專利名稱：抗微生物肽，組合物和使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及在藥物和美容應(yīng)用中使用的抗微生物肽，其用于治療或預(yù)防微生物感染，和/或預(yù)防治療后微生物感染的復(fù)發(fā)。
背景技術(shù)：
小的陽(yáng)離子抗微生物肽(AMP)是先天免疫系統(tǒng)天然存在的抗生素。AMP廣泛地分 布于動(dòng)物和植物中并且是最古老的宿主防御因子之一。它們的活性譜可以包括革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性細(xì)菌以及真菌和某些病毒。因?yàn)椴≡⑸飳?duì)常規(guī)抗生素的抗性增加，這些內(nèi)源性抗生素是用于設(shè)計(jì)抗多種感染性疾病的新的治療(包括用于慢性微生物感染的治療)以及用于常規(guī)和/或預(yù)防用途的重要來源。然而，對(duì)于很多應(yīng)用，此類肽除有效以外，必須足夠安全和穩(wěn)定，以允許長(zhǎng)期和/或常規(guī)使用，而對(duì)受侵襲的區(qū)域(affected area)沒有負(fù)面的影響。發(fā)明概述本發(fā)明提供顯示出抗革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性細(xì)菌以及真菌，霉菌，和某些病毒的廣泛抗微生物活性的抗微生物肽。本發(fā)明的肽是陽(yáng)離子的，其包含帶正電荷的氨基酸例如賴氨酸、精氨酸和組氨酸，和其他不帶電荷的氨基酸例如甘氨酸或谷氨酰胺。本發(fā)明的肽是安全的，有效的并且足夠穩(wěn)定的，以允許長(zhǎng)期或常規(guī)使用。本發(fā)明進(jìn)一步提供包含抗微生物肽的抗微生物組合物。所述組合物是穩(wěn)定的，并且因此可以配制為多種形式，包括常規(guī)使用的形式。所述組合物可特別用于局部施用至皮膚、毛發(fā)、指甲、陰道、尿道、耳、口腔、鼻道、呼吸系統(tǒng)、眼部、各種粘膜區(qū)域及其他受侵襲的區(qū)域，以治療或預(yù)防微生物感染，或預(yù)防微生物感染的復(fù)發(fā)。本發(fā)明的組合物通過降低，抑制或預(yù)防微生物感染，改善治療部位的病狀和/或外觀(appearance),甚至可長(zhǎng)期或常規(guī)使用。本發(fā)明進(jìn)一步提供用于改善皮膚、指甲或其他治療區(qū)域的病狀或外觀的試劑盒。這些試劑盒可以包含有助于分配和施用本發(fā)明的組合物的組分，并且可以為了所述組合物的方便施用和長(zhǎng)期保存對(duì)試劑盒進(jìn)行設(shè)計(jì)。發(fā)明詳述將HIV-TAT肽片段與肉毒毒素結(jié)合使用以產(chǎn)生用于治療、美學(xué)(aethetic)和/或美容目的的更穩(wěn)定，更有效和更安全的肉毒毒素組合物。包含這些肉毒毒素的組合物在2006 年 12 月 29 日提交的名稱為〃Compositions and Methods of Topical ApplicationAnd Transdermal Delivery of Botulinum Toxins Stabilized With PolypeptideFragments Derived From HIV-TAT〃的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)(其通過引用以其全文并入本文)中公開。本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，HIV-TAT的肽片段和相關(guān)肽具有抗微生物活性，并且可用作藥物和美容組合物中的活性成分。對(duì)于長(zhǎng)期或常規(guī)使用來說，此類肽是安全而且有效的(例如不存在肉毒毒素)。因此，本發(fā)明的一個(gè)方面是陽(yáng)離子肽，所述肽在N-或C-末端，或在N-末端和C-末端包含HIV-TAT序列或反向的HIV-TAT序列。例如，抗微生物肽可以在N-或C-末端，或N-末端和 C-末端具有 HIV-TAT 序列，例如 Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg (SEQID NO: I),或反向的 HIV TAT 序列，例如 Arg-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Lys-Lys-Arg(SEQ IDNO:2)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述陽(yáng)離子肽包含N-末端部分(所述N-末端部分為HIV-TAT或反向HIV-TAT序列)，C-末端部分(所述C-末端部分為HIV-TAT或反向HIV-TAT序列)和在N-末端部分和C-末端部分之間的一個(gè)或多個(gè)陽(yáng)離子殘基(例如Lys或Arg)。例如，所述肽可以在N-末端部分和C-末端部分之間具有5至20個(gè)陽(yáng)離子殘基(例如Lys)，例如約
