專利名稱：來自mage－2的分離的肽的制作方法
相關(guān)申請本申請是現(xiàn)已授權(quán)的1994年3月24日申請的系列號08/217,188的部分繼續(xù)申請。
本發(fā)明的領(lǐng)域本發(fā)明涉及免疫遺傳學(xué)和肽化學(xué)。更具體地說。本發(fā)明涉及以各種方式使用的，包括作為免疫原和作為HLA-A2分子的配體使用的十一肽，十肽和九肽。更具體地說，本發(fā)明涉及來自基因MAGE-2編碼的腫瘤排斥抗原前體的且由MHC-1型分子HLA-A2提供的所謂的“腫瘤排斥抗原”。
背景和現(xiàn)有技術(shù)現(xiàn)已用許多不同的方式對宿主生物識別或不能識別的癌細(xì)胞進(jìn)行了研究。對該領(lǐng)域的了解利用了對基礎(chǔ)免疫學(xué)和腫瘤學(xué)的一些了解。
對小鼠腫瘤的早期研究揭示了當(dāng)一些顯示分子移植進(jìn)同源動物時會導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞排斥。這些分子被受體動物的T-細(xì)胞識別，并激發(fā)裂解移植細(xì)胞的溶胞性T-細(xì)胞反應(yīng)。采用諸如甲基膽蒽的化學(xué)致癌劑體外誘導(dǎo)的腫瘤首先獲得了這一證據(jù)。發(fā)現(xiàn)由腫瘤表達(dá)且誘導(dǎo)T-細(xì)胞反應(yīng)的該抗原對各種腫瘤是不同的。參見Prehn等，國家癌癥研究所雜志18:769-778(1957)；klein等，癌癥研究20:1561-1572(1960)；Gross，癌癥研究，3:326-333(1943)，Basombrio，癌癥研究，30:2458-2462(1970)關(guān)于用化學(xué)致癌劑誘導(dǎo)腫瘤和細(xì)胞表面抗原區(qū)別的一般性教導(dǎo)。這類抗原被稱為“腫瘤特異性移植抗原”或“TSTA”。當(dāng)以化學(xué)致癌劑誘導(dǎo)觀察到存在該抗原后，經(jīng)紫外線輻射體外誘導(dǎo)腫瘤時也獲得相似的結(jié)果。參見Kripke，國家癌癥研究所雜志53:333-1336(1974)。
盡管對上文所述類型的腫瘤觀察到T-細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，但據(jù)認(rèn)為自發(fā)腫瘤一般無免疫原性。因此據(jù)認(rèn)為在攜帶腫瘤的受試者中不存在激發(fā)與腫瘤反應(yīng)的抗原。參見Hewitt等，Brit，癌癥雜志33:241-259(1976)。
存在tum-抗原細(xì)胞系的家族是經(jīng)過誘變小鼠腫瘤細(xì)胞或細(xì)胞系獲得的免疫原性變異體，如Boont，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，152:1184-1193(1980)所述，其說明書作為參考文獻(xiàn)引用。詳細(xì)來說，經(jīng)過突變在同源小鼠中不產(chǎn)生免疫反應(yīng)，但形成腫瘤的腫瘤細(xì)胞(即，“tum+”細(xì)胞)獲得tum-抗原。當(dāng)誘變這些tum+細(xì)胞時，它們受同源小鼠排斥并且不能形成腫瘤(從而變?yōu)椤皌um-”)。參見Boon等，美國科學(xué)院院刊74:272(1977)，其說明書作為參考文獻(xiàn)引用。己顯示許多腫瘤類型表現(xiàn)出這種現(xiàn)象。參見，例如，F(xiàn)rost等，癌癥研究，43:125(1983)。
Tum-變異體不能形成進(jìn)行性腫瘤似乎是因?yàn)樗鼈兤饎恿嗣庖吲懦膺^程。支持該假設(shè)的證據(jù)包括腫瘤“tum-”變異體，即在正常情況下不形成腫瘤的變異體在以亞致死輻射抑制免疫系統(tǒng)的小鼠中具有形成腫瘤的能力，van Pel等，美國科學(xué)院院刊76:5282-5285(1979)；以及如下的觀察結(jié)果，即腹膜內(nèi)注射的肥大細(xì)胞瘤P815的tum-細(xì)胞在12-15天內(nèi)指數(shù)繁殖且然后在淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞流入期間僅幾天后即被清除(Uyttenhove等，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，152:1175-1183(1980))。進(jìn)一步的證據(jù)包括如下的觀察結(jié)果，即小鼠可獲得免疫記憶，使其能抵抗隨后對相同tum-變異體的攻擊，即使在隨后的細(xì)胞攻擊時給予免疫抑制劑量的輻射時也是如此(Boon等，美國科學(xué)院院刊，74:272-275(1977)；Van Pel等，出處同上；Uyttenhove等，出處同上)。隨后的研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)對自發(fā)腫瘤進(jìn)行誘變時，產(chǎn)生不發(fā)生反應(yīng)的免疫原性變異體。事實(shí)上，這些變異體能誘導(dǎo)抗原始腫瘤的免疫保持性反應(yīng)。參見Van Pel等，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，157:1992-2001(1983)。因此，已表明可誘導(dǎo)在腫瘤中出現(xiàn)所謂的“腫瘤排斥抗原”，它是同源排斥反應(yīng)的靶子。將外源基因轉(zhuǎn)染進(jìn)自發(fā)性腫瘤時已獲得了相似的結(jié)果。這方面參見Fearon等，癌癥研究，48:2975-1980(1988)。
