本發(fā)明涉及植物提取物領(lǐng)域，具體涉及一種毛稔果實(shí)提取物的制備工藝及其抗氧化用途。

背景技術(shù)：

我國野生植物資源品種多，產(chǎn)量較大，質(zhì)量好。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)現(xiàn)，一些野生植物可調(diào)節(jié)人體新陳代謝、降低血壓、降低血膽固醇、預(yù)防和治療多種疾病。一些植物中含有許多抗氧化物質(zhì)，除了具有抗氧化功能外，還有抗菌抗病毒，抗炎和擴(kuò)張血管的作用，具有清除自由基、防止動脈硬化、改善血液循環(huán)、避免細(xì)胞受低氧傷害的功能，對老年性癡呆癥以及延緩機(jī)體衰老有較好的效果。特別是在野生漿果中，抗氧化物含量普遍較高。

毛稔又名甜娘、開口棗，為野牡丹科直立灌木，分布于我國南部，印度，馬來西亞等地。毛稔花朵大而艷麗，是較好的庭院盆栽植物，根葉有收斂止血，消食止痢等藥用價值。毛稔以葉或全株入藥，具有解毒止痛、生肌止血的功效，毛稔的葉中含有黃酮類、糖類成分，全草含黃酮甙、酚類、氨基酸、糖類成分。成熟的果實(shí)香甜可口，可以生吃，亦可用來泡酒。然而，至今尚未有關(guān)于毛稔果實(shí)提取物的報道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種毛稔果實(shí)提取物的制備工藝及其抗氧化用途。

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

毛稔果實(shí)提取物的制備工藝，包括如下步驟：

(1)用60～80℃熱水處理新鮮的毛稔果實(shí)8～15min，撈出后直接勻漿處理，經(jīng)超微粉碎，獲得毛稔果實(shí)超細(xì)粉末；

(2)取毛稔果實(shí)超細(xì)粉末，加入提取液，搖勻，所述提取液為乙醇體積濃度40％～60％的乙醇水溶液；

(3)設(shè)置水浴超聲處理功率為500～700W，溫度為50～70℃，超聲處理后，4000～4500g離心25～35min，收集上清液；

(4)用醋酸調(diào)節(jié)pH至4～6，乙酸乙酯萃取2次，合并萃取液，70～90℃蒸干，得毛稔果實(shí)提取物。

進(jìn)一步的，步驟(1)中，毛稔果實(shí)熱水處理撈出后，直接使用勻漿機(jī)處理至勻漿，經(jīng)超微粉碎膠體磨，調(diào)整磨齒間隙至粉碎粒徑達(dá)10～25μm。

優(yōu)選的，步驟(2)中，所述提取液為乙醇體積濃度40％～50％的乙醇水溶液。

進(jìn)一步的，步驟(2)中，毛稔果實(shí)超細(xì)粉末與提取液的混合比例為1：15～35(g/mL)。

優(yōu)選的，步驟(2)中，毛稔果實(shí)超細(xì)粉末與提取液的混合比例為1：25～35(g/mL)。

進(jìn)一步的，步驟(3)中，水浴超聲時間為15～35min。

優(yōu)選的，步驟(3)中，水浴超聲時間為25～35min。

優(yōu)選的，步驟(4)中，醋酸調(diào)節(jié)pH至4～5。

進(jìn)一步的，步驟(4)中，采用乙酸乙酯萃取2次，每次加入乙酸乙酯的體積為上清液體積的0.9～1.1倍。

上述制備工藝提取得到的毛稔果實(shí)提取物在制備抗氧化劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明的有益效果是：

本發(fā)明結(jié)合了超微粉、超聲輔助提取等技術(shù)，并在此基礎(chǔ)上做了有益的改進(jìn)，制備得到的毛稔果實(shí)提取物能夠最大程度地保持毛稔果實(shí)的抗氧化成分，提取工藝簡單、效率高，適用于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)，可應(yīng)用于抗氧化劑的制備。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1毛稔果實(shí)提取物及提取工藝