12，約15或約17個(gè)陽(yáng)離子殘基。在示例性實(shí)施方案中，本發(fā)明的陽(yáng)離子肽具有以下序列Arg-Lys-Lys-Arg_Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Gly-(Lys)n-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg(SEQ IDNO: 3),或 Arg-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Lys-Lys-Arg-Gly-(Lys)n-GIy-Arg-Arg-Arg-GIn-Arg-Arg-Lys-Lys-Arg(SEQ ID NO:4),其中 n 為約 5 至約 20，例如約 10 至約 20。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述肽的N-末端部分是HIV-TAT序列并且所述肽的C-末端部分是HIV-TAT序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，N-末端部分是反向HIV-TAT序列并且C-末端部分是反向HIV-TAT序列。例如，所述抗微生物肽可以具有以下氨基酸序列=Arg-Ly s-Ly s-Arg-Arg~GIη-Arg-Arg-Arg-GIy-(Lys)15-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg(SEQ ID NO:5)。在某些實(shí)施方案中，所述肽包含天然存在的氨基酸序列，例如HIV-TAT序列，但是可選地可以包含天然存在的序列的改進(jìn)，以提高其效力?？梢杂帽疚拿枋龌蚴纠臏y(cè)定鑒定具有提高的效力的抗微生物肽。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽可容易地生物降解。通常，本發(fā)明預(yù)期的HIV-TAT和反向HIV-TAT序列的抗微生物衍生物特征在于具有特別高含量的Arg和Lys殘基。例如，本發(fā)明的肽可以包含總共至少約50%的Arg和Lys氨基酸殘基，可以包含至少約75%,或至少約80%的Arg和Lys殘基。在這些或其他實(shí)施方案中，此類衍生物可以具有SEQ ID NO :3或4的氨基酸序列，且具有I至5個(gè)氨基酸置換，插入或缺失(總共)，包括對(duì)SEQ ID NO :3或4的1、2、3或4個(gè)氨基酸置換、插入或缺失。在某些實(shí)施方案中，此類置換、插入或缺失位于HIV-TAT或反向HIV-TAT序列內(nèi)。本發(fā)明的抗微生物肽具有約15個(gè)氨基酸至約100個(gè)氨基酸的長(zhǎng)度。在某些實(shí)施方案中，陽(yáng)離子肽長(zhǎng)度為約25至約50個(gè)，或約25至約40個(gè)氨基酸。在本發(fā)明的示例性實(shí)施方案中，抗微生物肽長(zhǎng)度為約35個(gè)氨基酸。本發(fā)明有效抑制、殺死和/或裂解多種微生物，并且可具有廣泛抗微生物譜。本發(fā)明可以抑制或殺死的示例性細(xì)菌包括革蘭氏陰性和革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌例如金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，釀月農(nóng)鏈球菌(Streptococcus pyogenes)(A群)，鏈球菌屬的種(Streptococcus spp.)(綠色群)，無(wú)乳鏈球菌(Streptococcusagalactiae) (B群)，牛鏈球菌(Streptococcus bovis),鏈球菌(厭氧型物種)，肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)，變異鏈球菌(Streptococcus mutans)，腸球菌屬的種(Enterococcus spp.)