專利名稱：：使用來(lái)自胎兒細(xì)胞及組織的化合物來(lái)改善皮膚狀況的方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及化妝品護(hù)膚組合物，該組合物包含由胎兒細(xì)胞及組織表達(dá)的能改善皮膚狀況的化合物。本發(fā)明還涉及鑒定及生產(chǎn)由胎兒細(xì)胞及組織表達(dá)的化合物的方法。本發(fā)明進(jìn)一步涉及使用蛋白聚糖(Protegolycans)來(lái)改善皮膚狀況的方法及化合物，其中，此蛋白聚糖包括纖調(diào)蛋白聚糖(fibromodulin)，或任何功能相當(dāng)?shù)幕衔铩?br>背景技術(shù)：
：皮膚主要由表皮與真皮層所組成，真皮層提供表皮支持與血液供應(yīng)的功能，另外，真皮層在維持皮膚的彈性及其外觀上也是重要的。真皮層主要由細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)(ExtracellularMatrix,ECM)所組成，而細(xì)胞外基質(zhì)的組成主要決定于成纖維細(xì)胞(Fibroblasts)。成纖維細(xì)胞可加工生產(chǎn)多種成分，例如膠原蛋白(collagen)、彈性蛋白(elastin)及蛋白聚糖(proteoglycan)。隨著年齡的增長(zhǎng)以及暴露在太陽(yáng)及環(huán)境的污染下，支持性真皮會(huì)變薄且被破壞，此種情形會(huì)直接導(dǎo)致表皮的下垂而產(chǎn)生皺紋(參JALOikarinenA.皮膚的老化時(shí)|、司老化對(duì)光老化(chronoagingversusphotoaging),PhotodermatolPhotoimmunolPhotomed7:3_4,1990)。本發(fā)明領(lǐng)域?yàn)槿怂熘氖翘浩つw與成人皮膚有根本的不同，例如，成年人的皮膚在受傷后會(huì)經(jīng)由形成疤痕而修復(fù)，這個(gè)過(guò)程的特征在于使用膠原蛋白及各種細(xì)胞外基質(zhì)成分的無(wú)序沉積(總稱為「?jìng)獭?來(lái)替代受傷組織。相對(duì)之下，胎兒皮膚的修復(fù)則經(jīng)由細(xì)胞組織的再生及正常皮膚的結(jié)構(gòu)經(jīng)由膠原蛋白及細(xì)胞外基質(zhì)成分有序的沉積來(lái)產(chǎn)生無(wú)疤痕的修復(fù)。研究指出，無(wú)疤痕皮膚修復(fù)能力是胎兒皮膚的一種優(yōu)點(diǎn)，并且，其不需胎兒免疫系統(tǒng)、胎兒血清、或是羊膜液(BleacherJC，etal.，JPediatrSurg28:1312-4,1993)。例如，以分離的人類胎兒皮膚移植到無(wú)胸腺小鼠(athymicmice)內(nèi)，在愈合時(shí)并不會(huì)產(chǎn)生典型的疤痕(AdzickNS,LorenzHP.，AnnSung220:10_8·1994)。因此，很明顯地存在于再生的胎兒皮膚中，且對(duì)皮膚的再生及增進(jìn)皮膚外觀具有重要性的某些特定分子或組合物，在非胎兒皮膚(如成人皮膚)中很少存在或是根本不存在。很多的組合物及技術(shù)在先前技術(shù)中已被描述可用于改善皮膚的狀況，其中，特別是指「老化」或具有「皺紋」的膚質(zhì)。典型的化合物包含利用視網(wǎng)膜酸(RetinoicAcid)來(lái)刺激表皮細(xì)胞的生長(zhǎng)。另外視黃酸類(Retinoids)則被公認(rèn)為是抗皺紋的活性物質(zhì)，其可幫助減少老化的皮下作用，例如皺紋、皮革化、松弛、粗糙、干燥及斑點(diǎn)(色素沉積)等(參見美國(guó)專利字號(hào)第4，603，146及4，877，805)。已有人假設(shè)，視黃酸類通過(guò)發(fā)炎來(lái)產(chǎn)生作用，其會(huì)導(dǎo)致表皮的增厚(Acanthosis，棘皮癥)，和局部的細(xì)胞間水腫，導(dǎo)致表皮脫落且改善皮膚的紋理及外觀。另外，使用L-抗壞血酸(L-ascorbicAcid)來(lái)刺激成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)及膠原蛋白增生已在先前技術(shù)中被描述(HataR，SenooH.JCellPhysioll388-16.1989)。改善皮膚狀況的技術(shù)可使用包含經(jīng)由化學(xué)品來(lái)刺激/傷害皮膚(例如酚脫屑(PhenolPeels))、使用機(jī)械性(例如磨皮(dermabrasion))或是熱(例如激光)等成熟的方法。而傷害表皮及/或真皮層最終會(huì)導(dǎo)致新細(xì)胞的生長(zhǎng)以及細(xì)胞外基質(zhì)的沉積，因此，可改善皮膚的整體外觀。另外一個(gè)常導(dǎo)致皮膚損害的狀況為發(fā)炎。一般而言，炎性及免疫的反應(yīng)可經(jīng)由藥物的使用來(lái)加以控制(請(qǐng)參見Goodman&Gilman’sThePharmacologicalBasisOfTherapeuticseds.Hardmanetal.，第九版，McGraw-Hill出版，1996)。糖皮質(zhì)激素類(Glucocorticoids)及類似阿司匹林的藥物(非類固醇抗炎劑(Non-SteroidalAnti-InflammatoryAgents,NASIDs))是最廣泛使用的抗炎劑，其中，非類固醇抗炎劑通常被用來(lái)治療發(fā)炎的癥狀(例如疼痛及發(fā)燒)。皮質(zhì)類固醇(Corticosteroids)為有效的抗炎劑，雖然，皮質(zhì)類固醇實(shí)際上對(duì)所有的發(fā)炎細(xì)胞具有作用，但卻會(huì)顯示出顯著的有害效果，例如會(huì)引發(fā)庫(kù)辛式癥(Cushingoid)、皮膚變薄、在傷口愈合時(shí)增加被感染的敏感性、以及下視丘一腦下垂體——腎上腺軸向(hypothalamic-pituitary-adrenalaxis)的抑制。目前可得到的其他抗炎藥物會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞毒素的結(jié)果，它是以癌癥化學(xué)療法及典型抗腫瘤藥劑反應(yīng)出它們剛開始的作用。此類藥物可不加以區(qū)別的殺死細(xì)胞，特別是針對(duì)那些快速增生的細(xì)胞。然而，甲氨喋昤(Methotrexate)使用比治療癌癥還低的劑量(細(xì)胞減量的劑量(Cytoreductivedose))可有效的治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。免疫抑制劑(ImmunosuppressiveAgents)，例如環(huán)孢菌素A(CyclosporinΑ)及他克羅司(Tacrolimus)對(duì)避免異體臟器移植物的排斥有效，但是他們使用在自體免疫疾病的治療受限于嚴(yán)重的副作用，特別是腎毒性(Nephrotoxicity)方面。特別對(duì)于皮膚而言，局部皮質(zhì)類固醇、口服皮質(zhì)類固醇或抗組織胺劑是療程中的中流砥柱。然而，皮質(zhì)類固醇卻有很多如以上所提及的不受歡迎的副作用，而當(dāng)局部涂抹時(shí)，抗組織胺劑本身會(huì)引發(fā)過(guò)敏反應(yīng)、口服時(shí)會(huì)導(dǎo)致嗜睡(ShaiA，etal.，Inflammation,dermatitisandcosmetics.HandbookofCosmeticSkinCare.London:MartinDunitzLtd.，pp.135-146,2001)。色素沉淀過(guò)多(Hyperpigmentation)為另一種常見的皮膚疾病，一旦產(chǎn)生便非常難以治療。由于色素沉淀過(guò)多在身心及美觀上會(huì)有明顯的負(fù)面影響，因此，已投入更多的精力在色素沉淀過(guò)多的治療上。對(duì)于色素沉淀過(guò)多的問(wèn)題，當(dāng)前的科技水平是提供了多種的治療方法，但卻沒(méi)有一種是完全令人滿意的，其主要原因在于當(dāng)前的治療方法主要為皮膚「漂白」的化合物，其對(duì)于已經(jīng)產(chǎn)生的色素沉淀是無(wú)效的治療，特別是對(duì)于真皮層的色素沉淀(請(qǐng)回顧BrigantiS，etal.,PigmentCellRes.16:101_110，2003)。許多其他種類的物質(zhì)已被提出來(lái)控制或抑制皮膚的色素沉淀，幾乎所有此類物質(zhì)不是被用來(lái)漂白已存在的色素，就是通過(guò)抑制在黑色素生成中主要的速率限制性酶(rate-limitingenzyme)酪氨酸酶的活性，來(lái)阻止新色素的合成。美國(guó)專利字號(hào)第6123959即描述水性組合物的使用，其包含脂質(zhì)體及至少一種黑色素合成酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，與至少一種黑色素合成酶的非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑的組合。美國(guó)專利字號(hào)第6132740描述了某些雷鎖辛(Recorcinol)衍生物來(lái)當(dāng)作皮膚增白劑的使用。WO99/64025A1揭露皮膚增白的組合物，其包含了由加拿大本土的雙子葉植物中萃取出的酪氨酸酶抑制劑。美國(guó)專利字號(hào)第5580549描述了一種增白皮膚的外用藥劑，作為酪氨酸酶抑制劑，其包含2-羥苯甲酸(2-hydroxybenzoicacid)衍生物及其鹽類。WO99/09011A1描述了一種用來(lái)抑制皮膚紅斑及/或皮膚色素沉淀的藥劑，其包含至少一種2-羥喹啉(carbostyril)衍生物及其鹽類。美國(guó)專利字號(hào)第5214028以及5389611描述了乳纖蛋白水解物(LactoferrinHydrolyzates)用作一種酪氨酸酶抑制劑。另外，有報(bào)道一些化合物及植物萃取物具有對(duì)抗過(guò)多色素沉淀的活性，其中包含抗壞血酸及其衍生物、曲酸及相關(guān)的化合物、甘草萃取物以及熊葡萄萃取物。雖然這些化學(xué)物質(zhì)及提取物在逆轉(zhuǎn)及預(yù)防過(guò)多色素沉淀時(shí)是具有活性的，但長(zhǎng)時(shí)間使用下他們會(huì)刺激皮膚。盡管提示上述所有這些物質(zhì)適用于過(guò)多色素沉淀的治療，但用來(lái)治療過(guò)多色素沉淀的主要產(chǎn)品包含對(duì)苯二酚，即一種廣為人知的皮膚脫色素有效的物質(zhì)(參見美國(guó)專利字號(hào)第6139854)，然而，對(duì)苯二酚在長(zhǎng)時(shí)間使用下會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用，例如，使用對(duì)苯二酚可對(duì)皮膚永久的去除色素沉淀，因此，當(dāng)肌膚暴露在紫外線下時(shí)，會(huì)增加皮膚的光敏感性。另外，對(duì)苯二酚會(huì)被代謝成苯醌(Benzoquinon)，苯醌為一種強(qiáng)力的血液毒素(Haematotoxic)、基因毒素(Genotoxic)以及致癌的化合物，其亦會(huì)引發(fā)自由基的產(chǎn)生而使得細(xì)胞(PredisposingCell)容易受到氧化性損害(DoCeuSilvaΜ,etal.，Mutagenesis.18=491-496,2003)。因此，在某些國(guó)家，對(duì)苯二酚只允許在限定濃度內(nèi)對(duì)皮膚進(jìn)行去色素作用，而在其他國(guó)家，該產(chǎn)品則是完全被禁止使用。據(jù)此，需要一種新的且更有效的方法來(lái)調(diào)整皮膚的狀況，例如治療皮膚的老化、發(fā)炎及色素沉淀且會(huì)伴隨較不明顯顯著的不受歡迎副作用
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明描述一組新的美容護(hù)膚組合物，其組成包含由胎兒組織表達(dá)的化合物，用以改善皮膚的狀況。將這些化合物輸送(deliver)至皮膚的方法包含但不限于溶液、化妝水、藥膏、乳液、凝膠或是皮膚可剝離帶。雖然對(duì)胎兒組織表達(dá)的化合物各組成分的鑒定或純化可能是有用的，但實(shí)際應(yīng)用本發(fā)明并不要求如此的鑒定或純化。本發(fā)明亦有關(guān)于鑒定由胎兒組織表達(dá)的化合物的方法或確認(rèn)促進(jìn)這些化合物表達(dá)的條件。本發(fā)明亦有關(guān)于促進(jìn)由胎兒組織所表達(dá)的化合物的表達(dá)的方法，其是通過(guò)改變外部細(xì)胞環(huán)境或是藉由基因重組表達(dá)來(lái)達(dá)到。本發(fā)明亦有關(guān)于使用包含由胎兒組織表達(dá)的化合物的組合物來(lái)改善皮膚狀況的方法。此方法一般包括對(duì)需要治療的哺乳類動(dòng)物的皮膚局部施用安全而有效量的組合物。進(jìn)一步而言，本發(fā)明闡述了一組新的美容護(hù)膚組合物，其包含純化的或富集萃取物的安全且有效量的纖調(diào)蛋白聚糖或功能上等效的分子。根據(jù)配方，含有由胎兒組織表達(dá)的化合物或纖調(diào)蛋白聚糖的組合物中，可以含有的其他組分為安全且有效量成分的透明質(zhì)酸(HyaluronicAcid)，即另外一種護(hù)膚活性成分，以及一種化妝品可接受的、皮膚可接受的或是藥物可接受的載體。具有代表性的組合物的實(shí)施例包括但不限定于透明質(zhì)酸、細(xì)胞外基質(zhì)肽或是多肽、生長(zhǎng)因子以及L-抗壞血酸。圖1顯示了對(duì)于胎兒傷口模型的操作流程。A.為子宮的反腸系膜表面的一小部分，其是被切開且在切口附近實(shí)施一環(huán)狀袋子縫合。B和C.通過(guò)切除2mm盤狀的組織，在每個(gè)胚胎上形成一個(gè)最大厚度的傷口。藍(lán)色或是綠色的活體染劑在傷口形成后立即被應(yīng)用以便之后的傷口鑒別。圖2顯示了再生修復(fù)的受傷E16大鼠皮膚H&E染色的結(jié)果。A.受傷24小時(shí)之后，100倍，其有一個(gè)最小化的炎性滲透。B.受傷24小時(shí)后，400倍。藍(lán)色活體染劑在毛囊中接近遷移的上皮邊緣提示著傷口再生上皮形成的毛囊再生是同時(shí)發(fā)生(黑色空心箭頭)。C.受傷后24小時(shí)，400倍。嗜中性白血球(黑色實(shí)心箭頭)及淋巴細(xì)胞(黑色空心箭頭)，分別是為傷口周圍及中心部分的主要細(xì)胞。D.受傷后72小時(shí)，400倍。傷口以正常皮膚結(jié)構(gòu)完全再生而愈合。在真皮層中正常的毛囊(黑色空心箭頭)分布清晰可見。E.受傷后72小時(shí)，400倍。在較高的倍率下，以在真皮層中的藍(lán)色活體染劑(黑色空心箭頭)定義出的先前的傷口，與非傷口皮膚難以辨別。F.以共焦顯微鏡檢視E16大鼠皮膚的傷口Fa到Fe)。Fa.受傷后48小時(shí)630倍。注意到膠原纖維有組織的外觀是具有一網(wǎng)狀的晶格結(jié)構(gòu)。Fb.受傷后72小時(shí)，630倍。傷口的位置是以正常皮膚膠原結(jié)構(gòu)及毛囊再生完全的復(fù)原而被完整的上皮再生化。Fe.未受傷E19皮膚(即E16+72小時(shí))，630倍，在受傷后72小時(shí)的E16的皮膚及E19未受傷的皮膚之間，沒(méi)有可觀察到不同表皮處。e表皮，h毛囊，d真皮層,尺標(biāo)(Scalebars):A，D，200μm;B，C，E，50μm;Fa_Fc，32μm。G.在受傷后72小時(shí)的E16的胎兒及沒(méi)有受傷的E19(E16+72小時(shí))的胎兒的整體膠原蛋白密度(P>0.05)，并無(wú)明顯的不同。圖3顯示了沒(méi)有再生修復(fù)的受傷E19大鼠皮膚H&E染色的結(jié)果。A.受傷后24小時(shí)，100倍。有一中等的發(fā)炎滲透及增加的紅血球細(xì)胞。B.受傷后24小時(shí)，400倍。在受傷后24小時(shí)時(shí)，再生上皮形成亦被注意到(黑色空心箭頭)。C.受傷后24小時(shí)，400倍。單核白血球(黑色空心箭頭)包含了大部分的發(fā)炎細(xì)胞。D.受傷后72小時(shí)，100倍。傷口是完全地以增加的細(xì)胞結(jié)構(gòu)及新生血管被再生上皮化。與沒(méi)有傷口的位置(右邊遠(yuǎn)處)比較，在修復(fù)的傷口位置(左邊遠(yuǎn)處)沒(méi)有明顯觀察到毛囊(黑色空心箭頭)。E.受傷后72小時(shí)，400倍。在較高的倍數(shù)下，藍(lán)色活體染劑(黑色實(shí)心箭頭)在修復(fù)的傷口中是為可見的。F.以共焦顯微鏡檢視E19大鼠的皮膚(Fa到Fe)。Fa.是為受傷后48小時(shí)，630倍。新形成的膠原纖維中的較大的空間，在真皮層中是為顯而易見的。一薄層的稠密的膠原纖維，在膜的底層被發(fā)現(xiàn)(白色空心箭頭)。Fb.受傷后72小時(shí)，630倍。具有異質(zhì)尺寸膠原纖維的瓦解的膠原蛋白沉積，其在愈合的真皮疤痕組織中是為明顯的，注意到并無(wú)毛囊再生。Fe.沒(méi)有受傷的初生的一天(Ni)的皮膚(例如E19+72小時(shí)，E21=一期)，630倍。沒(méi)有受傷的Nl的皮膚顯現(xiàn)出一個(gè)組織化的膠原沉積圖樣，其明顯地與受傷后72小時(shí)的E19皮膚不同。e表皮，h毛囊，d真皮層，尺標(biāo)(Scalebars):A，D，200μm;B，C，E，50μm;Fa_Fc，32μm。G.相對(duì)于沒(méi)有受傷的附的對(duì)照組(P=0.00043)，在受傷后72小時(shí)的傷口E19中，其整體膠原密度明顯地被提升。圖4顯示了以特定引物為基礎(chǔ)的反轉(zhuǎn)錄_聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)篩選轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β的配體、受體、調(diào)節(jié)體在胎兒皮膚發(fā)展期間的基因表達(dá)。RT-PCR在第14，16，17，18，19，20，及21天的胎兒的背部皮膚上(N=10-15個(gè)胎兒/時(shí)間點(diǎn))所分離出的RNA上執(zhí)行。為了檢測(cè)在發(fā)展期間，mRNA程度上相對(duì)的改變，在每一個(gè)時(shí)間點(diǎn)上，對(duì)于每一點(diǎn)的光密度測(cè)定值(densitometryvalues)是利用GAPDH表現(xiàn)來(lái)校正，且利用設(shè)定最高值為1來(lái)歸一化。結(jié)果是以圖表的平均值(A，B，C)來(lái)描述的，過(guò)渡期間是以灰色來(lái)強(qiáng)調(diào)，沒(méi)有配對(duì)的雙側(cè)檢定(two-tailedstudent'stest)被執(zhí)行來(lái)檢測(cè)胎兒皮膚的E16(剛開始轉(zhuǎn)移時(shí))及E18(轉(zhuǎn)移結(jié)束時(shí))統(tǒng)計(jì)學(xué)上有意義的誤差。對(duì)于每一個(gè)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子配位基(Α’)、接受子(B’)、或調(diào)節(jié)體(C’)，以具有相關(guān)P值的代表性的點(diǎn)在右邊顯示，且轉(zhuǎn)移期間以灰色來(lái)強(qiáng)調(diào)。在基因表達(dá)中，胎兒皮膚的第16天(剛開始轉(zhuǎn)移)及第18天(轉(zhuǎn)移結(jié)束)間統(tǒng)計(jì)學(xué)上有意義的誤差，是以底下畫線的方式表示(Α’，Β’，C’)。統(tǒng)計(jì)學(xué)上有意義的P值(<0.05)是以「*」被標(biāo)示出。一個(gè)代表性的胎兒GAPDHPCR反應(yīng)被顯示出(插入)。圖5是以圖表顯示了在修復(fù)期間，以基于特定引物的反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)來(lái)篩選對(duì)于細(xì)胞間質(zhì)蛋白水解酶(MMP)及其組織-衍生-抑制劑(TIMPS)的基因表達(dá)。一般而言，有疤痕的傷口是傾向于過(guò)量細(xì)胞外基質(zhì)的沉淀，而不是退化(右邊)，而無(wú)疤痕的傷口傾向于較少細(xì)胞外基質(zhì)的沉淀。圖6是以圖表顯示了在修復(fù)期間，以基于特定引物反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)來(lái)篩選纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子及飾膠蛋白聚糖(decorin)的基因表達(dá)。總體而言，成疤的皮膚傷害似乎與纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子bFGF(FGF-2)的較高表達(dá)相關(guān)(如右所示)，而不成疤的皮膚傷害具有較低的纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子bFGF(FGF-2)表達(dá)。圖7A和圖7B是以圖表顯示了在修復(fù)期間，以基于特定引物的反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)來(lái)篩選纖調(diào)蛋白聚糖及飾膠蛋白聚糖decorin的基因表達(dá)。A.FM(纖調(diào)蛋白聚糖)的轉(zhuǎn)錄在受傷后24小時(shí)的E16胎兒中(P<0.0001)，以2.75倍顯著地增加，其表示再生的修復(fù)，但此種現(xiàn)象在以非再生性方式修復(fù)的E18受傷的胎兒中不存在。B.相反地，與E16傷口比較，E18傷口的飾膠蛋白聚糖(decorin)轉(zhuǎn)錄相對(duì)較高，盡管E16及E18兩者的傷口相對(duì)于沒(méi)有受傷的老化控制組，其飾膠蛋白聚糖(decorin)水平是降低的。圖8是顯示了用胎兒皮膚的基因篩選方法得到應(yīng)用和阻斷化合物的檢測(cè)結(jié)果，在此例子中化合物是為FM。H&E染色顯示了FM(纖調(diào)蛋白聚糖)應(yīng)用到通常以非再生方式愈合的晚期懷孕胎兒的傷口上，會(huì)導(dǎo)致完全無(wú)傷疤的再生的修復(fù)，而當(dāng)抗FM(纖調(diào)蛋白聚糖)的抗體應(yīng)用至早期懷孕的傷口(這類傷口會(huì)以無(wú)疤痕再生方式正常愈合)之上時(shí)，會(huì)導(dǎo)致非再生的修復(fù)。在200倍(左邊)及400倍(右邊)放大下的傷口是在控制組中72小時(shí)下得到。紅色的箭頭是表示永久性的染色，黑色的箭頭表示毛囊。A.通常，在無(wú)永久性的染色及無(wú)肉層肌肉的斷裂(藍(lán)色箭頭)的情況下，(E16)胎兒傷口會(huì)無(wú)傷疤的愈合且難以從對(duì)照組(E19)的皮膚中(插入)分辨出來(lái)，注意毛囊的再生及沒(méi)有發(fā)炎反應(yīng)。B.以具有抗FM抗體來(lái)治療E16的傷口是會(huì)引誘出疤痕的產(chǎn)生，毛囊無(wú)再生且有發(fā)炎反應(yīng)。C.具有IgG比對(duì)溶液的治療是不會(huì)產(chǎn)生疤痕。注意毛囊。D.通常，E18胎兒傷口的愈合會(huì)有疤痕，在疤痕中，發(fā)炎的細(xì)胞(藍(lán)色箭頭)是存在的，但毛囊不存在。E.以外因的FM治療E18胎兒的傷口，其抑制了疤痕的形成。這些傷口只可通過(guò)永久染色和肉層肌肉的斷裂(藍(lán)色箭頭)來(lái)識(shí)別，因?yàn)樯倭擞幸饬x的發(fā)炎反應(yīng)且含有毛囊。F.以膠原比對(duì)溶液治療的ElSWt口，仍然形成有疤痕的愈合。注意發(fā)炎的細(xì)胞(藍(lán)色箭頭)及毛囊缺失。圖9是顯示了胎兒傷口經(jīng)纖調(diào)蛋白聚糖及抗纖調(diào)蛋白聚糖抗體處理的聚焦顯微鏡的結(jié)果。被纖調(diào)蛋白聚糖處理的晚期懷孕(胎兒)傷口顯示了一組織化膠原的結(jié)構(gòu)，而被抗-纖調(diào)蛋白聚糖抗體處理的傷口顯示了一個(gè)無(wú)序化的膠原結(jié)構(gòu)。傷口及控制組在受傷72小時(shí)后被獲得，膠原纖維已被Siriusred染色且顯現(xiàn)出白色，紅色的空心箭頭表示為毛囊。A.—E19胎兒無(wú)受傷的皮膚(200倍)與E16胎兒的傷口比較。B.通常，E16胎兒的傷口會(huì)無(wú)疤痕的愈合(200倍)，真皮的膠原纖維是薄的，且在沒(méi)有傷口的皮膚中，其網(wǎng)狀的排列從組織化的膠原中無(wú)法清楚地分辨。C.相反，膠原纖維在抗纖調(diào)蛋白聚糖治療的E16胎兒傷口中較厚且無(wú)序地排列(400倍)。D.在以IgG比對(duì)溶液(400倍)治療的E16傷口中，膠原纖維是較薄的且有一網(wǎng)狀的排列。E.—E21胎兒無(wú)受傷的皮膚與E18受傷皮膚比較一400(左邊)倍及1000倍(右邊)。F.通常，E18胎兒的傷口愈合會(huì)有疤痕。在疤痕中(400倍(左邊))并不見毛囊，膠原纖維在疤痕的區(qū)域中是較厚的且以在纖維間較大的距離混亂地排列，其在較高的倍數(shù)下(1000倍(右邊))看得較清楚。G.然而，將纖調(diào)蛋白聚糖加入到E18到傷口中，則會(huì)抑制傷口的產(chǎn)生400倍(左邊)及1000倍(右邊)。此處膠原纖維是薄的，而傷口床中的組織化膠原與沒(méi)有受傷的E21皮膚的結(jié)構(gòu)非常相似。H.以膠原對(duì)比溶液處理的傷口有較厚、混亂排列的纖維且纖維間距離較大一一400倍(左邊)及1000倍(右邊)。圖10顯示了第一類膠原在FM-處理(E18)的傷口中與有疤痕的傷口(E16)、無(wú)疤痕的傷口(E18)、及無(wú)受傷的皮膚(E18)比較下的相對(duì)mRNA的表現(xiàn)。與第五圖的結(jié)果一致，在FM處理的傷口顯示出較少的細(xì)胞外基質(zhì)的沉積，作為第一類膠原基因表達(dá)的例子。RNA從受傷后12小時(shí)的胎兒組織中分離出且用遞減循環(huán)(reduced-cycle)RT-PCR的方式處理。相對(duì)mRNA表達(dá)的平均值是以士SEM來(lái)描述。雙側(cè)檢定被用來(lái)檢測(cè)一配對(duì)與平均值的比較，P值小于0.05為差異顯著。用星號(hào)表示對(duì)照組的傷口/皮膚與FM處理群之間有顯著的不同。圖11顯示了以纖維蛋白聚糖(0.4毫克/毫升)或是磷酸鹽緩沖液對(duì)比溶液處理的成人的傷口，其膠原結(jié)構(gòu)及增加的真皮組織再生具有明顯的改善。傷口在受傷后2周得到，且組織的部分以H&E或Siriusred染色(對(duì)于聚焦顯微鏡)，黑色的箭頭標(biāo)示了傷口床，而紅色的箭頭標(biāo)示了永久的染色和肉層肌肉的斷裂。A.以纖維蛋白聚糖處理的一成人傷口的H&E的染色一200倍(左邊)及400倍(右邊)放大。在較高的放大倍率下，真皮膠原纖維顯示了有一平行的排列。B.—纖調(diào)蛋白聚糖處理的成人傷口的外表真皮(接近表皮_真皮邊緣)的共焦顯微鏡下的結(jié)果一400倍(左邊)及1000倍(右邊)的放大倍率。白膠原纖維具有一相當(dāng)均勻、線性的外觀且是平行在表皮層之上。C.一以纖調(diào)蛋白聚糖處理的一成人傷口的深層真皮層的共焦顯微鏡下的結(jié)果一400倍(左邊)及1000倍(右邊)的放大倍率。另外，平行的組織化膠原纖維被觀察到。D.以磷酸鹽緩沖液對(duì)比溶液處理的一成人傷口以H&E染色的結(jié)果一200倍(左邊)及400倍(右邊)的放大。此傷口的面積比以纖調(diào)蛋白聚糖處理的傷口的面積大。E.—對(duì)照組的成人傷口的外表真皮(接近表皮_真皮邊緣)的共焦顯微鏡下的結(jié)果，其證實(shí)了膠原纖維隨意的沉積一400倍(左邊)及1000倍(右邊)的放大倍率。