專利名稱：一種生物安全性非洲豬瘟抗原多因子血清制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種血清的制備方法，尤其是生物安全性非洲豬瘟抗原多因子血清制造方法。
背景技術(shù)：
非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒引起的豬的一種烈性傳染病，可以引起豬群100%發(fā)病率和死亡率，目前國內(nèi)外無有效的疫苗用于防疫這一疾病，該病被國際獸疫局列為A類動物疫病。該病主要在非洲和歐洲國家流行，并造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。一旦發(fā)病，只能采取封鎖、撲殺和銷毀的措施。上世紀(jì)八十年代，馬而他發(fā)生非洲豬瘟，最終導(dǎo)致其國內(nèi)當(dāng)年所有生豬全部被屠宰焚燒。我國從未有過非洲豬痕，應(yīng)當(dāng)對于非洲豬瘟保持高度警揭，因?yàn)榉侵挢i瘟病毒的傳播速度快、傳播媒介多種多樣。尤其值得關(guān)注的是，2007年5月，格魯吉 亞發(fā)生了非洲豬瘟，此后，在不到一年的時間里，非洲豬瘟傳播到了亞美尼亞、阿塞拜疆、俄羅斯等前蘇聯(lián)地區(qū)，在這一地區(qū)形成了一個新的非洲豬瘟流行區(qū)域。在當(dāng)前情況下，我國應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)可能造成非洲豬瘟感染的所有進(jìn)出境檢疫和消毒，監(jiān)控與俄羅斯接鄰地區(qū)野生動物流動，進(jìn)行適當(dāng)?shù)姆侵挢i瘟監(jiān)控和流行病學(xué)調(diào)查。診斷技術(shù)對于非洲豬瘟的防疫至關(guān)重要，先進(jìn)診斷技術(shù)有助于對于感染地區(qū)及其周邊地區(qū)進(jìn)行監(jiān)控，嚴(yán)格控制非洲豬瘟從境外傳入，快速劃定感染區(qū)和受威脅區(qū)，進(jìn)行詳細(xì)的流行病學(xué)調(diào)查。國外最常用的診斷技術(shù)是ELISA，此方法既可以檢測血清，也可檢測組織液，可用于診斷、監(jiān)測和流行病學(xué)調(diào)查。國內(nèi)現(xiàn)無成型的非洲豬瘟血清學(xué)ELISA診斷技術(shù)產(chǎn)品，主要原因?yàn)槿鄙訇栃詫φ昭澹驗(yàn)榉侵挢i瘟的血清型診斷試劑盒首先需要有陽性血清作為實(shí)驗(yàn)對照。一方面，我國沒有發(fā)生過非洲豬痕，沒有實(shí)驗(yàn)室保存的非洲豬瘟病毒；另一方面，非洲豬瘟是A類動物病，目前也沒有從國外引進(jìn)研究用病毒。所以國內(nèi)無法通過實(shí)驗(yàn)技術(shù)生產(chǎn)非洲豬瘟的人工感染血清。到目前為止，國內(nèi)所采用的非洲豬瘟ELISA診斷試劑盒都是高價從國外購買，每份豬血清樣品的檢測花費(fèi)超過200元人民幣，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過養(yǎng)殖戶甚至是研究所的使用該診斷試劑所能承受的經(jīng)濟(jì)壓力。生物安全性非洲豬瘟抗原多因子血清徹底解決我國無法生產(chǎn)非洲豬瘟診斷試劑盒的瓶頸，目前可行的方法有兩種，一種方法是從國外高價購買陽性血清，另外一種方法是通過生物技術(shù)制備抗原，通過動物接種，技術(shù)研制具有高度生物安全性、低成本的、適合于診斷試劑開放的陽性對照血清。而第一種方法，除了要花費(fèi)高成本，還要解決從國外引進(jìn)非洲豬瘟陽性血清所帶來的生物安全威脅以及貿(mào)易技術(shù)壁壘的種種不利，不適于開發(fā)診斷試齊U，而后者為自己創(chuàng)新方法，構(gòu)思獨(dú)特，技術(shù)嚴(yán)謹(jǐn)，在理論上可行，表達(dá)蛋白融合了本實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的基礎(chǔ)條件和優(yōu)勢，生產(chǎn)低成本診斷用陽性對照血清，則具備開發(fā)診斷試劑盒的先天條件
