專利名稱：一種酚類化合物及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種新的酚類化合物及其用途。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤是危害人類健康和生命的主要疾病，并對(duì)人類的威脅日益增大。近年來， 腫瘤的發(fā)病率明顯增高，由于傳染病的減少，腫瘤和心腦血管病上升為第一、二位的疾病， 但如果把心血管病和腦血管病分開的話，腫瘤就穩(wěn)座發(fā)病率和病死率的第一名?；谶@樣 的現(xiàn)實(shí)，各國(guó)政府、研究機(jī)構(gòu)和制藥公司長(zhǎng)期以來一直對(duì)腫瘤研究和抗腫瘤藥物開發(fā)予以 高度重視和巨額投資，從而使腫瘤治療不斷得到發(fā)展。中國(guó)是舉世公認(rèn)的天然藥物(中草 藥)大國(guó)，中國(guó)人民使用中草藥治病有著悠久的歷史，故在中草藥中篩選抗腫瘤新藥不失 為一條多快好省的途徑。近年來，人們開始對(duì)植物蒲葵進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)蒲葵果實(shí)提取物具有 預(yù)防和治療癌癥的成分，是一種高效、無毒的比較理想的抗癌藥物。腫瘤對(duì)人類健康威脅巨大，利用各種手段尋找切實(shí)有效的抗癌藥物，已經(jīng)成為世 界范圍內(nèi)生命科學(xué)研究的熱點(diǎn)課題。目前臨床上用于腫瘤治療的化學(xué)合成藥物，雖然對(duì)于 腫瘤治療起十分重要的作用，但是其毒性大、易產(chǎn)生耐藥性等副作用限制了他們的廣泛使 用。醫(yī)藥科研工作者一直在不懈的努力尋找毒副作用相對(duì)較小、作用原理獨(dú)特、效果明顯的 藥物，如何發(fā)明新的具有腫瘤作用的化合物，一直是他們重點(diǎn)研究方向之一。

發(fā)明內(nèi)容
基于上述原因，本公司的科研人員通過長(zhǎng)期的研究，得到了 1個(gè)新的化合物，該類 化合物除了具有很好的抗衰老的作用外，還具有很好的抗腫瘤的作用，該類化合物具有高 效、低毒的優(yōu)點(diǎn)，將成為市場(chǎng)上新的抗腫瘤藥物。本發(fā)明通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的?；衔?其中化合物在制備治療衰老藥物中的應(yīng)用。
其中化合物在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。其中化合物為原料制備的藥物制劑。其中所述的腫瘤為癌。其中所述的腫瘤為肝癌。
其中所述的腫瘤為白血病。其中所述的腫瘤為鼻咽癌。本發(fā)明所述的化合物，可以由包括但不限于下述方法得到蒲葵籽，用乙醇提取，回收乙醇得濃縮浸膏(LC)，將濃縮浸膏(LC)用水分散，依 次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，分別收集各萃取液并濃縮獲得石油醚萃取物 (LCP)、氯仿萃取物(LCC)、乙酸乙酯萃取物(LCE)和正丁醇萃取物(LCB)。取乙酸乙酯萃取物(LCE)，用氯仿和甲醇溶解，層析硅膠(100-200目)進(jìn)行拌樣。 硅膠(200-300目)用氯仿溶解硅膠裝柱，并用氯仿平衡柱子至硅膠面不再下降，干法上樣。 依次用氯仿、氯仿-甲醇(100 1)、氯仿-甲醇(50 1)、氯仿-甲醇(25 1)、氯仿-甲 醇(15 1)、氯仿-甲醇(10 1)、氯仿-甲醇(5 1)、氯仿-甲醇(2 1)、甲醇梯度洗 脫。利用薄層檢測(cè)合并得到23個(gè)組分(LCE1-LCE23)。取第11個(gè)餾分LCE21(由氯仿-甲醇50 1洗脫得到)，進(jìn)行硅膠柱分離，稱 取100 200目硅膠進(jìn)行拌樣。200 300目硅膠用氯仿溶解硅膠，填柱，并用氯仿平 衡柱子至硅膠不再下降為止，上樣。以氯仿和甲醇為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，其梯度設(shè)置 為氯仿、氯仿-甲醇(100 1)、氯仿-甲醇(50 1)、氯仿-甲醇(25 1)、氯仿-甲 醇(15 1)、氯仿-甲醇(10 1)、氯仿-甲醇(5 1)、甲醇，各梯度洗脫的體積分別 為10L、10L、5L、5L、3L、3L、3L、0. 5L，并每份500ml左右進(jìn)行濃縮，利用薄層檢測(cè)指導(dǎo)合并 得到7個(gè)組分(LCE11-1-LCE11-7)。