專利名稱：Hpma-多西他賽或吉西他濱綴合物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包含抗癌劑(例如吉西他濱或多西他賽)和/或靶向配體(例如 RGDfK、EPPTl肽或葉酸)與N-(2-羥丙基)異丁烯酰胺(HPMA)之綴合物的組合物，以及利用所述組合物將這些綴合物遞送至細(xì)胞的方法。
背景技術(shù)：
多西他賽(泰索帝(Taxotere))是最重要的一類新型腫瘤藥物的成員之一。然而， 其差的溶解性提出了藥學(xué)上的挑戰(zhàn)，且新出現(xiàn)的數(shù)據(jù)表明了特定的組織暴露特性(例如延長(zhǎng)時(shí)間的低藥物濃度)可增強(qiáng)有益的抗腫瘤機(jī)制。由于多西他賽主要的缺點(diǎn)在于其高度親脂并且?guī)缀醪蝗苡谒?，因此配制多西他賽制劑所考慮的因素已被廣泛地研究。為了臨床使用，在共溶劑體系中將其配制和施用。將藥物在聚山梨酯-SO(USPDI)中以40mg/ml包裝。 使用前，使用包含13% (V/V)乙醇的水溶液將其稀釋到10mg/ml。施用前，將藥物在250ml 鹽水或葡萄糖中進(jìn)一步稀釋，達(dá)到0.3-0. 9mg/L的終濃度。所述溶液在4小時(shí)內(nèi)使用。一些明顯的特有副作用與多西他賽制劑相關(guān)。延緩發(fā)生的胸腔積液和水腫已在一些病例導(dǎo)致中止治療。由于與施用紫杉烷(taxane)所需的共溶劑相關(guān)的毒性，已經(jīng)研究了多種替代性的多西他賽組合物，其包括合成多西他賽類似物、包埋到脂質(zhì)體中和制備聚合物-多西他賽綴合物。關(guān)于制備聚合物-多西他賽綴合物，已經(jīng)提出了一些聚合物，包括聚氨基酸 (W02007/067417)和合成聚合物(例如聚乙二醇(PEG))。在過(guò)去幾年中，吉西他濱(Gemzar ，一種新嘧啶核苷類似物)已經(jīng)成為用于胰腺癌患者的標(biāo)準(zhǔn)化療劑。胰腺腺癌是美國(guó)癌癥死亡的第四大原因。全國(guó)每年新診斷觀，000例病例?；瘜W(xué)療法和放射療法在很大程度上無(wú)效，甚至在可能為治愈性的手術(shù)后也頻繁發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移性疾病。該癌癥的1年生存率為20%，5年生存率只有1-3%。不多于25%的胰腺癌患者將受益于吉西他濱。很明顯，迫切需要對(duì)該破壞性疾病的有效治療。為了提高吉西他濱在癌癥患者中的益處，在本發(fā)明中首次公開(kāi)了聚合物-吉西他濱綴合物的新制劑?；谏鲜鰞?nèi)容，現(xiàn)有技術(shù)中仍然需要對(duì)多西他賽和吉西他濱的修飾，所述修飾可保持或增加其腫瘤特異性活性，同時(shí)降低其毒性。


圖1為顯示HPMA-GFLG-多西他賽(DOC)綴合物在皮下注射了 Mia-Paca人胰腺癌細(xì)胞之裸鼠中對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用的圖。有效性表示為作為時(shí)間(天)之函數(shù)的腫瘤尺寸變化倍數(shù)。圖2為顯示HPMA-GFLG-多西他賽(DOC)綴合物在皮下注射了 HCTl 16人結(jié)腸癌細(xì)胞之裸鼠中對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用的圖。有效性表示為作為時(shí)間(天)之函數(shù)的腫瘤尺寸
變化倍數(shù)。圖3為顯示HPMA-GFLG-吉西他濱(GEM)綴合物在皮下注射了 HCTl 16人結(jié)腸癌細(xì)胞之裸鼠中對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用的圖。效力表示為作為時(shí)間(天)之函數(shù)的腫瘤尺寸變化倍數(shù)?！癎FLG”如SEQ ID NO :1所公開(kāi)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及抗癌劑(例如吉西他濱或多西他賽)和/或靶向配體(例如RGDfK、 EPPTl肽或葉酸)與水溶性聚合物聚N-(2-羥丙基)異丁烯酰胺(HPMA)的綴合物，以及這些綴合物作為多西他賽或吉西他濱的特異性細(xì)胞內(nèi)載體進(jìn)入腫瘤血管內(nèi)的用途。本發(fā)明還涉及這些綴合物降低多西他賽或吉西他濱的毒性的用途以及治療癌癥的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗癌劑是多西他賽或吉西他濱。