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的采用基因表達(dá)的結(jié)構(gòu)蛋白P72、K205R、P54、A104R四種蛋白，經(jīng)過化學(xué)純化，用福氏不完全佐劑包被，分三批次肌肉免疫實(shí)驗(yàn)動物豬，一個月后采集豬血，分離血清，經(jīng)過血清學(xué)檢測，分裝保存。四種表達(dá)的結(jié)構(gòu)蛋白P72、K205R、P54、A104R蛋白氨基酸序列如下1、P72I vsvegtsgpl lcnihdlhkp hqskpiltde ndtqrtcsht npkflsqhfpenshniqtag61 kqditpitda tyldirrnvh yscngpqtpk yyqpplalwi klrfwfnenvnlaipsvsip121 fgerfitikl asqkdlvnef pg 2、K205RI mvepreqffq dllsavdqqm dtvkndikdi mkektsfmvs fenfierydtmekniqdlqn61 kyeemaanlm tvmtdtkiql gaiiaqleil mingtplpak kttikeamplpssntnneqt121 sppasgktse tpkknptnam fftrsewass ntfrekfItp eiqaildeqfanktgierlh181 aeglymwrtq fsdeqkkmvk emmkk3、P54I mdseffqpvy prhygeclss tptpsffsth mytiliaivv liiiiivliy lfssrkkkaa61 aaieeediqf inpyqdqqwa gvppqpgiak pagattgsvs kpvmdrpitn npvmdrpvtn121 hpvtdrlvtd klgmatgepa aasapahsae pyttvttqnt asqtmsaienlrqrstythk181 dlensl4、A104RI mstkkkptit kqelyslvaa dtqlnkalie riftsqqkii qnalkhnqev iippgikftv61 vtvkakparq ghnpatgepi qikakpehka vkiralkpvh dmln
具體實(shí)施例方式以下對本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)的描述；應(yīng)當(dāng)理解，優(yōu)選實(shí)施例僅為了說明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。采用基因表達(dá)的結(jié)構(gòu)蛋白P72、K205R、P54、A104R四種蛋白，經(jīng)過化學(xué)純化，用福氏不完全佐劑包被，分三批次肌肉免疫實(shí)驗(yàn)動物豬，一個月后采集豬血，分離血清，經(jīng)過血清學(xué)檢測，分裝保存。
權(quán)利要求
1.一種生物安全性非洲豬瘟抗原多因子血清制造方法，其特征在于，采用基因表達(dá)的結(jié)構(gòu)蛋白P72、K205R、P54、A104R四種蛋白，經(jīng)過化學(xué)純化，用福氏不完全佐劑包被，分三批次肌肉免疫實(shí)驗(yàn)動物豬，一個月后采集豬血，分離血清，經(jīng)過血清學(xué)檢測，分裝保存。
2.如權(quán)利要求I所述的生物安全性非洲豬瘟抗原多因子血清制造方法，其特征在于結(jié)構(gòu)蛋白P72蛋白氨基酸序列如下
3.如權(quán)利要求I所述的生物安全性非洲豬瘟抗原多因子血清制造方法，其特征在于結(jié)構(gòu)蛋白K205R蛋白氨基酸序列如下
4.如權(quán)利要求I所述的生物安全性非洲豬瘟抗原多因子血清制造方法，其特征在于結(jié)構(gòu)蛋白P54蛋白氨基酸序列如下
5.如權(quán)利要求I所述的生物安全性非洲豬瘟抗原多因子血清制造方法，其特征在于結(jié)構(gòu)蛋白A104R蛋白氨基酸序列如下
全文摘要
一種生物安全性非洲豬瘟抗原多因子血清制造方法,采用基因表達(dá)的結(jié)構(gòu)蛋白P72、K205R、P54、A104R四種蛋白，經(jīng)過化學(xué)純化，用福氏不完全佐劑包被，分三批次肌肉免疫實(shí)驗(yàn)動物豬，一個月后采集豬血，分離血清，經(jīng)過血清學(xué)檢測，分裝保存。
文檔編號A61P31/14GK102949720SQ20121032712
公開日2013年3月6日 申請日期2012年9月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月6日
發(fā)明者龔振華, 王志亮, 路平, 王麗萍, 包靜月, 王淑娟, 李金明, 單虎 申請人:中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心