專利名稱：還原響應(yīng)的納米藥物載體、納米藥物顆粒與納米藥物顆粒制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種還原響應(yīng)的納米藥物載體、納米藥物顆粒與納米藥物顆粒制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
納米藥物載體通常是指可以負載一種或多種藥物的具有納米級尺寸的體系。由于其具有量子尺寸效應(yīng)、兼有比表面積大、易于表面修飾等優(yōu)點，因此在藥物傳輸、控釋方面具有諸多優(yōu)越性。通常納米藥物載體有脂質(zhì)體、聚合物膠束、樹枝狀聚合物、碳納米管、量子點等多種形式。其中聚合物膠束由于其制備簡單、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、所用材料易于降解等而受到人們廣泛的關(guān)注。納米藥物載體除了對藥物具有良好包載性能的同時，還需要在靶點實現(xiàn)對藥物的良好控制釋放。傳統(tǒng)的釋放一般是通過被動擴散來實現(xiàn)的，但是，為了提高藥物的治療效果，有時需要藥物到達靶點后迅速釋放，從而提高藥物在靶點部位的局部濃度。因而，刺激響應(yīng)釋放體系受到廣泛的關(guān)注，其中包括還原響應(yīng)、pH響應(yīng)、酶響應(yīng)和溫度響應(yīng)等。

發(fā)明內(nèi)容
基于此，有必要提供一種能夠使藥物在靶點迅速釋放的還原響應(yīng)的納米藥物載體。進一步，提供一種使用該還原響應(yīng)的納米藥物載體的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒。還提供一種還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑及其制備方法?！N還原響應(yīng)的納米藥物載體，為聚乙二醇與改性葡聚糖連接形成的兩嵌段聚合物，所述改性葡聚糖由葡聚糖通過二硫鍵與氨基連接形成。在其中一個實施例中，所述聚乙二醇與所述改性葡聚糖的質(zhì)量比為1:廣4。在其中一個實施例中，所述聚乙二醇的分子量為200(T5000，所述改性葡聚糖的分子量為6000。一種還原響應(yīng)的納米藥物顆粒,包括帶負電藥物及如權(quán)利要求1 3任一項所述的還原響應(yīng)的納米藥物載體，其中，所述改性葡聚糖與所述帶負電藥物形成內(nèi)核，所述聚乙二醇位于所述內(nèi)核的表面。在其中一個實施例中，所述帶負電藥物選自吲哚菁綠及改性順鉬中的至少一種。在其中一個實施例中，所述還原響應(yīng)的納米藥物顆粒的粒徑為100納米 200納米。在其中一個實 施例中，所述帶負電藥物與所述還原響應(yīng)的納米藥物載體的質(zhì)量比為 0.05 0.2:1。在其中一個實施例中，還包括與所述改性葡聚糖形成交聯(lián)網(wǎng)絡(luò)的戊二醛。一種還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑，包括超純水及分散于所述超純水中的如權(quán)利要求4所述的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒,所述還原響應(yīng)的納米藥物顆粒的濃度為0.5 4mg/
mLo一種還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑的制備方法，包括如下步驟:將端甲氧基聚乙二醇、三乙胺及對硝基苯基氯甲酸酯溶于四氫呋喃中，反應(yīng)12小時 24小時，沉淀、收集，真空干燥，得到活化聚乙二醇；將葡聚糖與氰基硼氫化鈉溶于二甲基亞砜中，反應(yīng)I天后加入乙二胺，反應(yīng)I天，沉淀、收集，真空干燥，得到端氨基葡聚糖；將所述活化聚乙二醇與所述端氨基葡聚糖溶于二甲基亞砜中，反應(yīng)I天，透析，凍干后得到聚乙二醇-葡聚糖嵌段聚合物；將所述聚乙二醇-葡聚糖嵌段聚合物、丁二酸酐與三乙胺溶于二甲基亞砜中，反應(yīng)12小時 