專利名稱：用包含紫杉烷的納米顆?；诩に厥荏w狀態(tài)治療乳腺癌的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及基于孕酮受體和雌激素受體的激素受體狀態(tài)治療乳腺癌的方法和試劑盒，其包括單獨(dú)、與至少一種其他治療劑和多種其它治療劑聯(lián)合以及與可用于治療乳腺癌的其他治療形式聯(lián)合，給予紫杉烷(taxane)。特別地，本發(fā)明涉及單獨(dú)或與其它化療劑或放療聯(lián)合，應(yīng)用包含紫杉醇(paclitaxel)和白蛋白的納米顆粒(如

)，其可用于治療不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體的乳腺癌。
背景
大量的腫瘤不對藥物和/或放療應(yīng)答是癌癥治療中的一個嚴(yán)重問題。事實(shí)上，盡管在化療領(lǐng)域中取得了一些進(jìn)展，但上述問題是許多最普遍形式的人類癌癥仍然抵抗有效化療干預(yù)的主要原因之一。

現(xiàn)在，主要應(yīng)用三種療法中的一種或組合來治療癌癥手術(shù)、放療和化療。手術(shù)是傳統(tǒng)方法，其中腫瘤被全部或部分地從機(jī)體去除。一般地，手術(shù)僅對治療較早期癌癥有效。雖然手術(shù)在去除一些部位例如乳腺、結(jié)腸和皮膚處的腫瘤有時有效，但它不能用于治療位于手術(shù)者達(dá)不到的其它部位的腫瘤，也不能用于治療播散性腫瘤情況如白血病。對于50％以上的癌癥個體，他們在被診斷時已不再是有效手術(shù)治療的候選者。手術(shù)方法可能增加手術(shù)期間腫瘤通過血液循環(huán)的轉(zhuǎn)移。大多數(shù)癌癥個體不是在診斷或手術(shù)時死于癌癥，而是死于癌癥的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。

其它治療也常常是無效的。放射治療僅對癌癥早期和中期表現(xiàn)為臨床局部化疾病的個體有效，對于伴有轉(zhuǎn)移的晚期癌癥無效。放療一般用于含有異常增殖性組織的對象機(jī)體的限定區(qū)域，目的是使異常組織吸收的劑量最大化并使附近正常組織吸收的劑量最小化。然而，將治療性放射選擇性給予異常組織是困難的(如果不是不可能的話)。因此，與異常組織接近的正常組織在整個治療過程中也暴露于放射的潛在損害劑量。也存在一些治療，它們在稱為“全身放射(total bodyirradiation)”或“TBI”的過程中需要將對象的全部身體暴露于放射。從而，放療技術(shù)破壞異常增殖細(xì)胞的效應(yīng)由于對附近正常細(xì)胞的相關(guān)細(xì)胞毒性作用而被抵消。因此，放療技術(shù)具有固有的窄的治療指數(shù)，這使得大多數(shù)腫瘤被不充分治療。甚至最佳的放療技術(shù)也可能引起不完全的腫瘤縮小、腫瘤復(fù)發(fā)、增加腫瘤負(fù)荷和誘導(dǎo)對放射具有抗性的腫瘤。

化學(xué)治療包含細(xì)胞復(fù)制或細(xì)胞代謝的破壞?；熆梢允怯行У?，但具有嚴(yán)重的副作用，例如，惡心、白細(xì)胞(WBC)減少、脫發(fā)、體重減輕和其它毒性作用。由于極端毒性的副作用，許多癌癥個體不能成功地完成整個化療方案。化療誘導(dǎo)的副作用顯著影響個體的生活質(zhì)量，并可能明顯影響個體對治療的依從性。此外，與化療劑有關(guān)的不利副作用一般是給予這些藥物中的主要的劑量限制性毒性(dose-limiting toxicity)(DLT)。例如，粘膜炎是幾種抗癌藥的主要劑量限制性毒性之一，所述抗癌藥包括抗代謝劑細(xì)胞毒性藥5-FU、甲氨喋呤和抗腫瘤抗生素如多柔比星。這些化療誘導(dǎo)的副作用中的許多如果嚴(yán)重的話可能導(dǎo)致住院治療，或者需要止痛劑治療疼痛。一些癌癥個體由于對化療的耐受不良而死于化療?？拱┧幍臉O端副作用是由這些藥物的靶向特異性不良而引起的。藥物循環(huán)通過個體的大多數(shù)正常器官以及目標(biāo)靶腫瘤。引起副作用的靶特異性不良也降低化療的效果，因?yàn)閮H有一部分藥物被正確靶向?；煹男Ч捎诳拱┧幵诎心[瘤內(nèi)的保持性差而被進(jìn)一步降低。

由于贅生物、腫瘤和癌癥的嚴(yán)重程度和廣度，對克服手術(shù)、化療和放療的各種缺點(diǎn)的這種疾病或病癥的有效治療方法存在巨大需求。
化療劑的問題
抗藥性問題是聯(lián)合化療的重要性增加的一個原因，因?yàn)樗鲋委煴匦璞苊饪剐约?xì)胞的產(chǎn)生，并殺死預(yù)先存在的已經(jīng)具有抗藥性的細(xì)胞。

抗藥性是用于疾病不應(yīng)答于一種或多種治療藥物的情況的名稱?？顾幮钥梢允枪逃械模@意味著疾病從未對一種藥物或多種藥物產(chǎn)生應(yīng)答，或者可以是獲得性的，這意味著疾病停止對該疾病先前對其應(yīng)答的一種藥物或多種藥物產(chǎn)生應(yīng)答。多元抗藥性(MDR)是特定類型的抗藥性，其特征是疾病對一種以上功能上和/或結(jié)構(gòu)上不相關(guān)的藥物具有交叉抗性。癌癥領(lǐng)域中的多元抗藥性在“DetoxificationMechanisms and Tumor Cell Resistance to Anticancer Drugs”，Kuzmich和Tew著，特別是第VII節(jié)“The Multidrug-Resistant Phenotype(MDR)，”Med.Research Rev.11(2)185-217，(第VII節(jié)在208-213頁)(1991)；和“Multidrug Resistance andChemosensitizationTherapeutic Implications for Cancer Chemotherapy”，Georges，Sharom和Ling著，Adv.in Pharmacology，21185-220(1990)中有比較詳細(xì)的討論。

多元抗藥性(MDR)的一種形式是由被稱作P-糖蛋白(P-gp)的膜結(jié)合170-180kD能量依賴性流出泵介導(dǎo)的。已經(jīng)顯示，P-糖蛋白在許多人腫瘤對疏水性天然產(chǎn)物藥物的固有和獲得性抗藥性中起關(guān)鍵作用。作為P-gp的底物并且因而被P-gp解毒的藥物包括長春花堿(長春新堿和長春堿)、蒽環(huán)類抗生素(亞德里亞霉素)和表鬼臼毒素(依托泊甙)。雖然與P-gp有關(guān)的MDR是腫瘤細(xì)胞對化療劑耐藥的主要決定因素，但顯然，MDR現(xiàn)象是多因素的并且涉及許多不同的機(jī)制。

癌癥化療和抗病毒化療的一個主要并發(fā)癥是對骨髓細(xì)胞的損傷或?qū)ζ涔δ艿囊种?。具體地，化療損傷或破壞主要見于骨髓和脾的造血前體細(xì)胞，削弱了新的血細(xì)胞(粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞、單核細(xì)胞、血小板等)的產(chǎn)生。例如，用5-氟尿嘧啶治療癌癥個體，降低白細(xì)胞(淋巴細(xì)胞和/或粒細(xì)胞)數(shù)目，并且可以引起個體對感染的敏感性增強(qiáng)。許多癌癥個體死于化療后感染或造血失敗的其它后果?；焺┮部梢砸鹧“逍纬傻陀谡Ｋ?，產(chǎn)生出血傾向。對紅細(xì)胞產(chǎn)生的抑制可以引起貧血。對于一些癌癥個體，對造血系統(tǒng)或其它重要組織的損傷風(fēng)險常常限制了將化療劑的化療劑量增加至足夠高以提供良好的抗腫瘤或抗病毒效應(yīng)的機(jī)會。重復(fù)化療或高劑量化療周期可能引起嚴(yán)重的干細(xì)胞損耗，導(dǎo)致嚴(yán)重的長期造血后遺癥和骨髓耗竭。

防止化療副作用或保護(hù)免遭化療副作用會對癌癥個體具有巨大的益處。對于威脅生命的副作用，努力集中于改變化療劑的劑量和時間安排來降低副作用。其它的選擇也可以利用，如應(yīng)用粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞-CSF(GM-CSF)、表皮生長因子(EGF)、白介素11、促紅細(xì)胞生成素、血栓形成素、巨核細(xì)胞生成和生長因子、pixykines、干細(xì)胞因子、FLT-配體、以及白介素1、3、6和7，以增加化療開始前各種組織中的正常細(xì)胞數(shù)量(參見Jimenez和Yunis，Cancer Research 52413-415(1992))。這些因子的保護(hù)機(jī)制雖然未被充分了解，但是最可能與細(xì)胞毒劑治療前正常的關(guān)鍵靶細(xì)胞的數(shù)目增加有關(guān)，并且與化療后細(xì)胞存活增加無關(guān)。
腫瘤治療的化療靶向性
實(shí)體瘤的生長和轉(zhuǎn)移是血管發(fā)生依賴性的(Folkman，J.Cancer Res.，46，467-73(1986)；Folkman，J.Nat.Cancer Inst.，82，4-6(1989)；Folkman等，″TumorAngiogenesis，″第10章，第206-32頁，The Molecular Basis of Cancer，Mendelsohn等編著(W.B.Saunders，1995))。已經(jīng)顯示，例如，增大至直徑2mm以上的腫瘤必需獲得它們自身的血液供應(yīng)并且通過誘導(dǎo)新毛細(xì)血管生長實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)。這些新血管埋入腫瘤后，它們提供對于腫瘤生長必要的營養(yǎng)物和生長因子以及腫瘤細(xì)胞進(jìn)入循環(huán)和轉(zhuǎn)移到遠(yuǎn)處如肝臟、肺或骨的途徑(Weidner，New Eng.J.Med.，324(1)，1-8(1991))。當(dāng)被用作攜帶腫瘤動物中的藥物時，血管發(fā)生的天然抑制劑可以防止小腫瘤的生長(O′Reilly等，Cell 79315-28(1994))。事實(shí)上，在一些方案中，這種抑制劑的應(yīng)用使得腫瘤退化和靜止，甚至在治療結(jié)束后(O′Reilly等，Cell 88277-85(1997))。而且，提供血管發(fā)生抑制劑到一些腫瘤能夠加強(qiáng)它們對其它治療方案(例如化療)的應(yīng)答(參見，例如，Teischer等，Int.J.Cancer 57920-25(1994))。

蛋白酪氨酸激酶催化參與調(diào)節(jié)細(xì)胞生長和分化的多種蛋白質(zhì)中的特定酪氨酰殘基磷酸化(A.F.Wilks，Progress in Growth Factor Research(1990)297-111；S.A.Courtneidge，Dev.Suppl.(1993)57-64；J.A.Cooper，Semin.Cell Biol.(1994)5(6)377-387；R.F.Paulson，Semin.Immunol.(1995)7(4)267-277；A.C.Chan，Curr.Opin.Immunol.(1996)8(3)394-401)。蛋白酪氨酸激酶可以被廣義地歸類為受體(例如，EGFr、c-erbB-2、c-met、tie-2、PDGFr、FGFr)或非受體(例如，c-src、Ick、Zap70)激酶。已顯示，許多這些激酶的不適當(dāng)或不受控制的激活，即，蛋白酪氨酸激酶活性異常，例如，由于過表達(dá)或突變所致，引起不受控制的細(xì)胞生長。例如，表皮生長因子受體(EGFR)活性增加涉及小細(xì)胞肺癌、膀胱癌和頭頸癌，以及c-erbB-2活性增加涉及乳腺癌、卵巢癌、胃癌和胰腺癌。因此，蛋白酪氨酸激酶抑制應(yīng)該可用于治療如上列出的腫瘤。

生長因子是誘導(dǎo)細(xì)胞增殖的物質(zhì)，典型地通過與細(xì)胞表面上的特定受體結(jié)合實(shí)現(xiàn)。表皮生長因子(EGF)誘導(dǎo)體內(nèi)多種細(xì)胞增殖，并且是大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞生長所需的。EGF受體是170-180kD跨膜糖蛋白，可以在多種細(xì)胞類型上檢測到。該受體的細(xì)胞外N端結(jié)構(gòu)域被高度糖基化，并且與選擇性結(jié)合EGFR的EGF抗體結(jié)合。已經(jīng)應(yīng)用競爭性結(jié)合EGFR的藥劑來治療一些類型的癌癥，因?yàn)樵S多中胚層和外胚層起源的腫瘤過表達(dá)EGF受體。例如，已顯示EGF受體在許多神經(jīng)膠質(zhì)瘤、鱗狀細(xì)胞癌、乳腺癌、黑色素瘤、侵入性膀胱癌和食道癌中過表達(dá)。研究EGFR系統(tǒng)以獲得抗腫瘤治療的嘗試一般包括應(yīng)用針對EGFR的單克隆抗體。此外，原發(fā)性人乳腺腫瘤的研究顯示，EGFR高度表達(dá)和存在轉(zhuǎn)移、增殖速度增高和個體存活時間較短之間具有相關(guān)性。

Herlyn等在美國專利5,470,571中公開了應(yīng)用放射標(biāo)記Mab425治療表達(dá)EGFR的神經(jīng)膠質(zhì)瘤。Herlyn等報道，抗-EGFR抗體可以刺激或抑制癌細(xì)胞生長和增殖。已報道，對EGFR有特異性的其它單克隆抗體或是單獨(dú)地或是與細(xì)胞毒性化合物偶聯(lián)，對治療一些類型的癌癥是有效的。Bendig等在美國專利5,558,864中公開了治療性抗-EGFR Mab，其與EGFR競爭性結(jié)合。Heimbrook等在美國專利5,690,928中公開了應(yīng)用與來源于假單胞菌(Pseudomonas)某種的內(nèi)毒素融合的EGF治療膀胱癌。Brown等在美國專利5,859,018中公開了治療以由EGF等介導(dǎo)的細(xì)胞高增殖為特征的疾病的方法。
化療施用方式
經(jīng)常應(yīng)用單一或多種化療劑治療被診斷患有癌癥的人，以殺死腫瘤原發(fā)部位或癌癥轉(zhuǎn)移的遠(yuǎn)處部位的癌細(xì)胞。一般地，化療治療或以單劑量或以幾個大劑量給予，或是在數(shù)周至數(shù)月的變化時間期間給予。然而，重復(fù)化療或高劑量周期化療可以引起毒性增加和嚴(yán)重的副作用。

新的研究表明，節(jié)律性化療(metronomic chemotherapy)——即低劑量和頻繁給予細(xì)胞毒性劑而無長的無藥物間隔，靶向腫瘤血管中活化的內(nèi)皮細(xì)胞。許多臨床前研究表明，節(jié)律性方案相比于最大耐受劑量(MTD)對應(yīng)方案具有優(yōu)越的抗腫瘤效應(yīng)、有效的抗血管發(fā)生作用以及減輕的毒性和副作用(例如骨髓抑制)(Bocci等，Cancer Res 626938-6943(2002)；Bocci等，PNAS 100(22)12917-12922(2003)；和Bertolini等，Cancer Res 63(15)4342-4346(2003))。是所有的化療藥劑發(fā)揮相似作用還是一些化療藥劑比其它化療藥劑更適于這種方案，仍然不清楚。然而，節(jié)律性化療在克服與化療有關(guān)的一些主要缺點(diǎn)方面似乎是有效的。
化療劑
已經(jīng)顯示，紫杉醇在藥物難治性卵巢癌中具有明顯的抗腫瘤和抗癌作用，并且在寬范圍的腫瘤模型中表現(xiàn)出優(yōu)異的抗腫瘤活性，并且在以非常低的劑量應(yīng)用時也抑制血管發(fā)生(Grant等，Int.J.Cancer，2003)。然而，紫杉醇的水溶性差為施用于人類提出了難題。事實(shí)上，如果經(jīng)口輸送不是有效的話，在含水介質(zhì)中固有地不溶或溶解性差的藥物的輸送可被嚴(yán)重削弱。因此，目前應(yīng)用的紫杉醇制劑(例如

)需要

(聚氧乙烯蓖麻油)來溶解藥物。

在此制劑中的存在與動物(Lorenz等，Agents Actions 763-67(1987))和人(Weiss等，J.Clin.Oncol.81263-68(1990))的嚴(yán)重超敏反應(yīng)有關(guān)，因而需要對個體預(yù)先應(yīng)用皮質(zhì)類固醇(地塞米松)和抗組胺劑。也報道，制劑載體

EL在

中的臨床相關(guān)濃度使得紫杉醇的抗血管生成作用無效，這表明在

EL中配制的這一藥物或其它抗癌藥可能需要在比實(shí)現(xiàn)有效節(jié)律性化療所預(yù)期的劑量高的劑量下應(yīng)用(Ng等，Cancer Res.64821-824(2004))。因而，與傳統(tǒng)的MTD化療相比，缺乏與低劑量紫杉醇方案有關(guān)的不期望副作用的優(yōu)勢可能被損害。也參見美國專利公布2004/0143004；WO00/64437。


是無

EL的結(jié)合納米顆粒白蛋白的紫杉醇
臨床前模型已經(jīng)顯示，相比于

(Desai等，EORTC-NCI-AACR，2004)和在患有轉(zhuǎn)移性乳腺癌個體中(O′Shaughnessy等，San Antonio Breast CancerSymposium，Abstract#1122，Dec.2003)，

在安全性和效率方面顯著改進(jìn)。這可能是由于

中不存在表面活性劑(例如，

或

80，分別用在

和

中)，和/或優(yōu)先應(yīng)用基于白蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制，該機(jī)制利用微血管內(nèi)皮細(xì)胞上的gp60/內(nèi)陷(caveolae)(Desai等，EORTC-NCI-AACR，2004)。此外，已經(jīng)顯示，

和

80均強(qiáng)烈抑制紫杉醇與白蛋白的結(jié)合，可能影響基于白蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)(Desai等，EORTC-NCI-AACR，2004)。

IDN5109(Ortataxel)是新的紫杉烷，目前在II期中，由于其在表達(dá)多元藥物抗性表型的腫瘤細(xì)胞系(MDR/Pgp)中缺乏交叉抗藥和對P糖蛋白(P gp)的抑制而被選擇(Minderman；Cancer Chemother.Pharmacol.2004；53363-9)。由于其疏水性，IDN5109目前被配制在表面活性劑

80(與

相同的載體)中。從紫杉烷制劑中去除表面活性劑，例如，在納米顆粒白蛋白結(jié)合的紫杉醇

的情況下，顯示出與它們的含表面活性劑的對應(yīng)物相比，具有改進(jìn)的安全性和效率(O′Shaughnessy等，San Antonio Breast Cancer Symposium，Abstract#1122，Dec.2003)。

80也強(qiáng)烈抑制紫杉烷、紫杉醇與白蛋白的結(jié)合，可能損害通過微血管內(nèi)皮細(xì)胞上gp60受體的、基于白蛋白的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)(Desai等，EORTC-NCI-AACR，2004)。

作為秋藏紅花，秋水仙(Colchicum autumnale)和非洲攀爬性百合，嘉蘭(Gloriosa superba)中主要生物堿的秋水仙堿的抗腫瘤活性，在20世紀(jì)初被首次報道。通過X射線研究和許多總合成，其結(jié)構(gòu)最終被闡明(參見Shiau等，J.Pharm.Sci.(1978)67(3)394-397)。秋水仙堿被認(rèn)為是有絲分裂毒劑，特別是在胸腺(tyhmic)細(xì)胞、腸細(xì)胞和造血細(xì)胞中，其作為紡錘體毒劑起作用且妨礙運(yùn)動。它對有絲分裂紡錘體的作用被認(rèn)為代表了它對多種有關(guān)結(jié)構(gòu)和運(yùn)動的組織化的、易變的纖維系統(tǒng)的作用的一個具體例子。

硫代秋水仙堿(thiocolchicine)二聚體IDN5404由于其在對順鉑和拓?fù)涮婵礎(chǔ)2780-CIS和A2780-TOP具有抗性的人卵巢癌亞系中的活性而被選擇。該作用涉及雙重作用機(jī)制，即，如長春花堿的微管活性，和不同于喜樹堿的拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制作用。(Raspaglio，Biochemical Pharmacology 69113-121(2005))。

已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，紫杉烷的納米顆粒組合物(如白蛋白結(jié)合的紫杉醇

)比其它紫杉烷如

和

的毒性明顯低，并且在安全和效率方面具有明顯改進(jìn)的結(jié)果。

已發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合化療，例如，將一種或多種化療劑或其它治療方式聯(lián)合，例如，將化療與放射或手術(shù)和化療聯(lián)合，分別比單藥化療或單獨(dú)治療方式更成功。

其它參考文獻(xiàn)包括美國公布2006/0013819；美國公布2006/0003931；WO05/117986；WO05/117978和WO05/000900。

需要對增殖性疾病特別是癌癥的更有效治療。

本文提及的所有出版物、專利、專利申請和公開的專利申請的公開內(nèi)容通過引用以整體并入本文。
發(fā)明簡述
本發(fā)明提供了使用含有紫杉烷和載體蛋白(例如白蛋白)的納米顆粒，基于激素受體狀態(tài)(例如個體細(xì)胞(例如乳腺癌細(xì)胞)表達(dá)或不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法。

本發(fā)明提供了治療個體乳腺癌的方法，所述方法包括a)確定雌激素受體和/或孕酮受體的激素受體狀態(tài)；和b)給予個體有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白的納米顆粒。

本發(fā)明也提供了治療個體乳腺癌的方法，所述方法包括給予個體有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白的納米顆粒，其中雌激素受體和/或孕酮受體的激素受體狀態(tài)被用作選擇接受治療的個體的根據(jù)。

本發(fā)明提供鑒定適合于乳腺癌治療的個體的方法，所述方法包括確定雌激素受體和/或孕酮受體的激素受體狀態(tài)，其中如果雌激素受體和孕酮受體的激素受體狀態(tài)都是陰性，那么所述個體被鑒定為適合于用包含紫杉烷和載體蛋白的納米顆粒進(jìn)行乳腺癌治療。

本發(fā)明進(jìn)一步提供評估個體對乳腺癌療法應(yīng)答性的方法，所述方法包括確定雌激素受體和/或孕酮受體的激素受體狀態(tài)，其中所述乳腺癌療法包括給予包括含有紫杉烷和載體蛋白的納米顆粒的組合物，并且其中(a)如果雌激素受體和孕酮受體的激素受體狀態(tài)都是陰性，那么個體可能對該療法更具應(yīng)答性和(b)如果雌激素受體和/或孕酮受體激素受體狀態(tài)都是陽性，那么個體可能對該療法具有更少的應(yīng)答性。

在上述方法任一個的一些實(shí)施方式中，使用乳腺癌組織和/或細(xì)胞確定雌激素受體和/或孕酮受體的激素受體狀態(tài)。在一些實(shí)施方式中，個體的雌激素受體和孕酮受體的激素受體狀態(tài)都是陰性的。在一些實(shí)施方式中，乳腺癌是局部晚期乳腺癌(locally advanced breast cance)。在一些實(shí)施方式中，乳腺癌表達(dá)HER2(HER2+)。在一些實(shí)施方式中，乳腺癌不表達(dá)HER2(HER2-)。在一些實(shí)施方式中，個體是人。

在上述方法任一個的一些實(shí)施方式中，方法進(jìn)一步包括給予個體有效量的至少一種其它化療劑。在一些實(shí)施方式中，至少一種其它化療劑包括5-氟尿嘧啶、表阿霉素(表柔比星，epirubicin)和環(huán)磷酰胺。在一些實(shí)施方式中，含有納米顆粒的組合物(也稱為“納米顆粒組合物”)和化療劑或是在同一組合物中或是在單獨(dú)的組合物中同時給予。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物和化療劑被相繼給予，即，在給予化療劑之前或之后給予納米顆粒組合物。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物和化療劑并行(concurrent)給予，即，納米顆粒組合物的給藥時間和化療劑的給藥時間互相重疊。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物和化療劑不并行(non-concurrent)給予。例如，在一些實(shí)施方式中，在給予化療劑之前終止納米顆粒組合物的給予。在一些實(shí)施方式中，在給予納米顆粒組合物之前終止化療劑的給予。

在上述方法任一個的一些實(shí)施方式中，所述方法進(jìn)一步包括第二治療，其包括放療、手術(shù)或其組合。在一些實(shí)施方式中，第二治療是放療。在一些實(shí)施方式中，第二治療是手術(shù)。在一些實(shí)施方式中，在第二治療之前進(jìn)行第一治療。在一些實(shí)施方式中，在第二治療之后進(jìn)行第一治療。

在上述方法任一個的一些實(shí)施方式中，所述方法進(jìn)一步包括節(jié)律性治療方案。在一些實(shí)施方式中，提供了給予組合物的方法，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒，其中所述納米顆粒組合物在至少一個月期間施用，其中每次施用之間的間隔不多于大約一周，并且其中每次施用時的紫杉烷劑量為遵照傳統(tǒng)給藥方案的其最大耐受劑量的大約0.25％至約25％。在一些實(shí)施方式中，提供了給予組合物的方法，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒(如

)，其中所述納米顆粒組合物在至少一個月期間施用，其中每次施用之間的間隔不多于大約一周，并且其中每次施用時的紫杉醇劑量為遵照傳統(tǒng)給藥方案的其最大耐受劑量的大約0.25％至約25％。在一些實(shí)施方式中，紫杉烷(如紫杉醇，例如

)的每次給藥劑量是最大耐受劑量的約1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、18％、20％、22％、24％或25％中任一百分?jǐn)?shù)以下。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物以每周至少約1×、2×、3×、4×、5×、6×、7×(即每日)中任一頻率給藥。在一些實(shí)施方式中，每次給藥間的間隔是約7日、6日、5日、4日、3日、2日和1日中任何時間間隔以下。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物在至少約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18、24、30和36個月中的任一期間給藥。

一般而言，本發(fā)明的方法包括給予組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白的納米顆粒。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒的平均直徑不大于約200nm。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒組合物基本上不含(如不含)表面活性劑(如Cremophor)。在一些實(shí)施方式中，組合物中白蛋白與紫杉醇的重量比是約18∶1或更小，如約9∶1或更小。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇包被有白蛋白。在一些實(shí)施方式中，白蛋白是人血清白蛋白。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒的平均直徑不大于約200nm，并且紫杉醇/白蛋白組合物基本上不含(如不含)表面活性劑(如Cremophor)。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒的平均直徑不大于約200nm，并且紫杉醇包被有白蛋白。也考慮上述特征的其它組合。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物是

