本發(fā)明屬于脂肪移植和干細(xì)胞治療領(lǐng)域，涉及脂肪面部移植后年輕化和軟組織損傷修復(fù)技術(shù)，具體為一種對(duì)顆粒脂肪純物理處理后富集干細(xì)胞及細(xì)胞外基質(zhì)的移植材料及其制備方法和用途。

背景技術(shù)：

脂肪干細(xì)胞（Adipose-derived stem/stromal cells，ASCs）和基質(zhì)血管片段細(xì)胞（stromal vascular fraction cells，SVFs）在干細(xì)胞治療領(lǐng)域的應(yīng)用越發(fā)廣泛，尤其是SVF的應(yīng)用已在眾多國(guó)家展開臨床試驗(yàn)，其在提高脂肪移植后保存率以及創(chuàng)面修復(fù)方面優(yōu)勢(shì)明顯：1、脂肪組織新鮮分離得到的SVFs中含有大量的、具有生物學(xué)活性的自體ASCs；2、來(lái)源于自身脂肪組織，無(wú)免疫排斥反應(yīng)；3、人體內(nèi)儲(chǔ)量豐富；4、無(wú)需體外培養(yǎng)，降低細(xì)菌污染的風(fēng)險(xiǎn)。

然而，SVF的應(yīng)用也在存在眾多限制，例如：1、移植后，因?yàn)镾VFs脫離了生理狀態(tài)下的微環(huán)境，作為細(xì)胞懸液，其定植于靶組織的能力十分有限；2、分離過(guò)程復(fù)雜，并且需要加入外源性消化酶；3、提取過(guò)程需要在特定的實(shí)驗(yàn)環(huán)境下操作，花費(fèi)成本較高，并且需要專業(yè)的技術(shù)人員。因此，需要尋找一種富集SVFs的新方法，改變SVF應(yīng)用的現(xiàn)狀。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明旨在提供一種對(duì)顆粒脂肪組織純物理的機(jī)械化處理后，達(dá)到富集SVFs及細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的目的，其中SVFs中含有大量的、具有生物學(xué)活性的ASCs，并且保留了SVFs黏附在ECM上的生理關(guān)系，使得SVFs濃縮的同時(shí)，更易定植在移植區(qū)域，本發(fā)明中將此種新型移植材料明名為SVF-gel （脂肪組織干細(xì)胞凝膠）。SVF-gel將在促進(jìn)面部年輕化及創(chuàng)傷修復(fù)應(yīng)用方面展現(xiàn)廣泛的應(yīng)用前景。

本發(fā)明的目的在于提供一種含高度濃縮的脂肪來(lái)源干細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)的移植材料。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種含高度濃縮的脂肪來(lái)源干細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)的移植材料的純物理制備方法。

本發(fā)明的再一目的在于提供上述移植材料的應(yīng)用。

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

一種含高度濃縮的脂肪來(lái)源干細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)的移植材料的純物理制備方法，包括以下操作步驟：

1）將獲得的顆粒脂肪以800~1200g/min離心3~5min，將離心后上層油脂回收備用，底層液體棄去，將中層高密度脂肪組織轉(zhuǎn)移至注射器中；

2）將上步裝有高密度脂肪組織的注射器與一枚新注射器通過(guò)注射口密封對(duì)接，推動(dòng)含有脂肪組織的注射器活塞，將脂肪組織推注至對(duì)側(cè)注射器中，推注速度為10~20ml/s，如此連續(xù)往返推注1~2min；

3）將步驟1）回收的油脂加入到上步經(jīng)反復(fù)推注過(guò)的脂肪組織中，混勻；

4）將步驟3）獲得的脂肪組織過(guò)濾，將濾液裝入密封注射器內(nèi)，拉開注射器栓，保持注射器內(nèi)負(fù)壓，然后輕微震蕩；將震蕩后的混合物以1800~2200g/min離心3~5min；

5）經(jīng)步驟4）離心后，若混合物分層，頂層為油脂，底層為腫脹液，且油脂層體積占整個(gè)混合物體積的80%及以上，則取中間層產(chǎn)物，得SVF-gel，即得含高度濃縮的脂肪來(lái)源干細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)的移植材料；