已識別了一類抗原，它們存在于腫瘤細(xì)胞的表面并且被溶胞性T細(xì)胞識別，導(dǎo)致裂解。這類抗原下文稱為“腫瘤排斥抗原”或“TRAs”。TRA可以或不能誘導(dǎo)抗體反應(yīng)。研究這些抗原的程序是經(jīng)過體外溶胞性T細(xì)胞進(jìn)行鑒定研究，即，經(jīng)過特定溶胞性T細(xì)胞(下文稱為“CTL”)亞類鑒定該抗原的研究。當(dāng)識別存在的腫瘤排斥抗原時，該亞類增生，并且存在腫瘤排斥抗原的細(xì)胞被裂解。鑒定研究已鑒定了特異性裂解表達(dá)腫瘤排斥抗原的細(xì)胞的CTL克隆。該研究的例子可參見Levy等，癌癥研究進(jìn)展，24:1-59(1977)；Boon等，實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，152:1184-1193(1980)；Brunner等，免疫學(xué)雜志，124:1627-1634(1980)；Maryanskit，歐洲免疫學(xué)雜志，124:1627-1634(1980)；Maryanski等，歐洲免疫學(xué)雜志，12:406-412(1982)；Palladino等，癌癥研究，47:5074-5079(1987)。這類分析需要CTLs識別的其它類抗原，包括次要組織相容性抗原、雄性特異性H-Y抗原，和在本文中討論的稱為“tum-”抗原的一類抗原。
上文所述的受試者材料舉例性的腫瘤稱為P815。參見Deplaen等，美國科學(xué)院院刊85:2274-2278(1988)；Szikora等，EMBO J9:10141-1050(1990)和Sibille等，實(shí)驗(yàn)方法雜志，172:35-45(1990)，其公開內(nèi)容作為參考文獻(xiàn)引用。P815腫瘤是用甲基膽蒽在DBA/2小鼠中誘導(dǎo)并作為體外腫瘤和細(xì)胞系培養(yǎng)的肥大細(xì)胞瘤。誘變后P815細(xì)胞系產(chǎn)生了許多tum-變異體，包括稱為P91A(Deplaen，出處同上)、35B(Szikora，出處同上)和P198(Sibille，出處同上)的變異體。與腫瘤排斥抗原相反，且作為一種關(guān)鍵性區(qū)別的是，tum-抗原僅在誘變腫瘤細(xì)胞后存在。腫瘤排斥抗原存在于未誘變的給定腫瘤的細(xì)胞上。因此，參見參考文獻(xiàn)，細(xì)胞系可以是tum+，如稱為“P1”的細(xì)胞系，且可被誘導(dǎo)產(chǎn)生tum-變異體。由于tum-表型不同于親本細(xì)胞系，因此預(yù)期與其tum+親本細(xì)胞系相比在tum-細(xì)胞系的DNA中有區(qū)別，且該區(qū)別可用于定位tum-細(xì)胞中的感興趣的基因。結(jié)果，發(fā)現(xiàn)諸如P91A、35B和P198的tum-變異體基因與其正常等位基因的區(qū)別在于在該基因的編碼區(qū)存在點(diǎn)突變。見Szikora和Sibille，出處同上，和Lurquin等，細(xì)胞58:293-303(1989)。用本發(fā)明的TRA證實(shí)并非如此。這些論文還證實(shí)來自tum-抗原的肽由CTLs識別的Ld分子提供。P91A由Ld提供，P35由Dd提供，P198由Kd提供。
與本申請屬于同一受讓人的1992年5月22日申請的PCT申請PCT/US92/04354教導(dǎo)了稱為MAGE家族的編碼人腫瘤排斥抗原前體的基因家族。一些這類基因也在van der Bruggen等，科學(xué)254:1643(1991)中描述?，F(xiàn)已清楚的是MAGE家族的各種基因在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)，且可用作診斷該腫瘤及用于本文所述其它目的的標(biāo)記。參見Traversari等，免疫遺傳學(xué)35:145(1992)；van der Bruggen等，科學(xué)，254:1643(1991)和De Plaen等，免疫遺傳學(xué)40:360(1994)?，F(xiàn)在已充分公開了在細(xì)胞表面加工和提供蛋白質(zhì)的機(jī)制。本領(lǐng)域進(jìn)展的粗略綜述參見Barinaga，“獲得一些骨架MHC如何結(jié)合肽”，科學(xué)，257:880(1992)也見Fremont等，科學(xué)257:919(1992)；Matsumura等，科學(xué)257:927(1992)；Latron等，科學(xué)257:964(1992)。這些文章總的來說表明了結(jié)合MHC/HLA分子的肽需要9個氨基酸長(“九肽”)且表明了該九肽的第一個和第9個殘基的重要性。
對MAGE基因家族的研究現(xiàn)已表明了特定的九肽事實(shí)上存在于有些腫瘤細(xì)胞的表面，且九肽的存在需要提供的分子是HLA-A1。MAGE-1腫瘤排斥抗原(“TRA”或“九肽”)的復(fù)合物導(dǎo)致存在該復(fù)合物的細(xì)胞被溶胞性T細(xì)胞(“CTL”)裂解。
應(yīng)注意，對于一同提交的屬于Traversari等的申請系列號08/217,187和屬于Townsend的系列號08/217,186，其研究均針對來自MAGE的其它肽。
例如，在1992年8月31日申請的美國專利申請系列號07/938,334和在1993年6月7日申請的美國專利申請系列號073,103中提供的研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)比較各種MAGE基因的同源區(qū)與編碼相關(guān)九肽的MAGE-1基因區(qū)域時，有很大的同源性。事實(shí)上，這些觀察導(dǎo)致所公開的并在權(quán)利要求中所要求的本發(fā)明的一個方面，它是一個九肽家族，其中均具有相同的N末端和C末端氨基酸。這些九肽描述為單獨(dú)或與載體肽偶聯(lián)用于各種目的，包括其用作免疫原。九肽具有構(gòu)成抗原表位的足夠大小，對其產(chǎn)生的抗體描述為單獨(dú)或作為更大多肽的一部分用于鑒定九肽。
這些參考文獻(xiàn)，特別是系列號073,103顯示了HLA-A1和MAGE-3之間的聯(lián)系；然而，僅有大約26％的白種人群體和17％的黑種人群體的細(xì)胞表面存在HLA-A1分子。因此，更多地了解由其它類型的MHC分子提供的肽是有用的，這使得合適部分的人群可從上文所討論的研究中受益。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，在下面說明書中闡述的MAGE-2產(chǎn)生的肽提供的抗原鑒定了與MHCⅠ型分子HLA-A2復(fù)合的肽。該發(fā)現(xiàn)的細(xì)節(jié)，包括治療和診斷用途在下面說明書中所述的本發(fā)明的主題內(nèi)。
附圖的簡要描述

圖1是顯示包括HLA-A2.1的0.5倍最大正調(diào)節(jié)量的肽濃度計(jì)算的舉例圖。
圖2代表以51Cr釋放試驗(yàn)測定的HPV克隆對各種材料的反應(yīng)的比較數(shù)據(jù)。
