氨基酸替換的待測變異體?？墒褂帽绢I域技術人員已知的活性測定法篩選該類變異體。該類變異體可用于收集關于適當變異體的信息。舉例而言，如果發(fā)現某一氨基酸殘基可引起活性破壞、非期望的降低或不當的活性，可避免具有該類變化的變異體。換言之，基于從這些常規(guī)試驗收集的信息，本領域技術人員可輕松確定應避免進一步替換(單獨或與其它突變組合)的氨基酸。技術人員可使用已知技術確定如本文所列的多肽的適當變異體。在一些實施方案中，本領域技術人員可通過靶向對于活性不重要的區(qū)域鑒定經改變后不會破壞活性的分子適當區(qū)域。在一些實施方案中，可鑒定在相似多肽中保守的殘基或分子部分。在一些實施方案中，甚至可保守替換對于生物活性或結構重要的區(qū)域而不破壞生物活性或不會不利作用于多肽結構。此外，本領域技術人員可考察結構-功能研究鑒定對活性或結構重要的相似多肽中的殘基。鑒于這一對比，可預測對應于在相似蛋白中對活性或結構重要的氨基酸殘基的蛋白質中氨基酸殘基的重要性。本領域技術人員可為這些經預測重要的氨基酸殘基選擇化學相似氨基酸替換。本領域技術人員也可分析與相似多肽的結構相關的三維結構和氨基酸序列。鑒于該類信息，本領域技術人員可預測就三維結構而言抗體的氨基酸殘基比對。在一些實施方案中，本領域技術人員可選擇不對經預測在蛋白質表面的氨基酸殘基進行顯著改變，因為該類殘基可能參與與其它分子的重要相互作用。許多科學出版物致力于二級結構的預測。參見，MoultJ.,Curr.Op.Biotech.,7(4):422畫427(1996),Chou等，Biochemistry,13(2):222-245(1974);Chou等，Biochemistry,113(2):211-222(1974);Chou等，Adv.Enzymol.Relat.AreasMol.Biol.,47:45-148(1978);Chou等，Ann.Rev.Biochem.,47:251-276和Chou等，Biophys.J.,26:367-384(1979)。此外，目前可使用計算機程序輔助預測二級結構。舉例而言，序列同一性大于30%或相似性大于40%的兩個多肽或蛋白質通常具有相似的結構拓樸學。近期蛋白結構數據庫(PDB)的增長增強了二級結構的可預測性，包括多肽或蛋白結構中潛在的折疊數量。參見，Holm等，Nucl.Acid.Res.,27(l):244-247(1999)。已表明(Brenner等，Curr.Op.Struct.Biol"7(3):369-376(1997))在給定多肽或蛋白質中存在有限數量的折疊并且一旦確定了臨界數量的結構，結構預測將變得顯著更加精確。預測二級結構的其它方法包括"穿接(threading)"(Jones,D.,Curr.Opin.Struct.Biol.,7(3):377國87(1997);Sippl等，Structure,4(1):15-19(1996》，"圖譜分析(profileanalysis)"(Bowie等，Science,253:164-170(1991);Gribskov等,Meth.Enzym.,183:146-159(1990);Gribskov等,Proc.NatAcad.Sci.,84(13):4355畫4358(1987))和"進化聯系(evolutionarylinkage)"(參見Holm,supra(1999),andBrenner,supra(1997))。在一些實施方案中，抗體變異體包括糖基化變異體，其中與母體多肽的氨基酸序列相比改變了糖基化位點的數量和/或類型。在一些實施方案中，變異體與天然蛋白質相比具有更多或更少數量的N連接糖基化位點?；蛘撸コ撔蛄械奶鎿Q可移除現有的N連接糖鏈。也提供了N連接糖鏈的重排，其中去除了一個或多個N連接糖鏈位點(通常為天然存在的那些)并創(chuàng)造了一個或多個新的N連接位點。其它優(yōu)選抗體變異體包括半胱氨酸變異體，與母體氨基酸序列相比其中91缺失或由另一氨基酸(例如絲氨酸)替換一個或多個半胱氨酸殘基。當抗體必須折疊成生物活性構象時(例如在分離可溶包涵體之后)可用半胱氨酸變異體。半胱氨酸變異體通常比天然蛋白質具有較少的半胱氨酸殘基，并通常具有偶數個半胱氨酸以最小化未配對半胱氨酸引起的相互作用。本領域技術人員可在需要該類替換時確定期望的氨基酸替換(保守或非保守)。在一些實施方案中，氨基酸替換可用于鑒定人胰高血糖素受體抗體的重要殘基或者增加或降低本文所述人胰高血糖素受體抗體的親和力。根據一些實施方案，優(yōu)選的氨基酸替換為以下(l)降低蛋白質水解敏感性，(2)降低氧化敏感性，(3)改變形成蛋白質復合物的結合親和力，(4)改變結合親和力和/或(4)賦予或修飾該類多肽上的其它物理化學或功能性質。根據一些實施方案，可在天然存在序列中(在一些實施方案中，在形成分子間接觸的結構域之外的多肽部分)進行單個或多個氨基酸替換(在一些實施方案中為保守氨基酸替換)。在一些實施方案中，保守氨基酸替換通常不會本質上改變母體序列的結構特性(例如，替換氨基酸不應破解存在于母體序列中的螺旋或干擾特征化母體序列的其它類型二級結構)。本領域認可的多肽二級和三級結構的實例描述于Proteins,StructuresandMolecularPrinciples(Creighton,編輯，W.H.FreemanandCompany,NewYork(1984));IntroductiontoProteinStructure(C.BrandenandJ.Tooze,eds.,GarlandPublishing,NewYork,N.Y.(1991》；以及Thornton等，Nature354:105(1991),其以參考形式并于本文。在一些實施方案中，本發(fā)明抗體可與多聚體、脂類或其它部分(moieties)化學鍵合?？乖Y合試劑可包含至少一個本文描述的CDRs,其摻入生物相容性骨架結構中。在一個實例中，該生物相容性骨架結構包含足以形成構象穩(wěn)定結構支持或骨架或支架的多肽或其部分，其可在局限的表面區(qū)域展示可與抗原結合的一個或多個氨基酸序列(例如，CDRs、可變區(qū)等)。該類結構可為天然存在多肽或多肽"折疊"(結構基序)，或相對與天然多肽或折疊可具有一個或多個修飾，例如氨基酸添加、缺失或替換。這些支架可來源于任何物種(或多于一個物種)的多肽，例如，人類、其它哺乳動物、其它脊推動物、無脊推動物、細菌或病毒。生物可溶性骨架結構通常是基于蛋白質支架或骨架而不是免疫球蛋白結構域。舉例而言，可使用基于纖維結合素、錨蛋白、脂質運載蛋白(lipocalin)、新抑癌蛋白、細胞色素b、CP1鋅指蛋白、PST1、巻曲螺旋、LACI-D1、Z結構域和淀粉酶抑肽結構域(參見，例如，Nygren和Uhlen,1997,CurrentOpinioninStructuralBiology,7,463-469》此外，本領域技術人員可認識到適當的結合劑包括這些抗體的部分，例如一個或多個重鏈CDR1、CDR2、CDR3,輕鏈CDR1、CDR2和CDR3,如本文所具體7^開。至少一個重鏈CDR1、CDR2、CDR3、CDR1,CDR2和CDR3區(qū)具有至少一個氨基酸替換，只要該抗體保留了非替換CDR的結合特異性。該抗體的非CDR部分可為非蛋白分子，其中體的胰高血糖素信號傳導。該抗體^非CDR部分可為非i白質分子，其中該抗體在竟爭結合測定法中顯示出與至少抗體A1-A23之一所顯示相似的與人GCGR肽的結合類型，和/或中和胰高血糖素的活性?？贵w的非CDR部分可由氨基酸組成，其中該抗體為重組結合蛋白或合成肽，并且該重組結合蛋白交叉阻斷本文公開的抗體與人GCGR的結合和/或中和體內或體外胰高血糖素活性?？贵w的非CDR部分可由氨基酸組成，其中該抗體為重組抗體，并且該重組抗體在竟爭結合測定法中顯示出與至少抗體A1-A23之一所顯示相似的與人GCGR肽的結合類型，和/或中和胰高血糖素信號傳導。核酸一方面，本發(fā)明提供分離的核酸分子。該核酸分子包含例如編碼全部或部分抗原結合蛋白的多聚核苷酸，例如本發(fā)明抗體的一條鏈或兩條鏈，或其片段、衍生物、突變蛋白或變異體；足以用作雜交探針的多聚核苷酸；PCR引物或用于鑒定、分析、突變或擴增編碼多肽的多聚核苷酸的測序引物；用于抑制多聚核苷酸表達的反義核酸以及其互補序列。該核酸可為任何長度。