F.—控制組的成人傷口的深層真皮層的共焦顯微鏡下的結(jié)果一400倍(左邊)及1000倍(右邊)的放大倍率。在膠原形態(tài)學(xué)中，膠原沉積混亂的圖樣及很大的變動(dòng)在此將可清楚的觀察到。具體實(shí)施例方式接下來(lái)是本發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明，下述說(shuō)明中對(duì)制程與結(jié)構(gòu)的描述并不包括制作的完整流程。本發(fā)明所沿用的現(xiàn)有技術(shù)，在此僅做重點(diǎn)式的引用，以助本發(fā)明的闡述。I.定義使用的術(shù)語(yǔ)「局部施用(TopicalApplication)」在本發(fā)明中，是指施用或是涂布組合物到皮膚的表面上。使用的術(shù)語(yǔ)“皮膚可接受的(Dermatologically-Acc印table)”在本發(fā)明中，是指所描述的組合物或其成分是適合與人類的皮膚接觸而沒(méi)有不適當(dāng)?shù)亩拘?、排斥性、不穩(wěn)定性及過(guò)敏反應(yīng)等等。使用的術(shù)語(yǔ)「安全而有效的量(SafeandEffectiveAmount)」在本發(fā)明中，是指化合物或是組合物的量足以顯著地引發(fā)正面的效果，更佳的是皮膚外觀的正面效果或是感覺效果，其包括本發(fā)明所揭露的各個(gè)益處，但其量足夠低而避免嚴(yán)重的副作用，此亦即提供一個(gè)合理的利益風(fēng)險(xiǎn)比，在技術(shù)人員可加以判斷的范圍內(nèi)的化合物或組合物的量。使用的術(shù)語(yǔ)“纖調(diào)蛋白聚糖(FM)”在本發(fā)明中并不只是纖調(diào)蛋白聚糖，亦是任何有或沒(méi)有基因修飾的功能等效的分子。使用的術(shù)語(yǔ)“野生型纖調(diào)蛋白聚糖(Wild-TypeFMProtein)”，在本發(fā)明中，是指在組織中非基因修飾的天然存在的纖調(diào)蛋白聚糖。使用的術(shù)語(yǔ)“重組纖調(diào)蛋白聚糖cDNA(RecombinantFMcDNA)”在本發(fā)明中是指已被克隆到合適的表現(xiàn)載體(例如質(zhì)粒、腺病毒)的纖調(diào)蛋白聚糖cDNA(有或沒(méi)有基因修飾)。使用的術(shù)語(yǔ)“基因修飾(GeneticallyModified)”是為修飾表達(dá)纖調(diào)蛋白聚糖的去氧核糖酸(DNA)，以增加蛋白質(zhì)的某些特質(zhì)，例如轉(zhuǎn)錄效率、純化效率、利用提高結(jié)合效率增加蛋白質(zhì)的生物活性以及蛋白質(zhì)抗分解的能力等。使用的術(shù)語(yǔ)“重組表達(dá)(RecombinantlyExpressed)，，，在本發(fā)明中，指胎兒組織衍生出的cDNA(有或沒(méi)有基因修飾)，其是已被克隆到合適的表現(xiàn)載體(例如質(zhì)粒、腺病毒)，以達(dá)到由該cDNA得到蛋白質(zhì)表達(dá)的目的。使用的術(shù)語(yǔ)“溶解產(chǎn)物(Lysates)”在本發(fā)明中，指藉由使用適當(dāng)?shù)南礈靹┤芙饧?xì)胞并獲得的組合物。使用的術(shù)語(yǔ)“萃取物(Extracts)”在本發(fā)明中，指藉由更進(jìn)一步純化或是濃縮溶解細(xì)胞物質(zhì)以得到的組合物。使用的術(shù)語(yǔ)“培養(yǎng)基(Media)”在本發(fā)明中，指由沒(méi)有修飾或是基因修飾的胎兒細(xì)胞或組織的外在環(huán)境分離出的組合物。使用的術(shù)語(yǔ)“化合物(Compounds)”在本發(fā)明中可視為與“分子(Molecules)”相同，雖然術(shù)語(yǔ)“分子”在描述單一的實(shí)體(SingleEntity)時(shí)為更佳的解釋。使用的術(shù)語(yǔ)“健康的皮膚”或是“正常的皮膚”在本發(fā)明中是指沒(méi)有損傷的肌膚，例如沒(méi)有視覺上明顯的紅斑、水腫、過(guò)多或過(guò)少或不均勻的色素沉淀、疤痕的形成、干燥、或是面皰的形成。組織學(xué)上，正常或健康的皮膚是有關(guān)于具有形態(tài)外觀的皮膚組織，其包含組織完善的基體(Basal)層、刺狀(Spinous)層、粒狀(Granular)層，以及連續(xù)多層的角質(zhì)層。另外，正?；蚪】档谋砥影哂姓嫫ては陆M織的波動(dòng)連接點(diǎn)的末端分化的復(fù)層鱗狀上皮。正?；蚪】档钠つw更進(jìn)一步包含沒(méi)有體液滯留、細(xì)胞浸潤(rùn)、過(guò)多或過(guò)少細(xì)胞的增生、巨細(xì)胞去顆粒作用、及不全角化作用等等的癥狀，且暗示對(duì)于蘭格罕氏細(xì)胞(LangerhansCells)及真皮層膠質(zhì)細(xì)胞(DermalDendrocytes)的正常樹狀過(guò)程。此是出版在皮膚學(xué)的參考書中，例如HistopathologyoftheSkin,LeverandSchaumburg-Lever(eds.),J.B.LippincottCompany(1991)以MTextbookofDermatology,Championetal.,(eds.)，5thEd.BlackwellScientificPublications(1992)，特別是第三章"AnatomyandOrganizationofHumanSkin"；Physiology,BiochemistryandMolecularBiologyoftheSkin,Vols.IAndII,Goldsmith(ed.),OxfordPress(1991)，而參考資料中是有明確且充分的揭露，并全部結(jié)合在此引為參考。使用的術(shù)語(yǔ)“改善皮膚的狀況(PromotingSkinCondition)”包括預(yù)防性改善和/或治療性改善皮膚狀況，包括改善皮膚的視覺和/或觸覺間斷性。如同本發(fā)明所述的，治療性改善皮膚狀況包括減輕(例如減小、最小化和/或消除皮膚的間斷性)。改善皮膚的狀況包含改善皮膚的外觀和/或感覺。II.皮膚的狀況A.皮膚的發(fā)炎皮膚發(fā)炎的癥狀在本發(fā)明中，包含非過(guò)敏性皮膚發(fā)炎狀況、過(guò)敏性皮膚發(fā)炎狀況、神經(jīng)原性皮膚發(fā)炎狀況、腫瘤壞死因子-α-媒介的(TNF-alphal-mediated)狀況、紫外線輻射(UVR)引發(fā)的皮膚發(fā)炎狀況、其他皮膚發(fā)炎狀況?！阜沁^(guò)敏性皮膚發(fā)炎狀況」是一種皮膚發(fā)炎的狀況，其并非唯一由特定的抗原所媒介，此狀況包括刺激性接觸性皮炎、牛皮癬、濕疹、皮膚搔癢、脂逸性皮炎、錢癬、扁平苔癬、青春痘、粉刺、多形核白血球(Polymorphs)、結(jié)節(jié)性痤瘡(NodulocysticAcne)、痤瘡、老人斑痤瘡(SenileAcne)、以及二度痤瘡例如太陽(yáng)性痤瘡、藥物性痤瘡或是職業(yè)性痤瘡；其他角化異常的形式，例如魚鱗癬、魚鱗癬狀ichthyosiformconditions,Darier癥、掌跖角化_palmoplantarykeratodermises,leucoplasies,leucoplasiformconditions以及癬；其他皮膚異常例如泡疹皮膚病、膠原癥；以及由于光引發(fā)或不是光引發(fā)所導(dǎo)致肌肉外在的老化。「過(guò)敏性皮膚發(fā)炎狀況」是由一種或是多種的過(guò)敏原所導(dǎo)致的皮膚發(fā)炎的狀況?！高^(guò)敏原」在此是指一種物質(zhì)，其會(huì)引發(fā)免疫球蛋白E抗體反應(yīng)(IgEantibodyresponses)導(dǎo)致急性過(guò)敏癥及遲發(fā)性過(guò)敏反應(yīng)。一般而言，此類的反應(yīng)需要免疫系統(tǒng)對(duì)過(guò)敏原的過(guò)敏作用，例如，蚊子叮咬所引發(fā)的癢(MosquitoBite-InducedItch)以及發(fā)炎，是被認(rèn)為是免疫球蛋白E及免疫球蛋白G(IgG)對(duì)蚊子的涎管內(nèi)抗原物質(zhì)所介導(dǎo)的過(guò)敏反應(yīng)。在急性過(guò)敏癥中的主要對(duì)象是巨細(xì)胞，其具有高親和力的免疫球蛋白E受體(HighAffinityIgEreceptors)(OhtsukaΕ,etal.，JpnJPharmacol86:97_105，2001)，在免疫球蛋白E-依賴性刺激作用(IgE-cbpendentstimulation)時(shí)，巨細(xì)胞會(huì)釋放出數(shù)個(gè)引致發(fā)炎的介體(Pro-InflammatoryMediators)，例如腫瘤壞死因子-α、庫(kù)而卡M(KulkaΜ)以及畢福司AD(BefusAD)(ArchImmunolTherExp(Warsz)51:111_110，2003)。腫瘤壞死因子-α被發(fā)現(xiàn)預(yù)形成及被儲(chǔ)存在巨細(xì)胞的粒子中，或是接續(xù)著巨細(xì)胞活化作用被最新合成(IuvoneΤ,etal.,BrJPharmacol.128=700-704,1999)腫瘤壞死因子-α是一種多功能的細(xì)胞因子(Cytokine)，為免疫系統(tǒng)及炎性反應(yīng)的關(guān)鍵介體，且被發(fā)現(xiàn)預(yù)形成及被儲(chǔ)存在巨細(xì)胞的粒子中，或是接續(xù)著巨細(xì)胞活化作用被最新合成(GordonJR,andGalliSJ.,Nature.346274-276，1990)?！干窠?jīng)原性皮膚過(guò)敏(NeurogenicSkinInflammatory)狀況」是有關(guān)于皮膚發(fā)炎的情況，其是與前驅(qū)性發(fā)炎神經(jīng)肽釋放(ProinflammatoryNeuropeptideRelease)有關(guān)(例如在情緒激動(dòng)時(shí)或是有心理壓力下)。前驅(qū)性發(fā)炎神經(jīng)肽釋放可能存在于伴隨著皮膚過(guò)敏的狀況中，或是由非過(guò)敏或過(guò)敏發(fā)炎的皮膚狀況下發(fā)生。例如，壓力引發(fā)的痤瘡已經(jīng)被提出來(lái)為一種神經(jīng)原性發(fā)炎的例子。皮膚受神經(jīng)支配，其由主輸入感覺神經(jīng)(AfferentSensoryNerves)、節(jié)后膽堿能副交感神經(jīng)、節(jié)后腎上腺能以及膽堿能交感神經(jīng)來(lái)支配。感覺神經(jīng)是來(lái)自于背根節(jié)且是存在于全部皮膚中，其代表著輸入感覺神經(jīng)路徑的原初體壁部分。皮膚的感覺神經(jīng)系統(tǒng)是包含一個(gè)在皮膚中的細(xì)微C纖維(FineCFiber)網(wǎng)狀系統(tǒng)，其神經(jīng)支配多種細(xì)胞種類且在發(fā)炎反應(yīng)中扮演重要的角色。表皮層是被一個(gè)帶有游離分支末梢的三度空間的無(wú)髓鞘神經(jīng)纖維的網(wǎng)狀系統(tǒng)所神經(jīng)支配，其是出現(xiàn)在真皮層中。感覺神經(jīng)不只是扮演一個(gè)從皮膚傳導(dǎo)刺激物到中樞神經(jīng)系統(tǒng)的輸入的系統(tǒng)，還扮演一種由終端刺激目標(biāo)組織的輸出神經(jīng)分泌的方式。各式各樣的刺激物，例如有毒的刺激物，可能會(huì)直接活化主要感覺神經(jīng)元的周邊神經(jīng)末梢，其會(huì)產(chǎn)生神經(jīng)沖動(dòng)且被傳送到中樞，以及經(jīng)由逆行的軸突反射antidromicaxonreflexes傳送到周圍。在從感覺神經(jīng)末端釋放神經(jīng)肽時(shí)，重要的內(nèi)藏運(yùn)動(dòng)發(fā)炎及食性效應(yīng)會(huì)在末端組織中發(fā)生。正常的人類皮膚會(huì)直接由感覺神經(jīng)元或是皮膚細(xì)胞，例如角質(zhì)細(xì)胞、微血管內(nèi)皮細(xì)胞或是成纖維細(xì)胞表達(dá)不同的神經(jīng)肽。另外，免疫細(xì)胞或是原本就存在于皮膚中(例如巨細(xì)胞)，或是在發(fā)炎時(shí)滲透到皮膚中，其已被報(bào)道會(huì)產(chǎn)生神經(jīng)肽。皮膚的神經(jīng)纖維可經(jīng)由神經(jīng)肽局部的釋放來(lái)控制發(fā)炎反應(yīng)，其中，神經(jīng)肽局部的釋放可調(diào)整急性及慢性的皮膚發(fā)炎過(guò)程，例如血管移動(dòng)性、細(xì)胞運(yùn)輸、活化作用以及營(yíng)養(yǎng)作用。臨床上的證據(jù)支持神經(jīng)肽分泌及發(fā)炎的發(fā)生間的連結(jié)關(guān)系在不同的皮膚疾病中被發(fā)現(xiàn)，例如特異性過(guò)敏皮炎、牛皮癬、簇狀禿發(fā)、及痤瘡，其通常在情緒上有壓力時(shí)會(huì)容易惡化。確實(shí)地，壓力已顯示出會(huì)引誘物質(zhì)P(SubstanceP，一種強(qiáng)力的前驅(qū)性發(fā)炎神經(jīng)月太)白勺((πΙΜToyodaΜ,etal.,Neuropeptidesandsebaceousglands.EurJDermatol.12=422-427,2002)。一些研究已證實(shí)，巨細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)通常與神經(jīng)近距離接觸，在MC及神經(jīng)系統(tǒng)之間可能存在有功能性的交互作用。另外，最近的證據(jù)提到，物質(zhì)P在親密的神經(jīng)-巨細(xì)胞交談(IntimateNerve-MastCellCrossTalk)中為一種重要的介體。這些發(fā)現(xiàn)啟示了，經(jīng)由巨細(xì)胞在內(nèi)皮細(xì)胞-白血球(Endothelial-Leukocyte)交互作用的調(diào)節(jié)中，藉由皮膚神經(jīng)纖維內(nèi)生的釋放的物質(zhì)P可能是重要的。已經(jīng)證實(shí)，被巨細(xì)胞去顆粒產(chǎn)物所誘引出的前驅(qū)性炎癥效應(yīng)，可通過(guò)對(duì)TNF-α的阻斷性抗血清來(lái)抑制。因此，細(xì)胞事件的級(jí)聯(lián)反應(yīng)包含巨細(xì)胞去顆?；扒膀?qū)性炎性細(xì)胞因子(例如腫瘤壞死因子-α)的釋放，將會(huì)在相鄰小靜脈的內(nèi)皮引誘出黏合分子(例如選擇蛋白E-selection)，然后其會(huì)幫助白血球的局部集聚，以及更進(jìn)一步擴(kuò)大炎性反應(yīng)。故腫瘤壞死因子_α亦可能控調(diào)神經(jīng)原性發(fā)炎?！改[瘤壞死因子-α媒介的狀況(TNF-alphamediatedconditions)」是有關(guān)于局部的皮膚的失調(diào)，在此腫瘤壞死因子-α是導(dǎo)致該失調(diào)表現(xiàn)的一個(gè)主要介體。腫瘤壞死因子-α(過(guò)去稱為惡病質(zhì)素(Cachectin))，由大量的細(xì)胞或組織所產(chǎn)生，例如嗜中性白血球、活性淋巴細(xì)胞、巨嗜細(xì)胞、NK細(xì)胞、LAK細(xì)胞、星細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、巨細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞及其他上皮細(xì)胞。這些特別的細(xì)胞因子控有不同種類的生物學(xué)活性，其包括對(duì)抗腫瘤的細(xì)胞毒效應(yīng)、嗜中性白血球的活化、細(xì)胞的正常增生、炎性、免疫及抗病毒的應(yīng)答。一種腫瘤壞死因子-α的膜結(jié)合(Membrane-Bound)形式是被置放于淋巴細(xì)胞或單核血球內(nèi)，在此它參與細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)發(fā)生及活化。腫瘤壞死因子_α特別的過(guò)量分泌是已被知道為決定某些疾病、感染以及發(fā)炎狀況的重要決定因素，所述發(fā)炎狀況包括風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、惡病質(zhì)素、內(nèi)毒素休克、發(fā)炎性腸道疾病、克隆氏病(Crohn’sdisease)、牛皮癬、接觸性皮膚炎、成人呼吸窘迫癥、感染、移植、心肌缺氧/再灌注損傷，涉及嗜酸性的疾病(例如氣喘、過(guò)敏等等)、移植物抗宿主反應(yīng)、骨骼溶蝕作用、發(fā)炎性腸道疾病、多發(fā)性硬化癥(MS)、糖尿病、AIDS以及阿爾茨海默氏病及/或與阿爾茨海默氏病患有關(guān)的體重下降(回顧于BeutlerB.,TumorNecrosisFactors,TheMoleculesAndTheirEmergingRoleInMedicineRavenPress,1992,andEuropeanCytokineNetwork,5(2)(1994)?！缸贤夤廨椛涿浇榈钠つw炎性狀況(UVRMediatedSkinInflammatorycondition)」是有關(guān)于皮膚過(guò)度曝曬在紫外光輻射下的皮膚發(fā)炎的狀況?！父魇礁鳂悠つw發(fā)炎的狀況(MiscellaneousSkinInflammatorycondition)J是有關(guān)于一種肌皮膚發(fā)炎的情況，其非專指上述累及完整(Intact)或是非完整(Non-intact)的皮膚。皮膚感染是為皮膚發(fā)炎的例子，其發(fā)生在完整或是非完整的皮膚上。傷口是皮膚發(fā)炎的例子，其是發(fā)生在非完整的皮膚上。如上所述，在身體中最大器官的皮膚亦可產(chǎn)生腫瘤壞死因子-α。因?yàn)槠つw代表著對(duì)一個(gè)敵對(duì)環(huán)境的邊界，因此，它需要生物武器與某些頑強(qiáng)的敵人，例如化學(xué)刺激劑、細(xì)菌、昆蟲叮咬、陽(yáng)光以及物理上的創(chuàng)傷作戰(zhàn)。而前驅(qū)性炎性細(xì)胞因子是扮演著時(shí)刻準(zhǔn)備著的信差的角色，在受到挑戰(zhàn)時(shí)來(lái)通知及指揮免疫系統(tǒng)。B.皮色素沉淀在不同的個(gè)體及種族間，其膚色的不同是由黑色素細(xì)胞所產(chǎn)生的黑色素分布與量所決定。事實(shí)上，皮膚顏色的濃淡的差別不是由黑色素細(xì)胞的數(shù)目及密度所決定，這在任何種族的人類基本上都是相同的，但是卻由其黑色素產(chǎn)生的活性的程度、黑色素小體的數(shù)量及大小、黑色素沉積到黑色素小體上的形式、以及成熟的黑色素小體貢獻(xiàn)到周圍的角MifflIfiMi^胃的。(回Abdel—MalekΖ.,ThePigmentarySystem=PhysiologyandPathophysiology.Eds.NordlunJJ,etal.,pp.115-122,1998)皮膚色素沉淀的調(diào)節(jié)藉由黑色素細(xì)胞所產(chǎn)生的黑色素以及細(xì)胞增生是由數(shù)個(gè)因子所調(diào)節(jié)，其包括紫外線輻射、類固醇激素、炎性介體、生長(zhǎng)因子、肽激素、黑色素細(xì)胞激素(回顧于Abdel-MalekZ,1998)。藉由表皮細(xì)胞或角質(zhì)細(xì)胞曝露紫外線輻射下可刺激各種激素、細(xì)胞因子及生長(zhǎng)因子的合成。角質(zhì)細(xì)胞暴露在紫外線輻射下會(huì)產(chǎn)生白介素(IL)-I以及腫瘤壞死因子(TNF)-Ci兩種主要的炎性細(xì)胞因子。更者，腫瘤壞死因子-α已被證實(shí)為形成曬斑(即凋亡)角質(zhì)細(xì)胞的一個(gè)重要角色。藉由紫外線輻射的處理，角質(zhì)細(xì)胞的堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的合成亦會(huì)被增加。堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)于人類的黑色素細(xì)胞是促有絲分裂的(Mitogenic)。另外，紫外線輻射亦會(huì)增加角質(zhì)細(xì)胞內(nèi)皮素(ΕΤ)_1、促黑激素(MSH)、以及促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)的合成。角質(zhì)細(xì)胞內(nèi)皮素-1對(duì)于黑色素細(xì)胞是一種強(qiáng)力的有絲分裂原及黑素原，并且是藉由白介素-1、腫瘤壞死因子-α以及紫外光輻射來(lái)調(diào)節(jié)，而促黑激素及促腎上腺皮質(zhì)激素為促有絲分裂的及黑色素原的，其對(duì)紫外線輻射的melanogeniceffect可起到轉(zhuǎn)換器的功能。角質(zhì)細(xì)胞內(nèi)皮素_1亦可與基礎(chǔ)性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子及促黑激素協(xié)同作用，來(lái)刺激黑色素細(xì)胞的增殖。性類固醇激素(雄激素及雌激素)在皮膚色素沉積上的作用已被認(rèn)可有很長(zhǎng)一段時(shí)間。乳暈及生殖器色素的增加已經(jīng)主要被歸因于這些激素。在懷孕期間雌激素水平的改變是與皮膚變暗相關(guān)聯(lián)，見于黑斑病(Abdel-MalekZ，1998)。發(fā)炎后高色素沉積的臨床觀察亦指著存在這個(gè)現(xiàn)象中的免疫炎性介體。炎性細(xì)胞因子，例如白介素-1及腫瘤壞死因子-α，會(huì)增加角質(zhì)細(xì)胞的內(nèi)皮素的產(chǎn)生及分泌(ManakaL，etal.,BrJDermatol145:895_903，2001)。環(huán)加氧酶(Cyclooxygenase)其他性介體路徑的，例如前列腺素E(prostaglandinΕ)，已被發(fā)現(xiàn)會(huì)在曝曬過(guò)紫外線輻射后的皮膚中增加以及提高黑色素生成(Melangenesis)。(Abdel-MalekΖ,1998)雖然很多分子參與了黑色素生成的調(diào)節(jié)，但從之前的部分可以很清楚的了解炎性細(xì)胞因子、腫瘤壞死因子-α在暴露于紫外線輻射下以及其他會(huì)導(dǎo)致或增加皮膚發(fā)炎的狀況，例如受傷、痤瘡、昆蟲叮咬等等的皮膚色素沉淀的調(diào)節(jié)中扮演一種類似初始介體(InitialMediator)的主要角色。腫瘤壞死因子-向上調(diào)節(jié)(TNF-upiregulation)可能會(huì)引發(fā)其他分子的表達(dá)，這些分子可能更進(jìn)一步增加發(fā)炎及/或黑色素生成的刺激。例如，腫瘤壞死因子-α?xí)碳と祟惢杭?xì)胞和皮膚的成纖維細(xì)胞產(chǎn)生炎性介體前列腺素E2(Dayer，JM,etal.，JExpMed.162=2163-2168,1985)以及黑色素生成介體內(nèi)皮素介體-1。因此，抑制腫瘤壞死因子_α的活性，在預(yù)防能夠產(chǎn)生不受歡迎的皮膚色素沉淀作用的整個(gè)炎性和黑色素生成刺激的級(jí)聯(lián)反應(yīng)中會(huì)是有用的。另外，堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)亦在皮膚的顏色中具有重要意義。堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子是被紫外線輻射所誘生，對(duì)于黑色素細(xì)胞為促有絲分裂的(Mitogenic)亦增加干細(xì)胞因子(SCF)的產(chǎn)生(SugimotoY,etal.，JCellPhysiol.181=285-294,1999)。干細(xì)胞因子誘導(dǎo)黑細(xì)胞的增生同時(shí)增加黑色素細(xì)胞的數(shù)目及黑色素(GrichnikJM,etal.，JAmAcadDermatol.33=577-583,1995)在全身性硬化癥患者的血清和皮膚中干細(xì)胞因子的過(guò)度表達(dá)是與過(guò)多色素沉淀有關(guān)聯(lián)(KihiraC,etal.，JDermatolSci.2072-78,1998andYamamotoΤ,etal.，BrJDermatol.144199-200，2001)，因此，堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的調(diào)控不只影響了堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，而且也影響了干細(xì)胞因子對(duì)黑色素細(xì)胞的增殖以及黑色素的產(chǎn)生的作用。C.真皮膠原_組織(Organization)真皮的成份真皮層提供表皮的支持及血液提供，真皮層在維持皮膚的彈性、厚度及外觀上亦很重要。真皮層大部分由成纖維細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)構(gòu)成。免疫細(xì)胞例如巨細(xì)胞、多核型白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、以及巨噬細(xì)胞亦存在于真皮中。細(xì)胞外基質(zhì)的組成主要由成纖維細(xì)胞(Fibroblasts)來(lái)決定，而成纖維細(xì)胞產(chǎn)生了多種成分，例如膠原、彈性蛋白及其他母質(zhì)蛋白(MatrixProtein)。細(xì)胞外基質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的黏合(CellAdhesion)、增生、遷移和分化扮演一個(gè)類似支架的角色，且對(duì)組織給予機(jī)械強(qiáng)度及彈性(KuwabaK，etal.，JDermatolSci.29185-194，2002)。細(xì)胞外基質(zhì)最主要的組成為膠原，其功能將在下一個(gè)章節(jié)作詳細(xì)的介紹。與皮膚的膠原最有關(guān)聯(lián)的是彈性蛋白纖維，后者被發(fā)現(xiàn)在膠原蛋白束的周圍且賦予皮膚回彈(recoil)的性質(zhì)(即皮膚在拉伸之后「回縮」(SpringBack)的能力)，令人相信的是，損害彈性蛋白纖維會(huì)導(dǎo)致皮膚彈性的降低，其可在老化的皮膚中看見。其他母質(zhì)蛋白包含糖蛋白，例如纖維結(jié)合蛋白以及腱生蛋白(Tenascin)，其會(huì)影響細(xì)胞的遷移、黏合、取向，以及糖胺聚糖(GAGs)例如透明質(zhì)酸、皮膚素硫酸鹽(DermatanSulfate)和肝素硫酸鹽，其對(duì)于細(xì)胞的成長(zhǎng)以及黏合、膜受體的功能以及蛋白聚糖(例如飾膠蛋白聚糖decrin)(BaumannL.Basicscienceofthedermis.CosmeticDermatologyPrinciplesandPractice.HongKong:TheMcGrawHillCompanies,Inc.,pp.9-12,2002))可能是重要的。糖胺聚糖(GAGs)及蛋白聚糖已被證實(shí)為各種細(xì)胞行為的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑，且將在下述做更進(jìn)一步的討論。皮膚膠原_一般的特征在細(xì)胞外基質(zhì)中膠原是含量最豐的蛋白質(zhì)。膠原是為全部結(jié)締組織的主要結(jié)構(gòu)元素，其提供了組織的穩(wěn)定性及結(jié)構(gòu)完整性。已經(jīng)有超過(guò)21種不同的膠原被描述。