，淋病奈瑟氏球菌(Neisseria gonorrhoeae)，腦膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitidis)，粘膜炎布蘭漢氏球菌(Branhamella catarrhalis)，炭疽芽抱桿菌(Bacillus anthracis)，枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)，瘡皰丙酸桿菌(Propionibacterium acnes)，白喉棒桿菌(Corynebacterium diphtheriae)，單核細(xì)胞增生利斯特氏菌(Listeria monocytogenes)，破傷風(fēng)梭菌(Clostridium tetani)，艱難梭菌(Clostridium difficile)，大腸桿菌(Escherichia coli)，腸桿菌屬的種(Enterobacter spp.)，奇異變形菌(Proteus mirablis)，銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)，肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)，沙門氏菌屬的種(Salmonellaspp.)，志賀氏菌屬的種(Shigella spp.)，空腸彎曲桿菌(Campylobacter jejuni)，伴放線放線桿菌(Actinobacillus actinomycetumcomitans)，牙銀卩卜啉單胞菌(Porphyromonasgingivalis)，福賽斯擬桿菌(Bacteriodes forcythus)，齒垢密螺旋體(Treponemadenticola)，中間普雷沃氏菌(Prevotella intermedia)，和纏結(jié)真桿菌(Eubacteriumnoda turn)。

因此，本發(fā)明的抗微生物肽可以用于抑制此類細(xì)菌以改善微生物感染或降低微生物感染的可能性，包括菌血癥、肺炎、腦膜炎、骨髓炎、心內(nèi)膜炎、齲齒、牙周病、竇炎、鼻炎、紅眼(pink eye)、尿路感染、破傷風(fēng)、壞疽、結(jié)腸炎、急性胃腸炎、膿皰病、痤瘡、acneposacue、傷口感染、燒傷感染、筋膜炎、支氣管炎和多種膿腫、醫(yī)院感染、和機(jī)會(huì)感染。本發(fā)明的抗微生物肽還有效抑制真菌的生長(zhǎng)和存活，所述真菌例如皮膚真菌(例如，小孢子菌屬的種(Microsporium spp.)例如犬小孢子菌(Microsporumcanis)，奧氏小抱子菌(Microsporum audouinii)，和石膏樣小抱子菌(Microsporumgypseum);和毛癬菌屬的種(Trichophyton spp.)，例如紅色毛癬菌(T. rubrum)，須癬毛癬菌(T. mentagrophytes)，T. Trichophyton,許蘭毛癬菌(T. schoenleinii)和斷發(fā)毛癬菌(T. tonsurans))，支頂孢屬的種(Acremonium spp.)，尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum)，短帚霉(Scopulariopsis brevicaulis)，Onychocola canadensis，雙間柱丁頁(yè)抱(Scytalidium dimidiatum);酵母(例如，白色念珠菌(Candida albicans)，熱帶念珠菌(C. Tropicalis)，或其他念珠菌屬的種，和釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae))，光滑球擬酵母(Torulopsis glabrata)，絮狀表皮癬菌(Epidermophyton fIoccosum),糖批馬拉色菌(Malasseziafurfur)，Pityropsporon orbiculare 或 ovale，新形隱球菌(Cryptococcus neoformans)，煙曲霉(Aspergillus fumigatus)，構(gòu)巢曲霉(Aspergillusnidulans)，黑曲霉(Aspergillus niger)和其他曲霉屬的種(Aspergillus spp.)