若離心后，混合物不分層，或頂層油脂層的體積占整個(gè)混合物體積的80%以下，則將混合物重復(fù)步驟2）~4）的操作。

進(jìn)一步的，步驟2）中高密度脂肪組織在被往返推注之前先剪碎。

進(jìn)一步的，步驟2）中注射器間的密封對(duì)接是通過(guò)魯爾接頭將2個(gè)注射器注射口連接起來(lái)，即可實(shí)現(xiàn)注射器間的密封對(duì)接。

進(jìn)一步的，步驟4）中過(guò)濾所用濾膜的孔徑不大于0.2mm。

進(jìn)一步的，步驟4）輕微震蕩過(guò)程中有絮凝現(xiàn)象出現(xiàn)，表現(xiàn)為蛋花湯樣。

進(jìn)一步的，步驟4）輕微震蕩的時(shí)間為25~45s。

進(jìn)一步的，步驟5）中所述重復(fù)步驟2）~4）操作的重復(fù)次數(shù)不超過(guò)3次。

進(jìn)一步的，上述方法最終獲得的SVF-gel的脫油率≥80%。

一種含高度濃縮的脂肪來(lái)源干細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)的移植材料，其制備方法為上述所述的方法。

上述所述移植材料在作為面部年輕化及軟組織損傷修復(fù)的應(yīng)用。

本發(fā)明的有益效果是：

1）本制備方法自始至終未使用任何外源性試劑，且為對(duì)自體組織的處理，不存在倫理問(wèn)題。

2）本發(fā)明應(yīng)用流體渦旋原理，將脂肪組織中絕大多數(shù)成熟脂肪細(xì)胞破碎；同時(shí)應(yīng)用絮凝沉淀技術(shù)，將破碎脂肪細(xì)胞產(chǎn)生的油滴匯集并去除。

3）本發(fā)明制備的SVF-gel中，脂肪來(lái)源干細(xì)胞及內(nèi)皮祖細(xì)胞高度濃縮；濃縮的SVF細(xì)胞依然黏附在ECM之上，移植后定植于局部的干細(xì)胞數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于普通脂肪移植數(shù)量，作為干細(xì)胞療法，遠(yuǎn)期療效更佳。

4）本發(fā)明操作過(guò)程簡(jiǎn)便、成本低廉。

5）本發(fā)明制備的SVF-gel可通過(guò)27G細(xì)針頭進(jìn)行真皮內(nèi)注射或局部精確注射填充。

6）本發(fā)明方法制備的SVF-gel來(lái)源豐富、制備方法簡(jiǎn)單可靠、成本低廉、安全有效、無(wú)排斥反應(yīng)、可進(jìn)行銳針注射。SVF-gel的制備方法具有普遍意義，適用于每個(gè)需要干細(xì)胞療法或容量填充面部年輕化的患者。

7）本發(fā)明提供了一種將顆粒脂肪組織進(jìn)行一系列機(jī)械化處理后，獲得的去除成熟脂肪細(xì)胞及油滴的、富集干細(xì)胞的新型移植材料，該方法獲得的移植材料富含高濃度基質(zhì)血管片段細(xì)胞以及細(xì)胞外基質(zhì)，其所含脂肪來(lái)源干細(xì)胞與未處理的顆粒脂肪組織相比高出8倍，內(nèi)皮前體細(xì)胞高出7.5倍。

8）本發(fā)明采用一系列機(jī)械化處理過(guò)程，采用純物理手段，不添加任何外源性物質(zhì)。運(yùn)用多種物理方法的目的為去除移植后影響組織保留率的成熟脂肪細(xì)胞及油脂。而SVF中的干細(xì)胞在經(jīng)歷本發(fā)明一系列特定的機(jī)械化處理后幾乎不受影響，且脂肪組織體積可達(dá)到減少80%以上的水平，干細(xì)胞得到高度濃縮。處理后，脂肪組織中細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的基本結(jié)構(gòu)和特性并未受到影響。