依據(jù)它們的結(jié)構(gòu)及超分子組織，它們被分類為微纖維-形成膠原(Fibril-FormingCollagens(第I，II，III，V，andXI類))、基底膜膠原(basementmembranecollagen(第IV類))、微纖維膠原(microfibrillarcollagen(第VI類))、固定微纖維膠原(anchorfibrils(第VII類))、六角形網(wǎng)狀構(gòu)造膠原(hexagonalnetwork-formingcollagens(第VIIIandX類))、原纖維-締結(jié)膠原(fibril-associatedcollagens，第IXXIIXIVXIXXXXXI類))、跨膜膠原(transmembranecollagens(第XIIIandXVII類))、以及多重調(diào)節(jié)蛋白(multiplexins)(第XVXVIandXVIII類))。盡管它們結(jié)構(gòu)上有高差異性，但全部膠原家族的成員由具有特征性的三條α鏈組成的右手三股螺旋。大約全部膠原的90%為微纖維-形成膠原(回顧于GelseK,PoschlE,andAignerΤ.Collagens-structure,function,andbiosynthesis.AduDrugDelRev55，1531-1546，2003)。第一類膠原構(gòu)成80%-85%的真皮基質(zhì)且負(fù)責(zé)真皮的拉伸強(qiáng)度。第一類膠原在光照所導(dǎo)致的老化肌膚中會(huì)減少，且在真皮受傷后的皮膚(例如傷口、皮膚整平)中會(huì)增加。第三類膠原是第二豐富的真皮膠原，構(gòu)成10-15%的真皮基質(zhì)且對(duì)于皮膚的容量伸縮性是很重要的(BaumarmL.Basicscienceofthedermis.CosmeticDermatologyPrinciplesandPractice.HongKongTheMcGrawHillCompanies,Inc.,pp.9-12,2002)。真皮膠原_組織由于細(xì)胞外基質(zhì)的主要組成為膠原，因此細(xì)胞外基質(zhì)的機(jī)械性質(zhì)、生理性質(zhì)以及生物學(xué)性質(zhì)會(huì)被膠原的超分子(Super-Molecular)結(jié)構(gòu)所影響，例如膠原分子組織為微纖維、微纖維組織為膠原束、膠原束組織為組織特異性基質(zhì)，膠原的結(jié)構(gòu)或是組織會(huì)深深的影響不同組織的功能或外觀(Kuwabaetal.，2002)。膠原分子或參與膠原微細(xì)纖維生成的分子的先天性變異會(huì)導(dǎo)致膠原組織瓦解及獨(dú)特的疾病，例如先天結(jié)蒂組織異常疾病(EhlersDanlos)(AmeyeL,andYoungMF.Micedeficientinsmallleucine—richproteoglycans:novelinvivomodelsforosteoporosis,osteoarthritis,Ehlers-Danlossyndrome,musculardystrophy,andcornealdiseases.Glycobiology.12:107R_116R，2002)。后天的情況例如在紫外光輻射下延長(zhǎng)曝曬也會(huì)導(dǎo)致正常組織結(jié)構(gòu)的破壞以及由無(wú)序的膠原替代導(dǎo)致皮膚變薄及有皺紋。最后，后天的對(duì)于不同組織之正常膠原結(jié)構(gòu)的受傷或疾病會(huì)導(dǎo)致無(wú)序的膠原在修復(fù)期間的產(chǎn)生及沉積。這個(gè)例子包括肝硬化、肺纖維化以及皮膚疤痕的形成。因此，很多不相似的過(guò)程不論皮膚有或沒(méi)有受傷，都會(huì)導(dǎo)致膠原的瓦解并且膠原組織化的促進(jìn)有可能用來(lái)治療不同的臨床狀況。糖胺聚糖(Glycosaminoglycan)糖胺聚糖構(gòu)成了在細(xì)胞膜以及所有哺乳動(dòng)物的細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)存在的糖綴合物glycoconjugate相當(dāng)大的部分。他們具有能力去結(jié)合或改變蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的交互作用或是酶的活性，其會(huì)使他們成為在發(fā)育、體內(nèi)平衡及疾病上成為細(xì)胞應(yīng)答性的(cellularresponsiveness)重要決定因素。雖然對(duì)肝素硫酸鹽OfeparinSulfate)、肝素以及透明質(zhì)酸已有擴(kuò)大的研究，但皮膚素硫酸鹽主要的糖胺聚糖，其占了皮膚干重量的0.3%。另外，皮膚素硫酸鹽也稱為軟骨素硫酸鹽B，已被證實(shí)可提高堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子以及成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-7(FGF-7)的活性，皮膚素硫酸鹽以及皮膚素硫酸鹽締合的蛋白聚糖(DermatanSulfateAssociatedProteoglycans)例如飾膠蛋白聚糖Decorin，在受傷后會(huì)被顯著地上調(diào)(Upregulated)。由傷口產(chǎn)生的皮膚素硫酸鹽會(huì)經(jīng)由ICAM-1的刺激活化內(nèi)皮細(xì)胞白血球粘連。間接地，皮膚素硫酸鹽蛋白聚糖例如飾膠蛋白聚糖Decorin以及雙鏈蛋白聚糖Biglycan的產(chǎn)生已經(jīng)被認(rèn)為與增加的疤痕有關(guān)(回顧于TrowbridgeJM,andGalloRL.Dermatansulfate:newfunctionsfromanoldGAG.Glycobiology.12117R-125R,2002；TrowbridgeJM,etal.，JBiolChem.277:42815_42820，2002)。因此，皮膚素硫酸鹽是與增加的白血球增多癥有關(guān)，其會(huì)助長(zhǎng)發(fā)炎以及助長(zhǎng)黑色素細(xì)胞增生之堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的增加。另外，以一種將皮膚素硫酸鹽作為其唯一底物的分解酶軟骨素酶WChondroitinaseB)來(lái)治療，抑制了堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子媒介的成纖維細(xì)胞增生(DenholmEM,elal.，EurJPharmacol.400:145_153，2000；PojasekK，etal.，JBiolChem.277:31179_31186，2002)。因此，糖胺聚糖水平的調(diào)節(jié)或是直接經(jīng)由用酶來(lái)降解，或是間接經(jīng)由它們所締合的蛋白聚糖來(lái)調(diào)節(jié)，可能使得發(fā)炎及過(guò)多色素沉淀降低至最小。雖然不希望藉由一種特定理論來(lái)界定，但藉由軟骨素酶B介導(dǎo)的皮膚素硫酸鹽水平的降低，可以降低成纖維細(xì)胞(fibroblase)及黑色素母細(xì)胞(melanocyte)因堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子所造成的增生，同時(shí)促進(jìn)皮膚再生、膠原組織排列、及降低色素沉著以及減低ICAM-I介導(dǎo)的作用而導(dǎo)致對(duì)白血球增多及發(fā)炎反應(yīng)的抑制。另外，有證據(jù)認(rèn)為糖胺聚糖，例如皮膚素硫酸鹽，其在修復(fù)期間大小的改變以及特殊糖胺聚糖的大小對(duì)于膠原組織具有潛在的含意。特別是，雖然小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖(SmallLeucineRichProteoglycans,SLRPs)影響膠原微纖維的的形成，但在小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖上特殊的糖胺聚糖的大小會(huì)影響膠原纖維的間隔(即微纖維間的距離)以及膠原微纖維的直徑。例如，在成年小鼠修復(fù)期間，延長(zhǎng)的糖胺聚糖是與細(xì)的膠原微纖維的增大的微纖維間的空間聯(lián)系在一起，而正常大小的糖胺聚糖與緊密堆積且厚實(shí)的膠原束結(jié)合(KuwabaK，etal.，JDermatolSci.29185-194，2002)。因此，經(jīng)由不同的對(duì)特定的糖胺聚糖專一性的酶來(lái)調(diào)節(jié)糖胺聚糖的長(zhǎng)度，可用來(lái)更進(jìn)一步地促進(jìn)膠原的組織化。例如，角質(zhì)素硫酸鹽KeratanSulfates(另外一種形式的糖胺聚糖)可以經(jīng)由使用不同的角質(zhì)素硫酸鹽降解酶KeratanSulfateDefradingEnzymes來(lái)調(diào)節(jié)。(回顧于YamagishiK,etal.，JBiolChem.278:25766_25772，2003)。^^ΜΜ-ΦSWSS^H(SmallLeucine-RichProteoglycans)另一類重要的母質(zhì)蛋白(MatrixProtein)為小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖，其已被證實(shí)結(jié)合于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TransformingGrowthFactor-Beta)且控制膠原的微纖維生成。飾膠蛋白聚糖Decorin以及雙鏈蛋白聚糖Biglycan是為小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖家族的兩個(gè)重要的成員，其已在上述討論之。小的亮氨酸-豐富的蛋白聚糖家族很快速的成長(zhǎng)且至少包含13種成員(回顧于AmeyeLandYoungMF.Micedeficientinsmallleucine-richproteoglycans:novelinvivomodelsforosteoporosis,osteoarthritis,Ehlers-Danlossyndrome,musculardystrophy,andcornealdiseases。Glycobiology12:107R_116R，2002)。大多數(shù)小的亮氨酸-豐富的蛋白聚糖可被歸分為三大類，飾膠蛋白聚糖(Decorin)以及雙鏈蛋白聚糖(Biglycan)分別為第一類小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖的代表，其包含一種獨(dú)特的N-端半胱氨酸序列(N-terminalcysteinesequence)且分別攜帶一個(gè)或兩個(gè)軟骨素鏈或皮膚素硫酸鹽鏈。不像第一類，第二類小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖包含一種不同的N-端半胱氨酸序列且一般攜帶聚乳糖氨(polylactosamine)或是角質(zhì)素硫酸鹽鏈(keratansulfatechains)。纖調(diào)蛋白聚糖、腔蛋白聚糖(Lumican)，角聚糖(Keratocan)以及骨粘連蛋白(Osteoadherin)為第二類小亮氨酸_豐富的蛋白聚糖的例子。第三類小亮氨酸_豐富的蛋白聚糖是顯示出一種N-端半胱氨酸序列的特征且包含硫酸化的酪氨酸(Sulfatedtyrosine)殘基在N-端的尾端中。一般而言，第一類小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖傾向于比第二類成員更普遍存在，第二類小亮氨酸_豐富的蛋白聚糖更多組織特異性的分布。某些小亮氨酸_豐富的蛋白聚糖與第I、II、V、VI、XII及XIV類膠原結(jié)合來(lái)調(diào)節(jié)膠原的微纖維生成。另外，至少有三種小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖(飾膠蛋白聚糖(decorin)、雙鏈蛋白聚糖(biglycan)以及纖調(diào)蛋白聚糖)結(jié)合到一種多功能的細(xì)胞因子即轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子上，其參與發(fā)炎細(xì)胞的自然凋亡(InflammationApoptosis)、細(xì)胞增生、細(xì)胞的分化、以及疤痕的形成。根據(jù)這些發(fā)現(xiàn)，某些專利已經(jīng)通過(guò)中和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β來(lái)減低疤痕組織或是傷口的能力提出申請(qǐng)，其辦法為通過(guò)在飾膠蛋白聚糖(decorin)、蛋白聚糖(proteoglycan)家族中潛在轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β調(diào)節(jié)體(TGF-betamodulators)的應(yīng)用，包括飾膠蛋白聚糖(decorin)、雙鏈蛋白聚糖(biglycan)以及纖調(diào)蛋白聚糖。(美國(guó)專利第6509314號(hào)，美國(guó)專利第5583103號(hào)，美國(guó)專利第5958411號(hào)，美國(guó)專利第5654270號(hào)，以及美國(guó)專利第5824655號(hào))。另外，因?yàn)槌衫w維細(xì)胞所產(chǎn)生的飾膠蛋白聚糖decorin似乎會(huì)隨著年齡及光的損害而減少，還因?yàn)樵谄つw中飾膠蛋白聚糖decorin的缺乏是與拉伸強(qiáng)度的減少以及皮膚脆弱性有關(guān)，現(xiàn)在的某些專利已特別提到飾膠蛋白聚糖decorin，但不是其他的小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖用于預(yù)防或治療皮膚老化。例如，局部應(yīng)用綴合的亞麻油酸(conjugatedlinoleicacid)、petroselinicacid、以及其他的化合物促進(jìn)飾膠蛋白聚糖decorin在皮膚中的大量合成(美國(guó)專利第6，551，602號(hào)；美國(guó)專利第6，455，057號(hào)；美國(guó)專利第6，440，434號(hào)；美國(guó)專利第6，423，325號(hào)；美國(guó)專利第6，287，553號(hào)；美國(guó)專利第6，042，841號(hào))或是在化妝品及皮膚科組合物中實(shí)際使用飾膠蛋白聚糖。(美國(guó)專利公開字號(hào)第20030124152)。現(xiàn)存的基因剔除小鼠模型證實(shí)，雖然小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖大略地屬于相同的蛋白聚糖家族，但是它們具有顯著的不能互換的不同作用。例如，飾膠蛋白聚糖decorin(第一類小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖)缺失的小鼠表現(xiàn)出皮膚的脆弱性，而纖調(diào)蛋白聚糖(第一類小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖)缺失的小鼠則未表現(xiàn)出已知的皮膚缺陷(AmeyeLandYoungΜ,2002,Glycobiology,12(9):107R_116R)。更者，定靴的雙鏈蛋白聚糖biglycan(第一類小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖)的瓦解導(dǎo)致骨質(zhì)的減少但沒(méi)有描述到皮膚異常，而腔蛋白聚糖Lumican(第二類小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖)基因剔除的小鼠表現(xiàn)出了角膜混濁(CornealOpacity)。因此，雖然飾膠蛋白聚糖decorin，雙鏈蛋白聚糖biglycan，纖調(diào)蛋白聚糖以及Iumican歸類于相同的小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖家族，飾膠蛋白聚糖decorin/雙鏈蛋白聚糖biglycan和纖調(diào)蛋白聚糖/lumican屬于同類的蛋白聚糖，但每一成員具有不同的生物學(xué)功能，對(duì)膠原微纖維生成、結(jié)構(gòu)、以及組織具有不可交換的作用。就組織分布而言，飾膠蛋白聚糖decorin和雙鏈蛋白聚糖biglycan是普遍存在的，雖然它們?cè)诟鹘M織中的定位非常分散，以飾膠蛋白聚糖decorin被發(fā)現(xiàn)更多在組織的細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)(在此它鍵結(jié)到第一類膠原上)(VogelKG,etal.,BiochemJ.223587-597,1984)而雙鏈蛋白聚糖biglycan更定位在靠近在細(xì)胞的周圍(BiancoP，etal.，JHistochemCytochem.381549-1563，1990)。飾膠蛋白聚糖decorin是為一種主要的皮膚素硫酸鹽蛋白聚糖(DermatanSulfateProtoglycan)，其分布在皮膚中的膠原微纖維的表面上(KuwabaK,etal.，JDermatolSci.29185-194，2002)。纖調(diào)蛋白聚糖在軟骨、腱以及鞏膜(Sclera)中以高濃度更加局限地分布，而在皮膚中及礦化的骨骼中含量很低(HeinegardD,etal.,JBiolChem.261:13866_13872，1986)。腔蛋白聚糖Lumican是主要被發(fā)現(xiàn)在角膜中(回顧于AmeyeandYoung，2002)。D.老化隨著年齡的增加，成纖維細(xì)胞的增生以及合成膠原及其他細(xì)胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)(例如蛋白聚糖)的能力會(huì)下降(TakedaK，etal.，JCellPhysiol.153=450-459,1992)。例如，第一類膠原以及飾膠蛋白聚糖decorin的產(chǎn)生在老化的皮膚中會(huì)減少(HunzelmannN,etal.,BiochimBiophysActa.1360:64_70,1997andCarrinoDA,etal.，JBiolChem.27817566-17572，2003)。另外，較老的成纖維細(xì)胞亦展現(xiàn)了較高的基底(basal)和誘生的間質(zhì)膠原酶(interstitialcollagenase)穩(wěn)態(tài)信使核糖核酸(mRNA)的水平(BurkeEM,etal.,ExpGerontol.29=37-53,1994)因此，隨著年齡增長(zhǎng)在進(jìn)行性的細(xì)胞外基質(zhì)的沉積(例如第一類膠原，飾膠蛋白聚糖decorin)以及退化(例如膠原酶)之間相對(duì)的平衡會(huì)傾向于總的細(xì)胞外基質(zhì)的退化。這會(huì)導(dǎo)致支持性真皮漸漸的變薄及分裂，之后導(dǎo)致下垂以及表皮產(chǎn)生皺紋，即皺紋的形成。在微觀的水平上，在老化皮膚中的膠原是以在類似繩索束中變厚的微纖維組織為特征，其與在年輕皮膚中見到的有組織的形態(tài)相比之下為混亂的(例如參見OikarinenA.,PhotodermatolPhotoimmunolPhotomed7:3_4，1990)。除了由于時(shí)間導(dǎo)致的老化，也可能會(huì)發(fā)生由于暴露在陽(yáng)光及/或環(huán)境污染下所造成皮膚加速老化。例如，暴露的在紫外線輻射下所發(fā)生皮膚老化。暴露在紫外線輻射下會(huì)引起皮膚的炎性反應(yīng)，這在很大程度上由腫瘤壞死因子-α以及其他在此所討論的因子介導(dǎo)。腫瘤壞死因子-α已被證實(shí)抑制真皮成纖維細(xì)胞(dermalfibroblasts)中的膠原及纖連蛋白(fibronectin)的合成(MauvielA，etal.，JInvestDermatol.96:243_249，1991；MauvielA，etal.，F(xiàn)EBSLett.236:47_52，1988)以及促進(jìn)膠原的退化(DayerJM,etal.，JExpMed.162:2163_2168，1985；SiwikDA,etal.，CircRes.861259-1265，2000)-兩者都會(huì)造成皮膚的老化。暴露在紫外線輻射下極大地向上調(diào)整(upgulate)某些類型的膠原降解酶。即基質(zhì)金屬蛋白水解酶(MMPs)(間質(zhì)膠原酶亦屬于此類酶)的產(chǎn)生。因?yàn)榛|(zhì)金屬蛋白水解酶會(huì)降解膠原，由于紫外線輻射的暴露造成的基質(zhì)金屬蛋白水解酶長(zhǎng)期提高，會(huì)導(dǎo)致在光老化皮膚中看見的組織瓦解以及結(jié)塊的膠原(clumpedcollagen)。因此，基質(zhì)金屬蛋白水解酶可能代表了一種伴隨著紫外線輻射的曝曬，而使得第一類膠原水平降低17WI/LrfjlJ(BaumannL.Photoaging.CosmeticDermatologyPrinciplesandPractice.HongKong=TheMcGrawHillCompanies,Inc.,pp.13—20，2002)。紫外線輻射至某種程度時(shí)亦會(huì)導(dǎo)致真皮的降解。更者，紫外線輻射亦會(huì)誘生出堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，其已知可刺激血漿酶原活化蛋白(plasminogenactivator)以及膠原酶的活性，其會(huì)促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的分角軍(回顧于AbrahamJAandKlagsbrunΜ.Modulationofwoundrepairofmembersofthefibroblastgrowthfactorfamily.Ed.ClarkRAF.TheMolecularAndCellularBiologyOfWoundRepair.Vol.xxiii.NewYork:PlenumPress,pp.195-248,1996)。利用纖調(diào)蛋白聚糖來(lái)調(diào)節(jié)堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的活性亦可防止或是減少包括膠原瓦解的光老化作用。因此，正常的及加速的老化是與整體性的細(xì)胞外基質(zhì)(例如膠原、飾膠蛋白聚糖decorin、纖連蛋白)生成的減少，以及細(xì)胞外基質(zhì)退化的增加有關(guān)(例如基質(zhì)金屬蛋白水解酶、血漿酶原活化蛋白)，其導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)的進(jìn)行性變薄以及膠原的組織瓦解和結(jié)塊。因此，在改善皮膚的狀況特別是老化的皮膚方面，防止細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生的減少或是細(xì)胞外基質(zhì)退化的增加的方法(例如利用抑制腫瘤壞死因子_α及/或堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子)，或是改善膠原的組織化的方法可能是有用的。III.改善皮膚新生的方法及組合物在此描述的本發(fā)明之一方面，是為一種調(diào)整皮膚狀況的方法，例如促進(jìn)皮膚的再生。此方法包含一個(gè)步驟，其可促進(jìn)膠原的組織化、調(diào)節(jié)皮膚的炎性狀況、調(diào)節(jié)皮膚的色素沉淀以及上述幾種的組合。在一個(gè)實(shí)施例中，調(diào)節(jié)皮膚狀況的方法可以藉由例如調(diào)節(jié)某種化合物的水平來(lái)達(dá)成，該化合物可為哺乳動(dòng)物皮膚中的小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖、糖胺聚糖、基質(zhì)金屬蛋白水解酶或是上述幾種的組合。小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖可以是例如纖調(diào)蛋白聚糖、腔蛋白聚糖Iumican、飾膠蛋白聚糖、雙鏈蛋白聚糖、和它們的組合。糖胺聚糖可為例如皮膚素硫酸鹽、軟骨素硫酸鹽、角質(zhì)素硫酸鹽和它們的組合?；|(zhì)金屬蛋白水解酶可為基質(zhì)金屬蛋白水解酶-1或基質(zhì)金屬蛋白水解酶_9，或是上述幾種的組合。小亮氨酸_豐富的蛋白聚糖的水平可被應(yīng)用至皮膚的一種組合物來(lái)調(diào)節(jié)，該組合物包含一個(gè)或是多個(gè)有效量的小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖。皮膚可是完整的或是非完整的，有或沒(méi)有真皮的受傷，或是非完整的皮膚具有表皮的受傷。皮膚素硫酸鹽、軟骨素硫酸鹽、角質(zhì)素硫酸鹽keratansulfate及其組合可以通過(guò)將包含一個(gè)或是多個(gè)酶的組合物施加到皮膚來(lái)調(diào)節(jié)，這些酶調(diào)節(jié)膠原微纖維生成以及微纖維間的空間和/或調(diào)節(jié)成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的無(wú)組織的基質(zhì)沉積。示范性的調(diào)節(jié)膠原微纖維生成、微纖維間的空間、及/或成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的無(wú)組織的基質(zhì)沉積的酶包括但不限于軟骨素酶AC、軟骨素酶B、內(nèi)-β-半乳糖苷酶endo-beta-galactosidases、角質(zhì)素酶keratanase、角質(zhì)素酶keratanaseII、Bc角質(zhì)素酶keratanaseII以及上述幾種的組合?；|(zhì)金屬蛋白水解酶水平可通過(guò)將一種組合物施用到皮膚來(lái)調(diào)節(jié)，該組合物包含一種或多種有效量的基質(zhì)金屬蛋白水解酶來(lái)調(diào)節(jié)膠原的降解。在另一實(shí)例中，調(diào)節(jié)皮膚狀況的方法可通過(guò)調(diào)節(jié)皮膚炎性狀況或是調(diào)節(jié)皮膚色素沉淀來(lái)達(dá)成。皮膚炎性狀況可以是，例如，非過(guò)敏性皮膚炎性狀況、過(guò)敏性皮膚炎性狀況、神經(jīng)性皮膚炎性狀況、紫外線輻射所導(dǎo)致的皮膚炎性況、其他皮膚炎性狀況，以及上述幾種的組合狀況。皮膚炎狀況及/或皮膚色素稱沉淀，例如可通過(guò)調(diào)節(jié)可能調(diào)節(jié)的腫瘤壞死因子-α活性的纖調(diào)蛋白聚糖、lumican、飾膠蛋白聚糖decorin及/或雙鏈蛋白聚糖biglycan的水平來(lái)調(diào)節(jié)，或是通過(guò)調(diào)節(jié)可能調(diào)節(jié)皮膚中的白血球過(guò)多的皮膚素硫酸鹽來(lái)調(diào)節(jié)。皮膚色素硫酸鹽的水平可通過(guò)一種或是多種酶，例如軟骨素酶B來(lái)調(diào)節(jié)。皮膚色素沉淀亦可藉由調(diào)節(jié)堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子活性的皮膚素硫酸鹽的水平來(lái)達(dá)成。然后，堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的活性又直接地調(diào)節(jié)黑色素細(xì)胞的增生，或是間接地增加干細(xì)胞因子的產(chǎn)生。