含有其它紫杉烷(如多烯紫杉醇(docetaxel)和ortataxel)的納米顆粒組合物也包括上述特征中的一種或多種。在一些實(shí)施方式中，包含紫杉烷和載體蛋白的納米顆粒是納米顆粒白蛋白結(jié)合的紫杉醇，如美國專利6,566,405所述，可以以商品名

經(jīng)商業(yè)途徑得到。此外，包含紫杉烷和載體蛋白的納米顆粒被認(rèn)為是納米顆粒白蛋白結(jié)合的多烯紫杉醇，例如，描述于美國專利公布2005/0004002A1。

在一些實(shí)施方式中，提供了給予組合物的方法，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒，其中所述紫杉烷在至少一個月期間施用，其中每次施用之間的間隔不多于大約一周，并且其中每次施用時的紫杉烷劑量為約0.25mg/m2至約25mg/m2。在一些實(shí)施方式中，提供了給予組合物的方法，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒(如

)和載體蛋白(如白蛋白)，其中所述紫杉醇在至少一個月期間施用，其中每次施用之間的間隔不多于大約一周，并且其中每次施用時的紫杉烷劑量是約0.25mg/m2至約25mg/m2。在一些實(shí)施方式中，紫杉烷(如紫杉醇，例如

)的每次給藥劑量是約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、18、20、22和25mg/m2中任何劑量以下。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物以每周至少約1×、2×、3×、4×、5×、6×、7×(即每日)中的任一情形給藥。在一些實(shí)施方式中，每次給藥間的間隔是約7日、6日、5日、4日、3日、2日和1日中的任何間隔以下。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物在至少約2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18、24、30和36個月中的任一期間給藥。

本發(fā)明也提供試劑盒，其包括(a)檢測乳腺癌患者的雌激素受體和/或孕酮受體的激素受體狀態(tài)的藥劑；和(b)包括含有紫杉烷和載體蛋白的納米顆粒的組合物。

本發(fā)明還提供試劑盒，其包括(a)檢測乳腺癌患者的雌激素受體和/或孕酮受體的激素受體狀態(tài)的藥劑；和(b)用于對基于雌激素受體和/或孕酮受體的激素受體狀態(tài)治療乳腺癌的療法的可能應(yīng)答性進(jìn)行評估的說明書，其中所述療法包括給予包含含有紫杉烷和載體蛋白的納米顆粒的組合物。在一些實(shí)施方式中，說明書進(jìn)一步提供給予患者有效量組合物的說明。

在所述試劑盒的任何一個的一些實(shí)施方式中，使用乳腺癌組織和/或細(xì)胞確定雌激素受體和/或孕酮受體的激素受體狀態(tài)。在一些實(shí)施方式中，個體的雌激素受體和孕酮受體的激素受體狀態(tài)都是陰性的。在一些實(shí)施方式中，乳腺癌是局部晚期乳腺癌。在一些實(shí)施方式中，乳腺癌表達(dá)HER2(HER2+)。在一些實(shí)施方式中，乳腺癌不表達(dá)HER2(HER2-)。在一些實(shí)施方式中，試劑盒進(jìn)一步包括至少一種其他的化療劑。在一些實(shí)施方式中，至少一種其它化療劑包括5-氟尿嘧啶、表阿霉素和環(huán)磷酰胺。

在一些實(shí)施方式中，試劑盒包括組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白的納米顆粒。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒的平均直徑不大于約200nm。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒組合物基本上不含(如不含)表面活性劑(如Cremophor)。在一些實(shí)施方式中，組合物中白蛋白與紫杉醇的重量比是約18∶1或更小，如約9∶1或更小。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇包被有白蛋白。在一些實(shí)施方式中，白蛋白是人血清白蛋白。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒的平均直徑不大于約200nm，并且紫杉醇/白蛋白組合物基本上不含(如不含)表面活性劑(如Cremophor)。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒的平均直徑不大于約200nm，并且紫杉醇包被有白蛋白。也考慮上述特征的其它組合。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物是

含有其它紫杉烷(如多烯紫杉醇和ortataxel)的納米顆粒組合物也包括上述特征中的一種或多種。在一些實(shí)施方式中，包含紫杉烷和載體蛋白的納米顆粒是納米顆粒白蛋白結(jié)合的紫杉醇，如美國專利6,566,405所述，可以以商品名

經(jīng)商業(yè)途徑得到。此外，包含紫杉烷和載體蛋白的納米顆粒被認(rèn)為是納米顆粒白蛋白結(jié)合的多烯紫杉醇，例如，描述于美國專利公布2005/0004002A1。

通過閱讀隨后的詳述和所附權(quán)利要求，本發(fā)明的這些方面和優(yōu)勢以及其它方面和優(yōu)勢將是明顯的。將理解，本文所述的多種實(shí)施方案中的一種、一些或所有特性可以被組合，以形成本發(fā)明的其他實(shí)施方式。
附圖簡述


圖1A示出了ABI-007對大鼠主動脈環(huán)血管發(fā)生的影響。圖1B示出了ABI-007對人內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響。圖1C示出了ABI-007對內(nèi)皮細(xì)胞管道形成的影響。

圖2示出了對用于節(jié)律性給藥的ABI-007的最佳生物學(xué)劑量的確定。示出了應(yīng)答于增加劑量的ABI-007，在Balb/cJ小鼠外周血中，存活的循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞(CEPs)的水平。Untr′d，未處理對照；S/A，鹽水/白蛋白載體對照。柱條，均值±SE。
*與未處理對照顯著不同(p＜0.05)。

圖3A和3B示出了節(jié)律性或MTD方案中應(yīng)用的ABI-007和

對帶有MDA-MB-231(A)和PC3(B)腫瘤的SCID小鼠的腫瘤生長的影響。圖3C和3D示出了節(jié)律性或MTD方案中應(yīng)用的ABI-007和

對帶有MDA-MB-231(C)和PC3(D)腫瘤的SCID小鼠的體重的影響。

圖4A和4B示出用下列物質(zhì)處理之后，攜帶MDA-MB-231(圖4A)和PC3(圖4B)腫瘤的SCID小鼠的外周血中，存活的循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞(CEPs)的水平的變化A，鹽水/白蛋白；B，Cremophor EL對照；C，節(jié)律性

1.3mg/kg；D、E和F，節(jié)律性ABI-007，分別是3、6和10mg/kg；G，MTD

H，MTD ABI-007。柱條，均值±SE。a與鹽水/白蛋白載體對照明顯不同(p＜0.05)。b與Cremophor EL載體對照明顯不同(p＜0.05)。

圖5A示出了應(yīng)用下列物質(zhì)處理的MDA-MB-231(■)和PC3(□)異種移植物的腫瘤內(nèi)微血管密度A，鹽水/白蛋白；B，Cremophor EL對照；C，節(jié)律性

1.3mg/kg；D、E和F，節(jié)律性ABI-007，分別是3、6和10mg/kg；G，MTD Taxol；H，MTD ABI-007。柱條，均值±SE。圖5B和圖5C示出了在攜帶MDA-MB-231(圖5B)和PC3(圖5C)腫瘤的SCID小鼠中，腫瘤內(nèi)微血管密度和外周血中存活CEPs數(shù)目之間的關(guān)聯(lián)性。

圖6示出了在皮下注射入Balb/cJ小鼠側(cè)腹的matrigel栓(matrigel plug，基膜栓)中，用于節(jié)律性或MTD方案中的ABI-007或Taxol對堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)-誘導(dǎo)的血管發(fā)生的影響。處理A，鹽水/白蛋白；B，Cremophor EL對照；C，節(jié)律性Taxol 1.3mg/kg；D、E和F，節(jié)律性ABI-007，分別是3、6和10mg/kg；G，MTD Taxol；H，MTD ABI-007。不帶有bFGF(-bEGF)的植入Matrigel作為陰性對照。柱條，均值±SE。

圖7A和圖7B示出在用鹽水對照或

處理后，MDA-MB-231腫瘤細(xì)胞的壞死。圖7C和7D示出在用鹽水對照或

處理后，MDA-MB-231細(xì)胞的缺氧。箭頭示出壞死的位置(7A和7B)或缺氧的位置(7C和7D)。

圖8A和8B示出在細(xì)胞毒性和產(chǎn)克隆試驗(yàn)中VEGF-A和

對

-處理細(xì)胞的影響。在圖8A中，結(jié)果作為活細(xì)胞占未處理細(xì)胞的百分比示出。黑色園圈表示用

單獨(dú)處理的細(xì)胞；空白圓圈表示用

和VEGF-A處理的細(xì)胞；黑三角表示用

和

處理的細(xì)胞。在圖8B中，結(jié)果作為每個平板上細(xì)胞集落的平均數(shù)示出。

圖9示出

和

處理對MDA-MB-231乳腺腫瘤異種移植物生長的影響。黑色方塊表示鹽水處理小鼠中的平均腫瘤體積；黑色園圈表示

處理小鼠中的平均腫瘤體積；黑色菱形表示

處理小鼠中的平均腫瘤體積；空白菱形表示

(2mg/kg)處理小鼠中的平均腫瘤體積；空白圓圈表示

(4mg/kg)處理小鼠中的平均腫瘤體積；三角表示

(8mg/kg)處理小鼠中的平均腫瘤體積。標(biāo)記ABX的兩個條表示兩個

治療周期。

圖10A和10B示出在帶有腫瘤的小鼠中，

和

治療對表達(dá)螢光素酶的MDA-MB-231腫瘤細(xì)胞向淋巴結(jié)和肺轉(zhuǎn)移的影響。結(jié)果以淋巴結(jié)或肺細(xì)胞提取物中的螢光素酶活性水平表示。
發(fā)明詳述
本發(fā)明提供了使用含有紫杉烷和載體蛋白(例如白蛋白)的納米顆粒，基于激素受體狀態(tài)(例如個體細(xì)胞(例如乳腺癌細(xì)胞)表達(dá)或不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法。治療可進(jìn)一步包括聯(lián)合治療，其包括第一治療與第二治療聯(lián)合，第一治療包括給予含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒，第二治療如放療、手術(shù)、給予至少一種其它化療劑或它們的組合，用以基于激素狀態(tài)治療乳腺癌。治療可進(jìn)一步包括節(jié)律性治療，以基于激素狀態(tài)治療乳腺癌。

本發(fā)明涉及這樣的發(fā)現(xiàn)

由于其優(yōu)越的抗腫瘤活性和降低的毒性和副作用，能夠單獨(dú)給予、與其它治療藥和/或治療形式聯(lián)合給予，并且也能夠在節(jié)律性化療中應(yīng)用以基于激素受體狀態(tài)治療乳腺癌。由于含有藥物/載體蛋白納米顆粒的組合物(如

)的安全性方面顯著改善，我們認(rèn)為，在基于激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌中，應(yīng)用這種納米顆粒組合物(如

)的單一療法和聯(lián)合化療比應(yīng)用非納米顆粒制劑的單一療法或與其它藥物的聯(lián)合化療更加有效。另外，在基于激素受體狀態(tài)治療乳腺癌中，納米顆粒組合物(如

)與放射的聯(lián)合應(yīng)用也被認(rèn)為比其它藥物與放射的聯(lián)合更加有效。因此，在基于激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌中，當(dāng)納米顆粒組合物(特別是紫杉醇/白蛋白納米顆粒組合物，如

)單獨(dú)使用時、與其它化療藥聯(lián)合使用時，或者與其它治療形式聯(lián)合使用時，應(yīng)該非常有效并且克服了手術(shù)、放療和化療的缺陷。

本發(fā)明在一個實(shí)施方式中，是應(yīng)用包含紫杉烷的組合物例如

以基于激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明使用第一治療——其包括紫杉烷如

結(jié)合第二治療如另一化療藥或幾種化療藥、放射或類似治療，以基于激素受體狀態(tài)治療乳腺癌。包括紫杉烷的第一治療和第二治療可以相繼給予患有增殖性疾病的哺乳動物，或者它們可以共同給予，甚至在同一藥物組合物中同時給予。

進(jìn)一步地，已發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用

的節(jié)律性給藥方案比相同藥物組合物的傳統(tǒng)MTD給藥方案更加有效。也發(fā)現(xiàn)，

的這種節(jié)律性給藥方案比

的節(jié)律性給藥更加有效。

本文所述方法一般用于治療疾病，特別是增殖性疾病。如本文所用，“治療(treatment)”是獲得有益或所需臨床結(jié)果的方法。對于本發(fā)明目的，有益或所需臨床結(jié)果包括但不限于下列任一或多個一種或多種癥狀的緩解、疾病程度減輕、疾病的穩(wěn)定狀態(tài)(即，不惡化)、預(yù)防或延遲疾病播散(例如，轉(zhuǎn)移)、防止或延遲疾病發(fā)生或復(fù)發(fā)、延遲或減慢疾病進(jìn)展、疾病狀態(tài)改善、和緩和(部分或全部)。“治療”也包括增殖性疾病的病理后果減輕。本發(fā)明方法考慮了這些治療方面中的任一或多種。

如本文所用，“增殖性疾病”被定義為腫瘤疾病(包括良性或惡性)和/或任何轉(zhuǎn)移，不論腫瘤或轉(zhuǎn)移位于何處，更具體地為乳腺癌腫瘤。在一些實(shí)施方式中，增殖性疾病是癌癥。在一些實(shí)施方式中，增殖性疾病是良性或惡性腫瘤。當(dāng)上文和下文提及腫瘤、腫瘤病、癌或癌癥時，也可選地或附加地暗示原發(fā)器官或組織和/或任何其它位置的轉(zhuǎn)移，不論腫瘤和/或轉(zhuǎn)移的部位在何處。

本文所用術(shù)語“有效量”是指足以治療所指障礙、病或疾病，如改善、緩解、減輕和/或延遲其一種或多種癥狀的化合物或組合物的量。當(dāng)提及癌癥或其它不需要的細(xì)胞增殖時，有效量包括足以引起腫瘤縮小和/或降低腫瘤生長速度(如抑制腫瘤生長)或防止或延遲其它不需要的細(xì)胞增殖的量。在一些實(shí)施方式中，有效量是足以延遲發(fā)展的量。在一些實(shí)施方式中，有效量是足以防止或延遲發(fā)生和/或再發(fā)的量。有效量可以在一次或多次給藥中施用。在癌癥的情況下，有效量的藥物或組合物可以(i)減少癌細(xì)胞數(shù)量；(ii)減小腫瘤大??；(iii)一定程度地抑制、延遲、減緩，并優(yōu)選地終止癌細(xì)胞向外周器官浸潤；(iv)抑制(即，一定程度減緩，優(yōu)選地終止)腫瘤轉(zhuǎn)移；(v)抑制腫瘤生長；(vi)防止或延遲腫瘤發(fā)生和/或再發(fā)；和/或(vii)一定程度減輕與癌癥有關(guān)的癥狀的一種或多種。

在一些實(shí)施方式中，提供了治療原發(fā)性腫瘤的方法。在一些實(shí)施方式中，提供了治療轉(zhuǎn)移癌(即，從原發(fā)腫瘤轉(zhuǎn)移的癌癥)的方法。在一些實(shí)施方式中，提供了治療晚期癌癥的方法。在一些實(shí)施方式中，提供了治療乳腺癌(其可以是HER2陽性或HER2陰性)的方法，包括，例如，晚期乳腺癌、IV期乳腺癌、局部晚期乳腺癌和轉(zhuǎn)移乳腺癌。在一些實(shí)施方式中，提供了治療實(shí)體瘤(如晚期實(shí)體瘤)的方法。在一些實(shí)施方式中，提供了減少細(xì)胞增殖和/或細(xì)胞遷移的方法。本發(fā)明也提供了延遲本文所述的任何增殖性疾病進(jìn)展的方法。

術(shù)語“個體”是哺乳動物，包括人。個體包括但不限于人、牛、馬、貓科動物、犬科動物、嚙齒動物或靈長動物。在一些實(shí)施方式中，個體是人。個體(如人)可以患有晚期疾病或程度較低的疾病，如低腫瘤負(fù)荷。在一些實(shí)施方式中，個體處于增殖性疾病(如癌癥)的早期。在一些實(shí)施方式中，個體處于增殖性疾病的晚期(如晚期癌癥)。在一些實(shí)施方式中，個體是HER2陽性的。在一些實(shí)施方式中，個體是HER2陰性的。

本方法可以以輔助情形進(jìn)行實(shí)施。“輔助情形(adjuvant setting)”是指個體曾具有增殖性疾病、特別是癌癥病史，并且一般(但不是必需)對治療應(yīng)答的臨床情況，所述治療包括但不限于手術(shù)(如手術(shù)切除)、放療和化療。然而，由于他們有增殖性疾病(如癌癥)的病史，這些個體被認(rèn)為處于發(fā)生疾病的風(fēng)險中?！拜o助情形”中的治療或給藥是指隨后的治療方式。危險程度(即，當(dāng)輔助情形下的個體被認(rèn)為是“高風(fēng)險”或“低風(fēng)險”)取決于幾個因素，最通常為首次治療時的疾病程度。本文提供的方法也可以在新輔助情形(neoadjuvant setting)下實(shí)施，即，本方法可以在初步的/決定性的治療(primary/definitive therapy)之前實(shí)施。在一些實(shí)施方式中，個體之前已被治療。在一些實(shí)施方式中，個體之前未曾被治療。在一些實(shí)施方式中，治療是一線治療(first line therapy)。

應(yīng)該理解，本文所述的本發(fā)明的方面和實(shí)施方式包括“由各方面和實(shí)施方式構(gòu)成(consisting)”和/或“基本上由各方面和實(shí)施方式構(gòu)成(consisting essentiallyof)”。

如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所理解的，對本文“大約”值或參數(shù)的提及包括(并描述)涉及該值或參數(shù)本身的實(shí)施方式。例如，提及“大約X”的描述包括對“X”的描述。

當(dāng)激素受體狀態(tài)“被用作進(jìn)行本文描述的治療方法或選擇本文描述的治療方法的根據(jù)”時，在治療之前和/或期間，測量激素受體狀態(tài)，并且臨床醫(yī)生在評估下列的任一項(xiàng)中使用所獲得的值(a)個體對初始接受治療(一種或多種)的大概的或可能的適宜性；(b)個體對初始接受治療(一種或多種)的大概的或可能的不適宜性；(c)對治療的應(yīng)答性；(d)個體對繼續(xù)接受治療(一種或多種)的大概的或可能的適宜性；(e)個體對繼續(xù)接受治療(一種或多種)的大概的或可能的不適宜性；(f)調(diào)節(jié)劑量；或(g)預(yù)測臨床益處的可能性。
治療方法
本發(fā)明提供了使用包含含有紫杉烷和載體蛋白的納米顆粒的組合物，基于乳腺癌組織的激素受體狀態(tài)治療乳腺癌的方法。在一些實(shí)施方式中，激素受體狀態(tài)基于激素受體例如雌激素受體(ER)或孕酮受體(PgR)的表達(dá)來確定。在一些實(shí)施方式中，激素受體狀態(tài)基于乳腺癌組織和/或細(xì)胞的激素受體例如雌激素受體和孕酮受體的表達(dá)來確定。

在一些實(shí)施方式中，對于一種或多種激素受體例如雌激素受體和/或孕酮受體，激素受體狀態(tài)是低的。在一些實(shí)施方式中，如果雌激素受體和孕酮受體的激素受體狀態(tài)都是低的，那么個體可能對治療更具應(yīng)答性。在一些實(shí)施方式中，激素受體狀態(tài)不表達(dá)(即是陰性的)一種或多種激素受體例如雌激素受體(ER)或孕酮受體(PgR)。在一些實(shí)施方式中，乳腺癌組織的激素受體狀態(tài)不表達(dá)(即是陰性的)雌激素受體(ER)和孕酮受體(PgR)。在一些實(shí)施方式中，如果雌激素受體和孕酮受體的激素受體狀態(tài)都是陰性的，那么個體可能對治療更具應(yīng)答性。在一些實(shí)施方式中，個體表達(dá)(即是陽性的)雌激素受體或孕酮受體。在一些實(shí)施方式中，個體表達(dá)(即是陽性的)雌激素受體和孕酮受體二者。在一些實(shí)施方式中，如果雌激素受體和/或孕酮受體的激素受體狀態(tài)都是陽性的，那么個體可能對治療具有更少的應(yīng)答性。

在一些實(shí)施方式中，乳腺癌進(jìn)一步表達(dá)HER2(HER2+)。在一些實(shí)施方式中，乳腺癌進(jìn)一步不表達(dá)HER2(HER2-)。

在一些實(shí)施方式中，納米顆粒的平均直徑不大于約200nm。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物基本上不含(如不含)表面活性劑(如Cremophor)。在一些實(shí)施方式中，紫杉烷是紫杉醇。在一些實(shí)施方式中，載體蛋白是白蛋白。在一些實(shí)施方式中，白蛋白是人血清白蛋白。在一些實(shí)施方式中，組合物中白蛋白與紫杉醇的重量比是約18∶1或更小，如約9∶1或更小。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇包被有白蛋白。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒的平均直徑不大于約200nm，并且紫杉醇/白蛋白組合物基本上不含(如不含)表面活性劑(如Cremophor)。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒的平均直徑不大于約200nm，并且紫杉醇包被有白蛋白。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物是

通過雌激素受體(ER)介導(dǎo)的雌激素在調(diào)節(jié)正常乳腺上皮細(xì)胞的生長和分化中起重要作用(Pike MC等，Epidemiologic Reviews(1993)15(1)17-35；HendersonBE等Cancer Res.(1988)48246-253)。其刺激細(xì)胞增殖并且調(diào)節(jié)其他基因的表達(dá)，包括孕酮受體(PgR)。然后，PgR介導(dǎo)孕酮的有絲分裂作用，進(jìn)一步刺激增殖(Pike等，1993；Henderson等，1988)。甚至在不存在激素治療的情況下，雌激素受體(“ER”)陰性腫瘤和ER陽性腫瘤之間的分子差異基于臨床觀察是明顯的，這表明ER陽性腫瘤和ER陰性腫瘤的性質(zhì)和生物學(xué)行為是不同的。例如，與ER陽性腫瘤相比，ER陰性癌癥傾向更快復(fù)發(fā)，并且在遠(yuǎn)處器官位置顯示出不同的復(fù)發(fā)速率。臨床觀察和分子概括分析數(shù)據(jù)(molecular profiling data)表明不表達(dá)ER和PgR的腫瘤在化療應(yīng)答性方面代表不同的臨床實(shí)體(Colleoni等，Annals of Oncology 11(8)1057(2000))。因此，ER陰性乳腺癌和ER陽性乳腺癌是兩種不同的疾病實(shí)體，而不是同一疾病的表型變化。

在一些實(shí)施方式中，該方法包括基于具有不表達(dá)ER和PgR的腫瘤組織的患者的激素受體狀態(tài)鑒定乳腺癌患者。給予合適的患者有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷(例如紫杉醇、多烯紫杉醇或ortataxel)和載體蛋白(例如白蛋白)的納米顆粒。在一些實(shí)施方式中，該方法進(jìn)一步包括給予患者有效量的至少一種其他化療劑。至少一種其他化療劑可以與紫杉烷納米顆粒并行給予或相繼給予。在一些實(shí)施方式中，至少一種其他化療劑包括并行或相繼給予的5-氟尿嘧啶、表阿霉素和環(huán)磷酰胺(FEC)。這些方法在所有患者群——HER-2陽性和HER-2陰性——中的ER(-)/PgR(-)人群中具有更高的功效。

多種方法可用于在樣品(例如乳腺癌組織)中確定激素受體狀態(tài)和測量激素受體水平(例如雌激素受體水平和/或孕酮受體水平)。測量RNA水平的方法包括但不限于雜交(例如分離RNA的RNA印跡法、微列陣和點(diǎn)漬法或線漬法或總RNA)和基于PCR的方法(例如RT-PCR和定量實(shí)時PCR)。例如，可通過Northern分析進(jìn)行雜交，以識別雜交到探針的RNA序列。探針可以用放射性同位素例如32P、酶、digoxygenin或通過生物素化標(biāo)記。使用本領(lǐng)域熟知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)如Sambrook等在(1989)Molecular Cloning，第二版，Cold Spring Harbor Laboratory，Plainview，N.Y.的章節(jié)7.39-7.52中描述的那些技術(shù)，待被分析的RNA可以在瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠上電泳分離，轉(zhuǎn)移到硝酸纖維、尼龍或其它適合的膜，并且與探針雜交。

標(biāo)準(zhǔn)的RNA印跡分析可被用于確定哺乳動物樣品中特定RNA的水平，基于PCR的方法例如定量實(shí)時PCR也可用于確定哺乳動物樣品中特定RNA的水平。在一個實(shí)施方式中，使用隨機(jī)六聚體寡核苷酸引物的逆轉(zhuǎn)錄可以在從癌癥樣品分離的總mRNA上進(jìn)行。然后，在存在特異性探針的情況下(例如在一端具有5′熒光報道染料，并且在另一端具有3′猝滅染料的探針)，所形成的cDNA可被用作使用正向和反向寡核苷酸引物的定量實(shí)時PCR實(shí)驗(yàn)中的模板。可以使用在循環(huán)期間當(dāng)?shù)谝淮螜z測到PCR產(chǎn)物擴(kuò)增時的點(diǎn)監(jiān)測反應(yīng)，而不是用一定數(shù)目循環(huán)后積累的PCR產(chǎn)物的量監(jiān)測反應(yīng)。所形成的定量PCR產(chǎn)物水平可以與原始癌癥樣品中的mRNA水平相關(guān)聯(lián)，并且mRNA水平又可與癌癥的侵襲性相關(guān)聯(lián)。

測量多肽激素受體水平(例如雌激素受體蛋白水平和/或孕酮受體蛋白水平)的方法包括但不限于基于ELISA、免疫組織化學(xué)和免疫熒光的技術(shù)。這類方法一般使用對特定多肽具有特異性結(jié)合親和力的抗體?！疤禺愋越Y(jié)合親和力”指抗體與特定多肽特異性相互作用而不與同一環(huán)境中其它不同多肽明顯交叉反應(yīng)的能力。對雌激素受體或孕酮受體具有特異性結(jié)合親和力的抗體可以與雌激素受體或孕酮受體多肽相互作用。

