本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體的說，本發(fā)明涉及一種治療耳腫脹的藥物組合物。

背景技術(shù)：

炎癥是損傷和抗損傷的統(tǒng)一過程。盡管炎性反應(yīng)過程中，通過實(shí)質(zhì)和間質(zhì)細(xì)胞的再生使受損的組織得以修復(fù)和愈合，但損傷因子直接或間接造成組織和細(xì)胞的破壞，也會(huì)給機(jī)體帶來損傷。目前的抗炎藥物仍存在許多問題，如選擇性較差，會(huì)引起腸胃道不適，腎衰竭和心功能衰竭等副作用。因此尋找安全有效的抗炎藥物，以及選擇合適的動(dòng)物模型評(píng)價(jià)抗炎藥物的藥效和機(jī)制仍是目前關(guān)注的問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種治療耳腫脹的藥物組合物。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供一種治療耳腫脹的藥物組合物，所述藥物組合物包含下式的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、和藥學(xué)上可以接受的載體：

其中

R1獨(dú)立地選自：H或烷基；

優(yōu)選地，R1為CH₃。

更優(yōu)選地，所述藥學(xué)上可接受的載體為稀釋劑、崩解劑、粘合劑、潤滑劑、穩(wěn)定劑或矯正劑。

更優(yōu)選地，所述藥物組合物可以制成散劑、顆粒劑、膠囊劑或片劑。

本發(fā)明還提供化合物在制備治療耳腫脹的藥物中的用途，所述化合物具有下列結(jié)構(gòu)：

其中

R1獨(dú)立地選自：H或烷基；

優(yōu)選地，R1為CH₃。

本發(fā)明藥物療效確切，毒副作用小，能顯著緩解耳腫脹炎癥，有望研制成為臨床上的新藥。

附圖說明

圖1是本發(fā)明藥物對(duì)AA致小鼠蛋白滲出量的影響。

圖2是本發(fā)明藥物對(duì)LTB₄生成量的影響。

圖3是組織病理學(xué)檢查結(jié)果。

具體實(shí)施方式

為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。

實(shí)驗(yàn)例1本發(fā)明藥物的表征

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm1.63-1.78(m,4H)1.91(br.s.,4H)2.99(br.s.,2H)3.09-3.21(m,2H)3.46(br.s.,2H)3.58-3.68(m,2H)3.73(s,3H)3.88(s,3H)3.96(s,2H)6.55-6.64(m,2H)6.78(m,J＝8.20,1.60Hz,1H)6.89-6.98(m,2H)7.21(t,J＝7.83Hz,1H)7.79(dd,J＝8.20,1.37Hz,1H)8.01(d,J＝1.40Hz,1H)8.34(d,J＝8.22Hz,1H)11.62(s,1H)；HRMSm/z487.2701(M+H)⁺。

實(shí)驗(yàn)例2本發(fā)明藥物對(duì)于耳腫脹的治療效果

選取雄性ICR小鼠，根據(jù)文獻(xiàn)(Young JM,SpiresDA,BedordCJ,etal.The mouse ear in flammatory response to topical arachidonicacid[J].Journal of Investigative Dermatology,1984,82(4):367-371.)的方法，用磷酸緩沖鹽溶液(PBS)配制體積分?jǐn)?shù)為0.5％的依文斯藍(lán)溶液，用0.20μm濾膜過濾除菌。雄性ICR小鼠隨機(jī)分為4組，分別為模型組，本發(fā)明藥物高、中、低劑量組。造模前，為了測定蛋白滲出量，先將所有的實(shí)驗(yàn)小鼠尾靜脈注射0.20mL依文斯藍(lán)溶液。依據(jù)分組，將所有實(shí)驗(yàn)小鼠右耳耳廓正反兩面涂抹20.0μL質(zhì)量濃度分別為62.50、125.00和250.00mg/mL的本發(fā)明藥物，即實(shí)驗(yàn)小鼠分組I為模型組，II為本發(fā)明藥物低劑量組(1.25mg/耳)，Ⅲ為本發(fā)明藥物中劑量組(2.50mg/耳)，IV為本發(fā)明藥物高劑量組(5.00mg/耳)。30min后，將所有小鼠右耳耳廓正反面涂20.00μL花生四烯酸(100mg花生四烯酸1mL溶于丙酮)造模，1h后，擦除實(shí)驗(yàn)小鼠耳朵殘留物，檢測小鼠的耳腫脹各項(xiàng)指標(biāo)。

耳腫脹度的測量

花生四烯酸刺激1h后，小鼠頸椎脫臼處死，剪下雙側(cè)耳朵，用直徑6mm打孔器雙側(cè)同樣位置打孔，立即用電子天平稱量耳片質(zhì)量，并用游標(biāo)卡尺測量耳片厚度。小鼠耳腫脹程度用每只小鼠同位置同面積耳片的質(zhì)量差(m_R－m_L)和厚度差(d_R－d_L)來評(píng)價(jià)。其中，m_R和d_R為發(fā)炎右耳片的質(zhì)量及厚度；m_L和d_L為未發(fā)炎左耳片的質(zhì)量及厚度。

蛋白滲出量的檢測

花生四烯酸刺激1h后，小鼠頸椎脫臼處死，剪下雙側(cè)耳朵，用直徑6mm打孔器雙側(cè)同樣位置打孔，耳片放在對(duì)應(yīng)的EP管中，加入1mL酰胺，置于55℃水浴中充分震蕩24h后，在酶標(biāo)儀610nm波長處測量光密度值(OD)，記作D(610)。耳組織染料滲出液的變化為D(610)_R-D(610)_L。

