本發(fā)明涉及一種干擾素口服腸溶制劑，更具體地，涉及一種對病毒性腹瀉有很好的預(yù)防和治療效果的干擾素口服腸溶制劑，屬于生物制藥
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：病毒性腹瀉感染性腹瀉在兒童中的發(fā)病率僅次于呼吸道感染，是一個全球性的嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題，在發(fā)展中國家5歲以下兒童中尤為突出，隨著衛(wèi)生條件的改善和抗生素的使用，兒童感染性腹瀉中細(xì)菌性因素的比例逐步下降，而由病毒引起的腹瀉所占比例越來越多。輪狀病毒(rotavivrus，RV)感染是導(dǎo)致嬰幼兒腹瀉的主要原因，諾如病毒(norovirus，NoV)發(fā)生率也較高，其它諸如扎如病毒(sapovirus，SaV)、腸腺病毒(entericadenovirus，EAdv)、星狀病毒(astrovirus，AstV))也有一定的感染率。輪狀病毒是嚴(yán)重的脫水性腹瀉的最常見的原因，每年，五十多萬小于5歲的兒童死于輪狀病毒腹瀉。這些輪狀病毒相關(guān)的死亡多于80％發(fā)生在撒哈拉以南的非洲和南亞的發(fā)展中國家。此外，輪狀病毒引起發(fā)展中國家和發(fā)達(dá)國家中全部腹瀉住院治療的25％-50％，并且門診衛(wèi)生醫(yī)療每年接納兩千多萬幼兒。幾乎每個孩子在5歲之前便已感染了輪狀病毒。輪狀病毒腹瀉不但造成社會的疾病負(fù)擔(dān)，而且?guī)砹司薮蟮慕?jīng)濟(jì)損失。即便在發(fā)達(dá)國家，嬰幼兒輪狀病毒感染也是非常常見的。美國的研究發(fā)現(xiàn)每年用于輪狀病毒感染有關(guān)的醫(yī)療費(fèi)用高達(dá)3.52～10億美元。實施計劃免疫可以節(jié)約0.79億美元用于衛(wèi)生保健，4.66億美元用于社會其他方面。我國大陸調(diào)查顯示：在經(jīng)濟(jì)水平不同的地區(qū)，5歲以下輪狀病毒腹瀉患兒門診就診每次所需費(fèi)用為64～248元，住院治療每次所需費(fèi)用則為658～1920元，初步估計全國輪狀病毒腹瀉的平均門診治療費(fèi)用100元，平均住院費(fèi)用約為839元。到目前為止，輪狀病毒感染無特效治療藥物，主要依賴連續(xù)幾天的補(bǔ)液或調(diào)解腸道菌群的益生菌制劑進(jìn)行治療。更為嚴(yán)重的是，輪狀病毒的感染與衛(wèi)生條件沒有相關(guān)性，即使衛(wèi)生條件得到改善，仍無法有效控制病毒的傳播。疫苗預(yù)防被認(rèn)為是最好的預(yù)防措施，疫苗免疫是唯一可行的預(yù)防輪狀病毒腹瀉較高發(fā)病率和死亡率的方法。目前市購可得的兩種活的、口服實用的輪狀病毒疫苗是(MerckandCo.Inc.，PA，USAandSanofiPasteurMSDSNC，Lyon,France)和(GSKBiologicals，Rixensart,Belgium)。2009年4月和10月，WHO針對戰(zhàn)略咨詢專家組查閱了來自非洲和亞洲的不同人群的另外的效力數(shù)據(jù)，以及在美國許可后的研究，并將疫苗接種推薦推廣到世界所有地區(qū)。干擾素干擾素是一類重要的家族性細(xì)胞因子，具有廣譜的抗病毒、抗細(xì)胞增殖和免疫調(diào)節(jié)作用。