專利名稱：用作tpo模擬物的化合物和組合物的制作方法
用作TPO模擬物的化合物和組合物
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本申請(qǐng)請(qǐng)求2005年8月15日提交的在35U.S.CSll9(e)下的美國臨 時(shí)申請(qǐng)?zhí)朥S60/708，438的優(yōu)先權(quán)權(quán)益。本文引用該申請(qǐng)所有公開內(nèi)容作為 參考并用于所有目的。
背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域
本發(fā)明提供了一類新的化合物，包含這類化合物的藥物組合物和使用 這類化合物治療或預(yù)防與異?；蚴д{(diào)的TPO活性相關(guān)的疾病或障礙，特別 是涉及血小板減少的疾病或障礙的方法。
背景技術(shù)：
巨核細(xì)胞為骨髓衍生的細(xì)胞，它們產(chǎn)生循環(huán)的血小板。造血細(xì)胞因子 血小板生成素(TPO)支持造血干細(xì)胞增殖和分化過程并且對(duì)巨核細(xì)胞調(diào)節(jié) 而言是必需的。
本發(fā)明的新化合物作為TPO模擬物用于治療參與或?qū)е卵夯蜓“?減少的疾病或病癥，包括，但不限于放療、化療、免疫療法、癌癥、病毒 感染和移植，諸如骨髓和干細(xì)胞移植。
發(fā)明概述
本發(fā)明在一個(gè)方面中提供了式I的化合物及其N-氧化物衍生物，前體 藥物衍生物，被保護(hù)的衍生物，各異構(gòu)體及其異構(gòu)體混合物和這類化合物的可藥用鹽和溶劑合物(例如7JC合物):I其中n選自0、 1、 2和3;Z選自N和CRs;其中Rs選自氫、鹵素、C^烷基、鹵素-取代的-d.6 烷基；其中Rs的任意烷基可任選地有被選自-S(0)o-2-、 -C(O)-、 ^119-和-0-的原子或基團(tuán)替換的亞甲基；其中R9選自氫和C^烷基；R!、 R2、 R4和Rs獨(dú)立地選自氫、卣素、羥基、^&、硝基、-XNR9R10-、 C"烷基、鹵素-取代的-d—6烷基、Cw烷氧基和卣素-取代的-CL6烷氧基； 其中X選自鍵和d_6亞烷基；且R9和R1G獨(dú)立地選自氫和d-6烷基；R3選自氫、Cw烷基、C3-8雜環(huán)烷基、<:5_1()雜芳基、-(^(OhRm -NRnS(0)2R12、 -NR C(0)R12、畫NRnC(O)NRnRu、 -NR C(0)C(0)OR12、 NRuC(0)OR！2、 -OC(O) NR R12、畫C(O)OR"、 -C(0)R13、 NRnR!2、 -NRnR13、 -S(0)2NR R12和-C(O)NRuRu;其中R 和R12獨(dú)立地選自氫、 C"烷基、鹵素-取代的-C,-6烷基、C"烷氧基、^J^-d-6烷基、羥基-C" 烷基和被-NR9Ru)取代的Cw烷基；R!3是任選被1至3個(gè)Cw烷基基團(tuán)取 代的<:3-8雜環(huán)烷基；其中R3的任意雜環(huán)烷基或雜芳基可任選地進(jìn)一步被l至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、d,6烷基、Cf6烷氧基、絲-C^烷基、羥基-Cj.6烷基、鹵素-取代的-d_6烷基和鹵素-取代的-d—6烷氧基取代； Re選自卣素和d—6烷基；且R7選自鹵素、M、 d-6烷基、(:2.6鏈烯基、Qj-6炔基、鹵素-取代的-C"烷基、<:6_1()芳基、Cs-K)雜芳基、C3_8雜環(huán)烷基和C3_12環(huán)烷基；其中任意烷基、鏈烯基、炔基、芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基任選地被1至5個(gè)獨(dú)立地選自以下的基團(tuán)取代鹵素、C^烷基、Cw烷氧基、氰基-C"烷基、羥基-d-6烷基、鹵素-取代的-d-6烷基、卣素-取代的-d-6烷氧基、-NR14R15、畫XOR"、 -S(0)2R14、 Cm環(huán)烷基、<:3—8雜環(huán)烷基、C^o芳基和 0$.8雜芳基；其中X是鍵或d-6亞烷基且R"和Ri5獨(dú)立地選自C"烷基、 ^J^-d-6烷基、羥基-C^烷基、卣素-取代的-C"烷基和卣素-取代的-d.6 烷氧基；其中Rj的任意芳基、雜芳基、環(huán)烷基和雜環(huán)烷基取代基可任選地 進(jìn)一步被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、CL6垸基、d-6烷IL&、絲-Cw烷基、羥基-d，6烷基、卣素-取代的-CL6烷基和面素-取代-d-6烷氧基取代。本發(fā)明在第二個(gè)方面中提供了藥物組合物，它包含式I的化合物或其N-氧化物衍生物，各異構(gòu)體及其異構(gòu)體混合物，或其可藥用鹽，與一種或多種合適的賦形劑混合。本發(fā)明在第三個(gè)方面中提供了治療動(dòng)物疾病或病癥的方法，其中血小 板水平升高可以抑制或改善所述疾病或病癥的病理學(xué)和/或癥狀學(xué)情況，該方法包括對(duì)所述的動(dòng)物施用治療有效量的式I的化合物或其N-氧化物衍生物，各異構(gòu)體及其異構(gòu)體混合物，或其可藥用鹽。本發(fā)明在第四個(gè)方面中提供了式I的化合物在制備用于治療動(dòng)物疾病 或病癥的的藥物中的用途，其中血小板水平下降對(duì)所述疾病或病癥的病理 學(xué)和/或癥狀學(xué)有作用。本發(fā)明的第五個(gè)方面中提供了制備式r的化合物及其N-氧化物衍生 物、前體藥物衍生物、祐:保護(hù)的衍生物、各異構(gòu)體及其異構(gòu)體混合物及其可藥用鹽的方法。 發(fā)明詳述定義"烷基"作為基團(tuán)和其它基團(tuán)的結(jié)構(gòu)元件，例如卣素-取代的-烷基和烷氧基，其可以為直鏈或支鏈的。Ci-4-烷氧基包括曱氧基、乙氧基等。鹵素-取代的烷基包括三氟甲基、五氟乙基等。"芳基"意指含6-10個(gè)環(huán)碳原子的單環(huán)或稠合雙環(huán)芳族環(huán)組合。例如 芳基可以為苯基或萘基，優(yōu)選苯基。"亞芳基"意指衍生自芳基的二價(jià)基團(tuán)。 將"雜芳基"如上述對(duì)芳基所定義，其中環(huán)成員中的一個(gè)或多個(gè)為雜原子。例如，雜芳基包括吡咬基、吲咮基、吲唑基、喹楚啉基、#基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并硫代吡喃基、苯并[l，3j間二氧雜環(huán)戊烯、咪 唑基、苯并-咪唑基、嘧咬基、呋喃基、喁唑基、異鳴唑基、三唑基、四唑基、吡唑基、^:吩基等。"環(huán)烷基，，意指包含所示環(huán)原子數(shù)的飽和或部分不飽和的單環(huán)、稠合雙環(huán)或橋連多環(huán)組合。例如C3，H)環(huán)烷基包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。"雜環(huán)烷基，，意指如本申請(qǐng)中定義的環(huán)烷基，M是所示環(huán)碳中的一個(gè)或多個(gè)被選自-O-、 -N=、 -NR-、 -C(O)-、 -S-、 -8(0)-或-8(0)2-的部分所替 換，其中R為氫、C^烷基或氮保護(hù)基。例如，作為本申請(qǐng)中用于描述本 發(fā)明化合物的C3—8雜環(huán)烷基包括嗎啉代、吡咯烷基、吡咯烷基-2-酮、哌溱 基、哌咬基、哌咬基酮、1，4-二氧雜-8-氮雜-螺[4.5]癸-8-基等。"卣素(halogen)，，(或囟素(halo))優(yōu)選表示氯或氟，但也可以為溴 或珙。"血小板生成素(TPO)"在本領(lǐng)域中也稱作c-Mpl配體、mpl配體、巨 核細(xì)胞生成素和巨核細(xì)胞生長和發(fā)育因子。"治療(Treat)"、"治療(treating)"和"治療(treatment)，，意指緩 解或減輕疾病和/或其伴隨癥狀的方法。 優(yōu)選實(shí)施方案的描述本發(fā)明提供了治療血小板減少的化合物、組合物和方法。可以將血小 板減少廣泛解釋為認(rèn)為血小板數(shù)量低于正常值或健康個(gè)體要求的任意下 降。