，接合菌(例如，根霉和毛霉)，巴西副球孢子菌(Paracoccidioides brasiliensis)，皮炎芽生菌(Blastomyces dermatitides)，莢膜組織抱衆(zhòng)菌(Histoplasma capsulatum)，粗球抱子菌(Coccidioides immitis)，和申克抱子絲菌(Sporothrix schenckii)。因此，抗微生物肽可用于抑制真菌以治療或預(yù)防感染例如曲霉菌病、芽生菌病、念珠菌病、球孢子菌病、隱球菌病、組織胞衆(zhòng)菌病、副球孢子菌病(Paracoccidiomycosis)、孢子絲菌病、接合菌病。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，抗微生物肽有效治療或預(yù)防腳癬(Tinea pedis)、花斑癬和甲真菌病(Onychomycosis)。本發(fā)明的抗微生物肽對(duì)其有效的其他真菌感染包括須癬、羅伯芽生菌病(Lobomycosis)、足分支菌病、毛孢子菌病、花斑糠疹、頭癬、體癬、股癬、黃癬、黑癬、耳真菌病、暗色絲孢霉病和鼻孢子菌病。本發(fā)明還有效抗某些病毒,例如HIV、單純皰疫病毒、巨細(xì)胞病毒、和人乳頭瘤病毒。因此，本發(fā)明的抗微生物肽還有效預(yù)防和治療感染(例如冷瘡(cold sores)、生殖器皰疹和疣)，并且有效預(yù)防HIV感染。本發(fā)明提供包含本發(fā)明的抗微生物肽以及藥學(xué)上或美容上可接受的載體和/或稀釋劑的藥物或美容組合物。通常，本發(fā)明的組合物不包含肉毒毒素，如2006年12月29日提交的名稱為〃Compositions and Methods of Topical Application And TransdermalDelivery of Botulinum Toxins Stabilized With Polypeptide Fragments Derived FromHIV-TAT"的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)(其通過引用并入本文)中所公開的。本發(fā)明的組合物可以包含抗微生物活性有效量的本發(fā)明的抗微生物肽以及載體和/或稀釋劑，或由其組成，或基本上由其組成。在這方面，術(shù)語(yǔ)〃基本上由……組成〃指組合物僅包含抗微生物肽以及藥學(xué)上或美容上可接受的載體和/或稀釋劑，并且可以任選地包含其他的抗微生物劑，例如抗生素或抗炎劑(例如NSAID)。例如當(dāng)配制用于局部施用 時(shí)，本發(fā)明的組合物可以任選地包含過氧化苯甲酰、克林霉素、紅霉素、四環(huán)素、桿菌肽、新霉素、莫匹羅星、多粘菌素B、咪康唑和/或克霉唑。在某些實(shí)施方案中，載體和/或稀釋劑是水性載體或稀釋劑，例如緩沖鹽溶液。本發(fā)明的藥物或美容組合物可以配制用于局部施用，其可以是用于治療或預(yù)防很多微生物感染的全身性治療的受歡迎的替代。在某些實(shí)施方案中，將用本發(fā)明的組合物進(jìn)行的局部治療與全身性或其他的局部治療一起施用，以提供附加或協(xié)同作用。例如，本發(fā)明的抗微生物肽可以與過氧化苯甲酰、克林霉素、紅霉素、四環(huán)素、桿菌肽、新霉素、莫匹羅星、多粘菌素B、咪康唑、克霉唑和/或等效的抗微生物劑中的一種或多種協(xié)同作用。用本發(fā)明的組合物進(jìn)行的治療不僅可以清除各種微生物感染，還有效預(yù)防此類感染最初的發(fā)生和預(yù)防此類感染的復(fù)發(fā)。在后一方面，在局部或全身治療后，將本組合物施用到受侵襲的區(qū)域。為了預(yù)防經(jīng)有效治療的感染的復(fù)發(fā)，或?yàn)榱祟A(yù)防易感區(qū)域的感染最初的發(fā)生，可以常規(guī)地(例如每日)施用組合物一段時(shí)間，包括數(shù)天，數(shù)周或甚至數(shù)年。當(dāng)配制用于局部施用時(shí)，本發(fā)明的組合物可以包含通常用于局部藥物或美容組合物的成分，例如載體、媒介物或介質(zhì)。特別地，載體、媒介物、或介質(zhì)與將施加其的組織相容，所述組織例如皮膚、毛發(fā)、指甲、陰道、尿道、耳、口腔、鼻道、呼吸系統(tǒng)、眼部、和/或粘膜。本發(fā)明的組合物和組分適合于接觸受感染的組織或在患者中使用，且通常不具有過度的毒性、不相容性、不穩(wěn)定性、變態(tài)反應(yīng)等。視情況而定，本發(fā)明的組合物可以包含通常在本領(lǐng)域中考慮使用的任何成分。按照其形式，本發(fā)明的組合物可以包括溶液、乳劑(包括微乳劑)、懸浮液、乳膏、洗液、凝膠、粉劑、或用于施用至皮膚及其他組織(其可施用所述組合物)的其他固體或液體組合物。