24小時，透析，凍干后得到聚乙二醇-葡聚糖-羧基嵌段聚合物；將所述聚乙二醇-葡聚糖-羧基嵌段聚合物、N-羥基琥珀酰亞胺及1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽溶于二甲基亞砜中活化I小時，將活化后的聚乙二醇-葡聚糖-羧基嵌段聚合物、N-羥基琥珀酰亞胺及1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽及溶劑的混合物滴至胱胺二鹽酸鹽溶液中，反應(yīng)24小時，透析，凍干后得到還原響應(yīng)的納米藥物載體，所述還原響應(yīng)的納米藥物載體為聚乙二醇與改性葡聚糖連接形成的兩嵌段聚合物，所述改性葡聚糖由葡聚糖通過二硫鍵與氨基連接形成；將所述還原響應(yīng)的納米 藥物載體溶于水中，加入帶負電藥物，攪拌20分鐘后，用濾頭過濾，得到濃度為0.5 4mg/mL的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑。在其中一個實施例中，所述攪拌20分鐘后，用濾頭過濾之前還包括交聯(lián)的步驟，所述交聯(lián)的步驟具體為:所述攪拌20分鐘后，向攪拌后的還原響應(yīng)的納米藥物載體、水與帶負電藥物的混合物中加入戊二醛，攪拌3小時。上述還原響應(yīng)的納米藥物載體為聚乙二醇與改性葡聚糖連接形成的兩嵌段聚合物，改性葡聚糖由葡聚糖通過二硫鍵與氨基連接形成。這種還原響應(yīng)的納米藥物載體帶正電，帶負電藥物通過靜電作用絡(luò)合于該載體上，在還原環(huán)境下，帶正電的氨基與葡聚糖分離，從而使得帶負電藥物在靶點快速釋放，發(fā)揮藥效。


圖1為一實施方式的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒的結(jié)構(gòu)示意圖；圖2為另一實施方式的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒的結(jié)構(gòu)示意圖；圖3為圖2所示的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒在細胞內(nèi)釋放的狀態(tài)示意圖；圖4為一實施方式的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑的制備方法流程圖；圖5為圖4所示的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑的制備方法的步驟S160的示意圖；圖6為實施例1制備得到的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑中的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒的粒徑分布圖；圖7為實施例1制備得到的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑在還原環(huán)境和非還原環(huán)境下的熒光曲線及吲哚菁綠的熒光曲線；圖8為實施例1制備得到的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑分別在MCF-7細胞與非還原性的培養(yǎng)基中的熒光淬滅與恢復(fù)實驗圖。
具體實施例方式為使本發(fā)明的上述目的、特征和優(yōu)點能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實施方式
做詳細的說明。在下面的描述中闡述了很多具體細節(jié)以便于充分理解本發(fā)明。但是本發(fā)明能夠以很多不同于在此描述的其它方式來實施，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在不違背本發(fā)明內(nèi)涵的情況下做類似改進，因此本發(fā)明不受下面公開的具體實施的限制。一實施方式的還原響應(yīng)的納米藥物載體，為聚乙二醇(PEG)與改性葡聚糖連接形成的兩嵌段聚合物。聚乙二醇與改性葡聚糖通過酰胺鍵連接，改性葡聚糖由葡聚糖(dextran)通過二硫鍵與氨基連接形成。