哺乳動物的干擾素可以分為Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型，干擾素已用來治療許多疾病，包括病毒感染(如丙肝、乙肝、HIV)、炎癥性病癥以及癌癥(如骨髓瘤、淋巴瘤、肝癌、乳房癌、黑色素瘤、白血病等)。從治療的角度出發(fā)，干擾素尤其有意義(關(guān)于干擾素的綜述見DeMaeyer和DeMaeyer-Guignard，“干擾素”，《細(xì)胞因子手冊》(TheCytokineHandbook),第三版，Thompson(編)，第491-516頁(AcademicPressLtd.1998)和Walsh,Biopharmaceuticals:BiochemistryandBiotechnology,第158-188頁(JohnWiley&Sons1998))。干擾素顯示出多種生物學(xué)活性，可用于治療某些自身免疫性疾病和增強(qiáng)對感染劑(包括病毒、細(xì)菌、真菌和原生物)的免疫應(yīng)答。迄今，已經(jīng)鑒定到6種形式的干擾素，它們分為三個大組。所謂的“I型”干擾素包括干擾素α、干擾素β、干擾素ω、干擾素δ、干擾素τ。目前，干擾素γ和干擾素α的一個亞類是僅有的II型干擾素。III型干擾素是最近發(fā)現(xiàn)的一類細(xì)胞因子家族，包括干擾素λ1、λ2和λ3，也稱為IL-28A、IL-28B和IL-29。I型干擾素被認(rèn)為來源于相同的祖先基因，保留了充分相似的結(jié)構(gòu)以致可以通過相同的細(xì)胞表面受體起作用。人干擾素α/β受體的α鏈包含N端細(xì)胞外域，其具有II類細(xì)胞因子受體的特征。干擾素γ與I型干擾素或II型干擾素α亞型沒有顯著同源性，但與I性干擾素有許多相同的生物學(xué)活性。III型干擾素(又稱IL-28/IL-29)是最近發(fā)現(xiàn)的新蛋白家族，所述蛋白質(zhì)家族與I型干擾素有序列同源性，并與IL-10有基因序列的同源性。該新家族在共同所有的PCT申請WO02/086087和Sheppard等，NatureImmunol.4:63-68,2003(全文都納入本文參考)中有詳細(xì)的描述。從功能上說，IL-28和IL-29類似于I型干擾素，均能誘導(dǎo)細(xì)胞中的抗病毒狀態(tài)。然而，I型與III的干擾素系統(tǒng)的主要區(qū)別在于針對的是不同系列與類型的反應(yīng)細(xì)胞。I型干擾素的受體雖然并不一定在所有的成核細(xì)胞表面都存在，但在絕大部分的成核細(xì)胞表面都可以被發(fā)現(xiàn)，而功能性的III型干擾素的受體更傾向于表達(dá)在表皮細(xì)胞表面(SommereynsC,PaulS,etal.PLoSPathog.2008)。干擾素用于治療病毒性腹瀉在臨床上已有運(yùn)用，但在治療病毒性腹瀉時其給藥方式大都是通過肌肉注射、大劑量霧化吸入、灌腸(陳顥予，徐曉紅等.臨床醫(yī)學(xué)工程.2014；董金麗.臨床合理用藥.2014；李華.華南國防醫(yī)學(xué)雜志.2014；侯利.實用醫(yī)技雜志.2006)。也有在臨床上口服用于治療病毒性腹瀉的，但只是將干擾素注射液用相應(yīng)的水稀釋后口服。現(xiàn)有多肽/干擾素口服制劑使用蛋白質(zhì)和多肽作為藥物的一個限制因素是當(dāng)腸道外給藥時會通過血漿蛋白而新陳代謝。由于胃中的蛋白水解，口服給藥的途徑存在更多問題，在到達(dá)其預(yù)定目標(biāo)之前其中的酸性條件或破壞分子。