用70℃熱水處理新鮮的毛稔果實(shí)10min，撈出后直接使用勻漿機(jī)處理至勻漿，經(jīng)超微粉碎膠體磨，調(diào)整磨齒間隙至粉碎粒徑20μm，獲得毛稔果實(shí)超細(xì)粉末；精確稱量2g的毛稔果實(shí)超細(xì)粉末，加入50mL的提取液，所述提取液為乙醇體積濃度50％的乙醇水溶液；置于水浴型超聲儀器中，設(shè)置超聲功率為600W，60℃超聲處理25min；超聲處理后的提取液，4200g離心30min，收集上清液；用醋酸調(diào)節(jié)pH至4，往上清液中加入乙酸乙酯萃取2次，每次萃取加入乙酸乙酯50mL，合并萃取液，80℃蒸干得毛稔果實(shí)提取物。

實(shí)施例2毛稔果實(shí)提取物及提取工藝

用70℃熱水處理新鮮的毛稔果實(shí)10min，撈出后直接使用勻漿機(jī)處理至勻漿，經(jīng)超微粉碎膠體磨，調(diào)整磨齒間隙至粉碎粒徑10μm，獲得毛稔果實(shí)超細(xì)粉末；精確稱量2g的毛稔果實(shí)超細(xì)粉末，加入50mL的提取液，所述提取液為乙醇體積濃度50％的乙醇水溶液；置于水浴型超聲儀器中，設(shè)置超聲功率為600W，60℃超聲處理25min；超聲處理后的提取液，4200g離心30min，收集上清液；用醋酸調(diào)節(jié)pH至4，往上清液中加入乙酸乙酯萃取2次，每次萃取加入乙酸乙酯50mL，合并萃取液，80℃蒸干得毛稔果實(shí)提取物。

實(shí)施例3毛稔果實(shí)提取物及提取工藝

用70℃熱水處理新鮮的毛稔果實(shí)10min，撈出后直接使用勻漿機(jī)處理至勻漿，經(jīng)超微粉碎膠體磨，調(diào)整磨齒間隙至粉碎粒徑25μm，獲得毛稔果實(shí)超細(xì)粉末；精確稱量2g的毛稔果實(shí)超細(xì)粉末，加入50mL的提取液，所述提取液為乙醇體積濃度50％的乙醇水溶液；置于水浴型超聲儀器中，設(shè)置超聲功率為600W，60℃超聲處理25min；超聲處理后的提取液，4200g離心30min，收集上清液；用醋酸調(diào)節(jié)pH至4，往上清液中加入乙酸乙酯萃取2次，每次萃取加入乙酸乙酯50mL，合并萃取液，80℃蒸干得毛稔果實(shí)提取物。

實(shí)施例4毛稔果實(shí)提取物及提取工藝

用70℃熱水處理新鮮的毛稔果實(shí)10min，撈出后直接使用勻漿機(jī)處理至勻漿，經(jīng)超微粉碎膠體磨，調(diào)整磨齒間隙至粉碎粒徑25μm，獲得毛稔果實(shí)超細(xì)粉末；精確稱量2g的毛稔果實(shí)超細(xì)粉末，加入70mL的提取液，所述提取液為乙醇體積濃度40％的乙醇水溶液；置于水浴型超聲儀器中，設(shè)置超聲功率為700W，50℃超聲處理35min；超聲處理后的提取液，4200g離心30min，收集上清液；用醋酸調(diào)節(jié)pH至4，往上清液中加入乙酸乙酯萃取2次，每次萃取加入乙酸乙酯50mL，合并萃取液，80℃蒸干得毛稔果實(shí)提取物。