在一個(gè)實(shí)施方案中，式I化合物是式Ia化合物其中:n選自0、 1、 2和3; m選自0、 1、 2、 3、 4和5;Z選自N和CRs;其中Rs選自氫、鹵素、C,—6烷基、鹵素-取代的-d.6 烷基；其中Rs的任意烷基可任選地有被選自-S(0)o-2-、 -C(O)-、- 119-和-0-的原子或基團(tuán)替換的亞甲基；其中R9選自氫和C"烷基；Ri、 R2、 R4和Rs獨(dú)立地選自氫、卣素、羥基、硝基、-XNR9R10-、 d_6 烷基、卣素-取代的-C^烷基；其中X選自鍵和Cw亞烷基；且R9和Rjo 獨(dú)立地選自氫和d-6烷基；R3選自-XCOOR" -XCONR9R10、 -NR S(0)2R12 、 -S(0)2R函2 、 -NR C(0)R12 、 -NRnC(O)NRnRu 、 -NRuC(O)C(O)ORu 和 -NRuC(O)ORu;其中X選自鍵和Cw亞烷基；且R9和R1()獨(dú)立地選自氫 和Cw烷基；R6選自鹵素和C^烷基；且R加選自鹵素和d-6烷基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，R6為氟且R加選自氟、甲基和丁基。 在另一個(gè)實(shí)施方案中，R3選自氣基、M-羰基、M-磺?；?、曱基-磺?；?氨基和氨基；且R4選自氫、羥基、硝基和氨基。本發(fā)明的優(yōu)選化合物選自；4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-p引哚-2-基]-苯 甲酸；4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基-苯甲酰胺；4-[7-氟-6-(4-氟-3-甲基-苯基)-lH-吲咮-2-基卜苯甲酸；4-[7-氟-6-(4-氟-3-甲基-笨基)-1H-p引哚 -2-基]-糾酰胺；4-[6-(4-丁基-苯基)-3-乙基-7-氟-lH-p引味-2-基l-2-幾基-苯 曱酸；4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-3-異丙基-lH-吲哚-2-基-2-羥基-苯甲酸； 4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基-2-羥基-苯甲酸；4-[6-(4-丁基-苯 基)-7-氟-3-甲基-lH-吲咮-2-基-2-羥基-苯甲酸；4-[6-(4-丁基-苯基)-lH-苯并 咪唑-2-基卜苯甲酸；4-[6-(4-丁基-苯基)-lH-苯并咪唑-2-基-2-羥基-苯甲酸； N-(4-6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲咪-2-基苯基)-甲磺酰胺；N-(4-〖6-(4-丁基 誦苯基)-7-氟-lH-p引哚-2-基l苯基〉-乙酰胺；N-(4-[6-(4-丁基畫苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基-2-氯-苯基}-乙酰胺;4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基]-2-氯-苯胺；和2-氨基畫4-[6-(4-丁基-苯基)-7陽氟曙lH-吲咪-2國基-苯曱酸。 本發(fā)明更優(yōu)選的化合物詳述于下文的實(shí)施例與表中。藥理學(xué)和應(yīng)用可以將血小板減少廣泛解釋為認(rèn)為低于正常值或?qū)】祩€(gè)體所需的血 小板數(shù)量的任意下降。已知血小板減少具有許多致病因素，包括，但不限 于放療、化療、免疫療法、免疫性血小板減少性紫癜、骨髓異常增生綜合 征(MDS)、再生障礙性貧血、AML、 CML、病毒感染(包括，但不限于HIV、 丙型肝炎病毒、細(xì)小病毒)、肝病、重度骨髓抑制、骨髓移植、干細(xì)胞移植、 外周血干細(xì)胞移植、祖細(xì)胞缺陷、干細(xì)胞和祖細(xì)胞多態(tài)現(xiàn)象、TPO缺乏、 中性白細(xì)胞減少、樹突細(xì)胞活動(dòng)化、增殖、活化或分化。TPO在治療患有血小板計(jì)數(shù)減少的患者中具有顯著的治療價(jià)值。特別 地，具有許多類型癌癥的患者存在血小板減少，這是因骨髓抑制性化療或 放療所致，這種化療或放療可以導(dǎo)致出血風(fēng)險(xiǎn)增加并且通常限制了為接受 加強(qiáng)化療或骨髓移植給予的化療劑的劑量。本發(fā)明的化合物用于治療血小板減少，而與導(dǎo)致該病癥的因素或多種 因素?zé)o關(guān)。本發(fā)明的化合物還用于治療在致病因素或多種致病因素未知或 尚未得到鑒定時(shí)的血小板減少。本發(fā)明的化合物是有用的，無論是否涉及 血液或血小板減少，包括，但不限于移植術(shù)、手術(shù)、分娩前麻醉和腸保護(hù)。因?yàn)檠“?凝血細(xì)胞)是凝血所必需的并且在其數(shù)量極低時(shí)，患者因 突難性出血而處于死亡危險(xiǎn)，本發(fā)明的TPO才莫擬物具有在治療各種出血性 障礙中的有用應(yīng)用，例如主要因血小板缺乏導(dǎo)致的疾病。按照上述所述，本發(fā)明進(jìn)一步提供了有這類治療需要的個(gè)體預(yù)防或治 療上述疾病或障礙中的任意種的方法，該方法包括對(duì)所述患者施用治療有效量(參ja T義時(shí)"滋^和秀炎，逸合參，的式I的化合物或其可藥用鹽。就上 述用途中的任意種而言，所需劑量根據(jù)施用方式、所治療的特定病癥和所 需作用的不同而改變。施用和藥物纟且合物一般而言，通過本領(lǐng)域常用和可接受的已知方式中的任意種施用治療 有效量的本發(fā)明化合物，可以將其單獨(dú)施用或與 一種或多種治療劑聯(lián)合施 用。治療有效量可以根據(jù)疾病的嚴(yán)重性、個(gè)體的年齡和相對(duì)健康情況、所用化合物的功效和其它因素的不同而廣泛改變。 一般而言，顯示以約0.03 -2.5mg/kg/體重的每日劑量獲得令人滿意的結(jié)果。在較大哺乳動(dòng)物，例如 人中的所示每日劑量在約0.5mg -約100mg的范圍，便利地例如以達(dá)每日 4次的分次劑量或以延遲劑型施用。用于口服施用的合適的單位劑型包含 約1 -50mg的活性組分?？梢酝ㄟ^任意常規(guī)途經(jīng)施用作為藥物組合物的本發(fā)明化合物，特別是 經(jīng)腸道，例如口服，例如以片劑或膠嚢形式；或通過非腸道，例如以可注 射溶液或混懸液的形式；通過局部，例如以洗劑、凝膠、軟膏劑或霜?jiǎng)┗?鼻用劑型或栓劑形式?？梢酝ㄟ^混合、制?；虬路椒ò凑粘Ｒ?guī)方式制備 包含游離形式或可藥用鹽形式與至少 一種可藥用的載體或稀釋劑的藥物組 合物。例如，口服組合物可以為片劑或明^Mit，它們包含活性組分與 a)稀釋劑，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纖維素和/或甘 氨酸；b)潤滑劑，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、其鎂或鈣鹽和/或聚 乙二醇；就片劑而言還包含c)粘合劑，例如硅酸鎂鋁、淀粉糊、明膠、西 黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要， 還包含d)崩解劑，例如淀粉、瓊脂、藻酸或其鈉鹽，或泡騰混合物；和/ 或e)吸收劑、著色劑、矯p未劑和甜朱劑?？勺⑸浣M合物可以為等滲水溶液 或混懸液，并且可以由脂肪乳劑或混懸液制備栓劑。可以將這些組合物滅 菌和/或其包含輔助劑，諸如防腐劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑或乳化劑、溶解促進(jìn) 劑、用于調(diào)節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖劑。此外，它們還可以包含其它治療上 有價(jià)值的物質(zhì)。用于透皮施用的合適的制劑包括有效量的本發(fā)明化合物與 載體。載體可以包括可吸收的藥理學(xué)可接受的溶劑以便輔助通過宿主皮膚。 例如，透皮裝置可以為包含裱背部件、包含化合物任選與栽體的儲(chǔ)庫、任 選的在延長時(shí)間期限內(nèi)以受控和預(yù)定速率將化合物遞送至宿主皮膚的速率控制屏障和將裝置與皮膚固定的用具。還可以使用骨架透皮制劑。用于局 部施用，例如皮膚和眼的合適的制劑優(yōu)選為本領(lǐng)域眾所周知的水溶液、軟 膏劑、霜?jiǎng)┗蚰z。這類制劑可以包含增溶劑、穩(wěn)定劑、張力促進(jìn)劑、緩 沖劑和防腐劑。可以將治療有效量的本發(fā)明化合物與一種或多種治療劑(藥物組合)聯(lián)合施用。