例如它們的長度可為5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、75、100、125、150、175、200、250、300、350、400、450、500、750、1000、1500、3000、5000或更多個核普酸，和/或包含一個或多個附加序列，例如調控序列，和/或是較大核酸例如載體的一部分。該核酸可為單鏈或雙鏈并包含RNA和/或DNA核苷酸以及其人工變異體(例如，肽核酸)?？蓮慕汫CGR抗原免疫的小鼠B細胞中分離編碼抗體多肽(例如，重鏈或輕鏈、僅可變結構域或全長)的核酸?？赏ㄟ^常規(guī)方法例如聚合酶鏈式反應(PCR)分離該核酸。編碼重鏈和輕鏈可變區(qū)的核酸序列如上文所示。熟練的技術人員可理解由于遺傳密碼的簡并性，本文公開的各多肽序列可由更多數量的其他核酸序列編碼。本發(fā)明提供編碼本發(fā)明抗原結合蛋白的各簡并核苷酸序列。本發(fā)明進一步提供在具體雜交條件下與其他核酸(例如，包含任何A1-A14的核普酸序列的核酸)雜交的核酸。雜交核酸的方法為本領^或熟^口。參見,例長口,CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWiley&Sons,N.Y.(1989),6.3.1-6.3.6。如本文定義，例如，中等嚴格條件使用包含5X氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)的預洗溶液、0.5%SDS、1.0mMEDTA(pH8.0)、約50°/。曱酰胺的雜交緩沖液、6XSSC和55°C的雜交溫度(或其他相似的雜交溶液，例如包含約50%甲酰胺的，以42°C雜交)，并且洗脫條件為60°C,使用0.5XSSC、0.1%SDS。嚴格雜交條件在6XSSC中于45°C雜交，然后于68°C在0.1XSSC、0.2%SDS中洗滌一次或多次。此外，本領域技術人員可操作雜交和/或洗滌條件以增加或降低雜交嚴才各度這樣包含相互之間至少65、70、75、80、85、90、95、98或99%同源的核苷酸序列的核酸通常仍可以相互雜交。影響雜交條件選擇的基本參數和設計適當條件的指導列于例如Sambrook:Fritsch和Maniatis(1989，MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y,,第9和11章；CurrentProtocolsinMolecularBiology,1995，Ausubel等編輯，JohnWiley&Sons,Inc.,第2.10和6.3-6.4節(jié))并可由具有本領域普通技術的人員基于例如DNA的長度和/或堿基組成輕松確定。可通過突變在核酸中引入變化，藉此導致其編碼的多肽(例如，抗原結合蛋白)氨基酸序列的變化。可使用本領域已知的任何技術引入突變。在一個事實方案中，使用例如定點誘變方案改變一個或多個具體氨基酸殘基。在另一個實施方案中，使用例如隨機誘變方案改變一個或多個隨機選擇的殘基。無論其如何生成，可表達突變多肽并篩選期望性質。94可將突變引入核酸而不顯著改變其編碼多肽的生物學活性。例如，可進行引起非必需氨基酸殘基處氨基酸替換的核香酸替換。在一個實施方案中，突變本文為L-1-L-23和H-l至H-23提供的核苷酸序列或其片段、變異體或衍生物這樣其編碼包含本文所示L-l至L-23和H-l至H-23的氨基酸殘基的一個或多個缺失或替換，成為兩個或多個序列相異的殘基。在另一個實施方案中，誘變作用在本文所示L-l至L-23和H-l至H-23的一個或多個氨基酸殘基附近插入一個氨基酸成為兩個或多個序列相異的殘基?；蛘撸蓪⒁粋€或多個突變引入核酸以選擇性改變其編碼多肽的生物學活性(例如，與GCGR結合)。例如，該突變可在數量上或性質上改變生物學活性。量變的實例包括增加、降低或消除該活性。質變的實例包括改變抗原結合蛋白的抗原特異性。在另一方面，本發(fā)明提供適于用做引物或檢測本發(fā)明核酸序列的雜交探針的核酸分子。本發(fā)明的核酸分子可僅包含編碼本發(fā)明全長多肽的核酸序列的一部分，例如，可用作探針或引物或編碼本發(fā)明多肽活性部分的片段(例如，GCGE結合部分)的片段。編碼本發(fā)明多肽的轉錄物。該探針可包含標記基團，例如放射性同位素、熒光化合物、酶或酶輔因子。該類探針可用于鑒定表達該多肽的細胞。在另一方面本發(fā)明提供包含編碼本發(fā)明多肽或其部分的核算的載體。載體的實例包括但是不限于質粒、病毒載體、非游離基因哺乳動物載體和表達載體，例如重組表達載體。本發(fā)明的重組表達載體可包含適于該核酸在宿主細胞中表達的形式的本發(fā)明核酸。該重組表達載體包括一個或多個調控序列，基于用于表達的宿主細胞進行篩選，其與該預表達的核酸序列可操作性相連。調控序列包括引導核苦酸序列在多個種類宿主細胞中組成型表達的(例如，SV40早期基因增強劑、勞斯氏肉瘤病毒啟動子和細胞巨化病毒啟動子)，引導僅在某些宿主細胞中核苦酸序列的表達的(例如，組織特異調控序列，參見Voss等，1986,TrendsBiochem.Sci.11:287,Maniatis等，1987,Science236:1237，其完整內容以參考形式并于本文)以及引導核苷酸序列響應具體處理或條件的誘導型表達的(例如，哺乳動物細胞中的金屬硫堇啟動子和原核和真核系統(tǒng)二者中的四環(huán)霉素反應(tet-sesponsive)啟動子和/或鏈霉素反應啟動子(同前))。本領域技術人員應理解表達載體的設計取決于例如用于轉化的宿主細胞的選擇、所需蛋白表達水平等因素。本發(fā)明的表達載體可引入宿主細胞，藉此生產由本文所述核酸編碼的蛋白或肽，包括融合蛋白或肽。另一方面，本發(fā)明提供可引入本發(fā)明表達載體的宿主細胞。宿主細胞可為任何原核或真核細胞。原核宿主細胞包括革蘭氏陰性或革蘭氏陽性生物體，例如大腸桿菌或桿菌。更高級的真核細胞包括昆蟲細胞、酵母細胞以及哺乳動物源的確立細胞系。適當哺乳動物宿主細胞系的實例包括中國倉鼠卯巢(CHO)細胞或它們的衍生物例如VeggieCHO和在無血清培養(yǎng)基中生長的相關細胞系(參見Rasmussen等，1998Cytotechnology28:31)或CHO林DXB-ll，其缺失DHFR(參見Urlaub等，1980,Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4216-20)。其它CHO細胞系包括CHO國Kl(ATCC#CCL-61)、EM9(ATCC#CRL國1861),和UV20(ATCC#CRL-1862)。其它宿主細胞包括猴腎細胞的COS-7系(ATCCCRL1651)(參見Gluzman等，1981,Cell23:175)、L細胞、C127細胞、3T3細胞(ATCCCCL163),AM-1/D細胞(描述于美國專利序列號6210924)、HeLa細胞、BHK(ATCCCRLIO)細胞系、來源于非洲綠猴腎細胞系CV1的CV1/EBNA細胞系(ATCCCCL70)(參見McMahan等,1991,EMBOJ.10:2821)、人胚腎細胞例如293,293EBNA或MSR293、人上皮A431細胞、人Colo205細胞、其它經轉化靈長動物細胞系、正常二倍體細胞、來源于初生組織體外培養(yǎng)物的細胞抹、初移植體、HL-60、U937、HaK或Jurkat細胞。用于細菌、真菌、酵母和哺乳細胞宿主的適當克隆和表達載體描述于Pouwels等(CloningVectors:ALaboratoryManual,Elsevier,NewYork,1985)。可通過傳統(tǒng)轉化或轉染技術將載體DNA引入原核或真核細胞中。對于穩(wěn)定的哺乳動物轉染而言，取決于使用的表達載體和轉染技術，已知只有一小部分細胞可將外源DNA整合入它們的基因組中。為了鑒定和篩選這些整合子，通常將編碼篩選標記(例如抗生素抗性)的基因與所關注基因一起引入宿主細胞。優(yōu)選的篩選標記包括可賦予藥物(如G418、潮霉素和曱氨喋呤)抗性的那些。在其它方法中可通過藥物篩選鑒別包含被引入核酸的穩(wěn)定轉染細胞(例如，整合了篩選基因的細胞可存活，而其它細胞則死亡)?？稍谔岣叨嚯谋磉_的條件下培養(yǎng)已轉化細胞，可通過常規(guī)蛋白純化方法回收多肽。