專(zhuān)利名稱(chēng)：一種黑木耳多糖的酶法提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種酶法制備黑木耳多糖的方法。 背景技術(shù)：
HH Auri CU Iari ει auricula (L. exHook.) Underwood,S 耳，是一種大型真菌，屬于擔(dān)子菌綱，木耳目、木耳科、木耳屬。大量的醫(yī)學(xué)和藥理學(xué)研究表 明，黑木耳多糖具有抗血小板聚集、抗腫瘤、抗衰老、抑菌、降血糖、調(diào)節(jié)免疫功能、抗?jié)儭?抗肝炎和抗突變、降血脂和促進(jìn)血清蛋白生物合成等功效，并提出黑木耳具有潤(rùn)肺、清滌 胃腸、減肥、利于體內(nèi)有毒物質(zhì)的及時(shí)清除和排出等功能均與其含有的豐富的非淀粉多糖 有關(guān)。如李文寧在專(zhuān)利“黑木耳多糖保健品的制備方法”中，提出一種快速的黑木 耳多糖保健品的制備方法，將黑木耳放入3-10%的草酸或3-10%的氫氧化鈉溶液中浸泡 后，在70°C下干燥10-30分鐘，利用粉碎設(shè)備將干燥后的黑木耳粉碎制成口服劑；Muraki Shigeru等(1988)在日本專(zhuān)利“黑木耳多糖的制備”中，采用熱水抽提、超濾膜過(guò)濾、酒精 沉淀等方法制備的分子量在10萬(wàn) 20萬(wàn)之間的黑木耳多糖，對(duì)機(jī)體免疫有調(diào)節(jié)作用；Chan 等000 在美國(guó)專(zhuān)利“黑木耳多糖的制備及其在動(dòng)物中應(yīng)用”中，提出黑木耳多糖有降動(dòng) 物血清總膽固醇的作用；Byim Yu Ryang等Q004)在歐洲專(zhuān)利“黑木耳多糖提取物對(duì)作用 于胃壁細(xì)胞的heliccAacter pylori有抑制作用，可作為功能性添加劑”，提出了黑木耳多 糖的制備方法，并提出黑木耳多糖對(duì)由helicobacter pylori引起的胃病有良好的治療效 果，且沒(méi)有任何毒副作用。因此，黑木耳多糖制成的藥品和保健品深受人們喜愛(ài)，開(kāi)發(fā)前景 廣闊。盡管黑木耳多糖的多種生物活性已被證實(shí)，但至今還沒(méi)有開(kāi)發(fā)出象香菇多糖、靈 芝多糖等能夠應(yīng)用的產(chǎn)品。因此，在黑木耳多糖提取與應(yīng)用過(guò)程中如何確保其活性最大程 度的保留已是當(dāng)務(wù)之急。由于黑木耳細(xì)胞壁的關(guān)鍵組分幾丁質(zhì)和β-葡聚糖，質(zhì)地異常堅(jiān)韌，故破壁處理 是提取多糖首要考慮的問(wèn)題。破壁方法中酶法操作是重要手段之一。選用適當(dāng)?shù)拿?系)， 可以使細(xì)胞壁與間質(zhì)中的關(guān)鍵組分降解，減小傳質(zhì)屏障對(duì)多糖擴(kuò)散的傳質(zhì)阻力，有效地使 目標(biāo)物溶出，并控制非目標(biāo)物的溶出，為后續(xù)精制創(chuàng)造有利條件。細(xì)胞壁溶解酶是幾種酶的復(fù)合物，同其他酶一樣具有高度專(zhuān)一性，蛋白酶只能水 解蛋白質(zhì)，葡聚糖酶只對(duì)葡聚糖起作用，因此利用溶酶系統(tǒng)處理細(xì)胞必須根據(jù)細(xì)胞的結(jié)構(gòu) 和化學(xué)組成選擇適當(dāng)?shù)拿?，并確定相應(yīng)的使用次序。Asenjo等人對(duì)酵母細(xì)胞的酶溶進(jìn)行 了研究，分析了溶解機(jī)理，建立了數(shù)學(xué)模型，設(shè)計(jì)了反應(yīng)器。Asenjo提出了酵母細(xì)胞結(jié)構(gòu) 模式，細(xì)胞壁由甘露糖-蛋白質(zhì)層和葡聚糖層組成，加入溶酶后，蛋白酶打開(kāi)了外層上的蛋 白質(zhì)-甘露糖結(jié)構(gòu)，使二者溶解，裸露出的內(nèi)層受到葡聚糖酶攻擊，最后只剩下原生質(zhì)體， 這時(shí)若緩沖液的滲透壓變化，則細(xì)胞膜破裂，釋放出胞內(nèi)質(zhì)。國(guó)內(nèi)在酶法破碎真菌細(xì)胞壁 方面，蹇華麗000 以環(huán)狀芽飽桿菌Al. 383為出發(fā)菌株，對(duì)其進(jìn)行誘變后，獲得了一株穩(wěn) 定高產(chǎn)胞壁溶解酶的突變株Al. 383-2，其胞壁溶解酶產(chǎn)量比親株提高了 116.9%。通過(guò)對(duì)