干細(xì)胞因子會(huì)直接調(diào)節(jié)黑色素細(xì)胞的增生以及黑色素的產(chǎn)生。另外，可通過(guò)加組合物施用到皮膚上來(lái)調(diào)節(jié)皮膚素硫酸鹽、軟骨素硫酸鹽chondroitinsulfate，角質(zhì)素硫酸鹽keratansulfate以及上述的種類的組合的水平來(lái)調(diào)節(jié)的皮膚色素沉淀，此組合物包含一種或多種酶例如軟骨素酶AC、軟骨素酶B、內(nèi)-β-半乳糖苷酶endo-beta-galactosidases、^MSBIkeratanase>^MSBIkeratanaseII>BC^J^MMkeratanaseII類的組合。本發(fā)明的另一方面，是描述了具有促進(jìn)皮膚再生能力的包含藉由胎兒組織表達(dá)的一種或多種化合物的組合物及其使用方法。特別是，本發(fā)明提供一種組合物，其可改善、減少、預(yù)防或治療皮膚中可視的和/或可觸的裂痕。此裂痕可被內(nèi)部的及/或外部的因素所誘生或?qū)е?，且包括在此所描述的皮膚老化的標(biāo)記。改善皮膚的狀況包括了但不限于1)改善、減少、預(yù)防以及或是治療皮膚的狀況例如明顯的皺紋、下垂、不均勻色素沉淀、以及彈性或回彈性減少的治療；2)導(dǎo)致更加光滑柔軟的皮膚結(jié)構(gòu)及外觀的治療；3)改善、減少、預(yù)防、以及或是處理皮膚發(fā)炎的治療；4)改善、減小、預(yù)防以及或是處理與肌膚老化無(wú)關(guān)的過(guò)多色素沉淀或是不均勻色素沉淀的治療(例如痤瘡、昆蟲叮咬)力)促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)組織化的治療；6)促進(jìn)皮膚再生的治療。本發(fā)明之又一方面，提供方法來(lái)促進(jìn)利用包括纖調(diào)蛋白聚糖，Iumican，飾膠蛋白聚糖decorin以及雙鏈蛋白聚糖biglycan的小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖來(lái)改善皮膚的狀況，以及利用酶來(lái)調(diào)節(jié)與蛋白聚糖有關(guān)聯(lián)的糖胺聚糖。在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明包括皮膚的再生和真皮膠原的組織化，以及預(yù)防或是減少皮膚發(fā)炎或是過(guò)多色素沉淀的方法。本發(fā)明的再一方面，提供一種用來(lái)鑒定由胎兒組織表達(dá)的化合物的方法，此化合物可促進(jìn)皮膚的再生。提供包含一種和多種已鑒定的化合物的組合物，以及使用此組合物來(lái)促進(jìn)皮膚再生的方法。本方法可進(jìn)一步包括分離由胎兒組織表達(dá)的化合物、鑒定此化合物、重組表達(dá)此化合物、以及將此化合物施用到哺乳動(dòng)物皮膚的方法。在本發(fā)明的又一實(shí)施例中，促進(jìn)皮膚再生的方法包括對(duì)由成人組織所表達(dá)對(duì)化合物和由胎兒組織所表達(dá)對(duì)化合物進(jìn)行比較。選擇出只在成人組織中表達(dá)的化合物并選擇其他化合物以便阻斷這些只在成人組織中被表達(dá)的化合物的表達(dá)。阻斷表達(dá)的化合物，然后被施用到哺乳類動(dòng)物的皮膚。還提供化妝品護(hù)膚組合物，其包括由胎兒組織表達(dá)的化合物。還提供其他化妝品護(hù)膚組合物，其包括蛋白聚糖如纖調(diào)蛋白聚糖、酶例如軟骨素酶B，以及另一種酶例如基質(zhì)金屬蛋白水解酶-I(MMP-I)。除非有其他的指定，否則在此全部的百分比以及比例是以總組合物的重量為基礎(chǔ)來(lái)計(jì)算且在25°C下測(cè)量。在某些例子的組合物中包含的酶，以某給定重量的或某給定體積的專一活性(specificactivity)(IU)的單位來(lái)表示(例如專一活性/毫克(IU/mg))或是(例如專-活性/毫升(IU/mg))。本發(fā)明的組合物對(duì)于局部的應(yīng)用以及改善皮膚狀況是有用的。由胎兒組織表達(dá)的化合物可以各個(gè)純化的或是部分純化的或是直接沒(méi)有純化的細(xì)胞液、萃取物、以及培養(yǎng)基的形式使用。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，由胎兒細(xì)胞或組織表達(dá)的化合物可經(jīng)由組織培養(yǎng)基或是細(xì)胞溶解物來(lái)直接分離并進(jìn)一步濃縮及純化。雖然由胎兒組織表達(dá)的化合物的個(gè)別的鑒定或是純化是有用的，但是本發(fā)明并不要求對(duì)化合物個(gè)別的鑒定或是純化。經(jīng)過(guò)或未經(jīng)進(jìn)一步濃縮或是純化的組織培養(yǎng)基或細(xì)胞裂解液，其后可被配制為化妝品護(hù)膚組合物的配方用以改善皮膚的狀況。在一具體實(shí)施例中，組合物可包含a)從大約0.0001重量％到大約10重量％被純化的蛋白聚糖化合物，以及大約0.1重量％到大約80重量％的含有蛋白聚糖的細(xì)胞溶解液、萃取物、或是富集了蛋白聚糖化合物的培養(yǎng)基；b)從大約0.1重量％到大約10重量％的透明質(zhì)；c)從大約0.000001重量％到大約10重量％的至少一種另外的皮膚護(hù)膚活性分子；以及d)—種載體，其可包含化妝品可接受的載體、皮膚科可接受的載體、藥物可接受的載體、泡狀傳送系統(tǒng)、以及上述數(shù)種的組合。由胎兒組織表達(dá)的化合物早期懷孕的胎兒皮膚具有天生的能力經(jīng)由真正的組織再生過(guò)程而非疤痕的形成來(lái)愈合。非巧合地，組織再生的過(guò)程的特征是發(fā)炎癥狀的缺乏。因此，胎兒皮膚模型的使用可被用來(lái)鑒別對(duì)早期懷孕的胎兒皮膚的天生的經(jīng)由真正的組織再生過(guò)程而非疤痕的形成來(lái)愈合的能力是很重要的分子。在現(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)證實(shí)，胎兒皮膚基本上與成人的皮膚不同。例如，受傷后，成人的皮膚通過(guò)明顯的發(fā)炎及疤痕的形成來(lái)修復(fù)，這是一個(gè)以具有膠原及不同細(xì)胞外基質(zhì)組分的無(wú)序沉積來(lái)替代受傷組織的過(guò)程，其可總稱為「疤痕」。相比之下，胎兒皮膚的修復(fù)是進(jìn)行細(xì)胞再生以及正常皮膚結(jié)構(gòu)的復(fù)原，其通過(guò)膠原以及細(xì)胞外基質(zhì)的有序沉積以實(shí)現(xiàn)無(wú)疤痕的修復(fù)及最輕的發(fā)炎反應(yīng)(Mackool，R.J.，Gittes，G.K.，andlongaker,Μ.Τ.Scarlesshealing.Thefetalwound.ClinPlastSurg25:357-365,1998)。研究已證實(shí)，無(wú)疤痕皮膚修復(fù)的能力是胎兒皮膚的一種特征，且不需要胎兒免疫系統(tǒng)、胎兒血清、或是羊膜液(BleacherJC,AdolphVR,DillonPff,KrummelTM.Isolatedfetalmouselimbs!gestationaleffectsontissuerepairinanunperfusedsystem.JPediatrSurg28:1312-4；discussion1314-5.1993；IharaS,MotobayashiY.Woundclosureinfetalratskin.Development114:573-82.1992)，例如，分離的人類胎兒皮膚被移植到無(wú)胸腺小鼠的疤痕上愈合時(shí)沒(méi)有產(chǎn)生典型的疤痕組織(AdzickNS,LorenzHP,AnnSurg220:10-8.1994)。因此，在再生胎兒皮膚中的特定分子或是組合物是在非胎兒皮膚中(例如成人皮膚)很少存在或根本不存在，這些分子對(duì)于再生以及改善皮膚狀況是很重要的，特別是，假設(shè)在胎兒皮膚中缺少顯著的發(fā)炎，則某些此類分子或組合物亦可通過(guò)預(yù)防及減少發(fā)炎來(lái)發(fā)揮抗發(fā)炎的作用。另外，假設(shè)在胎兒皮膚中缺少無(wú)組織纖維組織的沉淀以及組織化，則某些此類分子或組合物亦可預(yù)防過(guò)量的細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生及/或增加細(xì)胞外基質(zhì)的組織化，實(shí)現(xiàn)正常膠原組織的復(fù)原(WhitbyDJandFergusonMW,Development112:651-668,1991)。雖然用來(lái)鑒定對(duì)于皮膚老化及/或皮膚壓力CWO021053773A3)以及皮膚體內(nèi)平衡(homeostasis)(W002/053774A3)重要的基因的方法已在先前技術(shù)中被描述，但此方法與本發(fā)明所包括的方法完全不同。例如，已經(jīng)證實(shí)，組織再生以及無(wú)疤痕修復(fù)的能力被限制在胎兒期間特殊的時(shí)間點(diǎn)(IharaS，etal.,Development110=671-680,1990)只有早期懷孕的哺乳類動(dòng)物具有愈合能力而不產(chǎn)生疤痕。后期懷孕的胎兒以及新生的動(dòng)物已經(jīng)失去組織再生的能力且來(lái)展現(xiàn)一種「成人形式」的以疤痕為特征的傷口愈合反應(yīng)(SooC，etal.，AmJofPathol.157:423-433.2000)。因此，以分子基因篩選的看法，如同在WO02/053773A3中比較「老化及年輕的皮膚」所詳細(xì)描述的，已無(wú)從鑒別對(duì)于組織再生所必需的基因，因?yàn)樵诤笃趹言械奶褐写四芰σ呀?jīng)喪失且無(wú)疑地在「年輕的」皮膚中也一定已經(jīng)喪失。這一點(diǎn)可通過(guò)用「年輕」皮膚修補(bǔ)裂唇并伴隨著顯著的疤痕形成，以及無(wú)疤痕裂唇修復(fù)唯一的例子是在早期懷孕的胚胎動(dòng)物模型中(LongakerMT,etal.，PlastReconstrSurg90:750-756，199幻。先前技術(shù)沒(méi)有描述使用胎兒組織及傷口模型來(lái)鑒定可以改善皮膚狀況的組合物，特別是化妝品組合物。另外，在先前技術(shù)WO02/053773A3的陳述中，并沒(méi)有描述一種皮膚再生的組合物包含利用胎兒組織表達(dá)的化合物的構(gòu)想。a)在胎兒模型中胎兒組織的獲取方法(MethodsforpreparationofFetalTisueinaFetalModel)大約300gm的雌大鼠(SD)被配對(duì)。以陰道栓塞檢測(cè)作為懷孕的證據(jù)來(lái)證實(shí)0.5天懷孕期(一期=21.5)。為了制造胎兒的傷口，麻醉16天及18.5天及19天的懷孕大鼠。胎兒大鼠皮膚從無(wú)疤痕胎兒類型修復(fù)(scaarlessfetal-typerepair)到疤痕成人類型修復(fù)(adult-typerepairwithscar)過(guò)渡是在16天(E16)的懷孕期至18天(E18)的懷孕期(一期=21.5天)，E19的胎兒大老鼠被選擇來(lái)避免E16到E18過(guò)渡期的潛在重復(fù)性。麻醉藥劑由劑量為10-20毫克/公斤的氯胺酮(Ketamine)和劑量為0.3毫克/公斤的0.1%塞拉嗪(Xylazine)構(gòu)成。懷孕的動(dòng)物被刮毛且從中線剖腹。每一個(gè)子宮的切片都被具體化且一條7-0尼龍環(huán)狀袋子縫合(purse-stringstructure)被放置在非胎盤表面上的每一層子宮壁。子宮肌壁及羊膜囊之后在環(huán)狀袋子縫合內(nèi)以顯微外科剪刀切開。接著，利用顯微外科鑷子抓傷皮膚以及剪刀刺激皮膚的方式，在胎兒的背部上制造一個(gè)2-毫米的切口。為了以后的傷口鑒定，藍(lán)色或是綠色的活體染劑(vitalstain)被施用在切片的位置上。溫的無(wú)菌正常生理食鹽水之后經(jīng)由子宮切開來(lái)施加并且閉合環(huán)狀袋子縫合(第一圖)。母體的筋膜及皮膚之后使用人造可吸收性縫合線封閉為兩層。在組織學(xué)上，E16以及E19胎兒的傷口在12、24、36、48以及72小時(shí)手術(shù)后獲得。從每一個(gè)時(shí)間點(diǎn)上收集沒(méi)有傷口的皮膚用作對(duì)照組(例如E17對(duì)照組的皮膚是為E16+24小時(shí)的傷口)。對(duì)于每一個(gè)時(shí)間點(diǎn)，總計(jì)四個(gè)動(dòng)物從兩族懷孕的動(dòng)物中分離出，全部的組織樣本是被固定于4%的三聚甲醛中、用無(wú)水等級(jí)的乙醇脫水、埋置在石蠟中，并切成5微米(μπι)切片用于常規(guī)染色(HematoxylinandEosin(H&E)stainingandimmunohistochemistry)，或是切成7微米切片用于激光掃描共軛焦(CLSM)顯微鏡。對(duì)于RNA的分析，E16以及E19的胎兒傷口在受傷后M及72小時(shí)被獲得，從每一個(gè)傷口獲得的時(shí)間點(diǎn)取得非傷口皮膚被使用為對(duì)照組(例如E19對(duì)照組皮膚是為E16+72小時(shí)的傷口)，對(duì)于每個(gè)時(shí)間點(diǎn)共有20個(gè)傷口被使用，分離的組織立即用液氮冷凍且儲(chǔ)存在-70°C下直至萃取RNA。b)在胎兒模型中組織再生的確定的方法是利用常規(guī)染色來(lái)鑒定整體傷口的外觀以及利用CLSM來(lái)分析膠原結(jié)構(gòu)及微纖維的排列(第二圖及第三圖)。CLSM的技術(shù)是如先前所描述的那樣進(jìn)行(BeanesSR,etal.，PlastReconstrSurg.109:160-170.，2002)。對(duì)于在受傷后的72小時(shí)的E16(n=10)以及E19(n=8)的傷口，每一個(gè)愈合傷口位置的總膠原密度使用ImageProPlus來(lái)計(jì)算，將總膠原表面面積除以總傷口表面面積(MediaCybernetic,SilverSpring，MD)。為了比較，從年齡配對(duì)的對(duì)照組中(例如E19(E16+72小時(shí))和初生的第一天(E19+72hours)動(dòng)物)非受傷皮膚的總膠原密度亦被測(cè)定。計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差并進(jìn)行沒(méi)有配對(duì)的雙側(cè)檢定(two-tailedstudent'stest)來(lái)檢測(cè)總膠原密度的統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的差別。P值<0.05被認(rèn)為是顯著的。如第2A-E圖所示，E16傷口在CLSM上證實(shí)了以減小的皮膚發(fā)炎及皮膚細(xì)胞結(jié)構(gòu)組織及組織的膠原結(jié)構(gòu)，在H&E證實(shí)了形成再生無(wú)疤痕的修復(fù)，其與正常、無(wú)傷口的皮膚為可比較(第2F圖)。數(shù)字影像分析證實(shí)受傷后72小時(shí)的E16傷口以及沒(méi)受傷的E19的皮膚在膠原密度上并未顯示顯著的不同(p>0.05)(第二G圖)。相對(duì)之下，E19傷口證實(shí)了有疤痕的非再生修復(fù)及無(wú)毛濾泡再生以及增加及延長(zhǎng)的發(fā)炎反應(yīng)和增加的直皮的細(xì)胞結(jié)構(gòu)(第三A-E圖)。CLSM揭示了一個(gè)致密的異種膠原微纖維，在完全愈合傷口中的無(wú)序集合(第三F圖)。數(shù)字影像分析證實(shí)了在受傷72小時(shí)后，在E19傷口中膠原密度相對(duì)于非受傷的新生的第一天的皮膚(E19+72小時(shí))(p=0.00043)有了顯著的增加(第三G圖)。這些研究指出，早期懷孕的E16傷口顯現(xiàn)出無(wú)疤痕再生修復(fù)的能力，其在后期懷孕的E19傷口是缺乏的。人類胎兒皮膚從15周到22周(第二個(gè)三個(gè)月)亦顯現(xiàn)出無(wú)疤痕再生修復(fù)的能力。(回顧于DangC,etal.，ClinPlastSurg.3013-23，2003)。c)從人類組織培養(yǎng)系統(tǒng)直接獲得化合物的方法如上文所述，在15到22周之間的人類胎兒的皮膚具有皮膚無(wú)疤痕修復(fù)以及組織再生的能力。因此，可以從胎兒皮膚器官培養(yǎng)物、二維或三維胎兒細(xì)胞培養(yǎng)物、以及來(lái)自培養(yǎng)的胎兒細(xì)胞/組織的培養(yǎng)基獲得由胎兒組織表達(dá)的非基因修飾的化合物。這些化合物可以是溶解物(Iysates)、萃取物及培養(yǎng)基的形式。細(xì)胞和組織培養(yǎng)方法，以及獲得細(xì)胞溶解物或萃取物的方法是本領(lǐng)域所公知的(參見PollardJW，WalkerJM(1997)Basiccellcultureprotocols,2nded.HumanaPress,Totowa,N.Jformorespecificdetailsoncellculture)0人類胎兒細(xì)胞培養(yǎng)基可以被分離且處理所得到的上清液。細(xì)胞培養(yǎng)物上清液的處理是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的可以包括但不限于上清液的濃縮，從上清液純化特殊的化合物，和上清液的殺菌。細(xì)胞培養(yǎng)物上清液處理方法應(yīng)該確保由胎兒組織表達(dá)的化合物的生物活性的最佳保留。無(wú)菌處理及其他的努力來(lái)改善殺菌也是期望及需要的。下面的實(shí)施例是為了闡明而不是限制本發(fā)明的范圍。人類胎兒細(xì)胞培養(yǎng)將胎兒皮膚的小條(真皮面朝下)放置到細(xì)胞培養(yǎng)板上，可將胎兒皮膚的成纖維細(xì)胞從胎兒皮膚樣品中分離出。胎兒皮膚成纖維細(xì)胞從一片皮膚遷移并附著到培養(yǎng)板上。在成纖維細(xì)胞附著于培養(yǎng)板上后，丟棄此片皮膚。讓此胎兒皮膚成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)至期望的密度并且根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)分離。人類胎兒細(xì)胞培養(yǎng)基的制備從胎兒組織或是培養(yǎng)基倒出或是吸出液體可以獲得胎兒細(xì)胞培養(yǎng)基(或上清液)。取出之后，可以進(jìn)一步處理得到上清液。這種處理的例子包括但不限于通過(guò)水流動(dòng)吸濾裝置或是滲濾(defiltration)濃縮(關(guān)于進(jìn)一步處理的更多的資訊參見下面「從胎兒細(xì)胞培養(yǎng)基或溶解產(chǎn)物純化蛋白質(zhì)的實(shí)施例」的章節(jié))。人類胎兒細(xì)胞溶解物的制備細(xì)胞培養(yǎng)板中胎兒皮膚成纖維細(xì)胞成長(zhǎng)至70%-80%密度之后，以下列方法進(jìn)行細(xì)胞溶解物的制備1)為了去除血清，在磷酸鹽緩沖的溶液(PBS)中充分洗滌含有胎兒成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)基板；幻之后，胎兒成纖維細(xì)胞用水解酶例如胰蛋白酶培養(yǎng)大約3分鐘，以有利于從培養(yǎng)板上分離；3)之后，分離的細(xì)胞經(jīng)由離心沉淀而成小丸狀，之后利用洗滌劑例如十二烷基硫酸鈉(SDQ進(jìn)行細(xì)胞溶解。然后將上清液透析以去除殘留的SDS。胞內(nèi)產(chǎn)物亦經(jīng)由化學(xué)的(例如有機(jī)溶劑)、酶促的(例如溶菌酶以及EDTA)、機(jī)械的、或是物理細(xì)胞破碎方法(例如菌化作用、超音波振蕩、高壓均化、摩擦攪動(dòng))。分離胞內(nèi)產(chǎn)物亦包括機(jī)械和非機(jī)械方法的組合。從人類胎兒細(xì)胞培養(yǎng)基或是溶解物純化蛋白質(zhì)細(xì)胞外(細(xì)胞培養(yǎng)基)或是細(xì)胞內(nèi)(溶解物)產(chǎn)物的純化可用多種方法進(jìn)行，以有利于產(chǎn)物純化或是去除非需要的污染物。一種方法為固-液相分離(例如離心/沉淀、萃取、過(guò)濾)。另一種方法是濃縮(例如蒸發(fā)、超濾、吸附、沉淀)。再一種方法為色層分析法(例如尺寸排斥分析法、離子交換色層分析法、色層聚集法、疏水交互層析法、親和層析法、固定化金屬離子親和層析法共價(jià)層析法。本領(lǐng)域技術(shù)人員容易實(shí)施這些技術(shù)。若有需要，也可以應(yīng)用殺菌技術(shù)，例如過(guò)濾或加熱或照射(有關(guān)蛋白質(zhì)純化的更多資訊請(qǐng)參見RatledgeC,KristiansenB(2001)Basicbiotechnology,2nded.CambridgeUniversityPress，Cambridge，U·K·)0d)ii丄寸基因重組抽術(shù)AU臺(tái)jl·傷nit型Φ丨旬接獲得化合4勿的方法本發(fā)明的另一實(shí)施例中，鑒定了在哺乳類的皮膚中(人類或是非人類)，由胎兒組織表達(dá)的化合物或是促進(jìn)這些化合物表達(dá)的條件。胎兒組織與細(xì)胞表現(xiàn)出與成年細(xì)胞截然不同的基因表達(dá)模式。就蛋白質(zhì)水平而言，這可能導(dǎo)致不同的細(xì)胞外基質(zhì)成分、生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子以及酶的產(chǎn)生(SullivanKM,LorenzHP,MeuliΜ,LinRY,AdzickNS.Amodelofscarlesshumanfetalwoundrepairisdeficientintransforminggrowthfactorbeta.JPediatrSurg30:198-202；discussion202_3，1995)。例如，胎兒皮膚成纖維細(xì)胞產(chǎn)生較高的第三類與第一類膠原的比例以及不同的蛋白聚糖曲線，以及更多的透明質(zhì)酸(MastΒΑ,DiegelmannRF,KrummelTM,CohenIK.Scarlesswoundhealinginthemammalianfetus.SurgGynecolObstet174:441-51.1992)。另外，蛋白聚糖是帶有一個(gè)或是多個(gè)糖胺聚糖側(cè)鍵的核心蛋白，在細(xì)胞外基質(zhì)的裝配、細(xì)胞交互作用、以及生長(zhǎng)因子儲(chǔ)存中起關(guān)鍵作用(RuoslahtiE.Proteoglycansincellregulation.JBiolChem26413369-72，1989)。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)分子生物學(xué)技術(shù)可以鑒定胎兒和成人組織間的基因表達(dá)差異。例如，可應(yīng)用Northern印跡、減數(shù)雜化術(shù)(subtractivehybridiaztin)、PCR的差異顯示、微陣列、以及實(shí)時(shí)PCR來(lái)鑒定基因表達(dá)的差異(下面是對(duì)各種技術(shù)中的一些樣品參考:DD-PCR-LiangL，ArthurBP.DifferentialdisplayofeukaryoticmessengerRNAbymeansofthepolymerasechainreaction.Science257:967-971,1992；Microarrray-zhangX，etal.，CraniosynostosisintransgenicmiceoverexpressingNell-LJClinInvest110:861-70.2002；Subtractivehybridization-DiatchenkoL,etal.，Suppressionsubtractivehybridization-.amethodforgeneratingdifferentiallyregulatedortissue-specificcDNAprobesandlibraries.ProcNatlAcadSciUSA93:6025-30.1996)。使用各種不同的基因表達(dá)鑒定技術(shù)，能闡明胎兒皮膚再生中特定時(shí)間的分子「藍(lán)印」(blueprint)，并且特異分子鑒定為在胎兒再生修復(fù)期間是被上調(diào)或下調(diào)。請(qǐng)參閱第四圖至第七圖候選基因篩選的特殊引物(primer)PCR基礎(chǔ)技術(shù)的例子。一旦鑒定后，早期懷孕中的(但不是晚期胎兒或是成年組織或細(xì)胞中的)上調(diào)分子可被分離出且進(jìn)行鑒定以用于后來(lái)的產(chǎn)品研發(fā)。這些上調(diào)分子可以「回加」以使得成年皮膚更具有「類似胎兒」的特性。相反地，成年組織或是晚期懷孕中的上調(diào)分子(但不是早期胎兒組織)也可以進(jìn)行鑒定以用來(lái)此后的產(chǎn)品研發(fā)?？梢浴缸钄嗷蛞种啤钩赡杲M織中鑒定的上調(diào)分子以賦予成年皮膚更具有「類似胎兒」的特性。下面是為了闡明而不是限制本發(fā)明的范圍。要「回加」的分子可以直接由胎兒組織、胎兒細(xì)胞培養(yǎng)基、溶解物、或萃取物得到(參見前面的章節(jié)，supra)?；蛘?，要「回加」的分子為了提高其表達(dá)的目的，可在基因工程細(xì)胞中「重組表達(dá)」(有或無(wú)事先的基因修飾)。之后，可以單獨(dú)或聯(lián)合在皮膚組合物中使用胎兒細(xì)胞或組織中的上調(diào)分子。相反地，用反義RNA(antisenseRNA)分子或是已知的抑制劑或是調(diào)節(jié)體(例如以軟骨素酶B來(lái)調(diào)節(jié)皮膚素硫酸鹽)可用于鎖定成人而非胎兒組織中的上調(diào)分子(即「阻斷或抑制」的分子)。之后，反義RNA分子或是已知的抑制劑可以在皮膚保養(yǎng)組合物中使用。篩選正常的大鼠胎兒組織作為懷孕的功能(ScreeningNormalRatFetalTissueasaFunctionofGestation)沒(méi)有受傷的胎兒皮膚的基因表達(dá)篩選作為一種懷孕的功能，可允許對(duì)無(wú)受傷的胎兒皮膚的恒定作用具有重要性的分子進(jìn)行鑒定。第四圖描述隨著妊娠年紀(jì)的增加以及再生愈合的喪失纖調(diào)蛋白聚糖下調(diào)及飾膠蛋白聚糖(decorin)上調(diào)，與先前技術(shù)中所期望的不同，其顯示出上調(diào)飾膠蛋白聚糖(decorin)暫時(shí)與晚期懷孕胎兒中非再生修復(fù)結(jié)合。其他利用此研究方法(即TFT-β配基和接體以及潛在的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子鍵結(jié)蛋白-I(LTBP-I))來(lái)篩選的分子，被包括在使用以PCR為基礎(chǔ)的特定引物來(lái)篩選的例子。篩選受傷大鼠的胎兒組織相對(duì)于Ε19的胎兒皮膚的受傷的Ε16的基因表達(dá)篩選，允許對(duì)于皮膚再生是為關(guān)鍵的分子的可能鑒定。第五圖描述了對(duì)于ΜΜΡ-9表達(dá)及相對(duì)低的TIMP-I作為特征。此是證明了相對(duì)于過(guò)量的細(xì)胞外基質(zhì)沉積，其細(xì)胞外基質(zhì)退化相當(dāng)程度的增加對(duì)于無(wú)疤痕修復(fù)是重要的。由于過(guò)量的細(xì)胞外基質(zhì)累積構(gòu)成了疤痕必要的組分，因此可用來(lái)防止過(guò)量細(xì)胞外基質(zhì)沉積以及促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)退化(例如MMPs)的化合物，對(duì)于在受傷后以疤痕的產(chǎn)生為特征的皮膚再生而言是有用的。