例如，通過胃酶和胰酶作用產(chǎn)生的多肽和蛋白片段，通過腸絨毛邊緣膜的外肽酶和內(nèi)切酶裂解產(chǎn)生二肽和三肽。如果可以避免胰酶的蛋白水解，多肽受到絨毛邊緣肽酶降解。通過胃還可以殘存的多肽或蛋白質(zhì)在腸粘膜中被代謝，腸粘膜中的穿透屏障防止其進(jìn)入細(xì)胞。為了能在胃和腸道中殘存直至通過腸粘膜吸收，典型地通過將分子配置于保護(hù)性劑量形式中。例如，蛋白質(zhì)可以和蛋白酶抑制劑(如桿菌肽或其衍生物、大豆胰蛋白酶或抑肽酶)一起服用，用聚合材料穩(wěn)定。而通過腸粘膜屏障的方式則是加入吸收促進(jìn)劑(如水楊酸鈉、月桂基硫酸鈉、油酸、亞油酸、卵磷脂等)。然而，酶抑制劑能有效避免蛋白酶的水解作用，但酶抑制劑同時也影響了食物蛋白的消化，長期服用將造成消化吸收紊亂甚至胰臟的腫大或增生；吸收促進(jìn)劑在增加腸道通透性的同時，有可能對細(xì)胞膜造成不可逆的破壞，長期服用會導(dǎo)致膜中毒。另一個處理是完全避開胃腸道，通過以錠劑的形式將蛋白質(zhì)傳遞至口咽部分或?qū)⑷芤涸诳陂L中保持一段時間，通過黏膜進(jìn)入血液循環(huán)。US5824300公開了一種口服干擾素治療腫瘤疾病方面的運(yùn)用，通過在患者的咽部黏膜吸收，劑型是一種可在口腔含服的錠劑。WO2013/165963公開了一種口服干擾素治療血小板減少癥的方法，通過舌下含服的方式給予血小板減少癥患者一定量的干擾素，舌下含服的為一種唾液可溶性的錠劑。US20070237723公開了一種通過口服干擾素治療慢性咳嗽的方法，病人通過霧化吸入的方式從口腔部霧化吸入干擾素而起到抗病毒而治療咳嗽的作用。將蛋白類藥物，如干擾素，制成口服制劑，并且充分保證其臨床治療效果，蛋白酶抑制劑和/或吸收促進(jìn)劑似乎是必不可少的輔助劑，但這些輔助劑卻又會帶來相應(yīng)的安全隱患(造成消化吸收紊亂，或者細(xì)胞膜破壞而至膜中毒)，這些因素的存在大大地限制了蛋白類藥物(如干擾素)口服給藥途徑的發(fā)展。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明研究人員在研究病毒性腹瀉疾病時驚奇地發(fā)現(xiàn)，口服給予特定的干擾素制劑時，對由病毒引起的腹瀉可以很起到很好的預(yù)防和/或治療作用。因此，本發(fā)明的目的之一在于提供一種可供口服的用于預(yù)防或治療病毒性腹瀉的干擾素制劑，對于感染腸道病毒的患者，通過口服本發(fā)明所述干擾素制劑，無需注射給藥，就可很好地起到預(yù)防或治療的作用，其效果與注射給藥相當(dāng)甚至更佳，這極大地方便了患者的用藥。用于預(yù)防或治療本病毒性腹瀉的干擾素制劑，優(yōu)選的是一種腸溶形式的口服干擾素制劑， 如干擾素腸溶微粒。本發(fā)明所述干擾素腸溶微粒，是一種即不含有例如防止其經(jīng)酶水解的蛋白酶抑制劑，也不含有如為解決腸道粘膜屏障而額外加入的吸收促進(jìn)劑。盡管，本發(fā)明所述的口服干擾素腸制劑(如干混懸劑)不含有蛋白酶抑制劑和吸收促進(jìn)劑，但在預(yù)防或治療病毒性腹瀉疾病時，卻有著相當(dāng)于注射給藥方式的治療效果，如此的治療效果大大地超出了技術(shù)人員的預(yù)期。本發(fā)明所述的干擾素腸溶微粒，在一定的條件下長期存放是穩(wěn)定的，而且，由于是通過直接口服方式給藥，方便了患者，提高了患者是順應(yīng)性。