本發(fā)明藥物對(duì)小鼠腫脹耳片中LTB₄含量測定

LTB₄是目前發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)效的炎癥趨化介質(zhì)之一，也是一種炎癥性疼痛的介質(zhì)。所以LTA₄H(花生四烯酸代謝產(chǎn)物)可以作為很重要的抗炎靶點(diǎn)。藥物對(duì)LTA₄H的影響可以通過對(duì)其產(chǎn)物L(fēng)TB₄的測定來判斷藥物對(duì)純化酶的抑制作用強(qiáng)弱。

將耳片放在EP管中，液氮研碎，加入500μL乙醇震蕩混勻后12000r/min離心取上清，用LTB₄ELISA試劑盒檢測LTB₄的含量。

組織病理學(xué)分析

先將小鼠耳片完整剪下，用體積分?jǐn)?shù)為10％的福爾馬林溶液固定。耳片脫水后石蠟包埋，切片機(jī)接近耳根部位切片，進(jìn)行H&E染色。50×光學(xué)顯微鏡下拍片，觀察小鼠耳腫脹程度和炎癥細(xì)胞浸潤聚集情況。

本發(fā)明藥物對(duì)5-LOX(花生四烯酸代謝通路中的關(guān)鍵酶)活性的影響

通過ELISA方法和脂氧化酶抑制劑篩選試劑盒，測定本發(fā)明藥物對(duì)5-LOX的酶活性的抑制作用強(qiáng)弱。在96孔板內(nèi)，空白對(duì)照組加入50.00μL反應(yīng)緩沖液，100％純酶活性組加入49.50μL5-LOX純酶稀釋液和0.50μL二甲基亞颯(DMSO)，給藥組加入49.50μL5-LOX純酶稀釋液和0.50μL溶于DMSO的本發(fā)明藥物的溶液；然后，每孔加入5μL底物亞麻酸，25℃震蕩孵育5min后，加入顯色劑色原酮50.00μL/孔，25℃震蕩孵育5min后終止反應(yīng)，在酶標(biāo)儀上檢測D(490)值，計(jì)算抑制率為

采用SPSS19.0軟件，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用表示，兩組比較用t-檢驗(yàn)，多組比較用方差分析。P<0.05時(shí)表示差異顯著。半抑制濃度(IC₅₀)值由半數(shù)效應(yīng)圖計(jì)得。

本發(fā)明藥物對(duì)花生四烯酸致小鼠耳腫脹度的影響

以耳朵局部涂抹給藥方式來評(píng)價(jià)本發(fā)明藥物對(duì)小鼠耳腫脹的作用，結(jié)果見下表。

表1本發(fā)明藥物對(duì)花生四烯酸致小鼠耳質(zhì)量差的影響

¹⁾表示與模型組比較P<0.05；²⁾表示與模型組比較P<0.01。

表2本發(fā)明藥物對(duì)花生四烯酸致小鼠耳厚度差的影響

¹⁾表示與模型組比較P<0.05；²⁾表示與模型組比較P<0.01

從表中看出，局部涂花生四烯酸能引起耳朵發(fā)紅、腫脹。與模型組相比，本發(fā)明藥物可以明顯減少小鼠耳質(zhì)量差(表1)及厚度差(表2)，并呈一定量效關(guān)系，說明本發(fā)明藥物對(duì)耳腫脹程度有明顯抑制作用。

本發(fā)明藥物對(duì)花生四烯酸致小鼠蛋白滲出量的影響

蛋白滲出量以伊文思藍(lán)染料滲出量表示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明藥物能顯著抑制小鼠腫脹耳朵的染料滲出，低、中、高劑量組的抑制率分別為22.13％、41.50％和60.66％，結(jié)果見圖1。

本發(fā)明藥物對(duì)耳腫脹小鼠耳中LTB₄生成量影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，局部涂花生四烯酸能引起LTB₄成量顯著升高。本發(fā)明藥物能顯著抑制LTB₄生成量，低、中、高劑量組的抑制率分別為65.63％、81.25％和87.50％，見圖2。

組織病理學(xué)檢查結(jié)果

在50×光學(xué)顯微鏡下觀察，耳組織病理切片結(jié)果如圖3。由圖3可見，模型組花生四烯酸刺激的耳朵出現(xiàn)水腫現(xiàn)象，膠原纖維間隙增大，但是炎性細(xì)胞浸潤現(xiàn)象不明顯。本發(fā)明藥物處理組耳朵厚度較對(duì)照組明顯有所減小，水腫程度降低。

本發(fā)明藥物對(duì)5-LOX的影響

為研究本發(fā)明藥物對(duì)5-LOX的作用機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)就本發(fā)明藥物對(duì)花生四烯酸通路中關(guān)鍵酶5-LOX以及COX-2的活性影響進(jìn)行了檢測。結(jié)果顯示，本發(fā)明藥物對(duì)5-LOX的酶活性有明顯的抑制作用，且呈現(xiàn)劑量依賴性，其半數(shù)抑制濃度IC₅₀值為12.16μmol/L，結(jié)果見下表。本發(fā)明藥物對(duì)COX-2無明顯抑制作用。