此類組合物可以包含另外的抗微生物劑，增濕劑和水合劑，滲透劑，防腐劑，乳化劑，天然或合成油，溶劑，表面活性劑，去污劑，膠凝劑，軟化劑(emollient),抗氧化劑，芳香劑，填充劑，增稠劑，蠟，氣味吸收劑，著色劑，染色劑，粉劑，粘度調(diào)節(jié)劑和水，以及任選地包括麻醉劑，止癢活性劑，植物提取物，調(diào)理劑(conditioning agent),增深劑或增白劑(darkening or lightening agent),閃光劑,保濕劑,云母,礦物質(zhì),多酹,有機(jī)娃或其衍生物，防曬劑，維生素和phytomedicinals。在某些實(shí)施方案中,本發(fā)明的組合物和上述成分一起進(jìn)行配制以使得其長(zhǎng)期穩(wěn)定，這當(dāng)期望持續(xù)或長(zhǎng)期治療時(shí)可能是有益的。本發(fā)明的組合物可以是控釋或緩釋組合物的形式，其中抗微生物肽與另外的活性劑一起封裝或包含在材料內(nèi)，以使它們以受控制的方式隨時(shí)間釋放至皮膚或受侵襲的區(qū)域上。本發(fā)明的組合物可以包含在基質(zhì)，脂質(zhì)體，囊泡，微膠囊，微球等之內(nèi)或之上，或在固體顆粒材料之內(nèi)或之上。本發(fā)明的組合物可以施用到任何受侵襲的或易感的區(qū)域，例如，施用到腿、肩、背(包括腰部)、腋、手掌、足、頸、腹股溝、背部或手或足、肘、上臂、膝、大腿、臀部、軀干、骨盆、或身體的任何其他部分(可能期望對(duì)其進(jìn)行感染的治療或預(yù)防)。此類治療還預(yù)期用于治療和/或包扎傷口(例如皮膚的割傷、擦傷、和燒傷)，以治療或預(yù)防受傷區(qū)域的感染。本發(fā)明的組合物適合于在具有約4. 5至約6. 3的pH的生理環(huán)境中使用，并且因此，所述組合物可以在相似或相同的PH下配制。根據(jù)本發(fā)明的組合物可以貯存在室溫下或
冷凍條件下。本發(fā)明的組合物包含抗微生物作用有效量的抗微生物肽。通常，組合物包含約O. 01% (wt. /vol.)至約20%的抗微生物肽。在某些實(shí)施方案中，組合物包含約O. 5%至約10%的抗微生物肽，例如約O. 5%，約1%，約5%，或約10%的抗微生物肽。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物是清潔劑或增濕劑。特別地，當(dāng)治療和/或預(yù)防微生物感染(例如痤瘡，包括丙酸桿菌(propionicbacterium)痤瘡)時(shí),本發(fā)明的清潔劑和增濕劑可用于調(diào)理皮膚。本發(fā)明的這一方面還在有效消退痤瘡后有效預(yù)防痤瘡的復(fù)發(fā)。在這一方面，清潔劑或增濕劑可以常規(guī)地(例如大約每天)施用于受侵襲的區(qū)域，并且在持續(xù)或常規(guī)的基礎(chǔ)上。例如，治療可以持續(xù)數(shù)天，數(shù)周，數(shù)月或甚至數(shù)年。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物是有效抗足癬(Athlete’s feet)(腳癬)和/或甲真菌病的局部用溶液。在這一方面，組合物可以是用于浸泡或涂抹受侵襲的區(qū)域的水溶液。在這一實(shí)施方案中，通過持續(xù)的每天治療，本發(fā)明還有效預(yù)防病狀的復(fù)發(fā)。此外，當(dāng)用于治療甲真菌病時(shí),本發(fā)明的組合物可以與全身性治療例如Lamisi I —起使用，以提供更有效的作用并且改善指甲的病狀和/或外觀。在其他的實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物配制為漱口劑，口腔噴霧劑或口服凝膠。在這一方面，本發(fā)明的漱口劑或口腔噴霧劑有效預(yù)防齲齒、治療和/或預(yù)防牙周病、治療咽喉痛、或治療或預(yù)防可能由微生物的存在或作用引起的口臭。當(dāng)配制為口服凝膠時(shí)，本發(fā)明的組合物有效治療和預(yù)防口腔周圍的潰瘍(例如冷瘡和口潰瘍)。當(dāng)配制為漱口劑，口腔噴霧齊U，或口服凝膠時(shí)，組合物通常包含約O. 01%至約10%的抗微生物肽，例如約1%，約2%，約3%,或約5%的抗微生物肽。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明配制為乳膏或洗液。