具體地，本發(fā)明所述干擾素腸溶微粒，包括：空白丸芯、包裹于空白丸芯上的干擾素層，以及包裹于所述干擾素層上的腸溶衣層。本發(fā)明所述空白丸芯，是一種粒徑很小的空白丸芯(直徑范圍為10納米至500微米)，例如可以是納米微丸丸芯，丸芯的材料可以是如蔗糖、淀粉、微晶纖維素、可生物降解的聚合物等。包裹于所述空白丸芯上的干擾素層，為將干擾素原液溶解于適當(dāng)?shù)娜軇┲泻?，通過噴霧或蒸發(fā)等的方式均勻地包裹在所述的空白丸芯上得到。包裹于所述干擾素層的腸溶衣，優(yōu)選為在pH5.0-6.8下可溶的腸溶衣，例如可以是鄰苯二甲酸乙酸纖維素(CAP)、聚醋酸乙烯鈦酸酯(PVAP)、丙烯酸樹脂類(如甲基丙烯酸甲基丙烯酸酯甲酯)，包衣增重可以是含藥丸芯重量的0.5％-10％。上述所得的干擾素微粒，在所得的微粒中，加入適宜的其它賦形劑，如稀釋劑、填充劑、潤滑劑、助流劑等，可壓制成片劑；或者，將所得的干擾素腸溶微粒，直接填裝于膠囊中，得到膠囊劑；或者，將所得的干擾素腸溶微粒，與一定的甜味劑等混合后包裝于袋中，制成干混懸劑，口服前懸浮于水中；或者將所得的干擾素腸溶微粒懸浮于何適的溶液中，制成口服液。優(yōu)選地，本發(fā)明所述的干擾素腸溶微粒為一種干混懸劑。動物實驗研究表明，口服給予本發(fā)明所述干擾素腸溶微粒，通過對腹瀉率/重度腹瀉率、腹瀉持續(xù)天數(shù)、HRV抗原陽性持續(xù)天數(shù)指標(biāo)考察，其對病毒性腹瀉的治療作用與肌肉或皮下注射同等劑量的干擾素相當(dāng)甚至更優(yōu)。本發(fā)明中，所述的干擾素，可以是I型干擾素，如干擾素α、干擾素β、干擾素ω、干擾素δ、干擾素τ；也可以II型干擾素，如干擾素γ；還可以是III型干擾素，如干擾素λ1、干擾素λ2、干擾素λ3。優(yōu)選地，本發(fā)明所述干擾素為III型干擾素。本發(fā)明中，所述的病毒性腹瀉，例如可以是輪狀病毒、諾如病毒、扎如病毒、腸腺病毒、星狀病毒引起的腹瀉。具體實施例實施例1干擾素腸溶微粒的制備-方法一取蔗糖丸芯200克，直徑為200-400微米，置于流化床中，將50毫升III型干擾(IFN-λ1)素溶液(含干擾素100毫克)以側(cè)噴方式進(jìn)行噴霧干燥，進(jìn)口溫度40-45度,干燥時間30分鐘。噴霧干燥完成后，干擾素包裹于丸芯上，形成干擾素顆粒。同樣在流化床中，將尤特奇L30D-55的乙醇溶液以側(cè)噴方式對上述干擾素顆粒進(jìn)行噴霧干燥，進(jìn)口溫度為35-40度，干燥時間25分鐘。干燥完成后獲得夾心式干擾素腸溶微粒，即最里層為蔗糖丸芯，中間層為三型干擾素，最外層為腸溶包衣層。夾心式干擾素微粒的粒徑在250-450微米(比蔗糖丸芯粒徑增加約50微米)。單位質(zhì)量干擾素微粒所含三型干擾素約為0.3～0.4mg/g。該微粒在接近于胃部的酸度條件下(pH2.0)，37度培養(yǎng)2小時，未見三型干擾素釋放，而在pH5.5或更高pH環(huán)境下，37度培養(yǎng)8小時，微粒中所含三型干擾素的85％以上被釋放。實施例2干擾素腸溶微粒的制備-方法二取平均粒徑約約為20nm的藥用級二氧化硅微粒200mg，懸浮于20ml純水中，將5ml三型干擾素溶液(IFN-λ1，4mg/ml)與其混勻，一邊攪拌一邊進(jìn)行真空干燥。當(dāng)水分全部除去后，得到表面附著了三型干擾素的二氧化硅微粒。