在另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物還包含溶酶體可降解的氨基酸序列和寡肽，其包括但不限于 Gly-Phe-Leu-Gly (SEQ ID NO 1)、Gly-Ileu-Phe, Gly-Val-Phe, Gly-Gly-Phe, Gly-Gly-Phe-Phe (SEQ ID NO 2)、Gly-Ileu-Tyr, Phe、Gly, Gly-Gly、Ala、Ser, Gly-Phe, Gly-Leu-Phe、Gly_Phe_Phe、Gly_D-Phe_Phe、Ala-Gly-Val-Phe(SEQ ID NO :3)、 Gly-Gly-Val-Phe (SEQ ID NO :4)、Gly-Phe-Tyr, Gly-B—Ala—Tyr、Gly-Lue, Gly—Phe—Gly、 His-Ser-Ser-Lys-Leu-Gln (SEQ ID NO :5)以及戊二酰 _4_ 羥脯氨酰-Ala-Ser-環(huán)六甘氨酰-Gln-Ser-Leu(SEQ ID NO :6)。 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物包含HPMA共聚物-多西他賽或HPMA共聚物-吉西他濱的靶向肽，例如RGDfK、EPPTl肽或葉酸。在此情況下，所述靶向系統(tǒng)包括將靶向配體 (例如RGDfK、EPPTl肽或葉酸)共價(jià)連接于所述聚合物。在本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案中，包含重均分子量(Mw)范圍在從約IOkDa到約 250kDa、從約 20kDa 到約 170kDa、從約 50kDa 到約 250kDa、或從約 IOOkDa 到約 170kDa 的 HPMA共聚物-藥物綴合物。本發(fā)明的另一些實(shí)施方案包含重均分子量(Mw)至少約20kDa、 至少約50kDa、至少約lOOkDa、至少約125kDa或至少約150kDa的HPMA共聚物-藥物綴合物。因此，在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的特征在于具有或不具有靶向配體的高分子量 HPMA共聚物-藥物綴合物。高分子量HPMA共聚物-藥物綴合物提供了未被當(dāng)前藥物聚合物綴合物所啟示的優(yōu)勢(shì)。例如，高分子量HPMA共聚物-藥物綴合物具有更長(zhǎng)的血漿半衰期 (t1/2)，致使在血流中循環(huán)時(shí)間更長(zhǎng)。因?yàn)榫酆衔锏逆湼L(zhǎng)，所以即使藥物摻入具有相似的程度，也有更多的藥物連于每一條聚合物鏈上。因此，使用高分子量HPMA共聚物-藥物綴合物可提供將更大量藥物遞送到腫瘤部位。進(jìn)一步，將靶向配體或部分連接到聚合物-藥物綴合物上導(dǎo)致藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的特異性增強(qiáng)。在一些實(shí)施方案中，所述靶向配體可為RGDfK、EPPTl或葉酸。此效果與高分子量HPMA共聚物-藥物綴合物的被動(dòng)腫瘤聚積作用一起，通過(guò)增加腫瘤特異性、提高穩(wěn)定性和降低毒性而產(chǎn)生高治療效果。因此，該系統(tǒng)在遞送用于癌癥治療的治療劑方面具有巨大的潛力。本發(fā)明的另一實(shí)施方案提供了遞送治療劑的方法，包括向?qū)ο笫┯糜行┝康呐c HPMA共聚物綴合的多西他賽或吉西他濱。本發(fā)明的另一實(shí)施方案提供了使用包含與多西他賽或吉西他濱綴合的HPMA共聚物的組合物來(lái)遞送治療劑到細(xì)胞的方法。發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明
下面詳細(xì)地描述本發(fā)明的實(shí)施方案。在描述實(shí)施方案時(shí)，出于清楚的目的，使用特定術(shù)語(yǔ)。然而，本發(fā)明不意在限于所選擇的特定術(shù)語(yǔ)。當(dāng)討論具體的示例性實(shí)施方案時(shí)，應(yīng)當(dāng)理解這樣做僅僅是為了說(shuō)明意圖。相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的情況下，也可使用其他的組分和結(jié)構(gòu)。本文中引用的所有參考文獻(xiàn)通過(guò)引用并入本文，如同其各自均單獨(dú)并入本文中一樣。A.基于聚合物的治療法游離的抗癌藥物擴(kuò)散在整個(gè)細(xì)胞中，而不能集中到特定的亞細(xì)胞部位。另外，如果這些藥物通過(guò)靜脈施用，則它們?nèi)硇缘胤植加谏眢w的所有組織。這些藥物在非目的分布部位的作用導(dǎo)致可觀測(cè)的全身性副作用。因此，使藥物定位于作用所需的身體部位是優(yōu)選的。將這些藥劑靶向至它們最有效的亞細(xì)胞部位，提高了它們的效力且降低了它們的毒性?？拱┧幬锏哪[瘤靶向可通過(guò)“被動(dòng)靶向”和“主動(dòng)靶向”來(lái)實(shí)現(xiàn)。