該還原響應(yīng)的納米藥物載體表示為PEG-dextran (-SS-NH2)。聚乙二醇與改性葡聚糖的質(zhì)量比為1:廣4。還原響應(yīng)是指在還原劑存在的環(huán)境下，還原響應(yīng)的納米藥物載體發(fā)生斷鍵而解離；在沒有還原劑存在的環(huán)境下，還原響應(yīng)的納米藥物載體保持穩(wěn)定，不發(fā)生變化。聚乙二醇是一種經(jīng)過美國食品和藥品管理局(FDA)批準、可用于臨床的高聚物。PEG具有生物安全性好、無毒，并且納米藥物載體用其改性后可提高穩(wěn)定性、降低非特異性吸附、延長納米藥物載體的血液循環(huán)時間的優(yōu)點。優(yōu)選地，聚乙二醇的分子量為200(T5000，為了便于合成的時候材料的分離純化。葡聚糖具有生物相容性好、安全可靠、來源廣泛、價格低廉、可生物降解、易于修飾等眾多優(yōu)點。優(yōu)選地,改性葡聚糖的分子量為6000。上述還原響應(yīng)的納 米藥物載體綜合了聚乙二醇和葡聚糖優(yōu)點，具有低毒、生物安全性好、生物可降解的特性，使用安全。改性葡聚糖的氨基帶正電，聚乙二醇與改性葡聚糖通過酰胺鍵連接形成帶正電的兩嵌段聚合物，使得該還原響應(yīng)的納米藥物載體能夠與帶負電藥物通過靜電作用絡(luò)合，形成分散均勻、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的納米藥物顆粒。在還原環(huán)境下，改性葡聚糖的帶正電的氨基與葡聚糖迅速分離，使得絡(luò)合的藥物迅速釋放于靶向部位，提高藥物在靶向部位的局部濃度，有利于發(fā)揮藥效?！獙嵤┓绞降倪€原響應(yīng)的納米藥物顆粒,包括帶負電藥物及上述還原響應(yīng)的納米藥物載體。請參閱圖1，標號10表示改性葡聚糖，標號20表示交聯(lián)的帶負電藥物，標號30表示聚乙二醇。改性葡聚糖與帶負電藥物形成內(nèi)核，聚乙二醇位于在內(nèi)核的表面。PEG作為外殼，具有穩(wěn)定該納米顆粒，降低非特異吸附的作用；帶正電的改性葡聚糖段與帶負電的藥物形成穩(wěn)定的核層。優(yōu)選地，帶負電藥物與還原響應(yīng)的納米藥物載體的質(zhì)量比為0.05^0.2:1。帶負電的藥物選自口引哚菁綠及改性順鉬中的至少一種。上述還原響應(yīng)的納米藥物載體可以通過靜電作用絡(luò)合吲哚菁綠或改性順鉬，或同時絡(luò)合吲哚菁綠和改性順鉬，發(fā)揮雙重療效。優(yōu)選地,還原響應(yīng)的納米藥物顆粒的粒徑為100納米 200納米。優(yōu)選地，上述還原響應(yīng)的納米藥物顆粒還包括與改性葡聚糖形成交聯(lián)網(wǎng)絡(luò)的戊二醛。戊二醛與改性葡聚糖的氨基反應(yīng)而形成交聯(lián)網(wǎng)絡(luò)，帶負電藥物通過靜電作用絡(luò)合于改性葡聚糖上并嵌入該交聯(lián)網(wǎng)絡(luò)中，如圖2所示。這種還原響應(yīng)的納米藥物顆粒的穩(wěn)定性較聞。請參閱圖3，在還原劑谷胱甘肽(GSH)存在的環(huán)境下，該還原響應(yīng)的納米藥物顆粒的改性葡聚糖上帶正電的氨基與葡聚糖分離，使還原響應(yīng)的納米藥物顆粒解離，從而將藥物釋放。在沒有還原劑谷胱甘肽(GSH)的環(huán)境下，該還原響應(yīng)的納米藥物顆粒的結(jié)構(gòu)保持完整，藥物活性得到最大程度的保持。血液循環(huán)系統(tǒng)中還原劑含量非常少，上述還原響應(yīng)的納米藥物顆?？蓪崿F(xiàn)在血液循環(huán)中藥物基本無釋放，到達腫瘤部位后通過快速內(nèi)吞、溶酶體逃逸到達細胞質(zhì)，然后通過還原響應(yīng)刺激使還原響應(yīng)的納米藥物顆粒解離而快速釋放藥物，能夠使藥物在靶點部位迅速釋放，發(fā)揮藥效。一種還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑，包括超純水及分散于超純水中的上述還原響應(yīng)的納米藥物顆粒，還原響應(yīng)的納米藥物顆粒的濃度為0.5 4mg/mL。