本發(fā)明的TPO才莫擬物化合物還用于與已知對(duì)存活或增殖細(xì)胞起作 用的其它已知活性劑一起對(duì)存活或增殖細(xì)胞起作用。這類活性劑包括，但 不限于G-CSF、 GM-CSF、 TPO、 M畫CSF、 EPO、 Gro-P 、 IL-ll、 SCF、 FLT3配體、LIF、 IL-3、 IL-6、 IL-1、 Progenipoietin、 NESP、 SD-01或 IL-5或上述活性劑中任意種的生物活性衍生物。已經(jīng)證實(shí)人樹突細(xì)胞表達(dá)TPO受體并且TPO為樹突細(xì)胞的強(qiáng)效轉(zhuǎn)移 物。本發(fā)明的TPO模擬物化合物還用作疫苗佐劑，即它們?cè)黾訕渫患?xì)胞的 活性和活動(dòng)。本發(fā)明的藥物活性化合物因增加樹突細(xì)胞活性和活動(dòng)而用作 免疫佐劑，與口服、透皮或皮下遞送的疫苗和/或免疫調(diào)節(jié)劑一起施用。已知TPO對(duì)巨核細(xì)胞、血小板和干細(xì)胞具有各種作用，包括抗-細(xì)胞 凋亡/存活作用和對(duì)干細(xì)胞和巨核細(xì)胞的增殖作用。因此，本發(fā)明的TPO 和/或TPO模擬物有效增加干細(xì)胞和祖細(xì)胞的數(shù)量，以便在將TPO與誘導(dǎo) 分化的其它細(xì)胞因子聯(lián)用時(shí)存在協(xié)同作用。如果將本發(fā)明的化合物與其它療法聯(lián)合施用，那么共同施用的化合物 劑量當(dāng)然要才艮據(jù)所用的共同藥物、^^用的具體藥物、所治療的病癥等的不 同而改變。本發(fā)明還提供了藥物組合產(chǎn)品，例如藥盒，它包含a)為如本文披露 的游離或可藥用鹽形式的本發(fā)明化合物的第一種活性劑；和b)至少一種 共同的活性劑。該藥盒可以包含用于其施用的說明書。如本文所用的術(shù)語"共同施用"或"聯(lián)合施用"等意指包括對(duì)單一患者施 用選擇的治療劑并且指定包括治療方案，其中不一定通過相同施用途徑或 同時(shí)施用所述的活性劑。本文所用的術(shù)語"藥物組合產(chǎn)品"意指因混合或合并一種以上活性組分產(chǎn)生并且包括活性組分的固定和不固定組合的產(chǎn)品。術(shù)語"固定組合"意指 以單一本體的形式或劑量同時(shí)對(duì)患者施用活性組分，例如式I的化合物和共同活性劑。術(shù)語"不固定組合"意指沒有特定時(shí)間限制的同時(shí)，同時(shí)或依 次對(duì)患者施用活性組分，例如式I的化合物和共同活性劑，這類施用在患者體內(nèi)提供了治療有效水平的2種化合物。后者也適用于雞尾酒療法，例 如施用3種或3種以上活性組分。制備本發(fā)明化合物的方法本發(fā)明還包括制備本發(fā)明化合物的方法。在所述的反應(yīng)中，有必要保 護(hù)反應(yīng)官能團(tuán)，例如羥基、氨基、亞氮基、硫代或g，其中這些基團(tuán)為 終產(chǎn)物中所需的，以避免其參與不需要的反應(yīng)?？梢园凑諛?biāo)準(zhǔn)實(shí)踐使用常 用的保護(hù)基，例如，參見T.W. Greene和P. G. M. Wuts在"Protective Groups in Organic Chemistry", John Wiley和Sons, 1991中所述。式I化合物，其中Z是N，可以如以下反應(yīng)方案I進(jìn)行制備反應(yīng)方案Ii(2》其中n和至R7如本發(fā)明概述中的定義。式I化合物可通過式2化合物與 式3化合物在亞硫酸氫鈉存在下在適當(dāng)?shù)娜軇┲?例如，DMA等)反應(yīng)而合 成。反應(yīng)在約100'C至約180X:溫度范圍并可能需進(jìn)行約24小時(shí)完成。 式I化合物，其中Z是CRg，可以如以下反應(yīng)方案II進(jìn)行制備<formula>formula see original document page 14</formula>其中n和R,至Rs如本發(fā)明概述中的定義。式I化合物可通過式2化合物與 式5化合物在適當(dāng)?shù)穆芬姿顾?例如，氯化鋅等)或質(zhì)子酸(例如，HC1 等)的存在下在適當(dāng)?shù)娜軇┲?例如，醋酸、乙醇等)反應(yīng)而合成。反應(yīng)在 約80"C至約120匸溫度范圍進(jìn)行并可能需進(jìn)行約72小時(shí)完成。 式I化合物合成的詳細(xì)實(shí)施例可見于如下的實(shí)施例中。制備本發(fā)明化合物的額外方法可以通過使游離堿形式的化合物與可藥用的無機(jī)酸或有機(jī)^應(yīng)將本 發(fā)明的化合物制備成可藥用的酸加成鹽?；蛘?，可以通過游離酸形式的化 合物與可藥用的無機(jī)喊或有fe^應(yīng)制備本發(fā)明化合物的可藥用的堿加成 鹽。或者，可以使用原料或中間體的鹽制備本發(fā)明化合物的鹽形式。 可以分別由相應(yīng)的堿加成鹽或酸加成鹽制備本發(fā)明化合物的游離酸或 游離堿。例如，可以通過用合適的堿(例如氫氧化銨溶液、氫氧化鈉等)處 理將酸加成鹽形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的游離堿。可以通過用合適 的酸(例如鹽酸等)處理將堿加成鹽形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的游離 酸。可以通過在0-80。C下用還原劑(例如硫、二氧化硫、三苯膦、硼氫化 鋰、硼氫化鈉、三氯化磷、三溴化物等)在合適的惰性有機(jī)溶劑(例如乙腈、 乙醇、含水二噁烷等)中處理由本發(fā)明化合物的N-氧化物制備未氧化形式 的本發(fā)明化合物?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法制備本發(fā)明化合物的前體藥物衍 生物(進(jìn)一步的詳細(xì)內(nèi)容例如參見Saulnier等，(1994)， Bioorganic andMedicinal Chemistry Letters, Vol. 4， p. 1985)。例如，可以通過4吏本發(fā)明非 衍生的化合物與合適的氨基甲?；噭?例如l，l-acyloxyalkylcarbanochloridate、碳酸對(duì)-硝基苯酯等)反應(yīng)制備合適的前 體藥物。的衍生物。適合于產(chǎn)生保護(hù)基及其除去的技術(shù)的詳細(xì)描述可以在T. W. Greene, "Protecting Groups in Organic Chemistry",第3版，John Wiley和 Sons, Inc., 1999中找到'本發(fā)明的化合物可以便利地制備或在本發(fā)明方法過程中形成，如溶劑合物(例如7K合物)。可以通過使用有機(jī)溶劑，諸如二 悉英、四氫呋喃或甲 醇從含7jC/有機(jī)溶劑混合物中重結(jié)晶便利地制備本發(fā)明化合物的水合物。對(duì)映異構(gòu)體化合物對(duì)，分離非對(duì)映體并且回收光學(xué)純的對(duì)映體將本發(fā)明的 化合物制備成其各個(gè)立體異構(gòu)體。盡管可以使用本發(fā)明化合物的共價(jià)非對(duì) 映異構(gòu)體衍生物對(duì)對(duì)映體進(jìn)行拆分，但是優(yōu)選易離解的復(fù)合物(例如結(jié)晶非對(duì)映異構(gòu)體鹽)。非對(duì)映體具有不同的物理特性(例如熔點(diǎn)、沸點(diǎn)、溶解度、 反應(yīng)性等)并且易于通過利用這些不同性分離。可以通過色譜法或優(yōu)選通過 基于溶解度差異的分離/拆分技術(shù)分離非對(duì)映體。然后通過不會(huì)產(chǎn)生外消旋 化的任何實(shí)施方式回收光學(xué)純的對(duì)映體與拆分試劑。適合于從外消旋混合物中拆分化合物的立體異構(gòu)體的技術(shù)的更詳細(xì)描述可以在Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen， "Enantiomers， Racemates and Resolutions", John Wiley和Sons, Inc., 1981中找到。 