一種該純化方法描述于下文實施例。預用于本文的多肽包括基本同源的重組哺乳動物抗胰高血糖素受體抗體多肽，其基本不含污染性內源材料?？乖Y合蛋白的活性一方面，本發(fā)明提供抗原結合蛋白，尤其是能與人胰高血糖素受體特異性結合的人類、人源化或嵌合抗體。該類抗體包括可減少或中和胰高血糖素信號傳導(由例如實施例4描述的基于細胞的功能測定法檢測)的拮抗或中和抗體。在一個實施方案中，抗原結合蛋白，例如本發(fā)明的人類抗體的IC50值為90nM或更低；在另一個實施方案中，IC50值為80nM或更低；在另一個實施方案中，70nM或更低；在另一個實施方案中，60nM或更j氐；在另一個實施方案中，50nM或更^f氐；在另一個實施方案中，40nM或更j氐；在另一個實施方案中，30nM或更低；在另一個實施方案中，25nM或更低。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白例如本發(fā)明的人類抗體可與人胰高血糖素受體特異性結合，而且其IC50值與參比抗體基本相似。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白具有由下述實施例所描述的測定法(或相似測定法)檢測的與參比抗體基本相似的Kb(或Kd)。在本文中，術語"基本相似，，意為與參比抗體的IC50或Kb(或Kd)可比或約100%、99%、98%、97%、95%、90%、85%、80%、75°/。、70%、65%或50Q/q。參比抗體包括，例如，具有重鏈和輕鏈組合L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、U皿l、U2H12、L13H13、L15H15、L21H21及L22H22的抗體。在一個實施方案中，參比抗體包括A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A畫7、A醫(yī)8、A國9、A國ll、A國12、A-13、A-15、A-21及A-22。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白例如本發(fā)明的人類抗體可與人胰高血糖素受體特異性結合，并能降低動物模型的血糖。在一個實施方案中，與未處理動物相比血糖降低2%;在另一個實施方案中，與未處理動物相比血糖降低5%;在另一個實施方案中，與未處理動物相比血糖降低10%;在另一個實施方案中，與未處理動物相比血糖降低15°/。，在另一個實施方案中為20%,在另一個實施方案中為25%或更多。血糖降低量由劑量控制。對于動物或人類患者而言，治療有效劑量是為將血糖降低至正常范圍的劑量。示例動物模型為ob/ob小97鼠，如下文實施例6所描述。在另一個實施方案中，本發(fā)明的人類抗體可與人胰高血糖素受體特異性結合并提高動物模型的葡萄糖清除率。示例動物模型為食蟹猴，如下文實施例7所描述。提高葡萄糖清除率指在動物或人類患者口服葡萄糖后血糖降低所需的時間量，為葡萄糖耐受的量度。它可由標準試驗例如口服葡萄糖耐量試驗(OGTT)檢測，如下文實施例所描述。本發(fā)明的抗原結合蛋白可提高動物模型的葡萄糖清除率。此外，抗原結合蛋白可改善其它與2型糖尿病和高血糖癥相關的體內指標，包括但不限于空腹糖耐量、血脂異常和代謝綜合癥。與人胰高血糖素受體結合在一個實施方案中，本發(fā)明提供與參比抗體交叉竟爭結合的抗原結合蛋白，其中參比抗體包含選自L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、LllHll、L12H12、L13H13、L15H15、L17H17、L21H21和L22H22的輕鏈和重鏈結構域的組合。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供與參比抗體交叉竟爭結合的人類抗體，其中該參比抗體為A-1、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9、A-ll、A-12、A-13、A-15、A-21和A-22。在另一方面，本發(fā)明提供與人胰高血糖素受體的Ser80-Ser119區(qū)域結合的人類抗體。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供與參比抗體交叉竟爭結合的人類抗體，其中參比抗體與人胰高血糖素受體的Ser80-Ser119區(qū)域結合。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供與人胰高血糖素受體的Ser80-Ser119區(qū)域結合的人類抗體，其IC50值為90nM或更低，在另一個實施方案中為80nM或更低，在另一個實施方案中為70nM或更低，在另一個實施方案中為60nM或更低，在另一個實施方案中為50nM或更低，在另一個實施方案中為40nM或更低，在另一個實施方案中為30nM或更低，在另一個實施方案中為25nM或更低，由例如實施例4所述測定法枱:測。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供與參比抗體交叉竟爭結合至人胰高血糖素受體的抗體，其中參比抗體為A-3。在又一實施方案中，抗原結合蛋白在結合至人胰高血糖素受體時以與參比抗體基本相同的Kd與人胰高血糖素受體結合；以與所述參比抗體基本相同的IC5o抑制人胰高血糖素受體的胰高血糖素激活；和/或與所述參比抗體交叉竟爭結合至人胰高血糖素受體，其中所述參比抗體包含選自L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、LllHll、L12H12、L13H13、L15H15、L21H21合L22H22的輕鏈和重鏈可變結構域序列。在又一實施方案中，所提供分離的人源抗體在結合至人胰高血糖素受體時以與參比抗體基本相同的Kd與人胰高血糖素受體結合；以與所述參比抗體基本相同的IC5o抑制人胰高血糖素受體的胰高血糖素激活；和/或與所述參比抗體交叉竟爭結合至人胰高血糖素受體，其中所述參比抗體選自A-l、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9、A國ll、A國12、A國13、A誦15、A國21和A國22。在又一實施方案中，所提供分離的人源抗體在結合至人胰高血糖素受體時a.與人胰高血糖素受體的氨基酸Ser80-Ser119部分特異性結合；b.以90nM或更低的IC50降低胰高血糖素信號傳導；c.降低動物模型的血糖；或(a)和(b)，或(a)、(b)和(c)。如下檢測與抗體交叉竟爭的能力。下面的實施例8描述了采用A-3作為參比抗體的示例性竟爭結合測定法。所測抗體為可克服(可與A-3竟爭結合)、部分可克服(僅部分竟爭結合)及非可克服抗體(不能與A-3竟爭結合)。結果如圖4-6所示。此外，人類抗體A-3和其它人類抗體的結合位點經構建人GCGR和GLP-1受體的嵌合受體檢測，如下文實施例9所述。如下所述及如圖7所示，采用嵌合受體的檢測表明對于抗體A-3,人胰高血糖素受體氨基酸Ser80-Ser117區(qū)域是結合必需且足夠的。此外，人GCGR包含3對半胱氨酸。對于抗體A-3，結合需要第二和第三對半胱氨酸而不是第一對。這與抗體A-18、A-21和A-10是相反的，它們僅在3對半胱氨酸均完整時結合。適應癥糖尿病尤其是2型糖尿病及其并發(fā)癥已經成為全世界日益嚴重的問題。通常，該疾病由胰臟(3細胞胰島素生成受損引起。在2型糖尿病(此疾病最常見的形式)中，人們認為遺傳和環(huán)境因素聯合引起卩細胞衰竭，使得在跟多個體中引起胰島素分泌和活性受損以及胰島素抵抗。一般認為肥胖癥是促使成人甚至兒童中2型糖尿病增加的病癥。人們還認為血脂異常，或者異常HDL(高密度脂蛋白)和LDL(低密度脂蛋白)均與2型糖尿病相關。2型糖尿病的特征為肌肉和其它器官不能響應正常循環(huán)濃度的胰島素。隨后胰臟P細胞分泌胰島素增多，即高胰島素血癥的病癥。最終卩細胞無法再補償，導致葡萄糖耐量降低、空腹葡萄糖濃度受損、慢性高血糖和組織損傷。此外，人們認為早發(fā)2型糖尿病與血脂異常，或者異常HDL(高密度脂蛋白)和LDL(低密度脂蛋白)有關。代謝綜合癥患者都表現血脂異常和高血糖癥。