專(zhuān)利名稱(chēng)：腫瘤治療的化合物和組合藥物的配方的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的腫瘤和化學(xué)治療等領(lǐng)域。具體來(lái)說(shuō)，本發(fā)明提供了新的藥物成分，藥物研發(fā)的靶目標(biāo)，和醫(yī)學(xué)應(yīng)用，以達(dá)到更有效，無(wú)毒的癌癥治療。
背景技術(shù)：
癌癥是一種致命性的疾病，并是全球主要致死原因之一。2004年全球有7. 4億人死于癌癥(約占總死亡人數(shù)的13% )。這個(gè)數(shù)字已經(jīng)預(yù)計(jì)將持續(xù)增加，預(yù)計(jì)2030年全球?qū)⒂?，200萬(wàn)人死于癌癥。即使美國(guó)過(guò)去十年的癌癥死亡率一直保持穩(wěn)定，癌癥的發(fā)病率，患病率和死亡率在發(fā)展中國(guó)家仍處于上升階段。急需有效和安全的癌癥的治療方法。迄今為止，化療和放射治療仍是癌癥的主要治療方法。這些治療方法針對(duì)的是快速增生的細(xì)胞，而不是特異針對(duì)癌細(xì)胞。這也是其致命的副作用的內(nèi)在原因，并也由此限制了的治療藥物的劑量。這又使療效受到限制。新一代的腫瘤靶向治療是旨在抑制腫瘤中特異的分子和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，誘導(dǎo)癌細(xì)胞死亡，從而增加藥物作用的特異性，降低藥物的副作用。全世界已經(jīng)和正在為此付出巨大的投入和努力用于尋找靶目標(biāo)和相應(yīng)的治療藥物與方法。然而，由于生物系統(tǒng)的復(fù)雜性和重疊的調(diào)控機(jī)制，到目前為止，這種新一代的癌癥治療的成功率是有限的。大部分靶向治療藥物只用作常規(guī)化療的輔助治療。正常細(xì)胞在線(xiàn)粒體中氧化丙酮酸和合成ATP。而腫瘤細(xì)胞與之不同，主要是在細(xì)胞質(zhì)中通過(guò)糖酵解代謝葡萄糖產(chǎn)生能量。諾貝爾生理學(xué)獎(jiǎng)獲得者Otto Heinrich Warburg在半世紀(jì)前指出，是這種有氧酵解導(dǎo)致癌細(xì)胞的形成。(澳華科學(xué)123:309，1956)。這種有氧糖酵解是腫瘤細(xì)胞能量代謝的獨(dú)特功能。最近，PKM2的表達(dá)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞此能量代謝的改變。但是，使用PKM2抑制劑抑制糖酵解作為抗癌治療，造成難以承受的神經(jīng)毒性。與有氧酵解相關(guān)聯(lián)，這些癌細(xì)胞通過(guò)跨質(zhì)膜運(yùn)輸電子(tPMET，Heart，PM，Curr Mol Med, 2006,6 :895)進(jìn)行呼吸。tPMET是位于細(xì)胞質(zhì)膜通過(guò)NADH氧化酶(NOx)介導(dǎo)的。這個(gè)過(guò)程，氧化細(xì)胞內(nèi) NADH，形成NAD+，從而回收NAD。用于保持NADH/NAD+的比例，使糖酵解得以持續(xù)。在細(xì)胞質(zhì)膜已經(jīng)確定多個(gè)不同的電子傳輸系統(tǒng)。這些tPMET系統(tǒng)包括=NADHferricyanide Oxidoreductase PMET 系統(tǒng)，NADH =Ubiquinone =WST-I Reductase 系統(tǒng)，和細(xì)胞表面的 NADH-Oxidase 的活性。由于正常細(xì)胞在線(xiàn)粒體進(jìn)行呼吸，tPMET是癌細(xì)胞獨(dú)特呼吸部位。一般而言，惡性度高的腫瘤與增加的糖酵解率和tPMET活動(dòng)相關(guān)。影響tPMET的化合物，也會(huì)影響腫瘤細(xì)胞的存活。由于ATP的產(chǎn)生是快速分裂的細(xì)胞所必需的，如癌細(xì)胞對(duì)能源的需求，加之tPMET 是癌細(xì)胞能源生產(chǎn)的主要來(lái)源，針對(duì)tPMET可能是一個(gè)可特異作用于癌細(xì)胞的治療癌癥的策略。
這一概念首先由Herst PM JPBerridge MV基于影響tPMET導(dǎo)致癌細(xì)胞死亡，質(zhì)膜氧化還原機(jī)制與和酸性鞘磷脂酶的激活之間的聯(lián)系，和質(zhì)膜富神經(jīng)酰胺島之形成與由此導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡間的聯(lián)系的現(xiàn)有的數(shù)據(jù)提出的。(Herst PM, Berridge MV，Curr Mol Med 6 895，2006)?；谶@一假說(shuō)，Herst PMjPBerridge MV提出把tPMET作為目標(biāo)所需的化合物只需作用于細(xì)胞膜，不必進(jìn)入細(xì)胞(Herst PM, Berridge MV, Curr Mol Med 6 :895,2006).。 然而，尚未有進(jìn)一步的報(bào)告。另一方面，一個(gè)新的腫瘤特異性NADH的氧化酶(tNOX)，ECT0-N0X，已被確證，并已作為抗癌藥物的作用目標(biāo)(Davies SL, Bozzo J, Drug News Perspect 2006 19:223)。目前正在使用的一些藥物，如非甾體類(lèi)消炎藥，(-)-epigallocatecin gallate，和doxorubic injhydrdrochloride (Adria-Mycin)，或正在研發(fā)的 phenoxodiol，均顯示出其抑制 tNOX 的能力，并以此作為其作用機(jī)理之一。然而，這些藥物的作用旨在抑制NOX的酶活性，但不是直接作用于tPMET。Phenoxoldiol是經(jīng)修飾的isoflevene，可作用于細(xì)胞膜上的tNOX，并抑制多種細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)過(guò)程。已經(jīng)證明Phenoxodiol可提高癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。目前 Phenoxodiol作為化療輔助藥物，正在臨床試驗(yàn)過(guò)程中。Phenoxodiol也被用來(lái)作為單一的腫瘤治療藥物研發(fā)。此外，癌細(xì)胞也表現(xiàn)出增加的缺氧反應(yīng)，包括缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)表達(dá)水平和活性的增加。缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)表達(dá)水平和活性的增加有進(jìn)一步有助于有氧糖酵解活動(dòng)。 抑制HIF已顯示出可喜的療效。芹菜素是自然存在的黃酮類(lèi)化合物，廣泛存在于水果和蔬菜，如蘋(píng)果和芹菜，之中。芹菜素已被證實(shí)是多功能抑制劑，可誘導(dǎo)激活P53，暫停細(xì)胞周期進(jìn)程，維護(hù)基因組的穩(wěn)定性，并抑制CK，NF-kappaB, HIF, HER2等功能分子的活性，和它們的信息傳導(dǎo)途徑。芹菜還可誘導(dǎo)活性氧的產(chǎn)生。已經(jīng)提交的有關(guān)芹菜素的專(zhuān)利申請(qǐng)超過(guò)100個(gè)。其中，有幾個(gè)專(zhuān)利聲稱(chēng)芹菜素作為藥物用于治療炎癥性疾病和自身免疫性疾病。芹菜素也已聲稱(chēng)可作為癌癥預(yù)防藥物，和與化療藥物結(jié)合用于癌癥的治療。芹菜素的其他異構(gòu)體，其他自然存在的和人工合成或經(jīng)過(guò)修飾的黃酮類(lèi)等化合物，包括合成的異黃酮，phenoxodiol，也被發(fā)現(xiàn)與芹菜素有類(lèi)似的功能。所有這些都需要與化療藥物相結(jié)合才能用于癌癥治療。此專(zhuān)利發(fā)明人此前提出了組合藥物配方用于治療抗癌。這一組合藥物包括由一種水溶性四唑鹽WST-I和一個(gè)中間的電子受體MPMS組成的WST-I試劑，合類(lèi)黃酮芹菜素，組成。根據(jù)這一描述，WST-I試劑能夠干擾tPMET。這一作用可以由其他四唑鹽和中間的電子受體組成的混合物，或單一的四唑鹽，如WST-3，或WST-3加mPMS，或中間的電子受體取代。 此外，同樣根據(jù)這一描述，芹菜素可以由IKK的抑制劑，CK2的抑制劑，NF-kappaB抑制劑，其他黃酮類(lèi)等，以及PUC19 DNA質(zhì)粒和相應(yīng)的針對(duì)所列出的靶基因的siRNA序列或其他各種可抑制這些靶基因的方法所取代。擬議的機(jī)制包括抑制NF-kappaB活性，誘導(dǎo)活性氧，長(zhǎng)期激活JNK和抑制HIF。但是，它并沒(méi)有提及阻斷ATP的合成和抑制細(xì)胞表面的呼吸和能量的產(chǎn)生，并與抑制缺氧誘導(dǎo)因子或細(xì)胞缺氧反應(yīng)相組合。因此，此發(fā)明與之不同，不是前述發(fā)明的替代品。由于癌細(xì)胞依賴(lài)于有氧糖酵解和tPMET進(jìn)行呼吸和ATP的生產(chǎn)，這一過(guò)程可能為癌細(xì)胞所獨(dú)有。因此，包括氧化磷酸化耦合的電子轉(zhuǎn)移和tPMET過(guò)程可作為直接針對(duì)癌細(xì)胞的靶目標(biāo)，用于腫瘤特異的抗腫瘤治療。然而，大部分有關(guān)tPMET的研究工作都集中在開(kāi)發(fā)針對(duì)腫瘤特定的氮氧化物(tNOX)抑制劑，沒(méi)有直接針對(duì)tPMET電子轉(zhuǎn)移過(guò)程和氧化磷酸化耦合的過(guò)程。發(fā)明總述本發(fā)明介紹的化合物，是不能通過(guò)細(xì)胞質(zhì)膜，而且具有能阻斷和/或抑制跨質(zhì)膜電子轉(zhuǎn)運(yùn)(tPMET)、細(xì)胞表面的呼吸和細(xì)胞表面的氧化磷酸化偶聯(lián)等功能的功能集團(tuán)。本發(fā)明還介紹了可同時(shí)阻斷跨質(zhì)膜電子轉(zhuǎn)運(yùn)和細(xì)胞表面的呼吸與抑制癌細(xì)胞缺氧反應(yīng)的藥物組合成分以及應(yīng)用這些化合物和藥物組合成分達(dá)到高效，低毒，廣譜的抗腫瘤治療。本發(fā)明的一個(gè)組成部分介紹了能夠應(yīng)用于治療腫瘤病人的，不能通過(guò)細(xì)胞質(zhì)膜， 而且具有能阻斷和/或抑制跨質(zhì)膜電子轉(zhuǎn)運(yùn)(tPMET)、細(xì)胞表面的呼吸和細(xì)胞表面的氧化磷酸化偶聯(lián)功能的化合物的功能集團(tuán)。本發(fā)明的另一個(gè)組成部分介紹了一個(gè)組合藥物的成分。這一成分包括聯(lián)合應(yīng)用至少一個(gè)不能通過(guò)細(xì)胞質(zhì)膜的，而且具有能阻斷和/或抑制跨質(zhì)膜電子轉(zhuǎn)運(yùn)(tPMET)、細(xì)胞表面的呼吸、和細(xì)胞表面的氧化磷酸化偶聯(lián)功能的化合物，與第二個(gè)具有能夠抑制癌細(xì)胞對(duì)缺氧反應(yīng)的多功能抑制劑，用于抗癌治療。本發(fā)明的另一個(gè)組成部分介紹了聯(lián)合應(yīng)用WST-3與芹菜素以達(dá)到相乘聯(lián)合作用， 協(xié)同誘導(dǎo)癌細(xì)胞死亡，作為腫瘤特異的癌癥治療。本發(fā)明的另一個(gè)組成部分介紹了如何設(shè)計(jì)化合物的結(jié)構(gòu)使之能夠阻斷tPMET，細(xì)胞表面的呼吸作用和細(xì)胞表面氧化磷酸化偶聯(lián)，和如何抑制癌細(xì)胞的缺氧反應(yīng)，以及使用這些化合物和藥物組合成分達(dá)到特異性的協(xié)同誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡。


圖1. DNP和WST-3的化學(xué)結(jié)構(gòu)圖2.圖示芹菜素和MPMS聯(lián)合應(yīng)用的劑量反應(yīng)關(guān)系圖3.圖示不同的細(xì)胞對(duì)mPMS治療反應(yīng)圖4.圖示W(wǎng)ST-3與芹菜素聯(lián)合應(yīng)用誘導(dǎo)細(xì)胞死亡

發(fā)明內(nèi)容