附圖說(shuō)明

圖1為實(shí)施例1所用到的魯爾接頭；

圖2為實(shí)施例1中往返推注過(guò)程中形成流體渦旋的示意思圖；

圖3為實(shí)施例1所用到的Nano Transfer；

圖4為本發(fā)明制得的SVF-gel的外觀及體積濃縮比例；

圖5為本發(fā)明制備的SVF-gel的掃描電鏡檢測(cè)結(jié)果；

圖6為不同處理所得脂肪組織的全組織染色結(jié)果；圖中Hoechst用于細(xì)胞核染色，為藍(lán)色；Lectin用于血管內(nèi)皮細(xì)胞（vascular ECs）染色，為紅色；BODIPY用于脂肪細(xì)胞（adipocytes）染色，為黃色；（Bar = 200 μm.）

圖7為本發(fā)明SVF-gel中各亞群細(xì)胞數(shù)量的檢測(cè)結(jié)果；

圖8為對(duì)本發(fā)明SVF-gel進(jìn)行成脂、成骨、成軟骨誘導(dǎo)分化的檢測(cè)結(jié)果；

圖9為SVF-gel促進(jìn)創(chuàng)面愈合的檢測(cè)結(jié)果，A為創(chuàng)面愈合過(guò)程圖，B為創(chuàng)面愈合過(guò)程中受傷創(chuàng)面面積的對(duì)比統(tǒng)計(jì)。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，但并不局限于此。

實(shí)施例1

1）將獲得的顆粒脂肪經(jīng)Coleman技術(shù)處理：即以1200g/min，離心3分鐘，將離心后上層油脂回收備用，底層液體棄去，保留中層高密度脂肪組織轉(zhuǎn)移至無(wú)針頭注射器中，并用剪刀進(jìn)一步將脂肪組織剪碎。

上述顆粒脂肪的獲取采用濕性吸脂技術(shù)，使用吸脂針，從患者腹部或大腿抽吸脂肪組織。

2）將上步裝有脂肪的注射器與一枚新的注射器通過(guò)魯爾接頭（如圖1所示）將2個(gè)注射器注射口連接起來(lái)，達(dá)到密封對(duì)接，推動(dòng)含有脂肪組織的注射器活塞，將脂肪組織通過(guò)連接器推注至對(duì)側(cè)注射器中，推注速度為20ml/s，如此連續(xù)往返推注2min（如圖2所示）。

3）取步驟1）留存的油脂，混至上步反復(fù)推注過(guò)的脂肪組織中；

4）將步驟3）獲得的脂肪組織通過(guò)Tulip公司的Nano Transfer（如圖3所示）進(jìn)行過(guò)濾（過(guò)濾的孔徑不大于0.2mm），將濾液裝入密封注射器內(nèi)，拉開注射器栓，保持注射器內(nèi)負(fù)壓，然后輕微震蕩30秒；輕微震蕩過(guò)程中有絮凝現(xiàn)象出現(xiàn)，表現(xiàn)為蛋花湯樣；將震蕩后的混合物以1800~2200g/min離心3~5min。

5）經(jīng)步驟4）離心后，混合物分層，頂層為油脂，底層為腫脹液，且油脂層體積占整個(gè)混合物體積的80%以上，則取中間層產(chǎn)物，得SVF-gel，即為含高度濃縮的脂肪來(lái)源干細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)的移植材料；

若離心后，混合物不分層，或頂層油脂層的體積占整個(gè)混合物體積的80%以下，則將混合物重復(fù)步驟2）~4）的操作，重復(fù)次數(shù)不超過(guò)3次。

上述制備的SVF-gel可應(yīng)用于面部年輕化及軟組織損傷修復(fù)，直接將SVF-gel移植材料置于注射器中，通過(guò)27G細(xì)針頭進(jìn)行真皮內(nèi)注射或局部精確注射填充即可。

實(shí)施例2

1）將獲得的顆粒脂肪經(jīng)Coleman技術(shù)處理：即以800g/min，離心5分鐘，將離心后上層油脂回收備用，底層液體棄去，保留中層高密度脂肪組織轉(zhuǎn)移至無(wú)針頭注射器中，并用剪刀進(jìn)一步將脂肪組織剪碎。