特別地，此類制劑適用于治療和/或預(yù)防單純皰疹病毒感染或發(fā)作。因此，在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明適用于治療生殖器皰疹，冷瘡，或水痘。本發(fā)明的組合物還可以配制為有效抗鼻炎的噴鼻劑，或配制為有效抗紅眼的滴眼劑。在另一方面，本發(fā)明提供用于治療或預(yù)防與微生物感染有關(guān)的病狀的方法。本發(fā)明的方法包括將包含抗微生物肽的本發(fā)明的藥物或美容組合物施用給患有或懷疑患有微生物感染的患者。在某些實(shí)施方案中，在用本發(fā)明的組合物或替代療法治療感染后，將組合物施用給患者，以預(yù)防進(jìn)一步復(fù)發(fā)。患者可以是任何獸醫(yī)的患者或人類患者。本發(fā)明的組合物可通過各種途徑(例如靜脈或皮下)用于局部和全身性細(xì)菌、真菌和病毒感染的治療和/或預(yù)防，所述細(xì)菌、真菌和病毒經(jīng)由局部途徑或全身性感染，感染皮膚、毛發(fā)、指甲、陰道、尿道、耳、□腔、呼吸系統(tǒng)、眼部、鼻和各種粘膜區(qū)域。此類疾病可以是例如痤瘡(包括丙酸桿菌痤瘡)，甲真菌病，足蘚，生殖器皰疹，齲齒，牙周疾病，鼻炎和紅眼。在示例性實(shí)施方案中，感染是金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸桿菌、白色念珠菌、黑曲霉和/或單純皰疹病毒的感染。為了治療或預(yù)防微生物感染或預(yù)防微生物感染的復(fù)發(fā)，可以每天至少一次施用抗微生物肽，持續(xù)至少約一周?？蛇x地，每天至少兩次施用組合物，持續(xù)至少兩天。在某些實(shí)施方案中，大約每天一次，至少每天一次，每周兩次，每周一次或持續(xù)約一個(gè)月施用所述組合物。在某些實(shí)施方案中，施用本發(fā)明的組合物數(shù)月，例如至少兩個(gè)月，六個(gè)月或約I年或更長(zhǎng)的時(shí)間。本發(fā)明進(jìn)一步適合于長(zhǎng)期使用，特別地，其可以有益于預(yù)防復(fù)發(fā)感染或有益于預(yù)防處于風(fēng)險(xiǎn)中的或易感的患者(包括免疫低下的患者)的感染或病狀。所述長(zhǎng)期使用可以包括至少兩年，三年，四年或甚至五年或更多年的治療。 在另一方面，本發(fā)明的組合物是試劑盒，其包含本發(fā)明的肽或組合物，所述肽或組合物經(jīng)包裝以便于將所述組合物分配和/或施用到受侵襲或易感的區(qū)域。包裝或分配器可以包括瓶，管，噴霧瓶或其他分配器。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，組合物以濃縮的形式進(jìn)行包裝，并且在由最終的使用者使用時(shí)稀釋到想要的濃度。在這一或其他方面，組合物以適合于長(zhǎng)期貯存的形式配制和包裝，以維持組合物的功效。試劑盒可以進(jìn)一步包括另外的組分(例如刷子，海綿，棉簽等)以便于將組合物施用至受侵襲的區(qū)域。
實(shí)施例實(shí)施例I.肽對(duì)特征在于微牛物感染的病狀的作用下列實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)用于測(cè)試稀釋制劑的作用；然而，令人驚奇地發(fā)現(xiàn)陽(yáng)離子肽本身是有效的抗微生物劑。發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的肽不僅對(duì)于長(zhǎng)期使用是安全的，還有效治療和預(yù)防多種與微生物感染有關(guān)的病狀(包括預(yù)防其復(fù)發(fā))。根據(jù)這些結(jié)果，在實(shí)施例2中測(cè)試所述肽對(duì)微生物生長(zhǎng)的作用。實(shí)施例I. I有兩年痤瘡病史的15歲男性每天兩次局部使用5%的肽(SEQ ID N0:5)制劑，持續(xù)4周。乳膏制劑由賦形劑十六烷醇，肉豆蘧酸異丙酯，十八烷醇，丁羥甲苯(butylatedhydrosyxtoluene),聚氧乙烯十八燒基醚,聚氧乙烯十八燒基醚,依地酸二鈉和經(jīng)純化的水組成。隨著局部制劑的使用，兩周內(nèi)痤瘡消失。持續(xù)使用所述制劑兩年，沒有觀察到新的發(fā)作或不良事件。實(shí)施例I. 2患有腳癬(足癬)(表現(xiàn)為腳趾之間的刺激、發(fā)癢的皮疹和滲出)的36歲女性在睡前在5%的肽(SEQ ID N0:5)制劑中泡腳10分鐘且在受感染區(qū)域及腳部其余區(qū)域每天兩次局部施用1%的肽制劑。