例如，使用定量夾心式ELISA技術(shù)(quantitative sandwich ELISA technique)可測量乳腺癌樣品中的雌激素受體或孕酮受體多肽水平。乳腺癌組織樣品可被勻漿并提取，將提取物的等分試樣加到用對雌激素受體或孕酮受體具有特異性的抗體預(yù)包被的微滴定板的分開的孔中。在蛋白結(jié)合和隨后的洗滌后，可以將雌激素受體或孕酮受體特異性的酶連接抗體加入到孔中。在抗體結(jié)合和隨后的洗滌后，可以將含有標(biāo)記結(jié)合的IgG的底物溶液加入到孔中(例如辣根過氧化物酶(HRP)-結(jié)合的IgG)。然后，可通過分光光度測定法定量標(biāo)記物，并且定量的水平與對照水平或基線相比較。所形成的定量的多肽水平可以與該癌癥的侵襲性相關(guān)聯(lián)。

也可以通過免疫組織化學(xué)，測量多肽水平。例如，乳腺癌組織樣品中的部分可用抗雌激素受體或抗孕酮受體抗體處理。陰性對照部分可以與代替一抗的預(yù)免疫兔或小鼠血清一起溫育。在抗體結(jié)合和隨后的洗滌后，可以用適當(dāng)?shù)臉?biāo)記-結(jié)合的二抗(例如金-結(jié)合或酶-結(jié)合抗體)檢測一抗。然后，顯色該標(biāo)記物，并使用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行定量。所形成的定量的多肽水平可以與該癌癥的侵襲性相關(guān)聯(lián)。盡管樣品可以單獨(dú)處理，但是來自不同組織或來自不同患者群的樣品可以同時處理。這樣的處理方法包括但不限于組織微列陣，如Kononen等(1998)Nature Med.4844-847描述的。

基于ELISA、免疫組織化學(xué)和免疫熒光的方法的適當(dāng)抗體可使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)獲得。另外，可以使用與癌癥侵襲性相關(guān)的多肽的商業(yè)可獲得的抗體。

基于上述和本領(lǐng)域已知的多種測量方法，可以測定激素受體狀態(tài)例如雌激素受體和孕酮受體。例如，使用免疫組織化學(xué)和測量雌激素受體和/或孕酮受體的核反應(yīng)性，可以測定表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體的免疫反應(yīng)性細(xì)胞百分比，其記錄為免疫反應(yīng)性細(xì)胞對至少2000個瘤細(xì)胞的百分比。如果大于或等于大約1％到大約10％的乳腺癌組織的細(xì)胞表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體，那么乳腺癌組織被表征為具有低激素受體狀態(tài)。如果大約1％以下的乳腺癌組織的細(xì)胞表達(dá)激素受體，那么乳腺癌組織被表征為不表達(dá)激素受體，或?qū)に厥荏w陰性，所述激素受體例如雌激素受體和/或孕酮受體。在一些實(shí)施方式中，小于大約0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％或0.9％的任一個的乳腺癌組織的細(xì)胞表達(dá)激素受體例如雌激素受體或孕酮受體。在一些實(shí)施方式中，小于大約0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％或0.9％的任一個的乳腺癌組織的細(xì)胞表達(dá)雌激素受體和孕酮受體。在一些實(shí)施方式中，0％的乳腺癌組織的細(xì)胞表達(dá)激素受體例如雌激素受體或孕酮受體。在一些實(shí)施方式中，0％的乳腺癌組織的細(xì)胞表達(dá)雌激素受體和孕酮受體。
應(yīng)用化療劑的聯(lián)合治療
本發(fā)明提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒；和b)有效量的至少一種其它化療劑。在一些實(shí)施方式中，紫杉烷是任何下列物質(zhì)(以及在一些實(shí)施方式中，基本上由它們組成)紫杉醇、多烯紫杉醇和ortataxel。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物包括

在一些實(shí)施方式中，化療劑是任何下列藥物(以及在一些實(shí)施方式中選自這些藥物)抗代謝劑(包含核苷類似物)、基于鉑的藥劑、烷化劑、酪氨酸激酶抑制劑、蒽環(huán)類抗生素、長春花堿、蛋白酶體抑制劑、大環(huán)內(nèi)酯類和拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑。

在一些實(shí)施方式中，對于一種或多種激素受體例如雌激素受體或孕酮受體，激素受體狀態(tài)是低的。在一些實(shí)施方式中，如果雌激素受體和孕酮受體的激素受體狀態(tài)都是低的，那么個體可能對治療更具應(yīng)答性。在一些實(shí)施方式中，激素受體狀態(tài)不表達(dá)(即是陰性的)一種或多種激素受體例如雌激素受體(ER)或孕酮受體(PgR)。在一些實(shí)施方式中，乳腺癌組織的激素受體狀態(tài)不表達(dá)(即是陰性的)雌激素受體(ER)和孕酮受體(PgR)二者。在一些實(shí)施方式中，如果雌激素受體和孕酮受體的激素受體狀態(tài)都是陰性的，那么個體可能對治療更具應(yīng)答性。在一些實(shí)施方式中，個體表達(dá)(即是陽性的)雌激素受體或孕酮受體。在一些實(shí)施方式中，個體表達(dá)(即是陽性的)雌激素受體和孕酮受體二者。在一些實(shí)施方式中，如果雌激素受體和/或孕酮受體的激素受體狀態(tài)都是陽性的，那么個體可能對治療具有更少的應(yīng)答性。

在一些實(shí)施方式中，乳腺癌組織進(jìn)一步表達(dá)HER2(HER2+)。在一些實(shí)施方式中，乳腺癌組織進(jìn)一步不表達(dá)HER2(HER2-)。

在一些實(shí)施方式中，所述方法包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒；和b)有效量的至少一種其它化療藥。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒的平均直徑不大于約200nm。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒組合物基本上不含(如不含)表面活性劑(如Cremophor)。在一些實(shí)施方式中，組合物中白蛋白與紫杉醇的重量比為約18∶1或更低，如約9∶1或更低。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇包被有白蛋白。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒的平均直徑不大于約200nm，并且紫杉醇/白蛋白組合物基本上不含(如不含)表面活性劑(如Cremophor)。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒的平均直徑不大于約200nm，并且紫杉醇包被有白蛋白。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物是

在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，該方法包括給予個體a)有效量的

和b)有效量的至少一種其它化療劑。與

相繼或共同給予或同時給予的優(yōu)選的藥物組合是，與單獨(dú)的單一組分相比時，表現(xiàn)出增強(qiáng)的抗增殖活性的組合，特別是引起增殖性組織消退和/或增殖性疾病治愈的組合。

本文所述的化療劑可以是藥劑本身、其藥學(xué)上可接受的鹽和其藥學(xué)上可接受的酯，以及立體異構(gòu)體、對映體、外消旋混合物和類似物?？梢越o予所述一種化療劑或多種化療劑以及含有所述藥劑(一種或多種)的藥物組合物，其中所述藥物組合物包括藥學(xué)上可接受的載體賦形劑或類似物。

化療劑可以存在于納米顆粒組合物中。例如，在一些實(shí)施方式中，提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒；和b)有效量的組合物，所述組合物包括含有至少一種其它化療劑和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒。在一些實(shí)施方式中，所述方法包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒(如

)；和b)有效量的組合物，所述組合物包括含有至少一種其它化療劑和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒。在一些實(shí)施方式中，化療劑是下列任何物質(zhì)(以及在一些實(shí)施方式中，選自)硫代秋水仙堿或其衍生物(如二聚硫代秋水仙堿，包括，例如，nab-5404、nab-5800和nab-5801)、雷帕霉素或其衍生物和格爾德霉素或其衍生物(如17-烯丙基氨基格爾德霉素(17-AAG))。在一些實(shí)施方式中，化療劑是雷帕霉素。在一些實(shí)施方式中，化療劑是17-AAG。

本文提供了被考慮的化療劑的示范性和非限制性列表。合適的化療劑包括例如，長春花堿、破壞微管形成的藥劑(如秋水仙堿和其衍生物)、抗血管生成藥、治療性抗體、EGFR靶向劑、酪氨酸激酶靶向劑(如酪氨酸激酶抑制劑)、過渡金屬配合物、蛋白酶體抑制劑、抗代謝劑(如核苷類似物)、烷化劑、基于鉑的藥劑、蒽環(huán)類抗生素、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、大環(huán)內(nèi)酯類、治療性抗體、類視黃醇(如全反式維甲酸或其衍生物)；格爾德霉素或其衍生物(如17-AAG)，和本領(lǐng)域公知的其它標(biāo)準(zhǔn)化療劑。

在一些實(shí)施方式中，化療劑是任何下列物質(zhì)(以及在一些實(shí)施方式中選自)亞德里亞霉素(adriamycin)、秋水仙堿、環(huán)磷酰胺、放線菌素、博來霉素、柔紅霉素(duanorubicin)、多柔比星(doxorubicin)、表阿霉素、絲裂霉素、氨甲蝶呤、米托蒽醌、氟尿嘧啶、卡鉑、卡莫司汀(BCNU)、甲基-CCNU、順鉑、依托泊甙、干擾素、喜樹堿及其衍生物、膽固醇苯乙酸氮芥、紫杉烷及其衍生物(例如，紫杉醇及其衍生物、泰索帝(taxotere)及其衍生物和類似物)、拓?fù)涮婵?topetecan)、長春堿、長春新堿、他莫昔芬、哌泊舒凡、nab-5404、nab-5800、nab-5801、依立替康、HKP、Ortataxel、吉西他濱、

長春瑞賓、

卡培他濱(capecitabine)、

拉帕替尼(Lapatinib)、索拉非尼(Sorafeni)、其衍生物、本領(lǐng)域已知的化療劑和類似物。在一些實(shí)施方式中，化療劑是組合物，所述組合物包括含有硫代秋水仙堿衍生物和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒。

在一些實(shí)施方式中，化療劑是抗腫瘤藥，包括但不限于卡鉑、

(長春瑞賓)、蒽環(huán)類

拉帕替尼(GW57016)、

吉西他濱

卡培他濱

順鉑、5-氟尿嘧啶、表阿霉素、環(huán)磷酰胺、


等。

在一些實(shí)施方式中，化療劑是參與腫瘤生長的其它因子的拮抗劑，所述因子如EGFR、ErbB2(也稱為Herb)、ErbB3、ErbB4或TNF。有時，也給予個體一種或多種細(xì)胞因子可以是有益的。在一些實(shí)施方式中，治療藥是生長抑制劑。生長抑制劑的合適劑量是目前應(yīng)用的量，并且可以由于生長抑制劑和紫杉烷的聯(lián)合作用(協(xié)同)而減少。

在一些實(shí)施方式中，化療劑是除了抗VEGF抗體、HER2抗體、干擾素和HGFβ拮抗劑之外的化療劑。

本文中對化療劑的提及適用于所述化療劑或其衍生物，因此本發(fā)明考慮和包含任一這些實(shí)施方式(藥劑；藥劑或衍生物(一種或多種))?；焺┗蚱渌瘜W(xué)部分的“衍生物”或“類似物”包括但不限于，結(jié)構(gòu)上與該化療劑或部分相似的化合物，或者與該化療劑或部分屬于同一總化學(xué)類別的化合物。在一些實(shí)施方式中，化療劑或部分的衍生物或類似物保持與該化療劑或部分相似的化學(xué)和/或物理性質(zhì)(包含，例如，官能度)。

在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，該方法包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒；和b)有效量的酪氨酸激酶抑制劑。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，該方法包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒(如

)；和b)有效量的酪氨酸激酶抑制劑。合適的酪氨酸激酶抑制劑包括，例如，伊馬替尼

吉非替尼

特羅凱(Tarceva)、

(蘋果酸舒尼替尼)和拉帕替尼。在一些實(shí)施方式中，酪氨酸激酶抑制劑是拉帕替尼。在一些實(shí)施方式中，酪氨酸激酶抑制劑是特羅凱(Tarceva)。特羅凱(Tarceva)是小分子人表皮生長因子1型/表皮生長因子受體(HER1/EGFR)抑制劑，其在III期臨床試驗(yàn)中表明晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)個體的存活增加。在一些實(shí)施方式中，所述方法用于治療乳腺癌，包括治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌和在新輔助情形下治療乳腺癌。在一些實(shí)施方式中，所述方法用于治療晚期實(shí)體瘤。在一些實(shí)施方式中，提供了抑制哺乳動物中表達(dá)EGFR的腫瘤增殖的方法，該方法包括給予感染這種腫瘤的哺乳動物

和吉非替尼，其中吉非替尼通過脈沖式給藥(pulse-dosing)給予。

在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒；和b)有效量的抗代謝劑(如核苷類似物，包括，例如，嘌呤類似物和嘧啶類似物)。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒(如

)；和b)有效量的抗代謝劑?！翱勾x劑(antimetabolic agent)”是在結(jié)構(gòu)上與代謝物類似，但是不能以有效方式被機(jī)體利用的藥劑。許多抗代謝劑干擾核酸、RNA和DNA的產(chǎn)生。例如，抗代謝劑可以是核苷類似物，其包括但不限于阿扎胞苷、硫唑嘌呤、卡培他濱

阿糖胞苷、克拉屈濱、阿糖胞甙(ara-C，賽德薩(cytosar))、去氧氟尿苷、氟尿嘧啶(如5-氟尿嘧啶)、UFT、羥基脲、吉西他濱、巰基嘌呤、氨甲蝶呤、硫鳥嘌呤(如6-硫鳥嘌呤)。其它抗代謝劑包括，例如，L-天冬酰胺酶(Elspa)、氮烯咪胺(decarbazine)(DTIC)、2-脫氧-D-葡萄糖和普魯芐肼(甲基芐肼(matulane))。在一些實(shí)施方式中，核苷類似物是任何下列物質(zhì)(在一些實(shí)施方式中，選自)吉西他濱、氟尿嘧啶和卡培他濱。在一些實(shí)施方式中，所述方法用于治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌或局部晚期乳腺癌。在一些實(shí)施方式中，所述方法用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌的一線治療。在一些實(shí)施方式中，所述方法用于在新輔助情形下治療乳腺癌。

在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒；和b)有效量的烷化劑。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒(如

)；和b)有效量的烷化劑。合適的烷化劑包括但不限于環(huán)磷酰胺(Cytoxan)、氮芥(mechlorethamine)、苯丁酸氮芥、美法侖、卡莫司汀(BCNU)、噻替哌、白消安、烷基磺酸鹽、吖丙啶、氮芥類似物、雌莫司汀磷酸鈉、異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)、亞硝基脲、洛莫司汀和鏈脲佐菌素(streptozocin)。在一些實(shí)施方式中，烷化劑是環(huán)磷酰胺。在一些實(shí)施方式中，在給予納米顆粒組合物之前給予環(huán)磷酰胺。在一些實(shí)施方式中，所述方法用于治療早期乳腺癌。在一些實(shí)施方式中，所述方法用于在輔助或新輔助情形下治療乳腺癌。

在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，該方法包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒；和b)有效量的基于鉑的藥劑。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，該方法包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒(如

)；和b)有效量的基于鉑的藥劑。合適的基于鉑的藥劑包括但不限于卡鉑、順鉑和奧沙利鉑。在一些實(shí)施方式中，基于鉑的藥劑是卡鉑。在一些實(shí)施方式中，本方法用于治療乳腺癌(HER2陽性或HER2陰性，包括轉(zhuǎn)移乳腺癌和晚期乳腺癌)。

在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒；和b)有效量的蒽環(huán)類抗生素。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了治療個體中增殖性疾病(如癌癥)的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒(如

)以及載體蛋白(諸如白蛋白)；和b)有效量的蒽環(huán)類抗生素。合適的蒽環(huán)類抗生素包括但不限于

放線菌素、放線菌素D、柔紅霉素(道諾霉素)、多柔比星(亞德里亞霉素)、表阿霉素、伊達(dá)比星、米托蒽醌、戊柔比星。在一些實(shí)施方式中，蒽環(huán)類抗生素是任意下列物質(zhì)(以及在一些實(shí)施方式中，選自下列)

表阿霉素和多柔比星。在一些實(shí)施方式中，本方法用于治療早期乳腺癌。在一些實(shí)施方式中，本方法用于在輔助或新輔助情形下治療乳腺癌。

在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒；和b)有效量的長春花堿。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒(如

)以及載體蛋白(諸如白蛋白)；和b)有效量的長春花堿。合適的長春花堿包括，例如，長春堿、長春新堿、長春地辛、長春瑞賓

和VP-16。在一些實(shí)施方式中，長春花堿是長春瑞賓

在一些實(shí)施方式中，本方法用于治療IV期乳腺癌。

在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒；和b)有效量的大環(huán)內(nèi)酯。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒(如

)以及載體蛋白(諸如白蛋白)；和b)有效量的大環(huán)內(nèi)酯。合適的大環(huán)內(nèi)酯包括，例如，雷帕霉素、卡波霉素和紅霉素。在一些實(shí)施方式中，大環(huán)內(nèi)酯是雷帕霉素或其衍生物。在一些實(shí)施方式中，本方法用于治療實(shí)體瘤。

在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒；和b)有效量的拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒(如

)以及載體蛋白(諸如白蛋白)；和b)有效量的拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑。在一些實(shí)施方式中，化療劑是拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑，包括，例如，拓?fù)洚悩?gòu)酶I和拓?fù)洚悩?gòu)酶II的抑制劑。示范性拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑包括但不限于喜樹堿，如依立替康和拓?fù)涮婵?topotecan)。示范性的拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑包括但不限于安吖啶、依托泊甙、依托泊甙磷酸鹽和替尼泊甙。

在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒；和b)有效量的抗血管生成劑。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒(如

)以及載體蛋白(諸如白蛋白)；和b)有效量的抗血管生成劑。在一些實(shí)施方式中，本方法用于治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌和在輔助情形或新輔助情形下治療乳腺癌。

許多抗血管生成劑已被鑒定并且是本領(lǐng)域已知的，包括Carmeliet和Jain(2000)列舉的那些?？寡苌蓜┛梢允翘烊话l(fā)生的或非天然發(fā)生的。在一些實(shí)施方式中，化療劑是合成的抗血管生成肽。例如，以前報道，小的合成促凋亡肽的抗血管生成活性包括兩個功能結(jié)構(gòu)域，一個靶向于腫瘤微血管上的CD 13受體(氨基肽酶N)，另一個內(nèi)化后破壞線粒體膜。Nat.Med.(1999)5(9)1032-8。發(fā)現(xiàn)第二代二聚體肽CNGRC-GG-d(KLAKLAK)2——稱為HKP(Hunter Killer Peptide)，具有提高的抗腫瘤活性。因此，在一些實(shí)施方式中，抗血管生成肽是HKP。在一些實(shí)施方式中，抗血管生成劑不同于抗-VEGF抗體(如

)。

在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒；和b)有效量的蛋白酶體抑制劑，如硼替佐米(bortezomib)(Velcade)。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒(如

)以及載體蛋白(如白蛋白)；和b)有效量的蛋白酶體抑制劑如硼替佐米

在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒；和b)有效量的治療性抗體。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒(如

)以及載體蛋白(如白蛋白)；和b)有效量的治療性抗體。合適的治療性抗體包括但不限于抗-VEGF抗體(如

(貝伐單抗))、抗-HER2抗體(如

(曲妥珠單抗))、

(西妥昔單抗)、Campath(阿侖單抗)、Myelotarg(吉妥單抗(gemtuzumab))、Zevalin(替伊莫單抗(ibritumomab tiuextan)、Rituxan(利妥昔單抗)和Bexxar(托西莫單抗)。在一些實(shí)施方式中，化療劑是

(西妥昔單抗)。在一些實(shí)施方式中，化療劑是針對VEGF或HER2的抗體之外的治療性抗體。在一些實(shí)施方式中，本方法用于治療HER2陽性乳腺癌，包括治療晚期乳腺癌，治療轉(zhuǎn)移癌，輔助情形下治療乳腺癌，和新輔助情形下治療乳腺癌。在一些實(shí)施方式中，本方法用于治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌和輔助情形或新輔助情形下治療乳腺癌。例如，在一些實(shí)施方式中，提供了治療個體中HER2陽性轉(zhuǎn)移性乳腺癌的方法，包括每周給予個體125mg/m2紫杉醇/白蛋白納米顆粒組合物(如

)，持續(xù)3周，第4周停藥，并行給予

在一些實(shí)施方式中，提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白的納米顆粒，和b)有效量的抗VEGF抗體。在一些實(shí)施方式中，有效量的紫杉烷納米顆粒組合物和抗VEGF抗體協(xié)同地抑制細(xì)胞增殖(例如腫瘤細(xì)胞生長)。在一些實(shí)施方式中，至少大約10％(包括例如至少大約下列任一20％、30％、40％、60％、70％、80％、90％或100％)的細(xì)胞增殖被抑制。在一些實(shí)施方式中，紫杉烷是紫杉醇。在一些實(shí)施方式中，抗VEGF抗體是貝伐單抗(例如

)。在一些實(shí)施方式中，紫杉烷是紫杉醇，并且抗VEGF抗體是貝伐單抗(例如

)。在一些實(shí)施方式中，組合物中納米顆粒中的紫杉烷通過靜脈施用給予。在一些實(shí)施方式中，抗VEGF抗體通過靜脈施用給予。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物中的紫杉烷和抗VEGF抗體都通過靜脈施用給予。

在一些實(shí)施方式中，提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)抑制乳腺癌腫瘤轉(zhuǎn)移的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白的納米顆粒，和b)有效量的抗VEGF抗體。在一些實(shí)施方式中，有效量的紫杉烷納米顆粒組合物和抗VEGF抗體協(xié)同地抑制腫瘤轉(zhuǎn)移。在一些實(shí)施方式中，至少大約10％(包括例如至少大約下列任一20％、30％、40％、60％、70％、80％、90％或100％)的轉(zhuǎn)移被抑制。在一些實(shí)施方式中，提供抑制轉(zhuǎn)移到淋巴結(jié)的方法。在一些實(shí)施方式中，提供抑制轉(zhuǎn)移到肺的方法。在一些實(shí)施方式中，紫杉烷是紫杉醇。在一些實(shí)施方式中，抗VEGF抗體是貝伐單抗(例如

)。在一些實(shí)施方式中，紫杉烷是紫杉醇，并且抗VEGF抗體是貝伐單抗(例如

)。在一些實(shí)施方式中，組合物中納米顆粒中的紫杉烷通過靜脈施用給予。在一些實(shí)施方式中，抗VEGF抗體通過靜脈施用給予。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物中的紫杉烷和抗VEGF抗體都通過靜脈施用給予。

抗VEGF抗體的適合劑量包括例如大約1mg/kg至大約20mg/kg，包括例如大約1mg/kg至大約15mg/kg(例如大約下列任一2、4、6、8、10或12mg/kg)。在一些實(shí)施方式中，抗VEGF抗體的劑量為大約40mg/m2至大約600mg/m2，包括例如大約100mg/m2至大約400mg/m2(例如大約下列任一100、200或300mg/m2)。在一些實(shí)施方式中，抗VEGF抗體是貝伐單抗(例如

)。

納米顆粒組合物中紫杉烷和抗VEGF抗體的量的適當(dāng)組合包括例如大約1mg/kg至大約20mg/kg(例如大約下列任一2、5、10或15mg/kg)的納米顆粒組合物中的紫杉烷和大約1mg/kg至大約20mg/kg(例如大約下列任一2、4、6、8、10、12、14、16或18mg/kg)的抗VEGF抗體；大約3mg/m2至大約400mg/m2(例如大約下列任一6、10、15、30、45、60、100、150、200或300mg/m2)的納米顆粒組合物中的紫杉烷和40mg/m2至大約600mg/m2，包括例如大約100mg/m2至大約400mg/m2(例如大約下列任一100、200或300mg/m2)的抗VEGF抗體；大約3mg/m2至大約300mg/m2(例如大約下列任一6、10、15、30、45、60、100、150、200或300mg/m2)的納米顆粒組合物中的紫杉烷和大約1mg/kg至大約20mg/kg(例如大約下列任一2、4、6、8、10、12、14、16或18mg/kg)的抗VEGF抗體。在一些實(shí)施方式中，該方法包括給予個體至少大約200mg/m2的納米顆粒組合物中的紫杉烷和至少大約2、4、8或10mg/kg的任一個的抗VEGF抗體。

在該方法的一些實(shí)施方式中，紫杉烷納米顆粒組合物和抗VEGF抗體同時給予個體。在該方法的一些實(shí)施方式中，并行給予納米顆粒組合物和化療劑。紫杉烷納米顆粒組合物聯(lián)合治療的一個示例性給藥方案包括，至少每周(包括例如每1、2、3、4、5或6天)給予100mg/m2-300mg/m2(例如200mg/m2)的納米顆粒組合物中的紫杉烷，并行每兩周或更高頻率(例如每周、每周兩次或每周三次)給予2mg/kg-15mg/kg(例如4、6、8、10mg/kg或15mg/kg的任一個)的抗VEGF抗體。

在一些實(shí)施方式中，紫杉烷納米顆粒組合物和抗VEGF抗體相繼地給予個體。例如，在一些實(shí)施方式中，紫杉烷納米顆粒組合物在給予抗VEGF抗體之前被給予至少一個(例如至少兩個、三個、四個、五個或六個的任一個)周期。然后，給予抗VEGF抗體至少一周一次(例如兩次)，持續(xù)至少大約3(例如4、5或6)周。紫杉烷納米顆粒組合物(例如紫杉醇/白蛋白納米顆粒組合物，例如

)和抗VEGF抗體(例如貝伐單抗，例如

)聯(lián)合治療的一個示例性給藥方案包括，每日給予10mg/kg的納米顆粒組合物中的紫杉烷，持續(xù)5天，給予兩個周期，中間隔一周，然后以2mg/kg、4mg/kg或8mg/kg劑量每周給予抗VEGF抗體兩次，持續(xù)6周。

在一些實(shí)施方式中，除了在納米顆粒組合物中的紫杉烷，還給予兩種或多種化療劑。這兩種或多種化療劑可以(但不必須)屬于不同類的化療劑。本文提供這些組合的實(shí)例。也考慮其它組合。

在一些實(shí)施方式中，提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒；b)有效量的抗代謝物(如核苷類似物，例如，吉西他濱)；和c)蒽環(huán)類抗生素(如表阿霉素)。在一些實(shí)施方式中，提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒(如

)；b)有效量的抗代謝物(如核苷類似物，例如，吉西他濱)；c)有效量的蒽環(huán)類抗生素(如表阿霉素)。在一些實(shí)施方式中，本方法用于新輔助情形下治療乳腺癌。例如，在一些實(shí)施方式中，提供了治療個體局部晚期/炎性癌癥的方法，包括給予個體220mg/m2紫杉醇/白蛋白納米顆粒組合物(如