組分LCEl 1-2用甲醇溶解，通過S印hadex LH-20柱 (2X43cm)分離，以氯仿-甲醇(7 3)為洗脫劑，利用薄層檢測(cè)指導(dǎo)合并得到3個(gè)組分 (LCE11-2-1-LCE11-2-3)。組分 LCEl 1-2-1 經(jīng)過 Rp_18 高效液相 Waters XTerra 系列， 19 X 250mm i. d.制備色譜柱分離，流動(dòng)相為甲醇水(42 58) pH為2. 5，紫外檢測(cè)，波長(zhǎng) 為205nm，流速為6ml/min在保留時(shí)間為32. 407min得到本發(fā)明化合物。本發(fā)明所述的新化合物可以通過化學(xué)合成的方法得到。一、本發(fā)明化合物的結(jié)構(gòu)鑒定白色無定性粉末，[α]25D = +8. 2(c0. 20，MeOH)。ESI-MS(positive)給出準(zhǔn)分子 離子峰[M+Na]+m/z 369，提示分子量為 346。HRESIMS m/z :369. 094[M+Na] + (C18Hx18a07 理論 值為369. 0945)，計(jì)算不飽和度為10。在1hnmr 譜上，δ h 6. 78 (2h，s，h-2，，6，)和 6. 93 (1h，s，h-4，)的三個(gè)芳基氫形 成1，3，5-三取代苯環(huán)，δ η 7. 55 (1η，s，h-2)和7. 44 (1h，s，h_6)的兩個(gè)芳基氫形成1，3， 4,5-四取代苯環(huán)；在13c nmr譜上，化學(xué)位移在110. 5-151. 6區(qū)域內(nèi)的12且根據(jù)其化學(xué)位 移和dept譜判斷，其中有4個(gè)含氧取代的季碳和3個(gè)非含氧取代的季碳以及5個(gè)次甲基 碳。此外，化學(xué)位移在167. 1處的峰提示存在一個(gè)羧基。δ 88. 1和62. 6分別顯示被氧化的 一個(gè)次甲基峰和一個(gè)亞甲基峰，δ 55. 6顯示2個(gè)甲氧基峰和δ 52. 2處含有一個(gè)次甲基峰。 根據(jù)1h-1h cosyi普中，δ Η 3. 55 (1η, br s，h-3)與 δ H3. 70 (2h，br s，h-9)和 δη5. 56(1h， d，j = 6.6hz，h-2)相關(guān)，可以推斷出該化合物含有(-ochchch2oh)片段，再結(jié)合hmbc中，H-2(5. 56)與C-7a(151.6)有遠(yuǎn)程相關(guān)，提示該化合物含有一個(gè)苯并呋喃結(jié)構(gòu)片段。此外， 在HMBC中，H-2 (5. 56)還與C-1’ (131.6)和C-4’(110.5)相關(guān)，可以推斷出該化合物的骨 架結(jié)構(gòu)為2-苯基_3-(羥甲基-l)-2，3- 二氫苯駢呋喃。在HMBC譜中，兩個(gè)氧甲基上的氫 分別跟C-3’和C-7相關(guān)，H-4和H-7與羧基碳相關(guān)，可以從以上相關(guān)中確定取代基的位置。 從而確定該化合物為2- (3’ -羥基-5’ -甲氧苯基)-3-(羥甲基-1) -7-甲氧基-2，3- 二氫 苯駢呋喃-5-羧酸。
表1 化合物的1HNMR，13C NMR, 1H-1H COSY和HMBC數(shù)據(jù)[δ in ppm，mult. (J in Hz)] Measured in DMS0_d6二、清除02_能力試驗(yàn)(1)各儲(chǔ)備液的配制NADH儲(chǔ)備液稱 20. 7mg NADH，溶解于 40ml pH 8. 150mmol/L Tris-HCl 緩沖液中。
PMS 儲(chǔ)備液稱 1. 84mg PMS，溶解于 40ml pH 8. 150mmol/L Tris-HCl 緩沖液中。NBT 儲(chǔ)備液稱 12. 3mg NBT，溶解于 30ml pH 8. 150mmol/L Tris-HCl 緩沖液中。樣品用DMSO溶解成不同濃度。(2)實(shí)驗(yàn)過程445 μ 1 pH 8. 150mmol/L Tris-HCl — 250 μ 1 NADH 儲(chǔ)備液一250 μ 1 NBT 儲(chǔ)備液 —5 μ 1樣品一50 μ 1 PMS儲(chǔ)備液，混勻，室溫放5min，570nm測(cè)OD值。注意調(diào)零組以DMSO+Tris-HCl緩沖液代替樣品+PMS空白組以Tris-HCl緩沖液代替PMS對(duì)照組以DMSO代替樣品超氧陰離子清除率=[1- (0D測(cè)定組-OD空白組)/ (0D對(duì)照組-OD調(diào)零 組)]X100%(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。