乳膏制劑由賦形劑十六烷醇，肉豆蘧酸異丙酯，十八烷醇，丁羥甲苯，聚氧乙烯十八烷基醚，聚氧乙烯十八烷基醚，依地酸二鈉和經(jīng)純化的水組成。在第I周，瘙癢減少并且停止?jié)B出。至第4周，皮膚的痂塊脫落并且在腳部沒有異常皮膚的跡象。她持續(xù)使用O. 05%的肽制劑5年，沒有進(jìn)一步的發(fā)作或不良事件。實(shí)施例L 3在真菌侵襲的實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)(基于顯微鏡檢查和指甲的削刮碎屑或剪取物的培養(yǎng))后，78歲男性被確診患有甲真菌病。他開始用5%的肽(SEQ ID NO: 5)制劑涂抹指甲和周圍的甲床，每天兩次。乳膏制劑由賦形劑十六烷醇，肉豆蘧酸異丙酯，十八烷醇，丁羥甲苯，聚氧乙烯十八烷基醚，聚氧乙烯十八烷基醚，依地酸二鈉和經(jīng)純化的水組成。12周后，所有長(zhǎng)出的指甲具有正常的結(jié)構(gòu)(texture)和顏色。他持續(xù)使用肽制劑兩年，而他的指甲全部無(wú)真菌感染。實(shí)施例L 4在真菌侵襲的實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)(基于顯微鏡檢查和指甲的削刮碎屑或剪取物的培養(yǎng))后，65歲男性被確診患有甲真菌病。他開始口服治療I個(gè)月。然后，他開始每天一次用10%的肽(SEQ ID NO:5)制劑涂抹指甲和周圍的甲床。乳膏制劑由賦形劑十六烷醇，肉豆蘧酸異丙酯，十八烷醇，丁羥甲苯，聚氧乙烯十八烷基醚，聚氧乙烯十八烷基醚，依地酸二鈉和經(jīng)純化的水組成。12周后，所有長(zhǎng)出的指甲具有正常的結(jié)構(gòu)和顏色。他持續(xù)使用肽制劑兩年，而他的指甲全部無(wú)真菌感染并且趾甲中沒有另外的真菌感染的復(fù)發(fā)。實(shí)施例L 5有兩年齲齒病史的10歲男孩使用肽(SEQ ID N0:5)漱口劑兩周。所述制劑由生理鹽水和1-5%的肽組成。他的癥狀得到顯著減輕。他持續(xù)使用肽漱口劑兩年，沒有觀察到新的齲洞。實(shí)施例I. 6口中爆發(fā)冷瘡的36歲女性每天三次施用1%的肽(SEQ ID NO: 5)制劑。水凝膠制劑包含30%的泊洛沙姆。所有的冷瘡在兩天內(nèi)消失。實(shí)施例I. 7
患有生殖器皰疹的24歲女性每天兩次向受侵襲的區(qū)域施用1%的肽(SEQ IDN0:5)，持續(xù)一周。乳膏制劑由賦形劑十六烷醇，肉豆蘧酸異丙酯，十八烷醇，丁羥甲苯，聚氧乙烯十八烷基醚，聚氧乙烯十八烷基醚，依地酸二鈉和經(jīng)純化的水組成。在治療期結(jié)束時(shí)，所有的癥狀都消失了。實(shí)施例I. 8有三年鼻炎病史的18歲女性每天三次使用包含本發(fā)明的肽(SEQ ID NO:5)的噴鼻劑，持續(xù)一周。該制劑由生理鹽水和1-5%的肽組成。她立即感覺到癥狀(例如瘙癢、噴嚏和鼻充血)減輕。實(shí)施例I. 9患有紅眼的8歲男孩施用由生理鹽水和1-5%的肽組成的肽(SEQ ID NO: 5)制劑，并且兩天后，癥狀消失。實(shí)施例2.體外抗微牛物活件在一組革蘭氏陰性和革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌及真菌中使用本發(fā)明的示例性肽，以測(cè)試抗微生物活性。所述示例性肽的序列為 Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Gly-(Lys) ι5-GI y-Ar g-Lys-Lys -Ar g-Ar g-G I n -Ar g-Ar g-Ar g (SEQ ID NO: 5)并且其已配制于 15% 的泊洛沙姆O. 9%的鹽水中。肽濃度分別為3. 3mg/ml, 11 μ g/ml，和llng/ml?？刮⑸锘钚栽诒?br> 1-3中顯示。肽以劑量依賴性方式表現(xiàn)出強(qiáng)抗微生物活性。值得注意的是，銅綠假單胞菌(一種因其對(duì)抗生素的抗性而著稱的革蘭氏陰性細(xì)菌)可以用O. 33%的本發(fā)明的肽抑制(表I)。表I. 3. 3mg/ml (O. 33%的肽)下的抗微生物活性
權(quán)利要求
1.包含陽(yáng)離子肽的組合物，其中所述陽(yáng)離子肽包含選自SEQID N0:3和SEQ ID NO:4的氨基酸序列。
2.權(quán)利要求I的組合物，其中所述陽(yáng)離子肽包含根據(jù)SEQID N0:3的氨基酸序列。