I 總述選擇性地聯(lián)合阻斷腫瘤細(xì)胞的缺氧反應(yīng)和癌癥細(xì)胞的呼吸可治療癌癥細(xì)胞.本說(shuō)明詳細(xì)介紹了設(shè)計(jì)具有能阻斷和/或抑制跨質(zhì)膜電子轉(zhuǎn)運(yùn)(tPMET)、細(xì)胞表面的呼吸、和細(xì)胞表面的氧化磷酸化偶聯(lián)功能的化合物，與具有能夠抑制癌細(xì)胞對(duì)缺氧反應(yīng)的多功能抑制劑聯(lián)合應(yīng)用的化合物的藥物組合成分，以用于腫瘤病人和脯乳動(dòng)物的抗癌治療。II 定義術(shù)語(yǔ)“WST” 一詞代表的一類(lèi)水溶性的四唑鹽化合物，包括，但不局限于WST-3， WST-4, WST-5, WST-8, WST-9, WST-10, WST-11, XTT 法，和 MSN。這些化合物也不能通過(guò)細(xì)胞質(zhì)膜。術(shù)語(yǔ)“WST-3”化學(xué)名2- (4-碘苯基)_3_ (2,4- 二硝基苯基)_5_ (2,4- 二硫基酚基-2H-四氮唑鈉鹽。術(shù)語(yǔ)“ IEA” 一詞是“電子中間受體”的簡(jiǎn)。術(shù)語(yǔ)“mPMS” (1-甲氧基_5_甲基-phenazinium甲基硫酸)，是一種化合物，當(dāng)與四唑鹽結(jié)合應(yīng)用時(shí)作為“電子耦合劑/電子中間受體”。術(shù)語(yǔ)“輔酶Q1”，(2，3_ 二甲氧基-5-甲基-6-(3-甲基-2-丁烯基-1，4-苯醌)， 是一個(gè)/電子中間受體化合物。術(shù)語(yǔ)“ IKK的”代表IkappaB磷酸激酶，磷酸化Ikappa從而活化NF-kappaB。已經(jīng)確定了兩個(gè)IKK的亞型。他們是IKKl (IKK)和IKK2 (IKK)。術(shù)語(yǔ)“NF-kappaB的”是一個(gè)作為調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的REL蛋白質(zhì)家族。通常兩個(gè)NF-kappaB蛋白形成二聚體，并與UappaB結(jié)合以存無(wú)活性的形式存在于細(xì)胞漿內(nèi)。在有信號(hào)激活后，IkappaB被IKK磷酸化，與NF-kappaB脫離，由此釋放出NFkappaB進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，并激活一系列NF-kappaB調(diào)控的基因轉(zhuǎn)錄。與NF-kappaB脫離的游離IkappaB被 protesomes降解。NF-kappaB的激活有利于細(xì)胞增殖和生存。已發(fā)現(xiàn)NF-κ B活性與促進(jìn)癌變過(guò)程中，腫瘤的進(jìn)展和癌細(xì)胞對(duì)化療和放射療耐受性相關(guān)聯(lián)。術(shù)語(yǔ)〃 IKK inhibitor"是指能夠抑制IKK活性的抑制劑，抑制IKK激酶活性和 NF-kapparelB的活化，從而抑制NF-kapparelB的活性與功能。IKK的抑制劑可為競(jìng)爭(zhēng)性抑制的，非競(jìng)爭(zhēng)性抑制的，或不可逆性抑制的IKK抑制劑。“競(jìng)爭(zhēng)性抑制的IKK抑制劑”是可以作用于IKK酶的催化部位進(jìn)行可逆性抑制的化合物或肽。“非競(jìng)爭(zhēng)性IKK的抑制劑” 是作用于IKK酶的非催化部位，可逆抑制IKK活性的化合物?！耙粋€(gè)不可逆轉(zhuǎn)的IKK抑制劑“是一種化合物，通過(guò)與IKK酶形成了共價(jià)鍵，破壞酶的活性，使IKK的酶的活性不可逆轉(zhuǎn)的。術(shù)語(yǔ)“IKK的抑制劑”包括但不限于，i)在此前已經(jīng)確認(rèn)的具有抑制IKK特效的化合物，包括但不限于SPC839 (Signal Pharmaceutical Inc.), Anilino-Pyrimidine 的 ttj ^L i^J] (Signal Pharmaceutical Inc.), PS1145 (Millennium Pharmaceutical Inc.), BMS-345541*(Bristol-Myers Squibb Pharmaceutical Research Institute, IKK inhibitor III), SC-514*(Smithkilne Beecham Corp.), Amino-imidazolecarboxamide derivative(Smithkilne Beecham Corp. ) , Ureudo-thiophenecarboxamide derivatives (AstraZeneca), Diarylpybidine derivative(Bayer), Pyridooxazinone derivative(Bayer), Indolecarboxamide derivative(Aventis Pharma), Benzoimidazole carboxamide derivative(Aventis Pharma), Pyrazolo[4,3~c] quinoline derivative(Pharmacia Corporation), Imidazolylquinoline-carbx aldehyde semicarbazide derivative(Tulark Inc.), Pyridyl Cyanoguanidine derivate(Leo Pharma), IkB Kinase Inhibitor Peptide (CalBiochem) , IKK-2 Inhibitor IV[5-(p-Fluorophenyl)-2-ureido]thiophene-3-carboxamide(CalBioche m), IKK Inhibitor II, Wedelolactone(CalBiochem), IKK Inhibitor VII (CalBiochem), IKK_2Inhibitor V N-(3, 5-Bis-trifluoromethylphenyl)-5-chloro-2-hydroxybenzamid e IMD-0354(CalBiochem), IKK-2 Inhibitor VI (5-Phenyl-2-ureido)thiophene-3-carbo xamide(CalBiochem), IKK_2Inhibitor VIII ACHP 2-Amino-6-(2-(cyclopropylmethoxy) -6-hydroxyphenyl)~4~ (4-piperidinyl)-3-pyridinec arbonitrile(CalBiochem). ii)在此說(shuō)明的某些部分所述的IKK抑制劑還包括在此前已發(fā)現(xiàn)具有抗腫瘤作用的IKK抑制劑，包括但不限于:PS1145 (Millennium Pharmaceutical Inc.), BMS-345541* (Bristol-Myers Squibb Pharmaceutical Research Institute).術(shù)語(yǔ)“CK2的抑制劑”一詞代表所有的蛋白激酶的酪蛋白kinaSe2抑制劑。首選的 CK2的抑制劑是，但并不限于芹菜素。術(shù)語(yǔ)“芹菜素” CAS登錄號(hào)520-36-5，化學(xué)文摘社名稱(chēng)4Η_1_苯并吡喃_4_5， 7-二羥基-2-(4-羥苯基)-(9CI)。它也被命名為 Apigenine ；洋甘菊；Apigenol ；Spigenin ； 和Versulin，是一種黃酮類(lèi)化合物的成員，黃酮類(lèi)化合物的一個(gè)子類(lèi)。芹菜素是一種多功能的信號(hào)transductor調(diào)制劑，可減少DNA氧化損傷，抑制人類(lèi)白血病細(xì)胞的生長(zhǎng)并誘導(dǎo)這些細(xì)胞分化，抑制腫瘤細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作為一種抗發(fā)炎的行為；和抗痙攣或解痙藥。芹菜素抑制NF-kappaB，IKK-I和IKK-2，蛋白激酶2 (CK2)，梅普激酶(MPK)，缺氧誘導(dǎo)因子1 (HIF)，血管上皮生長(zhǎng)因子(VEGF)，以及一些其他分子如細(xì)胞周期和血管生成的調(diào)控途徑的活性，芹菜素還誘導(dǎo)P53的活性，維持基因組的穩(wěn)定性，進(jìn)行錯(cuò)配修復(fù)，或終止細(xì)胞周期和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等。芹菜素已知具有抵抗紫外線(xiàn)輻射引起的氧化，和化學(xué)預(yù)防為癌癥作用。在此所述的芹菜素代表了子類(lèi)黃酮類(lèi)化合物，黃酮類(lèi)化合物，包括但不限于tricin，木犀草素，tangeritin，，6_羥基黃酮，黃芩，Scutellarein，漢黃芩素，地奧司明，F(xiàn)lavoxate, 白楊，glycosided，和其他具有類(lèi)似生物活性的黃酮類(lèi)化合物的子類(lèi)，包括但不限于任何異黃酮，黃酮醇，黃酮，3 Hydroxyflavanones,黃烷-3-0LS，花青素，3 deoxyanthocyanidin, 花青素，乙?；蛙眨蛦螌?，以及異黃酮和neoflavonoids。術(shù)語(yǔ)“總黃酮”，也稱(chēng)為生物類(lèi)黃酮，統(tǒng)稱(chēng)維生素P和西特林，是一類(lèi)植物次生代謝產(chǎn)物。此處的黃酮類(lèi)化合物代表全部三種含有酮基的化合物，(黃酮和黃酮醇)。根據(jù)IUPAC命名分類(lèi)1)從2-phenylChromen4- Q-苯基-1，4-苯并吡喃酮)的結(jié)構(gòu)派生的類(lèi)黃酮；2)異黃酮，從3phenylChromen-4-(3-苯基-1，4-苯并吡喃酮)結(jié)構(gòu)而得；及 3) neoflavonoids，來(lái)自 4 phenylcoumarine 0-苯基-1，2-苯并吡喃酮) 結(jié)構(gòu)；以及非酮的多羥基多酚的化合物，包括黃酮，黃烷-3-0LS和兒茶素。樣品化合物包括，但不限于大豆異黃酮大豆苷，大豆甙元，鷹嘴豆芽素A，芒柄花素，染料木素，Coumestrol，葛根素，黃烷-3-0LS:兒茶素(兒茶素，表兒茶素(EG)，表兒茶素，沒(méi)食子酸酯(EGC)的，兒茶素(EGCG))；黃酮楊梅素，槲皮素和山柰酚；Isoflavenes phenoxodiol ；花青素 Antirrhinin, Chrysanthenin, Malvin, Myrtillin, Oenin Primulin Protocyanin, Tulipanin ;3 deoxyanthocyanidin :Apigeninidin, Columnidin, Diosmetinidin, Luteolinidin, Tricetinidin ；花青素Aurantinidin,矢車(chē)菊，飛燕草，Europinidin, Luteolinidin, Malvidin,天竺葵，Peonidin, Petunidin, Rosinidin ； 3 Hydroxyflavanones :Dihydrokaempferol, Dihydroquercetin ；黃 圣草 皮， 圣草素，柚皮素；黃酮黃顏木素，異鼠李素，山柰，楊梅素，Pachypodol槲皮素，桑色素， Rhamnazin ；及其相應(yīng)的苷化合物。術(shù)語(yǔ)“HIF”缺氧誘導(dǎo)因子代表可在細(xì)胞缺氧的條件下對(duì)缺氧的細(xì)胞環(huán)境進(jìn)行反應(yīng)，調(diào)節(jié)基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子家族。已經(jīng)確定有三個(gè)家族成員。他們是HIF-I (由HIF-I組成的HIF-I 二聚體)，由HIF-2組成的二聚體(HIF-2)，由HIF-3組成的二聚體。術(shù)語(yǔ)“缺氧誘導(dǎo)因子抑制劑”是生物和非生物化合物，抑制各種HIF和/或細(xì)胞對(duì)于缺氧的反應(yīng)，包括但不限于2，2-dimethybenzopyran化合物，chetomin，2_甲氧基雌二醇(2ME2)，PX 478，17-N-烯丙胺-17-demethoxyge 1 danamycin (17-AAG)，EZN-2968，喜樹(shù)堿，644221國(guó)科會(huì)，3-(5，-羥甲基_2_呋喃基)-1-benzylindazole (YC-1)，雷帕霉素和誘騙寡核苷酸對(duì)HIF-I RX-0047。術(shù)語(yǔ)“tNOX” 一詞代表了腫瘤特異性的細(xì)胞表面的NADH氧化酶。它也被稱(chēng)為 ECT02。術(shù)語(yǔ)“tNOX抑制劑” 一詞代表能夠抑制tNOX活性的化合物。tNOX抑制劑包括， 但不僅限于，兒茶素兒茶素，(-)_表兒茶素(EC), (-)_兒茶素(EG),(-)表兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGC)，(-)_兒茶素-3-沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(ECG)和(-)_沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酉旨(EGCG)；辣椒素，Capsaicin, Capsicum, Capsicum vanilloids, Capsibiol-T, 和isoflavenes類(lèi)似物的衍生物，phenoxodio ；BTS衍生物，6_[N_(2_苯乙基)苯并[b] thiophenesulphonamidel, 1_氧化物；非甾體類(lèi)消炎藥(NSAIDS)，吡羅昔康，阿司匹林，布洛芬，萘普生和塞來(lái)昔布；和鹽酸阿霉素(亞德里亞霉素)。術(shù)語(yǔ)“氧化磷酸化” 一詞是耦合氧化與ATP的合成的一個(gè)過(guò)程，，這一過(guò)程傳輸和存儲(chǔ)來(lái)自糖代謝產(chǎn)生的能量于ATP，作為細(xì)胞能量來(lái)源。術(shù)語(yǔ)“解偶聯(lián)劑” 一詞意味著解除細(xì)胞的氧化與磷酸化的耦聯(lián)過(guò)程，阻止細(xì)胞內(nèi)ATP的合成，細(xì)胞的能量代謝。已知的解偶聯(lián)劑包括但不限于二硝基苯酚(DNP)，D5 _chloro_3_tert_butyl_2’ _chloro_4’ -nitrosalicyIaniIde (S-13), sodium 2,3,4,5, 6-pentachlorophenolate (PCP)，4，5，6，7-tetrachloro-2- (trifluoromethyl)-lH-benzi midazole(TTFB)， Flufenamic acid (2-[3-(trifluoromethyl)anilino]benzoic acid)， 3，5-di-tert-butyl-4-hydroxy-benzylidenemalononitrile(SF6847)，carbonyl cyanide m-chloro phenyl hydrazone (CCCP)，Carbonyl cyanide p-[trifluoromethoxy]-pheny 1-hydrazone (FCCP)， 禾口 alpha- (phenylhydrazono)phenylacetonitriIe derivatives, phenylacetonitrile衍生物；和弱酸性化合物，包括各種弱酸性酚，benzimidazoles, N-phenyIanthranilates, salicylanilides， phenylhydrazones, salicylic acids， acyldi-thiocarbazates, cumarines，禾口芳香胺。術(shù)語(yǔ)“癌細(xì)胞”代表來(lái)自人癌或腫瘤的體外培養(yǎng)的癌細(xì)胞。這些細(xì)胞具有惡性特征，如失去接觸抑制。術(shù)語(yǔ)“癌癥”是指一種疾病狀態(tài)，這種疾病是由于致癌物導(dǎo)致的體細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化而形成的癌癥，這些癌癥細(xì)胞可入侵其周?chē)恼＝M織，進(jìn)入淋巴或血液系統(tǒng)是這些惡性細(xì)胞可通過(guò)淋巴和血液系統(tǒng)擴(kuò)散到身體其他部位，即癌癥轉(zhuǎn)移。術(shù)語(yǔ)“有效劑量”本文提到的“有效劑量”是指一種藥物或藥品可引起一個(gè)細(xì)胞， 組織，系統(tǒng)，動(dòng)物或人類(lèi)達(dá)到研究人員和臨床醫(yī)生所期望的生物或醫(yī)學(xué)反應(yīng)的劑量。術(shù)語(yǔ)“有效治療劑量”是指對(duì)于一個(gè)以前沒(méi)有用過(guò)此治療的個(gè)體在經(jīng)過(guò)此治療后可達(dá)到疾病或癥狀或副作用的改善，治愈，康復(fù)，預(yù)防，或減少疾病的進(jìn)一步發(fā)展或惡化的劑量。本術(shù)語(yǔ)還表示在一定的范圍內(nèi)有效地加強(qiáng)正常生理功能。術(shù)語(yǔ)“癌癥治療”，表示所給予細(xì)胞或哺乳動(dòng)物的藥物或試劑，治療療程，所采用的給藥或試劑的方法和治療方法，以及用藥順序和給藥間隔。術(shù)語(yǔ)“協(xié)同效應(yīng)”是指應(yīng)用兩個(gè)或兩個(gè)以上的藥物治療并由此得到兩種藥物作用相乘的治療效果，即優(yōu)勢(shì)相結(jié)合的結(jié)果以得到比這些藥物的累加效應(yīng)更大的療效。