本發(fā)明提供抗原結合蛋白，尤其是可與胰高血糖素受體體內結合、降低動物模型血糖濃度的人類抗體?？乖Y合蛋白還可改善葡萄糖耐量。在一個實施方案中，本發(fā)明提供具有體內效價的完全人類抗體。對ob/ob小鼠單次注射抗體的作用可在注射后數天內降低血糖，為高血糖、2型糖尿病以及相關病癥提供了有效、持久的治療。單次注射抗體也可改善在下文所述食蟹猴上進行的葡萄糖耐量試驗(GTT)中血樣的葡萄糖清除率(改善葡萄糖耐量)。本發(fā)明的抗原結合蛋白，尤其是人類抗體可用于降低血液或血漿葡萄糖，改善葡萄糖耐量降低，改善空腹葡萄糖水平以及改善血脂異常。這樣，本發(fā)明的抗原結合蛋白，尤其是人類抗體可用于治療高血糖癥、2型糖尿病、代謝綜合癥和包括血脂異常的其它相關癥狀。此外，已顯示降低血糖可在某些情況下用于預防和治療具體的癌癥例如結腸癌，如Richardson等，NatureClinPractOncol2:48-53(2005),Giovannucci等,Gastroenterology132:2208-2225(2007),Krone等，IntegrativeCancerTher4(1):25-31(2005),Chang等，Diabetologia46(5):595-607(2003),Jee等，YonseiMedJ46(4):449-55(2005)所述。治療方法另一方面，治療受試者的方法，包括給予治療劑量的本發(fā)明提供的抗原結合蛋白。在一個實施方案中，抗原結合蛋白為人類抗體。本文中，術語"受試者，，指哺乳動物，包括人類，可與術語"患者"交替使用。人類抗體可用于治療、控制或預防以患者體內過量胰高血糖素和/或血糖為特點的病癥或癥狀。這些病癥包括高血糖癥、代謝綜合癥和2型糖尿病。術語"治療"包括減輕或預防至少一種癥狀或病癥的其它方面，或者減輕疾病嚴重性，等等。本發(fā)明的抗原結合蛋白尤其是人類抗體不需要產生完全治愈的效果，或根除疾病的所有癥狀或表現，即可構成有效治療劑。如相關領域所公認，作為治療劑的藥物100可減少給定疾病狀態(tài)的嚴重程度，但不需消除疾病的所有表現即可被認為是有效的治療劑。相似地，預防給藥治療不需在預防癥狀出現上完全有效即可構成有效預防劑。只減少疾病的影響(例如，通過減少其癥狀的數量或嚴重度，或通過提高另一治療效果，或通過產生另一有效作用)，或者減少受試者中疾病發(fā)生或加重的可能性就已經足夠。本發(fā)明的一個實施方案涉及包含以足以誘導反應具體病癥嚴重性的指示劑高于基線水平的持續(xù)改善的量和時間給予患者抗原結合蛋白例如人類纟元體的方法。如相關領域所理解，將包含本發(fā)明抗原結合蛋白的藥用組合物以對適應癥恰當的方式給予病人。在一個實施方案中，藥物組合物包含本發(fā)明的人類抗體。藥物組合物可采用任意適當技術包括但不限于腸道外、局部或吸入給藥。如果是注射，可通過例如關節(jié)內、靜脈內、肌肉內、損傷區(qū)內、腹膜內或皮下途徑，以快速注射或連續(xù)輸注給予藥用組合物?？煽紤]例如在疾病或損傷部位局部給藥，如透皮給藥和埋植劑持續(xù)釋放給藥。吸入給藥包括例如鼻腔或口腔吸入、采用噴霧劑、以氣霧劑形式吸入抗原結合蛋白等等。其它選擇包括口腔制劑包括片劑、糖漿劑或錠劑。以包含一個或更多其它組分例如生理學可接受載體、輔料或稀釋劑的組合物形式給予本發(fā)明抗原結合蛋白是有利的。組合物可任選額外包含一個或更多如下所述的生理學活性劑。在多個具體實施方案中，組合物包含除一個或更多本發(fā)明抗原結合蛋白(例如人類抗體)之外的一個、兩個、三個、四個、五個或六個生理學活性劑。在一個實施方案中，藥物組合物包含本發(fā)明人類抗體以及一個或更多選自以下的物質pH適合于抗體的緩沖液、抗氧化劑例如抗壞血酸、低分子量多肽(例如含少于IO個氨基酸的多肽)、蛋白質、氨基酸、糖例如糊精、絡合物例如EDTA、谷胱甘肽、穩(wěn)定劑和輔料。根據適當工業(yè)標準，也可加入防腐劑?？墒褂眠m當輔料溶液作為稀釋劑將組合物配制成凍干粉末。適當組分在所用劑量和濃度下對受者無毒?？捎糜谒幬锾幏浇M分的進一步實例見Remington'sPharmaceuticalSciences,第16版.(1980)和20版.(2000),MackPublishingCompany,Easton,PA.提供醫(yī)學從業(yè)者使用的試劑盒，其包括一種或更多本發(fā)明抗原結合蛋白以及治療本文討論任何病癥的標簽或其它說明。在一個實施方案中，試劑盒包括以上述組合物形式裝在一個或多個管型瓶中的一種或多種人類抗體的無菌制劑。給藥劑量和頻率可根據以下因素而改變給藥途徑、所用具體抗體、所治疾病的性質和嚴重度、癥狀為急性還是慢性以及患者的體積和總體癥狀?？赏ㄟ^本領域熟知的方法確定適當劑量，例如在臨床試驗中包括劑量放大研究。本發(fā)明抗原結合蛋白尤其是人類抗體可在例如一段時間內按規(guī)律間隔給藥一次或多次。在具體實施方案中，在至少一個月或更長時間給藥一次給予人類抗體，例如一個、兩個或三個月或者甚至不確定。對于治療慢性癥狀，長期治療通常最有效。但是，對于治療急性癥狀，短期給藥例如從一周至六周就已足夠。通常，給予人類抗體直至患者表現出所選體征或指示劑高于基線水平的醫(yī)學相關改善度為止。本文提供的治療方案的一個實例包括以適當劑量一周一次皮下注射抗原結合蛋白例如人類抗體治療血糖水平引起的癥狀。本文提供的這些癥狀的實例包括例如高血糖癥、2型糖尿病、空腹糖耐量受損、葡萄糖耐量降低和血脂異常?？沙掷m(xù)每周或每月給予抗原結合蛋白直到達到所需結果例如病人癥狀消退?？砂葱枰匦轮委煟蛘?，可選擇地，給予維持劑量?？稍谑褂每乖Y合蛋白例如人類抗體治療之前、進行中和/或之后監(jiān)測病人血糖濃度，以檢測其濃度的任何變化。對于某些病癥，血糖升高發(fā)病率可隨例如疾病進程等因素而變化?？捎靡阎夹g測定葡萄糖水平。也可用已知技術例如ELISA在患者血液中測定葡萄糖水平。本發(fā)明方法和組合物的具體實施方案涉及使用例如抗原結合蛋白例如人類抗體和一個或多個胰高血糖素拮抗劑、兩個或更多本發(fā)明抗原結合蛋白，或者本發(fā)明抗原結合蛋白和一個或更多其它胰高血糖素拮抗劑。在進一步的實施方案中，單獨或與其它用于治療使患者痛苦的癥狀的藥劑組合給予抗原結合蛋白。這些藥劑的實例包括蛋白質以及非蛋白質藥物。當聯合給予多種藥物時，如本領域所熟知其劑量應相應調整。"聯合給藥"和組合療法不限于同時給藥，也包括在涉及給予患者至少一種其它治療劑的療程中至少給予一次抗原和蛋白的治療方案。另一方面，本發(fā)明提供制備治療2型糖尿病、高血糖癥、代謝綜合癥、血脂異常和相關病癥藥劑的方法，其包含本發(fā)明抗原結合蛋白例如人類抗體與藥學可接受輔料中的混合物，用于治療2型糖尿病和相關病癥。藥劑制備方法如上所述。組合療法另一方面，本發(fā)明提供使用本發(fā)明治療性抗原結合蛋白，例如本文所述完全人類治療性抗體與一種或多種其它治療一起治療糖尿病患者的方法。在一個實施方案中，該組合療法可達到協同效應?？乖Y合蛋白可與一個或更多下述當前可用的2型糖尿病治療組合。其中包括雙胍(美福明)以及磺脲類(例如格列本脲、格列吡溱)。用于維持血糖平衡的其它治療包括PPARy拮抗劑(吡格列酮、羅格列酮)；a葡萄糖苷酶抑制劑(阿卡波糖、伏格列波糖)。其它治療包括可注射治療例如Exenatide(胰高血糖素樣肽)和Symlin(普蘭林肽)。已描述本發(fā)明，以下實施例用以說明目的，不具有限制性。實施例實施例1:抗原制備將編碼全長477個氨基酸的胰高血糖素受體(SEQIDNO:2)的人類GCGRcDNA亞克隆到pDC312表達載體中，并轉染AM1D細胞。在篩選和單細胞克隆后，選擇單克隆(克隆1004)用于進一步基于受體的細胞表面表達的特性研究。飽和結合分析測定的受體表達水平(Bmax)為每mg膜蛋白質含11.4pmol胰高血糖素受體。此外，在框架中講編碼N端GCGR(SEQIDNO:2的1-142氨基酸)的cDNA序列與人IgGlFc的cDNA融合，并亞克隆至pDsRa21載體(如U.S.2005/0118643所述)。在轉染至AM1D細胞后可篩選細胞穩(wěn)定庫。用重組蛋白質A快流速柱(GEHealthcare)接著用Source30Q陰離子交換柱(GEHealthcare)從濃縮條件培養(yǎng)基中純化GCGRN端Fc。