一種銀杏藥用提取物高效生產(chǎn)方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種銀杏藥用提取物高效生產(chǎn)方法，包括酶解、提取、分離、干燥四個(gè)步驟，其中酶解步驟采用細(xì)胞壁溶解酶法，提取步驟采用柱層析循環(huán)提取法，分離步驟采用大孔樹脂吸附法，干燥步驟采用噴霧干燥法。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：對(duì)銀杏葉碾碎酶解，提高溶劑溶解率，提取率提高10%以上；提取過(guò)程中流出液循環(huán)再利用，節(jié)約溶劑用量；提取和分離步驟能通過(guò)多條層析柱組合成連續(xù)自動(dòng)的生產(chǎn)線，不間斷的獲取提取物，形成循環(huán)流水線式生產(chǎn)，特別適合大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)；采用噴霧干燥法，不需要再對(duì)提取物進(jìn)行粉碎，優(yōu)化工藝步驟；所有步驟在常溫下進(jìn)行，無(wú)需加熱，節(jié)約能源，節(jié)約生產(chǎn)成本40%以上。
【專利說(shuō)明】一種銀杏藥用提取物高效生產(chǎn)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物成分提取領(lǐng)域，具體涉及銀杏藥用成分銀杏內(nèi)酯、黃酮苷的生產(chǎn)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]銀杏內(nèi)酯化合物是僅發(fā)現(xiàn)在銀杏葉中一類具有特殊結(jié)構(gòu)及顯著藥理活性的重要成分，銀杏內(nèi)酯對(duì)血小板活化因子(PAF)受體有強(qiáng)大的特異性抑制作用，PAF是血小板和多種炎癥組織分泌產(chǎn)生的一種內(nèi)源性磷脂，是迄今發(fā)現(xiàn)的最有效的血小板聚集誘導(dǎo)劑，與許多疾病的產(chǎn)生、發(fā)展密切相關(guān)，銀杏內(nèi)酯目前被認(rèn)為是最有臨床應(yīng)用前景的天然PAF受體拮抗劑。
[0003]銀杏黃酮主要的活性成分主要是槲皮素、異鼠李素和山奈酚，這三種化合物是治療心腦血管系統(tǒng)疾病的有效成分,它能夠增加腦血管流量,改善腦血管循環(huán)功能,保護(hù)腦細(xì)胞，擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，防止心絞痛及心肌梗塞，阻止血栓形成，提高機(jī)體免疫能力，對(duì)冠心病、心絞痛、腦動(dòng)脈硬化、老年性癡呆、高血壓病人均十分有益。
[0004]隨著中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的日益完善以及對(duì)銀杏葉中藥用成分研究日益增多，對(duì)銀杏內(nèi)酯和黃酮類化合物的需求越來(lái)越大，研究高效節(jié)能銀杏內(nèi)酯和黃酮苷提取、生產(chǎn)方法具有重要的意義。
[0005]目前對(duì)于銀杏內(nèi)酯、黃酮苷提取和生產(chǎn)方法的技術(shù)很多，但普遍存在如下不足:需要加熱和離心處理，能耗高；提取溶劑只進(jìn)行一次提取，沒有綜合利用，造成資源浪費(fèi)；提取工藝過(guò)程復(fù)雜，提取效率低下，生產(chǎn)成本高，不適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