)，每2周給予；2000mg/m2吉西他濱，每2周給予；和50mg/m2表阿霉素，每2周給予。在一些實(shí)施方式中，提供了輔助情形下治療個體中乳腺癌的方法，包括給予個體175mg/m2紫杉醇/白蛋白納米顆粒組合物(如

)，每2周給予，2000mg/m2吉西他濱，每2周給予，和50mg/m2表阿霉素，每2周給予。

在一些實(shí)施方式中，提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒，b)有效量的基于鉑的藥劑(如卡鉑)，和c)治療性抗體(如抗-HER2抗體(如

)和抗-VEGF抗體(如

))。在一些實(shí)施方式中，提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒(如

)；b)有效量的基于鉑的藥劑(如卡鉑)，和c)治療性抗體(如抗-HER2抗體(如

)和抗-VEGF抗體(如

))。在一些實(shí)施方式中，本方法用于治療下列任何疾病晚期乳腺癌，轉(zhuǎn)移性乳腺癌和輔助情形下乳腺癌。在一些實(shí)施方式中，提供了治療個體中轉(zhuǎn)移癌的方法，包括給予個體75mg/m2紫杉醇/白蛋白納米顆粒組合物(如

)和卡鉑，AUC＝2，其中每周給藥，給予3周，第4周不給藥。在一些實(shí)施方式中，本方法還包括每周給予約2-4mg/kg的

在一些實(shí)施方式中，提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒，b)有效量的基于鉑的藥劑(如卡鉑)，和c)長春花堿(如

)。在一些實(shí)施方式中，提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒(如

)；b)有效量的基于鉑的藥劑(如卡鉑)，和c)長春花堿(如

)。

在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了基于個體中激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒；b)有效量的烷化劑(如環(huán)磷酰胺)和c)蒽環(huán)類抗生素(如亞德里亞霉素)。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供治療個體中增殖性疾病(如癌癥)的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒；b)有效量的烷化劑(如環(huán)磷酰胺)和c)蒽環(huán)類抗生素(如亞德里亞霉素)。在一些實(shí)施方式中，本方法用于治療早期乳腺癌。在一些實(shí)施方式中，本方法用于輔助情形或新輔助情形下治療乳腺癌。例如，在一些實(shí)施方式中，提供了治療個體中早期乳腺癌的方法，包括給予260mg/m2紫杉醇/白蛋白納米顆粒組合物(如

)、60mg/m2亞德里亞霉素和600mg/m2環(huán)磷酰胺，其中每2周給藥1次。

其它實(shí)施方式在表1中提供。例如，在一些實(shí)施方式中，提供了治療個體中晚期乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒(如

)，b)有效量的卡鉑。在一些實(shí)施方式中，本方法還包括，給予個體有效量的

在一些實(shí)施方式中，提供了治療個體中轉(zhuǎn)移性乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒(如

)，b)有效量的吉西他濱。在一些實(shí)施方式中，提供了治療個體中晚期非小細(xì)胞肺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒(如

)，b)有效量的卡鉑。

在一些實(shí)施方式中，提供了組合物，所述組合物包括含有紫杉烷(如紫杉醇、多烯紫杉醇或ortataxel)和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒和至少一種其它化療劑。本文所述組合物可以包括有效量的紫杉烷和化療劑，用于基于激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌。在一些實(shí)施方式中，化療劑和紫杉烷以預(yù)定比例在組合物中存在，所述預(yù)定比例諸如本文所述的重量比。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了有效量的組合物和有效量的至少一種其它化療劑的協(xié)同組合物(synergistic composition)，所述有效量的組合物包括含有紫杉烷(如紫杉醇、多烯紫杉醇或ortataxel)的納米顆粒。在一些實(shí)施方式中，其它化療劑是抗VEGF抗體(例如貝伐單抗，如

)。

在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了用于基于激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的藥物組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒，其中所述應(yīng)用包括同時和/或相繼給予至少一種其它化療劑。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了用于基于激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的藥物組合物，所述組合物包括化療劑，其中所述應(yīng)用包括同時和/或相繼給予包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒的組合物。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了含紫杉烷的納米顆粒組合物和含有一種其它化療劑的組合物，用于同時和/或相繼應(yīng)用以基于激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌。
給藥方式
在上述用于基于激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法中，包括含有紫杉烷的納米顆粒的組合物(也稱為“納米顆粒組合物”)和化療劑可以同時施用(即，同時給藥)和/或相繼施用(即，相繼給藥)。

在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物和化療劑(包括本文所述的具體化療劑)被同時給予。如本文所用的術(shù)語“同時給予(或同時給藥)”，意味著在不多于約15分鐘的時間間隔內(nèi)給予納米顆粒組合物和化療劑，如不多于約10、5或1分鐘中的任一時間間隔。當(dāng)藥物同時給予時，納米顆粒中的藥物和化療劑可以包含在同一組合物中(例如，含有納米顆粒和化療劑的組合物)或在分開的組合物中(例如，納米顆粒包含在一個組合物中，化療劑包含在另一組合物中)。例如，紫杉烷和化療劑可以存在于含有至少兩種不同的納米顆粒的單一組合物中，其中組合物中的一些納米顆粒包括紫杉烷和載體蛋白，組合物中的一些其它納米顆粒包括化療劑和載體蛋白。本發(fā)明考慮和包括這樣的組合物。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒中僅含有紫杉烷。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物中的藥物和化療劑的同時給藥，可以與補(bǔ)充劑量的紫杉烷和/或化療劑聯(lián)合。

在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物和化療劑相繼給予。本文所用的術(shù)語“相繼給藥(或相繼給予)”指以約15分鐘以上的時間間隔給予納米顆粒組合物中的藥物和化療劑，如下列任一時間以上約20、30、40、50、60分鐘或更多分鐘?？梢韵冉o予納米顆粒組合物或化療劑。納米顆粒組合物和化療劑包含在分開的組合物中，它們可以包含在同一包裝或不同包裝中。

在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物和化療劑的給予是并行的，即，給予納米顆粒組合物的時間和給予化療劑的時間彼此重疊。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物和化療劑的給予不是并行的。例如，在一些實(shí)施方式中，在給予化療劑之前終止給予納米顆粒組合物。在一些實(shí)施方式中，在給予納米顆粒組合物之前終止給予化療劑。這兩個非并行給藥之間的時間間隔可以從大約2周至8周，諸如大約4周。

根據(jù)給藥醫(yī)生的判斷，可以在療程內(nèi)調(diào)整含藥物納米顆粒組合物和化療劑的給藥頻率。當(dāng)分開給藥時，可以以不同的給藥頻率或時間間隔給予含藥物納米顆粒組合物和化療劑。例如，可以每周給予含藥物納米顆粒組合物，同時化療劑的給藥頻率可以更高或更低。在一些實(shí)施方式中，可以應(yīng)用含藥物納米顆粒和/或化療劑的持續(xù)緩釋制劑。實(shí)現(xiàn)緩釋的各種制劑和裝置是本領(lǐng)域已知的。

可以應(yīng)用相同的給藥途徑或不同的給藥途徑給予納米顆粒組合物和化療劑。在一些實(shí)施方式中(對于同時給藥和相繼給藥)，以預(yù)先確定的比例給予納米顆粒組合物中的紫杉烷和化療劑。例如，在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物中的紫杉烷和化療劑的重量比是約1比1。在一些實(shí)施方式中，重量比可以是約0.001至約1之間和約1000至約1之間，或約0.01至約1之間和100至約1之間。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物中的紫杉烷和化療劑的重量比是大約下列任一以下100∶1、50∶1、30∶1、10∶1、9∶1、8∶1、7∶1、6∶1、5∶1、4∶1、3∶1、2∶1和1∶1。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物中的紫杉烷和化療劑的重量比是大約下列任一以上1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1、8∶1、9∶1、30∶1、50∶1、100∶1。考慮其它比例。

紫杉烷和/或化療劑的所需劑量可以(但不必)低于單獨(dú)給予每一藥劑時通常需要的劑量。因此，在一些實(shí)施方式中，亞治療量的納米顆粒組合物中的藥物和/或化療劑被給予。“亞治療量(低于治療的量，Subtherapeutic amount)”或“亞治療水平(低于治療的水平，subtherapeutic level)”是指低于治療量的量，即，所述量低于單獨(dú)給予納米顆粒組合物中的藥物和/或化療劑時通常應(yīng)用的量。該降低可以通過在指定給藥中給予的量來反映和/或在指定時間段給予的量來反映(降低的頻率)。

在一些實(shí)施方式中，給予足夠的化療劑，以使獲得相同治療程度所需的納米顆粒組合物中的藥物的正常劑量降低至少大約下列任一5％、10％、20％、30％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。在一些實(shí)施方式中，給予足夠的納米顆粒組合物中的藥物，以使獲得相同治療程度所需的化療劑的正常劑量降低至少大約下列任一5％、10％、20％、30％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。

在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物中的紫杉烷和化療劑的劑量與單獨(dú)給藥時各自的相應(yīng)正常劑量相比都降低。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物中的紫杉烷和化療劑均以亞治療水平、即降低的水平被給予。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物和/或化療劑的劑量大大低于確定的最大毒性劑量(MTD)。例如，納米顆粒組合物和/或化療劑的劑量低于MTD的約50％、40％、30％、20％或10％。

可以應(yīng)用本文所述的施用配置的組合。本文所述的聯(lián)合治療方法可以單獨(dú)進(jìn)行，或者與另一療法如手術(shù)、放射、化療、免疫療法、基因療法和類似療法聯(lián)合進(jìn)行。此外，具有發(fā)生增殖性疾病較大風(fēng)險的人可以接受治療，以抑制或和/或延遲疾病發(fā)展。

如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所理解的，化療劑的合適劑量將近似于已經(jīng)在臨床治療中應(yīng)用的劑量，其中化療劑被單獨(dú)給藥或與其它化療劑聯(lián)合給藥。根據(jù)被治療的疾病，劑量可能發(fā)生變化。如上所述，在一些實(shí)施方式中，可以以降低水平給予化療劑。

本文所述的納米顆粒組合物可以通過多種途徑給予個體(如人)，如腸胃外，包括靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肺內(nèi)、經(jīng)口、吸入、囊內(nèi)、肌內(nèi)、氣管內(nèi)、皮下、眼內(nèi)、鞘內(nèi)或經(jīng)皮。例如，可以通過吸入給予納米顆粒組合物，以便治療呼吸道疾病?？梢杂迷摻M合物治療呼吸疾病如肺纖維化、閉塞性細(xì)支氣管炎(broncheolitisobliterans)、肺癌、支氣管肺泡癌和類似疾病。在一些實(shí)施方式中，靜脈內(nèi)給予納米顆粒組合物。在一些實(shí)施方式中，經(jīng)口給予納米顆粒組合物。

給予納米顆粒組合物的給藥頻率取決于聯(lián)合治療的性質(zhì)和正被治療的具體疾病。一個示范性給藥頻率包括但不限于，每周給予而不間斷；每周給予，在4周中給予3周(three out of four week)；每三周給一次；每兩周給予一次；每周給藥，在3周中給予2周。也參見表1。

納米顆粒組合物中紫杉烷的劑量將隨著聯(lián)合治療的性質(zhì)和被治療的具體疾病而變化。該劑量應(yīng)該足以實(shí)現(xiàn)所需的應(yīng)答，如對具體疾病的治療或預(yù)防應(yīng)答。納米顆粒組合物中的紫杉烷(在一些實(shí)施方式中是紫杉醇)的示范性劑量包括但不限于大約下列任一50mg/m2、60mg/m2、75mg/m2、80mg/m2、90mg/m2、100mg/m2、120mg/m2、160mg/m2、175mg/m2、200mg/m2、210mg/m2、220mg/m2、260mg/m2和300mg/m2。例如，納米顆粒組合物中的紫杉醇的劑量范圍可以是，以三周方案給藥時為100-400mg/m2，或以每周方案給藥時為50-250mg/m2。也參見表1。

給予納米顆粒組合物(如紫杉醇/白蛋白納米顆粒組合物，如

)的一個示范性給藥方案包括但不限于100mg/m2，每周給予(weekly)，無間斷；75mg/m2，每周給予，在4周中給予3周；100mg/m2，每周給予，在4周中給予3周；125mg/m2，每周給予，在4周中給予3周；125mg/m2，每周給予，在3周中給予2周；130mg/m2，每周給予，無間斷；175mg/m2，每兩周一次；260mg/m2，每兩周一次；260mg/m2，每三周一次；180-300mg/m2，每三周；60-175mg/m2，每周給予，無間斷。此外，可以按照本文所述的節(jié)律性給藥方案給予紫杉烷(單獨(dú)或聯(lián)合治療)。

納米顆粒組合物(如紫杉醇/白蛋白納米顆粒組合物，如

)和其它藥劑的聯(lián)合治療的示范性給藥方案包括但不限于，125mg/m2，每周給予，在3周中給予2周，加825mg/m2

每日給予。納米顆粒組合物(如紫杉醇/白蛋白納米顆粒組合物，如

)和

的劑量可根據(jù)治療的具體疾病或患者而改變。該劑量應(yīng)該足以實(shí)現(xiàn)期望的應(yīng)答，例如對具體疾病的治療性或預(yù)防性應(yīng)答。在聯(lián)合治療中的納米顆粒組合物(在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒組合物，例如

)的示范性劑量包括但不限于，大約100mg/m2、125mg/m2、200mg/m2和260mg/m2的任一個。例如，當(dāng)每周安排給予時，納米顆粒組合物中紫杉醇的劑量范圍可以為50-300mg/m2，有或沒有間斷。在聯(lián)合治療中的

的示例性劑量包括但不限于大約550mg/m2、650mg/m2、825mg/m2、850mg/m2、1000mg/m2和1250mg/m2的任一個。例如，當(dāng)每日安排給予時，

的劑量范圍可以為500-2500mg/m2，有或沒有間斷。

納米顆粒組合物(如紫杉醇/白蛋白納米顆粒組合物，例如

)和其它藥劑的聯(lián)合治療的示范性給藥方案包括但不限于，260mg/m2，每兩周一次，加60mg/m2亞德里亞霉素和600mg/m2環(huán)磷酰胺，每兩周一次；220-340mg/m2，每三周一次，加卡鉑，AUC＝6，每三周一次；100-150mg/m2，每周給予，加卡鉑，AUC＝6，每三周一次；175mg/m2，每兩周一次，加2000mg/m2吉西他濱和50mg/m2表阿霉素，每兩周一次；和75mg/m2，每周給予，在4周中給予3周，加卡鉑，AUC＝2，每周給予，在4周中給予3周。

在一些實(shí)施方式中，根據(jù)表1中描述的任何給藥方案，給予紫杉烷納米顆粒組合物和化療劑。

在一些實(shí)施方式中，提供了治療個體中乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷(如紫杉醇)和白蛋白的納米顆粒，和b)有效量的至少一種其它化療劑，如表1中第1至35行所提供。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物和化療劑的給藥可以是如表1中第1至35行所示的任何給藥方案。在一些實(shí)施方式中，提供了治療個體中轉(zhuǎn)移性乳腺癌的方法，該方法包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷(如紫杉醇)和白蛋白的納米顆粒，和b)有效量的至少一種其它化療劑，如表1中第2、4-8和10-15行所提供。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物和化療劑的給藥可以是如表1中第2、4-8和10-15行所示的任何給藥方案。

在一些實(shí)施方式中，提供了治療個體中晚期乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷(如紫杉醇)和白蛋白的納米顆粒，和b)有效量的至少一種其它化療劑，如表1中第1和16行所提供。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物和化療劑的給藥可以是如表1中第1和16行所示的任何給藥方案。在一些實(shí)施方式中，提供了治療個體中IV期乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷(如紫杉醇)和白蛋白的納米顆粒，和b)有效量的至少一種其它化療劑，如表1中第3行所提供。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物和化療劑的給藥可以是如表1中第3行所示的給藥方案。

在一些實(shí)施方式中，提供了在輔助情形下治療個體的乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷(如紫杉醇)和白蛋白的納米顆粒，和b)有效量的至少一種其它化療劑，如表1中第18至24行所提供。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物和化療劑的給藥可以是如表1中第18至24行所示的任何給藥方案。

在一些實(shí)施方式中，提供了在新輔助情形下治療個體乳腺癌的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷(如紫杉醇)和白蛋白的納米顆粒，和b)有效量的至少一種其它化療劑，如表1中第25至35行所提供。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物和化療劑的給藥可以是如表1中第25至35行所示的任何給藥方案。

在一些實(shí)施方式中，提供了治療個體中實(shí)體瘤(包括晚期實(shí)體瘤)的方法，包括給予個體a)有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷(如紫杉醇)和白蛋白的納米顆粒，和b)有效量的至少一種其它化療劑，如表1中第36-39行所提供。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物和化療劑的給藥可以是如表1中第36-39行所示的任何給藥方案。
表1





如本文所用(例如表1中)，ABX是指

GW572016是指拉帕替尼(Lapatinib)；Xel是指卡培他濱或

貝伐單抗也稱為

曲妥珠單抗也稱為

pemtrexed也稱為

西妥昔單抗也稱為

吉非替尼也稱為

FEC指5-氟尿嘧啶、表阿霉素和環(huán)磷酰胺的聯(lián)合；AC是指亞德里亞霉素加環(huán)磷酰胺的聯(lián)合；TAC是指FDA批準(zhǔn)的輔助乳腺癌方案；RAD001是指雷帕霉素衍生物。

如本文所用(例如，在表1中)，AUC是指曲線下面積；q4wk是指每4周給藥1次，q3wk是指每3周給藥1次；q2wk是指每2周給藥1次；qwk是指每周1次給藥；qwk×3/4是指每周1次給藥，給予3周，第4周不給予；qwk×2/3是指每周1次給藥，給予2周，第3周不給予。
與放療和手術(shù)的聯(lián)合治療
另一方面，本發(fā)明提供了基于激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，其包括第一治療和第二治療，第一治療包括給予紫杉烷(特別是含有紫杉烷的納米顆粒)和載體蛋白，第二治療包括放射和/或手術(shù)。

在一些實(shí)施方式中，對于一種或多種激素受體例如雌激素受體或孕酮受體，激素受體狀態(tài)是低的。在一些實(shí)施方式中，如果雌激素受體和孕酮受體的激素受體狀態(tài)都是低的，那么個體可能對治療更具應(yīng)答性。在一些實(shí)施方式中，激素受體狀態(tài)不表達(dá)(即是陰性的)一種或多種激素受體例如雌激素受體(ER)或孕酮受體(PgR)。在一些實(shí)施方式中，乳腺癌組織的激素受體狀態(tài)不表達(dá)(即是陰性的)雌激素受體(ER)和孕酮受體(PgR)二者。在一些實(shí)施方式中，如果雌激素受體和孕酮受體的激素受體狀態(tài)都是陰性的，那么個體可能對治療更具應(yīng)答性。在一些實(shí)施方式中，個體表達(dá)(即是陽性的)雌激素受體或孕酮受體。在一些實(shí)施方式中，個體表達(dá)(即是陽性的)雌激素受體和孕酮受體二者。在一些實(shí)施方式中，如果雌激素受體和/或孕酮受體的激素受體狀態(tài)都是陽性的，那么個體可能對治療具有更少的應(yīng)答性。

在一些實(shí)施方式中，乳腺癌組織進(jìn)一步表達(dá)HER2(HER2+)。在一些實(shí)施方式中，乳腺癌組織進(jìn)一步不表達(dá)HER2(HER2-)。

在一些實(shí)施方式中，方法包括a)第一治療，其包括給予個體組合物，所述組合物包括含有有效量紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒，和b)第二治療，其包括放療、手術(shù)或其聯(lián)合。在一些實(shí)施方式中，紫杉烷包被有載體蛋白(如白蛋白)。在一些實(shí)施方式中，第二治療是放療。在一些實(shí)施方式中，第二治療是手術(shù)。

在一些實(shí)施方式中，方法包括a)第一治療，其包括給予個體組合物，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒，和b)第二治療，其包括放療、手術(shù)或其組合。在一些實(shí)施方式中，第二治療是放療。在一些實(shí)施方式中，第二治療是手術(shù)。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒的平均直徑不大于約200nm。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒組合物基本上不含(如不含)表面活性劑(如Cremophor)。在一些實(shí)施方式中，組合物中白蛋白與紫杉醇的重量比是約18∶1或更小，如約9∶1或更小。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇包被有白蛋白。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒的平均直徑不大于約200nm，并且紫杉醇/白蛋白組合物基本上不含(如不含)表面活性劑(如Cremophor)。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒的平均直徑不大于約200nm，并且紫杉醇包被有白蛋白。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物是

納米顆粒組合物的給藥可以在放射和/或手術(shù)之前，放射和/或手術(shù)之后，或與放射和/或手術(shù)并行進(jìn)行。例如，納米顆粒組合物的給予可以在放射和/或手術(shù)治療之前或之后，間隔數(shù)分鐘至數(shù)周。在一些實(shí)施方式中，第一治療和第二治療之間的時間段是這樣的使得紫杉烷和放射/手術(shù)仍然能夠?qū)?xì)胞發(fā)揮有益的聯(lián)合作用。例如，納米顆粒組合物中的紫杉烷(如紫杉醇)可以在放射和/或手術(shù)之前約1、3、6、9、12、18、24、48、60、72、84、96、108、120小時中的任何時間以下給予。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物在放射和/或手術(shù)之前約9小時以下給予。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物在放射/手術(shù)之前約1、2、3、4、5、6、7、8、9或10天中的任一個以下給予。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物中的紫杉烷(如紫杉醇)在放射和/或手術(shù)之后約1、3、6、9、12、18、24、48、60、72、84、96、108或120小時中的任何時間以下給予。在一些實(shí)施方式中，為了使治療效果顯著，可能需要延長時間，其中在兩次治療之間有幾天至幾周時間。

本文考慮的放射包括，例如γ-射線、X-射線(外部光束)和直接輸送放射性同位素到腫瘤細(xì)胞。也考慮其它形式的DNA損傷因素，如微波和UV照射也被考慮?？梢砸詥我粍┝窟M(jìn)行放射，或者在劑量分割方案中以一系列小劑量進(jìn)行放射。本文考慮的放射量范圍從約1至約100Gy，包括，例如，約5至約80，約10至約50Gy，或約10Gy。總劑量可以在分割方案中施用。例如，方案可以包括分割的2Gy的單獨(dú)劑量。放射性同位素的劑量范圍可以廣泛變化，并依賴于同位素的半衰期和發(fā)射的輻射的類型和強(qiáng)度。

當(dāng)放射(輻射，radiation)包括應(yīng)用放射性同位素時，同位素可以與靶向劑如治療性抗體偶聯(lián)，其將放射性核苷酸攜帶到靶組織。合適的放射活性同位素包括但不限于砹211、碳14、鉻51、氯36、鐵57、鈷58、銅67、Eu152、鎵67、氫3、碘123、碘131、銦111、鐵59、磷32、錸186、硒75、硫35、锝(technicium)99m和/或釔90。

在一些實(shí)施方式中，將足夠的輻射施加到個體，以使產(chǎn)生相同治療程度所需的納米顆粒組合物中的紫杉烷(如紫杉醇)的正常劑量降低至少約下列任一個5％、10％、20％、30％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。在一些實(shí)施方式中，給予足夠的納米顆粒組合物中紫杉烷，使得產(chǎn)生相同治療程度所需的輻射的正常劑量降低至少約下列任一個5％、10％、20％、30％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物中紫杉烷(如紫杉醇)和輻射的劑量都比單獨(dú)應(yīng)用時各自相應(yīng)的正常劑量低。

在一些實(shí)施方式中，聯(lián)合給予納米顆粒組合物和放療產(chǎn)生超加和作用。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物中的紫杉烷(如紫杉醇)以90mg/kg的劑量每日給予一次，輻射以80Gy每日給予五次。

本文所述的手術(shù)包括切除術(shù)，其中全部或部分癌組織被物理去除、切除和/或破壞。腫瘤切除術(shù)是指物理去除腫瘤的至少一部分。除了腫瘤切除術(shù)之外，手術(shù)治療還包括激光手術(shù)、冷凍手術(shù)、電外科和顯微控制手術(shù)(micropically controlledsurgery)(Mohs手術(shù))。也考慮表淺手術(shù)(superficial surgery)、癌前組織或正常組織的去除。

放療和/或手術(shù)可以在給予化療劑之外進(jìn)行。例如，可以首先給予個體含紫杉烷的納米顆粒組合物和至少一種其它化療劑，隨后接受放療和/或手術(shù)?？蛇x地，可以首先用放療和/或手術(shù)治療個體，隨后給予納米顆粒組合物和至少一種其它化療劑。其它聯(lián)合也被考慮。

聯(lián)合化療劑的給予，給予上面公開的納米顆粒組合物同樣適用于與放療和/或手術(shù)聯(lián)合給予。

在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包括含有紫杉烷(如紫杉醇)和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒，用于基于激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌，其中所述應(yīng)用包括第二治療，其包括放療、手術(shù)或其組合。
節(jié)律性治療
本發(fā)明也提供了節(jié)律性治療方案，用于基于激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌。提供了根據(jù)節(jié)律性給藥方案給予個體組合物的方法，所述組合物包括含有紫杉烷(如紫杉醇、多烯紫杉醇或ortataxel)和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒。本方法適用于治療方法、延遲發(fā)展和本文所述的其它臨床情況和情形(configuration)。

在一些實(shí)施方式中，對于一種或多種激素受體例如雌激素受體或孕酮受體，激素受體狀態(tài)是低的。在一些實(shí)施方式中，如果雌激素受體和孕酮受體的激素受體狀態(tài)都是低的，那么個體可能對治療更具應(yīng)答性。在一些實(shí)施方式中，激素受體狀態(tài)不表達(dá)(即是陰性的)一種或多種激素受體例如雌激素受體(ER)或孕酮受體(PgR)。在一些實(shí)施方式中，乳腺癌組織的激素受體狀態(tài)不表達(dá)(即是陰性的)雌激素受體(ER)和孕酮受體(PgR)二者。在一些實(shí)施方式中，如果雌激素受體和孕酮受體的激素受體狀態(tài)都是陰性的，那么個體可能對治療更具應(yīng)答性。在一些實(shí)施方式中，個體表達(dá)(即是陽性的)雌激素受體或孕酮受體。在一些實(shí)施方式中，個體表達(dá)(即是陽性的)雌激素受體和孕酮受體二者。在一些實(shí)施方式中，如果雌激素受體和/或孕酮受體的激素受體狀態(tài)都是陽性的，那么個體可能對治療具有更少的應(yīng)答性。