實施例2:鼠抗人雜交瘤生成將上述克隆1004的41細胞膜組分用作常*見和RIMMS(多位點注射快速免疫)免疫C57BL/6或DBF1小鼠的抗原(JacksonLaboratories,BarHarbor,Maine)。在多輪免疫之后，通過電融合將淋巴結(RIMMS免疫)或脾(常規(guī)免疫)釋放的淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞、Sp2/0-Ag14(ATCC)融合。將融合細胞按2xl04個細胞/孔的密度接種于預鋪100^1添加10%FBS、5。/o三曱氧唑辛克隆因子(BioVerisTM)、lx青霉素-鏈霉素-谷酰胺(Gibco)以及l(fā)xOPI(草酰乙酸鹽、丙酮酸鹽及胰島素，Sigma)的BD培養(yǎng)基的96孔板。培養(yǎng)24小時后，每孔加入100pl2xHAT(0.1mM次黃嘌呤、0.16mM脫氧胸腺嘧咬普、4mM氨基蝶呤，Sigma)。分別在融合后的第7天和第10天更換培養(yǎng)基，然后在第2次更換培養(yǎng)基后的第2天收集條件培養(yǎng)基用于下述初步篩選。對雜交瘤上清進行基于細胞的ELISA(酶聯免疫吸附測定法)或使用1004細胞的FMAT(微體積熒光數字圖像測定技術)，與親代AM1D細胞平行?；诳膳c1004而非AM1D特異性結合來篩選包含GCGR特異抗體的雜交瘤克隆。從下述擴增的雜交瘤培養(yǎng)基中部分純化單克隆抗體，并用結合的(ELISA或FMAT)和功能的基于細胞的測定法測定其對胰高血糖素誘導cAMP生成的中和作用，如下文所述。擴增陽性克隆、克隆單細胞并用多個測定法進一步確認。實施例3:完全人類抗體生成根據所述方案，例如U.S.05/0118643和WO05/694879、WO98/24838、WO00/76310和美國專利7064244(均以參考形式并于本文)，將來源于人GCGR高表達細胞系1004的粗細胞膜制備品用作免疫IgG2和IgG4XenoMouse(Abgenix,nowAmgen,Inc.)的抗原。初次免疫后，給予后繼輪次的加強免疫直至達到適當的抗體滴度。鑒別顯示適當滴度的動物，然后從引流淋巴結獲得淋巴細胞，必要時將各組混合。在一些實例中，通過用適當的介質(例如，DMEM,Invitrogen，Carlsbad,CA)研磨淋巴組織以解離淋巴細胞將細胞從組織中釋放。篩選B細胞并與適當融合配體融合，例如非分泌骨髓瘤P3X63Ag8.653細胞(AmericanTypeCultureCollectionCRL1580,Kerney等，J.Immunol.123,1548-1550(1979))，如上述參考文獻所述。其它適當的融合配體包括Sp2/0-Agl4(ATCC)細胞。將融合細胞沉淀并重懸于篩選介質中(通常為包含含偶氮絲氨酸、hypozanthine和其它補充物質的DMEM),溫育20-30分鐘，然后重懸于篩選介質中病接種平皿前培養(yǎng)。然后將細胞分布于孔中以最大化克隆形成能力，并用標準技術培養(yǎng)。培養(yǎng)后，用富含胰高血糖素受體細胞克隆1004和親代細胞系AM1D用FMAT對雜交瘤上清對進行篩選。接著用使用FITC標記(異硫氰酸熒光素偶聯)的人IgG抗體的FACS分析確認GCGR特異性結合子。按U.S2005/0118643及其它上述引用參考文獻所述方案擴增包含受體特異單克隆抗體的雜交瘤克隆。如下文所述檢測上清對胰高血糖素誘導的cAMP生成的抑制。將包含拮抗抗體的雜交瘤克隆單細胞克隆并擴增用于進一步檢測。然后如下所述純化抗體，然后測定來自單克隆的純化抗體的中和活性。用MabSelect(GEHealthcare)樹脂將抗體從雜交瘤條件培養(yǎng)基中純化出來。向7至10ml的條件培養(yǎng)基(CM)中加入100iil在PBS中平衡的MabSelect樹脂的l:2勻漿。將試管置振動器于4-8匸過夜。1000xg離心試管5分鐘，傾去未結合部分。用5mlPBS洗滌樹脂，然后離心并如上所述傾去未結合部分。將轉移樹脂至SPIN-X,0.45nm,2ml試管中。用0.5mlPBS再洗滌樹脂兩次，然后離心。通過室溫下溫育并偶爾攪拌10分鐘用0.2ml0.1M醋酸洗脫單克隆抗體。離心試管，向洗脫液中加入30ial1MpH8.0Tris緩沖液。純化抗保存于4-8。C。實施例4:抗體的體外表征抗體/受體結合測定法基于總細胞的ELISA將GCGR過表達CHO細胞(克隆1004)和親代細胞(AM1D)接種于微量培養(yǎng)板至90%匯合。用BSA封閉細胞，與雜交瘤上清4。C溫育90分鐘。強洗滌后，將細胞與檢測抗體羊抗鼠IgGFc-HRP(Pierce)溫育，洗滌三次。加入50pl/孔TMB底物(KPL),室溫溫育5-10分鐘。加入50|xl0.5NH2S04終止反應，用SpectraMax(MolecularDevices)于450nm處讀取數值。以GCGR膜血清免疫小鼠為陽性對照，以空白培養(yǎng)基為背景對照。抗體/受體結合測定法FMAT將GCGR過表達CHO細胞(克隆1004)以亞匯合密度(50-60%)接種于底部潔凈、黑壁的96孔微量培養(yǎng)板(AppliedBiosystems)中，然后在室溫與雜交瘤上清溫育60分鐘。與FMAT藍色標記第二抗體(羊抗人IgG,AppliedBiosystems)溫育后，用8200細胞檢測系統(tǒng)(AppliedBiosystems)記錄細力包影4象和細胞結合熒光量。基于細胞的功能測定法在采用穩(wěn)定功能細胞系基于細胞的功能測定法中測定抗胰高血糖素受體抗體的中和活性。用包含來自人、小鼠、大鼠、食蟹猴或大鼠的GCGRcDNAs(cDNAs分別編碼SEQIDNO:2,4,6，8)的表達構建體(pcDNA3.1,Invitrogen)分別轉染CHOKl細胞以建立穩(wěn)定細胞系。從轉染群中單細胞克隆表達來自上述種屬GCGR的最終功能細胞系，并檢測胰高血糖素刺激cAMP生成。基于各單品系的EC5o，選擇最終測定法細胞系并保存以備將來使用。在竟爭結合測定法中用以下方案測定Kb,或基于拮抗劑存在下劑量響應曲線漂移的Schild分析法計算抗體結合的解離常數。Schild分析法的使用如Lazaeno等，Br.J.Pharmacol.109(4):1110-9(1993)所描述，此處以參考形式并于本文。該測定法從用于小分子改編到用于本文抗體。雜交瘤上清和純化抗體均使用以下方案檢測。Cisbio的HTRF(均相時間分辨熒光分析l支術)-cAMP動態(tài)試劑盒用于功能測定。用功能測定法首先篩選在結合測定法中可與人GCGR特異性結合的克隆的雜交瘤上清。然后從雜交瘤條件培養(yǎng)基中純化抗體，并重新檢測Kb和IC5o值。使用該方法可鑒別可抑制胰高血糖素激活時cAMP生成、為胰高血糖素拮抗劑的抗體。將所選穩(wěn)定功能細胞系接種于96-半孔板。將GCGR抗體加入孔中，37。C溫育20分鐘，然后加胰高血糖素(Calbiochem),并在37°C再溫育15分鐘。在裂解液中加入cAMP共軛物之后，將抗cAMP穴狀化合物(抗共軛結合至穴狀化合物的cAMP的抗體)加入孔中，將板于室溫下溫育1小時，然后用RubyStar(BMGLabtech的熒光微量培養(yǎng)板讀板儀)讀取數值。用功能性人GCGR細胞系初步檢測2pM濃度的純化抗體。用50pM胰高血糖素刺激細胞，篩選顯示強抑制活性的抗體測定ICso(定義為抑制高于基線最大效應一半所需的抗體濃度)。在liiM濃度檢測抗體，然后作連續(xù)2倍系列稀釋。繪制劑量響應曲線圖，并用GraphPadPrism軟件測定IC5o。篩選具有較低IC5o的抗人GCGR抗體，然后用適當細胞系進一步檢測交叉種屬受體活性。功能測定法中人類抗體的IC50IC50(nM)抗體人食蟹猴鼠(murine)大鼠A-39.122.54.913.5A國418.152.110.117.2A-97.426.64.19.9對各所選人源抗體作Schild分析以檢測跨不同種屬的人抗GCGR抗體的相對效價。簡而言之，在連續(xù)稀釋的胰高血糖素(100nM至10fM)存在下才企測不同濃度的抗體。用GraphPadPrism軟件繪制不同抗體濃度下的胰高血糖素劑量響應曲線。