專利名稱：：一種穩(wěn)定的多西他賽亞微乳注射劑及凍干乳劑的制備方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥制劑
技術領域：
，涉及多西他賽亞微乳注射劑及凍干乳劑的制備方法。
背景技術：
：多西他賽(Docetaxel)又名多烯紫杉醇，屬紫杉烷類化合物，化學名為[2aR-(2aa，4β，4αβ，6β，9α，(aR*，βS*)，11α，12α，12aα，12bα)]-β-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-α-羰基苯丙酸[12b-乙酰氧-12-苯甲酰氧_2a，3，4，4a，5，6，9，10，11，12，12a，12b-十二氫-4,6,11-三羥基-4a,8,13，13-四甲基~5~氧代-7，11-亞甲基-IH-環(huán)癸五烯并[3,4]苯并[1,2-b]氧雜丁環(huán)-9-基]酯；其分子式為=C43H53NO14；分子量807.89。是由歐洲漿果紫杉針葉中提取的無活性化合物，再經(jīng)半合成得到的產(chǎn)物。1994年由法國羅納普克樂安公司開發(fā)成功，用作乳腺癌、非小細胞肺癌的化療藥物。1995年首次在墨西哥、南非、加拿大上市。1996年獲得美國FDA批準，用于化療失敗的轉移性乳腺癌和鉬類治療失敗的轉移性非小細胞肺癌的治療，隨后在英、法、意、德、日等33個國家上市，成為治療轉移性乳腺癌和非小細胞性肺癌最有效的單劑、首選化療藥物。2006年3月美國FDA批準用于治療晚期胃癌。2002年起，我國也出現(xiàn)多家企業(yè)仿制該品。多西他賽本身為抗腫瘤藥物，其毒副作用較大，又因多西他賽在水中的溶解度極小，只有0.006mg/ml，限制了其在體內的生物利用度。為了增大溶解度，目前，多西他賽市售制劑多以吐溫-80為增溶劑，臨床應用時，以配有的13%乙醇溶液稀釋，靜脈滴注。吐溫-80具有溶血性，且靜脈注射會加重患者的過敏反應，使患者出現(xiàn)呼吸困難、血管性水腫、低血壓、風疹等過敏樣反應以及休克等嚴重不良反應，甚至出現(xiàn)死亡。故多西他賽注射劑在臨床應用前和應用過程中，要口服、肌注大量激素類藥物進行脫敏干預，如此，仍然有相當比例的患者會發(fā)生過敏反應，給患者造成了極大的痛苦。目前，有較多的有關多西他賽亞微乳及凍干乳劑的文獻和專利申請，有些專利申請?zhí)幏剿玫挠拖鄬Χ辔魉惖娜芙饽芰τ邢?，使制劑?guī)格達不到臨床的一次最小使用劑量，即制劑載藥量??；在穩(wěn)定性方面，如中國專利公開號為CN1709236A的專利申請，乳劑最終在110-12(TC流通蒸汽滅菌，這樣的滅菌工藝，會導致主藥多西他賽含量大幅下降，乳滴聚集，粒徑增大，甚至發(fā)生乳劑分層、產(chǎn)生沉淀的現(xiàn)象，制劑穩(wěn)定性差。因此，仍有必要開發(fā)新的乳劑組合物及采用新的除菌工藝來滿足臨床需求。
發(fā)明內容本發(fā)明的優(yōu)點在于，避免使用能加重過敏反應的增溶劑輔料，找到了對多西他賽有較大溶解度的油相，篩選出能減少過敏反應且增大乳劑穩(wěn)定性的乳化劑，從而制備出穩(wěn)定的、高載藥量、供靜脈注射的多西他賽亞微乳注射劑劑及凍干乳劑。同時，發(fā)現(xiàn)了現(xiàn)有技術中流通蒸汽滅菌導致乳劑不穩(wěn)定的缺陷，采用了微孔濾膜過濾除菌的滅菌方式，保證了乳劑的穩(wěn)定性，雖然該滅菌方式是現(xiàn)有技術已知的，但是本申請的貢獻在于發(fā)現(xiàn)了改變滅菌方式可以改善乳劑穩(wěn)定性這一技術問題，并取得了良好的技術效果。