總之，可以通過一種方法制備式I的化合物，包括(a) 反應(yīng)方案I或II的方法；和(b) 任選將本發(fā)明的化合物轉(zhuǎn)化成可藥用鹽；(c) 任選將本發(fā)明的化合物的鹽形式轉(zhuǎn)化成非鹽形式；(d) 任選將本發(fā)明化合物的未氧化形式轉(zhuǎn)化成可藥用的N-氧化物；(e) 任選將本發(fā)明化合物的N-氧化物形式轉(zhuǎn)化成其未氧化形式；(f) 任選從異構(gòu)體的混合物中拆分本發(fā)明化合物的各異構(gòu)體；(g) 任選將本發(fā)明的未衍生化合物轉(zhuǎn)化成可藥用的前體藥物衍生物；和00任選將本發(fā)明化合物的前體藥物衍生物轉(zhuǎn)化成其非衍生形式。 就未特別描述原料的生產(chǎn)而言，化合物為已知的或可以按照與本領(lǐng)域公知或下文實(shí)施例中披露的方法類似的方式制備。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解上述轉(zhuǎn)化僅為制備本發(fā)明化合物方法的代表，并且可以類似地^f吏用其它眾所周知的方法。本發(fā)明進(jìn)一步以如下實(shí)施例舉例說明，這些實(shí)施例用于解釋本發(fā)明式 i化合物的制備，但不起限定作用。將(3-氯-2-氟-苯基)-肼鹽酸鹽(Apollo Scientific, Ltd., 221 mg， 1.12 mmol)和4-乙?；?苯曱酸甲酯(200 mg， 1.12 mmol)用無水ZnCl2和乙酸 (10mL)處理。將反應(yīng)加熱至105°C48小時(shí)。在冷卻至室溫后，反應(yīng)用乙酸 乙酯稀釋并用H20(5 x )、飽和NaCl水溶液依序洗滌。然后有才幾層用Na2S04 千燥并過濾。濃縮后，粗品用制備型RPLC-MS純化得到類白色固體狀的 4-(6-氯-7-氟-lH-P引味-2-基)-苯曱酸甲酯ESMS m/z 304.0 (M+H+)。步驟2和3:向從上一步得到的4-(6-氯-7-氟-lH-吲哚-2-基)-苯甲酸甲 酯(37 mg, 0.122 mmol)、 4-正-丁基苯基-硼酸(43 mg， 0.244 mmol)和碳酸銫實(shí)施例實(shí)施例14-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基I-苯甲酸步驟1: 4-(6-氯-7-氟-lH-吲味-2-基)-苯甲酸甲酉旨:(159mg， 0.487 mmol)混合物的二巧惡烷(4 mL)溶液中，加入CombiPhos國Pd6 釔催化劑(Combiphos Catalysts Inc.， 3mg)。在密封管中，混合物充N2 5分 鐘并120。C加熱7小時(shí)。冷卻至室溫后，反應(yīng)用乙酸乙酯稀釋，并連續(xù)用 1N HC1、 H20和飽和NaCl水溶液洗涂。然后有機(jī)層用Na2S04干燥、過 濾并濃縮。得到的殘留物用乙醇/1120(2 mL/1 mL)處理，再用LiOH (26 mg， 0.609 mmol)處理。該混合物在50。C加熱1小時(shí)。在冷卻至室溫后，反應(yīng)用 乙酸乙酯稀釋，并用1N鹽酸水溶液洗滌。有機(jī)層用Na2S04干燥并過濾。 濃縮后，粗品用制備型RP LC-MS純化得到白色固體狀的4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-丐l咮-2-基-苯甲酸NMR (400 MHz，丙酮-^) 811.13 (bs， 1H)， 8.10-8.05 (m， 4H)， 7.59 (d， 2H)， 7.52 (d， 1H)， 7.32 (d， 2H)， 7.18-7.12 (m, 2H)， 2.71 (t， 2H)， 1.70-1.63 (m， 2H)， 1.49-1.40 (m， 2H)， 0.98 (t, 3H); ESMS m/z 388.2 (M+H+)。二巧惡烷(16 mL)和N-甲基吡咯烷酮(8 mL)的混合物通過將其通氮?dú)饬?15分鐘除氧。3-氯-2-氟苯胺(3 g， 20,6 mmol)的樣品加至帶有能夠通過3 通玻璃活塞密封的螺旋適配器的250 mL圓底燒瓶。該苯胺然后用4-丁基 苯基硼酸(5.5 g， 30.9 mmol)、氟化銫(7.82 g， 51.5 mmol)和二(三叔丁基膦) 把(527 mg， 1.03 mmol)處理。將燒瓶抽真空，再充入氮?dú)?，并封口。該?瓶置于預(yù)熱至130。C的油浴中并攪拌4小時(shí)。冷卻后，反應(yīng)通過硅藻土墊實(shí)施例24- [6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲咮-2-基-苯甲酰胺步驟l: (4'-丁基-2-氟-聯(lián)苯-3-基)-肼鹽酸鹽過濾，其接著用EtOAc洗滌。然后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑。粗品反應(yīng)用水 稀釋，并用EtOAc萃取。相分離，并用MgS04干燥有樹目、過濾、并濃 縮。得到的油用乙醚稀釋，并用過量的4MHCl在二巧惡烷中的溶液處理。 收集得到的固體，用乙醚洗滌，并干燥得到白色固體狀的4'-丁基-2-氟-聯(lián) 苯-3-基胺鹽酸鹽LC/MS [M+H+C16H19FN理論值244.3，實(shí)測(cè)值244.2。 在0。C 4'-丁基-2-氟-聯(lián)苯-3-基胺鹽酸鹽(5.4 g， 0.019 mol)在濃HCl水溶液 (50 ml)中的混合物用在10分鐘內(nèi)滴加亞硝酸鈉(1.3 g， 0.019 mol) H20 (20 ml)溶液來處理。得到的溶液在0。C攪拌1小時(shí)，然后滴加0。C的二氯化錫 (II) (13.0 g， 0.058 mol)在濃HC1 (14 ml)水溶液中的溶液進(jìn)行處理。將該混 合物攪拌15min并過濾。分離的固體用冷飽和NaCl水溶液洗滌，然后混 懸于50。/。NaOH中。得到的漿狀物用1120稀釋，并用Et20萃取。有斜目 用MgS04干燥、過濾、并濃縮。得到的殘留物溶解于100mlEt2O中并冷 卻至0。C。 4.0MHCl的二 惡烷(15ml)溶液滴加至該溶液中，收集得到的 沉淀得到4.58 g (81%)的所需的肼鹽酸鹽。LC/MS C16H20FN2理論值 259.3，實(shí)測(cè)值259.2。步驟2:上一步的(4'-丁基-2-氟-聯(lián)苯-3-基)-肼鹽酸鹽(90 mg， 0.306 mmol)和4-乙?；?苯曱酰胺(Sigman， M. E.等人j. Am. Chem. Soc. 1988， 110， 4297.) (50 mg, 0.306 mmol)用無水ZnCl2 (418 mg， 3.06 mmol)和乙酸 (4mL)處理。將反應(yīng)加熱至105。C 48小時(shí)。冷卻至室溫后，將反應(yīng)用乙酸 乙酯稀釋并用h20 (5x)、 IN HC1水溶液和飽和NaCl水溶液依序洗滌。然 后有機(jī)層用Na2S04干燥并過濾。濃縮后，粗品用制備型RPLC-MS純化 得到褐色固體狀的4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基-苯甲酰胺 NMR (400 MHz，丙酮-^) 311.11 (bs, 1H)， 8.08-8.01 (m， 4H)， 7.59-7.43 (m, 4H)， 7.38-7.29 (m， 2H)， 7.18-7.12 (m， 2H)， 6.65 (bs， 1H)， 2.74-2.63 (m， 2H), 1.76-1.64 (m， 2H), 1.50-1.38 (m, 2H)， 1.04-0.93 (m， 3H); ESMS m/z 387.2 (M+H+)。實(shí)施例34- [7-氟-6-(4-氟-3-曱基-苯基)-lH-吲咮-2-基-苯曱酸通過重復(fù)實(shí)施例2中所述的方法，使用適當(dāng)?shù)钠鹗疾牧?，得到白色?體狀的4-[7-氟-6-(4-氟-3-甲基-苯基)-lH-P引味-2-基-苯甲酸，H NMR (400 MHz, CD3OD) S 8.09 (d， 2H)， 7.98 (d， 2H)， 7.52- 7.42 (m， 3H)， 7.18-7.05 (m， 3H)， 2.32 (s， 3H); ESMS m/z 364.1 (M+H+)。實(shí)施例44-[7-氟-6-(4-氟-3-曱基-苯基)-lH-丐l咮-2-基]-糾酰胺通過重復(fù)實(shí)施例2中所述的方法，使用適當(dāng)?shù)钠鹗疾牧?，得到褐色?體狀的4-[7-氟-6-(4-氟-3-甲基-苯基)-lH-吲咪-2-基-苯磺酰胺！