在一些實(shí)施方式中，乳腺癌組織進(jìn)一步表達(dá)HER2(HER2+)。在一些實(shí)施方式中，乳腺癌組織進(jìn)一步不表達(dá)HER2(HER2-)。

本文應(yīng)用的“節(jié)律性給藥方案”是指，在沒有長時間間斷的情況下頻繁地給予紫杉烷，給予的劑量低于通過有間斷的傳統(tǒng)規(guī)程的已確定最大耐受劑量(此后也稱為“標(biāo)準(zhǔn)MTD規(guī)程”或“標(biāo)準(zhǔn)MTD方案”)。在節(jié)律性給藥中，可以在一定的時間內(nèi)最終給予與通過標(biāo)準(zhǔn)MTD規(guī)程給予相比相同、較低或較高的積累劑量。在一些情況下，這通過延長進(jìn)行所述給藥方案期間的時間長短和/或頻率，同時降低每次給藥劑量來實(shí)現(xiàn)。一般地，通過本發(fā)明的節(jié)律性給藥方案給予的紫杉烷被個體更好地耐受。節(jié)律性給藥也可以稱為維持給藥(maintenance dosing)或慢性給藥(chronic dosing)。

在一些實(shí)施方式中，提供了給予組合物的方法，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒，其中在至少1個月期間給予納米顆粒組合物，其中每次給藥之間的間隔不多于約1周，并且其中每次給藥時的紫杉烷劑量是遵照傳統(tǒng)給藥方案的其最大耐受劑量的約0.25％至約25％。在一些實(shí)施方式中，提供了給予組合物的方法，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒，其中在至少1個月期間給予納米顆粒組合物，其中每次給藥之間的間隔不多于約1周，并且其中每次給藥時的紫杉烷劑量是遵照傳統(tǒng)給藥方案的其最大耐受劑量的約0.25％至約25％。

在一些實(shí)施方式中，每次給藥時納米顆粒組合物中的紫杉烷(如紫杉醇)劑量低于大約下列任一個按照給定的傳統(tǒng)給藥規(guī)程，在相同的制劑中相同的紫杉烷(如紫杉醇)的MTD的1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、18％、20％、22％、24％或25％。傳統(tǒng)給藥規(guī)程指在臨床情況下通常已確立的給藥規(guī)程。例如，

的傳統(tǒng)給藥規(guī)程是三周規(guī)程，即，每三周給予組合物。

在一些實(shí)施方式中，每次給藥的紫杉烷(如紫杉醇)劑量是相應(yīng)MTD值的約0.25％至約25％之間，包括，例如以下任一種相應(yīng)MTD值的約0.25％至約20％、約0.25％至約15％、約0.25％至約10％、約0.25％至約20％和約0.25％至約25％。按照傳統(tǒng)給藥規(guī)程的紫杉烷的MTD值是已知的，或者可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地確定。例如，當(dāng)

按照傳統(tǒng)的三周給藥規(guī)程給予時的MTD值是約300mg/m2。

在一些實(shí)施方式中，提供了給予組合物的方法，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒，其中在至少1個月期間給予納米顆粒組合物，其中每次給藥之間的間隔不多于約1周，并且其中每次給藥時的紫杉烷劑量是約0.25mg/m2至約25mg/m2。在一些實(shí)施方式中，提供了給予組合物的方法，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒，其中在至少1個月期間給予納米顆粒組合物，其中每次給藥之間的間隔不多于約1周，并且其中每次給藥時的紫杉烷劑量是約0.25mg/m2至約25mg/m2。

在一些實(shí)施方式中，每次給藥的紫杉烷(如紫杉醇)劑量低于大約下列任一個2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、18、20、22、25和30mg/m2。例如，紫杉烷(如紫杉醇)的劑量范圍可以從約0.25mg/m2至約30mg/m2，約0.25mg/m2至約25mg/m2，約0.25mg/m2至約15mg/m2，約0.25mg/m2至約10mg/m2和約0.25mg/m2至約5mg/m2。

納米顆粒組合物中的紫杉烷(如紫杉醇)的給藥頻率包括但不限于至少大約下列任一個每周1次、每周2次、每周3次、每周4次、每周5次、每周6次或每日1次。一般地，每次給藥之間的間隔少于約1周，例如少于大約下列任一時間6、5、4、3、2或1日。在一些實(shí)施方式中，每次給藥之間的間隔是恒定的。例如，可以每日、每2日、每3日、每4日、每5日或每周進(jìn)行給藥。在一些實(shí)施方式中，可以以每日2次、每日3次或更高的頻率進(jìn)行給藥。

本文所述的節(jié)律性給藥方案可以在一段延長的時間段內(nèi)延長，如從約1個月上至約3年。例如，給藥方案可以在大約下列任意時期內(nèi)延長2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18、24、30和36個月。一般地，在給藥規(guī)程中沒有間斷。

通過節(jié)律性方案給予的紫杉烷(如紫杉醇)的累積劑量可以高于根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)MTD給藥規(guī)程、在相同時間段內(nèi)給予的紫杉烷劑量。在一些實(shí)施方式中，通過節(jié)律性方案給予的紫杉烷的累積劑量等于或低于根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)MTD給藥規(guī)程、在相同時間段內(nèi)給予的紫杉烷劑量。

應(yīng)該理解，本文提供的教導(dǎo)僅是為了舉例；并且根據(jù)本文所述的教導(dǎo)和基于各個標(biāo)準(zhǔn)MTD規(guī)程，可以對節(jié)律性給藥方案進(jìn)行常規(guī)設(shè)計(jì)；并且這些試驗(yàn)中應(yīng)用的節(jié)律性給藥方案僅僅作為給藥間隔和持續(xù)時間的可能改變的一個例子，所述改變針對標(biāo)準(zhǔn)MTD規(guī)程作出以便實(shí)現(xiàn)最佳的節(jié)律性給藥方案。

本文所述的節(jié)律性給藥方案可以單獨(dú)用作對增殖性疾病的治療，或者在聯(lián)合治療中應(yīng)用，如本文所述的聯(lián)合治療。在一些實(shí)施方式中，節(jié)律性治療給藥方案可以與通過標(biāo)準(zhǔn)MTD方案給予的其它已確立的治療進(jìn)行聯(lián)合或結(jié)合?！奥?lián)合或結(jié)合(combination or in conjunction with)”意味著，本發(fā)明的節(jié)律性給藥方案或是與已確立治療的標(biāo)準(zhǔn)MTD方案同時進(jìn)行，或是在誘導(dǎo)治療的療程之間進(jìn)行以維持誘導(dǎo)治療對個體產(chǎn)生的益處，目的在于持續(xù)抑制腫瘤生長，同時不過度損傷個體健康或個體忍受下一誘導(dǎo)治療療程的能力。例如，在最初的短的MTD化療過程之后，可以采用節(jié)律性給藥方案。

根據(jù)本文所述的節(jié)律性給藥方案給予的納米顆粒組合物可以通過多種途徑給予個體(如人)，如腸胃外，包括靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、肺內(nèi)、經(jīng)口、吸入、囊內(nèi)、肌內(nèi)、氣管內(nèi)、皮下、眼內(nèi)、鞘內(nèi)或經(jīng)皮。例如，可以通過吸入給予納米顆粒組合物，以便治療呼吸道疾病。組合物可以用于治療呼吸疾病，如肺纖維化、閉塞性細(xì)支氣管炎、肺癌、支氣管肺泡癌和類似疾病。在一些實(shí)施方式中，經(jīng)口給予納米顆粒組合物。

下面提供了一些不同的示例性實(shí)施方式。

在一些實(shí)施方式中，提供了給予組合物的方法，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒，其中在至少1個月期間給予納米顆粒組合物，其中每次給藥之間的間隔不多于約1周，并且其中每次給藥時的紫杉烷劑量是其遵照傳統(tǒng)給藥方案的最大耐受劑量的約0.25％至約25％。在一些實(shí)施方式中，紫杉烷被載體蛋白(如白蛋白)包被。在一些實(shí)施方式中，每次給藥的紫杉烷劑量低于大約下列任一個最大耐受劑量的1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、18％、20％、22％、24％或25％。在一些實(shí)施方式中，紫杉烷以至少約每周1×、2×、3×、4×、5×、6×、7×(即，每日1次)中的任一個給予。在一些實(shí)施方式中，每次給藥之間的間隔低于大約下列任一個7日、6日、5日、4日、3日、2日和1日。在一些實(shí)施方式中，紫杉烷在至少大約下列任一時間段內(nèi)給予2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18、24、30和36個月。

在一些實(shí)施方式中，提供了給予組合物的方法，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒，其中在至少1個月的期間內(nèi)給予納米顆粒組合物，其中每次給藥之間的間隔不多于約1周，并且其中每次給藥時的紫杉烷劑量是其遵照傳統(tǒng)給藥方案的最大耐受劑量的約0.25％至約25％。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒的平均直徑不大于約200nm。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒組合物基本上不含(如不含)表面活性劑(如Cremophor)。在一些實(shí)施方式中，組合物中的白蛋白與紫杉醇的重量比為約18∶1或更低，如約9∶1或更低。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇用白蛋白包被。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒的平均直徑不大于約200nm，并且紫杉醇/白蛋白組合物基本上不含(如不含)表面活性劑(如Cremophor)。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒的平均直徑不大于約200nm，并且紫杉醇包被有白蛋白。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物是

在一些實(shí)施方式中，提供了給予組合物的方法，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒，其中在至少1個月期間給予納米顆粒組合物，其中每次給藥之間的間隔不多于約1周，并且其中每次給藥時的紫杉烷劑量是約0.25mg/m2至約25mg/m2。在一些實(shí)施方式中，紫杉烷包被有載體蛋白(如白蛋白)。在一些實(shí)施方式中，每次給藥的紫杉烷劑量低于大約下列任一種2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、18、20、22和25mg/m2。在一些實(shí)施方式中，紫杉烷以至少大約下列任一種給予每周1×、2×、3×、4×、5×、6×、7×(即，每日1次)。在一些實(shí)施方式中，每次給藥之間的間隔低于大約下列任一種7日、6日、5日、4日、3日、2日和1日。在一些實(shí)施方式中，紫杉烷在至少大約下列任一時間段內(nèi)給予2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18、24、30和36個月。

在一些實(shí)施方式中，提供了給予組合物的方法，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒，其中在至少1個月期間給予納米顆粒組合物，其中每次給藥之間的間隔不多于約1周，并且其中每次給藥時的紫杉烷劑量是約0.25mg/m2至約25mg/m2。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒的平均直徑不大于約200nm。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒組合物基本上不含(如不含)表面活性劑(如Cremophor)。在一些實(shí)施方式中，組合物中的白蛋白與紫杉醇的重量比是約18∶1或更低，如約9∶1或更低。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇包被有白蛋白。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒的平均直徑不大于約200nm，并且紫杉醇/白蛋白組合物基本上不含(如不含)表面活性劑(如Cremophor)。在一些實(shí)施方式中，紫杉醇/白蛋白納米顆粒的平均直徑不大于約200nm，并且紫杉醇包被有白蛋白。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物是

在一些實(shí)施方式中，

(或其它紫杉醇/白蛋白納米顆粒組合物)以每日約3mg/kg至約10mg/kg的劑量給予。在一些實(shí)施方式中，

以每日約6mg/kg至約10mg/kg的劑量給予。在一些實(shí)施方式中，

以每日約6mg/kg的劑量給予。在一些實(shí)施方式中，

以每日約3mg/kg的劑量給予。

本發(fā)明也提供了用于本文描述的節(jié)律性方案(一種或多種)的組合物。在一些實(shí)施方式中，提供了組合物，其包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒，其中所述組合物通過節(jié)律性給藥方案給予個體，如本文所述的給藥方案。
本發(fā)明的其它方面
另一方面，提供了基于激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予組合物，所述組合物包括含有紫杉烷(包括紫杉醇、多烯紫杉醇或ortataxel)和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒。在一些實(shí)施方式中，提供了基于激素受體狀態(tài)(例如不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌的方法，包括給予組合物，所述組合物包括含有ortataxel和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒。

在一些實(shí)施方式中，提供了治療癌癥的方法，包括給予組合物，所述組合物包括含有紫杉醇的納米顆粒，其中所述納米顆粒組合物根據(jù)表2所述的任意給藥方案給予。在一些實(shí)施方式中，癌癥是紫杉烷難治性轉(zhuǎn)移性乳腺癌。
表2

納米顆粒組合物
本文所述的納米顆粒組合物包括含有(在多種實(shí)施方式中，基本上由它們組成)紫杉烷(如紫杉醇)和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒。水溶性差的藥物(如紫杉烷)的納米顆粒已經(jīng)描述于例如，美國專利5,916,596；6,506,405和6,537,579中，也描述于美國專利公布2005/0004002A1中。雖然下文提供的描述具體針對紫杉烷，但應(yīng)該理解，相同的描述適用于其它藥物，如雷帕霉素、17-AAG和二聚體硫代秋水仙堿。

在一些實(shí)施方式中，組合物包括平均直徑或直徑均值不大于約1000納米(nm)的納米顆粒，如不大于大約下列任一值900、800、700、600、500、400、300、200和100nm。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒的平均直徑或直徑均值不大于約200nm。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒的平均直徑或直徑均值不大于約150nm。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒的平均直徑或直徑均值不大于約100nm。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒的平均直徑或直徑均值為約20至約400nm。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒的平均直徑或直徑均值為約40至約200nm。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒是可無菌過濾的。

本文所述的納米顆粒可以以干燥制劑存在(如凍干組合物)或懸浮于生物相容性介質(zhì)中。合適的生物相容性介質(zhì)包括但不限于，水、含水緩沖介質(zhì)、鹽水、緩沖鹽水、任選緩沖的氨基酸溶液、任選緩沖的蛋白質(zhì)溶液、任選緩沖的糖溶液、任選緩沖的維生素溶液、任選緩沖的合成聚合物溶液、含脂類乳液和類似物。

術(shù)語“蛋白質(zhì)”是指任意長度的多肽或氨基酸聚合物(包含全長或片段)，其可以是線性或分支的，包括修飾的氨基酸，和/或被非氨基酸中斷。該術(shù)語也包括已被天然修飾的氨基酸聚合物或通過干擾而修飾的氨基酸聚合物，例如二硫鍵形成、糖基化、脂化、乙?；?、磷酸化或任何操作或修飾。此術(shù)語中也包括，例如，含有一個或多個氨基酸類似物(包括，例如，非天然氨基酸等)以及本領(lǐng)域已知的其它修飾的多肽。本文所述的蛋白質(zhì)可以是天然發(fā)生的，即，獲自或來自天然來源(如血液)，或是合成的(如化學(xué)合成或通過重組DNA技術(shù)合成)。

合適的載體蛋白的例子包括通常見于血液或血漿中的蛋白質(zhì)，其包括但不限于白蛋白、免疫球蛋白——包括IgA、脂蛋白、載脂蛋白B、α-酸性糖蛋白、β-2-巨球蛋白、甲狀腺球蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、纖連蛋白、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X和類似物。在一些實(shí)施方式中，載體蛋白是非血液蛋白質(zhì)，如酪蛋白、α-乳清蛋白和β-乳球蛋白。載體蛋白可以是天然來源或是合成制備的。在一些實(shí)施方式中，藥學(xué)上可接受的載體包括白蛋白，如人血清白蛋白。人血清白蛋白(HSA)是高度可溶性球蛋白，Mr 65K，由585個氨基酸組成。HSA是血漿中最豐富的蛋白質(zhì)，并且構(gòu)成人血漿膠體滲透壓的70-80％。HSA的氨基酸序列包含總共17個二硫鍵、一個游離硫醇(Cys 34)和一個色氨酸(Trp 214)。HSA溶液的靜脈內(nèi)應(yīng)用已經(jīng)被指出用于預(yù)防和治療低血容量性休克(參見，例如，Tullis，JAMA 237355-360，460-463(1977))和Houser等人，Surgery，Gynecology and Obstetrics，150811-816(1980))和在新生兒膽紅素血癥治療中與交換輸血法結(jié)合(參見，例如，F(xiàn)inlayson，Seminars in Thrombosis and Hemostasis，685-120，(1980))。其它白蛋白被考慮，如牛血清白蛋白。這些非人白蛋白的應(yīng)用可適用于，例如，在非人哺乳動物中應(yīng)用這些組合物的情況中，如獸醫(yī)應(yīng)用(包括家養(yǎng)寵物和農(nóng)業(yè)情況)。

人血清白蛋白(HSA)具有多個疏水性結(jié)合位點(diǎn)(對脂肪酸共有8個，脂肪酸是HSA的內(nèi)源性配體)并且結(jié)合不同組的紫杉烷，特別是中性和帶負(fù)電荷的疏水化合物(Goodman等人，The Pharmacological Basis of Therapeutics，9th ed，McGraw-Hill New York(1996))。在HSA的亞結(jié)構(gòu)域HA和IIIA中已經(jīng)提出了兩個高親和結(jié)合位點(diǎn)，它們是很長的疏水口袋，表面附近具有帶電荷的賴氨酸和精氨酸殘基，發(fā)揮極性配體成分的結(jié)合點(diǎn)的功能(參見，例如，F(xiàn)ehske等人，Biochem.Pharmcol，30687-92(198a)，Vorum，Dan.Med.Bull.，46379-99(1999)，Kragh-Hansen，Dan.Med.Bull.，1441131-40(1990)，Curry等人，Nat.Struct.Biol.，5827-35(1998)，Sugio等人，Protein.Eng.12439-46(1999)，He等人，Nature 358209-15(199b)，和Carter等人，Adv.Protein.Chem.45153-203(1994))。已經(jīng)顯示，紫杉醇和異丙酚(propofol)結(jié)合HSA(參見，例如，Paal等人，Eur.J.Biochem.，268(7)2187-91(200a)，Purcell等人，Biochim.Biophys.Acta 1478(a)61-8(2000)，Altmayer等人，Arzneimittelforschung 451053-6(1995)和Garrido等人，Rev.Esp.Anestestiol.Reanim.41，308-12(1994))。此外，已經(jīng)顯示，多烯紫杉醇結(jié)合人血漿蛋白(參見，例如，Urien等人，Invest.New Drugs 14(b)147-51(1996))。

組合物中的載體蛋白(如白蛋白)一般作為紫杉烷的載體，即，與不含載體蛋白的組合物相比，組合物中的載體蛋白使得紫杉烷更容易懸浮在含水介質(zhì)中或者幫助維持懸浮。這可以避免用毒性溶劑(或表面活性劑)來溶解紫杉烷，從而可以降低給予個體(如人)紫杉烷的一種或更多種副作用。因此，在一些實(shí)施方式中，本文所述的組合物基本上不含(如不含)表面活性劑，如Cremophor(包括Cremophor

(BASF))。在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物基本上不含(如不含)表面活性劑。當(dāng)給予個體納米顆粒組合物時，如果組合物中Cremophor或表面活性劑的量不足以在個體中引起一種或更多種副作用，則組合物“基本上不含Cremophor”或“基本上不含表面活性劑”。

本文所述的組合物中的載體蛋白的量將根據(jù)組合物中的其它成分變化。在一些實(shí)施方式中，組合物包括的載體蛋白的量足以在含水懸浮液中穩(wěn)定紫杉烷，例如，以穩(wěn)定膠體懸浮液的形式(如穩(wěn)定的納米顆粒懸浮液)。在一些實(shí)施方式中，載體蛋白處于降低紫杉烷在含水介質(zhì)中的沉降速度的量。對于含顆粒組合物，載體蛋白的量也取決于紫杉烷納米顆粒的尺寸和密度。

如果紫杉烷保持懸浮在含水介質(zhì)中(如沒有可見的沉淀或沉降)一段長時間，如至少約0.1、0.2、0.25、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、24、36、48、60或72小時中的任意時間，則它在含水懸浮液中是“穩(wěn)定的”。懸浮液通常適合給予個體(如人)，但不是必需的。懸浮液的穩(wěn)定性通常(但不必)在貯存溫度下(如室溫(如20-25℃)或冷藏條件下(如4℃))被評價。例如，如果懸浮液在制備后約15分鐘時，對于裸眼或者當(dāng)在1000倍光學(xué)顯微鏡下觀察時沒有表現(xiàn)出可見的絮凝或顆粒聚集，則懸浮液在貯存溫度下是穩(wěn)定的。穩(wěn)定性也可以在加速試驗(yàn)條件下評價，如在高于約40℃的溫度下。

在一些實(shí)施方式中，載體蛋白存在的量足以將紫杉烷在含水介質(zhì)中穩(wěn)定在一定濃度下。例如，組合物中的紫杉烷濃度是約0.1至約100mg/ml，包括例如以下任一數(shù)值約0.1至約50mg/ml、約0.1至約20mg/ml、約1至約10mg/ml、約2mg/ml至約8mg/ml、約4至約6mg/ml、約5mg/ml。在一些實(shí)施方式中，紫杉烷的濃度是至少大約下列任一1.3mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml、6mg/ml、7mg/ml、8mg/ml、9mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml、40mg/ml和50mg/ml。在一些實(shí)施方式中，載體蛋白存在的量避免表面活性劑(如Cremophor)的使用，從而組合物不含或基本上不含表面活性劑(如Cremophor)。

在一些實(shí)施方式中，液體形式的組合物包括約0.1％至約50％(w/v)(例如，約0.5％(w/v)、約5％(w/v)、約10％(w/v)、約15％(w/v)、約20％(w/v)、約30％(w/v)、約40％(w/v)或約50％(w/v))的載體蛋白。在一些實(shí)施方式中，液體形式的組合物包括約0.5％至約5％(w/v)的載體蛋白。

在一些實(shí)施方式中，納米顆粒組合物中的載體蛋白例如白蛋白與紫杉烷的重量比是這樣的，使得足量的紫杉烷結(jié)合于細(xì)胞或被細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)。雖然載體蛋白與紫杉烷的重量比將必須針對不同的載體蛋白和紫杉烷組合而優(yōu)化，但通常地，載體蛋白例如白蛋白與紫杉烷的重量比(w/w)是約0.01∶1至約100∶1、約0.02∶1至約50∶1、約0.05∶1至約20∶1、約0.1∶1至約20∶1、約1∶1至約18∶1、約2∶1至約15∶1、約3∶1至約12∶1、約4∶1至約10∶1、約5∶1至約9∶1、或約9∶1。在一些實(shí)施方式中，載體蛋白與紫杉烷的重量比是大約下列任一值18∶1或更低、15∶1或更低、14∶1或更低、13∶1或更低、12∶1或更低、11∶1或更低、10∶1或更低、9∶1或更低、8∶1或更低、7∶1或更低、6∶1或更低、5∶1或更低、4∶1或更低、和3∶1或更低。

在一些實(shí)施方式中，載體蛋白使得組合物被給予個體(如人)而沒有明顯的副作用。在一些實(shí)施方式中，載體蛋白(如白蛋白)的量有效降低向人給予紫杉烷的一種或更多種副作用。術(shù)語“降低給予紫杉烷的一種或更多種副作用”是指減輕、緩解、改善或避免紫杉烷引起的一種或更多種不期望的作用，以及用于輸送紫杉烷的輸送載體(如使得紫杉烷適于注射的溶劑)引起的副作用。這些副作用包括，例如，骨髓抑制、神經(jīng)毒性、超敏性、炎癥、靜脈刺激、靜脈炎、疼痛、皮膚刺激(skinirritation)、外周神經(jīng)病、粒細(xì)胞缺乏性發(fā)熱(neutropenic fever)、過敏性反應(yīng)、靜脈血栓、外滲(extravasation)和它們的組合。然而，這些副作用僅僅是示例性的，并且與紫杉烷有關(guān)的其它副作用或副作用的組合可以被降低。

在一些實(shí)施方式中，組合物包括

是由人白蛋白USP穩(wěn)定的紫杉醇制劑，其可以分散在可直接注射的生理溶液中。當(dāng)其分散在合適的含水介質(zhì)如0.9％氯化鈉注射液或5％葡萄糖注射液中時，

形成穩(wěn)定的紫杉醇膠體懸浮液。膠體懸浮液中的納米顆粒的平均粒度是約130納米。由于HSA在水中自由可溶，

能夠以寬范圍的濃度范圍重構(gòu)，從稀(0.1mg/ml紫杉醇)到濃(20mg/ml紫杉醇)，包括，例如，約2mg/ml至約8mg/ml，約5mg/ml。

制備納米顆粒組合物的方法是本領(lǐng)域已知的。例如，含有紫杉烷(如紫杉醇)和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆?？梢栽诟呒羟辛l件下(例如，超聲波、高壓勻化、或類似條件)制備。這些方法公開于，例如，美國專利5,916,596、6,506,405和6,537,579中，也描述于美國專利公布2005/0004002A1中。

簡言之，紫杉烷(如多烯紫杉醇)被溶解在有機(jī)溶劑中，并且溶液可以被加到人血清白蛋白溶液中。使混合物接受高壓勻化處理。隨后可以通過蒸發(fā)去除有機(jī)溶劑。獲得的分散體可以進(jìn)一步凍干。合適的有機(jī)溶劑包括，例如，酮、酯、醚、氯化溶劑和本領(lǐng)域已知的其它溶劑。例如，有機(jī)溶劑可以是二氯甲烷和氯仿/乙醇(例如，比例是1∶9、1∶8、1∶7、1∶6、1∶5、1∶4、1∶3、1∶2、1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1、8∶1或9∶a)。
納米顆粒組合物中的其它組分
本文所述的納米顆粒可以在包括其它試劑、賦形劑或穩(wěn)定劑的組合物中存在。例如，為了通過增加納米顆粒的負(fù)ζ電勢來增加穩(wěn)定性，可以加入一些負(fù)電荷成分。這種負(fù)電荷成分包括但不限于，膽汁酸的膽汁酸鹽，所述膽汁酸由甘氨膽酸、膽酸、鵝脫氧膽酸、牛磺膽酸、甘氨鵝脫氧膽酸、?；蛆Z脫氧膽酸、石膽酸、熊脫氧膽酸、脫氫膽酸和其它組成；磷脂，包括卵磷脂(蛋黃)基磷脂，其包括下列磷脂酰膽堿棕櫚酰油酰磷脂酰膽堿、棕櫚酰亞油酰(linoleoyl)磷脂酰膽堿、硬脂酰亞油酰磷脂酰膽堿、硬脂酰油酰磷脂酰膽堿、硬脂?；ㄉ南Ａ字Ｄ憠A、和二棕櫚酰磷脂酰膽堿。其它磷脂包括L-α-二十四酰磷脂酰膽堿(DMPC)、二油酰磷脂酰膽堿(DOPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、氫化大豆卵磷脂(HSPC)和其它相關(guān)化合物。負(fù)電荷表面活性劑或乳化劑也適于作為添加劑，例如，膽固醇酰硫酸鈉和類似物。