表2本發(fā)明化合物清除02_結(jié)果 三、對(duì)烷自由基DPPH影響試驗(yàn)(1) DPPH儲(chǔ)備液稱5mg DPPH，用甲醇溶解至濃度約100mg/L。樣品用DMSO溶解成不同濃度(2)實(shí)驗(yàn)過程995 μ 1 DPPH儲(chǔ)備液一5 μ 1藥物混勻，室溫避光20min后546nm測(cè)OD值。調(diào)零組以甲醇+DMSO代替DPPH+藥物空白組以甲醇代替DPPH對(duì)照組以DMSO代替藥物清除百分比=[1-(0D測(cè)定-OD空白)/(0D對(duì)照-OD調(diào)零)]X100%(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。表3本發(fā)明化合物對(duì)烷自由基DPPH試驗(yàn)結(jié)果 四、本發(fā)明化合物抑瘤試驗(yàn)
本發(fā)明化合物對(duì)人體4個(gè)瘤株的體外抑瘤活性實(shí)驗(yàn)，這4個(gè)瘤株包括白血病HL-60 細(xì)胞、白血病Mata細(xì)胞、鼻咽癌CNE-I細(xì)胞和肝癌H印G2細(xì)胞。(I)MTT 法在96孔培養(yǎng)板中每孔加入200ul (含有2. 5X IO4個(gè)腫瘤細(xì)胞)含10 % FBS的 RPMI 1640培養(yǎng)基的細(xì)胞懸液，置37°C 5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，實(shí)驗(yàn)組分別加入最終 濃度100、50、25、12. 5和6. 25 μ g/ml權(quán)利要求1中所述的化合物，對(duì)照組則加入等體積溶 齊U，每組4孔，重復(fù)4次。置37°C，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)2天后，棄去上清液，加入200 μ 1/孔 新鮮配制的含50mg/ml MTT的無血清培養(yǎng)液，37°C繼續(xù)培養(yǎng)4h。棄去上清液，加入200 μ 1 DMS0，震蕩混勻后，在酶標(biāo)儀上以波長(zhǎng)為550nm，參比波長(zhǎng)為450nm測(cè)定OD值。計(jì)算結(jié)果并 利用CalcuSyn軟件計(jì)算出IC5tl值。按下式計(jì)算藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)得抑制率腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率％ = (1-實(shí)驗(yàn)組平均OD值/對(duì)照組平均OD值)X 100%(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。表4不同化合物抑制腫瘤作用 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明上述試驗(yàn)表明，本發(fā)明新化合物具有抗衰老的作用、抗腫瘤的作 用，特別是對(duì)癌癥，包括但不限于肝癌、白血病、鼻咽癌具有很好的治療作用，試驗(yàn)數(shù)據(jù)表 明，本發(fā)明化合物對(duì)白血病HL-60細(xì)胞、白血病Mata細(xì)胞和H印G_2細(xì)胞的體外增殖的抑制 作用強(qiáng)于陽(yáng)性藥物順鉬。
實(shí)施例實(shí)施例1取晾干粉碎的蒲葵籽20kg，用70%乙醇(150L)回流提取3次，每次3小時(shí)，合并提 取液。在55°C下減壓回收乙醇得濃縮浸膏(LC) 3. 0kg。將3. Okg濃縮浸膏(LC)用4. OL水 分散，依次用等體積石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取三次。分別收集各萃取液并濃縮 獲得石油醚萃取物(LCP) 90. 21g、氯仿萃取物(LCC) 91. 72g、乙酸乙酯萃取物(LCE) 55. 05g 和正丁醇萃取物(LCB) 554. 35g。取乙酸乙酯萃取物(LCE) 55. 05g，用氯仿和甲醇溶解，稱80g柱層析硅膠(100-200 目)進(jìn)行拌樣。稱取硅膠(200-300目)1200g，用氯仿溶解硅膠裝柱，并用氯仿平衡柱子至硅 膠面不再下降，干法上樣，柱子高度為10X80cm。