第六圖描述了對(duì)于FGFs以PCR為基礎(chǔ)來(lái)篩選的結(jié)果。相對(duì)于結(jié)疤的傷口，無(wú)疤痕傷口是以減少的FGF在受傷后初始的48小時(shí)被誘生出為特征。特別是，F(xiàn)GF-2(此是為堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子)在無(wú)疤痕胎兒傷口中被相當(dāng)程度的減少。此暗示堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的調(diào)節(jié)對(duì)于皮膚的再生可能是有用的。第七圖為以PCR為基礎(chǔ)對(duì)飾膠蛋白聚糖decorin以及纖調(diào)蛋白聚糖作篩選的結(jié)構(gòu)。此證實(shí)了并非飾膠蛋白聚糖decorin而是纖調(diào)蛋白聚糖在E16再生傷口中被上調(diào)，其表明不是飾膠蛋白聚糖decorin24的調(diào)節(jié)而是纖調(diào)蛋白聚糖的調(diào)節(jié)，可用來(lái)促進(jìn)皮膚再生。獨(dú)立的基因克降基因克隆的技術(shù)在本領(lǐng)域是熟知的(更多的資料請(qǐng)參閱miW.MethodsinGeneBiotechnology.BocaRaton:CRCPress，1997)。_|的1^，又寸IS石馬·歹[J(codingsequence)已知的基因，特定的引物PCR為基礎(chǔ)的技術(shù)可用于基因的克隆。從這些序列，PCR引物可被涉及為位在編碼序列的兩側(cè)。在放大后，對(duì)于細(xì)菌、酵母、或是哺乳類動(dòng)物的細(xì)胞，其PCR的產(chǎn)物可被連接成各式各樣的質(zhì)粒(Plasmid)。對(duì)于編碼序列未知的基因這對(duì)于使用差異表現(xiàn)方式來(lái)鑒定的基因序列的情況，這里常有的，如先前技術(shù)中所述的(SooC，etal.,JCellBiochem.74:1-10,1999)利用迅速擴(kuò)大cDNA端(RACE)的方法可完成全長(zhǎng)cDNA克隆的分離。例如，對(duì)于人類纖調(diào)蛋白聚糖，可經(jīng)由基因庫(kù)(GenBank)并利用下列的登陸號(hào)碼(accessionnumber):NM_002023,BCO;35^1，或是X75546，即可得到完整的cDNA序列。對(duì)于人類纖調(diào)蛋白聚糖的cDNA全長(zhǎng)編碼，其經(jīng)由反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)從人類成纖維細(xì)胞的總RNA被放大。用于該P(yáng)CR的特定引物的設(shè)計(jì)以基因庫(kù)的登陸號(hào)碼為NM_002023,已發(fā)表的人類纖調(diào)蛋白聚糖cDNA的序列為基礎(chǔ)，其1.IkbPCR片段利用全長(zhǎng)測(cè)序來(lái)確定。對(duì)于纖調(diào)蛋白聚糖的哺乳動(dòng)物表汰質(zhì)粒的構(gòu)津及表汰(MammalianExpressionPlasmidConstuctionandExpressionforFM)對(duì)于哺乳動(dòng)物系統(tǒng)，選擇p2xFLAG-CMV_14(Sigma)表達(dá)載體是由于其對(duì)于接續(xù)的蛋白質(zhì)純化具有方便的優(yōu)點(diǎn)。3xFLAG序列與人類纖調(diào)蛋白聚糖cDNA的C-端尾部連接，以產(chǎn)生C-端的棋標(biāo)-標(biāo)簽重組蛋白質(zhì)。人類纖調(diào)蛋白聚糖表達(dá)質(zhì)體最后的結(jié)構(gòu)為P3FLAG-CMV-HFM，更進(jìn)一步以選擇性限制消化作用以及DNA的測(cè)序來(lái)證實(shí)。CH0-K1細(xì)胞株(cellline)(ATCC，Manassas,VA)被使用來(lái)產(chǎn)生重組人類纖調(diào)蛋白聚糖(recombinanthumanFM，rhFM)。穩(wěn)定的被傳染的transfected細(xì)胞株以G418在培養(yǎng)基中的深度選擇，且利用對(duì)重組蛋白質(zhì)表達(dá)的anti-Flag抗體的免疫熒光細(xì)胞化學(xué)的方法來(lái)構(gòu)建。重組人類纖調(diào)蛋白聚糖經(jīng)由anti-flag瓊脂糖柱的親和層析法來(lái)純化用3xFLAG競(jìng)爭(zhēng)性洗脫，以維持重組人類纖調(diào)蛋白聚糖的天然形式。被純化的蛋白質(zhì)包含天然的KS側(cè)鏈，其經(jīng)由Western印跡以分子的大小來(lái)確認(rèn)。重組人類纖調(diào)蛋白聚糖鍵結(jié)到轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1以及堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的能力利用ELISA結(jié)合分析方法來(lái)確認(rèn)。若是需要，重組人類纖調(diào)蛋白聚糖的親水性標(biāo)志肽可容易利用腸激酶消化作用除去。纖調(diào)蛋白聚糖細(xì)菌表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及表達(dá)(BacterialExpressionPlasmidConstructionandExpressionforFM)E.coli系統(tǒng)的pFLAG-MAC(Sigma)表達(dá)載體會(huì)被使用，是由于其從細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)容易純化重組蛋白質(zhì)。在這個(gè)氨端flag(標(biāo)志的)-tagged載體中，人類纖調(diào)蛋白聚糖cDNA插入物被tac啟動(dòng)子所驅(qū)動(dòng)且假若需要，在融合蛋白中的flagtag(標(biāo)志物)可以利用腸動(dòng)酶來(lái)除去。與在哺乳動(dòng)物系統(tǒng)中的相同，用于構(gòu)成物纖調(diào)蛋白聚糖調(diào)全長(zhǎng)編碼cDNA的片段通過(guò)從人類成纖維細(xì)胞的總RNART-PCR放大。纖調(diào)蛋白聚糖表達(dá)質(zhì)粒的最后構(gòu)成物為pFLAG-MAC-HFM，更進(jìn)一步通過(guò)選擇性限制消化作用以及DNA的測(cè)序來(lái)證實(shí)。E.coli菌株BL21被用來(lái)產(chǎn)生重組人類纖調(diào)蛋白聚糖。陽(yáng)性菌落(positivecolony)的變形及選擇在標(biāo)準(zhǔn)的方案下進(jìn)行。具有大約2.O的0D600的大規(guī)模細(xì)菌培養(yǎng)物利用在5000xg下離心10分鐘收獲。細(xì)菌細(xì)胞以CelLyticB溶菌(lysis)以5微克/毫升DnaseI補(bǔ)充的緩沖液來(lái)細(xì)胞溶解。重組人類纖調(diào)蛋白聚糖經(jīng)由用3XFLAG競(jìng)爭(zhēng)洗脫的anti-flag瓊脂糖珠的親和層析法來(lái)純化。重組人類纖調(diào)蛋白聚糖的純度以及分子量由Western印跡來(lái)確認(rèn)。重組人類纖調(diào)蛋白聚糖鍵結(jié)到轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β以及堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的能力利用ELISA結(jié)合分析方法來(lái)確認(rèn)。若是需要，重組人類纖調(diào)蛋白聚糖的親水性flag肽容易利用腸激酶以消化作用除去。原核細(xì)胞(Drokaryoticcell)中單個(gè)基因的重組表汰構(gòu)建包含感興趣的基因的載體用于晚期插入到原核細(xì)胞中，可以使用啟動(dòng)子(例如T7)或Lac啟動(dòng)子來(lái)引發(fā)高轉(zhuǎn)錄效率。將有潛在親和性結(jié)合序列例如組氨酸親和性標(biāo)記插入到具有蛋白酶裂解位置的N-端?？梢圆迦腩~外的序列例如麥芽糖結(jié)合蛋白(maltosebindingprotein)來(lái)提高溶角軍(HidebrandA,RomarisΜ,RasmussenLM,HeinegardD,TwardzikDR,BorderWA,RuoslahtiΕ.Interactionofthesmallinterstitialproteoglycansbiglycan,decorinandFMwithtransforminggrowthfactorbeta.BiochemJ302(Pt2):527-34,1994)。真核細(xì)胞(eukaryoticell)中單個(gè)基因的重組表汰真核系統(tǒng)例如酵母、桿狀病毒(hculovirus)、以及哺乳類系統(tǒng)都可以進(jìn)行基因產(chǎn)物的翻譯后修飾。在酵母中可以使用強(qiáng)大的啟動(dòng)子例如A0X1，或是在哺乳類動(dòng)物細(xì)胞中可以使用巨細(xì)胞病毒(CMV)啟動(dòng)子來(lái)引誘高轉(zhuǎn)錄效率，在翻譯產(chǎn)物的N或C端可以插入親和性標(biāo)記。也可以在N-端插入分泌序列來(lái)提高所需的重組分子分泌到細(xì)胞培養(yǎng)基中的分泌作用。通過(guò)已注冊(cè)的商業(yè)公司使用生物工程植物系統(tǒng)也可以進(jìn)行重組蛋白質(zhì)的大規(guī)模表達(dá)(例如www.VentriaBio.com)。flaR-taRRedA^iISaM(HFM)(HDC)的結(jié)合i式驗(yàn)(BindinRassayofflaR-taRRedhuman(HFM)anddecorin(HDC))平底多孔組織培養(yǎng)盤用用人類重組轉(zhuǎn)化成長(zhǎng)因子β(Sigma)或是人類重組堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Sigma)涂覆緩沖液(0.5mM碳酸鈉緩沖液，PH9.3)中稀釋到0.5微克/毫升且在4°C下靜置隔夜。之后，倍涂覆的孔洞被倒空且200微升的結(jié)合緩沖液(50mMTris/HCI,PH7.4,150mMNaCl,2%BSAand0.05%Tween20)被加入每一涂覆的孔洞中，在37°C下保溫(incubation)2小時(shí)，以阻斷非一特定異性的結(jié)合位置?？锥幢磺蹇涨乙郧逑淳彌_液(磷酸鹽緩沖液(PBS)，0.l%Tween20)整個(gè)填入的方式清洗三次，之后，向下輕彈且倒過(guò)來(lái)拍打內(nèi)含物三次在一紙巾上。從質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的CH0-K1細(xì)胞得到的親和性純化的flag-tagged人類纖調(diào)蛋白聚糖及飾膠蛋白聚糖(decorin)被加入在每一孔洞具有100微升的結(jié)合緩沖液中且在37°C保溫1小時(shí)后在4°C下隔夜靜置?？锥磁c之前相同的方式被清空及清洗，且利用每孔洞100微升的anti-flagbiotinylatedM2mAb(Sigma)保溫，其中anti-flagbiotinylatedM2mAb(Sigma)是在室溫下以1微克/毫升稀釋于TBS-Ca緩沖液(50mMTris/HCI,pH7.4,150mMNaCl，andImMCaC12)中1.5小時(shí)?？锥从忠勒罩暗姆绞角逑醇扒蹇?，且100微升/孔洞檢測(cè)的抗生蛋白鏈菌素Mi^ptavidin-HRP(DakoCorp.)在室溫下被保溫另一個(gè)1.5小時(shí)?？锥幢磺逑此拇吻冶煌耆蹇杖缓蠹尤?00微升/孔洞的顯色緩沖液(developingbuffer)(100μg/ml四甲基聯(lián)苯胺，H202濃度為0.003%的乙酸鈉緩沖液，PH6.0)。顯色15-30分鐘生成后加入100微升的1當(dāng)量濃度的鹽酸溶液于每一個(gè)孔洞停止反應(yīng)。純化的人類纖調(diào)蛋白聚糖以及飾膠蛋白聚糖(decorin)鍵結(jié)到表面一固定化的(surface-immobilized)hrTGF-betal或是hrbFGF上的能力，藉由使用ELISA分析儀(Fisher)在450nm的吸收值下檢測(cè)。全部的試驗(yàn)一式三份進(jìn)行。從原本的CHO-Kl細(xì)胞得到的旗幟一標(biāo)志細(xì)菌堿性磷酸酶(flag-taggedbacterialalkalinephosphatase)(BAP-Flag)(Sigma)以及純化的溶解產(chǎn)物(Iysate)被作為陰性對(duì)照。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β結(jié)合能力在450nm下的讀數(shù)(分成三組)Blank(空白)0.121,0.111,0.113ConL(對(duì)照)0.151，0.163，0.164BAP0.120,0.137,0.130HDC0.205，0.207，0.206HFM0.787,0.722,0.741堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子結(jié)合能力在450nm下的讀數(shù)(分成三祖)Blank(空白)0.123,0.107,0.123ConL(對(duì)照)0.207，0.242，0.198BAP0.138，0.120，0.122HDC0.233，0.282，0.244HFM0.796，0.729，0.763HSM結(jié)合到轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β上在先前技術(shù)中已被詳細(xì)描述，但在先前技術(shù)中不知道人類纖調(diào)蛋白聚糖同樣能夠結(jié)合到堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子上。HSM結(jié)合到堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的這種能力有被特別的注意，因?yàn)閴A性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子與角質(zhì)素(keratan)硫酸鹽(sulfate)小亮氨酸一豐富的蛋白聚糖例如纖調(diào)蛋白聚糖間的交互作用還未被討論過(guò)。直至今日，唯一已知的在小亮氨酸一豐富的蛋白聚糖與堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子間的交互作用是與存在于飾膠蛋白聚糖上的皮膚素硫酸鹽部分的交互作用(dermatansulfatemoieties),而不是與decorin核心蛋白質(zhì)本身(ZamifirA,etal.,Glycobiology.13:733_742，200。由于堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)于成纖維細(xì)胞亦為一種強(qiáng)力的有絲分裂原(mitogen)，因此纖調(diào)蛋白聚糖結(jié)合到堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的能力可被特別的使用在治療過(guò)多成纖維細(xì)胞增生如疤痕的狀況的方法，或是治療過(guò)多黑色素細(xì)胞增生或活性(如在色素沉淀中)。更者，由于紫外線輻射導(dǎo)致堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的產(chǎn)生，且堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)素已被知道可以刺激胞漿素原活化劑和促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的分解的膠原酶活性(回顧于AbrahamJAandKlagsbrunΜ.Modulationofwoundrepairofmembersofthefibroblastgrowthfactorfamily.Ed.ClarkRAF.TheMolecularAndCellularBiologyOfWoundRepair.Vol.Xxiii.NewYork:PlenumPress,pp.195-248,1996)，因此，由纖調(diào)蛋白聚糖調(diào)節(jié)堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的活性也可以預(yù)防或減少光老化作用，包含膠原的瓦解。在重組表達(dá)前的基因修飾在確定的基因序列的非編碼區(qū)或非必需區(qū)(例如啟動(dòng)子區(qū)、非翻譯3’區(qū))以及確定的基因序列的編碼或必需區(qū)中都可以建立變異或基因修飾。所謂「必需」的意思是對(duì)于實(shí)施其預(yù)期的功能的基因是為關(guān)鍵基因的部分。一般進(jìn)行非編碼區(qū)中的基因修飾來(lái)提高基因的總體轉(zhuǎn)錄或翻譯效率及提高最終蛋白質(zhì)產(chǎn)物純化的容易度-這些變化一般不影響基因的功能特征。相反地，編碼區(qū)基因的修飾通常被用來(lái)作為修飾翻譯的產(chǎn)物以增強(qiáng)或減弱基因的期望功能的目的(例如對(duì)于目標(biāo)分子改變親和性、改變肌膚滲透特性、改變翻譯后加工、改變分子的半衰期)。對(duì)于非編碼區(qū)或編碼區(qū)的修飾這兩方面的技術(shù)在本領(lǐng)域已有詳細(xì)描述。B.小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖(SLRPs)為具有不同功能的一類化合物，其可用來(lái)增加皮膚的再生。雖然纖調(diào)蛋白聚糖已被提到可用來(lái)減少皮膚的結(jié)疤和傷口的收縮，但是由定義可知道這些狀況是會(huì)由于皮膚的受傷發(fā)生的。有很多例子敘述纖調(diào)蛋白聚糖或等效物的應(yīng)用可期望改善皮膚的狀況，其并不涉及減少皮膚的結(jié)疤或是傷口收縮的要求。a)X仔·關(guān)糊漏臺(tái)碰在先前技術(shù)中已知道飾膠蛋白聚糖(decorin)可以改善老化皮膚的外觀。但是就如同前述所提及的，飾膠蛋白聚糖decorin及纖調(diào)蛋白聚糖是具有不同功能的不同類的小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖。另外，無(wú)纖調(diào)蛋白聚糖小鼠并沒(méi)有很明顯的皮膚缺陷且在非胎兒的皮膚中有最小的纖調(diào)蛋白聚糖表達(dá)。因此，纖調(diào)蛋白聚糖在膠原組織化及皮膚的再生中具有這樣的中心角色是完全意外的新的發(fā)現(xiàn)。雖然在先前技術(shù)中已經(jīng)敘述，藉由綴合的亞麻酸(conjugatedlinoleicacid)、petroselinicacid,以及其他化合物(美國(guó)專利第51，602號(hào)；美國(guó)專利第6，455，057號(hào)；美國(guó)專利第6，440，434號(hào)；美國(guó)專利第6，423，325號(hào)；美國(guó)專利第6，287，553號(hào)；美國(guó)專利第6，042，841號(hào))局部的應(yīng)用，或是飾膠蛋白聚糖decorin在化妝品或皮膚科組合物中的實(shí)際使用引起飾膠蛋白聚糖decorin在皮膚中的大量合成，但其中并未提及纖調(diào)蛋白聚糖的使用。目前的先前技術(shù)是注重在飾膠蛋白聚糖decorin，因?yàn)橛沙衫w維細(xì)胞所產(chǎn)生的decorin顯現(xiàn)出隨著年齡增加及光照而減少，還因?yàn)閐ecorin在皮膚中的缺少是與皮膚拉伸強(qiáng)度的減少及皮膚脆性有關(guān)(TakedaK，etal.，JCellPhysiol.153=450-459,1992；CarrinoDA,etal.,ArchBiochemBiophys.373:91-101,2000)。因此當(dāng)前的幾篇專利有特別提到飾膠蛋白聚糖decorin(而不是其他小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖例如纖調(diào)蛋白聚糖)來(lái)預(yù)防或是治療皮膚的老化。從現(xiàn)有的先前技術(shù)中可以看到使用纖調(diào)蛋白聚糖來(lái)改善皮膚的狀況是不明顯的。例如，如從飾膠蛋白聚糖decorin及肌皮間親密的關(guān)系所預(yù)計(jì)的，飾膠蛋白聚糖decorin基因剔除的小鼠證實(shí)了皮膚明顯的脆弱性。同時(shí)，纖調(diào)蛋白聚糖基因剔除的小鼠如所預(yù)期的那樣并沒(méi)有任何可看得見的皮膚反常，且在成人皮膚中只能檢測(cè)到非常少的纖調(diào)蛋白聚糖。更者，在受傷的成人皮膚中，飾膠蛋白聚糖decorin而非纖調(diào)蛋白聚糖發(fā)生上調(diào)，表明飾膠蛋白聚糖decorin的表達(dá)與成人非再生修復(fù)反應(yīng)之間相關(guān)系是很緊密的。另外，屬于不同類小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖的纖調(diào)蛋白聚糖和飾膠蛋白聚糖decorin分別結(jié)合至膠原分子中不同的區(qū)域。因此，在早期懷孕胎兒皮膚中再生修復(fù)期間，是纖調(diào)蛋白聚糖而非飾膠蛋白聚糖decorin的上調(diào)可作為有組織的膠原沉積的一個(gè)證據(jù)(參見圖4及圖7)，而在晚期懷孕的胎兒皮膚中伴隨著瓦解的膠原排列的非再生修復(fù)并沒(méi)有伴隨著纖調(diào)蛋白聚糖的上調(diào)，更令人驚訝的是，通過(guò)用纖調(diào)蛋白聚糖抗體來(lái)單獨(dú)去除纖調(diào)蛋白聚糖已足夠阻止有序膠原在正常地顯現(xiàn)無(wú)疤修復(fù)的早期懷孕沉積，而單獨(dú)加入纖調(diào)蛋白聚糖已足夠促進(jìn)在正常顯示有疤痕的修復(fù)的晚期懷孕胎兒動(dòng)物中有序膠原的沉淀(圖8和圖9)。就如同先前的數(shù)據(jù)所顯示的，在無(wú)疤痕胎兒傷口中缺少過(guò)多的基質(zhì)累積，第一類膠原mRNA表達(dá)在晚期懷孕的傷口中在纖調(diào)蛋白聚糖的治療后減少(圖10)。纖調(diào)蛋白聚糖應(yīng)用在成人傷口亦顯著增加整體的皮膚結(jié)構(gòu)以及膠原的組織化(圖11)。此證實(shí)了本發(fā)明使用從胎兒組織中得到的化合物來(lái)改進(jìn)皮膚的狀況的方法，或是經(jīng)由胎兒組織來(lái)鑒定此化合物的方法，可應(yīng)用到成人的皮膚上。b)有表皮傷口的非完整皮膚的治療飾膠蛋白聚糖decorin或是等效化合物例如纖調(diào)蛋白聚糖的使用，用來(lái)預(yù)防皮膚的結(jié)疤或是傷口的收縮已經(jīng)在先前技術(shù)中有詳細(xì)描述.疤痕為纖維狀的或是結(jié)締組織的沉積，按照定義它只在皮膚受傷之后發(fā)生。皮膚受傷啟動(dòng)了傷口愈合的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，其包括止血、發(fā)炎、增生、以及重建(recomdeling)。正常皮膚傷口的修復(fù)以成纖維細(xì)胞的結(jié)締組織的沉積以及肌原成纖維細(xì)胞(myofibroblasts)的傷口收縮為特征，其最后會(huì)導(dǎo)致疤痕的產(chǎn)生(MastΒΑ.Theskin.InwoundHealing:BiochemicalandClinicalAspects.Eds.CohenKI,DiegelmannRF,lindbladWJ.Philadelphia:WBSaundersCompany,P.344-355,1992)。例如，在美國(guó)專利第6509314號(hào)中提到了“肌膚的結(jié)疤是一個(gè)各種皮膚損傷之后的過(guò)程，其會(huì)導(dǎo)致過(guò)量的纖維組織包含膠原、織連蛋白(fibronectin)、以及蛋白聚糖的累積。纖維基質(zhì)累積的誘發(fā)是血小板及發(fā)炎細(xì)胞在傷口的位置釋放生長(zhǎng)因子的結(jié)果。誘發(fā)纖維疤痕組織沉積的主要生長(zhǎng)因子為轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β，飾膠蛋白聚糖Decorins會(huì)結(jié)合并和不同的IFG-β的生物功能，包含誘發(fā)細(xì)胞外基質(zhì)”。相反地，單獨(dú)的表皮傷口并不會(huì)留下疤痕或是導(dǎo)致傷口的收縮。部分具有厚度的傷口例如擦傷或是表面的燙傷并不會(huì)穿過(guò)真皮，因此既不是纖維組織或過(guò)量的結(jié)締組織沉積(例如疤痕)，亦不是傷口的收縮在上皮痊愈中扮演一個(gè)角色(MastΒΑ.Theskin.InWoundHealing:BiochemicalandClinicalAspects.Eds.CohenKI,DiegelmannRP,LindbladWJ.Philadelphia:WBSaundersCompany，p.344-355，1992)。因此，正常傷口級(jí)聯(lián)反應(yīng)的止血、發(fā)炎、再生、以及重建的確會(huì)發(fā)生，因?yàn)槭紫?，在表皮中沒(méi)有血管可以受傷。然而，表皮的受傷或是刺激可以開始發(fā)炎的反應(yīng)，其會(huì)影響在上皮層中所包含的黑色素細(xì)胞及藍(lán)格罕式細(xì)胞。黑色素細(xì)胞的刺激及/或受傷會(huì)刺激或是中斷由黑色細(xì)胞產(chǎn)生色素的過(guò)程，黑色素細(xì)胞產(chǎn)生色素的過(guò)度刺激會(huì)導(dǎo)致表皮或是真皮的過(guò)多色素沉淀，而傷害黑色素細(xì)胞會(huì)導(dǎo)致過(guò)少色素沉淀。過(guò)多色素沉淀及過(guò)少色素沉淀的過(guò)程，直接與黑色素細(xì)胞產(chǎn)生色素有關(guān)，且分別與由成纖維細(xì)胞產(chǎn)生膠原及其他細(xì)胞外基質(zhì)成分及肌原成纖維細(xì)胞介導(dǎo)的疤痕的形成及傷口的收縮的過(guò)程完全不同。由于與色素問(wèn)題有關(guān)的疤痕的形成或是傷口收縮是為完全不同的機(jī)制，因此使得用纖維蛋白聚糖來(lái)治療與表皮發(fā)炎或是受傷相關(guān)的潛在并發(fā)癥在先前技術(shù)中并不明顯。c)促進(jìn)膠原的有序化的治療在特別強(qiáng)調(diào)完整的皮膚時(shí)，膠原組織化的促進(jìn)可能被使用來(lái)治療無(wú)序膠原形成的狀況，例如由時(shí)間老化或是由光老化。在特別強(qiáng)調(diào)非完整的皮膚時(shí)，膠原組織化的促進(jìn)可能被使用來(lái)治療無(wú)序膠原形成的狀況，例如真皮的結(jié)疤。就如同之前所提及的，使用飾膠蛋白聚糖decorin或是等效分子例如纖調(diào)蛋白聚糖，可防止真皮的結(jié)疤(美國(guó)專利第5，654，270號(hào)；美國(guó)專利第6，509，314號(hào))或是傷口的收縮，如同在先前技術(shù)中所描述的(美國(guó)專利第5，510，328號(hào)；美國(guó)專利第5，851，994號(hào))。因此，先前技術(shù)教示了過(guò)量第纖維基質(zhì)累積是疤痕的主要成分，其基本上由轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β所介導(dǎo)。