本發(fā)明涉及一種治療腫瘤疾病的含有多西他賽的亞微乳注射劑及凍干乳劑的制備方法，亞微乳注射劑的組分及含量為多西他賽l-10mg/ml注射用油50-200mg/ml乳化劑10_50mg/ml穩(wěn)定劑2-10mg/ml等滲調節(jié)劑10_25mg/mlpH值調節(jié)劑適量，調節(jié)至4.5-6.0注射用水至適量。在上述注射劑中加入凍干支持劑100-300mg/ml，常規(guī)方法凍干即獲得凍干乳劑。所述亞微乳注射劑或凍干乳劑復溶后的乳劑平均粒徑為100-200nm。所述注射用油為油酸乙酯、辛酸癸酸脂肪酸甘油三酯、油酸聚乙二醇甘油酯、精制大豆油中的一種或幾種。所述乳化劑為泊洛沙姆、大豆磷脂、卵磷脂PC-98T中的一種或幾種。所述穩(wěn)定劑為油酸。所述等滲調節(jié)劑為丙三醇、氯化鈉、葡萄糖中的一種或幾種。所述凍干支持劑為甘露醇、山梨醇、乳糖、麥芽糖、海藻糖中的一種或幾種。所述pH值調節(jié)劑為枸櫞酸、乳酸、枸櫞酸鈉、碳酸氫鈉中的一種或幾種。本發(fā)明制備方法如下1)將多西他賽、乳化劑加入到注射用油中，加熱、攪拌，使溶解，溫度控制在50-70°C，加入穩(wěn)定劑，得油相；2):將等滲調節(jié)劑加入到一定量的注射用水中，加熱，溫度控制在50-60°C，得水相；3)在高速攪拌下，將上述油相加入上述水相中，繼續(xù)攪拌3-5分鐘，得初乳，控制平均粒徑為2-5μπι；補充適量注射用水至初乳中，調節(jié)pH值至4.5-6.0；所得初乳加入超高壓均質機，控制壓力lOOOMpa，均質2_4次，得多西他賽亞微乳注射劑，乳劑的平均粒徑為100-150nm。4)所得多西他賽亞微乳注射劑用0.22μm的除菌級微孔濾膜過濾器過濾除菌，灌裝，制成注射劑產(chǎn)品；或者將凍干支持劑加入到上述多西他賽亞微乳注射劑中，重新調節(jié)pH值至4.5-6.0；用0.22μm的微孔濾膜過濾器過濾除菌后灌裝，凍干，制成凍干乳劑，制得的凍干乳劑復溶后，平均粒徑為150-200nm。具體實施例方式實施例1多西他賽Ig辛酸癸酸脂肪酸甘油三酯50g大豆磷脂25g油酸4g丙三醇25g枸櫞酸調節(jié)pH值至5.0注射用水至IOOOml油相將多西他賽、大豆磷脂加入辛酸癸酸脂肪酸甘油三酯中，加熱、攪拌，使溶解，溫度控制在50-70°C，加入油酸，得油相。水相將丙三醇加入800ml的注射用水中，加熱，溫度控制在50_60°C，得水相。在高速攪拌下，將上述油相加入上述水相中，繼續(xù)攪拌3-5分鐘，得初乳，平均粒徑為2.Ομ。將注射用水加入初乳中至1000ml，調節(jié)pH值至5.O初乳加入超高壓均質機，控制壓力IOOOMPa左右，均質3次，得多西他賽亞微乳劑。用0.22μm的除菌級微孔濾膜過濾器過濾除菌，灌裝，即得多西他賽亞微乳劑。實施例2多西他賽2g大豆油50g油酸乙酯50g卵磷脂PC-98T35g油酸4.8g丙三醇25g枸櫞酸調節(jié)pH值至5.O注射用水至IOOOml制備步驟同實施例1.實施例3多西他賽5g大豆油50g辛酸癸酸脂肪酸甘油三酯IOOg卵磷脂PC-98T25g泊洛沙姆25g油酸4.8g丙三醇25g枸櫞酸調節(jié)pH值至5.O注射用水至IOOOml制備步驟同實施例1.實施例4多西他賽IOg辛酸癸酸脂肪酸甘油三酯50g油酸乙酯IOOg卵磷脂PC-98T50g油酸4.8g丙三醇25g枸櫞酸調節(jié)pH值至5.0注射用水至IOOOml制備步驟同實施例1.實施例5多西他賽IOg油酸聚乙二醇甘油酯IOOg油酸乙酯50g卵磷脂PC-98T25g泊洛沙姆25g油酸4.8g丙三醇25g枸櫞酸調節(jié)pH值至5.0注射用水至IOOOml制備步驟同實施例1.