計算抗體的pA2，即產生胰高血糖素劑量響應曲線2倍右移所需抗體濃度的負對數。當Schild斜率等于1時，pA2等于pKb,即抗體結合的解離常數。然后，由pKb的反log值衍生出Kb,可直接用于比較跨種屬單個抗體的相對效價。-險測其它抗體對人GCGR的活性。抗體IC50(nM)A國l15.0A國210.1A國513.3A-632.2A國78.8A畫810.4A-10無活性A國il16.7A-1221.3A畫1372.6A-14457.5A-1511.3A-16無活性A-17無活性A陽18203.7A畫19無活性A-20無活性<table>tableseeoriginaldocumentpage108</column></row><table>Schild分析法測定的Kb值<table>tableseeoriginaldocumentpage108</column></row><table>實施例5:抗體的重組表達和純4匕研發(fā)表達抗體的穩(wěn)定細胞系基于Abgenix提供各抗體的DNA序列設計PCR引物以獲得完整輕鏈開放閱讀框、重鏈開放式閱讀框的信號肽和可變域。將完整輕鏈、重鏈信號肽和可變域以及人IgG2恒定區(qū)分與表達載體pDC323和pDC324相連。作為PCR引物設定的實例，5，A-9輕鏈引物為4337-12(5，-AAGCTCGAGGTCGACTAGACCACCATGGACATGAGGGTCCCCGCTCAGCTCCTG-3，)(SEQIDNO:313)，其包含Sail限制性酶切位點、框內終止密碼子、Kozak序列和氨基酸MDMRVPAQLL(SEQIDNO:314)的密碼，3'引物3250國80(5，誦AACCGTTTAAACGCGGCCGCTCAACACTCTCCCCTGTTGAA國3，)(SEQIDNO:315),其包含NotI限制性酶切位點、終止密碼子和氨基酸FNRGEC(SEQIDNO:316)的密碼。5，A畫9重鏈引物為3444-34(5，畫AAGCTCGAGGTCGACTAGACCACCATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGGTTTTC-3，)(SEQIDNO:317),其包含Sail限制性酶切位點、框內終止密碼子、Kozak序列和氨基酸MEFGLSWVF(SEQIDNO:318)的密碼，A-9重鏈可變區(qū)/IgG2(+)鏈接點引物4341-29(5'陽GACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTT-3，)(SEQIDNO:319),編碼氨基酸GTTVTVSSASTKGPSVF(SEQIDNO:321)的互補(-)鏈引物4341-30(5，-AAGACCGATGGGCCCTTGGTGGAGGCTGAGGAGACGGTGACCGTGGTC國3，)(SEQIDNO:320),3，引物3250-79(5，畫AACCGTTTAAACGCGGCCGCTCATTTACCCGGAGACAGGGA-3，)(SEQIDNO:322),其包含Notl限制性酶切位點、終止密碼子和氨基酸SLSPGK(SEQIDNO:323)的密碼。用于轉染抗GCGR表達質粒的CHO宿主細胞位通過適應無血清培養(yǎng)基(Rasmussen等，Cytotechnology28:31-42,1998)來源于DXB畫ll細胞(Urlaub等，PNASUS77:4126畫4220,(1980))的CHO細胞系。使用標準電穿孔方法用表達質粒pDC323-抗GCGRk和pDC324-[抗GCGR-IgG2]轉染宿主細胞產生抗GCGR細胞系。在用表達質粒轉染宿主細胞系之后，在含有4%經透析的胎牛血清(ds或dfFBS)的選擇性培養(yǎng)基(不含GHT)中培養(yǎng)細胞2-3周以篩選質粒和回收細胞。然后從培養(yǎng)基中移去血清，在-GHT選擇性培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞直至其活力〉85%。隨后在含有150nMMTX的培養(yǎng)基中培養(yǎng)轉染細胞群。細胞系克隆根據以下方法建立所篩選克隆的細胞庫?？寺〔襟E保證產生克隆種群和細胞庫，使商業(yè)生產具有重現性。將抗體表達細胞擴增群(pool)有限稀釋地接種于96孔板，并在小規(guī)模研究中評價候選克隆的生長和生產力特性。實施例6:ob/ob小鼠的體內活性向12周i^性ob/ob小鼠(JacksonLaboratories,BarHarbor,Maine)IP注射緩沖液或者1或3mg/kg(n-8-10/組)的抗體3或4。在單次注射抗體后的0、24、48、72、96、120、144、192、240小時測定血糖。以3mg/kg抗體劑量注射抗體3時血糖降低8天，如圖1所示。相似地，向12周雄性ob/ob小鼠(JacksonLaboratories,BarHarbor,Maine)IP注射緩沖液或者1或3mg/kg(11=8-10/組)的抗體3或9。在單次注射抗體后的0、24、72、120、192、240小時測定血糖。以3mg/kg抗體劑量注射抗體3和9時血糖降低8天，如圖2所示。實施例7:正常雄性食蟹猴的體內效力在云南靈長類動物中心(中國云南)在雄性食蟹猴中評價抗體A-9單次皮下(SC)劑量的效力。通過檢測給予口服劑量葡萄糖后的血液葡萄糖清除率對猴子進行葡萄糖耐量試驗(GTT)。GTT數據表示為AUC(曲線下面積)，如圖3所示，代表通過測定口服后0、30、90分鐘的血糖量得到的葡萄糖清除率。如圖3所示，在給予抗體前24天以交錯方式給予前劑量GTT1，在單次劑量前17天以交錯方式給予前劑量GTT2。向30只食蟹猴單次皮下(SC)注射總共3或30mg/kg抗體A-9或對照給藥抗體。注射后3天給予猴子GTT3,注射后8天給予GTT4,注射后17天給予GTT5。如圖3所示，結果為單次SC注射3或30mg/kg抗體9可提高葡萄糖耐量試驗期間的葡萄糖清除率。實施例8:竟爭結合測定法將本發(fā)明的若干抗體混合，用竟爭結合測定法檢測哪些抗體與標記參比抗GCGR抗體交叉竟爭結合。用Alexa熒光染料(分子探針/Invitrogen,Carlsbad,CA)標記A-3抗體作為示蹤物，根據操作說明制備。檢測一定劑量范圍內的各個抗體與固定濃度lnM標記A-3抗體竟爭結合表達于CHO細胞(如上所述)上的GCGR受體的能力。用實施例4描述的FMAT測定熒光密度，并計算AlexaA-3結合受體的抑制程度?；谝陨戏治隹煞殖鋈M抗體。即與Alexa-A-3竟爭時的可克服、部分可克服或非可克服抗體?？煽朔贵w能與A-3竟爭結合，而非可克服抗體不能交叉竟爭并且似乎在人GCGR上具有不同的結合位點。部分可克月良抗體與A-3結合位點有一些重疊。如圖4-6所示。經沖企測并發(fā)現能與Alexa-A-3竟爭結合(可克服)的抗體為A-ll、A-2、A-7、A國12、A國17、A國6、A國8、A國15和A國5。經檢測并發(fā)現僅能與Alexa-A-3部分竟爭結合(部分可克服)的抗體為A-16、A-14、A-20和A-23。經檢測并發(fā)現不能與Alexa-A-3竟爭結合的抗體為A-19和A-10。需要注意的是所有或大部分可克服抗體在基于細胞測定法(IC50)中顯示性。^P口實施例9:嵌合受體的構建人GCGR與人GLP-1受體最為同源，且均屬于受體N端部分有三對半胱氨酸的GPCRB家族。為了測定所測人類抗體結合至人GCGR上的區(qū)域或位點，并測定之間形成二硫鍵的三對半胱氨酸所維持構象的重要性，生成人GCGR和人GLP-1R(GLP-1R,登錄號NP—002053)之間的多種嵌合受體構建物并在細胞中表達。如圖7所示。來自人GCGR的嵌合體序列顯示于圖7。舉例而言，顯示圖上部的嵌合體4中，氨基酸1-142來自人GCGR,其余部分來自GLP-1受體。嵌合體4包含完整的三對半胱氨酸。在嵌合體4中引入成對半胱氨酸的點突變(Cys1-3、Cys2-5或Cys4-6)使隨后的三個嵌合體嵌合體-41CA,3CA;42CA,5CA以及44CA,6CA均含一個斷裂的半胱氨酸對。嵌合體-7的氨基酸1-79來自人GCGR;嵌合體-8的氨基酸80-477來自人GCGR;嵌合體-10的氨基酸80-142來自人GCGR;嵌合體-15的氨基酸80-119來自人GCGR;嵌合體-19的氨基酸1-119和143-477來自人GCGR。