將所得微粒懸浮于20ml乙醇中，并將20mg腸溶材料尤特奇L100溶于上述乙醇中，將該混合物置于真空環(huán)境下，同時進(jìn)行超聲波處理，直至除去全部液體，得到干粉。將所得干粉進(jìn)行粉碎，過篩除去較大的顆粒，得到目標(biāo)腸溶三型干擾素微粒，微粒平均粒徑為0.5～5微米。此法所得微粒單位質(zhì)量含三型干擾素為50mg/g。微粒置于pH2.0緩沖液中，30度培養(yǎng)2小時，20-30％三型干擾素被釋放，更換緩沖液為pH7.0，37度培養(yǎng)8小時，>80％的三型干擾素被釋放。用實施例1、2同樣的工藝步驟，可以制備IFN-λ2或IFN-λ3的腸溶微粒實施例3腸溶制劑對輪狀病毒感染的乳鼠的治療作用輪狀病毒：HRV病毒株由中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒研究所提供。用于病毒增殖和測定的細(xì)胞為MA104細(xì)胞(非洲綠猴胎腎細(xì)胞傳代細(xì)胞系)。藥物：IFN-λ1自行制備，分別制成注射液和腸溶微粒(實施例1法)；IFN-λ2自行制備，按實施例2方法制成腸溶顆粒。實驗動物：Bal/c乳鼠，SPF級，由北京提供，乳鼠自然分娩，8窩共88只，體重2.3～2.8g，乳鼠飼養(yǎng)與有空氣過濾膜的乳鼠籠內(nèi)，生后母鼠奶喂養(yǎng)，飼養(yǎng)環(huán)境12h光，12黑暗，溫度18～25℃，濕度40％-70％，實驗環(huán)境SFP級。A群輪狀病毒診斷試劑盒：購自北京萬肽生物藥業(yè)有限公司。實驗方法(1)分組實驗選用84只乳鼠，隨母鼠分為7組，每組12只：HRV感染組(A組)、IFN-λ1注射液預(yù)處理組(B組)、IFN-λ1腸溶微粒預(yù)處理組(C組)、IFN-λ1注射液治療組(D組)、IFN-λ1腸溶微粒治療組(E組)、IFN-λ1溶液治療組(F組)、IFN-λ2腸溶微粒治療組(G組)。HRV感染組參考文獻(xiàn)(徐志偉，等.中華臨床感染病雜志.2010,3(2):100)方法建立乳鼠感染HRV模型，即乳鼠出生第4d用改良的1ml注射器經(jīng)口灌服(自然吸吮發(fā))50μlHRV液(3×106pfu/ml)。IFN-λ1注射液預(yù)處理組在出生后第1天起每天腹腔注射IFN-λ1注射50μl(3萬IU/只)、IFN-λ1腸溶微粒預(yù)處理組在出生后第1d起經(jīng)口灌服50μl腸溶微粒懸浮液(3萬IU/只)，連續(xù)3d，于第4d經(jīng)口灌服50μlHRV液(3×106pfu/ml)，各治療組第4d經(jīng)口灌服50μlHRV液(3×106pfu/ml)，1h后，腹腔注射IFN-λ1液50μl(3萬IU/只)、經(jīng)口灌服IFN-λ1腸溶微粒懸浮液50μl(3萬IU/只)、經(jīng)口灌服IFN-λ1注射液50μl(3萬IU/只)、經(jīng)口灌服IFN-λ2腸溶懸浮液50μl(3萬IU/只)，連續(xù)4d。2、臨床觀察：從第4天開始，每天2次(早晚各1次)，對乳鼠進(jìn)行連續(xù)的臨床觀察：稱取乳鼠的體重，觀察乳鼠的腹瀉情況，計數(shù)乳鼠死亡數(shù)量，按試劑說明書用ELISA方法檢測乳鼠答辯HRV抗原。腹瀉的判斷慘叫文獻(xiàn)(TakahashiK,OhashiK,etal.AntimicrobAgentsChemother.2002,46:420)分為6級：1級為無大便，2級為黃色成型便，3級為黃色糊狀便，4級為黃色水樣粘液便，5級為黃色蛋花湯樣便，6級為完全黃色水樣便。