術(shù)語(yǔ)“化合物或藥物成分的有效治療量”，是指足以能夠改變細(xì)胞培養(yǎng)的癌細(xì)胞增殖，在動(dòng)物尤其是人類(lèi)的腫瘤的生長(zhǎng)或轉(zhuǎn)移，包括防止腫瘤形成和阻止腫瘤的生長(zhǎng)，化合物或藥物成分的有效治療量同時(shí)也代表可以導(dǎo)致癌細(xì)胞死亡或選擇性的腫瘤細(xì)胞死亡，而對(duì)正常細(xì)胞的無(wú)副作用的藥物劑量。術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的”表示由聯(lián)邦或州政府或美國(guó)藥典或其他監(jiān)管部門(mén)批準(zhǔn)承認(rèn)的可在動(dòng)物特別是在人類(lèi)身上使用的。術(shù)語(yǔ)“載體”是指，例如，可用于輔助給藥的稀釋劑，助劑，輔料，助劑或溶劑。這種藥物的載體可為無(wú)菌液體，例如水和油，包括石油，動(dòng)物，植物或合成液體，如花生油， 豆油，礦物油，芝麻油等。水或生理鹽水，葡萄糖水和甘油是最常用的載體，尤其是注射液。 "Remington的制藥科學(xué)”介紹了適用的醫(yī)用載體。它也包括細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑，用于提供體外或體內(nèi)轉(zhuǎn)染DNA和/或RNA進(jìn)入細(xì)胞的試劑。術(shù)語(yǔ)“同時(shí)”是指⑴在相同時(shí)時(shí)間，或(2)在共同的治療過(guò)程中相同的時(shí)間。術(shù)語(yǔ)“順序”是指首先用一個(gè)有活性的藥，再用另一個(gè)有活性的藥。第二個(gè)活性藥物的應(yīng)用可在應(yīng)用第一個(gè)活性的藥之后立即給予或間隔一段是今后在給予。間隔的時(shí)間可根據(jù)治療效果決定已得到最好的治療效果。III tPMET作為腫瘤特異的靶目標(biāo)正常細(xì)胞主要是通過(guò)位于線(xiàn)粒體基質(zhì)三檸檬酸(TCA)分解葡萄糖獲得能量。這一過(guò)程中釋放的能量首先存在于NADH，然后轉(zhuǎn)移到氫離子，再進(jìn)一步通過(guò)入位于線(xiàn)粒體內(nèi)膜的電子轉(zhuǎn)移系統(tǒng)建立跨線(xiàn)粒體內(nèi)膜的氫離子梯度。線(xiàn)粒體膜外的氫離子在氫離子濃度梯度的驅(qū)動(dòng)下通過(guò)一個(gè)質(zhì)子選擇性的通道進(jìn)入線(xiàn)粒體，并將其具有的能量經(jīng)磷酸化ADP合成 ATP。與此同時(shí)，一個(gè)氧原子將接受兩個(gè)電子和兩個(gè)氫離子，形成一個(gè)水分子。這就是氧化磷酸化的耦聯(lián)過(guò)程。通過(guò)這一偶聯(lián)過(guò)程，氫離子的濃度梯度所具有的能量被儲(chǔ)存到ATP。ATP 是細(xì)胞的主要能量來(lái)源。這個(gè)過(guò)程消耗氧氣，形成水，也被稱(chēng)為細(xì)胞呼吸。在糖酵解的情況下，細(xì)胞通過(guò)在細(xì)胞質(zhì)中的葡萄糖發(fā)酵獲得能量。在此過(guò)程中不需氧氣。伴隨著這個(gè)過(guò)程中，生成的NADH的會(huì)被此過(guò)程的終產(chǎn)物，丙酮酸氧化為NAD+，丙酮酸則被還原成為乳酸，從而回收NAD+，以保持在細(xì)胞質(zhì)中NADH/ND+比值。如上所述，腫瘤細(xì)胞代謝葡萄糖通過(guò)糖酵解，即使在有足夠的氧氣也是如此。這種有氧糖酵解過(guò)程伴隨tPMET。經(jīng)在細(xì)胞質(zhì)中糖酵解產(chǎn)生的NADH通過(guò)tPMET被進(jìn)一步氧化為 NAD+以保持NADH/NAD+的比率。這一過(guò)程消耗氧氣，通過(guò)位于細(xì)胞表面的細(xì)胞質(zhì)膜電子轉(zhuǎn)運(yùn)。預(yù)測(cè)細(xì)胞質(zhì)膜存在潛在的氧化磷酸化偶聯(lián)過(guò)程。因此，正常細(xì)胞和癌細(xì)胞之間的一個(gè)顯著區(qū)別是細(xì)胞呼吸和能源產(chǎn)生位于不同的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。正常細(xì)胞在線(xiàn)粒體中進(jìn)行呼吸，消耗氧氣和產(chǎn)生ATP，而癌細(xì)胞在細(xì)胞表面進(jìn)行。由于細(xì)胞呼吸和能量代謝對(duì)于細(xì)胞的生存至關(guān)重要，正常細(xì)胞與癌細(xì)胞呼吸和能源生產(chǎn)位置的不同，使細(xì)胞表面的呼吸作用成為一個(gè)腫瘤特殊的，抗腫瘤治療的靶目標(biāo)。本發(fā)明的一個(gè)體現(xiàn)，提供了一個(gè)位于細(xì)胞表面的，腫瘤特異的，可用于腫瘤治療的藥物作用的靶目標(biāo)。這個(gè)靶目標(biāo)位于細(xì)胞質(zhì)膜。其功能涉及跨膜電子轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，細(xì)胞表面的呼吸作用和氧化磷酸化的耦合過(guò)程。不能通過(guò)細(xì)胞質(zhì)膜的化合物可作用于此靶目標(biāo)。一個(gè)更具體的體現(xiàn)是這一靶目標(biāo)的分子包括但不限于一個(gè)位于細(xì)胞表面的細(xì)胞質(zhì)膜的質(zhì)子特定的，具有ATP合成活性的離子通道。這個(gè)過(guò)程的抑制作用，抑制這一過(guò)程可直接和/或間接的干擾跨質(zhì)膜質(zhì)子梯度。加之，另一個(gè)體現(xiàn)是tPMET Systemes的每個(gè)分子的和其相應(yīng)的功能，包括但不限于分子形成的 NADH =Ferricyanide Oxidoreductase 系統(tǒng)，NADH =Ubiquinone =WST-I Reductase系統(tǒng)和細(xì)胞表面的NADH-Oxidases也可成為抑制和/或阻斷細(xì)胞表面呼吸的靶目標(biāo)。可以直接或間接針對(duì)這些分子性的的抗癌療法。VI用于抗腫瘤治療的針對(duì)細(xì)胞表面呼吸的化合物本發(fā)明提供了一個(gè)設(shè)計(jì)和合成可作用于細(xì)胞表面的呼吸的化合物的原則。該化合物是由兩個(gè)化學(xué)功能基團(tuán)組成1)至少有一個(gè)第一功能組是能夠結(jié)合和/或干擾和/或阻斷tPMET系統(tǒng)的電子傳輸過(guò)程，阻斷氧化磷酸化的耦合和/或抑制的tNOX，從而阻止細(xì)胞表面的呼吸和氧氣消耗；2)至少有一個(gè)或多個(gè)具有第二功能的化學(xué)基團(tuán)，即可以阻止整個(gè)化合物通透細(xì)胞質(zhì)膜，使之不能進(jìn)入細(xì)胞的功能集團(tuán)。由這兩個(gè)功能集團(tuán)融合所成的單分子化合物具有特異干擾，抑制和/或阻斷位于細(xì)胞表面的tPMET，或氧化磷酸化偶聯(lián)的過(guò)程， 和細(xì)胞表面的呼吸的能力，但不影響在正常細(xì)胞位于線(xiàn)粒體的呼吸過(guò)程。本發(fā)明的一部分包括具體指出了一個(gè)可作用于細(xì)胞表面呼吸，氧化磷酸化過(guò)程的化合物，WST-3，化學(xué)名稱(chēng)2- (4-碘苯基)-3- (2，4- 二硝基苯基)-5- (2，4_d 二硫基苯-2H-四氮唑，鈉鹽(WST-3，日本專(zhuān)利JP2592436，B, 1995年)。圖1示W(wǎng)ST-3的化學(xué)結(jié)構(gòu)。WST-3是由兩種類(lèi)型的功能性化學(xué)基團(tuán)組成2，4_ 二硝基酚(DNP)的化學(xué)結(jié)構(gòu)位于四唑的環(huán)上，是氧化磷酸化解偶聯(lián)劑；位于四唑環(huán)上的[1，3 benzenedilsulfonate]和W lodophenyl]，具有增強(qiáng)化合物親水性的功能，使之不能通透于細(xì)胞質(zhì)膜。2,4- 二硝基酚(DNP)，是細(xì)胞代謝毒素，代表一類(lèi)可溶解在線(xiàn)粒體內(nèi)膜的6個(gè)化合物，形成質(zhì)子特異的通道，使氫離子可以穿梭通過(guò)生物膜，在由電子轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)建立起的濃度梯度的驅(qū)動(dòng)下，繞過(guò)ATP的合成的氧化磷酸化偶聯(lián)過(guò)程，經(jīng)這一通道進(jìn)入線(xiàn)粒體。由此解除了質(zhì)子通過(guò)過(guò)線(xiàn)粒體內(nèi)膜的氧化磷酸化偶聯(lián)過(guò)程，導(dǎo)致能量快速消耗，但不能生成ATP。DNP 的作用是消除跨線(xiàn)粒體和葉綠體膜的質(zhì)子梯度，消耗掉使質(zhì)子產(chǎn)生ATP化學(xué)能的驅(qū)動(dòng)力， 使本應(yīng)儲(chǔ)存于ATP的質(zhì)子梯度的能量作為熱量丟失。細(xì)胞則因ATP儲(chǔ)備降低而增加碳水化合物和脂肪的氧化。由此，DNP被用作燃燒多余的脂肪的減重療法。但是，它對(duì)細(xì)胞是有毒的，可消耗盡細(xì)胞的能量來(lái)源，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。通過(guò)將DNP與第二組可阻止化合物通透細(xì)胞質(zhì)膜的功能集團(tuán)組合成一個(gè)化合物， 可保持DNP不能進(jìn)入細(xì)胞，只能作用在細(xì)胞表面的細(xì)胞膜上。由于癌細(xì)胞呼吸主要依靠 tPMET和細(xì)胞表面的氧氣消耗，WST-3只會(huì)阻止癌細(xì)胞的細(xì)胞表面呼吸，但不會(huì)影響正常細(xì)胞線(xiàn)粒體的氧化磷酸化作用，這樣可使藥物特異的作用于腫瘤細(xì)胞，而不影響正常細(xì)胞。如上述，DNP作為第一功能集團(tuán)表示，代表氧化磷酸化解偶聯(lián)劑，同時(shí)也可能延伸到阻斷tPMET和細(xì)胞表面的呼吸的其他方式的原則。據(jù)此，可以替代DNP的化合物包括1) 可進(jìn)行氧化磷酸化去耦聯(lián)的化合物包括5_chloro_3_tert_butyl_2，_chloro_4，-nitrosalicyIaniIide (S-13), sodium 2,3,4,5,6-pentachlorophenolate (PCP)，4，5,6,7-tetrachloro-2- (trifluoromethy1)_ ΙΗ-benzimidazole (TTFB)，F(xiàn)lufenamic acid(2-[3- (trifluoromethyl)anilino]benzoic acid)，3，5-di-tert-butyl-4-hydroxy-benzylidenemalononitrile (SF6847)，carbonylcyanide m-chloro phenyl hydrazone(CCCP)禾口 Carbonyl cyanide ρ-[trifluorome thoxy]-phenyl-hydrazone(FCCP)， 禾口 alpha—(phenylhydrazono)phenylacetonitriIe derivatives, phenylacetonitrile derivatives ；和 2)具有解偶聯(lián)功能的一般化合物， 弱酸，其中的化學(xué)基團(tuán)包括弱酸性苯酚，benzimidazoles, N-phenylanthranilates, salicylanilides, phenylhydrazones, salicylic acids, acyldi-thiocarbazates, cumarines,禾口芳香胺。此外，細(xì)胞表面的呼吸也可以被具有可直接和/或間接干預(yù)，抑制或阻止tPMET功能和/或細(xì)胞表面的呼吸功能的功能基團(tuán)的化合物所抑制。