圖3A-3D顯示了陽性大量培養(yǎng)物測定的結(jié)果。優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)描述。實(shí)施例1實(shí)驗(yàn)條件所有實(shí)驗(yàn)均在室溫下進(jìn)行，除非另有說明。所有Fmoc保護(hù)的氨基酸、合成多聚體、肽和TFA均貯存在-20℃。肽合成以固相方法在自動多肽合成儀(Abimed AMS 422)上合成肽(參見Gausepohl和Frank，生物技術(shù)，1990年9月；Gausepohl等，E.Gtralt和D.Andreu(編輯)，肽，1990:206-207(1990))。
以各種不同的過程制備肽，每一過程同時合成48種不同的肽。
以Tentagel S AC(Rapp等，固相肽合成的革新和前景，205-210(1990)；sheppard和williams，國際肽和蛋白質(zhì)研究雜志，20:451-454(1982))，聚乙二醇間隔臂在聚苯乙烯基質(zhì)上的移植聚合體作為樹脂(每種肽40-60mg，上樣10μmol Fmoc氨基酸)。
經(jīng)過向各反應(yīng)容器中加入90μl在NMP中的0.67MBOP(Gausepohl等，肽241-243(1988)；Castro等，Tett.Lett.14:1219-1222(1975)),20μl在NMP中的NMM2/1(v/v)和100μl在NMP(超出6倍)中的0.60M的合適的Fmoc氨基酸(Fields和Noble，國際肽和蛋白質(zhì)研究雜志，35:161-214(1990))的溶液進(jìn)行重復(fù)偶聯(lián)。在70％的反應(yīng)時間時，向各反應(yīng)容器中加入大約50μl二氯甲烷。
經(jīng)過向各反應(yīng)容器中加入3次0.8ml哌啶/DMA1/4(v/v)進(jìn)行Fmoc-去保護(hù)。
隨合成的進(jìn)行，偶聯(lián)和去保護(hù)時間增加，開始分別為30分鐘和3分鐘3次。
偶聯(lián)和Fmoc-去保護(hù)后用1.2ml DMA進(jìn)行6次洗滌。獲得所需序列并去掉最后的Fmoc保護(hù)后，分別用DMA、二氯甲烷、二氯甲烷/乙醚1/1(v/v)和乙醚充分洗滌肽基樹脂并干燥。肽裂解和分離經(jīng)過以5分鐘的間隔向各反應(yīng)容器中6次加入200μl TFA/水19/1(v/v)而從樹脂裂解肽并去掉側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)，從而產(chǎn)生游離羧基肽。對于含Trp肽，使用TFA/水/巰基乙烷18/1/1/(v/v/v)。
首次TFA加入2小時后，經(jīng)過加入10ml乙醚/戊烷1/1(v/v)并冷卻到-20℃從合并的過濾物中沉淀肽。離心(-20℃,2500g，10分鐘)分離肽。
用乙醚/戊烷1/1(v/v)處理沉淀并以相同的離心程序分離后，在45℃干燥肽15分鐘。
將各種肽溶解于2ml水(或2ml 10％體積的乙酸)中，溶液在液氮中冷凍3分鐘，且邊離心(1300rpm,8-16h)邊凍干。分析和純化以反相HPLC測定肽的純度；將大約50nmol的等份試樣溶于100μl 30％體積的乙酸中。對30μl該溶液應(yīng)用備有三種溶劑的RP-HPLC系統(tǒng)A水，B乙腈，C2％體積的TFA水溶液。
在30分鐘內(nèi)從90％A、5％B、5％C到20％A、75％B、5％C進(jìn)行梯度洗脫(1.0ml/分鐘)。在214nm處檢測。
以質(zhì)譜法在PDMS上分析隨機(jī)所取的樣品。經(jīng)過在PDMS上經(jīng)質(zhì)譜法和在HP Aminoquant上進(jìn)行水解后的定量氨基酸分析來分析所有31種結(jié)合肽。在所有分析的樣品中，計(jì)算和測定質(zhì)量間的差異在所用儀器廠商限定的實(shí)驗(yàn)誤差(O.1％)范圍內(nèi)。所有氨基酸組成與預(yù)期一樣。實(shí)施例2肽在已凍干的所有71種MAGE-2肽中，稱重lmg并溶于10μlDMSO中。在所有溶解的肽中，在0.9％NaCl中制備0.5mg/ml的稀釋溶液并用在蒸餾水中稀釋的5％乙酸(CH3COOH,Merck Darmastadt，德國)或在蒸餾水中稀釋的1N NaOH(Marck Darstadt，德國)，將pH中和至pH7。細(xì)胞在補(bǔ)充有100IU/ml青霉素(Biocades Pharma,Leiderdorp,TheNetherlands)、100μg/ml卡那霉素(Sigma St.Louis,USA)、2mM谷氨酰胺(ICN Biomedicals Inc.Costa Mesa,CA,USA)和10％的胎牛血清(FCS,Hyclone Laboratories Inc.Logan,Utah,USA)的Iscove’s改良的Dulbecco’s培養(yǎng)基(Biochrom KG Seromed Berlin，德國)中培養(yǎng)174CEM.T2細(xì)胞。在37℃、5％CO2的加濕空氣中以2.5×105/ml的密度培養(yǎng)細(xì)胞。肽結(jié)合將174CEM.T2細(xì)胞在無FCS的培養(yǎng)基中洗滌2次并放入無血清培養(yǎng)基中至2×106個細(xì)胞/ml的密度。將40μl該懸液與10μl在0.9％NaCl中的單獨(dú)肽稀釋液(范圍為500μg/ml至15.6μg/ml)中的2倍系列稀釋液一起加入V型底96孔平板(Greiner GmbH,Frichenhausen，德國)中。終濃度范圍為每8×104個174CEM.T2細(xì)胞200μg/ml到3.1μg/ml肽。輕輕攪拌該溶液3分鐘，之后在37℃,5％CO2的加濕空氣中培養(yǎng)16小時。然后用100μl 0.9％NaCl、0.5％牛血清白蛋白(Sigma St.Louis,USA)、0.02％NaN3(MerckDarmstadt，德國)洗滌細(xì)胞一次。經(jīng)過一輪1200rpm離心后，將沉淀重懸于50μl飽和量的HLA-A2.1特異性小鼠單克隆抗體BB7.2中4℃ 30分鐘。然后將細(xì)胞洗滌2次并與1∶40稀釋且總體積為25μ1的與異硫氰酸熒光素(Tago Inc.Burlingame,CA,USA)連接的羊抗小鼠IgG的F(ab)2片段溫育30分鐘。