在一些實(shí)施方式中，組合物適于給予人類。在一些實(shí)施方式中，組合物適于給予哺乳動物，如獸醫(yī)應(yīng)用、家養(yǎng)寵物和農(nóng)業(yè)動物。存在許多合適的納米顆粒組合物的制劑(參見，例如，美國專利5,916,596和6,096,331)。下列制劑和方法僅僅是示范性的，絕不是限制性的。適于口服施用的制劑可以由下列組成(a)液體溶液，如有效量的溶解于稀釋劑中的化合物，稀釋劑如水、鹽水或橙汁，(b)膠囊、囊劑(sachets)或片劑，各自含有預(yù)先確定量的活性成分，如固體或顆粒，(c)在合適液體中的懸浮劑，和(d)合適的乳劑。片劑形式可以包括乳糖、甘露醇、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、微晶纖維素、阿拉伯膠、明膠、膠體二氧化硅、交聯(lián)羧甲纖維素鈉、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸和其它賦形劑、著色劑、稀釋劑、緩沖劑、濕潤劑、防腐劑、調(diào)味劑和藥學(xué)上相容的賦形劑中的一種或多種。錠劑形式可以包括通常為蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠的香料中的活性成分；以及軟錠劑(pastilles)含有惰性基質(zhì)如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠中的活性成分；乳劑、凝膠等除活性成分外還含有本領(lǐng)域已知的此類賦形劑。

合適的載體、賦形劑和稀釋劑的例子包括但不限于乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯膠、磷酸鈣、藻酸鹽、黃蓍膠、明膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮、纖維素、水、鹽水溶液、糖漿、甲基纖維素、羥基苯甲酸甲酯和羥基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸鎂和礦物油。制劑可以附加地包含潤滑劑、濕潤劑、乳化劑和懸浮劑、防腐劑、甜味劑或調(diào)味劑。

適于腸道外給藥的制劑包括含水的和非含水的等滲無菌注射液，其可以含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑、和使得制劑與目標(biāo)接受者的血液可相容的溶質(zhì)；和含水的和非含水的無菌懸浮液，其可以含有懸浮劑、增溶劑、增稠劑、穩(wěn)定劑和防腐劑。制劑可以存在于單位劑量或多劑量密封的容器如安瓿(ampules)和小瓶中，并且可以貯存在冷凍干燥(凍干)條件下，其僅需要恰好在應(yīng)用之前加入無菌液體賦形劑例如水進(jìn)行注射。臨時注射溶液和懸浮液可以由無菌粉末、顆粒和前述類型的片劑制備。優(yōu)選可注射制劑。

在一些實(shí)施方式中，組合物被配制為具有約4.5至約9.0的pH范圍，包括，例如，約5.0至約8.0、約6.5至約7.5和約6.5至約7.0中的任意pH范圍。在一些實(shí)施方式中，組合物的pH被配制為不大于約6，包括，例如，不大于大約下列任一值6.5、7或8(如約8)。通過加入合適的張力修飾劑如甘油，也可以使組合物與血液等滲。
試劑盒
本發(fā)明也提供了用于本方法的試劑盒。本發(fā)明的試劑盒包括用于鑒定乳腺癌患者的激素受體狀態(tài)(例如具有不表達(dá)雌激素受體(ER)和孕酮受體(PgR)的腫瘤組織)的檢測工具。在一些實(shí)施方式中，試劑盒包含(a)用于檢測乳腺癌患者的雌激素受體和/或孕酮受體的激素受體狀態(tài)的藥劑；和(b)包含含有紫杉烷和載體蛋白的納米顆粒的組合物。在一些實(shí)施方式中，試劑盒包含(a)用于檢測乳腺癌患者的雌激素受體和/或孕酮受體的激素受體水平的藥劑；和(b)用于評估對基于雌激素受體和/或孕酮受體的激素受體狀態(tài)治療乳腺癌的療法的可能應(yīng)答性的說明書，其中該療法包括給予包含含有紫杉烷和載體蛋白的納米顆粒的組合物。在一些實(shí)施方式中，說明書進(jìn)一步提供給予患者有效量的組合物的說明。

在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的試劑盒進(jìn)一步包括一種或多種容器，所述容器包括含紫杉烷的納米顆粒組合物(或單位劑型和/或制品)。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的試劑盒進(jìn)一步包括一種或多種容器，所述容器包括含紫杉烷的納米顆粒組合物(或單位劑型和/或制品)和/或化療劑，以及在一些實(shí)施方式中，還包括根據(jù)本文所述任意方法進(jìn)行應(yīng)用的說明書。試劑盒還可以包括對選擇適于治療的個體的說明。本發(fā)明試劑盒中提供的說明書一般是標(biāo)簽或包裝插入物(例如，試劑盒中包含的一頁紙)上的書面說明書，但是機(jī)器可讀的說明書(例如，在磁盤或光盤上攜帶的說明書)也可以接受。在一些實(shí)施方式中，說明書包括基于激素受體狀態(tài)(例如，不表達(dá)雌激素受體(ER)和孕酮受體(PgR))治療乳腺癌的說明，包括給予個體有效量的包含含有紫杉烷和載體蛋白的納米顆粒的組合物。

在一些實(shí)施方式中，對于一種或多種激素受體例如雌激素受體或孕酮受體，激素受體狀態(tài)是低的。在一些實(shí)施方式中，如果雌激素受體和孕酮受體的激素受體狀態(tài)都是低的，那么個體可能對治療更具應(yīng)答性。在一些實(shí)施方式中，激素受體狀態(tài)不表達(dá)(即是陰性的)一種或多種激素受體例如雌激素受體(ER)或孕酮受體(PgR)。在一些實(shí)施方式中，乳腺癌組織的激素受體狀態(tài)不表達(dá)(即是陰性的)雌激素受體(ER)和孕酮受體(PgR)。在一些實(shí)施方式中，如果雌激素受體和孕酮受體的激素受體狀態(tài)都是陰性的，那么個體可能對治療更具應(yīng)答性。在一些實(shí)施方式中，個體表達(dá)(即是陽性的)雌激素受體或孕酮受體。在一些實(shí)施方式中，個體表達(dá)(即是陽性的)雌激素受體和孕酮受體二者。在一些實(shí)施方式中，如果雌激素受體和/或孕酮受體的激素受體狀態(tài)都是陽性的，那么個體可能對治療具有更少的應(yīng)答性。

在一些實(shí)施方式中，乳腺癌組織進(jìn)一步表達(dá)HER2(HER2+)。在一些實(shí)施方式中，乳腺癌組織進(jìn)一步不表達(dá)HER2(HER2-)。

在一些實(shí)施方式中，試劑盒包括a)組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒，b)有效量的至少一種其它化療劑，和c)用于同時和/或相繼施用納米顆粒和化療劑的說明書，用于基于激素受體狀態(tài)(例如，不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌。在一些實(shí)施方式中，紫杉烷是紫杉醇、多烯紫杉醇和ortataxel中的任一種。在一些實(shí)施方式中，試劑盒包括納米顆粒，其包含a)組合物，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒(如

)，b)有效量的至少一種其它化療劑，和c)用于同時和/或相繼施用納米顆粒和化療劑的說明書，用于基于激素受體狀態(tài)(例如，不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)有效地治療乳腺癌。

在一些實(shí)施方式中，試劑盒包括a)組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒，b)組合物，所述組合物包括含有至少一種其它化療劑和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒，和c)用于同時和/或相繼施用納米顆粒組合物的說明書，用于基于激素受體狀態(tài)(例如，不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)治療乳腺癌。在一些實(shí)施方式中，試劑盒包括納米顆粒，其包括a)組合物，所述組合物包括含有紫杉醇和白蛋白的納米顆粒(如

)，b)組合物，所述組合物包括含有至少一種其它化療劑和載體蛋白(如白蛋白)的納米顆粒，和c)用于同時和/或相繼施用納米顆粒組合物的說明書，用于基于激素受體狀態(tài)(例如，不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體)有效地治療乳腺癌。

納米顆粒和化療劑可以存在于分開的容器中或在單個容器中。應(yīng)該理解，試劑盒可以包括一種獨(dú)特的組合物，或兩種或更多種組合物，其中一種組合物包括納米顆粒且一種組合物包括化療劑。

本發(fā)明的試劑盒處于合適的包裝中。合適的包裝包括但不限于，小瓶、瓶、罐、軟包裝(例如，密封Mylar(聚酯薄膜)或塑料袋)和類似物。試劑盒可以任選地提供其它組分，如緩沖劑和說明信息。

關(guān)于應(yīng)用納米顆粒組合物的說明書一般包括有關(guān)目的治療的劑量、給藥方案和給藥途徑的信息。容器可以是單位劑量、大包裝(例如，多劑量包裝)或亞單位劑量。例如，試劑盒可提供為，含有足夠的紫杉烷(如紫杉烷)劑量，如本文所述，以便為個體提供長時期的有效治療，如下列任一時間1周、2周、3周、4周、6周、8周、3個月、4個月、5個月、7個月、8個月、9個月或更長時間。試劑盒也可以包括多單位劑量的紫杉烷和藥物組合物和使用說明書，并且以足以貯存和藥房應(yīng)用的量包裝，所述藥房例如醫(yī)院藥房和配藥藥房。

本領(lǐng)域技術(shù)人員將知道，在本發(fā)明范圍和精神內(nèi)，幾種變化是可能的。通過參考下列的非限制性實(shí)施例，本發(fā)明將更加詳細(xì)地被描述。下列實(shí)施例進(jìn)一步闡明了本發(fā)明，但是當(dāng)然，不應(yīng)該被解釋為以任何方式限制其范圍。
實(shí)施例 實(shí)施例1新輔助化療在局部晚期乳腺癌中的II期試驗(yàn)，用

隨后是5-氟尿嘧啶、表阿霉素和環(huán)磷酰胺(FEC)
與在每三周規(guī)程上基于Cremophor的紫杉醇相比，

具有更大的功效和有利的毒性(Gradishar WJ等(2005)J Clin Oncol 237794-7803)。每周給予

已示出比該每三周規(guī)程更少的毒性和在紫杉烷難治性轉(zhuǎn)移性乳腺癌中的活性(Blum JL等(2004)J Clin Oncol 2214S，摘要543)。建立該試驗(yàn)以確定

隨后5-氟尿嘧啶、表阿霉素和環(huán)磷酰胺(FEC)在患有局部晚期乳腺癌(LABC)的女性中的活性和安全性概況。

患有LABC的66名女性每周給予100mg/m2的手術(shù)前

持續(xù)連續(xù)12周，然后每三周給予FEC，進(jìn)行4個周期。如果她們的乳腺癌是HER2陰性的(HER2-)，以5-氟尿嘧啶500mg/m2；表阿霉素100mg/m2；環(huán)磷酰胺500mg/m2的劑量給予FEC，并且稱為FEC-100。如果她們的癌癥是HER2陽性的(HER2+)，以5-氟尿嘧啶500mg/m2；表阿霉素75mg/m2；環(huán)磷酰胺500mg/m2的劑量給予FEC(稱為FEC-75)，并且她們接受曲妥珠單抗

在患有HER2+疾病的患者內(nèi)，在研究者的判斷下，以標(biāo)準(zhǔn)的每周規(guī)程，共同給予曲妥珠單抗與

和FEC-75。

試驗(yàn)的主要指標(biāo)(primary endpoint)是完成FEC治療后的病理學(xué)完全應(yīng)答率。次要指標(biāo)(secondary endpoint)包括在

完成下評估的完全臨床應(yīng)答率、毒性/安全性、無疾病發(fā)展存活情況(progression-free survival)和總存活情況。

患者的年齡中值為47歲(范圍為28-70)。IIB期疾病在33％的患者中存在，IIIA期在42％的患者中存在，和IIIB期在24％的患者中存在。評估腫瘤的激素受體狀態(tài)，其包括雌激素受體(ER)和孕酮受體(PgR)。58％的患者為ER或PgR陽性，42％的患者為兩種受體都陰性。評估患者的HER2狀態(tài)，29％為HER2+，71％為HER2陰性。在58個患者(89.2％)中，完成該方案，對剩下的患者沒有完成治療。將所有12劑的Abraxane給予61個患者；48個患者在12周內(nèi)接受12劑，13個患者在13-14周內(nèi)接受12劑。使用Abraxane的毒性數(shù)據(jù)顯示最頻繁的毒性是腹瀉、疹、疲勞、惡心和感覺神經(jīng)病。沒有4級或5級毒性，并且僅報道一例3級中性粒細(xì)胞減少癥。

以100mg/m2每周給予并持續(xù)12周的Abraxane具有最小的毒性和顯著的活性，在患有局部晚期乳腺癌(LABC)的患者中達(dá)到32％的臨床完全應(yīng)答率(21/65)。Abraxane接著FEC的相繼方案被良好耐受，這允許在所有患者中進(jìn)行切除和在33％中進(jìn)行保乳手術(shù)。

如在表3中所示，在HER2陽性LABC中，用曲妥珠單抗并行治療，病理學(xué)完全應(yīng)答(pCR)乳腺率為56％。如在表4中所示，在HER2陰性、激素受體陰性LABC中，病理學(xué)完全應(yīng)答(pCR)乳腺率為29％(5/17)；在HER2陰性、HR陽性LABC中，pCR乳腺率為10％(3/29)。
表3 表4
用Abraxane，然后用FEC治療在并行用曲妥珠單抗治療的HER2-陰性患者和HER2-陽性患者中都具有高效率。該治療方案在ER和PgR陰性的患者中比在ER和/或PgR陽性的患者、既HER2-陰性患者又HER2-陽性患者群體中明顯更有效。
實(shí)施例2.在每三周給予

的III期研究中，

相比于

應(yīng)答提高且毒性降低
中性粒細(xì)胞減少癥和超敏反應(yīng)的發(fā)生率明顯降低、不需要類固醇預(yù)先給藥、神經(jīng)病持續(xù)時間較短、輸注時間較短和劑量較高。

在患有轉(zhuǎn)移性乳腺癌(MBC)的個體中，將ABI-007

——第一個不含任何溶劑的、納米顆粒形式的生物學(xué)相互作用的白蛋白結(jié)合的紫杉醇，與基于

的紫杉醇

比較。進(jìn)行該III期研究以證實(shí)臨床前研究，證明ABI-007與

相比時的優(yōu)越效應(yīng)和降低的毒性。將個體隨機(jī)分派到3周周期，或是在30分鐘期間(靜脈內(nèi))給予ABI-007260mg/m2而不預(yù)先給藥(n＝229)，或是在3小時期間靜脈內(nèi)給予

175mg/m2而預(yù)先給藥(n＝225)。與

相比，ABI-007顯示出明顯更高的應(yīng)答率(33％比19％；p＝0.001)和明顯更長的到腫瘤進(jìn)展的時間(23.0比16.9周，HR＝0.75，p＝0.006)。在接受ABI-007的個體中，具有更長總存活的趨勢(65.0比55.7周；p＝0.374)。在未計(jì)劃的分析中，ABI-007提高了接受二線或更高線治療的個體的存活時間(56.4比46.7周，HR＝0.73，p＝0.024)。在ABI-007組中，4級中性粒細(xì)胞減少癥的發(fā)生率明顯更低(9％比22％，p＜0.001)，雖然紫杉醇劑量高49％。3級感覺神經(jīng)病在ABI-007組中比

組中更加普遍(10％比2％，p＜0.001)，但是比

(中位數(shù)73天)更容易被控制和改善更快(中位數(shù)22天)。在ABI-007組的任一個體中，沒有發(fā)生嚴(yán)重的(3或4級)治療相關(guān)性超敏反應(yīng)——雖然沒有預(yù)先給藥并且給藥時間較短。與之相比，3級超敏反應(yīng)在

組中發(fā)生——雖然有標(biāo)準(zhǔn)的預(yù)先給藥(胸痛2個個體；過敏反應(yīng)3個個體)。按照方案，沒有常規(guī)給予ABI-007組中的個體皮質(zhì)類固醇和抗組胺藥；然而，在2％的治療周期中，在ABI-007組中的18個個體(8％)中，針對嘔吐、肌痛/關(guān)節(jié)痛或厭食進(jìn)行預(yù)先給藥；而在95％的周期中，

組中的224個個體(＞99％)接受預(yù)先給藥。2個治療組之間明顯不同的唯一臨床化學(xué)值是，在

-治療個體中，血清葡萄糖水平更高，所述

-治療個體也具有更高的高血糖發(fā)生率，其被報告為AE(不利作用)(15[7％]比3[1％]；p＝0.003)?？傊?，相比于

ABI-007在此個體群中證明了更高的效應(yīng)和有利的安全特性。治療指數(shù)提高和基于溶劑的紫杉烷所需的類固醇預(yù)先給藥的消除，使得該納米顆粒白蛋白結(jié)合的紫杉醇成為MBC治療中的重要進(jìn)展。
實(shí)施例3.在紫杉烷難治性轉(zhuǎn)移性乳腺癌個體中，每周給予

近來的II期臨床研究顯示，在患有轉(zhuǎn)移性乳腺癌的個體中，以劑量125mg/m2每周給予

(納米顆粒白蛋白結(jié)合的紫杉醇)產(chǎn)生長期的疾病控制，所述患者的疾病在應(yīng)用

或

治療的情況下仍然發(fā)展(即，所述個體是紫杉烷難治性的)。


被認(rèn)為代表了第一個生物學(xué)相互作用組合物，其利用受體介導(dǎo)(gp60)通路，所述通路被發(fā)現(xiàn)是獲得活性成分-紫杉醇的高細(xì)胞內(nèi)腫瘤濃度所必需的(integral)。II期研究包括75個患有紫杉烷難治性轉(zhuǎn)移乳腺癌的個體。每周以125mg/m2通過30分鐘輸注給予

不預(yù)先給予類固醇/抗組胺藥或G-CSF預(yù)防。個體接受三次周劑量，隨后停止1周，每28天重復(fù)。與

或

它們含有可能抑制腫瘤攝取的去污劑——不同，白蛋白結(jié)合的納米顆粒紫杉醇的作用機(jī)制可以產(chǎn)生改進(jìn)的結(jié)果，特別是在這些難于治療的個體群中。

具體地，數(shù)據(jù)顯示，雖然在該高度預(yù)先治療和預(yù)先紫杉烷暴露的個體群中的每周劑量是高達(dá)125mg/m2，但75個個體中僅有3個(4％)由于外周神經(jīng)病而不得不停止

而且，在經(jīng)歷3級外周神經(jīng)病的個體中，80％在僅1或2周的延遲后一般能夠重新開始治療和繼續(xù)接受降低劑量的

持續(xù)平均再4個月。這一快速改進(jìn)與我們從III期試驗(yàn)中的觀察結(jié)果一致，所述結(jié)果是與

誘導(dǎo)的外周神經(jīng)病相比，單獨(dú)的紫杉醇(即不含

)誘導(dǎo)的外周神經(jīng)病快速改善。這些

臨床試驗(yàn)經(jīng)歷提供了評價化療劑紫杉醇本身的作用的第一個臨床機(jī)會，與溶劑的作用區(qū)分開來。基于II期和III期試驗(yàn)經(jīng)歷，現(xiàn)在數(shù)據(jù)表明，在持續(xù)時間和對個體的影響方面，

產(chǎn)生的外周神經(jīng)病比不上

或

產(chǎn)生的外周神經(jīng)病。

對于給予

或

后的外周神經(jīng)病的臨床經(jīng)歷，Abraxis Oncology最近完成了對200個腫瘤學(xué)家的調(diào)查，腫瘤學(xué)家被問道他們認(rèn)為由

誘導(dǎo)的外周神經(jīng)病需要多久來改善和/或解決25％的腫瘤學(xué)家報告“7-12個月”，另外23％報告“從未解決”；對于

各自的百分比是29％和7％。這些數(shù)據(jù)與

和

的包裝插入物中的陳述一致。

對II期數(shù)據(jù)的分析證明，在患有轉(zhuǎn)移性乳腺癌的紫杉烷難治性個體的這些預(yù)后不良的個體群(87％有內(nèi)臟(肺和肝)疾病，69％有＞3個轉(zhuǎn)移灶，88％有腫瘤生長——在紫杉烷情況下)中，

具有活性。觀察結(jié)果包括在

-難治性個體中的疾病控制是44％，在

-難治性個體中的疾病控制是39％。在轉(zhuǎn)移性情況下應(yīng)用單獨(dú)的

時疾病發(fā)展的那些個體中(n＝27)，注意到在接受每周一次的

后的應(yīng)答率是19％。在轉(zhuǎn)移性情況下應(yīng)用單獨(dú)的

時疾病發(fā)展的那些個體中(n＝23)，注意到在接受每周一次

后的應(yīng)答率是13％。

當(dāng)在30分鐘期間每周給予時，發(fā)現(xiàn)

被良好耐受，其中不給予類固醇或G-CSF預(yù)防4級中性粒細(xì)胞減少癥＝3％(沒有G-CSF)；4級貧血＝1％；沒有嚴(yán)重的超敏反應(yīng)(雖然沒有預(yù)先給藥)。在該高度預(yù)處理的個體群中，75％的個體以每周125mg/m2

的完全高劑量處理，沒有由于毒性/副作用引起的劑量減低。在發(fā)生3級感覺性神經(jīng)病的個體中，77％的個體能夠以減低劑量(75-100mg/m2)重新開始

和接受平均12.2個(范圍，1-28)的額外

劑量。明顯注意到，在重新應(yīng)用

的這些個體中，在神經(jīng)病改善為1級或2級后14天內(nèi)，80％(10中的8個)的個體能夠重新開始藥物治療。這些結(jié)果支持了關(guān)鍵的III期試驗(yàn)的觀察結(jié)果，所述III期試驗(yàn)應(yīng)用260mg/m2的

每3周給予，其中也注意到神經(jīng)病的快速改進(jìn)(中位數(shù)22天)。綜合這兩個臨床試驗(yàn)，表明當(dāng)單獨(dú)給予紫杉醇時，發(fā)生的神經(jīng)病顯示時間短并且容易控制。


應(yīng)用微血管內(nèi)皮細(xì)胞上的基于gp60受體的通路，以轉(zhuǎn)運(yùn)白蛋白-紫杉醇復(fù)合物到血管外并進(jìn)入腫瘤間質(zhì)，并且已經(jīng)顯示，

不通過這一機(jī)制轉(zhuǎn)運(yùn)。而且，白蛋白結(jié)合的蛋白SPARC在乳腺腫瘤中過度表達(dá)且可能在

的增加的腫瘤內(nèi)積累中起作用。所提出的機(jī)制表明，一旦位于腫瘤間質(zhì)中，則白蛋白-紫杉醇復(fù)合物會與腫瘤細(xì)胞表面上存在的SPARC結(jié)合，并且通過非溶酶體機(jī)制被迅速內(nèi)化入腫瘤細(xì)胞中。

此外，目前的紫杉烷制劑中一般應(yīng)用的表面活性劑/溶劑，如


80和TPGS，強(qiáng)烈抑制紫杉醇與白蛋白的結(jié)合，從而限制跨內(nèi)皮轉(zhuǎn)運(yùn)。示出的其它數(shù)據(jù)表明，在MX-1乳腺癌異種移植物中，等劑量的

的效率比

在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有所改進(jìn)。

總之，75％的個體以完全高劑量進(jìn)行治療，劑量沒有減低。數(shù)據(jù)表明，單獨(dú)給予納米顆粒白蛋白結(jié)合的紫杉醇而沒有溶劑

時，外周神經(jīng)病得到快速改善。其它數(shù)據(jù)提供了增加的證據(jù)，證明該作用機(jī)制在增強(qiáng)個體結(jié)果方面可能起重要作用。
實(shí)施例4.在MDA-MB-435人腫瘤異種移植物中，

(ABI-007)與靶向抗血管生成促凋亡肽(HKP)協(xié)同作用
由兩個功能域構(gòu)成的小的合成促凋亡肽的抗血管生成活性已經(jīng)被報道，一個功能域靶向腫瘤微血管上的CD 13受體(氨基肽酶N)，另一個功能域在內(nèi)化后干擾線粒體膜。參見，Nat Med.1999 Sep；5(9)1032-8。發(fā)現(xiàn)第二代二聚體肽CNGRC-GG-d(KLAKLAK)2——命名為HKP(Hunter Killer Peptide)，具有改進(jìn)的抗腫瘤活性。由于抗血管生成劑如

表現(xiàn)出與細(xì)胞毒性劑如5-氟尿嘧啶的協(xié)同作用，我們在MDA-MB-435人乳腺腫瘤異種移植物中，評價抗血管生成劑HKP和

(ABI-007)的聯(lián)合，

是白蛋白納米顆粒紫杉醇，由血管內(nèi)皮中的gp60受體轉(zhuǎn)運(yùn)(Desai，SABCS 2003)。

方法以平均腫瘤體積100mm3建立MDA-MB-435人腫瘤異種移植物，將小鼠隨機(jī)分為12-13只動物的組，并用HKP、

或HKP和

處理。靜脈輸送HKP(250μg)，每周1次，持續(xù)16周。靜脈給予

每日給予，持續(xù)5日，10mg/kg/日，僅治療的第一周給予。應(yīng)用的

劑量顯著低于其MTD(30mg/kg/日，qd×5)，以防止腫瘤完全消退，從而可以注意到HKP的作用。

結(jié)果在處理第19周時，在對照組(10,298mm3±2,570)和HKP(4,372mm3±2,470；p＜0.05，相比于對照組)或ABI-007(3,909mm3±506；p＜0.01，相比于對照組)之間，腫瘤體積顯著減小。與任一單藥治療相比，ABI-007和HKP的聯(lián)合明顯減小腫瘤體積(411mm3±386；p＜0.01，相比于

單藥治療或HKP單藥治療)。所述治療被良好耐受。

結(jié)論

(ABI-007)——納米顆粒白蛋白結(jié)合的紫杉醇，與血管靶向抗血管生成劑二聚體肽HKP(CNGRC-GG-d(KLAKLAK)2)聯(lián)合治療MDA-MB-435異種移植物乳腺腫瘤表明，相比于任一藥劑的單藥治療，腫瘤體積顯著減小。我們的結(jié)果顯示，