3級及以上的才判斷為腹瀉，3、4、5級為輕型，6級為重型。3、感染動物答辯中RV抗原檢測：取適量復(fù)變樣品放入容器內(nèi)，加入9倍體積的生理鹽水，攪拌混勻2分中，離心后在試劑盒加樣處滴加3～4滴糞便上清液，平置于室溫，10min內(nèi)判斷結(jié)果。表1：各組乳鼠體重變化(g)組別n出生后第4天出生后第9天A123.72±0.266.28±0.71B123.55±0.316.76±0.64*C123.68±0.296.98±0.73**D123.82±0.376.46±0.49E123.76±0.276.67±0.62*F123.87±0.346.41±0.65G123.79±0.296.59±0.54*與A組相比，*P<0.05，**P<0.01.表2：各組乳鼠腹瀉情況組別n重度腹瀉輕度腹瀉死亡重度腹瀉率％腹瀉率％A1293375100B12030025C12020016.7D121508.350E12050041.7F1256041.791.7G12060050表3：各組動乳鼠平均腹瀉天數(shù)及HRV抗原陽性天數(shù)(天d)組別n平均腹瀉天數(shù)d平均HRV抗原陽性天數(shù)dA124.72±0.665.48±0.68B122.05±0.51**3.16±0.56**C121.89±0.49**2.57±0.43**D122.92±0.52*3.86±0.62**E122.76±0.67*3.57±0.56**F123.99±0.544.71±0.70G122.49±0.59*3.36±0.54**與A組相比，*P<0.05，**P<0.01乳鼠的體重變化：至病毒感染后第6天(出生后第9天)，各治療組體重增長均要優(yōu)于未經(jīng)治療的HRV乳鼠組，其中IFN-λ1預(yù)處理組、IFN-λ1及IFN-λ2腸溶微粒治療組的體重增長更是明顯于HRV未治療組，差異具有顯著性。而IFN-λ1注射液注射治療組、IFN-λ1注射液口服治療組體重增長差異不具有顯著性。乳鼠的腹瀉狀況：HRV感染組乳鼠在喂服病毒后第二天出現(xiàn)精神怠慢、活動減少的癥狀，至病毒感染后第3～4天均出現(xiàn)腹瀉癥狀，腹瀉率達(dá)100％，其中重度腹瀉的有9只，3只輕度腹瀉的也都是排泄黃色蛋花樣便，其中在病毒感染后第5天有3只乳鼠死亡。用IFN-λ1注射液及IFN-λ1腸溶微粒預(yù)處理組的所有乳鼠均未出現(xiàn)重度腹瀉癥狀，在病毒感染后第3～4天，注射液組有3只乳鼠出現(xiàn)輕度腹瀉癥狀，腸溶微粒組有2只乳鼠出現(xiàn)輕度腹瀉癥狀，為黃色水樣粘液便，其余乳鼠精神狀況良好，活動正常，皮膚無皺褶。FN-λ1注射液、IFN-λ1及IFN-λ2腸溶微粒治療組全過程中均有近半乳鼠出現(xiàn)腹瀉癥狀，其中注射液治療組中有1只乳鼠出現(xiàn)重度腹瀉癥狀，5只為輕度腹瀉，輕度腹瀉的乳鼠中主要為黃色水樣粘液便至黃色蛋花樣便。IFN-λ1注射液口服給藥治療組全過程中也都出現(xiàn)了腹瀉癥狀，其中5只乳鼠出現(xiàn)重度腹瀉癥 狀，其余6只乳鼠為輕度腹瀉癥狀。各治療組及預(yù)防組中均未有乳鼠死亡。不管是預(yù)防用藥還是治療用藥，IFN-λ腸溶顆?？诜委熞晕?yōu)于IFN-λ注射液注射給藥組，盡管二者差異不具有顯著性，但都明顯要優(yōu)于IFN-λ注射液口服給藥治療組，彼此差異具有顯著性。