被動(dòng)靶向通過(guò)將抗癌藥物摻入或連接于大分子載體(例如水溶性聚合物)上來(lái)實(shí)現(xiàn)。主動(dòng)靶向通過(guò)摻入對(duì)癌細(xì)胞表面的識(shí)別分子(受體)具有特異性的細(xì)胞靶向部分來(lái)實(shí)現(xiàn)。當(dāng)與正常組織比較時(shí)，聚合物優(yōu)先定位于實(shí)體瘤。這是由于被稱為增強(qiáng)的滲透和駐留(Enhanced Permeability and Retention，“EPR”)效應(yīng)而發(fā)生，該效應(yīng)歸因于腫瘤組織的形態(tài)學(xué)改變，其中由于新血管發(fā)生產(chǎn)生的有漏隙的血管系統(tǒng)導(dǎo)致血管內(nèi)容物泄漏到細(xì)胞外組織中。另外，淋巴系統(tǒng)可被阻滯，其導(dǎo)致大分子藥劑在腫瘤細(xì)胞周圍的細(xì)胞外組織中聚積。可利用該現(xiàn)象將藥物與聚合物連接而靶向腫瘤細(xì)胞。由于聚合物定位于腫瘤細(xì)胞周圍，因此連接于聚合物的藥物也可以更高的濃度圍繞腫瘤周圍。與聚合物連接的藥物以內(nèi)吞作用攝取到細(xì)胞內(nèi)。然而，由于藥物保持共價(jià)連接于聚合物骨架，因此它們可能不像游離藥物一樣有效。這可以通過(guò)使用可生物降解或可水解的肽序列將藥物連接到聚合物骨架上來(lái)克服。選擇序列使得它們能夠在特定環(huán)境下在細(xì)胞內(nèi)降解?；诰酆衔锏闹委熅哂写蟮牧黧w力學(xué)體積，其轉(zhuǎn)化為更長(zhǎng)的血管內(nèi)半衰期。基于聚合物的治療法還增大了難溶性藥物的溶解度和生物利用度。由基于聚合物的治療法所帶來(lái)的其他優(yōu)勢(shì)包括最大耐受劑量增加、非特異性毒性降低、凋亡誘導(dǎo)作用增強(qiáng)和替代性信號(hào)途徑的活化(Kopecek 等，Advances in Polymer Science, 122 (Biopolymers II) 55-123(1995))。另外，腫瘤細(xì)胞常具有表面分子，所述表明分子或者在正常組織不具有，或者與正常組織相比過(guò)表達(dá)。這些可包括生長(zhǎng)因子受體和/或某些抗原。將結(jié)合這些分子的識(shí)別分子與聚合物相連產(chǎn)生在腫瘤局部環(huán)境中的高濃度聚合物。這些靶向部分包括抗體和細(xì)胞表面受體的肽配體。由這些識(shí)別分子中的一些與其受體的結(jié)合所引發(fā)的受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用可導(dǎo)致增加的細(xì)胞內(nèi)濃度和相應(yīng)的增強(qiáng)的治療效果。處于臨床試驗(yàn)中的幾種聚合物-藥物綴合物包括基于HPMA-共聚物或基于PGA的綴合物。HPMA共聚物是生物相容的、非免疫原性且無(wú)毒的載體，其能夠特異性遞送入腫瘤細(xì)胞，克服藥物相關(guān)毒性的限制(Duncan等，Hum. Exp. Toxicol. ,17 :93-104 (1998))。此外，它們的體內(nèi)分布得到了良好表征，且已知它們由于增強(qiáng)的滲透和駐留(EPR)而選擇性地聚積在腫瘤部位。該綴合物也包括針對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖部位或癌細(xì)胞或與增殖細(xì)胞相關(guān)的特異性受體或標(biāo)記物的靶向配體。目前有兩種聚谷氨酸-藥物綴合物和六種HPMA共聚物-藥物綴合物處在臨床試驗(yàn)的不同階段，且進(jìn)一步地包括葡聚糖-藥物綴合物和PEG-藥物綴合物的聚合物-藥物綴合物也報(bào)道處于臨床或臨床前開(kāi)發(fā)中。本發(fā)明的化合物具有這些屬性，其增加抗癌劑的遞送，此外，與其他抗癌藥的策略相比，所公開(kāi)的組合物增強(qiáng)對(duì)特定細(xì)胞類型的靶向和被靶向癌細(xì)胞的攝取。B.化合物本文中使用的術(shù)語(yǔ)“HPMA”表示化合物N-(2-羥丙基)異丁烯酰胺，為下述結(jié)構(gòu)代
表的親水聚合物
權(quán)利要求
1.一種化合物，包含載體分子、與所述載體分子共價(jià)連接的連接分子、以及與所述連接分子共價(jià)連接的抗癌劑，其中所述抗癌劑是吉西他濱或多西他賽。