最后一次溫育后，將細(xì)胞洗滌2次并在FACScan流式細(xì)胞光度計(jì)(Becton Dickinson,Franklin Lakes,NJ.USA)中的488納米處測量熒光。使用熒光指數(shù)對肽濃度的布點(diǎn)圖測定HLA-A2.1對174CEM.T2細(xì)胞達(dá)到0.5倍最大正調(diào)節(jié)量時的濃度。結(jié)果在表Ⅰ中顯示。表Ⅰ．滿足HLA-A2.1基序(Falk等1991,Hunt等，1992和Nijman等，1993編輯)的來自人黑色素瘤相關(guān)性蛋白質(zhì)MAGE-2的肽的結(jié)合親和性。肽號 序列 殘基 誘導(dǎo)0.5倍最大F1的肽濃度GLEARGEALGL15- 25 ＞100μg/mlGLEARGEAL 15- 23 60μg/ml4ALGLVGAQA 22- 30 ＞100μg/mlGLVGAQAPA 24- 32 65μg/mlDLESEFQAA 100-108 ＞100μg/mlDLESEFQAAI100-109 ＞100μg/mlAISRKMVELV108-117 ＞100μg/mlAISRKMVEL 108-116 ＞100μg/ml2 KMVELVHFL 112-120 40μg/mlKMVELVEFLL112-121 ＞100μg/mlKMVELVEFLLL 112-122 ＞100μg/mlLLLKYRAREPV 120-130 ＞100μg/mlLLKYRAREPV121-120 ＞100μg/ml3 VLRNCQDFFFPV 139-149 ＞100μg/ml4 VIFSKASEYL149-158 35μg/mlYLQLVFGIEV157-166 35μg/mlYLQLVFGIEVV 157-167 ＞100μg/ml5 QLVFGIEVV 159-167 25μg/ml6 QLVFGIEVVEV 159-169 30μg/mlGIEVVEVVPI163-172 ＞100μg/mlPISELYLLV 171-179 55μg/mlELYILVTCL 174-182 ＞100μg/mlELYILVTCLGL 174-184 ＞100μg/mlYILVTCLGL 176-184 ＞100μg/mlCLGLSYDGL 181-189 65μg/mlCLGLSYDGLL181-190 ＞100μg/mlVMPKTGLLI 195-203 ＞100μg/mlVMPKTGLLII195-204 ＞100μg/mlVMPKTGLLIIV 195-205 ＞100μg/mlGLLIIVLAI 200-208 ＞100μg/mlGLLIIVLAII200-209 ＞100μg/mlGLLIIVLAIIA 200-210 ＞100μg/mlLLIIVLAII 201-209 ＞100μg/mlLLIIVLIIA 201-210 ＞100μg/mlLLIIVLAIIAI 201-211 ＞100μg/mlLIIVLAIIA 202-210 ＞100μg/ml7 LIIVLAIIAI202-211 ＞100μg/mlIIVLAIIAI 203-211 20μg/mlIIAIEGDCA 208-216 ＞100μg/mlKIWEELSML 220-228 ＞100μg/ml8 KIWEELSMLEV 220-230 25μg/mlLMQDLVQENYL 246-256 ＞100μg/mlFLWGPRALI 271-279 65μg/ml9 ALIETSYVKV277-286 20μg/mlALIETSYVKVL 277-287 ＞100μg/ml10LIETSYVKV 278-286 30μg/mlLIETSYVKVL278-287 55μg/mlTLKIGGEPHI290-299 ＞100μg/mlEISYPPLEERA 298-308 ＞100μg/ml
174CEM.T2細(xì)胞系表達(dá)“空出”且不穩(wěn)定的HLA-A2.1分子，當(dāng)一種肽與這些分子的肽容納溝結(jié)合時可穩(wěn)定這些分子。不易降解的穩(wěn)定的HLA-A2.1分子是與所分析的肽結(jié)合的結(jié)果。這導(dǎo)致HLA-A2.1分子在細(xì)胞表面的表達(dá)增加。熒光指數(shù)是HLA-A2.1分子正調(diào)節(jié)量的測量值。熒光指數(shù)根據(jù)下面的公式計(jì)算MF=平均熒光
背景熒光的熒光指數(shù)為0。結(jié)果為了鑒定能結(jié)合174CEM.T2細(xì)胞所表達(dá)的HLA-A2.1分子的MAGE-2肽，根據(jù)van der Bruggen等，科學(xué)254:1643-1647(1991)的方法檢查MAGE-2r氨基酸序列。檢查了所有滿足公開的HLA-A2.1結(jié)合基序的9、10或11個氨基酸的肽(表Ⅰ)。
只有表Ⅲ中SEQ ID NOS:1-11的肽能以低肽濃度正調(diào)節(jié)HLA-A2.1分子的表達(dá)，表明它們與實(shí)施例2所述的HLA-A2.1分子結(jié)合。50個其它的肽中沒有一個能做到這點(diǎn)。熒光測量的結(jié)果在表Ⅰ和Ⅱ中給出。使用FI對各個單獨(dú)的肽的肽濃度的布點(diǎn)圖測定174CEM.T2細(xì)胞上的HLA-A2.1分子的0.5倍最大正調(diào)節(jié)量。
這些實(shí)驗(yàn)表明，只有有限部分的滿足HLA-A2.1基序的肽具有以高親和性結(jié)合這種HLA分子的能力且因而很可能是被人CTL識別的MAGE-2蛋白質(zhì)的候選肽，其中人CTL僅識別與HLA分子結(jié)合的肽。