經(jīng)測定,該還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑的Zeta電位大小為+30mV +50mV,說明該還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑性質(zhì)較為穩(wěn)定。使用該還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑進行治療，可實現(xiàn)在血液循環(huán)中藥物基本無釋放，到達腫瘤部位后通過還原響應(yīng)刺激快速釋放藥物，使藥物在靶點部位迅速釋放，療效好。請參閱圖4，一實施方式的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑的制備方法，包括如下步驟:步驟SllO:將端甲氧基聚乙二醇、三乙胺及對硝基苯基氯甲酸酯溶于四氫呋喃中，反應(yīng)12小時 24小時，沉淀、收集，真空干燥，得到活化聚乙二醇。端甲氧基聚乙二醇、三乙胺、對硝基苯基氯甲酸酯與四氫呋喃的固液比為
0.5g:500u L:0.5g:10mL。反應(yīng)12小時 24小時后，將得到沉淀進行干燥得到活化聚乙二醇，以使聚乙二醇能夠進行后續(xù)反應(yīng)。步驟S120:將葡聚糖與氰基硼氫化鈉溶于二甲基亞砜中，反應(yīng)I天后加入乙二胺，反應(yīng)I天，沉淀、收集，真空干燥，得到端氨基葡聚糖。葡聚糖、氰基硼氫化鈉、二甲基亞砜與乙二胺的固液比為0.5g:0.5g:15mL:lmL。步驟S130:將活化聚乙二醇與端氨基葡聚糖溶于二甲基亞砜中，反應(yīng)I天，透析，凍干后得到聚乙二醇-葡聚糖嵌段聚合物?；罨垡叶肌⒍税被暇厶桥c二甲基亞砜的固液比為0.5g:0.5g:10mL。反應(yīng)I天后，活化聚乙二醇與端氨基葡聚糖反應(yīng)，聚乙二醇與葡聚糖通過酰胺鍵連接，形成聚乙二醇-葡聚糖嵌段聚合物，表示為PEG-dextran。透析除去溶劑及多余的反應(yīng)物后，凍干得到純凈的、干燥的聚乙二醇-葡聚糖嵌段聚合物(PEG-dextran)。步驟S 140:將聚乙二醇-葡聚糖嵌段聚合物、 丁二酸酐及三乙胺溶于二甲基亞砜中，反應(yīng)12小時 24小時，透析，凍干后得到聚乙二醇-葡聚糖-羧基嵌段聚合物。
聚乙二醇-葡聚糖嵌段聚合物、丁二酸酐、三乙胺與二甲基亞砜的固液比為
0.2g:0.2g:100u L:5mL。反應(yīng)12小時 24小時，在聚乙二醇-葡聚糖嵌段聚合物的葡聚糖上引入羧基，用超純水透析、凍干后得到純凈的、干燥的聚乙二醇-葡聚糖-羧基嵌段聚合物，表示為PEG-dextran(-C00H)。步驟S150:將聚乙二醇-葡聚糖-羧基嵌段聚合物、N-羥基琥珀酰亞胺及1-(3-二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亞胺鹽酸鹽溶于二甲基亞楓中活化I小時，將活化后的聚乙二醇-葡聚糖-羧基嵌段聚合物、N-羥基琥珀酰亞胺及1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽及溶劑的混合物滴至胱胺二鹽酸鹽溶液中，反應(yīng)24小時，透析，凍干后得到還原響應(yīng)的納米藥物載體。聚乙二醇-葡聚糖-羧基嵌段聚合物(PEG-dextran (-C00H))、N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)與二甲基亞砜的固液比為
0.5g:0.85g:0.14g: 10OmT,n將聚乙二醇-葡聚糖-羧基嵌段聚合物、N-羥基琥珀酰亞胺及1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽溶于溶劑中活化I小時，以活化聚乙二醇-葡聚糖-羧基嵌段聚合物(PEG-dextran (-C00H))中的羧基，使PEG-dextran (-C00H)中羧基與胱胺二鹽酸鹽中的氨基及二甲基極楓反應(yīng)，生成還原響應(yīng)的納米藥物載體，該還原響應(yīng)的納米藥物載體為聚乙二醇與改性葡聚糖連接形成的兩嵌段聚合物，改性葡聚糖由葡聚糖通過二硫鍵與氨基連接形成，表示為PEG-dextran (-SS-NH2)。