實施例6多西他賽Ig辛酸癸酸脂肪酸甘油三酯50g大豆磷脂25g油酸4.8g丙三醇25g枸櫞酸調節(jié)pH值至5.0注射用水至IOOOml油相將多西他賽、大豆磷脂加入辛酸癸酸脂肪酸甘油三酯中，加熱、攪拌，使溶解，溫度控制在60_70°C，加入油酸，得油相。水相將丙三醇加入800ml的注射用水中，加熱，溫度控制在60°C，得水相。在高速攪拌下，將上述油相加入上述水相中，繼續(xù)攪拌3-5分鐘，得初乳，平均粒徑為:2.Ομο將注射用水加入初乳中至1000ml，調節(jié)pH值至5.0初乳加入超高壓均質機，控制壓力IOOOMPa左右，均質3次，得多西他賽亞微乳劑。加入凍干支持劑，用0.22μm的除菌級微孔濾膜過濾器過濾除菌，灌裝，凍干，即得多西他賽凍干乳劑。實施例7處方同實施例2，制備步驟同實施例6。實施例8處方同實施例3，制備步驟同實施例6。實施例9處方同實施例4，制備步驟同實施例6。實施例10處方同實施例5，制備步驟同實施例6。實施例11將本實施例1和例7制得的多西他賽亞微乳劑及凍干乳劑與市售制劑在25°C貯存條件下，考察性狀、含量、粒徑，得出穩(wěn)定性結論?？疾旖Y果如表1:表1<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>結論本實施例1和例7制得的多西他賽亞微乳劑及凍干乳劑在考察期內制劑穩(wěn)定，質量可控。實施例12本實施例1和例7制得的多西他賽亞微乳劑及凍干乳劑與市售制劑的溶血性實驗家兔耳緣靜脈采血，以竹簽攪拌去纖維蛋白后，用生理鹽水洗滌后離心(2000rpm)，除掉上清液，再以生理鹽水反復洗滌數(shù)次(均離心棄去上清液)直至上清液無紅色，然后按體積比用生理鹽水配成2%紅細胞混懸液備用。取試管17只，按表2所示，各管分別加入不同體積的藥液和相同體積的紅細胞混懸液，其中第16管不加藥，為0.9%氯化鈉注射液空白對照，第17管加蒸餾水作為完全溶血對照(陽性對照管)。各管輕輕搖勻后，置37°C水浴中溫孵4小時，觀察0.25小時至4.O小時內各管是否有溶血及紅細胞聚集現(xiàn)象，結果見表2.表2<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>-表示無溶血；士表示部分溶血；+表示全溶血。結論本實施例1和例7制得的多西他賽亞微乳劑及凍干乳劑無溶血作用。實施例13本實施例1和例7制得的多西他賽亞微乳劑及凍干乳劑與市售制劑的過敏性實驗取豚鼠30只，雌雄各半，體重250-300g，隨機分為5組，每組6只。三組實驗組分別腹腔注射多西他賽亞微乳劑、凍干乳劑、市售制劑的溶液，0.5ml/只，空白對照組注射相同體積的0.9%氯化鈉注射液，陽性對照組注射2%新鮮蛋清0.5ml/只。隔日一次，共三次。首次給藥后14天、21天，每組隨機取3只，實驗組分別由股靜脈注射多西他賽亞微乳劑、凍干乳劑、市售制劑的溶液1.Oml/只，空白對照組和陽性對照組分別由股靜脈注射0.9%氯化鈉注射液和2%新鮮蛋清1.Oml/只，給藥后立即觀察動物有無噴嚏、搔鼻(1級)、干嘔或咳嗽、豎毛(2級)、抽搐、呼吸困難(3級)、大小便失禁、休克和死亡(4級)等過敏反應，觀察1小時。實驗結果見表3。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>(-)表示無過敏反應；(+)表示有過敏反應。結論本實施例1和例7制得的多西他賽亞微乳劑及凍干乳劑無明顯的過敏反應。權利要求一種多西他賽亞微乳注射劑，成分及含量為多西他賽1-10mg/ml注射用油50-200mg/ml乳化劑10-50mg/ml穩(wěn)定劑2-10mg/ml等滲調節(jié)劑10-25mg/mlpH值調節(jié)劑適量調節(jié)至4.5-6.0注射用水適量。2.