[0006]其中趙守明等在CN102293791B專利公開了一種提取銀杏葉有效成分的生產(chǎn)方法，提到了采用先酶解后乙醇回流提取的方法，能使黃酮含量大大提高，但需要加熱提取耗能高，乙醇沒有循環(huán)提取，溶劑消耗大。為了克服現(xiàn)有技術(shù)缺點(diǎn)，本發(fā)明提供了一種能有效獲得高質(zhì)量銀杏葉提取物，且溶劑用量少、能耗低、提取率高、經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)單的生產(chǎn)工藝方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的在于提供一種銀杏內(nèi)酯、黃酮苷等銀杏藥用提取物高效節(jié)能生產(chǎn)方法。
[0008]本發(fā)明提供的技術(shù)方案是:一種銀杏藥用提取物高效生產(chǎn)方法，其步驟是:
(1)將干燥的銀杏葉粉碎至50-80目；
(2)加入銀杏葉重量0.1-0.15%的纖維素酶和銀杏葉重量4-5倍的水在室溫下浸泡2-3小時(shí)，使銀杏葉細(xì)胞壁充分酶解；
(3)過(guò)濾除去酶解液，加入銀杏葉重量4-8倍的65%乙醇，室溫下浸泡6-12小時(shí)，使銀杏葉充分吸脹；
(4)將充分吸脹的銀杏葉轉(zhuǎn)入層析柱或類似容器中，柱高約柱直徑的6倍；室溫下，用柱層析洗脫的方法將銀杏內(nèi)酯、黃酮苷從銀杏葉中洗脫出來(lái)；(5)分別用銀杏葉重量5-8倍的65%乙醇進(jìn)行三次洗脫，洗脫流速為2-4BV/h;收集每次洗脫液，第一次得到洗脫液1，第二次得到洗脫液2，第三次得到洗脫液3 ;洗脫液2用于下一批次完成酶解步驟的銀杏葉吸脹，洗脫液3用于下一批次提取步驟銀杏葉的洗脫，反復(fù)上述循環(huán)；
(6)將上述步驟收集到的洗脫液I用大孔吸附樹脂分離；
(7)用水、不同濃度的乙醇洗脫，收集各階段洗脫液；
(8)將所收集的洗脫液進(jìn)行真空濃縮，噴霧干燥，制得銀杏內(nèi)酯、黃酮苷的粉狀固體；用液相色譜法跟蹤檢測(cè)銀杏內(nèi)酯、黃酮苷含量，得到提取物中銀杏內(nèi)酯含量>7%，黃酮苷含量^ 28%，滿足2010版藥典對(duì)銀杏提取物藥用成分的要求。
[0009]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比有如下優(yōu)點(diǎn):
(1)提取過(guò)程中流出液循環(huán)再利用，能節(jié)約溶劑用量近50%，提取率提高10%以上；
(2)提取和分離步驟能通過(guò)多條層析柱組合成連續(xù)自動(dòng)的生產(chǎn)線，不間斷的獲取提取物，形成循環(huán)流水線式生產(chǎn)，特別適合大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)，生產(chǎn)效率大大增加；
(3)上述所有步驟在室溫下進(jìn)行，無(wú)需加熱，節(jié)約能源，節(jié)約生產(chǎn)成本40%以上。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0010]圖1為本發(fā)明的工藝流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0011]如本發(fā)明的工藝流程圖所示，【具體實(shí)施方式】如下。
[0012]實(shí)施例1
(1)將干燥的銀杏葉100kg粉碎至50目放入提取罐，加入400 kg的水和0.1kg的纖維素酶，在室溫浸泡2小時(shí)，使銀杏葉細(xì)胞壁充分酶解；
(2)過(guò)濾除去酶解液，加入400kg65%乙醇在室溫下浸泡6小時(shí)，使銀杏葉充分吸脹；
(3)將充分吸脹的銀杏葉轉(zhuǎn)入層析柱中，柱高是柱直徑的6倍；室溫下用柱層析洗脫的方法將銀杏內(nèi)酯、黃酮苷從銀杏葉中洗脫出來(lái)；