步驟S160:將還原響應(yīng)的納米藥物載體溶于水中，加入帶負電藥物，攪拌20分鐘后，用濾頭過濾，得 到濃度為lmg/mL的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑。帶負電藥物選自吲哚菁綠及改性順鉬中的至少一種。還原響應(yīng)的納米藥物載體、水與帶負電藥物的固液比為lmg:1ml:0.lmg。請同時參閱圖5，帶負電藥物通過靜電作用絡(luò)合于還原響應(yīng)的納米藥物載體的改性葡聚糖上，改性葡聚糖與帶負電藥物形成內(nèi)核，聚乙二醇位于內(nèi)核的表面，形成還原響應(yīng)的納米藥物顆粒。優(yōu)選地，將還原響應(yīng)的納米藥物載體、水及、帶負電藥物的混合物攪拌20分鐘后，用濾頭過濾之前還包括交聯(lián)的步驟。交聯(lián)的步驟具體為:向攪拌后的還原響應(yīng)的納米藥物載體、水與帶負電藥物的混合物中加入戊二醛，攪拌3小時，得到交聯(lián)的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒，如圖5所示。戊二醛與改性葡聚糖上的氨基反應(yīng)形成交聯(lián)的網(wǎng)絡(luò)，帶負電藥物分子吸附于改性葡聚糖上，并嵌入該交聯(lián)的網(wǎng)絡(luò)中，使得帶負電藥物較為穩(wěn)定的吸附于內(nèi)核上，制備得到穩(wěn)定性較高的交聯(lián)的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒。上述還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑的制備方法制備過程簡單，可直接在水中將還原響應(yīng)的納米藥物載體與帶負電藥物進行組裝得到還原響應(yīng)的納米藥物顆粒，組裝過程無需有機溶劑，且操作簡單。制備得到還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑的穩(wěn)定性較高。以下為具體實施例。實施例11、制備還原響應(yīng)的納米藥物載體:
(I)將0.5g端甲氧基聚乙二醇(分子量為2000)、500微升三乙胺與0.2g對硝基苯基氯甲酸酯溶于IOml四氫呋喃中，反應(yīng)12小時，沉淀、收集，真空干燥，得到活化聚乙二醇。
(2)將0.5g葡聚糖與0.5g氰基硼氫化鈉溶于15mL 二甲基亞砜中，反應(yīng)I天,加入Iml乙二胺，反應(yīng)I天，沉淀、收集，真空干燥，得到端氨基葡聚糖。(3)將0.5g端氨基葡聚糖與0.5g活化聚乙二醇溶于IOmL 二甲基亞砜中，反應(yīng)I天，透析，凍干得到聚乙二醇-葡聚糖嵌段聚合物，表示為PEG-dextran。(4)將 0.2g PEG-dextran、0.2g 丁二酸酐與 100 微升三乙胺溶于 5mL 二甲基亞砜中，反應(yīng)12小時，透析，凍干得到聚乙二醇-葡聚糖-羧基嵌段聚合物，表示為PEG-dextran(-C00H)。(5)將 0.5g PEG-dextran (-C00H)、0.85gN_羥基琥珀酰亞胺(NHS)、0.14gl_(3_ 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)溶于二甲基亞砜中活化I小時，將活化后的聚乙二醇-葡聚糖-羧基嵌段聚合物、N-羥基琥珀酰亞胺、1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽及溶劑的混合物滴至IOOmL胱胺二鹽酸鹽溶液中，反應(yīng)24h，透析，凍干得還原響應(yīng)的納米藥物載體，該還原響應(yīng)的納米藥物載體為聚乙二醇與改性葡聚糖連接組成的兩嵌段聚合物，改性葡聚糖由葡聚糖通過二硫鍵與氨基連接形成。該還原響應(yīng)的納米藥物載體表不為 PEG-dextran (-SS-NH2)。