這些功能基團(tuán)選自以下幾組，包括1組選定受阻)與tPMET直接交互作用的電子中間受體， 包括，并不限于，MPMS和輔酶Ql ;2) tPMET基質(zhì)，如NADH ；3)呼吸抑制劑，如氫氰酸組(CN)，鐵氰化鉀，砷和砷化物；4)tN0X抑制劑包括但不限于catechins :catechin， (-)-epicatechin (EC), (-)-epicatechin(EG), (-)-epicatechin gallate (EGC), (-)-epicatechin-3-gallate (ECG), and (-)-epigallocatechin gallate (EGCG)； Capsaicin, Capsicum, Capsicum vanilloids, Capsibiol-T, and a isoflavenes analogue derivative, the phenoxodiol ；BTS derivative, the 6-[N-(2-phenylethyl)] benzo [b]thiophenesulphonamide 1,1-dioxide ；Non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDS), piroxicam, aspirin, ibuprofen, naproxen禾口 celecoxib ；and doxorubicin hydrochloride (Adria-mycin)。所有上述這些功能基團(tuán)都可代替DNP，形成不能通透于細(xì)胞質(zhì)膜的化合物。第二化學(xué)基團(tuán)或組合的化學(xué)基團(tuán)是能使化合物保持不通透細(xì)胞質(zhì)膜的化學(xué)基團(tuán)。 其化學(xué)結(jié)構(gòu)的設(shè)計(jì)和合成可由相關(guān)領(lǐng)域的專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員進(jìn)行?；衔锏膶?shí)例包括但不限于用于修飾四唑類(lèi)化合物，使之成為水溶性的tetrazoliums (WSTs)Jn WST-I, WST-3, WST-4, WST-5, WST-8, WST-9, WST-10, WST-11, XTT, MSN,的酚環(huán)取代物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，使化合物不能通透于細(xì)胞質(zhì)膜。V抗腫瘤治療的組合配方1.聯(lián)合抑制缺氧誘導(dǎo)因子和細(xì)胞表面的呼吸的癌癥治療策略細(xì)胞的存活依賴(lài)能源。與正常細(xì)胞在線(xiàn)粒體的呼吸氧氣，并生成ATP不同，癌細(xì)胞通過(guò)tPMET在細(xì)胞表面消耗氧氣，進(jìn)行呼吸。腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞之間呼吸部位的不同，使 tPMET成為癌細(xì)胞獨(dú)特的靶目標(biāo)。此外，由于癌細(xì)胞的缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)水平的提高，對(duì)缺氧耐受性高。因此，在阻斷PMET的同時(shí)抑制缺氧誘導(dǎo)因子協(xié)同誘導(dǎo)癌癥特異的細(xì)胞死亡，用于癌癥病人的癌癥治療。因此，本發(fā)明提供藥品的組成成分，其中包括⑴至少有一個(gè)第一個(gè)可干擾和/或阻斷tMPET和/或細(xì)胞表面的呼吸，而且不能通透細(xì)胞質(zhì)膜的化合物，如WST-3 ； (2)至少一個(gè)具有抑制HIF能力的，或可抑制細(xì)胞缺氧反應(yīng)的多功能抑制劑的第二個(gè)化合物。至少一個(gè)的第二個(gè)化合物包括可消除細(xì)胞生存的信號(hào)傳遞，如NF-kappaB的活性，和/或細(xì)胞的缺氧反應(yīng)，如芹菜素，或其有效的替代品，缺氧誘導(dǎo)因子抑制劑，IKK的抑制劑，類(lèi)黃酮和有效替代品。此組合的藥物于藥學(xué)可接受的介質(zhì)之中，以最適當(dāng)濃度，有效的劑量，給藥于需要治療癌癥的病人?？梢酝ㄟ^(guò)加入第三成分，電子中間受體(IEA)來(lái)進(jìn)一步加強(qiáng)上述組合藥物的治療效果。第一化合物包括所有上面“用于抗腫瘤治療的針對(duì)細(xì)胞表面呼吸的化合物”一節(jié)中列出的化合物，包括不能通透細(xì)胞質(zhì)膜，同時(shí)也包含至少一個(gè)下列化學(xué)功能基團(tuán)A)至少一個(gè)功能基團(tuán)能夠干擾和/或阻斷tPMET系統(tǒng)的跨質(zhì)膜電子運(yùn)輸過(guò)程中，B)至少有一個(gè)功能基團(tuán)能夠阻斷細(xì)胞表面的呼吸，和/或C)至少有一個(gè)具有解偶聯(lián)氧化磷酸化功能的化學(xué)功能基團(tuán)，和/或D)組至少有一個(gè)能阻斷或抑制的tNOX功能的化學(xué)功能基團(tuán)，的化合物。即由此，以阻斷tPMET，細(xì)胞表面的呼吸和氧氣消耗。通過(guò)將這兩方面的功能基團(tuán)整合成一個(gè)單一的分子，使之不能通透細(xì)胞質(zhì)膜，上述的這些化學(xué)功能基團(tuán)將只能作用于細(xì)胞表面阻止或抑制癌細(xì)胞的細(xì)胞表面的呼吸，但不得影響正常細(xì)胞線(xiàn)粒體呼吸。如上“用于抗腫瘤治療的針對(duì)細(xì)胞表面呼吸的化合物” 一節(jié)所列出的第一個(gè)化合物包括但不限于1)直接作用于tPMET的中間電子受體，包括，但不限于mPMS和輔酶Ql ;2) tPMET的基質(zhì)，如NADH ；3)呼吸抑制劑，如氫氰酸基團(tuán)(CN)， 鐵氰化鉀，砷和砷化物；4) tNOX抑制劑，包括但不限于catechins :catechin， (-)-epicatechin(EC), (-)-epicatechin (EG), (-)-epicatechin gallate (EGC), (-)-epicatechin-3-gallate(ECG), 禾口(-)-epigallocatechin gal late (EGCG)； Capsaicin, Capsicum, Capsicum pepper vanilloids, Capsibiol-T, and a isoflavenes analogue derivative, the phenoxodiol ；BTS derivative, the 6-[N-(2-phenylethyl)] benzo [b]thiophenesulphonamide 1,1-dioxide ；Non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDS), piroxicam, aspirin, ibuprofen, naproxen and celecoxib ； 禾口 doxorubicin hydrochloride (Adria-mycin) ；5)含有氧化磷酸化解偶聯(lián)劑的不能通透細(xì)胞質(zhì)膜的分子，氧化磷酸化解偶聯(lián)劑包括但不限于DNP，5-chl0r0-3-tert-butyl-2，-chl oro_4，-nitrosalicylanilide (S-13), sodium 2,3,4,5,6-pentachlorophenolate(PCP), 4,5,6,7-tetrachloro-2-(trifluoromethyl)-ΙΗ-benzimidazole (TTFB), Flufenamic acid(2-[3-(trifluoromethyl)ani1ino]benzoic acid),3,5-di-tert-buty1-4-hy droxy-benzylidenemalononitriIe(SF6847), carbonyl cyanide m-chloro phenyl hydrazone(CCCP), Carbonyl cyanide p-[trifluoromethoxy]-phenyl-hydrazone (FCCP), 禾口 alpha_(phenylhydrazono)phenylacetonitrile derivatives, phenylacetonitriIe derivatives ；禾口 i看酸包 f舌i看酸 )類(lèi)，benzimidazoles, N-phenylanthranilates, salicylanilides, phenylhydrazones, salicylic acids, acyldi-thiocarbazates, cumarines,禾口芳香胺。上述至少一個(gè)的第二個(gè)化合物，具有抑制HIF能力的多功能抑制劑，或抑制細(xì)胞缺氧反應(yīng)的抑制劑或有效的替代品選自包括1)中的黃酮類(lèi)和其亞類(lèi)，如flaV0r0nes，2) 缺氧誘導(dǎo)因子抑制劑，3)可抑制NF-kappaB，IKK, CK2活性的的抑制劑，如包括但不限于IKK 抑制劑。芹菜素是第二個(gè)化合物的代表。它是一種黃酮類(lèi)，是黃酮類(lèi)化合物的一個(gè)子類(lèi)，它也是一個(gè)多功能的可調(diào)節(jié)和/或抑制細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的調(diào)解劑和/或抑制劑。已知芹菜素是缺氧誘導(dǎo)因子抑制劑，它抑制由缺氧誘發(fā)的HIFl的表達(dá)水平和活性。芹菜素還可以激活 P53，暫停細(xì)胞周期的進(jìn)程，以維護(hù)基因組的穩(wěn)定性，抑制酪蛋白激酶II (CK2)，NF-kappaB， IKK的活性，和誘導(dǎo)產(chǎn)生活性氧(R0Q等。
第二個(gè)化合物以及芹菜素的有效替代品選自包括下列化合物類(lèi)別(1)至少有一個(gè)黃酮類(lèi)化合物，包括但不限于自然存在的黃酮類(lèi)，如tricin，木犀草素，Tangeritin, 白楊，6-羥基黃酮，黃芩，Scutellarein,漢黃芩素和合成的黃酮類(lèi)物質(zhì)，如地奧司明， Flavoxate,以及黃酮類(lèi)，黃酮醇，f lavannones, f lacanonols，兒茶素，異黃酮等亞類(lèi)；或(2)至少一個(gè)來(lái)自其它的生物類(lèi)黃酮亞類(lèi)和其包括帶有或不帶有乙?；蜍栈锏念?lèi)黃酮化合物的異構(gòu)體，包括自然存在的，人工修飾的酮異構(gòu)體和人工合成的化合物，包括，但不限于來(lái)自 2-phenylchromen-4-one (2-phenyl-l, 4-benzopyrone)的結(jié)構(gòu)的黃酮類(lèi)化合物的衍生物，(如槲皮素，蘆丁)；來(lái)自3-phenylChr0men-4-0ne(3-phen yl-1,4-benzopyrone)結(jié)構(gòu)的 行生物的異黃麗，來(lái)自 4-phenylcoumarine (4-phenyl-l, 2-benzopyrone)結(jié)構(gòu)的衍生物的neof lavonoids，作為非酮多羥基酚化合物類(lèi) flavanoids :flavanoids, flavan-3-ols and catechins。例如,包 f舌,但不限于 Biochanin A, Daidzein, Daidzin, Formononetin, Genistein, Coumestrol, Puerarin ； flavan-3-ols :catechins(catechin, epicatechin(EG), epicatechin, gallate (EGC),禾口 epigallocatechin gallate (EGCG)) ；flavonol :myricetin, quercetin,禾口 Kaempferol ； Isoflavenes :phenoxodiol ；Anthocyanins :Antirrhinin, Chrysanthenin, Malνin, Myrti11 in, Oenin Primulin, Protocyanin, Tulipanin ；3-deoxyanthocyanidin Apigeninidin, Columnidin, Diosmetinidin, Luteolinidin, Tricetinidin ； Anthocyanidins :Aurantinidin, Cyanidin, Delphinidin, Europinidin, Luteolinidin, Malvidin, Pelargonidin, Peonidin, Petunidin, Rosinidin ；3-Hydroxyflavanones Dihydrokaempferol, Dihydroquercetin ；Flavanones :Eriodictyol, Hesperetin, Homoeriodictyol, Naringenin ；Flavonols :Fisetin, Isorhamnetin, Kaempferol, Myricetin, Pachypodol, Quercetin, Rhamnazin, Morin ；及其才目應(yīng)白勺昔化物；或(3)至少有一個(gè)可以抑制細(xì)胞的反應(yīng)缺氧缺氧誘導(dǎo)因子抑制劑，包括，但不限 T :2,2-dimethybenzopyran it -π ^J], chetomin, 2-methoxyestradiol (2ME2), PX-478, 17-N-allylamino-17-demethoxygeldanamycin(17-AAG), EZN-2968, camptothecins, NSC 644221,3-(5' -hydroxymethyl-2' -furyl)-1-benzylindazole (YC-I), rapamycin，禾口針對(duì) HIF-1RX-0047的decoy寡核苷酸；或(4)至少有一個(gè)包括上述和下列的可抑制IKK活性并存在于藥學(xué)可接受的介質(zhì)中的IKK的抑制劑的化合物。