表Ⅱ滿足延伸的HLA-A2.1基序的(RuPPert等，細(xì)胞，74:929-937)的來自人黑色素瘤相關(guān)性蛋白質(zhì)MAGE-2的其它肽的結(jié)合親和性。表Ⅱ肽號序列 殘基誘導(dǎo)0.5倍最大F1的肽濃度QTASSSSTL 37-45 ＞100μg/mlQTASSSSTLV 37-46 ＞100μg/mlSTLVEVTLGEV 43-53 45μg/mlVTLGEVPAA 48-56 ＞100μg/mlVTKAEMLESV 130-13970μg/mlVTKAEMLESVL130-140＞100μg/mlVTCLGLSYDGL179-189＞100μg/mlKTGLLIIVL 198-20665μg/mlKTGLLIIVLA 198-20780μg/mlKTGLLIIVLAI198-208＞100μg/mlHTLKIGGEPHI289-299100μg/ml表Ⅲ．來自黑色素瘤蛋白質(zhì)MAGE-2的肽與HLA-A2.1的結(jié)合肽號 氨基酸序列 區(qū)域SEQID NO1 STLVEVTLGEV 殘基 43-53 1LVEVTLGEV 殘基 45-53 22 KMVELVHFL 殘基 112-120 33 VIFSKASEYL殘基 149-158 44 YLQLVFGIEV殘基 157-166 55 QLVFGIEVV 殘基 159-167 66 QLVFGIEVVEV 殘基 159-169 77 IIVLAIIAI 殘基 203-211 88 KIWEELSMLEV 殘基 220-230 99 ALIETSYVKV殘基 277-2861010LIETSYVKV 殘基278-286 11
大多數(shù)HLA-A2.1結(jié)合肽是根據(jù)Falk等，自然351:290-296(1991)；Hunt等，科學(xué)255:1261-1263(1992)；和Nijman等，免疫學(xué)治療雜志，14:121-126(1993)的方法使用HLA-A2.1基序發(fā)現(xiàn)的。使用Ruppert等，細(xì)胞74:929-937(1993)的延伸的HLA-A2.1基序僅發(fā)現(xiàn)了一個其它的HLA-A2.1肽。實(shí)施例3．本實(shí)施例顯示了一級免疫反應(yīng)的體外誘導(dǎo)。作為對誘導(dǎo)一般性一級反應(yīng)，包括MAGE-2肽的可能性的證實(shí)，顯示了使用加工缺陷型細(xì)胞系174CEM.T2對HPV肽的這類反應(yīng)。
經(jīng)過在含有相關(guān)肽的培養(yǎng)基中培養(yǎng)T2細(xì)胞可增加HLA-A2.1細(xì)胞(T2)的表達(dá)。T2細(xì)胞提供與HLA-A2.1結(jié)合的大量相關(guān)肽，因而它是較好的提供抗原的細(xì)胞(APC)。在最近描述的反應(yīng)誘導(dǎo)方法中(Kast等，免疫治療雜志，14:115-120(1993)),T2細(xì)胞系用作APC且post-Ficoll單核細(xì)胞用作效應(yīng)器細(xì)胞。方法1)肽裝載到T2上的HLA-A2.1上。
將濃度為每毫升2×106細(xì)胞的T2細(xì)胞在T25瓶(BectonDickinson,Falcon,Plymouth England)中的含谷氨酰胺(2mM,ICN生化公司，Costa Meisa,USA)、抗生系(100IU/ml青霉素(Brocadespharma,Leiderdorp,The Netherlands)、100μg/ml卡那霉素(Sigma,St.Louis,USA))和濃度為80μg/ml的選定肽MLDLQPETT(SEQ IDNO:62)的無血清IMDM(=Iscoves改良的Dulbecco培養(yǎng)基BiochromKG,Seromed Berlin，德國)中37℃培養(yǎng)13小時。
2)絲裂霉素C處理來自HPV(APC)的生產(chǎn)T2抗原的細(xì)胞離心這些培養(yǎng)的生產(chǎn)T2抗原的細(xì)胞，隨后以20×106個細(xì)胞/ml的密度在無血清RPMI(Gibco Paisley Scotland)培養(yǎng)基中用絲裂酶素C(50μg/ml)在37℃處理1小時。此后在RPMI中洗滌T2細(xì)胞3次。
3)準(zhǔn)備一級免疫反應(yīng)誘導(dǎo)向96孔U型底平板(Costar,Cambridge,USA)的所有孔中加入在50μl無血清、完全RPMI培養(yǎng)基(谷氨酰胺(2mM,ICN生化公司，Costa Mersa,USA)、青霉素(100IU/ml,Brocades Pharma,Leiderdopr,The Netherlands)、卡那霉素(100μ/ml,Sigma,St.Louis,USA))和濃度為80μg/ml的肽MLDLQPETT(SEQ ID NO:21)中的100,000個絲裂霉素C-處理的T2細(xì)胞。
4)效應(yīng)器細(xì)胞效應(yīng)器細(xì)胞是HLA-A2.1亞型供體的單核外周血淋巴細(xì)胞(PBL)。用Ficoll方法(Ficoll preparation:Lymphoprep ofNycomedpharma,Oslo,Norway)從淡黃色層分離PBL并在RPMI中洗滌2次。分離和洗滌后，將PBL重懸于含30％人合并的血清(HPS)的完全RPMI培養(yǎng)基中(試驗(yàn)HPS在混合的淋巴細(xì)胞培養(yǎng)物中的抑制活性)。
5)用于一級免疫反應(yīng)的培養(yǎng)向已加有T2細(xì)胞的96孔U型平板的各孔中加入在50μl培養(yǎng)基中的400,000PBL(培養(yǎng)基在上文第4段中描述)并在含5％CO2和90％濕度的培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)7天。
6)再刺激(第7天)
在培養(yǎng)上文所述的PBL、肽MLDLQPETT(SEQ ID NO:21)和T2細(xì)胞后第7天，用肽MLDLQPETT(SEQ ID NO:62)再刺激PBL。為此，收獲96孔中的所有細(xì)胞和培養(yǎng)基。以Ficoll方法分離活細(xì)胞并在RPMI中洗滌。在新的96孔-U型底平板中，將50,000個活細(xì)胞與50μl含15％HPS的完全RPMI培養(yǎng)基一起接種進(jìn)各孔中。每孔加入20,000個自體的輻射的(3000rad)PBLs和50,000個自體的輻射(10000rad)的EBV-轉(zhuǎn)化的B-淋巴細(xì)胞與50μl含15％HPS的完全RPMI培養(yǎng)基和濃度為80μg/ml的肽MLDLQPETT(SEQ ID NO:62)。細(xì)胞在含5％CO2和90％濕度的培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)7天。
7)再刺激(第14天)在培養(yǎng)PBL、肽MLDLQPETT(SEQ ID NO:62)和T2細(xì)胞后的第14天，用肽MLDLQPETT(SEQ ID NO:62)再刺激PBL。為此重復(fù)上文第6點(diǎn)的方法。