通過熒光蛋白的框內C端融合監(jiān)測細胞表面受體表達。使用Alexa標記的參比抗體A-3通過FMAT直接檢測抗體與特定嵌合受體的結合。如圖7所示，此處測定的所有抗體的結合均需要人GCGR的N端(氨基酸1-142)?？贵wA-18、A-21和A-10的表現相似因為它們表現出僅與含三個完整半胱氨酸對的嵌合體-4結合。這表明這些抗體的構象表位。對于抗體A-3，來自人GCGR80-119的氨基酸序列是抗體結合所必需且足夠的。此外，研究表明A-3結合不需要人GCGR的氨基酸120-142。而且，對于抗體A-3,構象由第二和第三對(Cys2-5、Cys4-6)維持，而不是第一對半胱氨酸。因此，抗體A-3和所有與A-3交叉反應的抗體與人GCGR結合的受體區(qū)域在人GCGR氨基酸Ser80-Ser119之內。本文引用的各參考文獻就其所述和所有目的完整并于本文作為參考。本發(fā)明不限于本文描述的預期作為本發(fā)明單個方面的單獨例證的特定實施方案、本發(fā)明的功能等同方法和組分的范圍之內。確實，對于本領域技術人員而言可根據上文的描述和附圖做出除本文顯示和描述之外的許多本發(fā)明的修改。這些修改均涵蓋于附加權利要求的范圍內。權利要求1.包含選自以下的氨基酸序列的分離的抗原結合蛋白a.包含選自以下序列的輕鏈CDR3i.與選自L1-L23的輕鏈CDR3序列，SEQIDNOs72；74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97、100的CDR3序列相差總共不超過三個氨基酸添加、替換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；ii.LQX21NSX22PLT(SEQIDNO208)；iii.QAWDSX23TVX24(SEQIDNO209)；b.包含選自以下序列的重鏈CDR3序列i.與選自H1-H23的重鏈CDR3序列，SEQIDNOs165、167、169、171、173、175、177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197、199的CDR3序列相差總共不超過四個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDR3序列；ii.EX25X26X27YDILTGYX28X29YYGX30DV(SEQIDNO210)iii.X31GGGFDY(SEQIDNO211)；或c.(a)的輕鏈CDR3序列和(b)的重鏈CDR3序列；其中，X21為組氨酸殘基或谷氨酰胺殘基，X22為天冬酰胺殘基、天冬氨酸殘基或酪氨酸殘基，X23為天冬酰胺殘基或絲氨酸殘基，X24為異亮氨酸殘基或纈氨酸殘基，X25為賴氨酸殘基、谷氨酸殘基或脯氨酸殘基，X26為天冬氨酸殘基、蘇氨酸殘基、谷氨酰胺殘基或脯氨酸殘基，X27為組氨酸殘基或酪氨酸殘基，X28為天冬酰胺殘基、組氨酸殘基、天冬氨酸殘基或苯丙氨酸殘基，X29為酪氨酸殘基、組氨酸殘基或天冬酰胺殘基，X30為亮氨酸殘基或甲硫氨酸殘基，X31為亮氨酸殘基或甲硫氨酸殘基，其中所述抗原結合蛋白與人胰高血糖素受體特異性結合。2.權利要求1的分離的抗原結合蛋白，其包含選自以下的氨基酸序列a.選自以下的輕鏈CDR1序列i.與L1國L23的CDR1序列，SEQIDNOs:10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41相差不超過三個氨基酸添加、替換和/或缺失的輕鏈CDRl;ii.RSXiQSLLDX^DGTYTLD(SEQIDNO:200)iii.RASQX4IRNDX5G(SEQIDNO:201);及iv.SGDKLGDKYX6C(SEQIDNO:202);其中為絲氨酸殘基或蘇氨酸殘基，X2為精氨酸殘基或絲氨酸殘基，x3為天冬氨酸殘基或丙氨酸殘基，x4為甘氨酸殘基或天冬氨酸殘基，x5為亮氨酸殘基或苯丙氨酸殘基，x6為纈氨酸殘基或丙氨酸殘基，b.選自以下的輕鏈CDR2序列i.與L1-L23的CDR2序列，SEQIDNOs:43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70相差不超過兩個氨基酸添加、替換和/或缺失的輕鏈CDR2;ii.AASSLX9S(SEQIDNO:204);及iii.QX10XuKRPS(SEQIDNO:205);其中X9為谷氨酰胺殘基或谷氨酸殘基，X10為絲氨酸殘基或蘇氨酸殘基，Xu為蘇氨酸殘基或絲氨酸殘基，c.選自以下的重鏈CDRl序列i.與H1-H23的CDR1序列，SEQIDNOs:102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122相差不超過兩個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈CDRl;ii.X7YX8MH(SEQIDNO:203),其中X7為絲氨酸殘基或蘇氨酸殘基，X8為甘氨酸殘基或天冬氨酸殘基；及d.選自以下的重鏈CDR2:i.與H1-H23的CDR2序列，SEQIDNOs:124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、(155、157、159、161和163相差不超過三個氨基酸添加、替換和/或缺失的重鏈序列；ii.X12IWX13DGSX14KYYX15DSVKG(SEQIDNO:206);iii.X16ISX17DGSX18KYX19X20DSVKG(SEQIDNO:207);其中X12為絲氨酸殘基、苯丙氨酸殘基、纈氨酸殘基或谷氨酸殘基，X13為酪氨酸殘基或天冬酰胺殘基，X14為天冬酰胺殘基或谷氨酸殘基，X15為纈氨酸殘基或丙氨酸殘基，X16為纈氨酸殘基或苯丙氨酸殘基，X17為組氨酸殘基、天冬氨酸殘基或酪氨酸殘基，X18為天冬氨酸殘基、天冬酰胺殘基或組氨酸殘基，X19為酪氨酸殘基或絲氨酸殘基，X2()為丙氨酸殘基或甘氨酸殘基，其中所述抗原結合蛋白與人胰高血糖素受體特異性結合。3.權利要求1的分離的抗原結合蛋白，其包含以下之一a.包含以下的輕鏈可變結構域i.選自SEQIDNOs:lO、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38和41的輕鏈CDR1序列；ii.選自SEQIDNOs:43、45、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68和70的輕鏈CDR2序列；iii.選自SEQIDNOs:72、74、76、78、80、83、85、87、89、91、93、95、97和100的輕鏈CDR3序列；以及b.包含以下的重鏈可變結構域i.選自SEQIDNOs:102、104、106、108、111、113、115、117、118、120和122的重鏈CDR1序列;ii.選自SEQIDNOs:124、126、128、130、132、134、136、138、140、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161和163的重鏈CDR2序列；以及iii.選自SEQIDNOs:165、167、169、169、171、173、175、，177、179、181、183、185、187、189、191、193、195、197和199的重鏈CDR3序列；或c.(a)的輕鏈可變結構域和(b)的重鏈可變結構域，其中所述抗原結合蛋白與人胰高血糖素受體特異性結合。4.分離的抗原結合蛋白，其包含以下之一a.選自以下的輕鏈可變結構域序列i.具有與選自L1-L23的輕鏈可變結構域序列，SEQIDNOs:213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255和257至少80°/。相同的序列的氨基酸；ii.具有與編碼L1-L23的輕鏈可變結構域序列，SEQIDNOs:212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254和256至少80%相同的多聚核苷酸序列編碼的氨基酸序列；iii.