依次用氯仿(48L)、氯仿-甲醇(100 1) (80L)、氯仿-甲醇(50 1) (47L)、氯仿-甲醇(25 1) (53L)、氯仿-甲醇(15 1)(116L)、 氯仿-甲醇(10 1)(41L)、氯仿-甲醇(5 1)(45L)、氯仿-甲醇(2 1)(5. 1L)、甲醇 (3L)梯度洗脫?？刂屏魉僭?500ml/h，每接IOOOml為一個(gè)餾分濃縮。并且利用薄層檢測(cè)合并得到23個(gè)組分(LCE1-LCE23)。 取第11個(gè)餾分LCE21(1.60g)(由氯仿-甲醇50 1洗脫得到)，進(jìn)行硅膠柱 分離，稱取100 200目硅膠2g左右進(jìn)行拌樣。然后稱取200 300目硅膠50g，用氯 仿溶解硅膠，填柱，并用氯仿平衡柱子至硅膠不再下降為止，上樣，量取柱子的直徑和高 度為(2.5X35cm)。以氯仿和甲醇為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，其梯度設(shè)置為氯仿、氯仿-甲 醇(100 1)、氯仿-甲醇(50 1)、氯仿-甲醇(25 1)、氯仿-甲醇(15 1)、氯 仿-甲醇(10 1)、氯仿-甲醇(5 1)、甲醇，各梯度洗脫的體積分別為10L、10L、5L、 5L、3L、3L、3L、0. 5L，并每份500ml左右進(jìn)行濃縮，利用薄層檢測(cè)指導(dǎo)合并得到7個(gè)組 分(LCE11-1-LCE11-7)。組分 LCEl 1-2 (750mg)用 2ml 甲醇溶解，通過 S印hadex LH-20 柱(2X43cm)分離，以氯仿-甲醇(7 3)為洗脫劑，流速為1滴/秒，每5ml作為一 個(gè)餾分濃縮，并利用薄層檢測(cè)指導(dǎo)合并得到3個(gè)組分(LCE11-2-1-LCE11-2-3)。組分 LCE11-2-1 (IOOmg)經(jīng)過 Rp_18 高效液相 Waters XTerra 系列，19 X 250mm i. d.制備色譜柱 分離，流動(dòng)相為甲醇水(42 58) pH為2. 5，紫外檢測(cè)，波長(zhǎng)為205nm，流速為6ml/min在 保留時(shí)間為32.407min得到本發(fā)明化合物(IOmg)。通過理化常數(shù)和現(xiàn)代波譜學(xué)手段(MS、 NMR)鑒定結(jié)構(gòu)，化合物為2- (3’ -羥基-5’ -甲氧苯基)-3-(羥甲基-1) -7-甲氧基-2，3- 二 氫苯駢呋喃-5-羧酸。上述實(shí)施例包括但不限于上述。
權(quán)利要求
化合物FSA00000130610300011.tif
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中化合物在制備治療衰老藥物中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中化合物在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中化合物為原料制備的藥物制劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物，其中所述的腫瘤為癌。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物，其中所述的腫瘤為肝癌。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物，其中所述的腫瘤為白血病。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物，其中所述的腫瘤為鼻咽癌。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明公開了一種新酚類化合物及用途，利用理化常數(shù)和波譜學(xué)手段手段鑒定了它的化學(xué)結(jié)構(gòu)，該化合物除了具有很好的抗衰老的作用外，還具有很好的抗腫瘤的作用，該化合物具有高效、低毒的優(yōu)點(diǎn)，將成為市場(chǎng)上新的抗腫瘤藥物。
文檔編號(hào)A61K31/343GK101845032SQ201010190029
公開日2010年9月29日 申請(qǐng)日期2010年6月3日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月3日
發(fā)明者何祥久, 景運(yùn)條, 曾小斌, 滕慧梅, 蔣晨光, 黃有帶 申請(qǐng)人:廣東德鑫制藥有限公司