和抗血管生成劑如HKPs或可能是

的聯(lián)合可以是有益的。
實(shí)施例5.節(jié)律性ABI-007治療納米顆粒白蛋白結(jié)合的紫杉醇的抗血管生成和抗腫瘤活性 實(shí)施例5a
方法通過大鼠主動脈環(huán)、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)增殖和管腔形成試驗(yàn)，評價ABI-007的抗血管生成活性。通過測定Balb/c非腫瘤攜帶小鼠的外周血中循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞(CEPs)的水平(n＝5/組；劑量1-30mg/kg，i.p.，qd×7)和流式細(xì)胞分析，確定ABI-007用于節(jié)律性治療的最佳劑量(Shaked等人，Cancer Cell，7101-111(2005))。隨后，在帶有人MDA-MD-231乳腺癌和PC3前列腺癌異種移植物的SCID小鼠中，評價并比較節(jié)律性(qd；i.p.)和MTD(qd×5，1個周期，i.v.)ABI-007和

的抗腫瘤效應(yīng)。

結(jié)果5nM的ABI-007顯著(p＜0.05)抑制大鼠動脈微血管向外生長、人內(nèi)皮細(xì)胞增殖和管腔形成，分別抑制53％、24％和75％。根據(jù)CEP測定，觀察到ABI-007用于節(jié)律性治療的最佳劑量是6-10mg/kg。節(jié)律性ABI-007(6mg/kg)而不是

(1.3mg/kg)顯著(p＜0.05)抑制兩種異種移植物模型中的腫瘤生長。節(jié)律性給予的ABI-007和

都不誘導(dǎo)任何體重減輕。雖然MTD ABI-007(30mg/kg)比MTD

(13mg/kg)更有效地抑制腫瘤生長，但前者觀察到明顯的體重減輕。有趣的是，節(jié)律性ABI-007的抗腫瘤作用近似于MTD

的抗腫瘤作用。

結(jié)論當(dāng)用于節(jié)律性方案時，ABI-007表現(xiàn)出有效的抗血管生成和抗腫瘤活性。
實(shí)施例5b
大鼠主動脈環(huán)分析。將12孔組織培養(yǎng)板包被Matrigel(CollaborativeBiomedical Products，Bedford，MA)，使其于37℃和5％CO2下膠凝30分鐘。從8至10周齡的雄性Sprague-Dawley大鼠切除胸主動脈，切為1-mm長的橫向切片，放在Matrigel包被的孔中，并用額外的Matrigel覆蓋。設(shè)置第二層Matrigel之后，用EGM-II覆蓋這些環(huán)，于37℃和5％CO2下溫育。EGM-II由內(nèi)皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基(EBM-II；Cambrex，Walkersville，MD)加內(nèi)皮細(xì)胞生長因子構(gòu)成，以EGM-IIBulletkit(Cambrex)提供。隨后將培養(yǎng)基更換為EBM-II，其補(bǔ)充有2％FBS、0.25μg/ml兩性霉素B和10μg/ml慶大霉素。用含有載體(0.9％鹽水/白蛋白)、羧基酰胺三唑(CAI；12μg/ml)或ABI-007(0.05-10nM紫杉醇)的EBM-II處理主動脈環(huán)4天，并在第5天照相。CAI——已知的抗血管生成劑——以高于臨床上可實(shí)現(xiàn)的濃度用作陽性對照。用來自四種不同大鼠的主動脈重復(fù)試驗(yàn)4次。用Adobe Photoshop6.0量化血管發(fā)生萌發(fā)面積，報告為平方像素。

如圖1A所示，相對于載體對照，ABI-007以濃度依賴方式明顯抑制大鼠主動脈微血管向外生長，在5nM(53％抑制)和10nM(68％抑制)時，取得統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(p＜0.05)。在ABI-007的每一濃度下存在的白蛋白量不單獨(dú)抑制血管生成。

內(nèi)皮細(xì)胞增殖試驗(yàn)。在37℃和5％CO2下，在EGM-II中維持人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC；Cambrex)。將HUVECs種于12孔板上，密度是30,000個細(xì)胞/孔，并使其粘附過夜。隨后吸取培養(yǎng)基，向每個孔加入含有載體(0.9％鹽水/白蛋白)或ABI-007(0.05-10nM紫杉醇)的新鮮培養(yǎng)基。48h后，細(xì)胞被胰蛋白酶消化，且用Coulter Z1計(jì)數(shù)器(Coulter Corp.，Hialeah，F(xiàn)L)計(jì)數(shù)。所有試驗(yàn)重復(fù)三次。

如圖1B所示，人內(nèi)皮細(xì)胞增殖被5nM和10nM的ABI-007顯著抑制，分別抑制36％和41％。

內(nèi)皮細(xì)胞管腔形成試驗(yàn)。用Matrigel包被8孔玻片室(slide chambers)，使其于37℃和5％CO2下膠凝30分鐘。隨后在含有載體(0.9％鹽水/白蛋白)或ABI-007(0.05-10nM紫杉醇)的EGM-II中，以30,000個細(xì)胞/孔種植HUVECs，于37℃和5％CO2下溫育16小時。溫育后，在PBS中洗滌玻片，在100％甲醇中固定10秒，用DiffQuick溶液II(Dade Behring Inc.，Newark，DE)染色2分鐘。為了分析管腔形成，應(yīng)用2.5×物鏡對每個孔進(jìn)行數(shù)字化照相。設(shè)定閾值水平，以便遮蔽被染色的管。應(yīng)用MetaMorph軟件(Universal Imaging，Downingtown，PA)將相應(yīng)面積測量為像素數(shù)目。試驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行三次。

如圖1C所示，ABI-007在5nM和10nM時都阻斷管形成75％。

通過測量循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞(CEC)和循環(huán)內(nèi)皮祖細(xì)胞(CEC)確定ABI-007的體內(nèi)最佳生物學(xué)劑量。將6至8周齡的雌性Balb/cJ小鼠隨機(jī)分為下列8組(每組n＝5)未治療；通過每日腹膜內(nèi)彈丸注射藥物載體(0.9％鹽水/白蛋白)或ABI-007進(jìn)行治療，劑量為1、3、6、10、15或30mg/kg紫杉醇，進(jìn)行7天。治療期結(jié)束，通過心臟穿刺采取血樣，收集在含有EDTA的真空管(Becton Dickinson，F(xiàn)ranklin Lakes，NJ)中。用四色流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)CECs和CEPs。應(yīng)用特異于CD45的單克隆抗體排除CD45+造血細(xì)胞。應(yīng)用鼠類內(nèi)皮標(biāo)志物，胎兒肝臟激酶1/VEGF受體2(flk-1/VEGFR2)、CD 13和CD 117(BD Pharmingen，San Diego，CA)，描述CECs及其CEP亞類。進(jìn)行核染色(Procount；BD Biosciences，San Jose，CA)以便排除血小板或細(xì)胞碎片干擾CEC和CEP計(jì)數(shù)精確性的可能性。紅細(xì)胞裂解后，利用設(shè)計(jì)用于排除死細(xì)胞、血小板和碎片的分析途徑，通過FACSCalibur(BD Biosciences)評價細(xì)胞懸浮液。為了分析CEC和CEP的百分?jǐn)?shù)，得到至少100,000個事件/樣品。隨后將CECs和CEPs的絕對數(shù)計(jì)算為，CEC和CEP計(jì)數(shù)途徑中收集的事件百分?jǐn)?shù)乘以白細(xì)胞總數(shù)。確定染色細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，并與合適的陰性對照比較。陽性染色被定義為，大于非特異性背景染色。應(yīng)用7-氨基放線菌素D(7AAD)對存活細(xì)胞相比于凋亡和死亡細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。

圖2示出，以3、10-30mg/kg每日腹膜內(nèi)給予ABI-007持續(xù)7天，明顯降低非腫瘤攜帶Balb/cJ小鼠的CEP水平。然而，10-30mg/kg的ABI-007與表示毒性的白細(xì)胞計(jì)數(shù)的顯著降低有關(guān)。雖然6mg/kg的ABI-007導(dǎo)致的CEP水平降低未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性，但白細(xì)胞計(jì)數(shù)上的減少是不明顯的。因此，結(jié)論是，節(jié)律性ABI-007的體內(nèi)最佳生物學(xué)劑量是3-10mg/kg之間。在一個研究中，每日腹膜內(nèi)給予1.3、3、6或13mg/kg的節(jié)律性

持續(xù)7天沒有顯著降低活CEP水平，而30mg/kg或更高的節(jié)律性

引起小鼠的嚴(yán)重毒性并且最終死亡。以前報道，腹膜內(nèi)給予臨床普遍應(yīng)用劑量的

使得

EL膠束中的紫杉醇陷夾在腹膜腔中，結(jié)果使得血漿紫杉醇濃度不明顯(Gelderblom等人，Clin.Cancer Res.81237-41(2002))。這解釋了不引起死亡的節(jié)律性

(1.3、3、6和13mg/kg)劑量為何不能改變活CEP水平。在這種情況下，腹膜內(nèi)以1.3mg/kg給予節(jié)律性

不會與13mg/kg有任何差異。因此，選擇較低劑量1.3mg/kg以便在隨后的試驗(yàn)中使每次給予紫杉醇時的

EL量最小化。

節(jié)律性和MTD ABI-007相比于節(jié)律性和MTD

的抗腫瘤作用。人前列腺癌細(xì)胞系PC3和人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MD-231得自美國典型培養(yǎng)物保藏中心(American Type Culture Collection)(Manassas，VA)。將PC3細(xì)胞(5×106)皮下注射入6至8周齡雄性SCID小鼠，而MDA-MB-231細(xì)胞(2×106)正位植入雌性SCID小鼠的乳腺脂肪墊。當(dāng)原發(fā)性腫瘤體積達(dá)到約150-200mm3時，將動物隨機(jī)分為8組(n＝5-10/組)。每組應(yīng)用下列治療0.9％鹽水/白蛋白載體對照、

EL載體對照、節(jié)律性

(1.3mg/kg，i.p.，qd)、節(jié)律性ABI-007(3、6或10mg/kg紫杉醇，i.p.，qd)、MTD

(13mg/kg，i.p.，qd×5，1周期)或MTD ABI-007(30mg/kg紫杉醇，i.v.，qd×5，1個周期)。用測徑器每周1次測量腫瘤垂直直徑，并計(jì)算它們的體積。在治療期結(jié)束，從所有組的小鼠經(jīng)心臟穿刺采取血樣。CECs和CEPs如本文所述計(jì)數(shù)。

腹膜內(nèi)每日給予節(jié)律性ABI-007(3、6和10mg/kg)而不是

(1.3mg/kg)持續(xù)4周，明顯(p＜0.05)抑制MDA-MB-231和PC3腫瘤生長(圖3A和圖3B)。節(jié)律性給予的ABI-007和

都不誘導(dǎo)任何體重減輕(圖3C和圖3D)。雖然MTDABI-007(30mg/kg)抑制腫瘤生長比MTD

(13mg/kg)更加有效，但在前者中觀察到明顯的體重減輕，表明具有毒性。此外，藥物末次劑量后6天，用MTDABI-007治療的5只小鼠中的2只表現(xiàn)出單肢麻痹的跡象。麻痹是暫時的，在24-48小時內(nèi)恢復(fù)。有趣的是，在MDA-MB-231異種移植物模型中，6mg/kg的節(jié)律性ABI-007的抗腫瘤作用類似于MTD

的作用(圖3A)。增加節(jié)律性ABI-007的劑量至10mg/kg似乎不賦予更顯著的腫瘤生長抑制作用。相比而言，在PC3異種移植物中，10mg/kg的節(jié)律性ABI-007比3和6mg/kg引起更強(qiáng)的抗腫瘤應(yīng)答(圖3B)。

節(jié)律性ABI-007以劑量依賴方式顯著降低MDA-MB-231腫瘤攜帶小鼠中的活CEPs水平(圖4A)。在PC3腫瘤攜帶小鼠中，應(yīng)答于節(jié)律性ABI-007，存活CEP水平也表現(xiàn)出劑量依賴性降低，但僅在10mg/kg達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(圖4B)。在兩種異種移植物模型中，CEPs的水平都沒有被節(jié)律性

改變(圖4A和圖4B)。

節(jié)律性和MTD ABI-007與節(jié)律性和MTD

對腫瘤內(nèi)微血管密度的作用被研究。得自冷凍的MDA-MB-231和PC3腫瘤的5-μm厚切片通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)方法，應(yīng)用H&E染色用于組織學(xué)檢查。為了檢測微血管，用大鼠抗小鼠CD31/PECAM-1抗體(1∶1000，BD Pharmingen)對切片染色，隨后用德克薩斯紅(Texas Red)-偶聯(lián)的羊抗大鼠二抗(1∶200，Jackson ImmunoResearch Laboratories，Inc.，West Grove，PA)染色。單個微血管被定義為，CD31/PECAM-1d染色陽性的不連續(xù)簇或單個細(xì)胞，腔的存在不是用于作為微血管評分所必需的。每一腫瘤的MVD表示為三個染色最密集區(qū)域的平均數(shù)，以20×物鏡在Zeiss AxioVision 3.0熒光顯微成像系統(tǒng)中鑒定。對每一載體對照或治療組，分析4至5個不同腫瘤。

在MDA-MB-231腫瘤中，6和10mg/kg的節(jié)律性ABI-007，以及MTDABI-007似乎輕微降低微血管密度(MVD)，雖然沒有達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(圖5A)。在PC3腫瘤中，3和10mg/kg的節(jié)律性ABI-007表明降低MVD，但沒有達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(圖5A)。有趣的是，在MVD和活CEP水平之間存在明顯的關(guān)聯(lián)性，這發(fā)生于MDA-MB-231(圖5B；r＝0.76，P-0.04)而不是PC3(圖5C；r＝-0.071，P-0.88)模型中。

進(jìn)行體內(nèi)血管生成評價。進(jìn)行Matrigel栓輸注試驗(yàn)，對本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法進(jìn)行微小的修改。簡言之，在第0天將補(bǔ)充有500ng/ml堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF；R&D Systems Inc.，Minneapolis，MN)的0.5ml Matrigel皮下注射入10周齡雌性Balb/cJ小鼠的側(cè)腹。在第3天，將動物隨機(jī)分配為8組(每組n＝5)。各組用下列處理0.9％鹽水/白蛋白載體對照、

EL載體對照、節(jié)律性

(1.3mg/kg，i.p.，qd)、節(jié)律性ABI-007(3、6或10mg/kg紫杉醇，i.p.，qd)、MTD

(13mg/kg，i.v.，qd×5)或MTD ABI-007(30mg/kg紫杉醇，i.v，qd×5)。作為陰性對照，另外5只相似年齡的雌性Balb/cJ小鼠注射以單獨(dú)的Matrigel。在第10天，對所有動物靜脈注射0.2ml的25mg/ml FITC-葡聚糖(Sigma，St.Louis，MO)。隨后收集血漿樣品。去除Matrigel栓，用分散酶(Collaborative Biomedical Products，Bedford，MA)于37℃溫育過夜，隨后勻漿化。用FL600熒光平板讀數(shù)器(BiotechInstruments，Winooski，VT)獲得熒光讀數(shù)。血管生成響應(yīng)表示為Matrigel栓熒光與血漿熒光的比值。

6和10mg/kg的節(jié)律性ABI-007表明減低血管生成，雖然抑制作用沒有達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(圖6)。相對于各自的載體對照，血管生成似乎不被3mg/kg的節(jié)律性ABI-007、MTD ABI-007、MTD和節(jié)律性

改變(圖6)。這些觀察結(jié)果類似于本文所述的腫瘤內(nèi)MVD結(jié)果。
實(shí)施例6.

比

毒性和效率的臨床前比較
方法在以q4d×3方案給予藥物的裸鼠中的劑量范圍研究中，比較

和

的毒性。劑量水平是

7、15、22、33和50mg/kg，ABX 15、30、60、120和240mg/kg。在帶有人MX-1乳腺異種移植物的裸鼠中，比較

和

的抗腫瘤活性，劑量是每周15mg/kg，持續(xù)3周。

結(jié)果在小鼠的劑量增加研究中，

最大耐受劑量(MTD)是15mg/kg，致死劑量(LD100)是50mg/kg。與之相比，

MTD在120至240mg/kg之間，LD100是240mg/kg。在腫瘤研究中，

比相等劑量的

在腫瘤生長抑制方面更有效(79.8％比29.1％，p＜0.0001，ANOVA)。

結(jié)論在MX-1腫瘤模型中，當(dāng)以相等劑量測試時，納米顆粒白蛋白結(jié)合的紫杉醇

優(yōu)于

而且，

的毒性明顯低于

的毒性，這將允許在顯著更高的水平下給予

這些結(jié)果類似于應(yīng)用

與

相比所見的增強(qiáng)的治療指數(shù)，并且表明表面活性劑的存在可損害紫杉烷的轉(zhuǎn)運(yùn)、抗腫瘤活性和增加紫杉烷的毒性。比較

和

的在其它腫瘤模型中的研究正在進(jìn)行中。
實(shí)施例7.

和其它藥劑的聯(lián)合試驗(yàn)
由于上述

(ABX，納米顆粒白蛋白結(jié)合的紫杉醇)的有利性質(zhì)，

已被應(yīng)用于以及正被應(yīng)用于許多不同給藥方式和方案的研究中，并且與其它腫瘤學(xué)藥物以及放射治療聯(lián)合。這些列出如下
在轉(zhuǎn)移性乳腺癌中，這些研究包括



在乳腺癌新輔助情形下，研究包括

在放化療中的研究包括

其它研究包括
實(shí)施例8.

和卡鉑及

的聯(lián)合

陽卡鉑的聯(lián)合已顯示出對轉(zhuǎn)移性乳腺癌的顯著效應(yīng)。在每周方案中，在這種聯(lián)合中，

僅僅可以以上至80mg/m2給藥。更高的劑量由于毒性不能被耐受。此外，當(dāng)

包含在治療方案中時，HER-2-陽性個體得到更大益處。進(jìn)行此開放標(biāo)記II期研究以便確定ABI-007

與這些藥物的協(xié)同治療作用。開始目前的研究以評價ABI-007/卡鉑和

對于HER-2陽性疾病個體的安全性和抗腫瘤活性。ABI-007與卡鉑和

聯(lián)合給予，每周靜脈給予患有HER-2陽性晚期乳腺癌的個體。3個個體的隊(duì)列接受劑量為75mg/m2 IV的ABI-007；隨后接受卡鉑，目標(biāo)AUC＝2，每周給予；和

輸注(第1周為4mg/kg，在隨后各周為2mg/kg)，1個周期。這些個體對藥物的耐受很好，因此對于所有的隨后周期和個體，ABI-007的劑量被增高至100mg/m2。迄今為止已處理了6個個體。在評價應(yīng)答的4個個體中，所有4個個體(100％)對治療表現(xiàn)出應(yīng)答。應(yīng)該注意，由于

的毒性較低，可以給予比

更高總劑量的紫杉醇，對個體產(chǎn)生益處。
實(shí)施例9.

和酪氨酸激酶抑制劑聯(lián)合
吉非替尼的脈沖給藥與應(yīng)用

聯(lián)合，對于抑制表達(dá)EGFR的腫瘤增殖是有用的。用BT474腫瘤細(xì)胞接種120只裸鼠，以獲得至少90只帶有BT474異種移植物腫瘤的小鼠，并將其分為18個試驗(yàn)組(每個組5只小鼠)。組1小鼠接受對照靜脈注射。所有其它小鼠接受每周靜脈注射

50mg/kg，持續(xù)3周。組2接受單獨(dú)的

組3、4、5、6、7、8每周接受

在先2天接受增加劑量的吉非替尼脈沖給藥(pulse)。組9、10、11、12、13每周接受

在先1天接受增加劑量的吉非替尼脈沖給藥。組14、15、16、17、18每周接受

同時每日給予增加劑量的吉非替尼。確立吉非替尼的最大耐受劑量，該最大耐受劑量可以在每周

之前1或2天內(nèi)脈沖給予，或者與

連續(xù)給予。此外，對抗腫瘤應(yīng)答的測量將確定是否存在劑量應(yīng)答關(guān)系和是否2天脈沖或1天脈沖是優(yōu)越的。應(yīng)用這些數(shù)據(jù)以選擇脈沖吉非替尼的最佳劑量和與

給予的連續(xù)每日吉非替尼的最佳劑量。

用BT474腫瘤細(xì)胞接種120只裸鼠，得到90只帶有腫瘤的小鼠。將這些小鼠分為6組(每組15只)。組1接受對照靜脈注射。組2靜脈內(nèi)接受

50mg/kg每周，持續(xù)3周。組3接受口服吉非替尼，150mg/kg/日。組4接受

50mg/kg，連同之前確立劑量的每日吉非替尼。組5接受

50mg/kg，此前給予以前確立的吉非替尼脈沖劑量和持續(xù)時間。組6僅接受以前確立劑量的每周吉非替尼脈沖。治療三周后，跟蹤小鼠，直至對照達(dá)到最大許可腫瘤尺寸。
實(shí)施例10.每周劑量密集nabTM-紫杉醇

卡鉑和

的II期研究，作為晚期HER-2陽性乳腺癌的一線治療
本研究目的是，評價(1)安全性和耐受性，和(2)作為患有晚期/轉(zhuǎn)移性(IV期腺癌)HER-2過表達(dá)乳腺癌患者的一線細(xì)胞毒性治療的每周劑量密集曲妥珠單抗

卡鉑的實(shí)際應(yīng)答率。曲妥珠單抗是單克隆抗體，也稱為

它結(jié)合erbB2受體的胞外片段。

簡言之，沒有近期細(xì)胞毒性或放療的患者被包含在內(nèi)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)3+3規(guī)則，將

劑量從第1、8、15天的75mg/m2，30分鐘靜脈輸注增加到用于隨后周期的100mg/m2?？ㄣKAUC＝2在第1、8、15天通過靜脈輸注30-60分鐘給予，持續(xù)起初29天的周期。曲妥珠單抗在第1、8、15、22天通過靜脈輸注30-90min給予，第1周的劑量是4mg/kg，所有隨后各周的劑量是2mg/kg。

在可評價應(yīng)答的9個患者中的8個中，應(yīng)答率(確認(rèn)的加上未確認(rèn)的)是63％，其中38％具有穩(wěn)定疾病。最普遍的毒性是中性粒細(xì)胞減少癥(3級44％；4級11％)和白血球減少癥(33％)。

這些結(jié)果表明，曲妥珠單抗加

加卡鉑作為MBC的一線治療顯示了高度的抗腫瘤活性和可接受的耐受性。
實(shí)施例11.在轉(zhuǎn)移性乳腺癌一線治療中，卡培他濱加nabTM-紫杉醇

的II期試驗(yàn)
此II期研究的目的是評價安全性、功效(疾病進(jìn)展時間(至疾病進(jìn)展時間，time to progression)和總存活情況)和MBC患者的生活質(zhì)量，所述患者接受卡培他濱聯(lián)合

卡培他濱是氟嘧啶氨基甲酸酯，也稱為

已經(jīng)顯示，其在MBC治療中單獨(dú)地以及聯(lián)合紫杉烷應(yīng)用具有顯著效應(yīng)。
在此開放標(biāo)記單組試驗(yàn)中，

125mg/m2通過靜脈輸注在第1天和第8天每3周給予，加卡培他濱825mg/m2在第1至14天每日兩次口服每3周給予?；颊呤荋ER-2/neu陰性的，預(yù)期壽命為3個月以上。患者之前沒有對轉(zhuǎn)移性疾病進(jìn)行化療、之前沒有卡培他濱治療、并且之前沒有氟嘧啶治療和輔助條件下給予的紫杉醇化療。在實(shí)驗(yàn)過程中，3個患者需要減少卡培他濱的劑量至650mg/m2，2個患者需要減少卡培他濱的劑量至550mg/m2，和3個患者需要減少

的劑量至100mg/m2。

主要指標(biāo)是實(shí)際應(yīng)答率和安全性/毒性，在每2個周期后進(jìn)行評估。次要指標(biāo)是疾病進(jìn)展時間。招募12名患者，在前6個患者中完成安全性分析，2個周期后在前8個患者中可評價應(yīng)答率。沒有獨(dú)特的或意料不到的毒性，沒有4級毒性或1級以上的神經(jīng)病。應(yīng)答數(shù)據(jù)僅在前2個治療周期(第一評價點(diǎn))在6個患者中被確認(rèn)。兩名患者完成了6個周期，其中1名患者部分應(yīng)答，1名患者具有穩(wěn)定疾病。2個周期后在前8個患者中，2名患者部分應(yīng)答，4名患者具有穩(wěn)定疾病。

因此，總共招募50個患者，并且38個患者可進(jìn)行分析。患者的平均年齡是58.3歲(范圍為24-84)，并且50％的患者進(jìn)行在前的化療治療(在轉(zhuǎn)移性疾病之前)。34％的患者具有1個轉(zhuǎn)移灶，37％具有2個轉(zhuǎn)移灶，21％具有3個轉(zhuǎn)移灶，8％具有3個以上轉(zhuǎn)移灶。最常見的轉(zhuǎn)移灶是肝、骨、肺組織和其它淋巴結(jié)。

這些結(jié)果示出，卡培他濱和有效劑量的每周

聯(lián)合是可行的，迄今為止沒有新的毒性。

相關(guān)毒性主要是不伴有臨床后果的中性粒細(xì)胞減少癥，手足綜合癥是卡培他濱的主要毒性。

評估34個患者的臨床反應(yīng)，其中3個(9％)患者顯示完全應(yīng)答，15個(44％)患者顯示部分應(yīng)答，11個(32％)患者顯示穩(wěn)定的疾病，5個(15％)患者顯示進(jìn)展的疾病?？ㄅ嗨麨I和Abraxane聯(lián)合在一線轉(zhuǎn)移性乳腺癌治療中是非常有效的聯(lián)合方案。結(jié)果表明使用這種聯(lián)合方案，延長了至疾病進(jìn)展時間。
實(shí)施例12.在早期乳腺癌患者中，劑量密集多柔比星加環(huán)磷酰胺隨后是nab-紫杉醇

的試驗(yàn)性研究
本研究目的是評價多柔比星(亞德里亞霉素)加環(huán)磷酰胺隨后是

在早期乳腺癌中的毒性。

患者具有可手術(shù)的、組織學(xué)確認(rèn)的早期乳腺腺癌?；颊呙?周接受多柔比星(亞德里亞霉素)60mg/m2加環(huán)磷酰胺600mg/m2(AC)，進(jìn)行4個周期，隨后每2周應(yīng)用

260mg/m2，進(jìn)行4個周期。

30名患者接受4個周期的AC，29名患者中的27名接受4個周期的

33％的患者接受聚乙二醇非格司亭(pegfilgrastim)

這是因?yàn)樵?