乳鼠腹瀉持續(xù)天數(shù)及HRV抗原陽性天數(shù)：從病毒感染的第3天開始，統(tǒng)計每組腹瀉乳鼠大便HRV抗原陽性天數(shù)。與HRV感染組相比，各治療組乳鼠腹瀉持續(xù)天數(shù)及HRV抗原陽性天數(shù)均要明顯縮短，差異具有顯著性(P<0.05，P<0.01)，但I(xiàn)FN-λ1注射液口服治療組除外，IFN-λ1注射液口服治療組不能明顯降低乳鼠腹瀉持續(xù)天數(shù)及HRV抗原陽性天數(shù)。各治療組中，IFN-λ1注射液及腸溶微粒預(yù)處理組縮短更為明顯，其次是IFN-λ1、IFN-λ2腸溶顆粒及IFN-λ1注射治療組，IFN-λ腸溶顆?？诜委熜ЧcIFN-λ1注射治療效果相當(dāng)，甚至?xí)鼉?yōu)一些，但差異沒有顯著性。以上結(jié)果表明，對于HRV感染是乳鼠，IFN-λ無論從預(yù)防還是治療角度考慮，在體重、腹瀉率/重度腹瀉率、腹瀉天數(shù)、HRV陽性天數(shù)方面，本發(fā)明腸溶微粒均可達(dá)到與注射方式相當(dāng)甚至更好的效果，而直接口服給予IFN-λ注射液，其對腸道病毒腹瀉乳鼠的治療效果要明顯下降。實施例4穩(wěn)定性考察通常干擾素注射液的儲存條件是2-8℃，考慮到本發(fā)明IFN-λ1腸溶微粒劑型的特殊性，對該制劑進(jìn)行了各種影響因素的實驗，以考察本品在強(qiáng)光、高溫、高濕條件下的穩(wěn)定性，為產(chǎn)品貯藏條件提供實驗依據(jù)。同時進(jìn)行了加速和長期穩(wěn)定性試驗。穩(wěn)定性試驗參照中國藥典，選擇外觀、效價、pH和釋放度作為評價標(biāo)準(zhǔn)。采用實施例1所得的IFN-λ1腸溶微粒，分別試驗了在光照4500Lx±500Lx(冷藏干燥)、高濕RH75％(冷藏避光)、高溫40℃(避光干燥)條件下的穩(wěn)定性，得到的結(jié)果表明：本品對溫度非常敏感，在高溫(40℃)下第15天效價降至0天的70％，因此，這種干擾素腸溶微粒應(yīng)采用冷藏(2-8℃)貯存。在高濕環(huán)境下(75％)下，微粒容易吸濕發(fā)生粘連，因此建議采用能隔絕空氣中水分的藥用復(fù)合袋材料包裝。加速穩(wěn)定試驗的結(jié)果表明，本品采用防潮藥用復(fù)合袋進(jìn)行包裝，在溫度25±2℃、相對濕度60±10％的條件下放置6個月，效價有下降趨勢，但仍在合格范圍內(nèi)，而其它的試驗與在0月的比較均沒有顯著性差異，表明選用的內(nèi)包裝材料對產(chǎn)品的質(zhì)量沒有影響，其密封性和避光性均符合要求，且不影響產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量。同時，本品對溫度敏感，應(yīng)冷藏保存。進(jìn)一步地，采用防潮藥用復(fù)合袋進(jìn)行包裝，在溫度6±2℃、相對濕度60±10％的條件下，長期試驗12個月，效價、pH值和溶出度各項指標(biāo)均幾乎沒有變化，表明本品在上述條件下是穩(wěn)定的。綜合上述影響試驗、加速、長期穩(wěn)定試驗結(jié)果，重組人干擾素lambda腸溶微粒的條件為 2-8℃避光保存，有效期可初步暫定為18個月。溶出度在接近于胃部的酸度條件下(pH2.0)，37度培養(yǎng)2小時，IFN-λ1的溶出率不超過15％，在pH7.0環(huán)境下，37度培養(yǎng)8小時，微粒中所含IFN-λ1的85％以上被釋放。當(dāng)前第1頁1 2 3