更者，先前技術(shù)教示了由飾膠蛋白聚糖decorin或是相關(guān)的分子來(lái)改善疤痕，基本上與調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β活性的能力有關(guān)。因此，先前技術(shù)教示了飾膠蛋白聚糖decorin或是相關(guān)的分子會(huì)調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)累積的量。這個(gè)細(xì)胞外基質(zhì)累積量的減少，將會(huì)幫主以過(guò)多纖維沉積作為特征，例如血管球性腎炎(glomerulon印hritis)及真皮的疤痕，作為病理學(xué)上特殊疾病的治療。然而，單單減少細(xì)胞外基質(zhì)量，甚或單單抑制轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β活性并不足夠完全地消除疤痕。這是由于雖然轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子已被知道對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生具有直接的影響，但并不知道它對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的組織化有什么作用。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子是一類多功能的細(xì)胞因子，其對(duì)于細(xì)胞成長(zhǎng)和分化、胚胎發(fā)生、免疫調(diào)節(jié)、發(fā)炎及傷口的愈合尚有廣泛的作用(BorderWA,etal.,KidneyInternational.Supplement.49:S59_61，1995)。就皮膚的修復(fù)而言，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β2已知可以促進(jìn)疤痕的的形成，但I(xiàn)FG-β3可減少疤痕(LinRY，etal.，AnnSurg.222:146-154,1995；ShahΜ,etal.，JCellSci.108(Pt3):985-1002,1995)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β已認(rèn)為與個(gè)體發(fā)生的從具有最小發(fā)炎反應(yīng)的胎兒型態(tài)的無(wú)疤痕修復(fù)向具有顯著增加的發(fā)炎反應(yīng)的成形態(tài)的非再生性的修復(fù)的轉(zhuǎn)移有關(guān)。具有疤痕的成人型修復(fù)是以過(guò)多量及低質(zhì)的基質(zhì)沉積來(lái)作為特征。許多策略被設(shè)計(jì)來(lái)中和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子1，包括抗轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子2抗體，反意轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子1寡脫氧苷酸(oligodeoxynucleotides)及病毒性基因療法，其已被證實(shí)可減少但不是完全消除在成年動(dòng)物中形成的痕痕(ChoiBM,etal.,ImmunolCellBiol.74:144-150,1996；ShahM,etal.,Lancet.339:213-214,1992；ShahΜ,etal.,JCellSci.107(Pt5):1137-1157,1994；IsakaY,etal.,NatMed.2:418-423.,1996；ElepfandtP,etal.,NeurosciLett.322107-110.2002)。這表示了在細(xì)胞外基質(zhì)中單獨(dú)抑制轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β的活性伴隨與之相關(guān)的ECM量的減少，并不足以完全消除疤痕。已經(jīng)證實(shí)，對(duì)于無(wú)疤痕胎兒修復(fù)，以不足的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1表的來(lái)作為一個(gè)單一機(jī)制是過(guò)分的簡(jiǎn)單化。此亦證實(shí)了即使是無(wú)疤痕Ε16傷口也顯示了在受傷后初始時(shí)的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β2的上調(diào)(SooC，etal.,AmJPathol.Inpress)。更者，雖然轉(zhuǎn)化成長(zhǎng)因子-β被廣泛的認(rèn)為是一種可增加細(xì)胞外基質(zhì)數(shù)量的促纖維化的肽，但是，沒(méi)有數(shù)據(jù)可以指出轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β可以直接的影響細(xì)胞外基質(zhì)的品質(zhì)或組織化作用。這提示著直接參與細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)及組織化作用的其他因子，亦可能對(duì)于再生的胎兒細(xì)胞修復(fù)是重要的。然而，有一些并不一定與皮膚受傷相關(guān)的其他狀況，其亦導(dǎo)致纖維性結(jié)締組織的沉積。一個(gè)例子是全身性硬化癥(systemicsclerosis)，這是一個(gè)主要由于第一類及第三類膠原過(guò)量地沉積引起的一種結(jié)締組織的疾病，是以皮膚皮下組織及內(nèi)部的器官的纖維樣變性來(lái)作為特征(KurodaK,andShinkaiH.,ArchDermatolRes.289:481_485，1997。)因此，先天或是后天的畸形膠原結(jié)構(gòu)或是組織，會(huì)導(dǎo)致各種組織的功能障礙。例如在導(dǎo)致畸形膠原結(jié)構(gòu)的膠原分子本身的突變，會(huì)發(fā)生各種天生疾病綜合癥，例如群軟骨錯(cuò)生，骨骼發(fā)育不完整、先天結(jié)締組織異常疾病、或是表皮分解性水泡癥Epidermolysisbullosa)(回顧于(GelseK,etal.，AdvDrugDelivRev.551531-1546，2003)，而調(diào)節(jié)膠原細(xì)纖維生成的小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖的變異，會(huì)發(fā)生各種畸形的發(fā)生，例如骨關(guān)節(jié)炎(這是一種Danlos樣的表型(danlos-likephenotype))、肌肉失養(yǎng)癥、以及角膜的疾病(AmeyeLoundYoungMF,Glycobiology，12:10FR_116R，2002)。同時(shí)，受傷或疾病會(huì)導(dǎo)致得到后天的膠原結(jié)構(gòu)的降解，之后，則會(huì)產(chǎn)生更多的疾病。在這些例子中，無(wú)序化的膠原即可被總稱為-「疤痕」。疤痕的生成對(duì)很多人類疾病，包含肝硬化、肺纖維化、及貧血性心臟疾病的發(fā)生(pathogenesis)是關(guān)鍵性的。有兩種不同的過(guò)程會(huì)導(dǎo)致疤痕的產(chǎn)生，其中一個(gè)是基質(zhì)的累積，沒(méi)有基質(zhì)的累積基本上不會(huì)有物質(zhì)可以形成疤痕。只要過(guò)量的基質(zhì)沉積就會(huì)有疤痕的形成，甚至于不需要引起受傷。例如，在腎臟中的血管球性腎炎的一個(gè)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子的模型是以過(guò)量的細(xì)胞外基質(zhì)累積作為基礎(chǔ)，其破壞了基質(zhì)沉積以及退化之間的平衡。另一個(gè)例子是全身性硬化癥，它是以皮膚、皮下組織和各種內(nèi)部器官的纖維樣變性為特征的一種結(jié)締組織疾病，其原因主要是由于第一類及第三類膠原的過(guò)量沉積。其他會(huì)導(dǎo)致疤痕的過(guò)程是為基質(zhì)組織化的缺少。據(jù)此，有兩種方法來(lái)治療疤痕，其中之一為減少基質(zhì)的累積，另一為增加基質(zhì)的組織化。然而，疤痕形成的減少是不只包含基質(zhì)累積的減少。因此，可以認(rèn)為是累積基質(zhì)的有序化模式比基質(zhì)數(shù)量本身還要重要。此可以試驗(yàn)的證據(jù)來(lái)支持，即利用抗轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子抗體單獨(dú)中和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子是為傷口但不足以消除疤痕。因此，與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子介導(dǎo)基質(zhì)的累積無(wú)關(guān)的其他機(jī)制在無(wú)疤痕修復(fù)中是重要的。其他蛋白聚糖的飾膠蛋白聚糖decorin家族已知的功能包括對(duì)膠原微纖維形成的體外(invitro)效應(yīng)。然而，即使是體外的，其有很多明顯不同的作用。例如飾膠蛋白聚糖decorin及纖調(diào)蛋白聚糖以不同的位置在膠原分子上互相作用。同時(shí)在體內(nèi)，小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖基因剔除的動(dòng)物證實(shí)了不同的形態(tài)學(xué)，表示了在體內(nèi)小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖不同功能及組織分布。例如，纖調(diào)蛋白聚糖基因剔除的小鼠皮有可察覺的皮膚異常，且在皮膚中僅檢測(cè)到極少量的纖調(diào)蛋白聚糖。與飾膠蛋白聚糖(decorin)相反，F(xiàn)M在非再生型態(tài)的修復(fù)期間并未被提高。因此，此令人驚訝及新的方面是在胎兒的再生修復(fù)期間的令人驚訝的纖調(diào)蛋白聚糖上調(diào)，及以有疤痕的非再生修復(fù)期間的纖調(diào)蛋白聚糖的缺乏。更令人驚訝的甚至是在成人及晚期懷孕期動(dòng)物中隨著非再生修復(fù)的飾膠蛋白聚糖decorin上調(diào)。更者，更令人驚訝的是，單獨(dú)去除纖調(diào)蛋白聚糖已足夠在胎兒動(dòng)物中阻止組織化膠原的沉積，單獨(dú)的加入纖調(diào)蛋白聚糖已足夠促進(jìn)組織化膠原的沉積?；蚴欠绕つw的治療炎反應(yīng)本發(fā)明的一新穎之處是為迄今為止未被認(rèn)識(shí)的事件序列，即飾膠蛋白聚糖decorin及雙鏈蛋白聚糖biglycan的調(diào)節(jié)可調(diào)節(jié)腫瘤壞死因子TNF-α(其為一種參與多種炎性皮膚狀況的主要炎性細(xì)胞因子)，以及在飾膠蛋白聚糖decroin或是雙鏈蛋白聚糖biglycan上的皮膚素硫酸鹽部分的調(diào)節(jié)可調(diào)節(jié)白血球增多(白血球增多是炎性反應(yīng)的主要組成)。因此，飾膠蛋白聚糖decorin、雙鏈蛋白聚糖biglycan、及/或相關(guān)的膚素硫磺鹽部分的調(diào)節(jié)，會(huì)影響與完整或非完整皮膚有關(guān)的大量的發(fā)炎狀況。例如，中度的暴露在紫外線輻射下(例如曬傷)及皮膚的摩擦或是搔癢是導(dǎo)致完整性表皮(完整皮膚的定義)沒(méi)有31破壞情況下的皮膚發(fā)炎的例子?？赡馨殡S著完整或是非完整皮膚的其他炎性皮膚狀況的例子包括但不限于非過(guò)敏性皮膚發(fā)炎的狀況、過(guò)敏性皮膚發(fā)炎的狀況、紫外線輻射導(dǎo)致地皮膚發(fā)炎的狀況、神經(jīng)性皮膚發(fā)炎的狀況、或是其他皮膚發(fā)炎的狀況。因此包含一種或多種小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖及/或酶用來(lái)調(diào)節(jié)糖胺聚糖(例如皮膚硫酸鹽)的組合物，可被用于治療皮膚炎性狀況。本發(fā)明的較佳實(shí)施例包括飾膠蛋白聚糖decorin及/或軟骨素酶B0雜船輪■紐寸劣盧唐碰本發(fā)明的一個(gè)新穎之處為迄今為止未被認(rèn)知的事件序列，即飾膠蛋白聚糖decorin及纖調(diào)蛋白聚糖的調(diào)節(jié)可調(diào)節(jié)堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(其為一種強(qiáng)力的黑色素細(xì)胞有絲分裂原)并調(diào)節(jié)腫瘤壞死因子TNF-α(其為一種主要的炎性細(xì)胞因子)。本發(fā)明的另一新穎之處為迄今為止未被認(rèn)知的事件序列，即飾膠蛋白聚糖decorin或是雙鏈蛋白聚糖biglycan之上的相應(yīng)的膚素硫酸鹽部分的調(diào)節(jié)可調(diào)節(jié)白血球增多(一種炎性反應(yīng)的主要成分)以及調(diào)節(jié)堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的活性。雖然本發(fā)明并不希望受限于任何特定的理論，但堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子活性的調(diào)節(jié)可藉由通過(guò)使用酶如軟骨素酶B來(lái)調(diào)節(jié)飾膠蛋白聚糖decorin或纖調(diào)蛋白聚糖水平或皮膚素硫酸鹽水平，這會(huì)直接影響堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子介導(dǎo)的黑色素細(xì)胞增生。另外，堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的活性的調(diào)節(jié)亦會(huì)調(diào)節(jié)干細(xì)胞因子的活性，干細(xì)胞因子對(duì)于黑色素細(xì)胞的增生及黑色素的產(chǎn)生是一個(gè)強(qiáng)力的誘導(dǎo)劑。更者，表皮的傷害或是刺激會(huì)引發(fā)炎性反應(yīng)，其也可能刺激黑色素細(xì)胞并導(dǎo)致過(guò)多的黑色素沉淀，或傷害黑色細(xì)胞并導(dǎo)致黑色素細(xì)胞的死亡以及過(guò)少的色素沉淀的情形。通過(guò)調(diào)整腫瘤壞死因子_a來(lái)減少發(fā)炎的能力，可能會(huì)減少對(duì)黑色素標(biāo)的刺激或是傷害，并相關(guān)的減少可能的過(guò)多色素沉淀或過(guò)少色素沉淀。雖然某些小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖，例如飾膠蛋白聚糖decorin、雙鏈蛋白聚糖biglycan、以及纖調(diào)蛋白聚糖鍵結(jié)到轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β的能力已經(jīng)在先前技術(shù)中的在腎臟中減少細(xì)胞外基質(zhì)堆積的文章中有清楚的描述，但轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β并未被暗示與過(guò)多色素化的問(wèn)題有關(guān)。事實(shí)上，Tre-β1會(huì)強(qiáng)烈的抑制正常黑色素細(xì)胞的增生及DNA的體外合成(KrasagakisK，etal.,AnticancerRes.14:2565_2571，1994)。另外，過(guò)多色素沉淀為一種與疤痕形成完全不同的過(guò)程。疤痕的產(chǎn)生涉及藉由成纖維細(xì)胞所制造的纖維組織的過(guò)量累積，且會(huì)伴隨表皮層的受傷而發(fā)生。相反地，過(guò)多色素沉淀涉及由黑色素細(xì)胞產(chǎn)生并沉積過(guò)多的黑色素，且有或沒(méi)有伴隨著皮膚實(shí)際上的受傷。假使與皮膚的受傷有關(guān)，通常會(huì)伴隨著炎性成分。假使對(duì)于完整性皮膚并沒(méi)有實(shí)際上的傷害，則可能存在或不可能存在炎性成分，這與暴曬在紫外光輻射下的程度有關(guān)。因此，疤痕的形成是以真皮的受傷為前提，而過(guò)多色素沉淀則可能有關(guān)或無(wú)關(guān)于皮膚的發(fā)炎或是皮膚的受傷。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例是使用于痤瘡的傷口及昆蟲的叮咬，其會(huì)在一些特定的種族，例如亞洲人、拉丁人、黑人中起顯著的高色素沉積。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例可應(yīng)用在皮膚炎性狀況而產(chǎn)生的可能的過(guò)多的色素沉淀，其包括但不限于非過(guò)敏性皮膚炎性狀況、過(guò)敏性皮膚炎性狀況、神經(jīng)性皮膚炎性狀況、紫外線輻射導(dǎo)致的皮膚炎性狀況、或其他皮膚炎性狀況。C.纖調(diào)蛋白聚糖(FM)32本發(fā)明的一方面是一種組合物，其包含纖調(diào)蛋白聚糖且可用來(lái)促進(jìn)皮膚的再生。纖調(diào)蛋白聚糖為胎兒組織所表達(dá)的幾個(gè)組分中的一個(gè)，是一種小亮氨酸-豐富的蛋白聚糖，其明顯地改善皮膚中真皮層膠原的組織化，且無(wú)皮膚刺激的情形發(fā)生。當(dāng)局部地應(yīng)用純化的纖調(diào)蛋白聚糖或是纖調(diào)蛋白聚糖富集的細(xì)胞萃取物(FMenrichedcellularextracts)時(shí)，皮膚的狀況會(huì)在不受刺激下得到改善。事實(shí)上，纖調(diào)蛋白聚糖的應(yīng)用會(huì)導(dǎo)致皮膚發(fā)炎癥狀以及發(fā)炎的細(xì)胞因子表達(dá)的明顯減少。雖然，纖調(diào)蛋白聚糖被使用來(lái)作為減輕嚴(yán)重的皮膚受傷有關(guān)的真皮疤痕的產(chǎn)生在先前技術(shù)已有描述(參見美國(guó)專利第5，654，270號(hào)及第5，510，328號(hào))，但時(shí)目前的技術(shù)對(duì)于在新的化妝品上、或是藥學(xué)上使用纖調(diào)蛋白聚糖或是等效的化合物改善非發(fā)炎的皮膚狀況并未加以敘述。此外，先前技術(shù)也沒(méi)有敘述FM或等效分子的新的化妝品或藥物用來(lái)減少皮膚發(fā)炎和高色素沉淀的應(yīng)用。在本發(fā)明的一個(gè)代表性實(shí)施例中，由胎兒組織所表達(dá)的特定的化合物，例如纖調(diào)蛋白聚糖可從天然的組織(野生型)中，或由一適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)媒介例如細(xì)菌或是酵母(有或沒(méi)有編碼區(qū)修飾的重組形式)分離出來(lái)，之后，配置成改善皮膚狀況的化妝品組合物。有關(guān)具體組織組合物的更詳細(xì)說(shuō)明描述請(qǐng)參見在此提供的實(shí)施例。下面的描述在于說(shuō)明，但不限制本發(fā)明的范圍。使用纖調(diào)蛋白聚糖來(lái)促進(jìn)皮膚的再生的可以是野生型或是重組型纖調(diào)蛋白聚糖。純化的野生型纖調(diào)蛋白聚糖蛋白質(zhì)可由商業(yè)化的來(lái)源購(gòu)得(Sigma-AldrichCorp.,StLouis,MO)0重組型FM是由將纖調(diào)蛋白聚糖cDNA(最佳是為人類的)克隆到一個(gè)適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)載體(例如質(zhì)粒、線病毒)而獲得。人類纖調(diào)蛋白聚糖cDNA在本領(lǐng)域是為公知的(基因庫(kù)的登陸號(hào)碼X75546)。在本發(fā)明的一實(shí)施例中，在重組表達(dá)之前也可以利用在本領(lǐng)域公知的技術(shù)對(duì)重組纖調(diào)蛋白聚糖cDNA的編碼序列進(jìn)行基因修飾以增強(qiáng)特異性的特征。定位突^(site-sepecificmutagenesis)^MM^tM^1M(oligonucleotide)弓|·(primer)，來(lái)增加蛋白質(zhì)對(duì)其受體的結(jié)合親和力。另外，可以加入親水性及分泌序列(secretorysequence)例如IgKappa-鏈或組氨酸及GST標(biāo)記序列來(lái)提高純化效率。亦可利用本領(lǐng)域中公知的技術(shù)重組纖調(diào)蛋白聚糖cDNA的非編碼區(qū)進(jìn)行基因修飾以增強(qiáng)特異性的特征。例如，天然哺乳動(dòng)物啟動(dòng)子不足以有效地產(chǎn)生大量地的蛋白質(zhì)。在此種情況下，可以將CMV和SV40啟動(dòng)子插入到哺乳動(dòng)物體系中來(lái)提高轉(zhuǎn)錄效率。另外，可以在3’一端加入SV40或β—珠蛋白聚A序列來(lái)提高穩(wěn)定性和蛋白質(zhì)產(chǎn)生效率。本發(fā)明的另一實(shí)施例中，可從非基因修飾細(xì)胞或基因修飾細(xì)胞分離纖調(diào)蛋白聚糖。細(xì)胞和組織培養(yǎng)的方法，以及獲得細(xì)胞溶解產(chǎn)物或萃取物的方法在現(xiàn)有技術(shù)中已有詳細(xì)描述，且本領(lǐng)域的技術(shù)人員可實(shí)施(更多咨詢請(qǐng)參閱PollardJff,WalkerJM.BasicCellCultureprotocols,2nded.HumanaPress，Totowa，N.J，1997)。富集了纖調(diào)蛋白聚糖的細(xì)胞培養(yǎng)基可以被分離且經(jīng)加工得到上清液。這里的加工對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員是顯而易見的，包括(但不限于)上清夜的濃縮，從上清液中純化特定化合物和上清液的滅菌。這些方法應(yīng)該保證由胎兒組織所表達(dá)的化合物的最理想的生物活性的保存。此外，防腐及其他促進(jìn)滅菌的努力亦是令人滿意的。本發(fā)明的代表性實(shí)施例亦可能包含，但不限定透明質(zhì)、細(xì)胞外基質(zhì)肽或是多肽、生長(zhǎng)因子、L-抗壞血酸、或是碳水化合物部分例如乳糖-1-磷酸(lactose-1-phosphate)、麥芽糖-I-磷酸(maltose-1-phosphate)、甘露糖_6_磷酸(mannose-6-phosphate)及乳糖-6-磷酸(lactose-6-phosphate)。要明白，術(shù)語(yǔ)透明質(zhì)酸包括其衍生物且廣義的指由葡萄糖醛酸(glucuronic)和N-乙酰-D-葡萄糖胺殘基所構(gòu)成的天然存在的、微生物產(chǎn)生的、及合成衍生物的各種分子量的酸性多糖。透明質(zhì)酸已經(jīng)被描述為使用在保養(yǎng)皮膚組合物中的一種皮膚調(diào)節(jié)劑(參見美國(guó)專利的6，444，647號(hào))。亦相信透明的酸在胎兒組織再生中有著重要的作用(BurdDA,GrecoRM,RegauerS,LongakerMT,SiebertJff,GargHG.Hyaluronanandwoundhealing:anewperspective.BrJPlast44:579-84,1991)。單糖碳水化合物部分例如乳糖-1-磷酸、麥芽糖-1-磷酸、甘露糖-6-磷酸、及乳糖-6-磷酸已經(jīng)被描述為在預(yù)防或減少發(fā)炎的反應(yīng)是有用的。(DiCorletoPE,anddelaMotteCA.，JImmunol.143:3666-3672,1989；CrestaniB，etal.,AmJPhysiol.264:L391_400，1993；BartlettMR,etal.，ImmunolCellBiol.72:367-374,1994；DavisRH,etal.，JAmPodiatrMedAssoc.84:77-81,1994)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，透明質(zhì)和由胎兒組織所表達(dá)的化合物一起用于皮膚保養(yǎng)的目的且加強(qiáng)包含胎兒組織表達(dá)的化合物的化妝品護(hù)膚組合物的作用。一個(gè)具有代表性的護(hù)膚組合物可能包含，例如，從大約0.(重量)到10%(重量)的透明質(zhì)酸。D.劑量被包含在此所描述的組合物中的由胎兒組織所表達(dá)的化合物的量，隨著哺乳類動(dòng)物皮膚狀況而有所變化。一般而言，組合物及重量的范圍是依據(jù)某些因素來(lái)決定，包括化合物的分子重量、化合物的純度、化合物的生物活性及化合物的降解曲線。例如，酶、生長(zhǎng)因子及細(xì)胞因子為相對(duì)小的分子。因此，對(duì)于已知的重量其會(huì)顯現(xiàn)出相對(duì)高的生物活性，然而，生長(zhǎng)因子及細(xì)胞因子在任何缺乏保護(hù)的傳送傳播媒介中亦容易被降解。因此，在缺乏輸送介質(zhì)的環(huán)境中為了其生物學(xué)功效，必須以較高的重量劑量來(lái)提供。相反地，其他分子例如可能具有細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)功能的膠原或是蛋白聚糖，其一般是以對(duì)于已知分子可能有較少的生物活性而比較大，且對(duì)于降解有更大的抵抗力。因此，其他的化學(xué)物例如膠原或是蛋白聚糖，其可能以較高或較低的重量的劑量來(lái)提供，依據(jù)在上述所提的因素來(lái)決定。在一個(gè)實(shí)施例中，組合物可能包含純化的蛋白聚糖大約0.0001%(重量)至大約10%(重量)，及細(xì)胞溶解產(chǎn)物、萃取物、或是具有富集的蛋白聚糖化合物的培養(yǎng)基大約0.1%(重量)到大約80%(重量)。在另一個(gè)實(shí)施例中，組合物可能包含純化的酶或生長(zhǎng)因子化合物大約0.0001%(重量)到大約10%(重量)，或是純化的酶或生長(zhǎng)因子化合物大約0.000000001%(重量)到大約0.0001%(重量)，以及細(xì)胞溶解產(chǎn)物、萃取物、或是具有富集的酶或生長(zhǎng)因子的培養(yǎng)基大約0.1%(重量)到大約80%(重量)。在另一個(gè)實(shí)施例中，組合物可能包含大約0.001IU/毫升到大約1IU/毫升的純化的酶化合物，或是大約IU/毫升到大約1000IU/毫升的純化的酶化合物。E.附加的護(hù)膚活性物質(zhì)本發(fā)明的組合物可以含有安全而有效量的一種或多種附加的護(hù)膚活性成分，選自但不限于脫皮活性成分(desquamatoryactives)、抗粉刺性活性成分、視黃酸類物質(zhì)、羥基酸、肽、多肽、生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子、抗氧化劑、自由基清除劑、螯合劑、抗炎劑、局部麻醉齊U、曬褐活性物質(zhì)、皮膚增白劑、抗蜂窩織炎劑、黃酮類物質(zhì)、抗微生物活性物質(zhì)、潤(rùn)膚劑，皮膚修補(bǔ)劑、抗真菌活性物質(zhì)。防曬活性物質(zhì)、調(diào)理劑、結(jié)構(gòu)劑、增稠劑及其混合物。所述附加的護(hù)膚活性物質(zhì)的量可隨著要加以調(diào)節(jié)的具體的皮膚狀況而改變。在一個(gè)實(shí)施例中，組合物可包含0.000001%(重量)——10%(重量)的至少一種附加的護(hù)膚活性物質(zhì)。