3B. circulars Al. 383-2發(fā)酵產(chǎn)酶條件的優(yōu)化，得出其高產(chǎn)胞壁溶解酶的適宜條件為碳源 采用10g/L的酵母葡聚糖、氮源采用總濃度為4g/L的蛋白胨與(NH4)2SO4混合液、接種量 6% 10% (ν/ν)、搖瓶裝液量250mL、三角瓶裝液40mL、發(fā)酵溫度30°C 35°C，培養(yǎng)基初始 PH 6. 5 7.0。并通過(guò)單因素及均勻?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)，確定了將B. circulars Al. 383-2胞壁溶解 酶用于紅法夫酵母破壁提取蝦青素的最佳酶作用條件。國(guó)內(nèi)外酶解破壁的專(zhuān)利檢索情況如下，國(guó)內(nèi)相關(guān)專(zhuān)利如盧挺O002)在專(zhuān)利“油菜 蜂花粉生物破壁技術(shù)”中，將曲酶屬、酵母屬和丹麥強(qiáng)力復(fù)合酶Vi scozymeL加入花粉溶液酶 解破壁0. 5 72小時(shí)，酶解破壁溫度為25V 60°C ；林陸山000 在專(zhuān)利“一種動(dòng)植物 和微生物細(xì)胞壁溶解酶反應(yīng)液及其應(yīng)用”中描述了一種酶解技術(shù)，采用細(xì)胞壁溶解酶(以枯 草桿菌 Bacillus SubtilisK-77 或枯草桿菌 Bacillus Subtilis YT-25，賭狀芽孢桿菌 BM CirlulansAL. 1為菌種制備的溶解酶)進(jìn)行破壁處理，提取細(xì)胞內(nèi)的小分子蛋白、游離氨基 酸、亞麻酸和多肽等生物活性物質(zhì)；齊崴等O006)在專(zhuān)利“復(fù)合酶水解丹參強(qiáng)化提取丹參 多酚酸的方法”中，將纖維素酶、半纖維素酶、木聚糖酶、果膠酶、淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶中 的兩種或多種復(fù)合酶配制成復(fù)合酶系進(jìn)行有效破壁，制得具有多種縮酚酸類(lèi)功效物質(zhì)的丹 參水溶性提取物干粉；李森柱等O006)在專(zhuān)利“全靈芝孢子油的制備方法”中，利用菌絲生 長(zhǎng)過(guò)程中不斷分泌的纖維素酶、蛋白酶、果膠酶等多種復(fù)合酶來(lái)酶解孢子壁制備三萜類(lèi)化 合物。國(guó)外關(guān)于酶法破壁方面的專(zhuān)利，Schroder Glad等^00 在美國(guó)專(zhuān)利“不同的細(xì)胞 壁溶解酶”中，對(duì)來(lái)源不同的細(xì)胞壁溶解酶的分子結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)進(jìn)行了描述。酶法破壁由于作用條件溫和，無(wú)殘留，是一種非常有前景的細(xì)胞破壁技術(shù)。傳統(tǒng) 的黑木耳多糖提取采用水提醇沉，多糖難以從胞內(nèi)擴(kuò)散出來(lái)；而酸、堿法容易破壞多糖的結(jié) 構(gòu)，降低其生物利用率。為黑木耳保健食品的開(kāi)發(fā)提取一條新的工藝路線(xiàn)和方法，這對(duì)于黑 木耳的綜合開(kāi)發(fā)及提高其經(jīng)濟(jì)價(jià)值具有實(shí)際意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種以黑木耳為原料，利用特定酶結(jié)合熱水浸 提工藝，并結(jié)合超濾膜處理，進(jìn)一步提純多糖的方法。