至少一個(gè)IKK的抑制劑可選自，并不限于下列化合物i)此前已知的具有IKK抑制劑性能的化合物，包括，但不限于SPC839 (Signal Pharmaceutical Inc.),苯胺基嘧啶衍生物(Signal Pharmaceutical Inc.), PS1145(Millennium Pharmaceutical he.)，BMS-345541*(IKK 的抑制劑 III，Smithkilne Beecham Corp.), SC-514* (SmithkilneBeecham Corp.), Amino-imidazolecarboxamide 衍生物(Smithkilne Beecham Corp. )，Ureudo-thiophenecarboxamide 哲 生物(P可斯禾[!康)，Diarylpybidine 衍生物(拜耳)，Pyridooxazinone衍生物(拜耳)，Indolecarboxamide衍生物(安萬(wàn)特制藥)，苯并咪唑甲酰胺衍生物(安萬(wàn)特制藥)，吡唑并[4，3-C]喹啉衍生物(Pharmacia 公司)，Imidazolylquinoline-carbxaldehyde semicarbazide ttj L (Tulark 公司)， Pyridyl Cyanoguanidine 衍生物(獅子座制藥)，IKK 抑制肽(CalBiochem)，IKK-2 抑制劑 IV[5-(P-氟苯基)-2-脲]噻吩 3-甲酰胺(CalBiochem)，IKK 的抑制劑 II (ffedelolactone,CalBiochem)，IKK 抑制劑 VII (CalBiochem)，IKK-2 抑制劑 V (N-(3，5_Bis_trif Iuorometh yIpheny1)-5-chloro-2-hydroxybenzamide IMD-0354, CalBiochem, CalBiochem), IKK-2 抑制劑VI (5-苯基-2-脲基)噻吩3-甲酰胺，CalBiochem)，IKK-2抑制劑VIII (ACHP 2-Amino_6-(2-(eyelopropyImethoxy)-6-hydroxyphenyl)~4~(4-piperidinyl)-3-pyr idinecarbonitrile，CalBiochem)。ii)在某些體現(xiàn)，IKK的抑制劑組可另外包括具有抑制IKK的活性的，并已發(fā)現(xiàn)具有抗腫瘤作用的化合物，包括，但不限于PS1145 (Millennium Pharmaceutical Inc.)，BMS-345541*(IKK 的抑制劑 III，施貴寶制藥研究所)。本發(fā)明的一個(gè)體現(xiàn)，提供了一個(gè)使用誘導(dǎo)癌細(xì)胞死亡和腫瘤消退的治療癌癥病人的治療方案在。據(jù)此，聯(lián)合應(yīng)用第一個(gè)上述可抑制癌細(xì)胞的表面呼吸的化合物和第二個(gè)上述可抑制癌細(xì)胞缺氧反應(yīng)的化合物，這種聯(lián)合用藥的治療方案用有效劑量的上述的藥物配方抑制癌細(xì)胞表面呼吸。這種治療方法可用于達(dá)到協(xié)同誘導(dǎo)癌細(xì)胞死亡的抗癌療法。本發(fā)明的又一體現(xiàn)是上述的第一個(gè)化合物和上述的第二個(gè)化合物用于治療癌細(xì)胞時(shí)，二者可同時(shí)和/或以任何先后順序應(yīng)用。這一應(yīng)用方法適用于在此以上和以下的每一個(gè)說(shuō)明，是一個(gè)更可取的體現(xiàn)。每一個(gè)藥物，可通過(guò)口服，腹腔內(nèi)注射，肌肉內(nèi)注射，靜脈內(nèi)注射，靜脈內(nèi)輸液，內(nèi)動(dòng)注脈灌，動(dòng)脈內(nèi)注射，以及通過(guò)皮膚滲透給藥。當(dāng)應(yīng)用第三個(gè)化合物時(shí)，它可以與上述兩種藥物以任何順序配合給藥，治療。治療劑量和時(shí)間表可由業(yè)內(nèi)專(zhuān)業(yè)人員確定。此治療策略的目標(biāo)是在腫瘤細(xì)胞中的能量代謝的根本性的變化。因此，這種治療方法可用于廣譜的腫瘤類(lèi)型。WST-3或其有效的替代物與芹菜素或其有效的替代物的聯(lián)合治療方案可治療的腫瘤是腹部腫瘤，腹膜腫瘤，腹膜后腫瘤，肛門(mén)腺腫瘤，骨腫瘤， 釉質(zhì)，股骨腫瘤，顱骨腫瘤，脊柱腫瘤，乳腺腫瘤，男性乳腺腫瘤，乳腺癌。導(dǎo)管癌，葉狀腫瘤，消化系統(tǒng)腫瘤，膽道腫瘤，胃腸腫瘤，肝腫瘤，胰腺腫瘤，腹腔腫瘤，內(nèi)分泌腺腫瘤，腎上腺腫瘤，多發(fā)性?xún)?nèi)分泌腫瘤，卵巢腫瘤，胰腺腫瘤，副腫瘤內(nèi)分泌綜合征，甲狀旁腺腫瘤，垂體腫瘤，睪丸腫瘤，甲狀腺腫瘤，眼部腫瘤，結(jié)膜腫瘤，眼眶腫瘤，視網(wǎng)膜腫瘤，葡萄膜腫瘤，頭頸部腫瘤，食管腫瘤，面部腫瘤，□腔腫瘤，耳鼻喉腫瘤，甲狀旁腺腫瘤，甲狀腺腫瘤，氣管腫瘤，血液腫瘤，骨髓腫瘤，動(dòng)物乳腺腫瘤，實(shí)驗(yàn)性乳腺腫瘤，神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，顱神經(jīng)腫瘤，聽(tīng)神經(jīng)瘤，神經(jīng)系統(tǒng)副腫瘤綜合征，周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)腫瘤，盆腔腫瘤，皮膚腫瘤，棘皮瘤，皮脂腺腫瘤，汗腺腫瘤，軟組織腫瘤，肌肉腫瘤，血管性腫瘤， 脾臟腫瘤，胸部腫瘤，心臟腫瘤，縱隔腫瘤，呼吸道腫瘤，胸腺腫瘤，泌尿生殖系統(tǒng)腫瘤，女性生殖器腫瘤，男性生殖器腫瘤，泌尿系腫瘤，獸醫(yī)性病腫瘤；惡性組織細(xì)胞病濾泡樹(shù)突細(xì)胞肉瘤，Interdigitating Dendritic Cell Sarcoma，組織細(xì)胞肉瘤，朗格漢斯細(xì)胞肉瘤，白血病流行性牛白血病，貓白血病，毛細(xì)胞白血病，淋巴細(xì)胞白血病，嗜堿肥大細(xì)胞白血病，粒細(xì)胞性白血病，漿細(xì)胞白血病，輻射誘導(dǎo)的白血?。涣馨凸苣[瘤淋巴管瘤， Lymphangiomyoma, Lymphangiosarcoma ；淋巴瘤何杰金氏病，小腸疾病免疫增生疾病，何杰金氏淋巴瘤，復(fù)雜和混合腫瘤腺淋巴瘤，PleomorphicAdenoma, Adenomyoepithelioma, Adenosquamous Carcinoma,肉瘤，肝母細(xì)胞瘤，間葉，Malignant Mixed月中瘤，中胚層混合腫瘤，Mullerian Mixed Tumor，肌上皮瘤，Mesoblastic N印hroma，肺母細(xì)胞瘤，橫紋肌樣瘤，Endometrial StromalSarcoma,胸腺瘤，腎母細(xì)胞瘤，結(jié)締組織和軟組織腫瘤脂肪組織腫瘤，結(jié)締組織組織腫瘤，肌肉組織腫瘤，血管周?chē)掀ぜ?xì)胞癌，肉瘤，生殖細(xì)胞和胚胎腫瘤EmbryonalCarcinoma,脊索瘤，生殖細(xì)胞，Gonadoblastoma, Meson印hroma,神經(jīng)夕卜胚層腫瘤，畸胎癌，畸胎瘤，滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤，腺上皮性腫瘤腺瘤，癌，附件和皮膚附件腫瘤，基底細(xì)胞癌，黏液和漿液性囊性腫瘤，小葉和髓質(zhì)性導(dǎo)管癌，纖維上皮癌，間皮癌，神經(jīng)上皮癌， 鱗狀細(xì)胞腫瘤，性腺TissueNeoplasms =Gonadoblastoma,性索-性腺間質(zhì)瘤，神經(jīng)組織腫瘤腦膜瘤神經(jīng)鞘腫瘤，神經(jīng)外胚層瘤，漿細(xì)胞腫瘤多發(fā)性骨髓瘤，漿細(xì)胞瘤，華氏巨球蛋白血癥，血管組織腫瘤纖維血管瘤，血管角化瘤，血管球瘤，血管瘤，血管外皮細(xì)胞瘤，血管肉瘤，腦膜瘤，KaposiSarcoma ；痣和黑色素瘤惡性黑色素瘤，痣，牙源性腫瘤Cementoma， 造釉細(xì)胞瘤，CalcifyingOdontogenic Cyst, SquamousOdontogenic Tumor,牙瘤。2. WST-3和芹菜素的藥物組合成分和癌癥治療的應(yīng)用本發(fā)明的一個(gè)具體體現(xiàn)提供了藥物的組成成分包括(1)至少一種水溶性四唑鹽(WST-3，2-(4-Iodophenyl)-3-(2，4-dinitrophenyl)-5-(2， 4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium，salt，，圖 1A)或，其有效的替代品；(2)至少一個(gè)芹菜素或其有效的替代品。此藥物的成分在藥學(xué)可接受的介質(zhì)中，以最適的濃度，有效治療劑量，，給與需要治療的癌癥病人。聯(lián)合應(yīng)用WST-3和芹菜素可導(dǎo)致協(xié)同的腫瘤特異的死亡。這種效果可以通過(guò)加入 ΜΞ.^^^, Φ ^^ Φ, l-methoxy-5-methyl-phenazinium methyl sulfate (mPMS) 進(jìn)一步加強(qiáng)。如上所述，WST-3是一種由Dojindo公司生產(chǎn)的的水溶性四脞鹽(WST)。直接或間接連接于苯環(huán)的硫酸基團(tuán)增強(qiáng)了化合物分子的水溶性，同時(shí)也使其不能通透于細(xì)胞質(zhì)膜。 與其他WSTS不同的是WST-3包含了一個(gè)2，4_ 二硝基酚(DNP)，并直接連接到四氮唑環(huán)(圖 1)。DNP是一個(gè)氧化磷酸化的解偶聯(lián)劑。它溶解于內(nèi)線(xiàn)粒體膜，形成質(zhì)子特異的通道。 這一通道使線(xiàn)粒體內(nèi)膜外的質(zhì)子可繞過(guò)位于線(xiàn)粒體內(nèi)膜的ATP合成酶，也就是氧化磷酸化的偶聯(lián)過(guò)程，憑借質(zhì)子濃度梯度的驅(qū)動(dòng)進(jìn)入線(xiàn)粒體。這一過(guò)程導(dǎo)致了能源的快速消耗，而不產(chǎn)生ATP。因此，DNP是線(xiàn)粒體的毒藥。它耗盡細(xì)胞內(nèi)的能源和ATP，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。然而，由于WST-3不能通透細(xì)胞質(zhì)，將DNP引入水溶性的四脞鹽WST-3使DNP不能通透于細(xì)胞質(zhì)膜，因此也進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，如此，使得WST3能夠模仿的DNP效應(yīng)作用于細(xì)胞表面解，解偶聯(lián)位于細(xì)胞質(zhì)膜的氧化磷酸化，阻斷腫瘤細(xì)胞tPMET和位于細(xì)胞表面的呼吸，但不影響正常細(xì)胞位于線(xiàn)粒體呼吸過(guò)程。(圖1)因此，WST-3代表了各種不能通透于細(xì)胞膜，但能夠通過(guò)細(xì)胞表面的氧化磷酸化去偶聯(lián)阻斷細(xì)胞表面呼吸的化合物。這種化合物可以這種方式特異阻止tPMET電子轉(zhuǎn)運(yùn)，細(xì)胞表面的呼吸和/或細(xì)胞表面的氧化磷酸化，由此，可特異抑制癌細(xì)胞的細(xì)胞表面的呼吸和/或ATP產(chǎn)生，而不會(huì)影響線(xiàn)粒體在正常的細(xì)胞呼吸。WST-3有效的替代品，包括但不限于化合物，不能通透細(xì)胞質(zhì)膜，同時(shí)具有至少一個(gè)可使氧化磷酸化解偶聯(lián)劑，包括5-chloro-3-tert-butyl-2，-chloro-4，-nitrosalicylani1ide (S-13), sodium 2,3,4,5,6-pentachlorophenolate (PCP),4, 5,6,7-tetrachloro_2-(trifluoromethy1)-ΙΗ-benzimidazole (TTFB), Flufenamic acid (2- [3- (trifluoromethy1)ani1ino]benzoic acid),3,5_di_tert_butyl_4_hydroxy-benzylidenemalononitrile(SF6847), carbonyl cyanide m-chloro phenyl hydrazone(CCCP)禾口 Carbonyl cyanide p- [trifluoromethoxy]-phenyl-hydraz one(FCCP)，和如上“用于抗腫瘤治療的針對(duì)細(xì)胞表面呼吸的化合物”節(jié)中所述的 alpha- (phenylhydrazono) phenylacetonitriIe 的tti生此外，WST-3的功能，氧化磷酸化解偶聯(lián)，也可以被前述“用于抗腫瘤治療的針對(duì)細(xì)胞表面呼吸的化合物” 一節(jié)中所述的不能通透細(xì)胞質(zhì)膜，同時(shí)也具有直接或間接的抑制和/或阻斷tPMET的功能和細(xì)胞表面的呼吸的功能，抑制tNOX的化合物取代，包括1) 直接作用于tPMET的電子中間受體，包括，但不限于MPMS和輔酶Ql ； 2) tPMET的基質(zhì)， 如NADH ；3)呼吸抑制劑，如氫氰酸類(lèi)(CN)，鐵氰化鉀，砷和砷化群體；4) tNOX抑制劑，包括但不限于兒茶素兒茶素，(-)_表兒茶素(EC), (-)_兒茶素(EG), (-)_兒茶素沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGC)，(-)表兒茶素-3-沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(ECG)，和(-)-沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)；辣椒素，辣椒，Capsicum vanilloids, Capsibiol-Τ和一個(gè) isoflavenes 的類(lèi)似物的衍生物，phenoxodiol ；BTS 的衍生物，6_[N_ Q-phenylethyl)] benzo [b] thiophenesulphonamide 1，1-dioxide，非甾體類(lèi)消炎藥(NSAIDs)，吡羅昔康，阿司匹林，布洛芬，萘普生，和塞來(lái)昔布，和鹽酸阿霉素(亞德里亞霉素)..上述芹菜素是類(lèi)黃酮，是一個(gè)細(xì)胞的多功能抑制劑。它的功能包括，但不限于抑制缺氧誘導(dǎo)因子1 (HIF-I)表達(dá)和/或活性，抑制酪蛋白激酶II (CK2)，NF-kappaB,誘導(dǎo)p53活化，暫停細(xì)胞周期的進(jìn)程，以維持基因組穩(wěn)定，誘導(dǎo)產(chǎn)生的活性氧(R0Q等。芹菜素的有效替代品選自以下各類(lèi)化合物，包括至少一個(gè)黃酮，包括但不限于自然存在的黃酮類(lèi)化合物，如=Tricin,木犀草素，Tangeritin,白楊，6-羥基黃酮，黃芩， kutellarein，漢黃芩素和合成的黃酮類(lèi)化合物，如地奧司明，F(xiàn)lavoxate0芹菜素的功能也可以被至少一個(gè)選自其他f 1 avones類(lèi)亞群的f 1 avono i ds替 :flavonols, flavannones, flacanonols, catechins, isofIavones ； M 一 yIv 自