3.權(quán)利要求I的組合物，其中所述陽(yáng)離子肽包含根據(jù)SEQID N0:4的氨基酸序列。
4.權(quán)利要求2的組合物，其中所述組合物是局部用組合物。
5.權(quán)利要求3的組合物，其中所述組合物是局部用組合物。
6.權(quán)利要求4或5的組合物，其中所述組合物選自固體組合物、液體組合物、溶液、乳劑、微乳劑、懸浮液、乳膏、洗液、凝膠和粉劑。
7.權(quán)利要求6的組合物，其中所述組合物是溶液。
8.權(quán)利要求6的組合物，其中所述組合物是乳膏。
9.權(quán)利要求6的組合物，其中所述組合物是洗液。
10.權(quán)利要求6的組合物，其中所述組合物是凝膠。
11.權(quán)利要求6的組合物，其中所述組合物是噴鼻劑。
12.權(quán)利要求2的組合物，其中所述組合物包含約O.01%至約20%的陽(yáng)離子肽。
13.權(quán)利要求3的組合物，其中所述組合物包含約O.01%至約20%的陽(yáng)離子肽。
14.權(quán)利要求4的組合物，其中所述組合物包含約O.01%至約20%的陽(yáng)離子肽。
15.權(quán)利要求5的組合物，其中所述組合物包含約O.01%至約20%的陽(yáng)離子肽。
16.用于施用組合物的試劑盒，所述試劑盒包括權(quán)利要求2的組合物以及分配器。
17.用于施用組合物的試劑盒，所述試劑盒包括權(quán)利要求3的組合物以及分配器。
18.用于施用組合物的試劑盒，所述試劑盒包括權(quán)利要求4的組合物以及分配器。
19.用于施用組合物的試劑盒，所述試劑盒包括權(quán)利要求5的組合物以及分配器。
20.權(quán)利要求16-19任一項(xiàng)的試劑盒，其還包含便于組合物施用的組分。
21.包含陽(yáng)離子肽的組合物，其中所述陽(yáng)離子肽是SEQID NO:3或SEQ ID NO:4。
22.權(quán)利要求21的組合物，其中所述組合物是局部用組合物。
23.用于施用組合物的試劑盒，所述試劑盒包括權(quán)利要求21的組合物以及分配器。
24.用于施用組合物的試劑盒，所述試劑盒包括權(quán)利要求22的組合物以及分配器。
25.權(quán)利要求22的組合物，其中所述組合物選自固體組合物、液體組合物、溶液、乳劑、微乳劑、懸浮液、乳膏、洗液、凝膠和粉劑。
26.權(quán)利要求25的組合物，其中所述組合物是溶液。
27.權(quán)利要求25的組合物，其中所述組合物是乳膏。
28.權(quán)利要求25的組合物，其中所述組合物是洗液。
29.權(quán)利要求25的組合物，其中所述組合物是凝膠。
30.權(quán)利要求25的組合物，其中所述組合物是噴鼻劑。
31.權(quán)利要求21的組合物，其中所述組合物包含約O.01%至約20%的陽(yáng)離子肽。
32.權(quán)利要求22的組合物，其中所述組合物包含約O.01%至約20%的陽(yáng)離子肽。
33.權(quán)利要求23的試劑盒，其還包含便于所述組合物的局部施用的施用器。
34.權(quán)利要求24的試劑盒，其還包含便于所述組合物的局部施用的施用器。
全文摘要
本發(fā)明提供顯示出抗革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性細(xì)菌以及真菌，霉菌，和病毒的廣泛抗微生物活性的抗微生物肽。本發(fā)明的抗微生物肽為陽(yáng)離子肽，并且可以包含HIV-TAT或反向HIV-TAT序列，或其衍生物。本發(fā)明進(jìn)一步提供包含陽(yáng)離子肽的抗微生物組合物。特別地，所述組合物可用于局部施用至皮膚、毛發(fā)、指甲、陰道、尿道、耳、口腔、鼻道、呼吸系統(tǒng)、眼部和各種粘膜部位。本發(fā)明的組合物改善治療部位的病狀和/或外觀，并且適合于長(zhǎng)期和/或常規(guī)施用，以例如預(yù)防微生物感染或預(yù)防微生物感染復(fù)發(fā)。本發(fā)明進(jìn)一步提供用于改善皮膚、指甲或治療區(qū)域的病狀或外觀的試劑盒。這些試劑盒可以有助于所述組合物的使用，長(zhǎng)期貯存和/或功效。
文檔編號(hào)A61P31/00GK102872447SQ20121037575
公開日2013年1月16日 申請(qǐng)日期2008年7月28日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月26日
發(fā)明者H·F·斯通, J·M·沃 申請(qǐng)人:雷文斯治療公司