(4)分別用500kg的65%乙醇進(jìn)行三次洗脫(相當(dāng)于銀杏葉干重15倍的65%乙醇進(jìn)行洗脫)，洗脫流速為2BV/h ;收集每次洗脫液，第一次得到銀杏內(nèi)酯、黃酮苷含量較高的洗脫液1，第二次得到銀杏內(nèi)酯、黃酮苷含量較低的洗脫液2，第三次得到銀杏內(nèi)酯、黃酮苷含量很低的洗脫液3 ;洗脫液2用于下一批次完成酶解步驟的銀杏葉吸脹，洗脫液3用于下一批次提取步驟銀杏葉的洗脫，通過(guò)多條層析柱組合成連續(xù)自動(dòng)的生產(chǎn)線，不間斷的獲取提取物，形成循環(huán)流水線式生產(chǎn)；
(5)分別用水、10%、30%、50%、70%乙醇洗脫相洗脫，棄去水和10%洗脫液，收集后續(xù)三階段洗脫液；
(6)將所收集的后續(xù)三階段洗脫液進(jìn)行真空濃縮，噴霧干燥，用液相色譜法跟蹤檢測(cè)，制得含7.33%銀杏內(nèi)酯、28.24%黃酮苷粉狀固體提取物3.01 kg。
[0013]實(shí)施例2
如實(shí)施例1所述的銀杏藥用提取物高效生產(chǎn)方法，其步驟如下:
(I)將干燥的銀杏葉100 kg粉碎至65目放入提取罐，加入500 kg的水和0.15kg的纖維素酶，在室溫浸泡3小時(shí)，使銀杏葉細(xì)胞壁充分酶解；
(2)過(guò)濾除去酶解液，加入600kg65%乙醇在室溫下浸泡8小時(shí)，使銀杏葉充分吸脹；
(3)將充分吸脹的銀杏葉轉(zhuǎn)入層析柱中，柱高是柱直徑的6倍；室溫下用柱層析洗脫的方法將銀杏內(nèi)酯、黃酮苷從銀杏葉中洗脫出來(lái)；
(4)分別用600kg的65%乙醇進(jìn)行三次洗脫(相當(dāng)于銀杏葉干重18倍的65%乙醇進(jìn)行洗脫)，洗脫流速為4BV/h ;收集每次洗脫液，第一次得到銀杏內(nèi)酯、黃酮苷含量較高的洗脫液1，第二次得到銀杏內(nèi)酯、黃酮苷含量較低的洗脫液2，第三次得到銀杏內(nèi)酯、黃酮苷含量很低的洗脫液3 ;洗脫液2用于下一批次完成酶解步驟的銀杏葉吸脹，洗脫液3用于下一批次提取步驟銀杏葉的洗脫，通過(guò)多條層析柱組合成連續(xù)自動(dòng)的生產(chǎn)線，不間斷的獲取提取物，形成循環(huán)流水線式生產(chǎn)；
(5)分別用水、10%、30%、50%、70%乙醇洗脫相洗脫，棄去水和10%洗脫液，收集后續(xù)三階段洗脫液；
(6)將所收集的后續(xù)三階段洗脫液進(jìn)行真空濃縮，噴霧干燥，用液相色譜法跟蹤檢測(cè)，制得含7.43%銀杏內(nèi)酯、28.42%黃酮苷粉狀固體提取物3.11 kg。
[0014]實(shí)施例3
如實(shí)施例1所述的銀杏藥用提取物高效生產(chǎn)方法，其步驟如下:
(1)將干燥的銀杏葉100kg粉碎至65目放入提取罐，加入500 kg的水和0.15kg的纖維素酶，在室溫浸泡2.5小時(shí)，使銀杏葉細(xì)胞壁充分酶解；
(2)過(guò)濾除去酶解液，加入700kg65%乙醇在室溫下浸泡10小時(shí)，使銀杏葉充分吸脹；
(3)將充分吸脹的銀杏葉轉(zhuǎn)入層析柱中，柱高是柱直徑的6倍；室溫下用柱層析洗脫的方法將銀杏內(nèi)酯、黃酮苷從銀杏葉中洗脫出來(lái)；
(4)分別用700kg的65%乙醇進(jìn)行三次洗脫(相當(dāng)于銀杏葉干重21倍的65%乙醇進(jìn)行洗脫)，洗脫流速為4BV/h ;收集每次洗脫液，第一次得到銀杏內(nèi)酯、黃酮苷含量較高的洗脫液1，第二次得到銀杏內(nèi)酯、黃酮苷含量較低的洗脫液2，第三次得到銀杏內(nèi)酯、黃酮苷含量很低的洗脫液3 ;洗脫液2用于下一批次完成酶解步驟的銀杏葉吸脹，洗脫液3用于下一批次提取步驟銀杏葉的洗脫，通過(guò)多條層析柱組合成連續(xù)自動(dòng)的生產(chǎn)線，不間斷的獲取提取物，形成循環(huán)流水線式生產(chǎn)；