本發(fā)明的一個(gè)代表性實(shí)施例中，組合物要接觸人類角質(zhì)組織，附加成分應(yīng)該適合角質(zhì)組織施用，亦即當(dāng)混入到組合物中時(shí)，它們適合接觸到人類的角質(zhì)組織但在合理醫(yī)藥判斷范圍內(nèi)不具有過(guò)度的毒性、不相容性、不穩(wěn)定性、過(guò)敏反應(yīng)等等。CTFA化妝品成分手冊(cè)第二版(1992年)描述了很多種非限制性護(hù)膚常使用的化妝品成分和醫(yī)藥成分，其適合在本發(fā)明的組合物中使用。這些成分的類別包括，例如研磨劑、吸收劑、美感成分例如香味劑、顏料、著色劑/色料、精油、皮膚感覺物質(zhì)、收斂劑等(例如丁子香油、薄荷醇、樟腦、桉樹油、子丁香酸、乳酸薄荷脂、榛樹蒸餾產(chǎn)物)、抗粉刺物質(zhì)、抗結(jié)劑(anti-cakingagents)、消泡劑、抗微生物劑(例如丁基氨基甲酸碘代丙酯(iodopropylbutylcarbamate))、抗氧化劑、粘合劑、生物添加劑、緩沖劑、填充劑、螯合劑、化學(xué)添加劑、著色劑、化妝品收斂劑、化妝品殺蟲劑、變性劑、藥物收斂劑、外部止痛劑、有助于組合物的成膜性質(zhì)和實(shí)質(zhì)性(例如二十碳烯和乙烯基比咯烷酮的共聚物)的成膜劑或材料(例如聚合物)、不透明劑、PH調(diào)節(jié)劑、推進(jìn)劑、還原劑、多價(jià)螯合劑、皮膚漂白劑和光亮劑(例如氫琨、曲酸、抗壞血酸、磷酸抗壞血酸鎂、抗壞血酸葡糖胺)、皮膚調(diào)理劑(例如包括各種各樣和閉塞的濕潤(rùn)劑)、潤(rùn)膚劑/或恢復(fù)劑(例如泛醇(panthenol)及其衍生物(例如乙基泛醇)、蘆薈、泛酸及其衍生物、尿囊素、沒(méi)藥醇(bisabolol)，及甘草酸二鉀)、皮膚治療劑、增稠劑、和維生素及其衍生物。然而，在本發(fā)明的任一實(shí)施例中，籍由它們所提供的利益或是藉由它們假設(shè)的作用模式，能將此有用的活性成分分類。但是，要明白在此有用的活性成分在某些狀況下能提供一個(gè)以上的優(yōu)點(diǎn)或是藉由一個(gè)以上的作用模式作用。因此，在此的分類只是為了方便起見，并非要將活性物質(zhì)限制到特定的應(yīng)用或是所列出的應(yīng)用上。脫屑活件成分可以向本發(fā)明的組合物中加入安全而有效量的脫屑活性成分，較佳者大約0.1%至大約10%，更佳者為大約0.2至大約5%，另一更佳者為大約0.5%至大約4%，其是以組合物的重量來(lái)計(jì)算。將脫屑活性成分提高是受益于本發(fā)明的皮膚外觀，例如，脫屑活性成分是為了改善皮膚的紋理(例如光滑感)。一種適合在本發(fā)明中使用的脫屑系統(tǒng)，是含有基化合物和兩性離子表面活性劑，并且描述于Bissett的美國(guó)專利第5681852號(hào)中，其用于此是作為參考。另一種適合在本發(fā)明中使用的脫屑體系含有水楊酸和兩性離子表面活性劑，并且描述于Bissett的美國(guó)專利第5652228號(hào)中，其用于此是作為參考。在此所描述的兩性離子表面活性劑，亦可在本發(fā)明中以特別挑選的鯨臘基甜菜堿(cetylbetaine)作為脫屑劑。抗痤瘡活性成分本發(fā)明的組合物可以含有安全且有效量的一種或是多種抗痤瘡活性成分，有用的抗痤瘡活性成分包括間苯二酚、硫磺、水楊酸、過(guò)氧化苯甲酰、紅霉素(erythromycin)、鋅等。適合的抗痤瘡活性成分的例子進(jìn)一步詳細(xì)描述在McAtee等在1997年3月4日公開的美國(guó)專利第5607980號(hào)中。抗皺紋活件成分/抗萎縮活件成分本發(fā)明的組合物可進(jìn)一步含有安全且有效量的一種或多種抗皺紋活性成分或是抗萎縮活性成分。適合在本發(fā)明的組合物中使用的抗皺紋活性成分或是抗萎縮活性成分的例子包括含硫的D和L氨基酸及其衍生物以及鹽類，特別是N-乙酰衍生物，其具有代表性的例子是為N-乙基-L-半胱氨酸、硫醇(例如乙硫醇)、羥基酸(例如α-羥基酸、例如乳酸和乙醇酸或β-羥基酸、例如水楊酸和水楊酸衍生物例如辛酰(octanoyl)衍生物)、植酸、硫辛酸、溶血磷脂酸、脫皮劑(例如苯酚等)、以及可增加在本發(fā)明的角質(zhì)組織外觀受益，特別是強(qiáng)調(diào)角質(zhì)組織狀況的視黃素類。在此所使用的「視黃素類」包括所有天然的及/或合成的維生素A類似物或是在肌膚中具有維生素A的生物活性的類似視黃醇類化合物，以及此類物質(zhì)的立體異構(gòu)體與幾何異構(gòu)體。視黃素類較佳者為視黃醇、視黃醇脂(例如視黃醇C2-C22烷基酯，包括棕櫚酸視黃酯、乙酸視黃酯、丙酸視黃酯)、視黃醛，及/或視黃酸(包括全反式-視黃酸及/或13-順式視黃酸)，更佳者為除了視黃酸之外的視黃素類。此些化合物在本領(lǐng)域中是為公知的且可購(gòu)買至Ij(例如SigmaChemicalCompany(St.Louis,Mo.)，及BoerhingerMannheimdndianapolis,Ind.)).在此有用的視黃素類是在以下的文獻(xiàn)中描述的Parish等人的美國(guó)專利第4，677，120號(hào)；Parish等人的美國(guó)專利第4，885，311號(hào)，Purcell等人的美國(guó)專利第5，049，584to號(hào)；Purcell等人的美國(guó)專利第5，124，356；andPurcell等人的美國(guó)專利再公開第34，075號(hào)。其他適合的視黃素類是為維生素E視黃酸酯[視黃酸(反式或順式)的維生素E酯、阿達(dá)帕林{6-[3-(1-金剛烷基)-4-甲氧基苯基]-2-茶酸}，及他佐羅丁(乙基6-[2-(4，4_二甲基硫代苯并二氫吡喃-6-基)-乙炔基]煙酸酉旨)](adapalene){6-[3-(1-adamantyl)]-4-methoxypheny}-2-naphthoicacid}，及tazarotene(ethyl)6_[2_(4，4-dimethylthiochroman-6-yl)-ethynyl]nicotinate)]。代表性的視黃素類是視黃醇、棕櫚酸視黃酯、乙酸視黃酯、丙酸視黃酯、視黃醛及其組合。較佳的組合物中包含從大約0.005%到大約2%，更佳者大約0.01%到大約2%的視黃素類。視黃醇使用的量較佳者大約為0.01%至大約0.15%:視黃醇酯使用的量較佳者大約為0.01%-2%(如約1%)；視黃酸的用量為約0.01%至大約0.25；維生素E視黃酸酯、adapalene、tazarotene使用的量較佳者大約為0.01%至大約2%。肽/多肽在此所使用的多于三個(gè)但等于或少于34個(gè)氨基酸的天然存在的、酶消化的、或合成的氨基酸序列，是稱作「肽」。而「多肽」是指多于34各氨基酸的天然存在的、酶消化的、或合成的氨基酸序列。本發(fā)明的組合物中可含有安全且有效量的肽，包括但不限于二肽、三肽、四肽、五肽及其衍生物，以及細(xì)胞外基質(zhì)的成分例如膠原、彈性蛋白的酶裂解片段。天然存在及在商業(yè)上可購(gòu)得的含有肽的組合物，在此亦也是為有用的。當(dāng)包含于本發(fā)明的組合物時(shí)，較佳者是以大約1X10_6%到大約10%，更佳者是以大約1X10_6%到大約0.1%，最佳者是以大約1X10_5%到大約0.01%的量含有肽，其是以組合物的重量來(lái)計(jì)算。在所有含的肽為CARN0SINE的某些組合物中，組合物較佳者包含以組合物重量計(jì)算的大約0.至大約5%的肽。生長(zhǎng)因子/細(xì)胞因子雖然藉由胎兒組織所表達(dá)的化合物可包括生長(zhǎng)因子及細(xì)胞因子，但本發(fā)明的較佳的實(shí)施例中，可包含有安全且有效量，但不一定為由胎兒組織所表達(dá)的附加的生長(zhǎng)因子及細(xì)胞因子。在此所描述的刺激細(xì)胞生長(zhǎng)的化合物及因子，為對(duì)特定細(xì)胞株的建立和生長(zhǎng)有刺激作用的天然或外生的化合物。這些包括合成代謝生長(zhǎng)激素，例如人類生長(zhǎng)激素和甲狀腺刺激激素，或者作用于特定細(xì)胞株例如粒細(xì)胞、血小板或紅細(xì)胞。具體而言，有關(guān)于促進(jìn)表皮生長(zhǎng)例如皮膚組織的修復(fù)或是傷口的愈合，多種定義為生長(zhǎng)因子的因素包括但不限制于表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、及類似胰島素生長(zhǎng)因子(IGF)。抗氧化劑/自由基清除劑本發(fā)明的組合物可以含有安全且有效量的抗氧化劑/自由基清除劑?？寡趸瘎?自由基清除劑特別用于提供保護(hù)對(duì)抗會(huì)導(dǎo)致角質(zhì)曾脫落及紋理變化的紫外線輻射，以及對(duì)抗會(huì)導(dǎo)致皮膚損傷的其他環(huán)境物質(zhì)的保護(hù)作用?？梢栽诒景l(fā)明的組合物中加入安全而有效量的抗氧化劑/自由基清除劑，較佳者為占組合物的大約0.至大約10%，更佳者為大約至大約5%。抗氧化劑/自由基清除劑可以使用例如抗壞血酸(維生素C)及其鹽類、脂肪酸的抗壞血酸酯、抗壞血酸衍生物(例如磷酸抗壞血酸酯鎂、磷酸抗壞血酸酯鈉、山梨酸抗壞血酸酯)、生育素(維生素E)、山梨酸生育素酯、乙酸生育素酯、生育素的其他酯類、丁基化的羥基苯甲酸及其鹽類、6-羥基-2，5，7，8-四甲基可羅滿-2-羧酸(6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylicacid)(可以由商品的TR0L0X購(gòu)得)、沒(méi)食子酸(gallicacid)及其烷基酯、特別是沒(méi)食子酸丙酯、尿酸及其鹽類和烷基酯、山梨酸及其鹽類、硫辛酸、胺類(例如N，N-二乙基羥基胺、氨基-胍(amino-guanidine))、硫氫基化合物(例如谷胱甘肽(glutathione))、二羥基-富馬二酸及其鹽類、甜菜堿氧脯胺酸鹽(lycinePidolate)、精氨酸氧脯氨酸鹽、去甲二氫愈創(chuàng)酸、生物類黃酮、薑黃素、賴氨酸(lysine)、甲硫氨酸、脯氨酸、超氧化物歧化胸、水飛薊素(silymarin)、茶葉萃取物、葡萄皮/籽萃取物、黑色素、及迷迭香萃取物。更具代表性的抗氧化劑/自由基清除劑選自山梨酸生育素酯、及生育素的其他酯類。更具代表性的是為山梨酸生育素酯。例如，在局部組合物中使用山梨酸生育素酯以及應(yīng)用苯發(fā)明的描述于DonaldL.Bissett,RodneyD.BushandRanjitChatterjee的美國(guó)專利第4，847，071號(hào)。螯合劑本發(fā)明的組合物亦可含有安全且有效量的熬合試劑。「螯合劑」或「螯合試劑」意思是藉由形成復(fù)合物能從系統(tǒng)中去除金屬離子，以使得金屬離子不能容易地參與或是催化化學(xué)反應(yīng)的活性試劑。螯合劑的加入特別用于提供保護(hù)對(duì)抗過(guò)度脫落及肌膚紋理變化的紫外線輻射，以及對(duì)抗其他環(huán)境物質(zhì)的保護(hù)作用。安全且有效量的螯合劑可加入在本發(fā)明的組合物中，較佳者為組合物的大約0.1%至大約10%，更佳者大約為組合物1%至大約5%。在此示范的有用的螯合劑是描述于Bissett等人的美國(guó)專利第5，487，884號(hào)；Bush等人的PCT公開號(hào)第W091/16035號(hào)；及Bush等人的PCT公開號(hào)第W091/16034號(hào)。本發(fā)明組合物中使用的代表性的螯合劑為糠偶酰二肟(furildioxime)、糠偶酰單肟(furilmonoxime)，及其衍生物。類黃酮本發(fā)明的組合物可以隨意選擇類黃酮化合物。美國(guó)專利第5686082及5686367號(hào)清楚地揭露了類黃酮且被用在此作為參考。在此所使用的類黃酮化合物是由許多來(lái)源購(gòu)得，例如IndofineChemicalCompany,Inc.(Somervill,N.J.)>Steraloids,Inc.(Wilton,N.H.)，及AldrichChemicalCompany,Inc.(Milwaukee，Wis)·類黃酮化合物的混合物亦可被使用。在此所描述的類黃酮化合物本發(fā)明中的濃度是大約為0.01%到大約20%，較佳者為大約0.到大約10%，更佳者為大約0.5%到大約5%?？寡讋┍景l(fā)明的組合物中可以加入安全且有效量的抗炎劑，較佳是大約為組合物的0.1%至大約10%，更佳者大約為組合物的0.5%至大約5%，此抗炎劑增強(qiáng)本發(fā)明的皮膚外觀的益處，例如使皮膚色調(diào)更為均勻美觀。由于抗炎劑在效力上有很大的不同，因此，組合物中使用的抗炎劑精確的量取決于所使用的特定的抗炎劑?？寡讋┑睦影ǖ幌抻陬惞檀伎寡讋┘胺穷惞檀伎寡讋＿@些化合物是本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的，例如，可以參照抗發(fā)炎劑標(biāo)準(zhǔn)教科書，包括RainsfordKD(1985)抗發(fā)炎及抗風(fēng)濕病的藥物。CRCPress,BocaRaton,Florida,andScherrerRA,WhitehouseMW(1974)抗發(fā)炎藥劑；化學(xué)及藥學(xué)，AcadamicPress,NewYork。另外，當(dāng)作化妝品時(shí)，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β，或其他主要炎癥生長(zhǎng)因子的天然的或合成的調(diào)節(jié)劑也可將發(fā)炎癥狀最小化。(LoganAFrautschySA,GonzalezAM,SpornMB,BairdA.Enhancedexpressionoftransforminggrowthfactorbeta1intheratbrainafteralocalizedcerebralinjury.BrainRes587:216-25,1992；BorderWA,NobleNA,YamamotoT,HarperJR,YamaguchiY,PierschbacherMD,RuoslahtiE.Naturalinhibitoroftransforminggrowthfactor-betaprotectsagainstscarringscarringinexperimentalkidneydisease.Nature360:361-4,1992)。在一個(gè)實(shí)施例中，稱為「天然的」抗炎劑可用在本發(fā)明的方法中。此藥劑可從天然的來(lái)源(例如植物、真菌、微生物的副產(chǎn)品)或是經(jīng)由合成獲得，其是經(jīng)由適當(dāng)?shù)奈锢砑?或化學(xué)的分離以作為萃取物。例如，可以使用小燭樹臘(candelillawax)、沒(méi)藥醇(bisabolol)(例如α沒(méi)藥醇)、蘆薈、植物類固醇類(例如植物類固醇)、Manjistha(從Rubia屬中的植物，特別是RubiaCordifolia中萃取)及Guggal(從commiphora屬中的植物，特別是commiphoraMukul中萃取)、可藥樹萃取物、紅三葉草(redclover)萃取物、及海鞭萃取物?？狗涓C織炎劑本發(fā)明的組合物亦可含有安全且有效的抗蜂窩織炎劑，適合的藥劑包括但不限于黃嘌呤化合物(例如咖啡因、茶堿、可可堿、及胺茶堿)。局部麻醉劑本發(fā)明的組合物亦可含有安全且有效量的局部麻醉劑。局部麻醉劑的例子包括苯佐卡因、利多卡因(Iidocaine)、布比卡因(bupivacaine)、氯普魯卡因(chlorprocaine)、辛可卡因(dibucaine)、依替卡因(etidocaine)、甲哌卡因(m印ivacaine)、丁卡因(tetracaine)、達(dá)克羅寧(dyelonine)、?？丝ㄒ?hexylcaine)、普魯卡因(procaine)、可卡因(cocaine)、氯胺酮(ketamine)、普莫卡因(pramoxine)、苯酚，及藥學(xué)上可以接受的鹽類。曬褐活性成分本發(fā)明的組合物可含有曬褐活性成分。當(dāng)存在時(shí)，較佳為含有組合物重量的大約0.至大約20%，更佳為大約2%至大約7%，亦更佳為大約3%至大約6%的二羥基丙酮為人造曬褐活性成分。二羥基丙酮，也稱為DHA或1，3_二羥基_2_丙酮，是白色至灰白色結(jié)晶粉末。此化合物可以單體和二聚體的混合物存在，固體結(jié)晶態(tài)中二聚體占優(yōu)勢(shì)。加熱或融化時(shí)，二聚體裂解產(chǎn)生單體。在水溶液中也發(fā)生二聚體向單體的轉(zhuǎn)化作用。另外，二羥基丙酮在酸性PH值下更穩(wěn)定(參見WindholzM,Merck&Co(1983)TheMerckindex:anencyclopediaofchemicals,drugs,andbiologicals,IOthed.Merck,Rahway,N.J,entry3167,p.463and"DihydroxyacetoneforCosmetics",E.MerckTechnicalBulletin,03-304110,319897,180588)。皮膚增白劑本發(fā)明的組合物可以含有皮膚增白劑。當(dāng)存在時(shí)，組合物較佳為含有組合物重量的大約0.至大約10%，更佳為大約0.2%至大約5%，最佳為大約0.5%至大約2%的皮膚增白劑。適合的皮膚增白劑，包括本領(lǐng)域所公知的，包括曲酸、熊果素(arbutin)、抗壞血酸、及其衍生物((例如磷酸抗壞血酸鎂、磷酸抗壞血酸鈉)、及萃取物(例如桑樹萃取物、胎盤萃取物))。在此適合使用的皮膚增白劑還包括Hillebrand在PCT所公開的No.W095/3^80，其是于1995年6月12日申請(qǐng)的PCT申請(qǐng)No.U.S.W095/07432、及Kvalnes，MitchellA.Delong,BartonJ.Bradbury,CurtisB.Motley的美國(guó)專利第6，068，834號(hào)、及JohnD.Carter，在PCT申請(qǐng)的No.W095/23780。皮膚舒緩及皮膚愈合活性成分本發(fā)明的組合物可以含有皮膚舒緩或皮膚愈合活性成分。適合在此使用的皮膚舒緩或皮膚愈合活性成分包括泛酸衍生物(panthenoicacid)(包括泛醇、D-泛酸、乙基泛醇)、蘆薈、尿囊素、沒(méi)藥醇(bisabolol、及甘草酸二鉀。可在本發(fā)明的組合物中加入安全且有效量的皮膚舒緩或皮膚愈合活性成分，較佳為大約為形成組合物重量的0.至大約30%，更佳為大約0.05%至大約2%?？刮⑴Ｎ锖涂拐婢罴煞直景l(fā)明的組合物中可含有抗微生物或抗真菌活性成分，在此的活性成分可破壞微生物，抑制微生物的生長(zhǎng)或防止微生物的病理作用?？梢栽诒景l(fā)明的組合物中加入有效量的抗微生物或抗真菌的活性成分，較佳為大約為0.001%至大約10%，更佳為大約0.01%至大約5%，最佳為大約0.05%至大約2%?？刮⑸锖涂拐婢睦影˙-內(nèi)酰胺藥物、喹諾酮(quinolone)藥物，JfM^M(ciprofloxacin),1M^M(norfloxacin),0ifi(tetracycline),HM素(erythromycin)，阿米卡星(amikacin)，2，4，4，-三氯-2，-羥基二苯基醚(2，4，4'-trichloro-2'-hydroxydiphenylether),3,4,4'-trichlorobanilide,苯氧乙酉享(phenoxyethanol)，苯氧丙酉享(phenoxypropanol)，苯氧異丙酉享(phenoxyisopropan),多西環(huán)素(doxycycline)，卷曲霉素(capreomycin)，氯己定(chlorhexidine)，金霉素(chlortetracycIineO,土霉素(oxytetracycline),克林霉素(clindamycin),乙胺丁醇(ethambutol)，乙脒定(hexamidine)，羥乙磺酸鹽(isethionate)，甲硝唑(metronidazole),噴他脈(pentamidine)，慶大霉素(gentamicin)，卡那霉素(kanamycin)，lineomycin,美他環(huán)素(methacyclie)，烏洛托品(methenamine)，米諾環(huán)素(minocycline)，新霉素(neomycin)，奈替米星(netilmicin)，巴龍霉素(paromomycin)，鏈霉素(streptomycin)，妥布霉素(tobramycin)，咪康唑(miconazole),鹽酸四環(huán)素(tetracycline),hydrochloride，紅霉素(erythromycin)，紅霉素鋒(zincerythromycin),依托紅霉素(erythromycinestolate)，硬月旨酸紅霉素(erythromycinstearate)，葡糖酸氯己定(chlorhexidinegluconate)，鹽酸氯己定(chlorhexidinehydrochloride),硫酸卷曲霉素(capreomycinsulfate)，硫酸阿米星(amikacinsulfate)，鹽酸多西環(huán)素(doxycyclinehydrochloride)，硫酸卷曲霉素(capreomycinsulfate)，葡糖酸氯己定(chlorhexidineglucinate)，鹽酸氯己定(chlorhexidinehydrochloride)，鹽酸金霉素(chlortetracycinehydrochloride)，鹽酸土霉素(oxytetracyclinehydrochloride)，鹽酸克林霉素(clindamycinhydrochloride)，鹽酸乙胺丁酉享(ethambutolhydrochloride)，鹽酸甲石肖唑(metronidazolehydrochloride)，鹽酸噴他咪(pentamidinehydrochloride)，硫酸慶大霉素(gentamicinsulfate)，硫酸卡那霉素(kanamycinsulfate)，鹽酸(lineomycinhydrochloride)，鹽酸美他環(huán)素(methacyclinehydrochloride)，馬尿酸烏洛托品(methenaminehippurate)，扁桃酸烏洛托品(methenaminemandelate)，鹽酸米諾環(huán)素(minocyclinehydrochloride)，硫酸新霉素(neomycinsulfate)硫酸奈替米星(netilmicinsulfate)，硫酸巴龍霉素(paromomycinsulfate)，硫酸鏈霉素(streptomycinsulfate)，硫酸妥布霉素(tobramycinsulfate)，鹽酸咪康唑(miconazolehydrochloride)，酮康唑(ketaconazole)，amanfadinehydrochloride,amanfadinesulfate，輕甲辛口比酮(octopirox),對(duì)氯間二苯酚(parachlorometaxylenol)，制霉素(nystatin)，托萘酶(tolnaftate)，口比硫翁鋒(zincpyrithionandclotrimazole)0在此有用的活性成分代表的例子包括選自水楊酸、過(guò)氧化苯甲酰(benzoylperoxide)，3_輕基苯甲酸(3-hydroxybenzoicacid),乙酉享酸(glycolicacid),乳酸(lacticacid)，4-羥基苯甲酸0-hydroxybenzoicacid),乙酰水楊酸(acetylsalicylicacid),2-ψ■丁St(2~hydroxybutanoicacid),2-ψ■戊酸(2-hydroxypentanoicacid),2-基己酸(2-hydroxyhexanacid),jl質(zhì)式IlH酸(cis-retinoicacid)，反式視黃酸(trans-retinoicacid)，視黃酉享(retinol)，植酸(phyticacid)，N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine)，硫辛酸(lipolicacid),壬二酸(azelaicacid),花生四烯酸(arachidonicacid),過(guò)氧it^Ψ^k(benzoylperoxide)，0ifi(tetracycline),^fJ(ibuprofen)，^生(naproxen),氧可的松(hydrocortisone),對(duì)乙酉先氧基酚(acetominophen),間苯二(resorcinol)，苯氧乙酉享(phenoxyethanol)，苯氧丙酉享(phenoxypropanol)，苯氧異丙酉享(phenoxyisopropanol),2,4,4，-三氯(trichloro)-2，-輕基(hydroxy)二苯基(diphenyl)醚(ether)，3，4，4，_trichlorocarbanilide，羥甲辛吡酮(octopirox)，鹽酸利多卡因(lidocainehydrochloride)，克雷唑(clotrimazole)，咪康唑(miconazole)，酮康唑(ketoconazole),neocycinsulfate,及其混合物。防曬活性成分暴露于紫外線輻射下會(huì)導(dǎo)致過(guò)度脫皮及角質(zhì)層紋理變化，因此，本發(fā)明組合物可以任選含有防曬的活性成分。如在此所使用的，「防曬活性成分」包括防曬劑和物理防曬油。適合的防曬活性成分可以是有機(jī)物和無(wú)機(jī)物。在此有用的無(wú)機(jī)防曬物質(zhì)包括下面的金屬氧化物。平均初級(jí)粒度大約為15nm至大約IOOnm的二氧化鈦、平均初級(jí)粒度大約為15nm至大約150nm的氧化鋅、平均初級(jí)粒度大約為15nm至大約150nm的氧化鋯、平均初級(jí)粒度大約為15nm至大約500nm的氧化鐵，及其混合物。當(dāng)在此使用時(shí)，無(wú)機(jī)防曬物存在的量是組合物重量的大約0.1至大約20%，更佳為大約0.5%至大約10%，最佳為大約1%至大約5(%。有很多種常規(guī)的有機(jī)防曬活性成分適合本發(fā)明使用。BalsamMS,SagarinE(1972)化妝品、科學(xué)與技術(shù)，第二版。Wiley-InterscienceJewYork，揭露了很多適合的活性成分。本發(fā)明中有用的組合物使用了代表性的有機(jī)防曬活性成分是為2-乙基己基-ρ-甲氧基肉桂酸酯(ethylhexyl-p-methoxycinnamate)，丁基甲氧基二苯甲酰甲烷(butylmethoxydibenzoy1-methane),2-輕基_4_甲氧基二苯酮(2-hydroxy-4-methoxybenzo-phenone)，2-苯基苯并味P坐石黃酸(2-phenyIbenzimidazole-5-sulfonicacid)，辛基二甲基-P-氨基苯甲酸(octyldimethyl-p-aminobenzoicacid),octocrylene,及其混合物。組合物特別有用的防曬活性成分，是如在下列文獻(xiàn)中揭露的；Sabatelli的美國(guó)專利第4937370號(hào)，及Sabatelli&Spirnak的美國(guó)專利第4999186號(hào)。在此揭露的防曬劑在單一分子中具有兩個(gè)不同的發(fā)色團(tuán)部分，其表現(xiàn)出不同的紫外線輻射吸收光譜。發(fā)色團(tuán)部分之一主要在UVB照射范圍內(nèi)吸收，其他在UVA照射范圍內(nèi)吸收。