實(shí)施例5毛稔果實(shí)提取物及提取工藝

用70℃熱水處理新鮮的毛稔果實(shí)10min，撈出后直接使用勻漿機(jī)處理至勻漿，經(jīng)超微粉碎膠體磨，調(diào)整磨齒間隙至粉碎粒徑20μm，獲得毛稔果實(shí)超細(xì)粉末；精確稱量2g的毛稔果實(shí)超細(xì)粉末，加入57mL的提取液，所述提取液為乙醇體積濃度43％的乙醇水溶液；置于水浴型超聲儀器中，設(shè)置超聲功率為500W，70℃超聲處理35min；超聲處理后的提取液，4200g離心30min，收集上清液；用醋酸調(diào)節(jié)pH至4，往上清液中加入乙酸乙酯萃取2次，每次萃取加入乙酸乙酯50mL，合并萃取液，80℃蒸干得毛稔果實(shí)提取物。

實(shí)施例6毛稔果實(shí)提取物及提取工藝

用70℃熱水處理新鮮的毛稔果實(shí)10min，撈出后直接使用勻漿機(jī)處理至勻漿，經(jīng)超微粉碎膠體磨，調(diào)整磨齒間隙至粉碎粒徑10μm，獲得毛稔果實(shí)超細(xì)粉末；精確稱量2g的毛稔果實(shí)超細(xì)粉末，加入30mL的提取液，所述提取液為乙醇體積濃度60％的乙醇水溶液；置于水浴型超聲儀器中，設(shè)置超聲功率為600W，60℃超聲處理15min；超聲處理后的提取液，4200g離心30min，收集上清液；用醋酸調(diào)節(jié)pH至4，往上清液中加入乙酸乙酯萃取2次，每次萃取加入乙酸乙酯50mL，合并萃取液，80℃蒸干得毛稔果實(shí)提取物。

實(shí)施例7毛稔果實(shí)提取物及提取工藝

用70℃熱水處理新鮮的毛稔果實(shí)10min，撈出后直接使用勻漿機(jī)處理至勻漿，經(jīng)超微粉碎膠體磨，調(diào)整磨齒間隙至粉碎粒徑20μm，獲得毛稔果實(shí)超細(xì)粉末；精確稱量2g的毛稔果實(shí)超細(xì)粉末，加入50mL的提取液，所述提取液為乙醇體積濃度50％的乙醇水溶液；置于水浴型超聲儀器中，設(shè)置超聲功率為600W，60℃超聲處理25min；超聲處理后的提取液，4200g離心30min，收集上清液；用醋酸調(diào)節(jié)pH至5，往上清液中加入乙酸乙酯萃取2次，每次萃取加入乙酸乙酯50mL，合并萃取液，80℃蒸干得毛稔果實(shí)提取物。

實(shí)施例8毛稔果實(shí)提取物及提取工藝

用70℃熱水處理新鮮的毛稔果實(shí)10min，撈出后直接使用勻漿機(jī)處理至勻漿，經(jīng)超微粉碎膠體磨，調(diào)整磨齒間隙至粉碎粒徑20μm，獲得毛稔果實(shí)超細(xì)粉末；精確稱量2g的毛稔果實(shí)超細(xì)粉末，加入50mL的提取液，所述提取液為乙醇體積濃度50％的乙醇水溶液；置于水浴型超聲儀器中，設(shè)置超聲功率為600W，60℃超聲處理25min；超聲處理后的提取液，4200g離心30min，收集上清液；用醋酸調(diào)節(jié)pH至6，往上清液中加入乙酸乙酯萃取2次，每次萃取加入乙酸乙酯50mL，合并萃取液，80℃蒸干得毛稔果實(shí)提取物。

對比例1

取新鮮毛稔果實(shí)清洗干凈，自然晾干，采用中藥粉碎機(jī)粉碎至75μm，獲得毛稔果實(shí)粉末；精確稱量2g的毛稔果實(shí)超細(xì)粉末，加入50mL的提取液，所述提取液為乙醇體積濃度50％的乙醇水溶液；置于水浴型超聲儀器中，設(shè)置超聲功率為600W，60℃超聲處理25min；超聲處理后的提取液，4200g離心30min，用醋酸調(diào)節(jié)pH至4，往上清液中加入乙酸乙酯萃取2次，每次萃取加入乙酸乙酯50mL，合并萃取液，80℃蒸干得毛稔果實(shí)提取物。