H NMR (400 MHz,丙酮-A) S 11.12 (bs， 1H)， 8.18-8.13 (m， 2H)， 8.06-7.98 (m， 2H)，7.59-7.48 (m， 3H)， 7.22-7.12 (m， 3H)， 6.68 (bs， 2H)， 2.33 (s, 3H); ESMS m/z 399.1 (M+H+)。實(shí)施例54-[6-(4-丁基-苯基)-3-乙基-7-氟-lH-吲哚-2-基-2-羥基-苯甲酸步驟l: 2-羥基-4-碘-苯甲酸<formula>formula see original document page 20</formula>將4-#^-2-羥基水楊酸(10 g， 65.3 mmol)的樣品加至裝有大攪拌棒的 2升錐形瓶，在冰/水浴中冷卻，并用濃石危酸(20mL)和足量的水處理，制成 自由流動(dòng)的混懸液( 50mL)。攪拌20分鐘后，反應(yīng)用亞硝酸鈉(4.55g，66.0 mmol)水(20 mL)溶液在10min內(nèi)處理。再攪拌3分鐘后，反應(yīng)用碘化鉀 (16.9 g， 101 mmol)的水(30mL)溶液用15分鐘的時(shí)間處理。撤去冷浴，仔 細(xì)監(jiān)控反應(yīng)，并攪拌隨著產(chǎn)生的顯著量的氮?dú)狻７磻?yīng)減慢后，快速加熱至 70'C，使其冷卻至室溫并過夜。通過過濾收集得到的固體，用水洗滌并干 燥得到粗品2-羥基-4-碘-苯甲酸，無需進(jìn)一步純化用于下一步反應(yīng)ESMS m/z 265.0 (M+H+)。步驟2: 2-羥基-4-碘-苯曱酸甲酯<formula>formula see original document page 20</formula>2-羥基-4-碘-苯甲酸(4.0 g， 0.015 mol)的THF(25 ml)和MeOH (25ml)溶 液通過滴加(三甲基甲硅烷基)-重氮曱烷(2.0M在Et20中，15 ml)進(jìn)行處理， 并室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。真空除去揮發(fā)性物質(zhì)，粗品殘留物用EtOAc稀釋。 有才M目用飽和NaHC03 7jC溶液(3x)、飽和NaCl 7JC溶液(1 x )、和H20(1 x)依序洗滌。有機(jī)相用MgS04干燥、過濾、并濃縮。粗品用珪膠柱色i普 (0-80%乙酸乙酯-正己烷梯度)純化得到2-羥基-4-碘-苯甲酸甲酯ESMS m/z 279.0 (M+H+)。步驟3: 2-羥基-4-乙烯基-苯曱酸曱酯<formula>formula see original document page 20</formula>將2-羥基-4-湊苯甲酸甲酯(8.01 g， 0.0288 mol)的THF (184 ml)和 H20 (46 ml)的溶液用乙烯基-硼酸二丁基酯(9.53 ml, 0.0432 mol, 1.5 eq.)、Na2C03 (21.37 g， 0.201 mol， 7 eq.)、和二氯-二(三苯基膦)鈀(l.Ol g, 1.44 mmol， 5 mol。/o)處理。將溶液通N2 (g) 5分鐘，并加熱回流2小時(shí)。將反應(yīng) 真空濃縮，用EtOAc稀釋，并連續(xù)用H20和飽和NaCl水溶液洗滌。有機(jī) 相用MgS04干燥、過濾并濃縮。粗品用珪膠柱色鐠(5%乙酸乙酉旨-正己烷) 純化得到2-羥基-4-乙烯基-苯甲酸甲酯ESMS m/z 179.1 (M+H+)。 步驟4: 4-甲?；?2-羥基-苯甲酸曱酯穩(wěn)定的02 (g)氣流通入冷的(-78。C) 2-羥基-4-乙烯基-苯曱酸曱酯(3.28 g， 0.0184 mol)的CH2C12 (50 ml)溶液。5分鐘后，03 (g)通入溶液中直至 溶液的顏色變藍(lán)/灰。然后溶液通02 (g) 5分鐘，用DMS (4.05 ml， 0.0552 mol)處理并溫?zé)嶂潦覝剡^夜。真空除去所有揮發(fā)性物質(zhì)，粗品用珪膠柱色 鐠(0-100%乙酸乙S旨-正己烷梯度)純化得到4-甲?；?2-羥基-苯甲酸甲酯 ESMS m/z 181.0 (M+H+)。步驟5: 2-羥基-4-(l-羥基-丁基)-苯甲酸甲酯將4-甲?；?2-羥基-苯甲酸甲酯(360 mg， 2mmol)溶解于THF (無水, 10mL)中。溶液冷卻至-78'C并在氮?dú)庀聰嚢?。向該溶液中通過針管滴加氯 代正丙基鎂(2M在THF中，2 mL, 2 mmol)。反應(yīng)混合物在-78。C攪拌1 小時(shí)，然后逐漸在1小時(shí)溫?zé)嶂潦覝兀诖藭r(shí)間點(diǎn)之后加飽和氯化銨水溶 液終止反應(yīng)。得到的混合物用EtOAc (3 x 15 mL)萃取。合并的有樹目用飽 和NaCl水溶液洗滌，并用Na2S04干燥。濃縮后，粗品用硅膠閃式柱色 譜(10-20%乙酸乙酉旨-正己烷梯度)純化得到無色油狀的2-羥基-4-(l-羥基-丁 基)-苯甲酸甲基酯NMR (400 MHz， CDC13) S10.74 (s， 1H)， 7.79 (d， 1H， J= 8.4Hz)， 6.95 (d， 1H, J= 1.2 Hz)， 6.86 (dd， 1H， J= 1.6， 8 Hz)， 4.67 (t， 1H，J= 6.8 Hz)， 3.94 (s， 3H)， 1.82 (br， 1H)， 1.80-1.62 (m， 1H)， 1.46-1.28 (m， 2H) 0.93 (t， 3H， J= 7.2 Hz)。步驟6: 4-丁酰基-2-羥基-苯曱酸曱酯向2-羥基-4-(l-羥基-丁基)-苯甲酸甲酯(132 mg, 0.59 mmol)的DCM (6 mL)溶液中一次加入PDC (245 mg， 1.1 mmol)。將反應(yīng)攪拌過夜。反應(yīng) 混合物通過硅膠填料過濾，使用DCM作為洗脫劑。濃縮濾液得到白色固 體狀的4-丁?；?2-羥基-苯甲酸甲酯& NMR (400 MHz, CDC13) S10.77 (s， 1H)， 7.92 (d， 1H， J= 8.4 Hz)， 7.52 (d， 1H， J= 1.6 Hz)， 7.44 (dd, 1H， J= 1.6， 8 Hz)， 3.99 (s， 3H)， 2.93 (t， 2H， J= 7.2 Hz)， 1.76 (qt， 2H， J= 7.6 Hz)， 1.00 (t， 3H J=7.6Hz)。步驟7: 4-(6-氯-3-乙基-7-氟-lH-吲咪-2-基)-2-羥基-苯甲酸甲酯4-丁酰基-2-羥基-苯甲酸甲酯(60 mg， 0.27 mmol)、 (3-氯-2-氟-苯基)-肼(Apollo Scientific, Ltd., 54 mg， 0.27 mmol)、和氯化鋅(110 mg， 0.8 mmol) 混合物在乙酸中(2 mL)通以氮?dú)?分鐘并在密封管中于120。C加熱2小 時(shí)。將混合物冷卻至室溫并用乙酸乙酯稀釋。得到的混合物連續(xù)用飽和 Na2C03水溶液和飽和NaCl水溶液洗滌，并最終用硫酸鈉干燥。濃縮后， 粗品用硅膠閃式柱色鐠(10%乙酸乙酯-正己烷)純化得到淡黃色固體狀的 4-(6-氯曙3誦乙基-7-氟-lH-吲咮-2-基)-2-羥基畫苯甲酸甲酯ESMS m/z 348.1 (M+H+)。步驟8和9:向4-(6-氯-3-乙基-7-氟-lH-吲咪-2-基)-2-羥基-苯甲酸曱 酉旨(50 mg， 0.14 mmol)、 4-正畫丁基-苯基硼酸(50 mg， 0.28 mmol)、和氟化 銫(78 mg， 0.52 mmol)在二5悉烷(3 niL， anhydrous)的混合物中加入二(三叔丁基膦)鈀(6 mg, 10 mol%)。該混合物通以N23分鐘，然后在密封管中在 12(TC加熱4小時(shí)。將該混合物冷卻至室溫，過濾，濃縮濾液。得到的殘留 物溶于乙醇/1120 (1 mL / 0.1 mL)中并轉(zhuǎn)移至微波管。加入LiOH(12mg， 0.54 mmol)并將混合物在微波輻射下在120。C加熱6分鐘。將粗品過濾。 濾液濃縮后，粗品用制備型RP LC-MS純化得到黃色固體狀的4-[6-(4-丁 基-苯基)曙3國乙基-7-氟-lH-P引咮-2-基-2-羥基-苯甲酸& NMR (400 MHz， CD3OD) 3 7.96 (d， 1H， J= 8.8 Hz)， 7.50 (d， 2H， J= 8 Hz)， 7.42(d， 1H， J= 8.4 Hz)， 7.24 (d， 2H， J= 8 Hz)， 7,21-7.20 (m， 2H)， 7.10 (dd， 1H， J= 8， 8 Hz)， 2.95 (q， 2H， J= 7.6 Hz), 2.66 (t， 2H， J= 8 Hz)， 1.65 (m， 2H)， 1.40 (m， 2H)， 1.34 (t， 3H， J= 7.6 Hz), 0.97 (t， 3H， J= 7.6 Hz); ESMS m/z 432.2 (M+H+)。