根據(jù)權利要求1所述的多西他賽亞微乳注射劑，其中所用注射用油為油酸乙酯、辛酸癸酸脂肪酸甘油三酯、油酸聚乙二醇甘油酯、精制大豆油中的一種或幾種。3.根據(jù)權利要求1-2中任一項所述的多西他賽亞微乳注射劑，其中所用乳化劑為泊洛沙姆、大豆磷脂、卵磷脂PC-98T中的一種或幾種。4.根據(jù)權利要求1-3中任一項所述的多西他賽亞微乳注射劑，其中所用穩(wěn)定劑為油酸。5.根據(jù)權利要求1-4中任一項所述的多西他賽亞微乳注射劑，其中所用等滲調節(jié)劑為丙三醇、氯化鈉、葡萄糖中的一種或幾種。6.根據(jù)權利要求1-5中任一項所述的多西他賽亞微乳注射劑，其中所用PH調節(jié)劑為枸櫞酸、乳酸、枸櫞酸鈉、碳酸氫鈉中的一種或幾種。7.根據(jù)權利要求1-6中任一項所述的多西他賽亞微乳注射劑的制備方法，包括如下步驟1)將多西他賽、乳化劑加入到注射用油中，加熱、攪拌，使溶解，溫度控制在50-70°C，加入穩(wěn)定劑，得油相；2)將等滲調節(jié)劑加入到一定量的注射用水中，加熱，溫度控制在50-60°C，得水相；3)在高速攪拌下，將上述油相加入上述水相中，繼續(xù)攪拌3-5分鐘，得初乳，控制平均粒徑為:2-5ym；補充適量注射用水至初乳中，調節(jié)PH值至4.5-6.O；所得初乳加入超高壓均質機中，控制壓力lOOOMpa，均質2-4次，得多西他賽亞微乳注射劑。8.權利要求7所述的制備方法，其中所得亞微乳注射劑的平均粒徑為100-150nm。9.一種多西他賽凍干乳劑，其特征在于向權利要求1-6中任一項所述的多西他賽亞微乳注射劑中加入凍干支持劑100-300mg/ml，凍干獲得。10.根據(jù)權利要求9所述的多西他賽凍干乳劑，其中所用凍干支持劑為甘露醇、山梨醇、乳糖、麥芽糖、海藻糖中的一種或多種。11.根據(jù)權利要求9所述的多西他賽凍干乳劑的制備方法，包括如下步驟1)將多西他賽、乳化劑加入到注射用油中，加熱、攪拌，使溶解，溫度控制在50-70°C，加入穩(wěn)定劑，得油相；2)將等滲調節(jié)劑加入到一定量的注射用水中，加熱，溫度控制在50-60°C，得水相；3)在高速攪拌下，將上述油相加入上述水相中，繼續(xù)攪拌3-5分鐘，得初乳，控制平均粒徑為:2-5μπι；補充適量注射用水至初乳中，調節(jié)PH值至4.5-6.O；所得初乳加入超高壓均質機中，控制壓力lOOOMpa，均質24次，得多西他賽亞微乳注射劑；4)將凍干支持劑加入到上述多西他賽亞微乳注射劑中，重新調節(jié)pH值至4.5-6.0；5)凍干，即得多西他賽凍干乳劑。12.權利要求11所述的制備方法，其中凍干乳劑復溶后，粒徑為150-200nm。13.權利要求7或權利要求11的制備方法，其中多西他賽亞微乳注射劑用0.22μm的微孔濾膜過濾器過濾除菌后灌裝，多西他賽凍干乳劑凍干前用0.22μm的微孔濾膜過濾器過濾除菌，灌裝，凍干。全文摘要本發(fā)明公開了一種穩(wěn)定的、高載藥量的供靜脈注射用多西他賽亞微乳注射劑及凍干乳劑的制備方法。亞微乳主要活性成分為多西他賽，輔料為注射用油、乳化劑、穩(wěn)定劑、等滲調節(jié)劑、凍干支持劑及注射用水。多西他賽的含量為1-10mg/ml。本發(fā)明的乳劑粒徑小，亞微乳注射劑及凍干乳劑復溶后的粒徑范圍為100-200nm。本發(fā)明通過選擇合適的油相和乳化劑，優(yōu)化制備工藝，使制得的多西他賽亞微乳劑及凍干乳劑具有載藥量高、穩(wěn)定性好、易于工業(yè)化生產(chǎn)、臨床適用性強等特點。文檔編號A61K9/19GK101810574SQ20091017702公開日2010年8月25日申請日期2009年9月17日優(yōu)先權日2009年9月17日發(fā)明者馮仲異,史朝暉,陳容申請人:海南碧凱藥業(yè)有限公司