8)以限制稀釋法克隆在培養(yǎng)PBL、肽MLDLQPETT(SEQ ID NO:62)和T2細(xì)胞后第21天，收獲96孔中的細(xì)胞和培養(yǎng)基。以Ficoll方法分離活細(xì)胞并在含15％HPS的完全RPMI中洗滌。經(jīng)限制稀釋克隆這批活細(xì)胞的培養(yǎng)物。向新的96孔U型底平板(Costar,Cambridge,USA)各孔中加入50μl含15％HPS的完全RPMI培養(yǎng)基及100個活細(xì)胞(=HPV16集體抗MLDLQPETT(SEQ ID NO:62))。對于其它新的96孔-U型底平板，除了各孔中的細(xì)胞數(shù)外，完全重復(fù)該步驟隨后的平板含有每孔10,1或0.3個細(xì)胞的細(xì)胞稀釋度。向所有孔中加入4個不同供體的20,000個合并且輻射(3000)過的PBL和3個不同HLA-A2.1供體(VU-4/518/JY)的10,000個合并且輻射(10,000rad)過的EBV-轉(zhuǎn)化的B-細(xì)胞以及50μl含15％HPS的完全RPMI培養(yǎng)基和濃度為40μg/ml的肽MLDLQPETT(SE1 IDNO:62)、濃度為2μg/ml(Pharmacia,Uppsala,Sweden)的白細(xì)胞凝集素、濃度為120IU/ml的人重組IL-2(Eurocetus,Amsterdam,The Netherlands)。
9)擴(kuò)展(Expand)克隆以100μl的終體積向各孔中加入-25,000個活細(xì)胞，-20,000個輻射過的PBL-合并物(上文描述)-10,000個輻射過的EBV-合并物(上文描述)-2μg肽MLDLQPETT(SEQ ID NO:62)-6IU重組IL-2。
用65個克隆和一批培養(yǎng)物樣品作效應(yīng)器細(xì)胞和以T2(含或不含相關(guān)肽MLDLQPETT(SEQ ID NO:62))作靶細(xì)胞在第49天進(jìn)行細(xì)胞毒性分析。背景殺死定義為用無關(guān)(但結(jié)合HLA-A2.1)肽GILGFVFTL(SEQ ID NO:64)培養(yǎng)的T2細(xì)胞殺死的量。該流感基質(zhì)蛋白產(chǎn)生的肽是HLA-A2.1限制性流感特異性CTL的表位且在本領(lǐng)域中是已知的。
HPV集體抗SEQ ID NO:62效應(yīng)器細(xì)胞似乎對殺死SEQ IDNO:62敏感性細(xì)胞具有特異性。
用HPV集體培養(yǎng)物細(xì)胞進(jìn)行限制性稀釋試驗(yàn)，23天后，用5個克隆進(jìn)行細(xì)胞毒性試驗(yàn)。代表性克隆的結(jié)果在圖2中顯示。實(shí)施例4已報道了幾組需要肽與HLA-A*0201分子結(jié)合。例如，F(xiàn)alk等，自然351:290(1991)；Nijman等，歐洲免疫學(xué)雜志，23:1215(1993)；Ruppert等，細(xì)胞，74:929(1993)(均作為參考文獻(xiàn)引用)已闡述了最重要(錨著)和重要(顯性)殘基。使用這些論文的數(shù)據(jù)，以Drihout等，人類免疫學(xué)，43:1(1995):D’Amaro等，人類免疫學(xué)，43:13(1995)，(均作為參考文獻(xiàn)引用)所述的篩選程序篩選了MAGE-2推斷的氨基酸序列中推斷的結(jié)合肽。如果存在一個錨著殘基和一個顯性殘基或兩個錨著殘基，則認(rèn)為肽滿足了參考基序。使用熟知的固相合成技術(shù)合成所有這些肽，然后根據(jù)作為參考文獻(xiàn)引用的van der Burg等，人類免疫學(xué)，44:189-198(1995)的內(nèi)容在肽結(jié)合競爭試驗(yàn)中進(jìn)行試驗(yàn)。簡單地說，對于HLA-A*0201為純合的、且作為EBV轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞系的細(xì)胞系JY經(jīng)過與冰冷的檸檬酸緩沖液(pH3.2)接觸90秒剝離結(jié)合肽。(緩沖液為等體積的0.263M檸檬酸和0.123M Na2HPO4)。然后用IMDM洗滌剝離的細(xì)胞且隨后用補(bǔ)充了1.5μg/mlβ-微球蛋白的IMDM重懸。使用在半胱氨酸殘基上用熒光素標(biāo)記的參考肽，即Phe Leu ProSer Asp Cys Phe Pro Ser Val(SEQ ID NO:63)。在該試驗(yàn)中，將150nMSEQ ID NO:63放于96孔U型底平板的各孔中，并滴定所加入的試驗(yàn)肽的量。將剝離的JY細(xì)胞樣品(7×105個細(xì)胞)與肽在4℃溫育24小時。然后用含1％牛血清白蛋白的PBS洗滌細(xì)胞，隨后用含10％低聚甲醛的PBS固定并分析對熒光標(biāo)記的參考肽結(jié)合的抑制。
使用下式測定抑制
“MF背景”指無參考肽時獲得的平均熒光值?！癕F參考肽”指僅用150nM參考肽溫育后獲得的平均熒光值。經(jīng)過以半對數(shù)形式對一些肽的系列稀釋結(jié)果作布點(diǎn)圖可計(jì)算50％的抑制(“IC50”)。下面表Ⅳ提供了一些這類數(shù)據(jù)。當(dāng)試驗(yàn)的肽是前面實(shí)施例中所提到的一種時，規(guī)定一個序列鑒定號。星號(*)表明IC50大于100μM，SEQ ID NOS:71,72和73均是現(xiàn)有技術(shù)中已知的結(jié)合HLA-A*0201分子的肽。