其它的生物類(lèi)黃酮亞類(lèi)和其包括帶有或不帶有乙?；蜍栈锏念?lèi)黃酮化合物的異構(gòu)體，包括自然存在的，人工修飾的酮異構(gòu)體和人工合成的化合物，包括，但不限于來(lái)自2 -phenylchromen-4-one(2-phenyl-l,4-benzopyrone)的結(jié)構(gòu)的黃酮類(lèi)化合物的衍生物，(如槲皮素，戸丁)；來(lái)自 3-phenylchromen-4-one (3-phenyl-l, 4-benzopyrone) 結(jié)構(gòu)的衍生物的異黃酮，來(lái)自 4-phenylcoumarine (4-phenyl-l, 2-benzopyrone)結(jié)構(gòu)的衍生物的neoflavonoids，作為非酮多羥基酚化合物類(lèi)f lavanoids :flavanoids， flavan-3-ols and catechins。例如，包括，但不限于Biochanin A，Daidzein, Daidzin, Formononetin, Genistein, Coumestrol, Puerarin ；flavan-3-ols :catechins (catechin， epicatechin(EG)，epicatechin，gallate (EGC),禾口 epigallocatechin gallate (EGCG))； flavonol :myricetin，quercetin， 禾口 Kaempferol ；Isoflavenes :phenoxodiol ； Anthocyanins :Antirrhinin， Chrysanthenin， Malvin， Myrtillin， Oenin Primulin， Protocyanin，Tulipanin ；3-deoxyanthocyanidin :Apigeninidin，Columnidin， Diosmetinidin，Luteolinidin，Tricetinidin ；Anthocyanidins :Aurantinidin， Cyanidin，Delphinidin，Europinidin，Luteolinidin，Malvidin，Pelargonidin，Peonidin， Petunidin，Rosinidin ；3-Hydroxyflavanones :Dihydrokaempferol，Dihydroquercetin ； Flavanones :Eriodictyol，Hesperetin, Homoeriodictyol，Naringenin ；Flavonols Fisetin, Isorhamnetin, Kaempferol, Myricetin, Pachypodol, Quercetin, Rhamnazin, Morin ；及其相應(yīng)的苷化物；或此外，芹菜素的功能也可以被至少有一個(gè)可以抑制細(xì)胞的反應(yīng)缺氧缺氧誘導(dǎo)因子抑制劑取代，，包括，但不限于2，2-dimethybenzopyran化合物，chetomin, 2-methoxyestradiol(2ME2), PX-478,17-N-allylamino-17-demethoxygeldanamycin(17-A AG),EZN-2968,camptothecins,NSC 644221,3-(5' -hydroxymethyl-2'-furyl)-1-benzyli ndazole (YC-I)，rapamycin，和針對(duì) HIF-1RX-0047 的 decoy 寡核苷酸.芹菜素的功能，也可以由至少一個(gè)存在于藥學(xué)上可接受的介質(zhì)之中的，可抑制IKK 活性的，IKK抑制劑的化合物取代。至少一個(gè)IKK抑制劑選自，但不限于下列化合物i)此前已知的具有IKK抑制劑性能的化合物，包括，但不限于SPC839 (Signal Pharmaceutical Inc.),苯胺基嘧啶衍生物(Signal Pharmaceutical Inc.), PS1145(Millennium Pharmaceutical he.)，BMS-345541*(IKK 的抑制劑 III，Smithkilne Beecham Corp.), SC-514*(Smithkilne Beecham Corp.),Amino—imidazolecarboxamidetii生物(Smithkilne Beecham Corp. )，Ureudo-thiophenecarboxamide 哲 生物(P可斯禾[!康)，Diarylpybidine 衍生物(拜耳)，Pyridooxazinone衍生物(拜耳)，Indolecarboxamide衍生物(安萬(wàn)特制藥)，苯并咪唑甲酰胺衍生物(安萬(wàn)特制藥)，吡唑并[4，3-C]喹啉衍生物(Pharmacia 公司)，Imidazolylquinoline-carbxaldehyde semicarbazide ttj L (Tulark 公司)， Pyridyl Cyanoguanidine 衍生物(獅子座制藥)，IKK 抑制肽(CalBiochem)，IKK-2 抑制劑 IV[5-(P-氟苯基)-2-脲]噻吩 3-甲酰胺(CalBiochem)，IKK 的抑制劑 II (ffedelolactone, CalBiochem)，IKK 抑制劑 VII (CalBiochem)，IKK-2 抑制劑 V (N-(3，5_Bis_trif Iuorometh ylphenyl)-5-chloro-2_hydroxybenzamide IMD-0354, CalBiochem, CalBiochem), IKK-2 抑制劑VI (5-苯基-2-脲基)噻吩3-甲酰胺，CalBiochem)，IKK-2抑制劑VIII (ACHP 2-Amino_6- (2-(cyclopropylmethoxy)-6-hydroxyphenyl)~4~(4-piperidinyl)-3-pyr idinecarbonitrile，CalBiochem)。ii)在某些體現(xiàn)，IKK的抑制劑組可另外包括具有抑制IKK的活性的，并已發(fā)現(xiàn)具有抗腫瘤作用的化合物，包括，但不限于PS1145 (Millennium Pharmaceutical Inc.)，BMS-345541*(IKK 的抑制劑 III，施貴寶制藥研究所)。上述第三個(gè)化合物，MPMS，如上所述，可由一個(gè)電子中間受體(IEA)取代。mPM的有效替代品包括，但不限于輔酶Ql。一個(gè)體現(xiàn)提供了用于誘導(dǎo)癌細(xì)胞死亡，抑制腫瘤，治療癌癥病人的治療方案。已知，根據(jù)此方案，聯(lián)合應(yīng)用WST-3或其有效替代品，和芹菜素或其有效替代品用于協(xié)同誘導(dǎo)癌細(xì)胞死亡，和抑制腫瘤生長(zhǎng)。因此，癌癥細(xì)胞的治療通過(guò)應(yīng)用有效劑量的WST-3，或至少一個(gè)其有效的替代品之一，結(jié)合有效劑量的芹菜素或至少一個(gè)其有效的替代品之一，于藥學(xué)可接受的介質(zhì)中，和持續(xù)有效的治療時(shí)間。本發(fā)明的另一個(gè)治療癌細(xì)胞的體現(xiàn)是WST-3和至少一個(gè)芹菜素，或其任何有效的替代物，WST-3和芹菜素二者可同時(shí)和/或以任何順序給藥，此項(xiàng)體現(xiàn)適用于上述和下述的每一個(gè)體現(xiàn)，成為更可取的體現(xiàn)。本發(fā)明的另一個(gè)治療癌細(xì)胞的體現(xiàn)是WST-3和至少有一個(gè)IKK抑制劑或其所有有效的替代品，WST-3 and IKK的抑制劑二者可同時(shí)和/或以任何順序給藥，此項(xiàng)體現(xiàn)適用于上述和下述的每一個(gè)體現(xiàn)，成為更可取的體現(xiàn)。當(dāng)應(yīng)用第三化合物的情況下，給藥治療的先后順序可以為任何順序。這意味著，第三化合物是可以治療的同時(shí)或相繼在治療的過(guò)程中的任何順序給藥。WST-3在體外有效劑量可能介于0. 001-500M或更低，但可以更高。芹菜素在體外有效劑量范圍之間0. 001-500M。在體外有效劑量mPMS的，第三個(gè)化合物，劑量范圍為0. 001-100M。WST-3或至少一個(gè)其有效的替代品，和芹菜素，或者至少一個(gè)其有效的替代品，可同時(shí)，分別，和/或以任何順序，給予癌細(xì)胞或癌癥患者。每個(gè)藥物，可通過(guò)口服，腹膜內(nèi)注射，肌肉內(nèi)注射，靜脈內(nèi)注射，靜脈輸液內(nèi)，內(nèi)動(dòng)脈灌注，動(dòng)脈內(nèi)注射，以及通過(guò)皮膚滲透給藥。WST-3或至少其有效的替代品之一的治療時(shí)間可持續(xù)15分鐘至8小時(shí)之間或更長(zhǎng)的時(shí)間。芹菜或至少其有效的替代品之一的治療時(shí)間可持續(xù)15分鐘到連續(xù)M小時(shí)或更長(zhǎng)的時(shí)間。換句話(huà)說(shuō)，可首先單獨(dú)給予治療有效劑量的WST-3或至少一個(gè)其有效的替代品15 分鐘至8小時(shí)，然后給予芹菜素或至少一個(gè)其有效的替代品1至M小時(shí)；另外一種方法，給予腫瘤細(xì)胞芹菜素，或至少一個(gè)其有效的替代品，另外1至M小時(shí)，然后，給予WST-3，或至少一個(gè)其有效替代品15分鐘至8小時(shí)；另外一種方法，給予腫瘤細(xì)胞芹菜素，或至少一個(gè)其有效的替代品和WST-3或至少一個(gè)其有效的替代品，15分鐘至8小時(shí)，然后換為芹菜素，或至少一個(gè)其有效的替代品 1-24小時(shí)，或另外一種方法，給予腫瘤細(xì)胞芹菜素，或至少一個(gè)其有效的替代品M小時(shí)，然后， 給予WST-3，或至少一個(gè)其有效替代品15分鐘至8小時(shí)，另外一種方法，同時(shí)給予腫瘤細(xì)胞芹菜素，或至少一個(gè)其有效的替代品和WST-3 或至少一個(gè)其有效的替代品，15分鐘至8小時(shí)。另外一種方法，同時(shí)持續(xù)給予腫瘤細(xì)胞芹菜素，或至少一個(gè)其有效的替代品和 WST-3或至少一個(gè)其有效的替代品，WST-3和芹菜素這些化合物的治療時(shí)間，和實(shí)際治療劑量可由醫(yī)生或業(yè)內(nèi)專(zhuān)業(yè)人
士調(diào)整掌握。為治療的首選的體現(xiàn)，是給予腫瘤細(xì)胞芹菜素或至少一個(gè)其有效的替代品和 WST-3或至少一個(gè)其有效的替代品4個(gè)小時(shí)，然后，換為芹菜素，或者至少一個(gè)其有效替代品，另外M小時(shí)。這是因?yàn)槲覀兌鄶?shù)的數(shù)據(jù)所用的條件。如上所述，此WST-3與芹菜素結(jié)合的治療方案針對(duì)的目標(biāo)是癌細(xì)胞的能量代謝的根本性的改變，使這種治療對(duì)廣譜腫瘤類(lèi)型有效。WST-3或至少一個(gè)其有效的替代品與芹菜素或其至少一個(gè)其有效的替代品聯(lián)合應(yīng)用可治療的腫瘤為癌和肉瘤，包括，但不限于腹部腫瘤，腹膜后腫瘤，肛門(mén)腺腫瘤，骨腫瘤，釉質(zhì)，股骨腫瘤，顱骨腫瘤，脊柱腫瘤，乳腺腫瘤， 男性乳腺腫瘤，乳腺癌。導(dǎo)管癌，葉狀腫瘤，消化系統(tǒng)腫瘤，膽道腫瘤，胃腸腫瘤，肝腫瘤， 胰腺腫瘤，腹腔腫瘤，內(nèi)分泌腺腫瘤，腎上腺腫瘤，多發(fā)性?xún)?nèi)分泌腫瘤，卵巢腫瘤，胰腺腫瘤， 副腫瘤內(nèi)分泌綜合征，甲狀旁腺腫瘤，垂體腫瘤，睪丸腫瘤，甲狀腺腫瘤，眼部腫瘤，結(jié)膜腫瘤，眼眶腫瘤，視網(wǎng)膜腫瘤，葡萄膜腫瘤，頭頸部腫瘤，食管腫瘤，面部腫瘤，口腔腫瘤，耳鼻喉腫瘤，甲狀旁腺腫瘤，甲狀腺腫瘤，氣管腫瘤，血液腫瘤，骨髓腫瘤，動(dòng)物乳腺腫瘤，實(shí)驗(yàn)性乳腺腫瘤，神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，顱神經(jīng)腫瘤，聽(tīng)神經(jīng)瘤，神經(jīng)系統(tǒng)副腫瘤綜合征，周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)腫瘤，盆腔腫瘤，皮膚腫瘤，棘皮瘤，皮脂腺腫瘤，汗腺腫瘤，軟組織腫瘤，肌肉腫瘤，血管性腫瘤，脾臟腫瘤，胸部腫瘤，心臟腫瘤，縱隔腫瘤，呼吸道腫瘤，胸腺腫瘤，泌尿生殖系統(tǒng)腫瘤，女性生殖器腫瘤，男性生殖器腫瘤，泌尿系腫瘤，獸醫(yī)性病腫瘤； 惡性組織細(xì)胞病濾泡樹(shù)突細(xì)胞肉瘤，Interdigitating Dendritic Cell Sarcoma，組織細(xì)胞肉瘤，朗格漢斯細(xì)胞肉瘤，白血病流行性牛白血病，貓白血病，毛細(xì)胞白血病，淋巴細(xì)胞白血病，嗜堿肥大細(xì)胞白血病，粒細(xì)胞性白血病，漿細(xì)胞白血病，輻射誘導(dǎo)的白血?。