期間缺乏ANC(絕對中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù))的恢復(fù)。9名患者(31％)由于非血液毒性而

劑量降低?？偣?名患者患有2級外周神經(jīng)病(PN)，4名患者患有3級外周神經(jīng)病(PN)；PN改善≥1級，中位數(shù)是28天。

這些結(jié)果表明，在患有早期乳腺癌的患者中，如下治療被良好耐受應(yīng)用多柔比星(60mg/m2)加環(huán)磷酰胺(600mg/m2)劑量密集治療，每2周進(jìn)行，4個周期，然后是劑量密集

(260mg/m2)，每2周進(jìn)行，4個周期。
實(shí)施例13.每周nab-紫杉醇

作為轉(zhuǎn)移性乳腺癌的一線治療，對HER-2/neu陽性患者加入曲妥珠單抗
目前研究的目的是將每周

移到前線情況(frontline setting)和加入曲妥珠單抗用于HER2/neu-陽性患者。

此II期開放標(biāo)記研究包括20個HER2-陽性和50個HBR2-陰性患者，所述患者患有局部晚期或轉(zhuǎn)移性乳腺癌。

在第1、8和15天以125mg/m2靜脈輸注給予30分鐘，隨后停止一周。曲妥珠單抗與研究治療并行給予HER2-陽性患者。主要指標(biāo)是應(yīng)答率，次要指標(biāo)是疾病進(jìn)展時間(time to progression(TTP))、總存活情況(OS)和毒性。

在安全群體中，23名患者接受中位數(shù)3個周期的

為止。最普遍的治療相關(guān)不利事件是3級中性粒細(xì)胞減少癥(8.7％)，沒有4級不利事件。4個可評價患者中的1個對治療應(yīng)答。
實(shí)施例14.nab-紫杉醇

和卡鉑的I期試驗(yàn)
本研究的目的是確定

(每周和每三周)的最大耐受劑量，卡鉑AUC＝6，并且比較給藥順序?qū)λ幬飫恿W(xué)(PK)的影響。

具有“標(biāo)準(zhǔn)治療”后發(fā)生進(jìn)展的組織學(xué)或細(xì)胞學(xué)證明的惡性腫瘤的患者被包含在內(nèi)。組1基于每3周的周期1毒性以劑量增加形式每三周接受

(220、260、300、340mg/m2)，隨后接受卡鉑AUC＝6。組2每周接受(第1、8、15天，隨后停止1周)

(100、125、150mg/m2)，隨后接受卡鉑AUC＝6。對本研究的PK部分，周期1中

之后是卡鉑，給藥順序在周期2中顛倒，PK水平在起始6、24、48和72小時時確定。

在每3周方案中，中性粒細(xì)胞減少、血小板減少和神經(jīng)病是最常見的3/4級毒性(每一個3/17)。在每周方案中，中性粒細(xì)胞減少5/13是最普通的3/4級毒性。對每周125mg/m2的最高劑量給藥(n＝6)的最佳應(yīng)答是2個部分應(yīng)答(胰腺癌、黑色素瘤)和2個穩(wěn)定疾病(NSCLC)。對每三周340mg/m2的最高劑量給藥(n＝5)的最佳應(yīng)答是1個穩(wěn)定疾病(NSCLC)和2個部分應(yīng)答(SCLC、食道)。

這些數(shù)據(jù)表明

和卡鉑聯(lián)合的活性。每周給藥的MTD是300mg/m2，對于每3周一次給藥的MTD是100mg/m2。
實(shí)施例15.劑量密集的吉西他濱、表阿霉素和nab-紫杉醇

(GEA)在局部晚期/炎性乳腺癌中的II期試驗(yàn)
吉西他濱、蒽環(huán)類和紫杉烷在治療乳腺癌中是最有效的藥劑，轉(zhuǎn)移性乳腺癌(MBC)實(shí)驗(yàn)證實(shí)這三個組合具有高活性。對于新輔助治療，使用多種方案，25％的病理學(xué)完全應(yīng)答(pCR)率是明顯的。先前的吉西他濱、表阿霉素和每周多烯紫杉醇的新輔助試驗(yàn)在12周治療后顯示24％的pCR，盡管帶有抑制性血液毒性(prohibitive hematologic toxicity)。

是新型紫杉烷，其具有良好的應(yīng)答、疾病進(jìn)展時間(TTP)和比標(biāo)準(zhǔn)紫杉醇更少的骨髓抑制。

獨(dú)特的增加的腫瘤內(nèi)濃度有助于gp60和SPARC糖蛋白。該試驗(yàn)檢測劑量密集的吉西他濱、表阿霉素和

(GEA)在局部晚期乳腺癌和/或炎性乳腺癌中的新輔助聯(lián)合治療的可行性、毒性和功效。主要目的是評估新輔助GEA的可行性和毒性，并且評估臨床和病理學(xué)反應(yīng)。次要目的是評估進(jìn)展時間、總存活情況和保乳手術(shù)的比例。

在開放標(biāo)記II期研究中，在局部干預(yù)前開始誘導(dǎo)/新輔助方案。治療方案是吉西他濱2000mg/m2靜脈，每2周，6個周期；表阿霉素50mg/m2，每2周，6個周期；

175mg/m2每2周，6個周期；聚乙二醇非格司亭6mg皮下，每2周的第2天。局部干預(yù)后的手術(shù)后/輔助治療方案是吉西他濱2000mg/m2每2周，4個周期；

220mg/m2每2周，4個周期，和聚乙二醇非格司亭6mg皮下，每2周的第天?；颊甙M織學(xué)確認(rèn)的局部晚期/炎性乳腺腺癌女性。

招募年齡中值為48歲(范圍為29-73)的48名患者。腫瘤特征包括79％具有管組織結(jié)構(gòu)，8％具有小葉組織結(jié)構(gòu)，13％具有炎性組織結(jié)構(gòu)。激素受體狀態(tài)包括i)雌激素受體(ER)陰性和孕酮受體(PgR)陰性腫瘤，54％的患者；ii)ER+PgR+腫瘤，33％的患者；iii)ER+PR-腫瘤，10％的患者；和iv)ER-PR+腫瘤，2％的患者。HER2狀態(tài)顯示為HER2+腫瘤——81％的患者和HER2-腫瘤——19％的患者。給予113個周期。18個患者完成手術(shù)后治療。血液毒性主要由G3/4中性粒細(xì)胞減少癥，4名患者(8％)；G3血小板減少，3名患者(6％)；和G3貧血，1名患者(2％)構(gòu)成。沒有發(fā)熱中性粒細(xì)胞減少癥的發(fā)作。非血液毒性是最小的，僅1個G4事件(疲勞)。G3事件主要由關(guān)節(jié)痛/疼痛、5名患者(10％)構(gòu)成；神經(jīng)病變和感染各在兩名患者中注意到。

可對35名患者進(jìn)行病理檢查結(jié)果和聯(lián)合藥物治療功效的評估。病理學(xué)完全應(yīng)答(pCR；定義為在原發(fā)乳腺和淋巴結(jié)組織中的病理學(xué)完全應(yīng)答)為20％(7/35)；病理學(xué)部分應(yīng)答為74％(26/35)；和穩(wěn)定疾病為6％(2/35)。

結(jié)果表明，在用吉西他濱、表阿霉素和

(GEA)的新輔助藥劑的密集聯(lián)合治療是可行的，并且良好耐受。兩周方案的毒性是最小的并且可容易控制。GEA聯(lián)合治療表明高水平的完全應(yīng)答率或部分應(yīng)答率。
實(shí)施例16.

(ABI-007)減小MDA-MB-231人腫瘤異種移植物中的腫瘤生長，并誘導(dǎo)壞死、缺氧和VEGF-A表達(dá)
將MDA-MB-231人乳腺癌異種移植物常位植入雌性裸(nu/nu)小鼠的乳腺脂肪墊中。當(dāng)平均腫瘤體積為230mm3時，將小鼠隨機(jī)分為幾組，每組五只動物，并且用鹽水、

或多柔比星處理。

以10mg/kg/天給予，

以15mg/kg/天給予，而多柔比星以10mg/kg/天給予。所有藥物和對照鹽水靜脈內(nèi)給予，每天100μl的體積，持續(xù)5天。處死小鼠，收獲腫瘤，并且制備腫瘤細(xì)胞提取物。通過ELISA，測定腫瘤提取物中的VEGF-A蛋白水平。在一些情況中，通過組織學(xué)分析來自用

處理的小鼠的腫瘤。
表5

如在表5中所示，當(dāng)與鹽水處理的對照動物相比時，

和多柔比星都抑制腫瘤生長，如通過腫瘤體積減小所表示的。通過比較測試組的平均腫瘤體積與在對照組最后測量時的對照組的平均腫瘤體積，計(jì)算腫瘤生長抑制(TGI)。腫瘤生長抑制在

處理的小鼠中最大(64％抑制)。

和多柔比星分別顯示56％和45％的腫瘤生長抑制。

VEGF-A蛋白在腫瘤細(xì)胞提取物中的水平通過ELISA測量，并顯示其在來自用

和多柔比星處理的小鼠的腫瘤中增加。VEGF-A蛋白水平在用

處理的小鼠中最高(164％增加)，然后是多柔比星(124％)和

(97％)。

從鹽水處理的對照小鼠和在最后一次注射

后一周的

處理小鼠收獲腫瘤。評估腫瘤的壞死位置和缺氧細(xì)胞的存在。通過哌莫硝唑(pimonidazole)-蛋白偶聯(lián)物的免疫組織化學(xué)檢測，鑒定缺氧細(xì)胞。如在圖7中所示，在

-處理的小鼠中腫瘤生長的抑制伴有腫瘤組織中的壞死(圖7B)和缺氧(圖7D)。在鹽水處理的對照小鼠中的腫瘤組織中，沒有觀察到壞死和缺氧(圖7A和圖7C)。
實(shí)施例17.VEGF-A和

對

誘導(dǎo)的體外細(xì)胞毒性的影響
VEGF-A或抗VEGF抗體

對

誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性的影響在體外細(xì)胞毒性分析中進(jìn)行評價。細(xì)胞用一定濃度范圍的

(1到24nM)處理。也用VEGF-A或

處理細(xì)胞，并且細(xì)胞毒性與用

單獨(dú)處理的細(xì)胞進(jìn)行比較。如在圖8A中所示，加入VEGF-A減少

的體外細(xì)胞毒性。與之相反，加入

增加

的體外細(xì)胞毒性(圖8A)。

在體外產(chǎn)克隆試驗(yàn)中，觀察到相似的結(jié)果。用鹽水對照、

單獨(dú)、VEGF-單獨(dú)、

單獨(dú)、

或

處理細(xì)胞。如在圖8B所示，與鹽水對照相比，

減少形成的集落的平均數(shù)。用VEGF-2單獨(dú)處理增加形成的集落的數(shù)量，而用

單獨(dú)處理導(dǎo)致形成的集落數(shù)量輕微減少。將VEGF-A加入到

處理的細(xì)胞減少細(xì)胞毒性作用，這導(dǎo)致與

單獨(dú)相比形成的集落數(shù)量更多。將

加入到

處理的細(xì)胞表現(xiàn)出具有協(xié)同效應(yīng)，表明細(xì)胞毒性增加(如通過形成的集落數(shù)量急劇減少所表明)超過用單獨(dú)

或

觀察到的水平。
實(shí)施例18.

(ABI-007)與

聯(lián)合減少M(fèi)DA-MB-231腫瘤異種移植物中的腫瘤生長
將表達(dá)螢光素酶的MDA-MB-231人乳腺癌異種移植物常位植入雌性裸(nu/nu)小鼠的乳腺脂肪墊中。當(dāng)平均腫瘤體積達(dá)到230mm3時，將小鼠隨機(jī)分為幾組，每組五只動物，并且用鹽水、

或

與

的聯(lián)合處理。

單獨(dú)或組合以10mg/kg/天每日給予，持續(xù)5天，兩個周期，之間間隔一周。一些組以10mg/kg/天每日給予

持續(xù)5天，僅一個周期。在兩個周期

之后，以2mg/kg、4mg/kg或8mg/kg的劑量給予

每周兩次，持續(xù)6周。在與聯(lián)合治療的小鼠相同的時間，以4mg/kg的劑量給予單獨(dú)的

監(jiān)測小鼠的腫瘤生長和藥物毒性。當(dāng)鹽水處理對照組中的平均腫瘤體積達(dá)到2000mm3時，處死小鼠。
表6

在任一處理組中沒有觀察到毒性。通過比較測試組的平均腫瘤體積與在對照組最后測量時的對照組的平均腫瘤體積，計(jì)算腫瘤生長抑制(TGI)。如在表6和圖9中所示，4mg/kg劑量的

沒有明顯抑制原發(fā)腫瘤的生長(12.56％抑制)。

和

聯(lián)合治療，特別是對于2周期的

產(chǎn)生比單獨(dú)

明顯更好的結(jié)果，腫瘤抑制范圍從94.23％到98.49％。

與兩個最高劑量的

聯(lián)合，產(chǎn)生比單獨(dú)

更好的結(jié)果(97.49％或98.49％，相比于95.11％抑制)。

和

聯(lián)合導(dǎo)致處理小鼠中腫瘤消退，其中完全消退指小鼠在第65天沒有可測腫瘤。用

和

聯(lián)合處理的15只小鼠中的5只(30％)表現(xiàn)了完全的腫瘤消退；其余小鼠中的腫瘤與對照相比減少90％。

在這些劑量下，

單獨(dú)沒有明顯抑制原發(fā)性腫瘤。

的功效比

的功效高得多，并且通過加入第二周期的

該功效被顯著提高。只有

和

聯(lián)合在30％的小鼠中根除原發(fā)性腫瘤。
實(shí)施例19.

(ABI-007)與

聯(lián)合減少M(fèi)DA-MB-231腫瘤異種移植物中的腫瘤轉(zhuǎn)移
如在實(shí)施例25中所述，將表達(dá)螢光素酶的MDA-MB-231人乳腺癌異種移植物常位植入雌性裸(nu/nu)小鼠的乳腺脂肪墊中。當(dāng)平均腫瘤體積達(dá)到230mm3時，將小鼠隨機(jī)分為幾組，并且用鹽水(n＝10)、

(n＝5)、

(n＝5)或

與

(n＝5)聯(lián)合處理小鼠。

單獨(dú)或組合以10mg/kg/天每日給予，持續(xù)5天，兩個周期，之間間隔一周。一些組以10mg/kg/天每日給予

持續(xù)5天，僅一個周期。在兩個周期

之后，以2mg/kg、4mg/kg或8mg/kg劑量給予

每周兩次，持續(xù)6周。在與聯(lián)合治療的小鼠相同的時間，以4mg/kg的劑量給予單獨(dú)的

當(dāng)鹽水處理對照組中的平均腫瘤體積達(dá)到2000mm3時，處死小鼠。腋窩淋巴結(jié)和肺的兩葉從每一只小鼠中移出，并制備細(xì)胞提取物。通過分析螢光素酶活性，評估這些組織中MDA-MB-231細(xì)胞的存在，并將其作為從原發(fā)腫瘤轉(zhuǎn)移的指示。在處死當(dāng)天(腫瘤移植后第65天)，測量來自10個淋巴結(jié)和肺的兩葉的提取物中的螢光素酶活性。對于MDA-MB-231細(xì)胞的存在和轉(zhuǎn)移的發(fā)生，大于每20μl溶胞產(chǎn)物500光單位的值被評估為陽性。
表7

如表7中所示，用

或

單獨(dú)處理表明對腫瘤轉(zhuǎn)移到淋巴結(jié)的發(fā)生沒有作用，如通過在細(xì)胞提取物中的螢光素酶活性所分析的。如在本文使用的，發(fā)生指在來自每只小鼠的組織中存在螢光素酶活性。

與

聯(lián)合沒有顯示對腫瘤轉(zhuǎn)移的明顯效果，特別是對于2周期的

在用

和4mg/kg和8mg/kg兩個最高劑量的

處理的組中，轉(zhuǎn)移的發(fā)生率下降到40％。(P值＝0.022；其中P值通過用Fisher確切檢驗(yàn)(Fisher’s exact test)分析測試組和對照組之間的差異產(chǎn)生；NS指不顯著。)單獨(dú)的

或

表現(xiàn)出對腫瘤轉(zhuǎn)移到肺的發(fā)生幾乎沒有影響，如表6中所示。

與

聯(lián)合表明了對肺轉(zhuǎn)移發(fā)生的影響。

與2mg/kg、4mg/kg和8mg/kg劑量

聯(lián)合情況下，轉(zhuǎn)移發(fā)生率分別下降到20％、40％和0％。

通過組織提取物中螢光素酶活性評估的腫瘤向淋巴結(jié)和肺的轉(zhuǎn)移在圖10中示出。

和

聯(lián)合對減少M(fèi)DA-MB-231腫瘤細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(圖10A)和肺轉(zhuǎn)移(圖10B)具有協(xié)同作用。在這些劑量下，單獨(dú)

沒有明顯抑制轉(zhuǎn)移。

的功效比

的功效高得多，并且通過加入第二周期的

該功效被顯著提高。僅

和

聯(lián)合在治療小鼠的部分中消除局部轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。
實(shí)施例20.

(ABI-007)與

聯(lián)合治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌
貝伐單抗

和紫杉醇的聯(lián)合在轉(zhuǎn)移性乳腺癌中具有明顯的活性。

比紫杉醇具有更小的毒性，并且表現(xiàn)更好的腫瘤輸送，因此

和

的組合被用于治療患有轉(zhuǎn)移性乳腺癌的女性。

用

和

的組合治療27名患有轉(zhuǎn)移性乳腺癌的女性。在28天的周期內(nèi)，

以80-125mg/m2在第1天、第8天和第15天(每周一次，持續(xù)3周)給予，或以170-200mg/m2每14天(2周一次)給予。

以10mg/m2每14天(2周一次)給予。每個患者最少被給予兩個周期(2個月)。所有女性先前已接受最少量的3種化療方案，包括蒽環(huán)類(26/27)和紫杉烷(24/27)。使用身體檢查、腫瘤標(biāo)記物和PET/CT融合掃描，監(jiān)測患者對治療的反應(yīng)。所有患者被連續(xù)監(jiān)測毒性或副作用的任何臨床體征。

三名患者具有完全應(yīng)答(11％)，13名患者具有部分應(yīng)答(48％)，這導(dǎo)致59％的總應(yīng)答率。七名患者具有穩(wěn)定的疾病，四名患者進(jìn)展?？偠拘允强山邮艿?，然而，6名患者具有副作用，其中一名患者從治療中退出。


和

的組合在嚴(yán)重的具有轉(zhuǎn)移性乳腺癌的預(yù)治療女性群體中是非常有活性的。結(jié)果表明59％的實(shí)際臨床應(yīng)答率(3個完全應(yīng)答，13個部分應(yīng)答。

雖然為了清楚理解的目的，前述發(fā)明已通過闡明和實(shí)施例的方式進(jìn)行一定程度的詳細(xì)描述，但對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說顯然的是將進(jìn)行一些微小的改變和修改。因此，描述和實(shí)施例不應(yīng)被解釋為限制本發(fā)明的范圍。

本文引用的所有參考文件，包括出版物、專利申請和專利都通過引用并入本文，并入的程度如同單獨(dú)和特定地表明每一參考文件通過引用并入并且被整體闡述一樣。

本文描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，包括發(fā)明人知道的實(shí)施本發(fā)明的最佳方式。在閱讀前面的描述后，這些優(yōu)選實(shí)施方式的變化對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員是明顯的。本發(fā)明人預(yù)期技術(shù)人員適當(dāng)時應(yīng)用這些變化，并且本發(fā)明人意圖以不同于本文具體描述的其它方式實(shí)施本發(fā)明。因此，本發(fā)明包括所附權(quán)利要求書中陳述的主題的所有修改和等同物，如可適用的法律所允許的。而且，如果本文沒有另外指明或上下文沒有明確抵觸，在所有可能變化中的上述要素的任何組合都包含在本發(fā)明中。
權(quán)利要求
1.治療個體中乳腺癌的方法，所述方法包括
(a)確定雌激素受體和/或孕酮受體的激素受體狀態(tài)；和
(b)給予所述個體有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白的納米顆粒。
2.治療個體中乳腺癌的方法，所述方法包括給予所述個體有效量的組合物，所述組合物包括含有紫杉烷和載體蛋白的納米顆粒，其中雌激素受體和/或孕酮受體的激素受體狀態(tài)被用作選擇接受治療的所述個體的根據(jù)。
3.鑒定適合于乳腺癌治療的個體的方法，所述方法包括確定雌激素受體和/或孕酮受體的激素受體狀態(tài)，其中如果雌激素受體和孕酮受體的激素受體狀態(tài)都是陰性，那么所述個體被鑒定為適合于用包含紫杉烷和載體蛋白的納米顆粒進(jìn)行乳腺癌治療。
4.評估個體對乳腺癌療法的應(yīng)答性的方法，所述方法包括確定雌激素受體和/或孕酮受體的激素受體狀態(tài)，其中所述乳腺癌療法包括給予包括含有紫杉烷和載體蛋白的納米顆粒的組合物，并且其中
(a)如果雌激素受體和孕酮受體的激素受體狀態(tài)都是陰性，那么所述個體可能對所述療法更具應(yīng)答性，和
(b)如果雌激素受體和/或孕酮受體的激素受體狀態(tài)是陽性，那么所述個體可能對所述療法具有更少的應(yīng)答性。
5.權(quán)利要求1-2的任一項(xiàng)所述的方法，其中所述個體的雌激素受體和孕酮受體的所述激素受體狀態(tài)都是陰性的。
6.權(quán)利要求1-5的任一項(xiàng)所述的方法，其中所述紫杉烷是紫杉醇。
7.權(quán)利要求1-6的任一項(xiàng)所述的方法，其中所述組合物中的所述納米顆粒的平均直徑不大于大約200nm。
8.權(quán)利要求1-7的任一項(xiàng)所述的方法，其中所述載體蛋白是白蛋白。
9.權(quán)利要求8所述的方法，其中所述白蛋白是人血清白蛋白。
10.權(quán)利要求8-9的任一項(xiàng)所述的方法，其中所述納米顆粒組合物中的白蛋白與紫杉醇的重量比在約9∶1以下。
11.權(quán)利要求1-10的任一項(xiàng)所述的方法，其中所述納米顆粒組合物不含Cremophor。
12.權(quán)利要求1-11的任一項(xiàng)所述的方法，進(jìn)一步包括給予所述個體有效量的至少一種其它化療劑。
13.權(quán)利要求12所述的方法，其中所述至少一種其它化療劑包括5-氟尿嘧啶、表阿霉素和環(huán)磷酰胺。
14.權(quán)利要求1-13的任一項(xiàng)所述的方法，其中所述乳腺癌是局部晚期乳腺癌。
15.權(quán)利要求1-14的任一項(xiàng)所述的方法，其中所述乳腺癌表達(dá)HER2(HER2+)。
16.權(quán)利要求1-14的任一項(xiàng)所述的方法，其中所述乳腺癌不表達(dá)HER2(HER2-)。
17.權(quán)利要求1-16的任一項(xiàng)所述的方法，其中所述個體是人。
18.試劑盒，其包括
(a)檢測乳腺癌患者的雌激素受體和/或孕酮受體的激素受體狀態(tài)的藥劑；和
(b)包括含有紫杉烷和載體蛋白的納米顆粒的組合物。
19.試劑盒，其包括
(a)檢測乳腺癌患者的雌激素受體和/或孕酮受體的激素受體狀態(tài)的藥劑；和
(b)用于對基于雌激素受體和/或孕酮受體的激素受體狀態(tài)治療乳腺癌的療法的可能應(yīng)答性進(jìn)行評估的說明書，其中所述療法包括給予包含含有紫杉烷和載體蛋白的納米顆粒的組合物。
20.權(quán)利要求19所述的試劑盒，其中所述說明書進(jìn)一步提供給予所述患者有效量的所述組合物的說明。
21.權(quán)利要求18-20的任一項(xiàng)所述的試劑盒，其中所述紫杉烷是紫杉醇。
22.權(quán)利要求18-21的任一項(xiàng)所述的試劑盒，其中雌激素受體和孕酮受體的所述激素受體狀態(tài)都是陰性的。
23.權(quán)利要求18-22的任一項(xiàng)所述的試劑盒，其中所述組合物中的所述納米顆粒的平均直徑不大于大約200nm。
24.權(quán)利要求18-23的任一項(xiàng)所述的試劑盒，其中所述載體蛋白是白蛋白。
25.權(quán)利要求24所述的試劑盒，其中所述白蛋白是人血清白蛋白。
26.權(quán)利要求24-25的任一項(xiàng)所述的試劑盒，其中所述納米顆粒組合物中的白蛋白與紫杉醇的重量比在約9∶1以下。
27.權(quán)利要求18-25的任一項(xiàng)所述的試劑盒，其中所述納米顆粒組合物不含Cremophor。
28.權(quán)利要求18-27的任一項(xiàng)所述的試劑盒，進(jìn)一步包括至少一種其它化療劑。
29.權(quán)利要求28所述的試劑盒，其中所述至少一種其它化療劑包括5-氟尿嘧啶、表阿霉素和環(huán)磷酰胺。
30.權(quán)利要求18-29的任一項(xiàng)所述的試劑盒，其中所述乳腺癌是局部晚期乳腺癌。
31.權(quán)利要求18-30的任一項(xiàng)所述的試劑盒，其中所述乳腺癌表達(dá)HER2(HER2+)。
32.權(quán)利要求18-30的任一項(xiàng)所述的試劑盒，其中所述乳腺癌不表達(dá)HER2(HER2-)。
全文摘要
本發(fā)明涉及基于孕酮受體和雌激素受體的激素受體狀態(tài)治療乳腺癌的方法和試劑盒，其包括單獨(dú)、與至少一種其他治療劑和多種其它治療劑聯(lián)合以及與可用于治療乳腺癌的其他治療形式聯(lián)合給予紫杉烷。特別地，本發(fā)明涉及單獨(dú)或與其它化療劑或放療聯(lián)合，應(yīng)用包含紫杉醇和白蛋白的納米顆粒(如Abraxane)，其可用于治療不表達(dá)雌激素受體和/或孕酮受體的乳腺癌。
文檔編號A61K31/337GK101605535SQ200780049623
公開日2009年12月16日 申請日期2007年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月14日
發(fā)明者N·P·德塞, P·孫雄 申請人:阿布拉科斯生物科學(xué)有限公司