上述顆粒脂肪的獲取采用濕性吸脂技術(shù)，使用吸脂針，從患者腹部或大腿抽吸脂肪組織。

2）將上步裝有脂肪的注射器與一枚新的注射器通過(guò)魯爾接頭將2個(gè)注射器注射口連接起來(lái)，達(dá)到密封對(duì)接，推動(dòng)含有脂肪組織的注射器活塞，將脂肪組織通過(guò)連接器推注至對(duì)側(cè)注射器中，推注速度為10ml/s，如此連續(xù)往返推注1min。

3）取步驟1）留存的油脂，混至上步反復(fù)推注過(guò)的脂肪組織中；

4）將步驟3）獲得的脂肪組織通過(guò)Tulip公司的Nano Transfer進(jìn)行過(guò)濾（過(guò)濾的孔徑不大于0.2mm），將濾液裝入密封注射器內(nèi)，拉開注射器栓，保持注射器內(nèi)負(fù)壓，然后輕微震蕩45秒；輕微震蕩過(guò)程中有絮凝現(xiàn)象出現(xiàn)，表現(xiàn)為蛋花湯樣；將震蕩后的混合物以1800g/min離心3min。

5）經(jīng)步驟4）離心后，混合物分層，頂層為油脂，底層為腫脹液，且油脂層體積占整個(gè)混合物體積的80%及以上，則取中間層產(chǎn)物，得SVF-gel，即為含高度濃縮的脂肪來(lái)源干細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)的移植材料；

若離心后，混合物不分層，或頂層油脂層的體積占整個(gè)混合物體積的80%以下，則將混合物重復(fù)步驟2）~4）的操作，重復(fù)次數(shù)不超過(guò)3次。

上述制備的SVF-gel可應(yīng)用于面部年輕化及軟組織損傷修復(fù)，直接將SVF-gel移植材料置于注射器中，通過(guò)27G細(xì)針頭進(jìn)行真皮內(nèi)注射或局部精確注射填充即可。

實(shí)施例3

1）將獲得的顆粒脂肪經(jīng)Coleman技術(shù)處理：即以1200g/min，離心5分鐘，將離心后上層油脂回收備用，底層液體棄去，保留中層高密度脂肪組織轉(zhuǎn)移至無(wú)針頭注射器中，并用剪刀進(jìn)一步將脂肪組織剪碎。

上述顆粒脂肪的獲取采用濕性吸脂技術(shù)，使用吸脂針，從患者腹部或大腿抽吸脂肪組織。

2）將上步裝有脂肪的注射器與一枚新的注射器通過(guò)魯爾接頭將2個(gè)注射器注射口連接起來(lái)，達(dá)到密封對(duì)接，推動(dòng)含有脂肪組織的注射器活塞，將脂肪組織通過(guò)連接器推注至對(duì)側(cè)注射器中，推注速度為20ml/s，如此連續(xù)往返推注1min。

3）取步驟1）留存的油脂，混至上步反復(fù)推注過(guò)的脂肪組織中；

4）將步驟3）獲得的脂肪組織通過(guò)Tulip公司的Nano Transfer進(jìn)行過(guò)濾（過(guò)濾的孔徑不大于0.2mm），將濾液裝入密封注射器內(nèi)，拉開注射器栓，保持注射器內(nèi)負(fù)壓，然后輕微震蕩25秒；輕微震蕩過(guò)程中有絮凝現(xiàn)象出現(xiàn)，表現(xiàn)為蛋花湯樣；將震蕩后的混合物以2200g/min離心5min。

5）經(jīng)步驟4）離心后，混合物分層，頂層為油脂，底層為腫脹液，且油脂層體積占整個(gè)混合物體積的80%及以上，則取中間層產(chǎn)物，得SVF-gel，即為含高度濃縮的脂肪來(lái)源干細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)的移植材料；

若離心后，混合物不分層，或頂層油脂層的體積占整個(gè)混合物體積的80%以下，則將混合物重復(fù)步驟2）~4）的操作，重復(fù)次數(shù)不超過(guò)3次。

上述制備的SVF-gel可應(yīng)用于面部年輕化及軟組織損傷修復(fù)，直接將SVF-gel移植材料置于注射器中，通過(guò)27G細(xì)針頭進(jìn)行真皮內(nèi)注射或局部精確注射填充即可。