這類防曬劑具代表性的成員為2，4_二羥基二苯酮(2，4-dihydroxybenzophenone)的4_N，N-Q-乙基己基)甲基-氨基苯甲酸酸酯G-N，N-(2-ethylhexyl)methyl-aminobenzoicacidester)；N,N_di-(2-乙基己基)~4~氨基苯甲酸酯(N，N-di-Q-ethylhexyl)-4-aminobenzocacidester)與4-羥基二苯甲酰甲烷的酯(4-hydroxydibenzoylmethane)；4_N，N-Q-乙基己基)甲基氨基苯甲酸與4-羥基二苯甲酰甲烷的酯4-N，N-(2-ethylhexyl)methyl-aminobenzoicacidesterwith4-hydroxydibenzoylmethane；2-羥基-4--羥基乙氧基)二苯酸的4-N，N-(2-乙基己基)甲基氛基苯甲酸酉旨4-N,N-(2-ethylhexyl)methy_aminobenzoicacidesterof2-hydroxy-4-(2-hydroxyethoxy)benzophenone；2-羥基_4_(2-羥基乙氧基)二苯酮的4-(2-羥基乙氧基)苯甲酰甲烷的4-N，N-(2-乙基己基)甲基氨基苯甲酸酯4-N，N42-ethylhexyl)-methylaminobenzoicacidesterof4-(2-hydroxyethoxy)dibenzoylmethane；N,N_di-(2-ethylhexyl)-4-aminobenzoicacidesterof2_輕基_4_(2-hydroxyethox)benzophenone，及4-(2-羥基乙氧基)二苯甲酰甲烷的N，N_di-(2-乙基己基)_4_氨基苯甲酸酉旨N，N_di-(2-ethylhexyl)-4-aminobenzoicacidesterof4-(2-hydroxyethoxy)dibenzoylmethane及其混合物。特別具有代表性的防曬活性成分包括4，4’-t-叔丁基甲氧基二苯甲酰甲烷(4，4，-t-butylmethoxydibenzoylmethane),2~乙基己基_p_甲氧基肉桂酸酉旨(2—ethylhexyl-p-methoxycinnamate),苯基苯并咪唑石黃酸(phenylbenzimidazolesulfonicacid),及octocrylene。使用安全且有效量的有機(jī)防曬成分，一般是組合物重量的大約至大約20%，更典型是大約2%至大約10%。精確的量將隨著所選擇的一種或是多種防曬劑及期望的太陽(yáng)防曬系數(shù)(SPF)而有所不同。粒狀材料本發(fā)明組合物可以含有粒狀材料，特別是金屬氧化物。在此粒子可以是被包覆的或是沒(méi)有被包覆的、帶電荷的或是未帶電荷的。帶電荷的粒子材料揭露于Ha等人的美國(guó)專利第5997887號(hào)中，并在此做為參考。在此有用的顆粒材料包括氯氧化鉍、氧化鐵、云母、硫酸鋇處理過(guò)的云母及二氧化鈦、二氧化硅、尼龍、聚乙烯、滑石、苯乙烯、聚丙烯、乙烯/丙烯酸共聚物、絹云母、二氧化鈦、氯氧化鉍、氧化鐵、氧化鋁、硅酮樹脂、硫酸鋇、碳酸鈣、乙酸纖維素、聚甲基丙烯酸甲酯、及其混合物。無(wú)機(jī)顆粒材料(例如二氧化鈦、氧化鋅或二氧化鋯)是由很多來(lái)源所購(gòu)得。適合的顆粒材料之一離子包含以U.S.Cosmetics獲得的材料(TR0N0XΤ02系列，SAT-TCR837，一種二氧化鈦)。較佳地，組合物中存在的顆粒材料的含量是組合物重量的大約0.01%至大約2%，更佳地，大約為0.05%至大約1.5%，最佳地是為大約0.至大約1%。調(diào)節(jié)劑本發(fā)明的組合物可以含有選自濕潤(rùn)劑、潤(rùn)膚劑或護(hù)膚劑的調(diào)節(jié)劑?？墒褂酶魇礁鳂拥拇朔N材料，每一種存在的含量是組合物量的大約0.01%至大約20%，較佳大約為0.至大約10%，更佳為大約0.5%至大約%。此些材料包括但不限于胍(guanidine)、尿素、乙醇酸及乙醇酸鹽(例如銨及四烷基銨)、水楊酸、乳酸及乳酸鹽類(例如銨及四烷基銨)、各種形式的蘆薈(例如蘆薈凝膠)、多羥基醇(例如山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤蘚糖醇、丙三醇、己三醇、丁三醇、丙二醇、丁二醇、己二醇等)、聚乙二醇、糖(例如蜜二糖)及淀粉、糖及淀粉衍生物(例如烷氧化的葡萄糖、海藻糖、葡糖胺)、透明質(zhì)酸、乳酰胺-乙醇胺、乙酰胺-乙醇胺、泛醇、尿囊素、及其混合物。在此有用的是Orr等人的美國(guó)專利等4976953號(hào)所揭露的丙氧基化的甘油。另外，亦有用的是為糖的各種C1-C30單酯和多元酯及其相關(guān)物質(zhì)。此些酯類材料由糖或多元醇部分和一個(gè)或多個(gè)羧酸部分衍生。此類酯類材料進(jìn)一步描述于美國(guó)專利第2，831，854號(hào)，Jandacek的美國(guó)專利第4，005，196號(hào)、Jandacek的美國(guó)專利第4，005，195號(hào)、Letton等人的美國(guó)專利第5，306,516號(hào)、Letton等人的美國(guó)專利第306.515號(hào)、Letton等人的美國(guó)專利5，305，514號(hào)、Jandacek等人的美國(guó)專利第4，797，300號(hào)、Rizzi等人的美國(guó)專利第3，963，699號(hào)、Volpenhein的美國(guó)專利等4，518，772號(hào)、及Volpenhein的美國(guó)專利第4,517,360號(hào)。結(jié)構(gòu)劑在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的組合物，特別是基乳狀液中可以含有結(jié)構(gòu)劑。在本發(fā)明中結(jié)構(gòu)劑特別的代表是為水包油型乳液。不受原理的限制，相信結(jié)構(gòu)劑有助于對(duì)組合物提供流變特性(rheologiccharacteristics)，以帶給組合物穩(wěn)定性。例如，結(jié)構(gòu)劑傾向于有助于形成液晶凝膠網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。結(jié)構(gòu)劑還可作為乳化劑或表面活性劑以發(fā)揮功能。本發(fā)明較佳為組合物含有大約0.至大約20%，更佳大約為0.至10%，最佳大約0.5%至大約9%的一種或是多種結(jié)構(gòu)劑。代表性的結(jié)構(gòu)劑是具有大約1至大約8的HLB且具有至少大約45°C的熔點(diǎn)。適42合的結(jié)構(gòu)劑選自飽和C14-C30脂肪醇、含有大約1至大約5摩耳環(huán)氧乙烷的飽和C16-C30脂肪醇、飽和C16-C20二醇、飽和C16-C30單甘油醚、飽和C16-C30羥基脂肪酸、C14-C30羥基化的及非羥基化的飽和脂肪酸、C14-C30飽和的乙酸基化的脂肪酸、含有大約1至大約5摩耳環(huán)氧乙烷二醇的胺和醇、單甘油酯含量至少40%的飽和C14-C30甘油單酯、具有大約1至大約3個(gè)烷基和大約2至大約3個(gè)飽和甘油單元的飽和C14-C30多甘油酯、C14-C30甘油單醚、C14-C30脫水山梨糖醇一/二酯、含有1至大約5摩耳環(huán)氧氣乙烷的C14-C30飽和的乙氧基化的脫水山梨糖一/二酯、C14-C30飽和甲基葡糖甘酯、C14-C30飽和蔗糖一/二酯、含有1至大約5摩耳環(huán)氧乙烷的C14-C30飽和乙基化的甲基葡糖苷酯、具有平均1-2個(gè)葡萄糖單元及其混合物的、具有至少大約45°C熔點(diǎn)的C14-C30飽和聚葡糖苷。本發(fā)明某些具有代表性的結(jié)構(gòu)劑選自硬酯酸、棕櫚酸、十八烷基醇、十六烷基醇、二十二烷基醇、硬酯酸、棕櫚酸、平均具有大約1至大約5個(gè)環(huán)氧乙烷單元的十八烷醇的聚乙二醇醚、平均具有大約1至大約5個(gè)環(huán)氧乙烷單元的十六烷醇的聚乙醇醚、及其混合物。本發(fā)明更具代表性的結(jié)構(gòu)劑是選自十八烷基醇、十六烷基醇、二十二烷基醇、平均具有大約2個(gè)環(huán)氧乙烷單元的十八烷醇的聚乙二醇醚(Steareth-幻、平均具有大約2個(gè)環(huán)氧乙烷單元的十六烷醇的聚乙二醇醚、及其混合物。最佳代表性的結(jié)構(gòu)劑是選自硬脂酸、棕櫚酸、十八烷基醇、十六烷基醇、二十二烷基醇、steareth-2、及其混合物。增稠劑(包括增稠劑和凝膠化劑)本發(fā)明組合物可以含有一種或是多種的增稠劑，較佳者是組合物重量的大約0.至大約5%，更佳者為大約0.至大約4%，更佳者為大約0.25%至大約3%。非限制性增稠劑種類包含選自下列羧酸聚合物、交聯(lián)聚丙烯酸酯聚合物、聚丙烯酰胺聚合物、多糖、及凝膠化劑樹脂。羧酸聚合物是含有一種或是多種從丙烯酸、取代的丙烯酸及這些丙烯酸其取代的丙烯酸的鹽類和酯類衍生物單體的交聯(lián)化合物，其中交聯(lián)劑含有兩個(gè)或是多個(gè)碳-碳雙鍵，并且從多羥基醇衍生出。本發(fā)明中有用的聚合物更詳細(xì)描述于Haffey等人的美國(guó)專利第5，087，445號(hào)、Huang等人的美國(guó)專利第4，509，949號(hào)、Brown的美國(guó)專利第2，798，053號(hào)，及在WenningerJA,McEwenGN,CosmeticToiletry禾口FragranceAssociation(1993)國(guó)際化妝品成分字典，第五版，CosmeticToiletryandFragranceAssociation,Washington,D.C.。交聯(lián)的聚丙烯酸酯聚合物作為增稠劑或凝膠化劑，包括陽(yáng)離子及非離子聚合物、而陽(yáng)離子聚合物一般是具有代表性的。有用的交聯(lián)非離子聚丙烯酸酯聚合物和交聯(lián)的陽(yáng)離子聚丙稀酯聚合物是在下例的文獻(xiàn)中揭露的=Hawe等人的美國(guó)專利第5，100，660號(hào)；Heard的美國(guó)專利第4，849，484號(hào)；Farrar等人的美國(guó)專利第4，835，206號(hào)；Glover等人的美國(guó)專利第4，628，078號(hào)；Flesher等人的美國(guó)專利第4，599，379號(hào)；及Farrar等人的美國(guó)專利第EP228，868號(hào)。聚丙烯酰胺聚合物，特別是非離子聚丙烯酰胺聚合物包括取代的支化(branch)或未支化的聚合物。這些聚丙稀酰胺聚合物中較具代表性的是由kppicCorporation(Fairfield,N.J.)以商品名S印igel305所購(gòu)得的CTFA命名的聚丙烯酰胺、isoparaffin及l(fā)aureth-7的非離子聚合物。在此有用的其他聚丙烯酰胺聚合物包括丙烯酰胺和取代的丙烯酰胺與丙烯酸和取代的丙烯酸的多嵌段(multi-block)共聚物。這些多團(tuán)共聚物可由包括HypanSR150H，SS500V，SS500W，及從LipoChemical,Inc.，(Patterson,N.J.)的SSSAIOOH購(gòu)得?！付嗵恰故呛兄貜?fù)糖(即碳水化合物)單元主鏈的凝膠化劑。多糖凝膠化劑的非限制性例子包括那些選自纖維素、羧甲基羥基乙基纖維素(carboxymethy1hydroxyethyellulose)>乙酸丙酸纖維素(celluloseacetatepropionatecarboxylate)>羥乙基纖維素(hydroxyethylcellulose)>羥乙基乙基纖維素(hydroxyethylethylcellulose)、輕丙基纖維素(hydroxypropylceulose)>輕丙基甲基纖維素(hydroxyproplmethylcellulose)、甲基羥乙基纖維素(methylhydroxyethylcellulose)、微晶纖維素(microcrystal1inecellulose)、硫酸纖維素鈉(sodiumcellulosesulfate)、及其衍生物。在此有用的是烷基取代的纖維素，在這些聚合物中，纖維素聚合物的羥基是羥基化的(特別是羥乙基化或羥丙基化)，形成羥烷基化纖維素，之后，更進(jìn)一步經(jīng)由醚鍵修飾有C10-C30直鏈或支鏈烷基。一般而言，這些聚合物是C10-C30直鏈或支鏈醇與羥烷基化纖維素的醚類。在此有用的烷基的例子包括自十八烷基、異十八烷基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、異十六烷基、椰油基(即椰油醇衍生的烷基)、棕櫚基、油基、亞油基(Iinoleyl)、亞麻油基(Iinolenyl)、蓖麻油基ricinoleyl、二十二烷基、及其混合物。烷基羥烷基纖維素醚中具代表性的是以CTFA命名的十六烷基羥乙基纖維素材料，其為十六烷醇及羥乙基纖維素的醚。此材料由從AqualonCorporation(Wilmington,Del.)以NATR0S0LCSPlus出售。其他有用的多糖包括核葡聚糖(seleroglucans)，其為每三個(gè)單元(1_3)連接的葡萄糖單元與(1_6)連接的葡萄糖的線性鏈，在商業(yè)上可購(gòu)得的例子是從MichelMercierProductsInc.(Mountainside,N.J.)的CLEARGELCS11。在此還有用的其他增稠劑和凝膠化劑包括最初自然來(lái)源的材料，這些凝膠化劑樹脂的非限制性例子包括阿拉伯膠、洋菜、褐藻素、褐藻酸、褐藻酸銨、淀粉果膠、淀粉紅藻膠、肉生僉、紅藻膠、糊精、明膠、結(jié)冷膠(gellan)樹脂、瓜兒膠、羥丙基三甲基I安(guarhydroxypropyltrimoniumchloride)、水輝石、hyaluroinicacid、水合二氧化硅(hydratedsilica)、羥丙基聚葡萄胺糖、刺梧桐膠、海藻、刺槐豆膠、納豆膠、褐藻酸鉀、紅藻膠鉀、丙烯基乙二醇褐藻酸酯、菌核膠、羥甲基葡聚糖鈉(sodiumcarboyxmethyldextran)、紅藻膠鈉、山羊刺樹膠、三仙膠、及其混合物。附加的活性成分本發(fā)明組合物可含有附加的皮膚活性成分，不包括特定的種類，包括但不限于安全且有效的金合歡醇(Farnesol)及phytantrriol。金合歡醇為一種天然存在的物質(zhì)，相信其在角鯊烯及類固醇特別是膽固醇的生物合成作用中作為母體及/或中間體。蛋白質(zhì)修飾和調(diào)節(jié)中(例如蛋白質(zhì)的金合歡醇化作用)也涉及金合歡醇，且有一種對(duì)金合歡醇敏感的細(xì)胞核受體?；瘜W(xué)上，金合歡醇是3，7，11-三甲基-2，6，10-十二碳三烯-1-醇(3，7，ll-trimethyl-2,6,10-dodecatrien-l-ol)，在此所使用的「金合歡醇」包括異構(gòu)物及互變變構(gòu)體。金合歡醇在商業(yè)可購(gòu)得，例如商品名為金合歡醇(一由Dragoco，10GordonDrive,Totowa,N.J.異構(gòu)物的混合物)及反式-反式-金合歡醇(SigmaChemicalCompany,P.0.Box14508，St.Louis,Mo.)。當(dāng)在本發(fā)明組合物中存在時(shí)，組合物較佳為含有組合物重量的大約0.001%至大約50%，更佳為大約0.01%至大約20%，最佳為大約0.至大約15%，另一最佳為大約0.至大約10%，再一最佳為大約0.5%至大約5%，又一最佳為大約至大約5%的金合歡醇。在本發(fā)明組合物中，phytantrriol較佳的量是組合物重量的大約0.001%至大約50%，更佳為大約0.01%至大約20%，最佳為大約0.至大約15%，另一更佳為大約0.2%至大約10%，再一更佳為大約0.5%至大約10%，又一更佳為大約1至大約5%。F.化妝品上、皮膚科上或是藥學(xué)上可接受的載體本發(fā)明的局部組合物亦含有皮膚可接受的載體。安全有效且有效量的載體是組合物的大約50%至大約99.99%，更佳為大約80%至大約99.9%，最佳為大約90%至大約98%，另一更佳為大約90%至大約95%。載體可是各式各樣的形式，例如，乳狀液載體，包括但不限于水包油、油包水、水包油包水及油包水包硅酮樹脂乳狀液，其是在此使有用的。本發(fā)明的乳液狀一般含有如上所述溶液和脂質(zhì)或是油脂。脂質(zhì)和油脂可來(lái)自動(dòng)物、植物和石油，并且可以是天然的或是合成的(例如人造的)。代表性的乳狀液含有濕潤(rùn)劑例如甘油。代表性的乳狀液更進(jìn)一步含有載體重量的大約0.01至大約10%，更佳為大約0.至大約5%，乳化劑可以是非離子、陽(yáng)離子、或陰離子。適合的乳化劑揭露于Dicker等人的美國(guó)專利第3，755，560號(hào)、Dixon等人的美國(guó)專利第4，421，769號(hào)、及McCutcheon的去污劑及乳化劑(DetergentsandEmulsifiers)、北美版(NorthAmericanEdition)、第317-324頁(yè)(1986)。乳狀液更進(jìn)一步可含有消泡劑、在對(duì)角質(zhì)組織施用時(shí)可使泡沫最小化。消泡劑包括高分子量硅酮樹脂及本領(lǐng)域中公知于此用途的其他材料。適合的乳狀液可以有寬廣的粘度范圍，其取決于所需的產(chǎn)品形式。較佳為具有大約50厘沲(centistokes)或是更少的粘度，更佳為大約10厘沲或是更小，最佳為大約5厘沲或是更小的低粘度乳狀物。G.小泡狀的傳送系統(tǒng)局部藥物傳送的主要障礙是為藥物穿越角質(zhì)層的擴(kuò)散速率太慢。皮膚天生的功能是為保護(hù)身體免于有害環(huán)境的傳染。皮膚主要的屏障是位于皮膚最外層的角質(zhì)層，由于在角質(zhì)層中的脂質(zhì)區(qū)域會(huì)形成不間斷的結(jié)構(gòu)，因此當(dāng)物質(zhì)應(yīng)用在皮膚上時(shí)，必須通過(guò)此區(qū)域。為了要增加轉(zhuǎn)移至皮膚的機(jī)會(huì)，各式各樣的小泡狀傳送系統(tǒng)例如凝膠狀、液狀、及彈性小泡已經(jīng)被揭露于下列的文獻(xiàn)(回顧于VermaDD,etal.,EurJPharmBiopharm.55271-277，2003；VermaDD,etal.，IntJPharm.258:141-151,2003；MiyazakiS,etal.，JPharmPharmSci.6:238-245,2003；TakahashiA,etal.，IntJPharm.246179—186，2002；BarryBff.，AdvDrugDelivRev.54Suppll:S31_40，2002；BarryBff.，EurJPharmSci.14:101-114,2001JainS,etall.，DrugDevIndPharm.29:1013-1026,2003)。IV.使用組合物來(lái)調(diào)節(jié)皮膚狀況的方法本發(fā)明的組合物可用于改善哺乳動(dòng)物皮膚的狀況。此類的角質(zhì)組織狀況的調(diào)節(jié)可以包括預(yù)防性和治療性的調(diào)節(jié)，例如此類的調(diào)節(jié)方法針對(duì)增厚的角質(zhì)組織(例如建立皮膚的表皮及/或真皮層即應(yīng)用到指甲及毛根的角質(zhì)層的狀況)，以及防止及/或延遲哺乳類動(dòng)45物皮膚的萎縮、防止及/或延遲哺乳類動(dòng)物皮膚的蜘蛛血管及/或紅斑外觀、防止及/或延遲哺乳類動(dòng)物眼下黑眼圈的外觀、防止及/或延遲哺乳類動(dòng)物皮膚的土黃色、防止及/或延遲哺乳類動(dòng)物的皮膚下垂、使哺乳類動(dòng)物的嘴唇、毛發(fā)及指甲柔軟及/或平滑、防止及/或減輕哺乳類動(dòng)物皮膚的搔癢、調(diào)節(jié)皮膚紋理且改善皮膚的顏色(例如紅潤(rùn)、雀斑)。調(diào)節(jié)角質(zhì)組織的狀況包括對(duì)角質(zhì)組織局部應(yīng)用安全且有效量的本發(fā)明的組合物。所應(yīng)用的組合物的量、應(yīng)用頻率及使用時(shí)間的長(zhǎng)短，是根據(jù)胎兒化合物、皮膚活性成分及/或已知組合物的其他成分和期望的調(diào)節(jié)水平(例如著眼于存在的角質(zhì)組織損傷程度或預(yù)期發(fā)生的情況)而有所不同。在一個(gè)具體實(shí)施例中，是對(duì)于皮膚長(zhǎng)期使用組合物。所謂「長(zhǎng)期局部應(yīng)用」的意思為在目標(biāo)物的生命期期間，連續(xù)地局部應(yīng)用組合物超過(guò)一段時(shí)間，較佳者為至少大約一個(gè)月，更佳者為至少大約六個(gè)月，最佳者為至少大約一年。當(dāng)在不同的最長(zhǎng)的應(yīng)用時(shí)間(例如5、10、或20年)后即刻獲得好處時(shí)，其具有代表性的為長(zhǎng)期的使用持續(xù)了整個(gè)目標(biāo)物的生命期。一般情況之下，在此持續(xù)時(shí)間大約為每天一次使用，但是應(yīng)用的比例大約可以每周一次至大約每天三次或是更多。本發(fā)明的組合物的量可在很大的范圍使用以提供皮膚外觀及/或感覺的好處。一般每次使用的本發(fā)明組合物的量在組合物的毫克/平方厘米(mg/cm2)中，是為大約是0.lmg/cm2至lOmg/cm2，特別有用的應(yīng)用量是為大約lmg/cm2至大約ang/cm2。較佳之角質(zhì)組織狀況的調(diào)節(jié)，是可經(jīng)由下列形式的組合物皮膚的化妝水、乳液、凝膠、泡沫劑、乳膏劑、糊狀物、乳狀液、噴霧劑、調(diào)理劑、化妝品、唇膏、指甲油、刮胡后的泡沫劑，或是為了在皮膚或是其他角質(zhì)結(jié)構(gòu)上打算留下一些美感、預(yù)防性、治療性或其他好處的類似的形式(例如一「留在上面」的組合物)。對(duì)皮膚使用組合物后，較佳者為在皮膚上至少大約15分鐘，更佳者為至少大約30分鐘，最佳者為至少大約1小時(shí)，另一最佳者為至少大約數(shù)小時(shí)，例如直至大約12小時(shí)。任何臉部、毛發(fā)、及/或指甲以外的部分可被治療，例如臉部、嘴唇、眼部下面、頭皮、頸部、軀干、手臂、手、腿、腳、手指甲、腳趾甲、頭發(fā)、睫毛、眉毛等?？梢允种富蚴褂霉ぞ呋蜓b置(例如墊、棉花球、筆狀涂抹器、噴霧器及其類似物)應(yīng)用此組合物。保證皮膚與至少最小量的胎兒化合物和護(hù)膚活性成分連續(xù)接觸的另一種方法，是為藉由使用貼片應(yīng)用此化合物。此方法特別用于需要更強(qiáng)力的處理方法的問(wèn)題皮膚的部分(例如面爪紋部分、眉線、眼下部分等)。貼片可以是閉合的、半閉合的或者不閉合的，且可以是粘合的或是不粘合的。貼片可以含有組合物或是在應(yīng)用貼片之前將組合物應(yīng)用到皮膚上。貼片也可以含有另外的活性成分，例如對(duì)于放熱反應(yīng)的化學(xué)啟動(dòng)劑(initiators)，其是如在Wu等人的美國(guó)專利第5，821，250，5，981，547，及5，972，957號(hào)所揭露的。貼片較佳是為在皮膚上停留大約5分鐘，更佳為大約15分鐘，最佳為至少大約30分鐘，另一最佳為大約1小時(shí)，再一最佳是一種在晚上的夜晚治療的形式。實(shí)施例下列的實(shí)施例進(jìn)一步描述和證明在本發(fā)明范圍內(nèi)的實(shí)施例。特定的實(shí)施例只是為了詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的目的，但并非限制本發(fā)明的說(shuō)明。不脫離本發(fā)明的精神及其他多種的變化是為可能的。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，藉由胎兒細(xì)胞或組織所表達(dá)的化合物，其是藉由組織培養(yǎng)基及溶解產(chǎn)物直接分離且進(jìn)一步濃縮及純化。雖然藉由胎兒組織表達(dá)的化合物的各自的鑒定或是純化是有用的，但本發(fā)明的化合物的應(yīng)用不需要求化合物各自的鑒定或純化，之后，將有或無(wú)進(jìn)一步濃縮或純化的組織培養(yǎng)基或溶解產(chǎn)物依據(jù)下列的實(shí)施例，配置改善皮膚狀況的化妝品的組合物。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，鑒定了藉由胎兒組織表達(dá)的化合物或改善此化合物表達(dá)的條件。一旦鑒定后，從天然組織中(野生型)或者從適合的表達(dá)載體例如細(xì)菌或酵母(有或無(wú)編碼區(qū)修飾作用的重組形式)分離出胎兒化合物，并且根據(jù)下列的實(shí)施例配置成改善肌膚狀況的化妝品組成物。下表中列出的成分「胎兒組織化合物」不需限定于胎兒組織培養(yǎng)基、溶解產(chǎn)物、及萃取物，其可是有或沒(méi)有進(jìn)行各種成分的事先的鑒定?！柑航M織化合物」亦可指從胎兒組織直接產(chǎn)生的化合物，或者藉由有或無(wú)事先的基因修飾作用的重組方法來(lái)獲得化合物。表一、使用胎兒組織化合物的護(hù)膚組合物的例子權(quán)利要求1.一種包含由胎兒組織表達(dá)的化合物以及皮膚科類或是藥學(xué)上可接受的載體的化妝品類的、藥物的、皮膚科的護(hù)膚組合物在制備用于改善無(wú)真皮損傷的皮膚狀況、調(diào)節(jié)皮膚發(fā)炎狀況或調(diào)節(jié)皮膚色素沉淀的藥物中的用途，其中該由胎兒組織表達(dá)的化合物是纖調(diào)蛋白聚糖。2.如權(quán)利要求第1項(xiàng)所述的用途，其中由該胎兒組織表達(dá)的化合物選自下列源于胎兒組織的天然化合物、在基因工程的原核或是真核細(xì)胞中重組表達(dá)的由胎兒組織所表達(dá)的化合物所產(chǎn)生的化合物及其組合。3.如權(quán)利要求第1項(xiàng)所述的用途，其中由該胎兒組織所表達(dá)的化合物選自純化的化合物或部分純化的化合物。4.如權(quán)利要求第1項(xiàng)所述的用途物，其中由該胎兒組織所表達(dá)的化合物先做基因修飾，而后在基因工程的原核或是真核細(xì)胞中進(jìn)行重組表達(dá)。5.如權(quán)利要求第1項(xiàng)所述的用途，其中該護(hù)膚組合物為選自下列之一的制劑溶液、洗液、軟膏、乳霜，及其組合。6.如權(quán)利要求第1項(xiàng)所述的用途，其中所述皮膚學(xué)上或是藥學(xué)上可接受的載體選自下列織物貼片、非織物貼片、微脂粒傳送工具、及其組合。7.如權(quán)利要求第1項(xiàng)所述的用途，其中該護(hù)膚組合物更進(jìn)一步包含選自以下的成分透明質(zhì)酸、乳糖-1-磷酸、麥芽糖-1-磷酸、甘露糖-6-磷酸、及乳糖-6-磷酸、及其組合。8.如權(quán)利要求第1項(xiàng)所述的用途，其中該護(hù)膚組合物更進(jìn)一步包含外加的護(hù)膚活性成分，其中該外加的護(hù)膚活性成分選自下列脫屑活性成分、抗痤瘡活性成分、視黃素類物質(zhì)、肽、多肽、核酸、生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子、羥酸、抗氧化劑、自由基清除劑、螯合劑、抗炎劑、局部麻醉齊、曬褐活性成分、皮膚增白齊、抗蜂窩織炎齊、類黃酮、抗微生物活性成分、皮膚舒緩齊、皮膚愈合活性成分、抗真菌活性成分、防曬活性成分、調(diào)節(jié)齊、結(jié)構(gòu)劑、增稠齊、及其混合物。9.一種制造用于促進(jìn)無(wú)真皮損傷的或在表皮層有受傷的非完整的哺乳類動(dòng)物皮膚再生的化妝品的、藥物的、皮膚科的護(hù)膚組合物的用途，其中該組合物包含有效量的蛋白聚糖化合物。10.如權(quán)利要求第9項(xiàng)所述的護(hù)膚組合物，更進(jìn)一步包含化妝品上、皮膚科上或藥學(xué)上可接受的載體。11.如權(quán)利要求第9項(xiàng)所述的護(hù)膚組合物，其中蛋白聚糖化合物選自下列天然的蛋白聚糖化合物、重組的蛋白聚糖化合物、纖調(diào)蛋白聚糖及其組合。全文摘要本發(fā)明涉及使用來(lái)自胎兒細(xì)胞及組織的化合物來(lái)改善皮膚狀況的方法及其應(yīng)用，將這些化合物輸送(deliver)至皮膚的方法包含但不限于溶液、化妝水、藥膏、乳液、凝膠或是皮膚可剝離帶。雖然對(duì)胎兒組織表達(dá)的化合物各組成分的鑒定或純化可能是有用的，但實(shí)際應(yīng)用本發(fā)明并不要求如此的鑒定或純化。本發(fā)明也涉及關(guān)于鑒定由胎兒組織表達(dá)的化合物的方法或確認(rèn)促進(jìn)這些化合物表達(dá)的條件以及促進(jìn)由胎兒組織所表達(dá)的化合物的表達(dá)的方法，其是通過(guò)改變外部細(xì)胞環(huán)境或是藉由基因重組表達(dá)來(lái)達(dá)到。文檔編號(hào)A61K35/48GK102166166SQ201110048128公開日2011年8月31日申請(qǐng)日期2003年12月10日優(yōu)先權(quán)日2002年12月11日發(fā)明者蘇加珞申請(qǐng)人:蘇加珞