2、還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑的制備:稱取上述還原響應(yīng)的納米藥物載體(PEG-dextran (-SS-NH2)) IOmg溶于IOmL水中，加入Img的卩引哚菁綠,攪拌20min,加入0.25mg戍二醒,攪拌3h后用0.45 U m濾頭過濾，得到濃度為lmg/mL的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑。制備得到的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑中的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒的粒徑分布如圖6所示，該還原響應(yīng)的納米藥物顆粒的水合粒徑為120納米左右。經(jīng)測定,該還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑的Zeta電位為+40mV左右,表明該還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑較為穩(wěn)定。請參閱圖7，單純的吲哚菁綠帶有近紅外熒光，如曲線I所示。以二硫蘇糖醇(DTT)作為還原劑。在沒有還原劑存在的環(huán)境下，還原響應(yīng)的納米藥物顆粒中，吲哚菁綠被包在顆粒內(nèi)部時是熒光淬滅的,如曲線II所示。在IOmM的DDT環(huán)境下，還原響應(yīng)的納米藥物顆粒解離，使吲哚菁綠釋放后會熒光恢復(fù)，如曲線III所示。請參閱圖8，在非還原性的培養(yǎng)基中，上述還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑沒有熒光恢復(fù)的過程；而在MCF-7細胞環(huán)境中，可以看到很明顯的淬滅恢復(fù)過程，表征吲哚菁綠的快速釋放。實施例21、制備還原響應(yīng)的納米藥物載體:(I)將1.0g端甲氧基聚乙二醇(分子量為5000)、1000微升三乙胺與0.4g對硝基苯基氯甲酸酯溶于20ml四氫呋喃中，反應(yīng)24小時，沉淀、收集，真空干燥，得到活化聚乙二醇。(2)將1.0g葡聚糖與1.0g氰基硼氫化鈉溶于30mL 二甲基亞砜中，反應(yīng)I天，加入2ml乙二胺，反應(yīng)I天，沉淀、收集，真空干燥，得到端氨基葡聚糖。(3)將1.0g端氨基葡聚糖與1.0g活化聚乙二醇溶于20mL 二甲基亞砜中，反應(yīng)I天，透析，凍干得到聚乙二醇-葡聚糖嵌段聚合物，表示為PEG-dextran。(4)將 0.4g PEG-dextran、0.4g 丁二酸酐與 200 微升三乙胺溶于 2.5mL 二甲基亞砜中，反應(yīng)XX小時，透析，凍干得到聚乙二醇-葡聚糖-羧基嵌段聚合物，表示為PEG-dextran(-C00H)。(5)將 1.0g PEG-dextran (-C00H)、1.7gN_ 羥基琥珀酰亞胺(NHS)、0.28gl_ (3- 二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)溶于二甲基亞砜中活化I小時，將活化后的聚乙二醇-葡聚糖-羧基嵌段聚合物、N-羥基琥珀酰亞胺、1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽及溶劑的混合物滴至200mL胱胺二鹽酸鹽溶液中，反應(yīng)24h，透析，凍干得還原響應(yīng)的納米藥物載體，該還原響應(yīng)的納米藥物載體為聚乙二醇與改性葡聚糖連接組成的兩嵌段聚合物，改性葡聚糖由葡聚糖通過二硫鍵與氨基連接形成。該還原響應(yīng)的納米藥物載體表不為 PEG-dextran (-SS-NH2)。2、還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑的制備:稱取上述還原響應(yīng)的納米藥物載體(PEG-dextran (-SS-NH2)) Img溶于2mL水中，加入0.05mg的改性順鉬，攪拌20min,加入0.025mg戍二醒，攪拌3h后用0.45 u m濾頭過濾，得到濃度為0.5mg/mL的還原響應(yīng) 的納米藥物顆粒制劑。實施例31、制備還原響應(yīng)的納米藥物載體:(I)將1.0g端甲氧基聚乙二醇(分子量為5000)、1000微升三乙胺與0.4g對硝基苯基氯甲酸酯溶于20ml四氫呋喃中，反應(yīng)24小時，沉淀、收集，真空干燥，得到活化聚乙二醇。