表ⅣIC50SEQ ID NO:1 ＊SEQ ID NO:3 7SEQ ID NO:4 ＊SEQ ID NO:5 7SEQ ID NO:6 47SEQ ID NO:7 26SEQ ID NO:8 *SEQ ID NO:9 10SEQ ID NO:10*SEQ ID NO:11*SEQ ID NO:13*SEQ ID NO:1530SEQ ID NO:2780SEQ ID NO:3142SEQ ID NO:47 6sEQ ID NO:48*Thr Leu Val Glu Val Thr Leu Gly Glu Val (SEQ ID NO:64) 17Leu Val Glu Val Thr Leu Gly Glu Val (SEQ ID NO:65) *Lys Ala Ser Glu Tyr Leu Gln Leu Val (SEQ ID NO:66) 14Gln Val Met Pro Lys Thr Gly Leu Leu Ile Ile (SEQ ID NO:67) 82Lys Thr Gly Leu Leu Ile Ile Val Leu (SEQ ID NO:68) 27Phe Leu Trp Gly Pro Arg Ala Leu Ile Glu Thr (SEQ ID NO:69) 9Phe Leu Pro Ser Asp Asp Phe Pro Ser Val (SEQ ID NO:70) 1Gly Ile Leu Gly Phe Val Phe Thr Leu (SEQ ID NO:71) 3Tyr Met Asn Gly Thr Met Ser Gln Val (SEQ ID NO:72) 9應(yīng)注意，當(dāng)使用低濃度時，除了對照外，只有7個肽能抑制參考肽的結(jié)合，即，SEQ ID NOS:3,5,9,47,64,66和69。然后在進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)中試驗(yàn)了這些肽。實(shí)施例5在4℃下進(jìn)行實(shí)施例4的實(shí)驗(yàn)，以排除溫度作為影響復(fù)合物穩(wěn)定性的因素。在37℃的人生理學(xué)溫度下進(jìn)行第二組實(shí)驗(yàn)。基本上按照van der Burg等，免疫學(xué)雜志，156(1)33087的方法進(jìn)行。按實(shí)施例4所述用土根堿處理JY細(xì)胞以終止蛋白質(zhì)合成。這防止了細(xì)胞在其表面提供新合成的HLA-A*0201分子。然后，經(jīng)過使用弱酸處理剝離細(xì)胞提供的肽。隨后將它們與200μg/ml濃度的試驗(yàn)肽接觸。然后用冷的Iscover氏改良的Dulbecco’s培養(yǎng)基(IMDM)洗滌結(jié)合肽的細(xì)胞并在起始時間=0時在37℃下在IMDM中溫育2,4和6小時。經(jīng)過用可從美國典型培養(yǎng)物保藏中心獲得的HLA-A2構(gòu)象特異性單克隆抗體BB7.2和GaM-Fitc染色細(xì)胞可測量存在的HLA-A*0201肽復(fù)合物的量。接觸步驟按FACScan分析法進(jìn)行。然后，使用下式計(jì)算熒光指數(shù)
其中，MF背景是無肽時獲得的值。各樣品試驗(yàn)2次，以所列的各時間點(diǎn)計(jì)算平均FI。經(jīng)過找到t=0時的FI，然后應(yīng)用下式計(jì)算殘留的HLA-A2分子的百分?jǐn)?shù)％剩余(t=n)=(FIt=n/FIt=0)×100已知肽與MHC的解離是一個線型過程。還已知肽形成長期穩(wěn)定復(fù)合物的能力與體外肽的免疫原性相關(guān)。(參見，例如，van der Burg等，出處同上)。因此，在50％的分子衰變時測量肽的穩(wěn)定性，從t=2時開始測量。對于與剩余的HLA-A2分子百分?jǐn)?shù)進(jìn)行布點(diǎn)作圖的系列測量值進(jìn)行線型回歸分析可計(jì)算DT50。在上面所列的7個肽中，SER ID NOS:3,5和9在37℃以超過6小時的DT50誘導(dǎo)肽-HLA-A*0201復(fù)合物。其它肽顯示較低水平的親和力。表Ⅴ肽 IC50DT50SEQ ID NO:3 7 ＞6SEQ ID NO:5 7 ＞6SEQ ID NO:910 ＞6SEQ ID NO:4763SEQ ID NO:64 174SEQ ID NO:66 14 3.5SEQ ID NO:6995試驗(yàn)肽SEQ ID NOS:71和72均具有大于6的DT50值。實(shí)施例6試驗(yàn)了上文所列的肽的免疫原性。在這些實(shí)驗(yàn)中，使用轉(zhuǎn)基因HLA-A*0201Kb小鼠。這些小鼠表達(dá)嵌合的HLA-A*0201Kb基因產(chǎn)物，其中HLA-A*0201的α3結(jié)構(gòu)域被鼠H-2Kbα3結(jié)構(gòu)域取代。所得的分子結(jié)合HLA-A*0201分子，并與鼠CD8+細(xì)胞相互作用。
使用2-3只動物一組的小鼠。用在不完全Freund氏佐劑中乳化的50μg肽與140μg作為參考文獻(xiàn)引用的MiUich等，美國科學(xué)院院刊85:1610(1988)所述的HBV核心抗原產(chǎn)生的T輔助表位混合物在側(cè)面注射各小鼠。14天后用相同混合物加強(qiáng)注射動物。最后一次注射后11-14天處死小鼠，將其脾細(xì)胞通過尼龍絨，在靜止的T25組織培養(yǎng)瓶中用補(bǔ)充了青霉素、8％熱滅的FCS和20μM 2-巰基乙醇的IMDM中用1×107個徹底洗滌后的結(jié)合了同源肽的LPS誘導(dǎo)的淋巴母細(xì)胞體外再刺激3×107個細(xì)胞樣品。在5％CO2加濕的空氣中37℃下培養(yǎng)培養(yǎng)物6天，然后試驗(yàn)這些集體培養(yǎng)物的細(xì)胞裂解活性。它包含根據(jù)，例如，De Waal等，免疫學(xué)雜志，125:2665(1983)；Bouma等，人類免疫學(xué)，35:85(1992)所述的標(biāo)準(zhǔn)51Cr或熒光銪稀放分析。簡單地說，在37℃下用10μg/ml肽結(jié)合標(biāo)記的靶細(xì)胞至少20分鐘。然后用等量的靶細(xì)胞溫育滴定量的效應(yīng)器細(xì)胞至少4小時。以每組6個測量自發(fā)釋放和最大釋放。當(dāng)在結(jié)合有特異性肽的靶細(xì)胞的細(xì)胞毒性分析中的裂解與未結(jié)合的靶細(xì)胞的背景裂解相比，以兩者E/T比率至少高10％時，認(rèn)為反應(yīng)為陽性。圖3A-3D提供了SEQ ID NO:3,5和9，以及試驗(yàn)肽SEQ ID NO:71的陽性集體培養(yǎng)物的結(jié)果。剩下的肽不具有免疫原性。實(shí)施例7隨后在TNF釋放分析中試驗(yàn)上文所述的集體CTL培養(yǎng)物。具體地說，使用Seed等，美國科學(xué)院院刊84:3365(1987)的熟知的DEAE-葡聚糖氯套方法用克隆進(jìn)pcDNAⅠ/Amp的HLA-A*0201Kb、MAGE-2和/或酪氨酸酶cDNA轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞。48小時后，棄去培養(yǎng)基，在TNF釋放試驗(yàn)中使用COS-7細(xì)胞作為刺激細(xì)胞。簡單地說，向轉(zhuǎn)染的COS-7細(xì)胞中加入5×103個鼠集體培養(yǎng)物細(xì)胞，或2×103個人CTL。24小時后，收獲上清并使用TNF敏感性WEHI164克隆13細(xì)胞測定的TNF內(nèi)容物。