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案一種黑木耳多糖的酶法提取方法，包括如下步驟取干燥黑木耳機(jī)械粗粉碎，過(guò) 40 100目篩，然后按照1 50 200的料水比混合，在幾丁質(zhì)酶作用下于35 50°C、pH 5. 0 9. 0及幾丁質(zhì)酶添加量為100 600U/g的條件下提取60 180min ；再將提取溫度 提高到80 95°C提取60 180min，所得提取液離心后得到上清液與沉淀物；取上清液加 入乙醇沉淀多糖，離心分離得到沉淀物，沉淀物用水溶解，濃縮除去殘留的乙醇，然后在濃 縮液中加入硅藻土與活性炭的混合物，所述混合物加入的量為濃縮液質(zhì)量的2 8wt%，所 述混合物中硅藻土與活性炭的質(zhì)量比為1 1 4，混合充分?jǐn)嚢韬?，過(guò)濾，取濾液用30 IOOkD的聚砜膜進(jìn)行膜過(guò)濾，收集未濾過(guò)膜的大分子濃縮液，將大分子濃縮液進(jìn)行干燥得到 黑木耳多糖。進(jìn)一步，本發(fā)明優(yōu)選料水比為1 98。進(jìn)一步，本發(fā)明在幾丁質(zhì)酶作用下于42°C的條件下提取，提取時(shí)間優(yōu)選為99min。進(jìn)一步，在上述技術(shù)方案中，優(yōu)選將提取溫度提高到85°C，提取120min。
進(jìn)一步，本發(fā)明優(yōu)選幾丁質(zhì)酶添加量為200 400U/g。本發(fā)明優(yōu)選所述的黑木耳多糖的酶法提取方法為取干燥黑木耳機(jī)械粗粉碎，過(guò) 60目篩，然后按照1 98的料水比混合，在幾丁質(zhì)酶作用下于溫度42°C、pH為8.0及幾丁 質(zhì)酶添加量為400U/g的條件下提取99min，再將提取溫度提高到85°C，提取120min，提取液 離心后得到上清液與沉淀物，取上清液加入乙醇沉淀多糖，離心分離得到沉淀物，沉淀物用 水溶解，濃縮除去殘留的乙醇，然后在濃縮液中加入硅藻土與活性炭按質(zhì)量比1 3混合的 混合物，所述混合物加入的量為濃縮液的2 Swt %，充分?jǐn)嚢韬?，過(guò)濾，取濾液用50kD的聚 砜膜進(jìn)行膜過(guò)濾，收集未濾過(guò)膜的大分子濃縮液，將大分子濃縮液進(jìn)行干燥得到黑木耳多 糖。進(jìn)一步，優(yōu)選所述硅藻土與活性炭按質(zhì)量比1 3混合的混合物的加入量為所述 濃縮液的5wt%。進(jìn)一步，所述過(guò)濾優(yōu)選使用板框過(guò)濾機(jī)，用6 8層濾布?jí)簽V。進(jìn)一步，本發(fā)明所述的大分子濃縮液干燥優(yōu)選微波真空干燥，所述微波頻率 M50MHz，微波功率lkW，真空度為35-45mmHg，干燥5 30分鐘。進(jìn)一步，本發(fā)明所述的用50kD的聚砜膜進(jìn)行膜過(guò)濾，優(yōu)選采用切向流過(guò)濾技術(shù)， 即液體流動(dòng)方向與過(guò)濾方向呈垂直方向的過(guò)濾形式，相對(duì)于常規(guī)的垂直流過(guò)濾有著能保持 穩(wěn)定的過(guò)濾速度、能連續(xù)循環(huán)進(jìn)行過(guò)濾和在膜表面不形成凝膠層的特點(diǎn)。本發(fā)明所述的幾丁質(zhì)酶是從浙江省食用菌生產(chǎn)基地的土壤中分離得到的地衣芽 孢桿菌產(chǎn)生的。本發(fā)明以黑木耳為原料，采用特異性的幾丁質(zhì)酶作用于黑木耳子實(shí)體，提高了多 糖的得率，并結(jié)合超濾膜處理，進(jìn)一步提純多糖。發(fā)明的技術(shù)要點(diǎn)在于特定酶水解破壁并結(jié) 合熱水浸提，充分促使多糖有效溶出，并結(jié)合超濾膜處理，得到的多糖純度高、活性破壞小。本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在1.所制得產(chǎn)品純度高，其中多糖含量可高達(dá)40%以上，生物活性高。