(2)將3.0g葡聚糖與3.0g氰基硼氫化鈉溶于90mL 二甲基亞砜中，反應(yīng)I天，加入6ml乙二胺，反應(yīng)I天，沉淀、收集，真空干燥，得到端氨基葡聚糖。(3)將3.0g端氨基葡聚糖與1.0g活化聚乙二醇溶于20mL 二甲基亞砜中，反應(yīng)I天，透析，凍干得到聚乙二醇-葡聚糖嵌段聚合物，表示為PEG-dextran。(4)將 0.4g PEG-dextran、0.4g 丁二酸酐與 200 微升三乙胺溶于 2.5mL 二甲基亞砜中，反應(yīng)12小時，透析，凍干得到聚乙二醇-葡聚糖-羧基嵌段聚合物，表示為PEG-dextran(-C00H)。(5)將 1.0g PEG-dextran (-C00H)、1.7gN_ 羥基琥珀酰亞胺(NHS)、0.28gl_(3_ 二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)溶于二甲基亞砜中活化I小時，將活化后的聚乙二醇-葡聚糖-羧基嵌段聚合物、N-羥基琥珀酰亞胺、1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽及溶劑的混合物滴至200mL胱胺二鹽酸鹽溶液中，反應(yīng)24h，透析，凍干得還原響應(yīng)的納米藥物載體，該還原響應(yīng)的納米藥物載體為聚乙二醇與改性葡聚糖連接組成的兩嵌段聚合物，改性葡聚糖由葡聚糖通過二硫鍵與氨基連接形成。該還原響應(yīng)的納米藥物載體表不為 PEG-dextran (-SS-NH2)。2、還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑的制備:稱取上述還原響應(yīng)的納米藥物載體(PEG-dextran (-SS-NH2)) Img溶于2mL水中，加入0.2mg的改性順鉬，攪拌20min,加入0.025mg戍二醒,攪拌3h后用0.45 u m濾頭過濾，得到濃度為0.5mg/mL的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑。以上所述實施例僅表達了本發(fā)明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細，但并不能因此而理解為對本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當指出的是，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本 發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。因此，本發(fā)明專利的保護范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準。
權(quán)利要求
1.一種還原響應(yīng)的納米藥物載體，其特征在于，為聚乙二醇與改性葡聚糖連接形成的兩嵌段聚合物，所述改性葡聚糖由葡聚糖通過二硫鍵與氨基連接形成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的還原響應(yīng)的納米藥物載體，其特征在于，所述聚乙二醇與所述改性葡聚糖的質(zhì)量比為1:廣4。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的還原響應(yīng)的納米藥物載體，其特征在于，所述聚乙二醇的分子量為2000 5000，所述改性葡聚糖的分子量為6000。
