專利名稱：從青脆枝中提取的生物堿及其應(yīng)用和含該堿的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從青脆枝(MAPPIA FOETIDA)中提取的新型生物堿及其在治療上的應(yīng)用以及含該生物堿的組合物。
本發(fā)明的生物堿具有以下結(jié)構(gòu)式(I) 氟艾替丁(foetidine)1R＝H氟艾替丁2R＝OCH3。
通過用酸或堿，或用水解酶處理，氟艾替丁1和2可以分別定量地釋出在腫瘤學(xué)領(lǐng)域和治療一些病毒疾病中是已知的生物堿－喜樹堿或其衍生物，一種已在藥理學(xué)上和臨床上廣泛試驗(yàn)的分子，或9－甲氧基喜樹堿，其用于上述相同的癥狀。
式(II)的喜樹堿， 與其它的化合物一起首次從喜樹(Camptoteca acuminata)(珙桐科)和其中為青脆枝(Olinaceae)的其它的植物中分離出來；雖然對(duì)后者已研究了很長的時(shí)間，可是進(jìn)一步的化學(xué)篩選卻出乎意料地發(fā)現(xiàn)了這些新型的生物堿，甚至在加工該種植物的粗提取物時(shí)，也可以得到喜樹堿。
在產(chǎn)生喜樹堿的化合物中，特別重要的是氟艾替丁1，這是由于它在植物中的含量相當(dāng)豐富。通過光譜分析和化學(xué)降解，對(duì)其結(jié)構(gòu)式的闡明可以得到一種化合物的鑒定結(jié)果，其特征在于具有以香豆酸雙酯化的亞精胺單元，該單元依次被開鏈的喜樹堿單元酯化(參見式(I))。該化合物含于植物的各個(gè)部分，但尤以種子和根莖中為多，其含量為0.1－0.5％。與喜樹堿相比，它的優(yōu)點(diǎn)是在微酸性pH下易溶于水；相反，喜樹堿在水中甚至在生物學(xué)上適用的所有載體中均完全不溶解，因此，從半合成的角度進(jìn)行了充分的研究，以期消除這一缺陷。
氟艾替丁1是用低分子量的脂族醇或酮(單一的或在室溫下與水的混合物)萃取植物的不同部分而得到的；將萃取液在低溫和真空下濃縮，優(yōu)選低于25℃；除去有機(jī)相，并用氯化的溶劑萃取濃縮水溶液，以提取含量極低的堿性生物堿，其中含有喜樹堿、9－甲氧基喜樹堿和mappicines；其后，用正丁醇或水不溶混的醇類萃取水相，隨后，將其在低溫和真空下濃縮至干。由丁醇萃取而得的殘?jiān)?，在硅膠或類似的吸附劑上純化，用作氯化溶劑的洗脫劑混合物，優(yōu)選二氯甲烷，和脂族醇類，優(yōu)選甲醇或乙醇。優(yōu)選采用4∶1至1∶1的混合物。將本發(fā)明含有生物堿的部分合并、濃縮至干，殘?jiān)捎弥苽湫訦PLC，使用例如，LiClichrotrep RP8柱進(jìn)一步純化，并以甲醇/水之比從1∶1開始直到純甲醇的甲醇/水洗脫梯度洗脫。含生物堿的部分在低溫和真空下濃縮，并將濃縮的水溶液冷凍干燥。通過結(jié)晶而制得純的生物堿。
將所得的化合物進(jìn)行對(duì)人體腫瘤細(xì)胞系(卵巢、乳房、結(jié)腸、肺、對(duì)其它抗癌劑和類似的藥劑是否有抗性)以及對(duì)某些病毒菌株的生物評(píng)價(jià)。事實(shí)上，已經(jīng)知道喜樹堿或它的一些較好的衍生物具有與抑制DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I和II有關(guān)的細(xì)胞毒活性。
細(xì)胞毒性，例如對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞系約為25nM。氟艾替丁1的抗病毒活性，即使涉及菌株的不同耐藥性，也可在1－100ng/ml的濃度下產(chǎn)生作用。氟艾替丁2在9－位上的甲氧基與氟艾替丁1的不同，但其作用類似。胞疹、細(xì)胞巨噬病毒和HIV病毒被證明對(duì)本發(fā)明的生物堿敏感。