2.針對(duì)黑木耳細(xì)胞壁質(zhì)地堅(jiān)韌，細(xì)胞壁內(nèi)所含有的多糖類(lèi)物質(zhì)很難透過(guò)細(xì)胞壁， 篩選特異性的作用于黑木耳細(xì)胞壁的幾丁質(zhì)酶，可有效破壁，黑木耳粗多糖的得率可達(dá) 12. 36%,比傳統(tǒng)的直接采用熱水浸提得到的粗多糖提高了 3. 17倍，比采用商品化的果膠 酶、蛋白酶得到的粗多糖分別提高了 2. 19倍、2. 08倍。該工藝條件溫和，不易損壞多糖結(jié) 構(gòu)，綠色環(huán)保，符合保健食品的生產(chǎn)要求。3.采用聚砜膜，將切向流過(guò)濾技術(shù)應(yīng)用到黑木耳多糖的制備中，在過(guò)濾的同時(shí)也 對(duì)聚砜膜表面沖刷，使膜表面不會(huì)形成雜質(zhì)，確保穩(wěn)定快速的超濾速度，大大縮短工藝時(shí) 間，提純過(guò)程中的同時(shí)亦對(duì)樣液進(jìn)行濃縮，便于工業(yè)化生產(chǎn)。


圖1為料液比與提取時(shí)間對(duì)多糖得率影響的響應(yīng)面圖；圖2為料液比與提取溫度對(duì)多糖得率影響的響應(yīng)面圖；圖3為提取時(shí)間與提取溫度對(duì)多糖得率影響的響應(yīng)面圖。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于 此實(shí)施例11材料與試劑黑木耳(由浙江省富來(lái)森綠色產(chǎn)業(yè)集團(tuán)公司提供)；中性蛋白酶，果膠酶，幾丁質(zhì) 酶，3，5- 二硝基水楊酸(DNS)，無(wú)水乙醇、濃硫酸、葡萄糖、苯酚，均為分析純。2實(shí)驗(yàn)儀器UV-2100 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，Mettler Tolefo 320-S pH 計(jì)，TOMY ES-315 高壓 滅菌鍋，ZHWY-2102C恒溫?fù)u床培養(yǎng)箱，精密增力電動(dòng)攪拌器JJ-1，HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋， DL-5M臺(tái)式高速離心機(jī)，DHG-9240A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，EL204電子天平。3實(shí)驗(yàn)方法3. 1多糖提取技術(shù)路線(xiàn)黑木耳粉碎，過(guò)60目篩一以1 100的料水比，在pH值8.0下，400U/g的酶添加 量，在45°C下提取1. 65h —提高溫度到85°C提取1. 5h —過(guò)濾，收集濾液一加3倍體積95% 的乙醇、混勻一置4°C冰箱沉淀過(guò)夜一3000r/min離心lOmin—沉淀水溶并稀釋定容一多糖
含量測(cè)定。3. 2多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制作0. lmg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液葡萄糖干燥恒重后準(zhǔn)確稱(chēng)取1. OOOg，用去離子水溶解 并定容至 1L,然后梯度稀釋到 0. lmg/mL。分別取 0，0. 2，0. 4，0. 6，0. 8，1. 0，1. 2，1. 4，1. 6mL 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液于試管中，補(bǔ)蒸餾水到2mL ；混合均勻后分別加入5%苯酚lmL，濃硫酸 5mL，搖勻；靜置IOmin再放入30°C水浴鍋15min ；按后在分光光度計(jì)485nm下測(cè)吸光度值。3. 3多糖溶出量計(jì)算多糖采用改良的苯酚-硫酸法對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定，然后按下式計(jì)算多糖含量。計(jì)算公式