2.一種化合物，包含載體分子、與所述載體分子共價(jià)連接且任選地通過(guò)連接分子連接的抗癌劑、和與所述載體分子共價(jià)連接且任選地通過(guò)第二連接分子連接的靶向配體，其中所述靶向配體選自RGDfK、EPPTl和葉酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中所述抗癌劑是吉西他濱或多西他賽。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的化合物，其中所述連接分子和所述第二連接分子各自包含氨基酸或寡肽。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的化合物，其中所述氨基酸或寡肽選自Gly-Phe-Leu-Gly(SEQ ID NO 1) , Gly-Ileu-Phe, Gly-Val-Phe, Gly-Gly-Phe, Gly-Gly-Phe-Phe(SEQ ID NO 2), Gly-Ileu-Tyr, Phe, Gly, Gly-Gly, Ala, Ser, Gly-Phe, Gly-Leu Phe, Gly-Phe-Phe, Gly-D-Phe-Phe, Ala-Gly-Val-Phe(SEQ ID NO :3)， Gly-Gly-Val-Phe(SEQ ID NO :4)，Gly-Phe-Tyr, Gly-B-Ala-Tyr, Gly-Lue, Gly-Phe-Gly, His-Ser-Ser-Lys-Leu-Gln(SEQ ID NO:5)，和戊二酰-4-羥脯氨酰-Ala-Ser-環(huán)六甘氨酰-Gln-Ser-Leu (SEQ ID NO :6)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的化合物，其中所述載體包含聚(N-2-羥丙基異丁烯酰胺)(聚-HPMA)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或3的化合物，其中所述載體分子包含聚-HPMA，且所述抗癌劑通過(guò) Gly-Phe-Leu-Gly(GFLG(SEQ ID NO :1))寡肽鏈連接到所述載體分子上。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)的化合物，其中所述載體分子包含分子量從約10，000道爾頓到約250，000道爾頓的大分子。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的化合物，其中所述載體分子包括分子量從約10，000道爾頓到約 170,000道爾頓的大分子。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，還包含與所述載體分子共價(jià)連接且任選地通過(guò)第二接頭連接的靶向配體。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的化合物，其中所述靶向配體通過(guò)第二接頭與所述載體分子共價(jià)連接。
12.根據(jù)權(quán)利要求2或11中任一項(xiàng)的化合物，其中所述第二接頭是氨基酸或寡肽。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的化合物，其中所述寡肽包含Gly-Gly(GG)。
14.根據(jù)權(quán)利要求10或11中任一項(xiàng)的化合物，其中所述靶向配體選自RGDfK、EPPTl和葉酸。
15.根據(jù)權(quán)利要求3或14中任一項(xiàng)的化合物，其中所述載體分子包含聚-HPMA，所述抗癌劑通過(guò)GFLG(SEQ ID NO 1)寡肽接頭與所述載體分子相連，并且所述第二接頭是GG寡肽接頭。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的化合物，其中所述載體分子的分子量從約10，000道爾頓到約 250，000道爾頓。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的化合物，其中所述載體分子的分子量從約100，000道爾頓到約 170,000道爾頓。
18.一種治療癌癥的方法，包括對(duì)有此需要的人施用治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1至17任一項(xiàng)的化合物。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了通過(guò)將吉西他濱或多西他賽綴合到水溶性聚合物(例如N-2-羥丙基異丁烯酰胺(HPMA))上而形成的吉西他濱和多西他賽水溶性組合物。本發(fā)明還公開(kāi)了使用本發(fā)明組合物治療癌癥的方法。
文檔編號(hào)A61K47/48GK102264396SQ200980148874
公開(kāi)日2011年11月30日 申請(qǐng)日期2009年10月7日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月7日
發(fā)明者哈米德雷扎·甘德哈里, 安昌浩, 安賈·南, 李永福, 金德中, 阿比西特·雷 申請(qǐng)人:巴爾的摩馬里蘭大學(xué), 瑞沙恩醫(yī)藥公司