本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域,具體指N15多肽在制備金黃色葡萄球菌抑制劑中的用途。
背景技術(shù):
金黃色葡萄球菌致病力最強,主要產(chǎn)生溶血素、殺白細(xì)胞素和血漿凝固酶等,造成許多種感染,如癤、癰、膿腫和傷口感染等。金黃色葡萄球菌感染的特點是局限性組織壞死,膿液稠厚、黃色、不臭。也能引起全身性感染,影響人體健康,威脅人類生命安全。為了抑制和消滅病原真菌,人們一直致力于尋找有效的抗病原細(xì)菌藥物。
技術(shù)實現(xiàn)要素:
本發(fā)明的目的在于提供一種多肽,該多肽能夠抑制金黃色葡萄球菌的生長,具有在制備病原細(xì)菌抑制劑中的用途,它已被現(xiàn)有技術(shù)公開,名為N15多肽。
N15多肽是一個具有15個氨基酸的短肽,其序列為甲硫氨酸-脯氨酸-酪氨酸-絲氨酸-蘇氨酸-谷氨酸-亮氨酸-異亮氨酸-苯丙氨酸-酪氨酸-異亮氨酸-谷氨酸-甲硫氨酸-天門冬氨酸-脯氨酸,它具有多種生物學(xué)功能,包括調(diào)節(jié)NF-κB轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合目的基因的能力,影響NF-κB目的基因產(chǎn)物蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄和表達(dá);阻斷PCNA結(jié)合DNA聚合酶,從而阻止細(xì)胞DNA合成抑制細(xì)胞增殖;抑制上皮細(xì)胞增生,調(diào)節(jié)表皮增生及分化,使皮膚角化過程正?;取?/p>
發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在研究中發(fā)現(xiàn)N15多肽能夠?qū)Ω鞣N病原細(xì)菌的生長產(chǎn)生抑制作用。
前期研究表明,在金黃色葡萄球菌中加入N15會起到抑制金黃色葡萄球菌增殖的效果。通過檢測金黃色葡萄球菌內(nèi)DNA含量發(fā)現(xiàn),N15會引起金黃色葡萄球菌內(nèi)的DNA含量的減少,因此N15抑制金黃色葡萄球菌的增殖可能是通過抑制基因組DNA復(fù)制而實現(xiàn)的。此外,實驗結(jié)果還表明N15可以抑制沙門氏菌的生長。
本發(fā)明還提供了一種N15多肽制備的抗真菌藥物,為N15多肽的水溶液,濃度大于等于500μg/mL。
本發(fā)明的有益效果:N15多肽是一種結(jié)構(gòu)清晰,易于工業(yè)化生產(chǎn)的多肽,它可以抑制多種病原細(xì)菌的增殖,效果好且無毒副作用。
附圖說明
圖1為流式細(xì)胞儀檢測N15對金黃色葡萄球菌DNA含量的影響。
具體實施方式
下面結(jié)合附圖和具體實驗例對本發(fā)明作進(jìn)一步的論證說明,以下實驗例僅是對本發(fā)明的解釋而本發(fā)明并不局限于以下實驗例。
實驗例1:N15對金黃色葡萄球菌的生長具有抑制作用
實驗方法:
取金黃色葡萄球菌菌株接種到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面上,37℃下活化培養(yǎng),用接種環(huán)從斜面上挑菌到無菌水中制成菌懸液,接種培養(yǎng)無菌操作下,用取液器吸取100μL體積的菌液到滅菌小離心管中,充分混勻后,迅速注入到滅菌平皿中,在平板中加入N15多肽,以同體積的無菌水的混合液注入作空白,置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時,觀察菌落生長情況,并對菌落計數(shù),結(jié)果見表1。
表1.N15對金黃色葡萄球菌生長抑制結(jié)果對照表
結(jié)果顯示,和對照相比,加入N15多肽的平板上金黃色葡萄球菌的菌落數(shù)明顯減少,N15對金黃色葡萄球菌的生長具有抑制效應(yīng)。
實驗例2:N15對金黃色葡萄球菌的DNA復(fù)制具有抑制效應(yīng)
實驗方法:
制備YEPD液體培養(yǎng)基,培養(yǎng)金黃色葡萄球菌,并加入N15到Y(jié)EPD液體培養(yǎng)基中,同時設(shè)置不加N15多肽的金黃色葡萄球菌作為對照(control),加入N15多肽(終濃度500μg/mL),在處理2小時分別取樣2mL金黃色葡萄球菌菌體,加入Sytox-Green染料對金黃色葡萄球菌細(xì)胞DNA染色后,使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行金黃色葡萄球菌的DNA相對含量進(jìn)行測定,結(jié)果見圖1。
如實驗結(jié)果所示,橫坐標(biāo)表示單個金黃色葡萄球菌細(xì)胞內(nèi)DNA的含量,縱坐標(biāo)表示酵母細(xì)胞數(shù)量。在N15處理2小時內(nèi),N15處理細(xì)胞內(nèi)的DNA含量和對照細(xì)胞相比沒有顯著性差異,而隨著時間的增加,在N15處理15小時以后,N15處理細(xì)胞內(nèi)的DNA含量和對照細(xì)胞相比明顯減少。該結(jié)果表明N15會引起金黃色葡萄球菌細(xì)胞DNA含量的減少。