對比例2

取新鮮毛稔果實(shí)清洗干凈，自然晾干，采用中藥粉碎機(jī)粉碎至75μm，獲得毛稔果實(shí)粉末；精確稱量2g的毛稔果實(shí)超細(xì)粉末，加入提取液進(jìn)行熱回流提取3次，所述提取液為乙醇體積濃度90％的乙醇水溶液，每次提取2小時，每次用提取液50mL，合并提取液，濃縮至無醇味，濃縮液依次用石油醚(80mL×3次)、乙酸乙酯(80mL×3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物；減壓濃縮，80℃蒸干得毛稔果實(shí)提取物。

抗氧化能力評價

將實(shí)施例1～8，對比例1～2毛稔果實(shí)提取物用去離子水稀釋到能抑制20％～80％的空白吸光度，采用ABTS法測定抗氧化能力，選擇Trolox作為參照標(biāo)準(zhǔn)。

表1各例提取的毛稔果實(shí)提取物的TEAC值

如表1所示，實(shí)施例1～5和7制備的毛稔果實(shí)提取物的TEAC值高于900(μmol Trolox/g DW)，說明在此提取工藝下，能夠最大程度地保留毛稔果實(shí)提取物的抗氧化活性。對比例1與實(shí)施例1～3的區(qū)別在于毛稔果實(shí)粉末的制備，可見超微粉碎工藝更利于毛稔果實(shí)提取物抗氧化物活性的保留；對比例2是采用常規(guī)工藝提取毛稔果實(shí)的抗氧化物，其TEAC值達(dá)到814.59μmol Trolox/g DW，亦有較好的提取效果。

毛稔果實(shí)提取物的多酚類成分分析

分別準(zhǔn)確稱取適量多酚類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(綠原酸、咖啡酸、大豆黃素、雌馬酚、表兒茶素、表沒食子兒茶素、表兒茶素沒食子酸酯、阿魏酸、染料木素、黃豆黃素、對羥基肉桂酸、原兒茶酸、槲皮素、蘆丁、白藜蘆醇)，用甲醇溶解，制得質(zhì)量濃度均為1g/L的單標(biāo)準(zhǔn)儲備液。再取適量體積的單標(biāo)準(zhǔn)儲備液置于容量瓶中，用甲醇定容，制備成濃度為1mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液。用同樣的方法稀釋實(shí)施例1的毛稔果實(shí)提取物，作為樣品液。

采用AB Sciex 4000Qtrap液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，對提取物中的多酚類成分進(jìn)行定性和定量。利用Acquity HSS T3柱對成分進(jìn)行分離。流動相由溶液A(0.1％甲酸溶液，V/V)和溶液B(甲醇)組成，流動相流速為0.3ml/min。梯度洗脫程序為：0-2min，15％B；2-8min，15-30％B；8-15min，30-80％B；15-17.5min，80％B；17.5-19.5min，15％B。進(jìn)樣量為2μL。離子源：電噴霧離子源，掃描方式：多離子反應(yīng)監(jiān)測，離子源溫度：550℃，毛細(xì)管電壓：-4.5KV。

結(jié)果顯示：在毛稔果實(shí)提取物中，鑒定出了7種多酚類成分。其中包括表兒茶素沒食子酸酯(1019.57±99.39μg/g DW)，表兒茶素(90.34±4.84μg/g DW)，蘆丁(61.6±1.59μg/g DW)，表沒食子兒茶素(28.67±2.62μg/g DW)，原兒茶酸(3.22±0.23μg/g DW)，綠原酸(2.34±0.28μg/g DW)，槲皮素(1.39±0.18μg/g DW)。