多糖得率= exFxArxlQ—3XlOO vxMC——經(jīng)過(guò)稀釋后，測(cè)定的多糖含量(μ g)V——提取后得到的上清體積(mL)N——稀釋倍數(shù)ν——用于測(cè)定的上清體積(mL)M——用于提取的黑木耳質(zhì)量(mg)3. 4試驗(yàn)方法先設(shè)置5因素多水平做單因素試驗(yàn)，后根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果做中心組合設(shè)計(jì)。5個(gè)因素分 別為料水比、提取時(shí)間、提取溫度、提取pH、酶的添加量。經(jīng)各單因素提取條件實(shí)驗(yàn)后，設(shè)定pH和酶的添加量為固定因素，選擇液料比、提 取溫度、提取時(shí)間為自變量，根據(jù)Box-Benhnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，采用三因素三水平的響應(yīng) 面分析法，研究了各個(gè)因素及其交互作用后對(duì)黑木耳多糖提取率的影響。
3. 5統(tǒng)計(jì)及分析方法統(tǒng)計(jì)方法三因素5水平中心組合設(shè)計(jì)；分析方法=Hiinitab中響應(yīng)面分析程序。3. 6其他提取方法在同等條件下比較熱水浸提法、蛋白酶提取、果膠酶提取是在相同的酶添加量，料 水比條件下，按各自最適合PH及溫度提取，提取相同的時(shí)間。3. 7黑木耳多糖(APS)的進(jìn)一步精制按3. 4方法優(yōu)取出的最佳工藝，取提取的上清液，加入上清液質(zhì)量5%的硅藻土活 性炭的混合物(硅藻土與活性炭按質(zhì)量比1 3混合)，充分?jǐn)嚢韬?，以板框過(guò)濾機(jī)用6層 濾布?jí)簽V，取濾液用聚砜膜材料進(jìn)行膜過(guò)濾，采用切向流超濾技術(shù)，使用50kD聚砜膜材料 (北京特里高膜技術(shù)有限公司)，壓力不超過(guò)0. 4MPa,收集未濾過(guò)膜的大分子濃縮溶液，大 分子濃縮溶液微波真空干燥，微波頻率M50MHz，微波功率lkW，真空度為35mmHg，干燥得到 黑木耳多糖。4實(shí)驗(yàn)結(jié)果4. 1多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得到計(jì)算公式多糖含量(μ g/mL) = (0D485+0. 018)/0. 0095，R2 = 0.9975。4. 2響應(yīng)面優(yōu)化胞壁溶解酶作用條件4. 2. 1部分因素設(shè)計(jì)及結(jié)果按單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，分別用xl、x2、x3、x4、x5來(lái)表示料水比、酶的添加量、pH、提取 時(shí)間及提取溫度，按方程Xi = 0 -χ0)/Δχ對(duì)自變量進(jìn)行編碼，其中，Xi為變量的編碼值， Xi為變量的真實(shí)值，XO為實(shí)驗(yàn)中心點(diǎn)變量的真實(shí)值，Δ X為步長(zhǎng)。以3次實(shí)驗(yàn)所得多糖提 取率的平均值為響應(yīng)值(Y)。實(shí)驗(yàn)中所設(shè)計(jì)的變量及水平見(jiàn)表1。表1部分因素設(shè)計(jì)水平及取值表
權(quán)利要求
1.一種黑木耳多糖的酶法提取方法，包括如下步驟取干燥黑木耳機(jī)械粗粉碎，過(guò) 40 100目篩，然后按照1 50 200的料水比混合，在幾丁質(zhì)酶作用下于35 50°C、pH 5. 0 9. 0及幾丁質(zhì)酶添加量為100 600U/g的條件下提取60 180min ；再將提取溫度 提高到80 95°C提取60 180min，所得提取液離心后得到上清液與沉淀物；取上清液加 入乙醇沉淀多糖，離心分離得到沉淀物，沉淀物用水溶解，濃縮除去殘留的乙醇，然后在濃 縮液中加入硅藻土與活性炭的混合物，所述混合物加入的量為濃縮液質(zhì)量的2 8wt%，所 述混合物中硅藻土與活性炭的質(zhì)量比為1 1 4，混合充分?jǐn)嚢韬螅^(guò)濾，取濾液用30 IOOkD的聚砜膜進(jìn)行膜過(guò)濾，收集未濾過(guò)膜的大分子濃縮液，將大分子濃縮液進(jìn)行干燥得到 黑木耳多糖。