實(shí)施例64-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-3-異丙基-lH-吲哚-2-基卜2-羥基-苯甲酸<formula>formula see original document page 23</formula>通過重復(fù)實(shí)施例5中所迷的方法，使用適當(dāng)?shù)钠鹗疾牧?，得到黃色固 體狀的4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-3-異丙基-lH-吲咮-2-基-2-羥基-苯甲酸 NMR (400 MHz，丙酮-"6) S10.64 (s， 1H)， 8.01 (d， 1H， J= 8.4 Hz)， 7.68 (d， 1H， J= 8 Hz), 7.55 (d， 2H， J= 7.6 Hz), 7.31 (d， 2H， J= 8 Hz)， 7.23-7.13 (m， 3H), 3,46 (m， 1H), 2.68 (t， 2H， J= 7.6 Hz)， 1.66 (m, 2H)， 1.51 (d， 6H， J = 7.2 Hz)， 1.40 (m， 2H)， 0.96 (t， 3H， J= 7.6 Hz); ESMS m/z 446.2 (M+H+)。實(shí)施例74-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-叼l咮-2-基-2-羥基-苯甲酸通過重復(fù)實(shí)施例5中所述的方法，使用適當(dāng)?shù)钠鹗疾牧?，得到黃色固 體狀的4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基-2-羥基-苯甲酸^ NMR (400 MHz，丙酮-A) 3 11.12 (bs， 1H)， 7.99 (d， 1H)， 7.60-7.53 (m， 4H)， 7.48 (d， 1H)， 7.32 (d， 2H)， 7.18-7.10 (m， 2H)， 2.67 (t， 2H)， 1.72-1.61 (m， 2H)， 1.49-1.37 (m， 2H)， 0，98 (t， 3H); ESMS m/z 404.2 (M+H+)。實(shí)施例84-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-3-甲基-1H-吲味-2-基I-2-羥基-苯甲酸通過重復(fù)實(shí)施例5中所述的方法，使用適當(dāng)?shù)钠鹗疾牧?，得到淡黃色 固體狀的4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-3-甲基-lH-吲咮-2-基-2-羥基-苯甲酸& NMR (400 MHz，丙酮-^) S10.75 (bs， 1H)， 8.02 (d， 1H)， 7.57-7.15 (m， 8H)， 2.74-2.62 (m， 2H)， 2.58 (s， 3H)， 1.71-1.61 (m， 2H)， 1.43-1.35 (m， 2H)， 0.98 (t， 3H); ESMS m/z 418.2 (M+H+)。實(shí)施例94-[6-(4-丁基-苯基)-lH-苯并咪唑-2-基-苯甲酸-氣 /=\步驟l: 4'-丁基-3-硝基-聯(lián)苯-4-基胺加入4-溴-2-硝基苯胺(205 mg, 0.945 mmol)、 4-丁基苯基硼酸(336 mg， 1.89 mmol)、氟化銫(430 mg， 2.83 mmol)、 二(三叔丁基膦)-4巴(24.1 mg， 0.0472 mmol)、和二 悉烷(2 ml)的史密斯反應(yīng)瓶通以氬氣(g) 5分鐘，然后微^^口熱至120。C 15分鐘。粗品反應(yīng)用硅藻土過濾，使用EtOAc作為洗 脫劑。將濾液真空濃縮，粗品用珪膠閃式柱色譜純化(0-100%乙酸乙酉旨-正 己烷梯度)得到4'-丁基-3-硝基-聯(lián)苯-4-基胺ESMSm/z 271.2 (M+H+)。 步驟2: 4'-丁基-聯(lián)苯-3 ，4-二胺<formula>formula see original document page 25</formula>將4'-丁基-3-硝基-聯(lián)苯-4-基胺(117 mg， 3.70 mmol)和10% Pd/C (10 mg)在2:1 v/v MeOH / EtOAc (4 ml)中穩(wěn)定地通H2 (g)處理15分鐘。將反 應(yīng)在攪拌下保持在1 atm的H2下1小時(shí)。通過硅藻土過濾反應(yīng)，濾液真空 濃縮得到4'-丁基-聯(lián)苯-3.4-二胺ESMS m/z 241.2 (M+H+)。步驟3:4-甲?；?苯甲酸甲酯(21.0 mg， 0.129 mmol)和NaHS03 (20.1 mg, 0.193 mmol， 1.5 eq.)的在DMA (250pL)中的熱(140。C)混合物在10分 鐘的時(shí)間里滴加4'-丁基-聯(lián)苯畫3，4-二胺(31 mg， 0.129 mmol)的DMA (100nL)溶液進(jìn)行處理。得到的混合物在140。C攪拌1小時(shí)，然后用H20 (1 ml)處理并再攪拌1小時(shí)。反應(yīng)用EtOAc稀釋并相分離。有才M目用MgS04 干燥、過濾、并濃縮。粗品的苯并咪唑產(chǎn)物用95%乙醇(0.5 ml)和THF (1 ml)稀釋并轉(zhuǎn)移至包含LiOH (15.4 mg， 0.645 mmol， 5 eq.)的史密斯反應(yīng) 瓶中。反應(yīng)容器微波輻射加熱至165。C5分鐘。濃縮后，粗品用制備型RP LC-MS純化得到4-[6-(4-丁基-苯基)-lH-苯并咪唑-2-基卜苯甲酸力NMR (400 MHz, CD3OD) S9.00 (d， J= 8.2 Hz， 1H)， 8.91 (d， J= 8.1 Hz， 1H)， 8.63 (s, 1H)， 8.53 (s， 1H), 8,31 (d， J= 7.6 Hz， 2H)5， 8.23 (d， J= 8.3 Hz， 1H)， 8.02 (d， J= 7.7 Hz， 1H)， 7.94 (s， 1H), 7.84 (s， 1H)， 7.62 (d， J= 7.7 Hz， 1H)， 7.33 (d， J= 7.6 Hz, 1H)， 3.38 (dd， J= 7.8, 7.7 Hz， 1H)， 2.69 (dd, J= 7.8, 7.6 Hz， 1H)， 2.35 (m， 1H)， 2.09 (m, 1H)， 1.66 (dd， J= 7.4， 7.3 Hz， 3H)， 1.41 (m， 1H)， 0.97 (dd， J= 7.3， 6.9 Hz， 2H); ESMS m/z 371.2 (M+H"。實(shí)施例104-[6-(4-丁基-苯基)-lH-苯并咪唑-2-基-2-羥基-苯曱酸通過重復(fù)實(shí)施例5和9中所述的方法，使用適當(dāng)?shù)钠鹗疾牧?，得?4-[6-(4-丁基-苯基)-lH-苯并咪唑-2-基]-2-羥基-苯甲酸ESMS m/z 387.1 (M+H+)。實(shí)施例11N-(4-6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲味-2-基-苯基)-甲磺酰胺通過重復(fù)實(shí)施例2中描述的方法，使用適當(dāng)?shù)钠鹗疾牧?，得到褐色?體狀的N-(4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基I-苯基卜甲磺酰胺& NMR (400 MHz，丙酮-</6) 311.00 (bs, 1H)， 8.79 (s， 1H)， 7.99 (d, 2H)， 7.55 (d 2H)， 7.52-7.44 (m， 3H)， 7.32 (d， 2H)， 7.15 (dd， 1H)， 7.01 (s， 1H)， 3.09 (s， 3H), 2.72 (t， 2H)， 1.75-1.64 (m， 2H)， 1.47-1.36 (m， 2H)， 0.99 (t, 3H); ESMS m/z 437.2 (M+H+)。實(shí)施例12N-(4-6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-丐l咮-2-基-苯基)-乙酰胺通過重復(fù)實(shí)施例2中所述的方法，使用適當(dāng)?shù)钠鹗疾牧?