涣馨凸苣[瘤淋巴管瘤，Lymphangiomyoma, Lymphangiosarcoma ；淋巴瘤何杰金氏病，小腸疾病免疫增生疾病，何杰金氏淋巴瘤，復(fù)雜和混合腫瘤腺淋巴瘤，PleomorphicAdenoma, Adenomyoepithelioma, Adenosquamous Carcinoma,肉瘤，肝母細(xì)胞瘤，間葉，Malignant Mixed 腫瘤，中胚層混合腫瘤，Mullerian Mixed Tumor,肌上皮瘤，Mesoblastic Nephroma, 肺母細(xì)胞瘤，橫紋肌樣瘤，Endometrial StromalSarcoma,胸腺瘤，腎母細(xì)胞瘤，結(jié)締組織和軟組織腫瘤脂肪組織腫瘤，結(jié)締組織組織腫瘤，肌肉組織腫瘤，血管周?chē)掀ぜ?xì)胞癌， 肉瘤，生殖細(xì)胞和胚胎腫瘤EmbryonalCarcinoma，脊索瘤，生殖細(xì)胞，Gonadoblastoma, Mesonephroma,神經(jīng)外胚層腫瘤，畸胎癌，畸胎瘤，滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤，腺上皮性腫瘤腺瘤， 癌，附件和皮膚附件腫瘤，基底細(xì)胞癌，黏液和漿液性囊性腫瘤，小葉和髓質(zhì)性導(dǎo)管癌，纖維上皮癌，間皮癌，神經(jīng)上皮癌，鱗狀細(xì)胞腫瘤，性腺TissueNeoplasms =Gonadoblastoma, 性索-性腺間質(zhì)瘤，神經(jīng)組織腫瘤腦膜瘤神經(jīng)鞘腫瘤，神經(jīng)外胚層瘤，漿細(xì)胞腫瘤多發(fā)性骨髓瘤，漿細(xì)胞瘤，華氏巨球蛋白血癥，血管組織腫瘤纖維血管瘤，血管角化瘤，血管球瘤，血管瘤，血管外皮細(xì)胞瘤，血管肉瘤，腦膜瘤，KaposiSarcoma ；痣和黑色素瘤惡性黑色素瘤，痣，牙源性腫瘤:Cementoma，造釉細(xì)胞瘤，CalcifyingOdontogenic Cyst, SquamousOdontogenic Tumor,牙瘤。因此，本發(fā)明的實(shí)施例提供了一個(gè)聯(lián)合用藥治療癌癥病人的方法，包括(1)阻斷 tPMET，細(xì)胞表面的呼吸，和/或細(xì)胞質(zhì)膜氧化磷酸化解偶聯(lián)的方法，或tNOX抑制劑，結(jié)合 (2)抑制細(xì)胞對(duì)缺氧的反應(yīng)，抑制缺氧誘導(dǎo)因子，NFkappaB, IKK的活性，或模仿一個(gè)或多個(gè)預(yù)定的芹菜素對(duì)癌細(xì)胞的作用。阻斷tPMET和/或細(xì)胞質(zhì)膜氧化磷酸化解偶聯(lián)的方法包括但不限于不能通透細(xì)胞質(zhì)膜的tMPET抑制劑，細(xì)胞表面的氧化磷酸化的解偶聯(lián)劑，或有效的替代品，和tNOX抑制劑，如上面列出的能夠抑制跨質(zhì)膜的電子轉(zhuǎn)移的化合物，或氧化磷酸化過(guò)程，或耦合電子傳遞和氧化磷酸化的，且不能通透細(xì)胞質(zhì)膜的化合物。抑制細(xì)胞對(duì)缺氧的反應(yīng)，抑制缺氧誘導(dǎo)因子，NFkappaB活性，或模仿一個(gè)或多個(gè)已知的芹菜素的影響的方法，包括，但不限于應(yīng)用芹菜素的治療，或其有效的替代品，和如上所列的黃酮類(lèi)化合物，缺氧誘導(dǎo)因子抑制劑，IKK抑制劑。阻斷tPMET，細(xì)胞表面的呼吸，和/或細(xì)胞質(zhì)膜氧化磷酸化解偶聯(lián)的方法，或tNOX 抑制劑的方法，與抑制細(xì)胞對(duì)缺氧的反應(yīng)，抑制缺氧誘導(dǎo)因子，NFkappaB, IKK的活性，或模仿一個(gè)或多個(gè)預(yù)定的芹菜素對(duì)癌細(xì)胞的作用的方法的應(yīng)用與治療癌細(xì)胞和腫瘤病人的順序可為同時(shí)，或以任何先后順序，并以有效的劑量和有效的時(shí)間進(jìn)行。
上述此聯(lián)合用藥的治療效果可通過(guò)加入第三個(gè)化合物，IEA，提高療效。適于此治療的IEA包括有效劑量的存在于藥學(xué)可接受的介質(zhì)中的mPMS，和輔酶Ql。上述第三個(gè)化合物可與前述的藥物以任何順序關(guān)系給藥。本發(fā)明還提供了用于誘導(dǎo)癌細(xì)胞死亡和抑制癌癥患者的腫瘤的生長(zhǎng)的額外的方法。根據(jù)本發(fā)明，已發(fā)現(xiàn)聯(lián)合應(yīng)用有效濃度的類(lèi)黃酮，芹菜素，或其有效的替代品，與WST-3 或其有效替的代品的組合，可協(xié)同誘導(dǎo)癌細(xì)胞死亡。因此，本發(fā)明為需要治療癌癥的癌癥病人提供了一個(gè)包括有效劑量的至少一個(gè)黃酮類(lèi)化合物，具體而言，芹菜素，或如上所述的有效替代品，和有效劑量的WST-3或至少一個(gè)WST-3有效的替代品，于藥學(xué)可接受的介質(zhì)中的組合藥物配方的藥品成分和治療方案。適用的黃酮類(lèi)化合物包括，但不僅限于本說(shuō)明前述的芹菜素和其有效的替代物于藥學(xué)上可接受的介質(zhì)中。芹菜素的有效替代品包括表現(xiàn)出至少一種芹菜素在藥學(xué)上可接受的介質(zhì)中的抑制性活性的化合物。適用的至少一個(gè)WST-3的有效的替代品，包括，但不限于，可滿(mǎn)足本說(shuō)明如上所述的包括DNP和四唑鹽及其有效替代品，使之不能通透于細(xì)胞質(zhì)膜的各個(gè)組成部分的，并以最適濃度，于藥學(xué)上可接受的介質(zhì)中每一個(gè)化合物，。芹菜素的有效濃度可能會(huì)因腫瘤細(xì)胞的種類(lèi)不同而異，根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型。首選的體外劑量范圍是0. 001-500M。本說(shuō)明所有以上和以下的體現(xiàn)，WST-3的有效濃度和有效的替代品的有效濃度可能會(huì)各不相同，每個(gè)組份的有效濃度可能會(huì)與WST-3不同，體外和體內(nèi)的有效濃度也可能不相同。WST-3于藥學(xué)可接受的介質(zhì)中，在體外實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)的首選濃度是0. 001-500M。本發(fā)明的一個(gè)具體體現(xiàn)，可以以任何順序給予WST-3，或至少有一個(gè)WST-3有效的替代品，和芹菜素，或至少一個(gè)芹菜素的有效替代品的。具體來(lái)說(shuō)，WST-3或至少一個(gè)WST-3 有效的替代品，和芹菜素，或者少一個(gè)芹菜素的有效替代品，可同時(shí)或順序的給予細(xì)胞或病人。換句話(huà)說(shuō)，芹菜素或芹菜素的有效替代品，或WST-3或至少有一個(gè)替代的WST-3至少可以首先給予，或者，WST-3或至少一個(gè)WST-3的有效替代品，和芹菜素或至少一個(gè)芹菜素的有效替代品，可同時(shí)給予。在本發(fā)明的治療的首選順序是同時(shí)給予WST-3或WST-3有效的替代品和芹菜素或芹菜素的有效替代品，然后，移除WST-3后，再次添加芹菜素，并保持與細(xì)胞的接觸另一段時(shí)間。一個(gè)特定的體現(xiàn)，WST-3的治療時(shí)間是與細(xì)胞接觸15分鐘至8小時(shí)。首選的時(shí)間是30分鐘至4小時(shí)之間。更可取的時(shí)間是2-4小時(shí)之間。從所有以上和以下的實(shí)施方案， 去除WST-3以及其有效的替代品是為此治療方法誘導(dǎo)癌癥細(xì)胞死亡所必需?？傊?，本發(fā)明提供一種治療癌癥的方法，通過(guò)給予需要的病人有效劑量的WST-3， 或至少一個(gè)其有效的替代品，和芹菜素，或至少一個(gè)其有效的替代品于藥學(xué)可接受的介質(zhì)中。此腫瘤聯(lián)合治療方案可用于廣譜的癌癥。使用本治療方案可治療的癌癥已在此說(shuō)明前述中列出。本發(fā)明的優(yōu)越性根據(jù)上面的描述，此治療方法對(duì)癌癥的治療具有高效率，低毒性，和廣譜的優(yōu)勢(shì)。
2. WST-3的化學(xué)結(jié)構(gòu)代表了一類(lèi)不能通透細(xì)胞質(zhì)膜，并能夠干擾tPMET和細(xì)胞表面的呼吸，并將其作用的活性限制在細(xì)胞表面上，而不影響正常細(xì)胞的線(xiàn)粒體呼吸的化合物的模型。細(xì)胞呼吸是細(xì)胞存活的關(guān)鍵，腫瘤細(xì)胞依靠細(xì)胞表面的氧氣消耗，這種模式提供了一個(gè)腫瘤特異的靶目標(biāo)。3.這種聯(lián)合用藥的組合治療作用于tPMET，細(xì)胞表面的呼吸，以阻止細(xì)胞的能量代謝，同時(shí)抑制缺氧誘導(dǎo)因子或細(xì)胞對(duì)缺氧的反應(yīng)。這種組合的戰(zhàn)略，進(jìn)一步增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)缺氧的敏感性，導(dǎo)致協(xié)同誘導(dǎo)癌細(xì)胞的死亡的療效。這是一種更有效的抗癌治療方法。4.由于有氧glyclysis和tPMET是癌癥特異的，和共同的改變，存在于幾乎所有類(lèi)型的癌細(xì)胞。此治療方法的靶目標(biāo)是癌細(xì)胞共同的根本性的改變。這種治療方法可應(yīng)用于治療廣譜的腫瘤的類(lèi)型。5.這種組合治療采用兩個(gè)非細(xì)胞毒性化合物，達(dá)到協(xié)同誘導(dǎo)癌細(xì)胞死亡的的效果。與常規(guī)化療相比，這種組合治療是安全的，或者至少是毒性較低的。總之，這本發(fā)明提供了一種組合治療抗癌藥物開(kāi)發(fā)戰(zhàn)略的新概念。這種組合治療， 將有選擇性地阻止癌細(xì)胞的細(xì)胞表面的呼吸，由此，抑制癌細(xì)胞的呼吸，同時(shí)抑制其應(yīng)對(duì)缺氧的反應(yīng)能力。由此從兩個(gè)方面抑制干擾腫瘤細(xì)胞的能量代謝，以獲得協(xié)同誘導(dǎo)癌細(xì)胞死亡。此外，這些治療方法利用非細(xì)胞毒性化合物協(xié)同誘導(dǎo)腫瘤特異性細(xì)胞死亡，它提供了一個(gè)新的抗癌藥物的發(fā)展戰(zhàn)略，以達(dá)到高效，安全，廣譜和腫瘤特異性抗癌治療的結(jié)果。雖然上面的描述中包含太多的特殊性，這些不應(yīng)該被解釋為限制的實(shí)施方案的范圍，但只是勾畫(huà)出一些目前首選的化身。例如，WST-3和的芹菜素每一個(gè)分別代表了具有類(lèi)似功能的化合物的種類(lèi)。同樣，WST-3和芹菜素的結(jié)合代表了一種新的將tPMET作為目標(biāo)， 并結(jié)合抑制細(xì)胞缺氧反應(yīng)和其他一些相關(guān)的過(guò)程的新的戰(zhàn)略策略和抗癌藥物開(kāi)發(fā)的新途徑相結(jié)合。因此，實(shí)施方案的范圍確定應(yīng)根據(jù)權(quán)利要求和相關(guān)法律等價(jià)物，而不是給定的例子。給藥方式及藥品成分和化合物本發(fā)明涉及的藥物成分，可以通過(guò)任何合適的方式給予，例如，通過(guò)注射，口服， 鼻腔吸入，或其他方法。一般來(lái)說(shuō)，本發(fā)明所包括的藥品成分還報(bào)括其他藥用的稀釋劑， 防腐劑，增溶劑，乳化劑，助劑和/或運(yùn)營(yíng)商載體。這些成分可以包括各種緩沖劑成分的稀釋劑(如Tris-HCl，醋酸鹽，磷酸鹽)，pH值和離子強(qiáng)度，如清潔劑和助溶劑(例如，吐溫80，Polysorbate80)添加劑，抗氧化劑(例如，抗壞血酸，焦亞硫酸鈉)，防腐劑(例如， Thimersol，苯甲醇)和膨脹的物質(zhì)(如乳糖，甘露醇)。這些成分可以被納入特殊微粒，如聚乳酸，聚羥基酸等，或?qū)⒅|(zhì)體聚合化合物的工藝制作。這些成分可能會(huì)影響本發(fā)明的藥物的物理性能，狀況，穩(wěn)定性，體內(nèi)釋放的速率和速度，藥物的體內(nèi)清除速體率。例如，見(jiàn) Remington' s Pharmaceutical Sciences,18th Ed. (1990,Mack Publishing Co. ,Easton, Pa. 18042)pages 1435-1712。本發(fā)明的藥物成分，可以，比如說(shuō)，在液態(tài)形式，或可以在干燥粉末狀(如凍干)。藥物組合物的應(yīng)用方法已在以上給予介紹。另一個(gè)要點(diǎn)是，本發(fā)明的藥物成分，可以通過(guò)可控釋系統(tǒng)提供，如使用靜脈注射， 植入滲透泵，皮膚貼劑，脂質(zhì)體，或其他給藥方式。在一特定的情況下，可使用輸液泵給藥 (見(jiàn) Langer，supra ;Sefton，CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. (1987) 14 201 ；Buchwald et al.,Surgery (1980)88 507 ；Saudek et al. , N. Engl. J. Med. (1989)321:574)。在另一些情況下，可應(yīng)用高分子材料，(見(jiàn) Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds. ), CRC Press :Boca Raton, Fla. (1974) ；Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball(eds. ) , Wiley :New York (1984) ；Ranger and Peppas, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. (1983)23:61 ；see also Levy et al.，Science(1985) 228 :190 ；During et al.，Ann. Neurol. (1989)25 :351 ； Howard et al.，J. Neurosurg. (1989)71 :105).。