由在中等嚴才各條件下與L1-L23輕鏈可變結構域序列，SEQIDNOs:212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254和256組成的多聚核苦酸的互補序列雜交的多聚核香酸序列編碼的氨基酸序列；b.選自以下的重鏈可變結構域序列i.與H1-H23的重鏈可變結構域序列，SEQIDNOs:259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301和303至少80%相同的氨基酸序列；ii.與編碼H1-H23的重鏈可變結構域序列，SEQIDNOs:258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、292、294、296、298、300和302的多聚核苷酸序列至少80%相同的多聚核苷酸序列編碼的氨基酸序列；iii.由在中等嚴格條件下與H1-H23重鏈可變結構域序列，SEQIDNOs:258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、292、294、296、298、300和302組成的多聚核苷酸的互補序列雜交的多聚核苷酸序列編碼的氨基酸序列；或c.(a)的輕鏈可變結構域和(b)的重鏈可變結構域，其中所述抗原結合蛋白與人胰高血糖素受體特異性結合。5.權利要求4的分離的抗原結合蛋白，其包含以下之一a.選自Ll-L23:SEQIDNOs:213、215、217、219、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255和257的輕鏈可變結構域序列；b.選自H1國H23:SEQIDNOs:259、261、263、265、267、269、271、273、275、277、279、281、283、285、287、289、291、293、295、297、299、301和303的重鏈可變結構域序列；或c.(a)的輕鏈可變結構域和(b)的重鏈可變結構域，其中所述抗原結合蛋白與人胰高血糖素受體特異性結合。6.權利要求5的抗原結合蛋白，其中所述輕鏈可變結構域與重鏈可變結構域選自組合L1H1、L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、LllHll、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H16、L17H17、L18H18、L19H19、L20H20、L21H21、L22H22和L23H23。其中所述抗原結合蛋白與人胰高血糖素受體特異性結合。7.權利要求6的抗原結合蛋白，其進一步包含a.SEQIDNO:305的輕鏈恒定序列；b.SEQIDNO:307的輕鏈恒定序列；c.SEQIDNO:309的重鏈恒定序列；d.SEQIDNO:305的輕鏈恒定序列和SEQIDNO:309的重鏈恒定序列，或e.SEQIDNO:307的輕鏈恒定序列和SEQIDNO:309的重鏈恒定序列。8.權利要求1或4的分離的結合蛋白，其中所述抗原結合蛋白選自人類抗體、人源化抗體、嵌合抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、重組抗體、抗原結合抗體片段、單鏈抗體、雙鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體、Fab片段、F(fa，)x片段、結構域抗體、IgD抗體、IgE抗體、IgM抗體、IgGl抗體、IgG2抗體、IgG3抗體、IgG4抗體和在鉸鏈區(qū)至少具有一個突變的IgG4抗體。9.權利要求8的抗原結合蛋白，其中所述結合蛋白為人類抗體。10.權利要求1或4的抗原結合蛋白，當其與人胰高血糖素受體結合時a.以與參比抗體基本相同的Kd與人胰高血糖素受體結合；b.以與所述參比抗體基本相同的IC50抑制人胰高血糖素受體的胰高血糖素激活；或c.在人胰高血糖素受體上與所述參比抗體交叉竟爭結合，其中所述參比抗體包含選自L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、LllHll、L12H12、L13H13、L15H15、L21H21和L22H22的輕鏈和重鏈可變結構域序列的組合。11.分離的人類抗體，當其與人胰高血糖素受體結合時a.以與參比抗體基本相同的Kd與人胰高血糖素受體結合；b.以與所述參比抗體基本相同的ICso抑制人胰高血糖素受體的胰高血糖素激活；或c.在人胰高血糖素受體上與所述參比抗體交叉竟爭結合，其中所述參比抗體選自A-l、A-2、A-3、A-4、A-5、A-6、A-7、A-8、A-9、A-ll、A-12、A-13、A國15、A國21和A-22。12.權利要求11的分離的人類抗體，當其與人胰高血糖素受體結合時a.與人胰高血糖素受體的氨基酸Ser80至Serl19特異性結合；b.以90nM或更低的IC5o值降低胰高血糖素信號傳導；c.在動物模型中降低血糖；d.(a)和(b)二者，或e.(a)、(b)和(c)。13.權利要求12的抗體，其中所述動物為ob/ob小鼠模型。14.一種藥用組合物，其包含與藥用可接受載體混合的權利要求1或4的抗原結合蛋白。15.—種藥用組合物，其包含與藥用可接受載體混合的權利要求11或12的人類抗體。16.—種分離的核酸，其包含編碼權利要求1或5的抗原結合劑的輕鏈可變結構域、重鏈可變結構域或二者的多聚核苷酸序列。17.權利要求16的分離的核酸，其中序列選自L1-L23,SEQIDNOs:212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254和256;H1畫H23，SEQIDN0s:258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300和302,或二者。18.—種重組表達載體，其包含權利要求16的核酸。19.一種宿主細胞，其包含權利要求18的載體。20.—種雜交瘤，其能夠生產權利要求9的抗體。21.生產與人胰高血糖素受體特異性結合的抗原結合蛋白的方法，其包括在允許表達所述抗原結合蛋白的條件下培養(yǎng)權利要求19的宿主細胞。22.降低需要治療的受試者的血糖的方法，其包括給予受試者治療有效量的權利要求14的組合物。23.提高需要治療的受試者的葡萄糖耐受的方法，其包括給予受試者治療有效量的權利要求14的組合物。24.在需要治療的受試者中預防或治療2型糖尿病或相關病癥的方法，其包括給予受試者治療有效量的權利要求14的組合物。25.權利要求24的方法，其中所述受試者為人受試者。26.權利要求24的方法，其中所述相關病癥為高血糖癥、空腹血糖受損、葡萄糖耐量降低、血脂異常和代謝綜合癥。27.在需要治療的受試者中降低血糖的方法，其包括給予受試者治療有效量的權利要求15的組合物。28.在需要治療的受試者中提高葡萄糖耐受的方法，其包括給予受試者治療有效量的權利要求15的組合物。29.在需要治療的受試者中預防或治療2型糖尿病或相關病癥的方法，其包括給予受試者治療有效量的權利要求15的組合物。30.權利要求29的方法，其中所述受試者是人受試者。31.權利要求29的方法，其中所述相關病癥為高血糖癥、空腹血糖受損、葡萄糖耐量降低、血脂異常和代謝綜合癥。32.—種用于治療2型糖尿病的試劑盒，其包含權利要求14的組合物。33.—種用于治療2型糖尿病的試劑盒，其包含權利要求15的組合物。34.權利要求14或15的藥用組合物在制備用于治療可從降低血糖受益的病癥的藥物中的用途。35.權利要求32的用途，其中所述病癥選自2型糖尿病、高血糖癥、空腹血糖受損、葡萄糖耐量降低、血脂異常和代謝綜合癥。全文摘要本發(fā)明提供與抗原結合蛋白尤其是與胰高血糖素受體特異性結合的抗體相關的組合物和方法。本發(fā)明提供編碼該抗原結合蛋白和抗體的核酸以及制備和使用該類抗體的方法，包括通過給予需要治療的受試者該類抗體以治療和預防2型糖尿病和相關病癥的方法。文檔編號A61K39/395GK101589062SQ200780042973公開日2009年11月25日申請日期2007年9月19日優(yōu)先權日2006年9月20日發(fā)明者H·顏,R·A·林伯格,S·S·胡,T·C·布恩申請人:安姆根有限公司