，得到褐色?體狀的N-H-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-P引味-2-基]-苯基)-乙酰胺，H NMR (400 MHz，丙酮O 8 10.95 (bs， 1H)， 9.32 (bs， 1H)， 7.92 (d， 2H)， 7.81 (d，2H)， 7.57 (d， 2H), 7.43 (d， 1H)， 7.32 (d， 2H)， 7.16 (dd， 1H)， 6.97 (s， 1H)， 2.70 (t， 2H)， 1.69-1.62 (m， 2H)， 1.42-1.33 (m， 2H)， 0.96 (t， 3H); ESMS m/z 401.1 (M+H+)。實(shí)施例13N-(4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-丐l咮-2-基-2-氯-苯基)-乙酰胺通過重復(fù)實(shí)施例2中所述的方法，使用適當(dāng)?shù)钠鹗疾牧?，得到固體狀 的N-(4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-P引咪-2-基-2-氯-苯基)-乙酰胺NMR (400 MHz, DMSO-d6) 510.91 (s， 1H)， 8.62 (s， 1H)， 8.19 (d， J= 8.6 Hz， 1H)， 7.92 (d， J= 2.1Hz， 1H)， 7.77 (dd, J= 8.6， 2.1 Hz， 1H)， 7.42 (dd， J= 8.1， 1.6 Hz 2H)， 7.32 (d， J= 8.2 Hz， 1H)， 7.19 (d， J= 8.2 Hz， 1H)， 7.03 (dd， J= 8.1， 6.9 Hz, 1H)， 6.91 (dd， J= 3.3， 2.3 Hz， 1H)， 2.56 (t, J= 7.7 Hz， 2H)， 2.11 (s， 3H)， 1.54 (m， 2H)， 1.28 (m， 2H)， 0.83 (t， J= 7.3 Hz， 3H); ESMS m/z 435.2 (M+H+)。通過重復(fù)實(shí)施例2中所述的方法，使用適當(dāng)?shù)钠鹗疾牧?，得到固體狀 的4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲咮-2-基-2-氯-苯胺ESMS m/z 393.3 (M+H+)。實(shí)施例152-氨基-4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基-苯甲酸實(shí)施例144-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-P引咮-2-基l-2-氯-苯胺步驟1: 1-(3-硝基-4-乙烯基-苯基)-乙酮向4，-溴-3'-硝基苯乙酮(600 mg， 2.46 mmol)、乙烯基硼酸二丁基酯(680 mg， 3.69 mmol)、和碳酸鈉(1.83 g， 17.22 mmol)的THF/H20 (12 mL/4 mL) 溶液中加入二氯二(三苯基膦)鈀(II) (86 mg， 5% mmol)。將反應(yīng)管密封， 混合物通以N23分鐘，并在7(TC加熱1.5h。然后將混合物冷卻至室溫并傾 入飽和氯化銨水溶液中。混合物用乙酸乙酯(3x20 mL)萃取。合并有機(jī)萃 取物，用鹽水洗滌并濃縮。粗品用珪膠柱色譜純化(20%乙酸乙酯-正己烷) 得到黃色固體狀的l-(3-硝基-4-乙烯基-苯基)-乙酮，87%收率ESMS m/z 192.0 (M+H+)。步驟2: 4-乙?；?2-硝基-苯甲酸甲酯將上一步得到的l-(3-硝基-4-乙烯基-苯基)-乙酮(410mg， 2.14 mmol) 溶于DCM(20mL)中并冷卻至-78。C。加入NaOH (429 mg， 10.7mmol)的 MeOH (5 mL)溶液。03 (g)通入溶液直至溶液顏色變藍(lán)/灰。然后溶液通以 N2 (g)直至藍(lán)色消失。溶液溫?zé)嶂潦覝夭饪s得到無色油狀的4-乙?；?2-硝基-苯甲酸甲酯、H醒R (400 MHz， CDC13)58.41 (d， 1H， J = 1.6 Hz)， 8.19 (dd， 1H， J = 7.6， 1.6 Hz)， 7.79 (d， 1H， J = 8 Hz)， 3.91 (s, 3H)， 2.66 (s， 3H)。步驟3-5:按照實(shí)施例2中所述的方法，4-乙酰基-2-硝基-苯甲酸甲酯 (從上一步得到)的樣品和(4'-丁基-2-氟-聯(lián)苯-3-基)-肼鹽酸鹽(實(shí)施例2， 步驟l)用于形成4-〖6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基-2-硝基-苯甲酸甲酯。硝基基團(tuán)氫化為相應(yīng)的胺(1 atm H2， Pd/C)接著甲酯再用NaOH (EtOH/H20)皂化，并使用制備型RP LC-MS進(jìn)行最后的純化得到固體狀 的2-氨基-4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-叼l哚-2-基]-苯甲酸& NMR (400 MHz,丙酮O 811.07 (s， 1H)， 7.92 (d, 1H)， 7.53 (dd， 2H)， 7.45 (d, 1H)， 7.36 (d， 1H)， 7.31 (d， 2H)， 7.19-7.13 (m， 2H)， 7.02-7.00 (m, 1H)， 2.67 (t， 2H)， 1.67-1.62 (m， 2H)， 1.42- 1.37 (m， 2H)， 0.94 (t， 3H); ESMS m/z 403.1 (M+H+)。測(cè)定檢測(cè)本發(fā)明的化合物以便測(cè)定其作為TPO模擬物在體外使用人TPO 受體(TPO-R)轉(zhuǎn)染的鼠BaF3細(xì)胞系的增殖測(cè)定中的功效 螢光素酶報(bào)道分子測(cè)定洗滌Ba/F3-TpoR細(xì)胞并且重新懸浮于以8 x 104個(gè)細(xì)胞/mL補(bǔ)充了 1。/o或20。/。FBS、 MS、 HS或(人血清清蛋白+ otl酸糖蛋白)、1% Pen-Strep-Glu和1 mM或25fiM ZnS04的RPMI-1640中并且以50 mL/ 孔配入384-孔平板過夜饑餓(18-20小時(shí))。在第2天，在37。C、 5% C02 下用0.5 mL DMSO、化合物或rhTpo(30 ng/mL)將饑餓細(xì)胞處理7小時(shí)。 將在水中稀釋至60%的Perkin Elmer Britelite(25 mL)加入到各孔中并且 在幾分鐘后，在CLIPR上讀取平板以便記錄發(fā)光信號(hào)。增殖測(cè)定洗滌Ba/F3-TPO-R細(xì)胞并且重新懸浮于以8x 104個(gè)細(xì)胞/mL補(bǔ)充了 1% FBS， 1% Pen-Strep畫Glu和1 mM或25jiM ZnS04的RPMI-1640中并 且以50 mL/孔配入384-孔平板過夜饑餓(18-20小時(shí))。在第2天，在37°C， 5% C02下用0.5 mL DMSO、化合物或rhTpo(30 ng/mL)將饑餓細(xì)胞處理 48小時(shí)。將Alamar Blue試劑(在 7。/。終濃度下的3.5pL)加入到各孔中， 將平板賻育4小時(shí)并且在Analyst GT上讀取以便記錄熒光信號(hào)。CFU-Meg測(cè)定將CD34+細(xì)胞和MegaCult-C試劑盒(StemCell Technologies, Inc" Vancouver, Canada)用于本測(cè)定。將CD34+細(xì)胞以104個(gè)細(xì)胞/載玻片與 MegaCult-C膠原蛋白溶液按照制造商的方案混合。在以不同濃度添加 TPO或本發(fā)明的化合物后，將載玻片在37。C、 5。/。C02下孵育12天，固 定，染色人CFU-Meg并且使用倒置顯微鏡對(duì)集落進(jìn)行定量。游離形式或可藥用鹽形式的式I的化合物表現(xiàn)出有價(jià)值的藥理學(xué)特 性，例如本申請(qǐng)中所述的體外試驗(yàn)中所示。本發(fā)明的化合物優(yōu)選表現(xiàn)出 TPO才莫擬物活性，其中ICso在1 x l(T9 - 1 x 10-5M的范圍，優(yōu)選低于500nM， 更優(yōu)選低于250nM。式I的化合物表現(xiàn)出相對(duì)于TPO 25% - 150%范圍的 有效性。應(yīng)理解本文所述的實(shí)施例和實(shí)施方案僅用于解釋目的，并且可以提示和范圍內(nèi)以及待批權(quán)利要求范圍內(nèi)。為所有目的而將本文51述的全部公開 文獻(xiàn)、專利和專利申請(qǐng)引入本文作為參考。