2.如權(quán)利要求1所述的黑木耳多糖的酶法提取方法，其特征在于所述的料水比為 1 98。
3.如權(quán)利要求1所述的黑木耳多糖的酶法提取方法，其特征在于在幾丁質(zhì)酶作用下 于42 °C進(jìn)行提取。
4.如權(quán)利要求3所述的黑木耳多糖的酶法提取方法，其特征在于在幾丁質(zhì)酶作用下 于42 °C進(jìn)行提取99min。
5.如權(quán)利要求1所述的黑木耳多糖的酶法提取方法，其特征在于將提取溫度提高到 85°C 提取 120min。
6.如權(quán)利要求1所述的黑木耳多糖的酶法提取方法，其特征在于所述的方法為取干 燥黑木耳機(jī)械粗粉碎，過(guò)60目篩，然后按照1 98的料水比混合，在幾丁質(zhì)酶作用下于溫 度42°C、pH為8. 0及幾丁質(zhì)酶添加量為400U/g的條件下提取99min，再將提取溫度提高到 850C，提取120min，提取液離心后得到上清液與沉淀物，取上清液加入乙醇沉淀多糖，離心 分離得到沉淀物，沉淀物用水溶解，濃縮除去殘留的乙醇，然后在濃縮液中加入硅藻土與活 性炭按質(zhì)量比1 3混合的混合物，所述混合物加入的量為濃縮液的2 8wt%，充分?jǐn)嚢?后，過(guò)濾，]取濾液用50kD的聚砜膜進(jìn)行膜過(guò)濾，收集未濾過(guò)膜的大分子濃縮液，將大分子 濃縮液進(jìn)行干燥得到黑木耳多糖。
7.如權(quán)利要求1 6之一所述的黑木耳多糖的酶法提取方法，其特征在于所述硅藻土 與活性炭的混合物的加入量為所述濃縮液的5wt%。
8.如權(quán)利要求1 6之一所述的黑木耳多糖的酶法提取方法，其特征在于所述過(guò)濾為 使用板框過(guò)濾機(jī)，用6 8層濾布?jí)簽V。
9.如權(quán)利要求1 6之一所述的黑木耳多糖的酶法提取方法，其特征在于所述的大分 子濃縮液采用微波真空干燥，所述微波頻率M50MHz，微波功率lkW，真空度為35-45mmHg， 干燥5 30分鐘。
10.如權(quán)利要求1 6之一所述的黑木耳多糖的酶法提取方法，其特征在于所述的用聚 砜膜進(jìn)行膜過(guò)濾采用切向流過(guò)濾技術(shù)。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種黑木耳多糖的酶法提取方法，包括如下步驟取干燥黑木耳機(jī)械粗粉碎，過(guò)篩，然后按照1∶50～200的料水比混合，在幾丁質(zhì)酶作用下于35～50℃、pH 5.0～9.0及幾丁質(zhì)酶添加量為100～600U/g的條件下提取60～180min；再將提取溫度提高到80～95℃提取60～180min，所得提取液離心后得到上清液與沉淀物；取上清液加入乙醇沉淀多糖，離心分離得到沉淀物，沉淀物用水溶解，濃縮除去殘留的乙醇，然后在濃縮液中加入硅藻土與活性炭的混合物，混合充分?jǐn)嚢韬螅^(guò)濾，取濾液用30～100kD的聚砜膜進(jìn)行膜過(guò)濾，收集未濾過(guò)膜的大分子濃縮液，將大分子濃縮液進(jìn)行干燥得到黑木耳多糖。本發(fā)明制得產(chǎn)品純度高，其中多糖含量可高達(dá)40％以上，生物活性高。
文檔編號(hào)A61P31/04GK102060934SQ20101058343
公開(kāi)日2011年5月18日 申請(qǐng)日期2010年12月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月11日
發(fā)明者何杰民, 張擁軍, 朱麗云, 李佳, 鮮喬 申請(qǐng)人:中國(guó)計(jì)量學(xué)院