(5)分別用水、10%、30%、50%、70%乙醇洗脫相洗脫，棄去水和10%洗脫液，收集后續(xù)三階段洗脫液；
(6)將所收集的后續(xù)三階段洗脫液進(jìn)行真空濃縮，噴霧干燥，用液相色譜法跟蹤檢測(cè)，制得含7.22%銀杏內(nèi)酯、28.15%黃酮苷粉狀固體提取物2.98 kg。
[0015]實(shí)施例4
如實(shí)施例1所述的銀杏藥用提取物高效生產(chǎn)方法，其步驟如下:
(1)將干燥的銀杏葉100kg粉碎至80目放入提取罐，加入400 kg的水和0.15kg的纖維素酶，在室溫浸泡3小時(shí)，使銀杏葉細(xì)胞壁充分酶解；
(2)過(guò)濾除去酶解液，加入600kg65%乙醇在室溫下浸泡8小時(shí)，使銀杏葉充分吸脹；
(3)將充分吸脹的銀杏葉轉(zhuǎn)入層析柱中，柱高是柱直徑的6倍；室溫下用柱層析洗脫的方法將銀杏內(nèi)酯、黃酮苷從銀杏葉中洗脫出來(lái)；
(4)分別用800kg的65%乙醇進(jìn)行三次洗脫(相當(dāng)于銀杏葉干重24倍的65%乙醇進(jìn)行洗脫)，洗脫流速為4BV/h ;收集每次洗脫液，第一次得到銀杏內(nèi)酯、黃酮苷含量較高的洗脫液1，第二次得到銀杏內(nèi)酯、黃酮苷含量較低的洗脫液2，第三次得到銀杏內(nèi)酯、黃酮苷含量很低的洗脫液3 ;洗脫液2用于下一批次完成酶解步驟的銀杏葉吸脹，洗脫液3用于下一批次提取步驟銀杏葉的洗脫，通過(guò)多條層析柱組合成連續(xù)自動(dòng)的生產(chǎn)線，不間斷的獲取提取物，形成循環(huán)流水線式生產(chǎn)；
(5)分別用水、10%、30%、50%、70%乙醇洗脫相洗脫，棄去水和10%洗脫液，收集后續(xù)三階段洗脫液； (6)將所收集的后續(xù)三階段洗脫液進(jìn)行真空濃縮，噴霧干燥，用液相色譜法跟蹤檢測(cè)，制得含7.35%銀杏內(nèi)酯、28.13%黃酮苷粉狀固體提取物2.95 kg。
【權(quán)利要求】
1.一種銀杏藥用提取物高效生產(chǎn)方法，其步驟是: (1)將干燥的銀杏葉粉碎至50-80目； (2)加入銀杏葉重量0.1-0.15%的纖維素酶和銀杏葉重量4-5倍的水在室溫下浸泡2-3小時(shí)，使銀杏葉細(xì)胞壁充分酶解； (3)過(guò)濾除去酶解液，加入銀杏葉重量4-8倍的65%乙醇，室溫下浸泡6-12小時(shí)，使銀杏葉充分吸脹； (4)將充分吸脹的銀杏葉轉(zhuǎn)入層析柱或類似容器中，柱高約柱直徑的6倍；室溫下，用柱層析洗脫的方法將銀杏內(nèi)酯、黃酮苷從銀杏葉中洗脫出來(lái)； (5)分別用銀杏葉重量5-8倍的65%乙醇進(jìn)行三次洗脫，洗脫流速為2-4BV/h;收集每次洗脫液，第一次得到洗脫液1，第二次得到洗脫液2，第三次得到洗脫液3 ;洗脫液2用于下一批次完成酶解步驟的銀杏葉吸脹，洗脫液3用于下一批次提取步驟銀杏葉的洗脫，反復(fù)上述循環(huán)； (6)將上述步驟收集到的洗脫液I用大孔吸附樹脂分離； (7)用水、不同濃度的乙醇洗脫，收集各階段洗脫液； (8)將所收集的洗脫液進(jìn)行真空濃縮，噴霧干燥，制得銀杏內(nèi)酯、黃酮苷的粉狀固體；用液相色譜法跟蹤檢測(cè)銀杏內(nèi)酯、黃酮苷含量，得到提取物中銀杏內(nèi)酯含量>7%，黃酮苷含量^ 28%ο
【文檔編號(hào)】A61K127/00GK103638071SQ201310715927
【公開日】2014年3月19日 申請(qǐng)日期:2013年12月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月23日
【發(fā)明者】劉小文, 何福林, 李治章, 王宗成, 劉婷, 姜紅宇, 呂宏再, 張敏, 張存根, 王崢, 陳小明, 陳修文 申請(qǐng)人:湖南科技學(xué)院, 湖南恒偉藥業(yè)股份有限公司