權(quán)利要求
1.式I的化合物及其可藥用鹽、水合物、溶劑合物和異構(gòu)體id="icf0001" file="S2006800374588C00011.gif" wi="40" he="33" top= "53" left = "96" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>其中n選自0、1、2和3；Z選自N和CR8；其中R8選自氫、鹵素、C1-6烷基、鹵素-取代的-C1-6烷基；其中R8的任意烷基可任選地有被選自-S(O)0-2-、-C(O)-、-NR9-和-O-的原子或基團(tuán)替換的亞甲基；其中R9選自氫和C1-6烷基；R1、R2、R4和R5獨(dú)立地選自氫、鹵素、羥基、氰基、硝基、-XNR9R10-、C1-6烷基、鹵素-取代的-C1-6烷基、C1-6烷氧基和鹵素-取代的-C1-6烷氧基；其中X選自鍵和C1-6亞烷基；且R9和R10獨(dú)立地選自氫和C1-6烷基；R3選自氫、C1-6烷基、C3-8雜環(huán)烷基、C5-10雜芳基、-OS(O)2R11、-NR11S(O)2R12、-NR11C(O)R12、-NR11C(O)NR11R12、-NR11C(O)C(O)OR12、-NR11C(O)OR12、-OC(O)NR11R12、-C(O)OR11、-C(O)R13、-NR11R12、-NR11R13、-S(O)2NR11R12和-C(O)NR11R12；其中R11和R12獨(dú)立地選自氫、C1-6烷基、鹵素-取代的-C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基-C1-6烷基、羥基-C1-6烷基和被-NR9R10取代的C1-6烷基；R13是任選被1至3個(gè)C1-6烷基基團(tuán)取代的C3-8雜環(huán)烷基；其中R3的任意雜環(huán)烷基或雜芳基可任選地進(jìn)一步被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基-C1-6烷基、羥基-C1-6烷基、鹵素-取代的-C1-6烷基和鹵素-取代的-C1-6烷氧基取代；R6選自鹵素和C1-6烷基；且R7選自鹵素、氰基、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、鹵素-取代的-C1-6烷基、C6-10芳基、C5-10雜芳基、C3-8雜環(huán)烷基和C3-12環(huán)烷基；其中任意烷基、鏈烯基、炔基、芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基任選地被1至5個(gè)獨(dú)立地選自以下的基團(tuán)取代鹵素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基-C1-6烷基、羥基-C1-6烷基、鹵素-取代的-C1-6烷基、鹵素-取代的-C1-6烷氧基、-NR14R15、-XOR14、-S(O)2R14、C3-12環(huán)烷基、C3-8雜環(huán)烷基、C6-10芳基和C3-8雜芳基；其中X是鍵或C1-6亞烷基且R14和R15獨(dú)立地選自C1-6烷基、氰基-C1-6烷基、羥基-C1-6烷基、鹵素-取代的-C1-6烷基和鹵素-取代的-C1-6烷氧基；其中R7的任意芳基、雜芳基、環(huán)烷基和雜環(huán)烷基取代基可任選地進(jìn)一步被1至3個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基-C1-6烷基、羥基-C1-6烷基、鹵素-取代的-C1-6烷基和鹵素-取代的-C1-6烷氧基取代。
2.權(quán)利要求1的式Ia化合物n選自0、 1、 2和3; m選自0、 1、 2、 3、 4和5;Z選自N和CRs;其中Rs選自氫、鹵素、d-6烷基、鹵素-取代的-d-6 烷基；其中R8的任意烷基可任選地有被選自國S(0)o-2-、 -C(O)-、 ^119國和-0畫 的原子或基團(tuán)替換的亞甲基；其中R9選自氫和C!—6烷基；R，、 R2、 R4和Rs獨(dú)立地選自氫、鹵素、羥基、硝基、-XNR9R10-、 d_6 烷基、卣素-取代的-C,，6烷基；其中X選自鍵和d—6亞烷基；且R9和Rk) 獨(dú)立地選自氫和d-6烷基；R3選自-XCOOR" -XCONR9R10、 NRnS(0)2Ru 、 S(0)2R函2 、 -NR C(0)R12 、 NR C(0)NRuR12 、 NR C(0)C(0)OR12 和 -NRuC(O)ORu;其中X選自鍵和Q_6亞烷基；且R9和R10獨(dú)立地選自氫 和C,—6烷基；Re選自囟素和d,6烷基；且R加選自鹵素和Cw烷基。其中:
3. 權(quán)利要求2的化合物，其中R6為氟且R2o選自氟、曱基和丁基。
4. 權(quán)利要求3的化合物，其中R3選自羧基、^J^M、 Jl^-磺?；?、甲基-磺酰基-氨基和氨基；且R4選自氫、羥基、硝基和氨基。
5. 權(quán)利要求4的化合物，其選自4-6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲 哚-2-基-苯曱酸；4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基-苯曱酰胺；4-[7-氣_6_(4_氟_3-甲基-苯基)-lH-吲咮-2-基-苯甲酸；4-[7-氟-6-(4-氟-3-甲基-苯 基)-lH-吲哚-2-基]-苯磺酰胺；4-[6-(4-丁基-苯基)-3-乙基-7-氟-lH-吲哚-2-基-2-羥基-苯曱酸;4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-3-異丙基-lH-吲咮-2-基-2-羥基 -苯曱酸；4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基-2-羥基-苯曱酸；4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-3-甲基-lH-吲哚-2-基-2-羥基-苯甲酸；4-[6-(4-丁基-苯 基)-lH-苯并咪唑-2-基]-苯甲酸；4-[6-(4-丁基-苯基)-111-苯并咪唑-2-基-2-羥基-苯曱酸；N-H-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基苯基卜甲磺酰胺； N-(4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基]苯基卜乙酰胺；N-(4-[6-(4-丁基-苯基)-7-氟-lH-吲哚-2-基-2-氯-苯基卜乙酰胺；4-6-(4-丁基-苯基)-7-氟-111-吲咮-2-基]-2-氯-苯胺；和2-絲國4-[6畫(4-丁基畫苯基)畫7國氟-111畫吲哚畫2畫基]國苯 甲酸。
6. 藥物組合物，其包含治療有效量的權(quán)利要求1的化合物與可藥用賦 形劑。
7. 治療動(dòng)物疾病的方法，其中升高的血小板水平可以抑制或改善所述 疾病或病癥的病理學(xué)和/或癥狀學(xué)情況，該方法包含對(duì)所述的動(dòng)物施用治療 有效量的權(quán)利要求1的化合物。
8. 權(quán)利要求1的化合物在制備用于治療動(dòng)物疾病的藥物中的用途，其 中降低的血小板水平對(duì)所述疾病或病癥的病理學(xué)和/或癥狀學(xué)起作用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一類新的化合物、包含這類化合物的藥物組合物和使用這類化合物治療或預(yù)防與異?；蚴д{(diào)的TPO活性相關(guān)的疾病或障礙特別是涉及血小板減少的疾病或障礙的方法。
文檔編號(hào)C07D209/14GK101282929SQ200680037458
公開日2008年10月8日 申請(qǐng)日期2006年8月15日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月15日
發(fā)明者D·穆特尼克, P·阿爾佩爾, T·馬爾希杰, 耘 賀, 陸文碩 申請(qǐng)人:Irm責(zé)任有限公司