本發(fā)明的化合物可以摻入各種藥品的組合物中，但最重要的是在與血液相容的pH下，以水溶液的形式，很容易通過腸道外引入機(jī)體，而不致產(chǎn)生例如沉淀或不相容的問題。在該組合物中，所有傳統(tǒng)的藥用賦形劑均可采用。這些新型生物堿的劑量可為每次劑量和療程為0.5－200mg。約50mg/m2的劑量被證明具有初步的療效。
下列實(shí)施例將對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)說明，但對(duì)本發(fā)明的范圍絕無限制。實(shí)施例1從青脆枝的種子中制備氟艾替丁15kg磨細(xì)的青脆枝種子用50L丙酮在室溫和攪拌下萃取3次，將丙酮萃取液合并，在真空下將其濃縮至10L；用10L1％的檸檬酸溶液稀釋該濃縮液，將不溶物過濾，并棄去，而氫化丙酮相則用二氯甲烷反相萃取，直至生物堿中可被萃取的物質(zhì)(喜樹堿、甲氧基喜樹堿等)完全提盡為止；將氫化丙酮相濃縮并轉(zhuǎn)移到水中，在pH7.5下中和后，用正丁醇萃取該濃縮液，直至將氟艾替丁1和2萃取至盡。將正丁醇溶液濃縮，并將殘?jiān)稍铮吹玫郊s200g的丁醇組分，其如下分級(jí)分餾將30g丁醇組分在500g硅膠上層析，首先用4∶1的二氯甲烷/甲醇混合物洗脫該柱，隨后用7∶3相同溶劑的混合物洗脫。用7∶3混合物洗脫的含于組分中的產(chǎn)品在LiChroprep RP8柱上純化，用甲醇/水梯度洗脫。將含有氟艾替丁1和2的組分合并，在真空和低于30℃下濃縮至干，將殘?jiān)鼜谋?己烷中結(jié)晶，得到5.1g氟艾替丁1，其具有的特征如下m.p.157－58℃；αd＝－37.9(c＝0.31，MeOH)。1H-NMR(300MHz，DMSO d6)8.60(1H，s，H-7)，8.19(1H，t，J＝5.2，H-10′)，8.15(1H，d，J＝8.6，H-12)，8.05(1H，d，J＝8.6，H-9)，8.04(1H，t，J＝5.2，H-19′)，7.80(1H，t，J＝7.8，H-11)，7.65(1H，t，J＝7.8，H-10)，7.35(2H，d，J＝8.6，H-3′+H-5′)，7.34(2H，d，J＝8.6，H-24′+H-28′)，7.29(1H d，J＝15.8，H-7′)，7.28(1H，d，J＝15.8，H-22′)，6.76(4H，d，J＝8.6H-2′+H-6′+H-25′+H-27′)，6.36(1H，d，J＝15.8，H-8′)，6.35(1H，d，J＝15.8，H-21′)，5.58，5.41(2H，體系A(chǔ)B，J＝10.6，H-17)，5.18(2H，s，H-5)，3.21(2H，m，H-11′)，3.13(2H，m，H-18′)，2.84(4H，bt，J＝7.2，H-13′+H-15′)，2.02(1H，m，H-19A)，1.96(3H，s，CH3CO)，1.90(1H，m，H-19B)，1.74(2H，m，H-12′)，1.55(2H，m，H-16′)，1.46(2H，m，H-17′)，0.84(3H，t，J＝7.2，H-18)13C-NMR(78.1MHz，DMSO d6)δ175.23(s，C-21)，170.81(s，CH3CO)，166.27(s，C-9′)，165.83(s，C-20′)，161.43(s，C-16a)，159.40(s，C-1′)，159.14(s，C-15)，153.50(s，C-2)，148.36(s，C-13)，143.56(s，C-3)，139.37(d，C-7)，139.06(d，C-22′)，131.74(d，C-7)，130.58(d，C-11)，130.33(s，C-6)，129.63(s，C-3′+C-5′)，129.56(d，C-24′+C-28′)，129.40(d，C-12)，128.83(d，C-9)，128.23(s，C-8)，127.78(d，C-10)，126.23(d，C-4′)，126.13(s，C-23′)，123.42(s，C-16)，119.01(d，C8′)，118.68(d，C-21′)，116.18(d，C-2′+C-6′+C-25 ′+C-27 ′)，100.68(d，C-14)，80.28(d，C-20)，59.87(t，C-17)，50.45(t，C-5)，47.23(t，C-13′)，45.36(t，C-15′)，38.41(t，C-18)，36.36(t，C-11′)，33.40(t，C-19)，26.99(t，C-12′)，26.87(t，C-17′)，24.04(t，C-16′)，21.22(α，CH2CO)，9.29(α，C-18)。
從氟艾替丁1的結(jié)晶母液中，通過在反相的相同色譜洗脫劑純化，即可得到氟艾替丁2(1.2g)，其具有的特征如下m.p.172－4℃，αd＝－44.6(c0.35，MeOH)。除在3.2ppm芳環(huán)上的－OCH3的信號(hào)外，NMR光譜與氟艾替丁1的是可重疊的。實(shí)施例2制備含有氟艾替丁1的冷凍干燥安瓿將5g氟艾替丁1溶于500ml含有1.2g檸檬酸的蒸餾水中，將該溶液過濾、滅菌，然后在無菌室內(nèi)將其裝入100個(gè)安瓿中，并快速冷凍和冷凍干燥。
權(quán)利要求
1.通式(I)的化合物 其中，R是氫或甲氧基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，氟艾替丁1中的R是氫。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，氟艾替丁2中的R是甲氧基。
4.一種制備根據(jù)權(quán)利要求1的化合物的方法，該方法包括下列步驟a)在室溫下用低分子量的脂族醇類或酮類或與水的混合物萃取植物的各個(gè)部分；b)在溫度低于25℃和真空下濃縮該萃取液；c)用氯化溶劑萃取通過部分除去有機(jī)溶劑而得到的氫化丙酮濃縮液，以萃取堿性較低的生物堿；d)用正丁醇或水不溶混的醇類萃取水相；e)通過在低溫和真空下濃縮而得的丁醇萃取液，采用色譜法在硅膠上或類似的吸附劑上，用氯化溶劑和脂族醇類作為溶劑對(duì)其進(jìn)行純化；f)將含有生物堿的組分濃縮至干，用制備HPLC純化殘?jiān)约状?水之比從1∶1開始直至純甲醇的甲醇/水梯度洗脫；g)冰凍干燥所得的萃取水溶液并結(jié)晶出純生物堿。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中在步驟e)中二氯甲烷和甲醇或乙醇分別作為氯化的溶劑和脂族醇類，并按4∶1至1∶1的比例混合。
6.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中在步驟f)中采用LiChro-prep RP8柱。
7.含有權(quán)利要求1－3的化合物作為活性組分的藥用組合物。
8.權(quán)利要求1－3的化合物用于制備具有抗病毒作用的藥物的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及從青脆枝中提取的具有抗癌和抗病毒特性的新型生物堿氟艾替丁1和2。這些生物堿能溶于水，存在于植物的各個(gè)部分，且為喜樹堿和9-甲氧基喜樹堿(是已知具有藥效特性的生物堿，但卻不溶于水)的前體。該新型的化合物具有特殊的水溶性，可使它們適合于通過胃腸道外注入肌體為病人治療，避免使用賦形劑或不適用的化學(xué)衍生物。
文檔編號(hào)A61K35/00GK1121075SQ94114908
公開日1996年4月24日 申請(qǐng)日期1994年7月30日 優(yōu)先權(quán)日1994年5月30日
發(fā)明者E·博馬德里, G·馬迪奇, L·韋洛塔 申請(qǐng)人:因迪納有限公司