下面對(duì)上述實(shí)施例制備的SVF-gel作進(jìn)一步的生物學(xué)特性檢測(cè)。

（1）處理前后SVF-gel的體積濃縮比例及大體觀察

實(shí)驗(yàn)方法：

實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)施例1，除了將實(shí)施例1步驟2）中反復(fù)推注時(shí)間從30s至5min（即0.5min、1min、2min、3min、4min、5min）進(jìn)行梯度增加外，其他步驟不變，檢測(cè)不同推注時(shí)間條件下制得的SVF-gel體積，及相應(yīng)的脫油率。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論：

檢測(cè)結(jié)果如圖4所示，從中圖4A可以看出，相比Control組（對(duì)照組，未經(jīng)處理的顆粒脂肪組織）和Coleman組（實(shí)施例1步驟1）離心后的產(chǎn)物），經(jīng)本發(fā)明一系列物理處理后，大量油脂可被析出，獲得體積非常小的SVF-gel，見(jiàn)圖4A中的0.5min、1min、5min組中下層物質(zhì)。

從中圖4B可以看出，與普通吸脂法（非機(jī)械處理法）獲得的脂肪組織（Control組）相比，本發(fā)明方法所得SVF-gel質(zhì)地均勻富有彈性，可以輕松通過(guò)27g針頭。

從中圖4C可以看出，隨著實(shí)施例1步驟2）中反復(fù)推注時(shí)間的延長(zhǎng)，所得SVF-gel的濃縮比例逐漸增加，當(dāng)推注時(shí)間為0.5min時(shí)，SVF-gel的產(chǎn)出率約為總體積的25%，1min時(shí)SVF-gel的產(chǎn)出率約為總體積的10%，1min以后再增加推注處理時(shí)間，產(chǎn)出率無(wú)明顯變化。

（2）掃描電鏡觀察SVF-gel的結(jié)構(gòu)變化

實(shí)驗(yàn)方法：

實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)施例1，除了將實(shí)施例1步驟2）中反復(fù)推注時(shí)間從1min至5min（即1min、3min、5min）進(jìn)行梯度增加外，其他步驟不變，對(duì)不同推注時(shí)間條件下制得的SVF-gel進(jìn)行掃描電鏡檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論：

檢測(cè)結(jié)果如圖5所示，通過(guò)掃描電鏡觀察，隨著往復(fù)推注處理時(shí)間的延長(zhǎng)，ECM的破碎程度逐漸增加(圖5A)，但是，通過(guò)定量分析，當(dāng)往復(fù)推注處理時(shí)間在3min及以內(nèi)，所得SVF-gel中的ECM破碎程度與未處理相比不具有顯著差異，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖5B）；上述結(jié)果說(shuō)明在反復(fù)推注的過(guò)程中，時(shí)間在不大于3min情況下，ECM仍能保持相對(duì)完整性。

（3）全組織染色觀察脂肪組織與SVF-gel

實(shí)驗(yàn)方法：將對(duì)照組（未經(jīng)處理的脂肪組織）、推注后負(fù)壓震蕩前的脂肪組織（即實(shí)施例1步驟2）處理后的產(chǎn)物）、SVF-gel三種脂肪組織進(jìn)行全組織染色，其中用Hoechst進(jìn)行細(xì)胞核染色，為藍(lán)色；用Lectin進(jìn)行血管內(nèi)皮細(xì)胞（vascular ECs）染色，為紅色；用BODIPY進(jìn)行脂肪細(xì)胞（adipocytes）染色，為黃色；于共聚焦顯微鏡下觀察全組織染色結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論：

檢測(cè)結(jié)果如圖6所示，從中可以看出，全組織染色結(jié)果中，未經(jīng)處理的脂肪組織對(duì)照組和推注后負(fù)壓震蕩前的脂肪組織（即實(shí)施例1步驟2）處理后的產(chǎn)物）中可見(jiàn)大量微小脂滴（圖6，白色箭頭所示）；而經(jīng)絮凝離心并去除油脂后的SVF-gel中，細(xì)胞外基質(zhì)明顯增加（圖6，紅色箭頭所示），成熟脂肪細(xì)胞顯著減少。上述結(jié)果說(shuō)明本發(fā)明所得SVF-gel中成熟細(xì)胞幾乎完全被破碎，其釋放的油脂被完全去除，ECM得到了高度濃縮。