4.一種還原響應(yīng)的納米藥物顆粒,其特征在于,包括帶負電藥物及如權(quán)利要求1 3任一項所述的還原響應(yīng)的納米藥物載體，其中，所述改性葡聚糖與所述帶負電藥物形成內(nèi)核，所述聚乙二醇位于所述內(nèi)核的表面。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒,其特征在于,所述帶負電藥物選自吲哚菁綠及改性順鉬中的至少一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒，其特征在于，所述還原響應(yīng)的納米藥物顆粒的粒徑為100納米 200納米。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒,其特征在于,所述帶負電藥物與所述還原響應(yīng)的納米藥物載體的質(zhì)量比為0.05、.2:1。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒，其特征在于，還包括與所述改性葡聚糖形成交聯(lián)網(wǎng)絡(luò)的戊二醛。
9.一種還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑，其特征在于，包括超純水及分散于所述超純水中的如權(quán)利要求4所述的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒，所述還原響應(yīng)的納米藥物顆粒的濃度為 0.5 4mg/mL。
10.一種還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟: 將端甲氧基聚乙二醇、三乙胺及對硝基苯基氯甲酸酯溶于四氫呋喃中，反應(yīng)12小時 24小時，沉淀、收集，真空干燥，得到活化聚乙二醇； 將葡聚糖與氰基硼氫化鈉溶于二甲基亞砜中，反應(yīng)I天后加入乙二胺，反應(yīng)I天，沉淀、收集，真空干燥，得到端氨基葡聚糖； 將所述活化聚乙二醇與所述端氨基葡聚糖溶于二甲基亞砜中，反應(yīng)I天，透析，凍干后得到聚乙二醇-葡聚糖嵌段聚合物； 將所述聚乙二醇-葡聚糖嵌段聚合物、丁二酸酐與三乙胺溶于二甲基亞砜中，反應(yīng)12小時 24小時，透析，凍干后得到聚乙二醇-葡聚糖-羧基嵌段聚合物； 將所述聚乙二醇-葡聚糖-羧基嵌段聚合物、N-羥基琥珀酰亞胺及1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽溶于二甲基亞砜中活化I小時，將活化后的聚乙二醇-葡聚糖-羧基嵌段聚合物、N-羥基琥珀酰亞胺及1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽及溶劑的混合物滴至胱胺二鹽酸鹽溶液中，反應(yīng)24小時，透析，凍干后得到還原響應(yīng)的納米藥物載體，所述還原響應(yīng)的納米藥物載體為聚乙二醇與改性葡聚糖連接形成的兩嵌段聚合物，所述改性葡聚糖由葡聚糖通過二硫鍵與氨基連接形成； 將所述還原響應(yīng)的納米 藥物載體溶于水中，加入帶負電藥物，攪拌20分鐘后，用濾頭過濾，得到濃度為0.5 4mg/mL的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的還原響應(yīng)的納米藥物顆粒制劑的制備方法，其特征在于，所述攪拌20分鐘后，用濾頭過濾之前還包括交聯(lián)的步驟，所述交聯(lián)的步驟具體為:所述攪拌20分鐘后，向攪拌后的還原響應(yīng)的納米藥物載體、水與帶負電藥物的混合物中加入戊二醛，攪拌3小 時 。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種還原響應(yīng)的納米藥物載體、納米藥物顆粒與納米藥物顆粒制劑及其制備方法。該還原響應(yīng)的納米藥物載體為聚乙二醇與改性葡聚糖連接形成的兩嵌段聚合物，所述改性葡聚糖由葡聚糖通過二硫鍵與氨基連接形成。這種還原響應(yīng)的納米藥物載體帶正電，帶負電藥物通過靜電作用絡(luò)合于該載體上，在還原環(huán)境下，帶正電的氨基與葡聚糖分離，從而使得帶負電藥物在靶點快速釋放，發(fā)揮藥效。
文檔編號A61K47/48GK103120797SQ20121056703
公開日2013年5月29日 申請日期2012年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月24日
發(fā)明者蔡林濤, 劉朋, 岳彩霞, 石碧華, 王碧, 易虎強, 劉斌, 魏偉 申請人:深圳先進技術(shù)研究院