在另一種情況下，控制釋放系統(tǒng)，可以放置在動(dòng)物目標(biāo)組織附近，由此可只需要系統(tǒng)性給藥劑量的一小部分(見(jiàn)G00dS0n，in Medical Applications of Controlled Release, supra, (1984) vol. 2，pp. 115-138)。特別是,控釋設(shè)備可以直入動(dòng)物異常的免疫激活或腫瘤部位附近。其他控制釋放系統(tǒng)在蘭格的綜述中介紹((Science(1990)249 :1527-1533) 此發(fā)明涉及腫瘤細(xì)胞特異的細(xì)胞雕亡的結(jié)論源自我們實(shí)驗(yàn)結(jié)果的觀(guān)察正常細(xì)胞沒(méi)有細(xì)胞毒性反應(yīng)，而腫瘤細(xì)胞超過(guò)90 %的死亡率，這一重大的發(fā)現(xiàn)。這項(xiàng)發(fā)明涉及的癌細(xì)胞死亡是之前從未報(bào)導(dǎo)的。由于涉及到細(xì)胞凋亡，本發(fā)現(xiàn)所涉及的機(jī)理可能涉及到此前未曾有過(guò)的機(jī)理，或者，可能以與其它發(fā)明不同的方式活化了已知的信息傳導(dǎo)途徑，或是一個(gè)新的未知的信息傳導(dǎo)途徑。本發(fā)明有關(guān)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的具體過(guò)程和程序提出了一個(gè)有價(jià)值的，可進(jìn)一步研究的模型。換句話(huà)說(shuō)，業(yè)內(nèi)人士可通過(guò)這一過(guò)程探尋導(dǎo)致超過(guò)90%腫瘤細(xì)胞死亡的核心分子。因此本發(fā)明也是一個(gè)進(jìn)一步研究的重要，闡明其過(guò)程的重要模型。雖然上面和下面已經(jīng)證明特定的實(shí)驗(yàn)結(jié)果和數(shù)據(jù)，一個(gè)從事腫瘤研究的專(zhuān)業(yè)人士可通過(guò)閱讀本說(shuō)明所介紹的化合物名稱(chēng)，劑量變化，應(yīng)用的順序及時(shí)間，所述藥物的有效的替代物，可得到相同或類(lèi)似的結(jié)果。這些藥物可以應(yīng)用在任何哺乳動(dòng)物的任何癌癥。發(fā)明人指出在這個(gè)文件中沒(méi)有對(duì)任何說(shuō)明或任何后繼文件加以限制。發(fā)明人還指出，這項(xiàng)發(fā)明可單獨(dú)應(yīng)用，也可與傳統(tǒng)的癌癥治療方法如化療和放療合用，但是，在此沒(méi)有任何限制這一發(fā)明使用的范圍內(nèi)。此外，這對(duì)化療和放射療法的聯(lián)合使用，這個(gè)發(fā)明可減少化療或放療毒性由于化療和放療的劑量。最后，此發(fā)明可能會(huì)進(jìn)一步增加腫瘤細(xì)對(duì)常規(guī)化療，放療的敏感性，減少化療/輻射劑量。以上述的說(shuō)明和描述，并不是用于限制此發(fā)明的全部。應(yīng)用過(guò)程中還會(huì)進(jìn)行與上述說(shuō)明一致的修改和變更。本發(fā)明現(xiàn)通過(guò)在下面的示例進(jìn)行更詳細(xì)地說(shuō)明。在此聲明這些例子只會(huì)描述了本發(fā)明的具體體現(xiàn)，但不以任何方式對(duì)此發(fā)明加以限制。此發(fā)明提供了核苷酸和氨基酸序列的數(shù)據(jù)。在某種程度上，這些新的序列數(shù)據(jù)可作為開(kāi)發(fā)新的癌癥治療的新的靶目標(biāo)，并不對(duì)本發(fā)明加以任何限制。所說(shuō)靶目標(biāo)是指應(yīng)用以上方法進(jìn)一步作藥物開(kāi)發(fā)發(fā)展的潛在目標(biāo)。 雖然此說(shuō)明沒(méi)有具體詳述其它小分子藥物的DNA，RNA, siRNA和已知的癌癥治療技術(shù)的所有其他方法使用輻射治療的方法，專(zhuān)業(yè)人士可修改調(diào)整具體的應(yīng)用方法和步騶。
具體實(shí)施例方式例1 mPMS劑量-反應(yīng)關(guān)系方法A和B :HT1080(圖2A)和UM-SCC6 (Fig2B)細(xì)胞給予圖中所示不同濃度的 mPMS,聯(lián)合應(yīng)用ImMWST-Ic和10，30或100M芹菜素4個(gè)小時(shí)，然后，改變?yōu)檎ＩL(zhǎng)培養(yǎng)介質(zhì)M小時(shí)。CCK8試劑盒用于測(cè)定細(xì)胞存活率。平行對(duì)照為0. 12mM mPMS，或10% WST-Ic0 APO 無(wú)芹菜素對(duì)照，APlO :10M芹菜素，AP30 :30M芹菜素，AP100 :10M芹菜素。結(jié)果數(shù)據(jù)顯示，mPMS和芹菜素劑量依賴(lài)的HT1080和UM-SCC6細(xì)胞死亡(圖2A和B)。HT1080細(xì)胞應(yīng)用mPMS，和mPMS+WST-1，與芹菜素100M聯(lián)合用藥的mPMS的IC50為5M，而未治療的對(duì)照 mPMS的IC50為60M。SCC6細(xì)胞應(yīng)用mPMS，和mPMS+WST-1，與芹菜素100M聯(lián)合用藥的mPMS 的IC50為30M，而未治療的對(duì)照mPMS的IC50為80M。例2不同細(xì)胞對(duì)mPNS的劑量-反應(yīng)關(guān)系非癌癥的人角質(zhì)細(xì)胞(HEKA)，人類(lèi)malonoma細(xì)胞株SK-MEL-5 (SK5)，人頭頸部腫瘤細(xì)胞株Cal27 (Cal27)，和UM-SCC6 (SCC6)細(xì)胞，和人體軟組織肉瘤細(xì)胞株 HT1080(HT1080)分別用mPMS 30，40或50M，4小時(shí)，然后在另外M小時(shí)的正常生長(zhǎng)培養(yǎng)基培養(yǎng)。CCK8試劑盒測(cè)定細(xì)胞存活率。數(shù)據(jù)顯示，不同細(xì)胞株對(duì)mPMS劑量依賴(lài)性細(xì)胞死亡和敏感性差異，以從每個(gè)細(xì)胞系(圖3)mPMS治療。其中，非腫瘤來(lái)源的原代培養(yǎng)HEKA細(xì)胞對(duì) mPMS 最不敏感，其 IC50 為 50M 的 mPMS，而其 IC50 從 Cal27，UM-SCC6 和 HT1080 細(xì)胞 mPMS 的IC50分別為20和30M。例3芹菜素與WST-3聯(lián)合治療誘導(dǎo)癌細(xì)胞死亡的效果，方法UM-SCC6，HT1080，Cal27，SK-MEL-5，和HEKA 細(xì)胞單獨(dú)，或聯(lián)合給予 50 或 100M WST-3或10或30M芹菜素，或聯(lián)合給予不同濃度的WST-3和芹菜素4小時(shí)，以未經(jīng)處理的細(xì)胞作為對(duì)照，然后，改變?yōu)檎ＩL(zhǎng)介質(zhì)，保留M小時(shí)。應(yīng)用CCK8試劑盒測(cè)定細(xì)胞存活率。 數(shù)據(jù)以未經(jīng)處理的對(duì)照組細(xì)胞的％校正。結(jié)果A:不同細(xì)胞對(duì)以WST-3，芹菜素，和聯(lián)合治療的反應(yīng)。與未經(jīng)處理的細(xì)胞相比(CTRL)單獨(dú)應(yīng)用50M WST-3(WST-3)或30M芹菜素(芹菜素)各測(cè)試的細(xì)胞株僅顯示沒(méi)有或較少的細(xì)胞死亡的影響。WST-3和芹菜素(芹菜+WST-3)聯(lián)合應(yīng)用導(dǎo)致SK-MEL-5， Cal27,UM的SCC6和HT1080所有四個(gè)測(cè)試的人類(lèi)癌癥細(xì)胞系的協(xié)同作用的細(xì)胞死亡，但非腫瘤人類(lèi)細(xì)胞只有有限的(Fig4A)。B和C 比較人類(lèi)黑色素瘤細(xì)胞系SK-MEL-5細(xì)胞與非腫瘤人上皮細(xì)胞HEKA對(duì) WST-3和芹菜素聯(lián)合作用的劑量反應(yīng)關(guān)系。數(shù)據(jù)顯示，WST-3和芹菜素均誘導(dǎo)其劑量依賴(lài)性，但有限的HEKA細(xì)胞死亡(Fig4B)和SK-MEL-5 (Fig5C)的細(xì)胞死亡。HEKA細(xì)胞對(duì)芹菜素或WST-3單獨(dú)應(yīng)用表現(xiàn)出有限的細(xì)胞死亡。WST-3與30M芹菜素結(jié)聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，WST-3 的IC50為40M。進(jìn)一步增加WST-3的濃度未能導(dǎo)致更多的HEKA細(xì)胞死亡(Fig4B)。然而， SK-MEL-5細(xì)胞對(duì)50M WST-3與30M芹菜素結(jié)聯(lián)合應(yīng)用表現(xiàn)出協(xié)同作用的細(xì)胞死亡反應(yīng)。 SK-MEL-5細(xì)胞對(duì)這種結(jié)合治療的WST-3的IC50為20M，比HEKA細(xì)胞少一倍(Fig4C)。HEKA 細(xì)胞更耐受這種組合治療。從其他癌癥細(xì)胞也觀(guān)察到了類(lèi)似的結(jié)果。
權(quán)利要求
1.一種化合物包括a)至少有一個(gè)功能組能夠抑制細(xì)胞跨質(zhì)膜電子轉(zhuǎn)運(yùn)(tPMET)或細(xì)胞表面的呼吸或細(xì)胞表面的氧化磷酸化偶聯(lián)，或抑制tNOX活性，和b)至少有一個(gè)功能組，保持化合物不能通透細(xì)胞質(zhì)膜，因此，此化合物是一個(gè)不能通透細(xì)胞質(zhì)膜的，可抑制tPMET，細(xì)胞表面的呼吸或/和細(xì)胞表面氧化磷酸化的抑制劑。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中至少有一個(gè)氧化磷酸化解偶聯(lián)功能的呼吸基團(tuán)選自 DNP, CCCP, FCCP, SF6847, S-13，五氯酚，TTFBjP α -(phenylhydrazono)苯乙腈衍生物。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中至少有一個(gè)功能組可抑制tPMET，或細(xì)胞表面的呼吸選自包括mPMS和輔酶Ql的電子中間受體(IEA) ；tNOX抑制劑，包括辣椒素，綠茶兒茶素， 沒(méi)食子兒茶素-3-沒(méi)食子酸(EGCG)，雙香豆素和phenoxodiol。
4.藥物組成成分，包括a)第一個(gè)成分為可阻斷tPMET，或/和細(xì)胞質(zhì)膜的呼吸的藥物，和b)第二個(gè)成分為可阻斷至少HIF，細(xì)胞缺氧反應(yīng)，NFkappaB，CK2，IKK的活性中的一個(gè)， 還可能有，c)還可包括第三個(gè)成分IEA，d)在藥學(xué)上可接受的介質(zhì)。
5.權(quán)利要求4中的第二個(gè)組成成分由權(quán)利要求1的化合物組成。
6.權(quán)利要求1中的化合物，和權(quán)利要求4中的第一個(gè)組成成分的化合物是WST-3。
7.權(quán)利要求4中的第一個(gè)組成成分，包括至少一個(gè)黃酮類(lèi)化合物，包括選自下列至少一個(gè)tricin，芹菜素，木犀草素，Tangeritin,白楊，6-羥基黃酮，黃芩，Scutellarein,漢黃芩素，地奧司明，和Flavoxate黃酮類(lèi)化合物組成的團(tuán)體；IKK的抑制劑，選定自下列至少一個(gè)的BMS-345541的組成SC-514，IKK-2抑制劑IV[5-(P-氟苯基)-2_脲基]噻吩3-甲酰胺，IKK抑制劑第七，IKK抑制劑ILffedelolactone, IKK-2抑制劑VN-(3，5_ 二-三氟甲基苯基)-5-氯-2-hydroxybenzamide, IMD-0354,和 IKK-2 抑制劑六(5-苯基-2-脲基) 噻吩3-甲酰胺，以及至少一個(gè)選自缺氧誘導(dǎo)因子抑制劑2，2-dimethybenz0pyran化合物， chetomin，2-甲氧基雌二醇 QME2)，PX-478，17N-烯丙胺-17-demethoxygeldanamycin (17-MG)，EZN-968，喜樹(shù)堿，NSC644221，3-(5，_羥甲基-2，-呋喃基)-l-benzylindazole(YC-l)， 雷帕霉素，和針對(duì)HIF-I的decoy寡核苷酸RX-0047。
8.權(quán)利要求4中的第二個(gè)組成成分包括芹菜素。
9.權(quán)利要求4中的第三個(gè)組成成分包括MPMS和輔酶Ql。
10.一個(gè)藥物組成成分，包括WST-3，和芹菜素，或至少一個(gè)IKK的抑制劑。
11.一個(gè)藥物組成成分，包括WST-3，mPMS或一個(gè)IEA，和芹菜素，或至少一個(gè)IKK的抑制劑。
12.應(yīng)用特異性地殺死癌細(xì)胞的方法，包括聯(lián)合應(yīng)用有效劑量的權(quán)利要求4中的藥物組合成分，用以阻斷tPMET，和/或細(xì)胞表面的呼吸，和/或細(xì)胞表面的氧化磷酸化過(guò)程的解偶，和抑制腫瘤細(xì)胞對(duì)缺氧的反應(yīng)。
全文摘要
本發(fā)明提供了可用來(lái)治療癌癥的細(xì)胞質(zhì)膜防滲化成分藥物組合。該成分含有的功能組能夠阻斷和/或抑制跨細(xì)胞質(zhì)膜電子傳遞，細(xì)胞表面的呼吸作用和偶聯(lián)細(xì)胞表面的氧化磷酸化。本發(fā)明的藥物組合包括至少一種能夠與抑制癌細(xì)胞缺氧反應(yīng)的多功能抑制劑藥物組合相結(jié)合的細(xì)胞質(zhì)膜防滲化成分。
文檔編號(hào)A61K31/41GK102438620SQ201080018765
公開(kāi)日2012年5月2日 申請(qǐng)日期2010年3月1日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月1日
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