（4）流式細(xì)胞分析SVF-gel中各亞群細(xì)胞數(shù)量

實(shí)驗(yàn)方法：

實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)施例1，除了將實(shí)施例1步驟2）中反復(fù)推注時(shí)間從30s至5min（即0.5min、1min、2min、3min、4min、5min）進(jìn)行梯度增加外，其他步驟不變，將不同推注時(shí)間條件下制得的SVF-gel分別進(jìn)行膠原酶消化獲得單個(gè)SVF細(xì)胞，標(biāo)記CD45、CD31、CD34抗體后，進(jìn)行流式細(xì)胞分析，分析各亞群細(xì)胞數(shù)量。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論：

流式細(xì)胞分析結(jié)果如圖7所示， 本發(fā)明SVF-gel中各細(xì)胞亞群均在推注處理時(shí)間為1min時(shí)數(shù)量達(dá)到最多（圖7 A~E），尤其是其中的脂肪來(lái)源干細(xì)胞ASCs (CD45-/CD31-/CD34+)（圖7C）和內(nèi)皮祖細(xì)胞（圖7D）ECs (CD45-/CD31+/CD34+)得到極高程度的濃縮；其中脂肪來(lái)源干細(xì)胞ASCs與未處理的顆粒脂肪組織相比高出約8倍（圖7C），內(nèi)皮前體細(xì)胞ECs高出約7.5倍（圖7D）。上述結(jié)果說(shuō)明在處理1分鐘時(shí)，SVF-gel中SVF細(xì)胞濃縮程度最高，本發(fā)明方法獲得的移植材料富含高濃度基質(zhì)血管片段細(xì)胞以及細(xì)胞外基質(zhì)。

（5）SVF-gel提取SVF貼壁培養(yǎng)后成脂、成骨誘導(dǎo)分化

實(shí)驗(yàn)方法：

將本發(fā)明制備的SVF-gel進(jìn)行貼壁培養(yǎng)至第三代后，分別進(jìn)行成脂、成骨及成軟骨誘導(dǎo)分化并進(jìn)行相應(yīng)產(chǎn)物染色檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論：

上述檢測(cè)結(jié)果如圖8所示，圖7A為貼壁培養(yǎng)至第三代所得到的ASCs；圖8B為油紅O染色的成脂誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果；圖8C為茜素紅染色的成骨誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果；圖8D為阿爾新藍(lán)染色的成軟骨誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。從中可以看出，本發(fā)明制備的SVF-gel中ASCs增殖及成脂、成骨、成軟骨誘導(dǎo)均正常，并未受到機(jī)械處理的影響。

（6）SVF-gel促進(jìn)創(chuàng)面愈合的檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)方法：

于裸鼠背部構(gòu)建多處皮膚全層缺損模型，將本發(fā)明SVF-gel于創(chuàng)面處注射入創(chuàng)面周圍皮內(nèi)及皮下，于術(shù)后2、4、7、10、14日觀察創(chuàng)面愈合情況并統(tǒng)計(jì)相應(yīng)的受傷面積。同時(shí)設(shè)立對(duì)照組（對(duì)照組采細(xì)胞量為2×10⁴的SVF細(xì)胞懸液進(jìn)行注射）。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論：

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖9A和9B所示，從中可以看出，從手術(shù)后的第7天起，本發(fā)明SVF-gel處理后的受傷面積開始顯著小于對(duì)照組，到第14天時(shí)，基本無(wú)受傷創(chuàng)面，而對(duì)照組還存在明顯的受傷創(chuàng)面。上述結(jié)果說(shuō)明本發(fā)明制備的SVF-gel組進(jìn)行創(chuàng)面愈合的速度明顯優(yōu)于對(duì)照組，本發(fā)明SVF-gel具有很好的創(chuàng)面愈合效果。

上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡(jiǎn)化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。