來自用肽SEQ ID NOS:3和5免疫的小鼠的集體培養(yǎng)物顯示出識別用HLA-A*0201Kb和MAGE-2轉(zhuǎn)染的COS-7細(xì)胞，表明這兩個肽由HLA-A*0201加工和提供。
數(shù)據(jù)表明，SEQ ID NOS:1-11的肽是鑒定序列的單肽。然而，這些肽的同源物，同工型或遺傳變異體可能存在于細(xì)胞環(huán)境內(nèi)或外。本發(fā)明包含能結(jié)合HLA-A2分子的上述的所有這些同源物，同工型或遺傳變異體。
作為該肽同源物的多肽具體包括具有相對于表Ⅱ所述氨基酸序列至少大約40％保守、優(yōu)選至少大約60％保守、更優(yōu)選至少大約75％保守的氨基酸序列的那些多肽。
本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)明白上文所示肽的其它變異體應(yīng)包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。這特別是包括與上述合成肽區(qū)別僅在于保守氨基酸取代的任何變異體。具體地說，包括以A(丙氨酸)，S(絲氨酸)，α-氨基丁酸和其它氨基酸取代C(半胱氨酸)，因?yàn)橐阎腚装彼岬碾脑诤铣珊吞幚砥陂g容易(被空氣)氧化。Taylor，分子生物學(xué)雜志188:233-258(1986)闡述了許多這類保守的氨基酸取代。
上文顯示的本文的肽或其片段包括氨基酸序列上的任何變異，不管是保守氨基酸取代，缺失還是其它加工，前提是這類肽能結(jié)合HLA-A2分子。當(dāng)所說的多肽結(jié)合HLA-A2.1分子時，肽片段可以是具有小到5個或更多個氨基酸的序列的小肽，所說的序列是表Ⅱ中公開的那些序列，前提是所說的多肽能結(jié)合HLA-A2.1分子。
特別是比所示的肽更大的多肽也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)，前提是所說的多肽在HLA-A2.1陽性個體中誘導(dǎo)MAGE-2特異性CTL反應(yīng)且含有表Ⅱ所述的一種(部分)氨基酸序列或其保守取代。該多肽可具有9到12，更優(yōu)選9到11或甚至9到10個氨基酸的長度。
本發(fā)明包括以各種方法，不論是遺傳工程、固相技術(shù)肽合成，還是其它方法產(chǎn)生的多肽的應(yīng)用。上述肽可在末端進(jìn)行各種化學(xué)修飾且仍在本發(fā)明的范圍內(nèi)。其它的化學(xué)修飾也是可能的，特別是環(huán)狀和二聚體構(gòu)象。術(shù)語“衍生物”覆蓋所有這類修飾的肽。
發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的多肽可用于預(yù)防、診斷和/或治療或防止涉及包括黑色素瘤細(xì)胞和其它癌細(xì)胞的MAGE-2表達(dá)細(xì)胞的疾病。
對于所有應(yīng)用，可按免疫原性形式施用肽。由于該肽相當(dāng)短，因此它必需與提供免疫原性的結(jié)合載體物質(zhì)，如脂類或其它物質(zhì)混合、復(fù)合、偶連或化合，或者使用佐劑。
當(dāng)然，本發(fā)明的肽的預(yù)防或治療劑量的大小隨病人類型(年齡、性別、體重等)，所需治療的癥狀的嚴(yán)重性、本發(fā)明的特定肽及其用藥途徑的不同而變化?？刹捎萌魏魏线m的用藥途徑以獲得本發(fā)明所鑒定的多肽的有效量以及藥劑學(xué)領(lǐng)域熟知的任何劑量形式。另外也可經(jīng)過控制釋放工具和/或傳遞裝置施用該多肽。它們也可與其它活性物質(zhì)，如，特別是T-細(xì)胞激活劑類白細(xì)胞介素-2等結(jié)合用藥。
本發(fā)明的肽也可用于其它目的，如診斷學(xué)用途。例如，它們可用于檢查用根據(jù)本發(fā)明的肽免疫接種是否成功。這可通過試驗(yàn)所說的肽是否能激活被接種人的T細(xì)胞而在體外進(jìn)行。
如上所述，本發(fā)明還包含對HLA-A2分子復(fù)合物，如HLA-A*0201和特定肽具有特異性的分離的溶胞性T細(xì)胞克隆(“CTLs”)及體內(nèi)產(chǎn)生它們的方法。在說明書中的“產(chǎn)生”基本上指經(jīng)過HLA-A2分子提供特定的肽刺激CTLs的增生。例如，通過選用需要其它CTL的受試者可做到這一點(diǎn)。
不是所有的肽和HLA-A2分子的復(fù)合物均導(dǎo)致CTL增生；然而，肽對其靶HLA-A*0201分子的特異性仍然使其可用作診斷標(biāo)記以便將細(xì)胞分類成HLA-A2陽性或陰性。
本發(fā)明的其它方面對技術(shù)人員而言是顯而易見的，在此不必重復(fù)。
已采用的術(shù)語和表達(dá)用作描述術(shù)語而不是限制，在使用這些術(shù)語和表達(dá)時不打算排除所顯示和所描述的特征的任何等價物或其部分，因?yàn)閼?yīng)認(rèn)識到在本發(fā)明范圍內(nèi)可作出各種修改。(1)一般信息(ⅰ)申請人(ⅱ)發(fā)明名稱來自MAGE-2的分離的肽，對肽和HLA-A2分子復(fù)合物特異性的溶胞性T細(xì)胞及其應(yīng)用(ⅲ)序列數(shù)69
(ⅳ)聯(lián)系地址(A)聯(lián)系人Felfe&Lynch(B)街道805 Third Avenue(C)城市紐約城(D)州紐約州(E)國家美國(F)郵編10022(ⅴ)計(jì)算機(jī)可讀形式(A)媒體類型5.25inch軟盤，360kb存儲量(B)計(jì)算機(jī)IBM PS/2(C)操作系統(tǒng)PC-DOS(D)軟件Wordperfect(ⅵ)最近申請數(shù)據(jù)(A)申請?zhí)?B)申請日(C)分類(ⅵ)在先申請數(shù)據(jù)(A)申請?zhí)?8/217,188(B)申請日1994年3月24日(ⅷ)律師/代理人信息；(A)姓名Hanson,Norman D.
(B)登記號30,946(C)參考/文摘號LUD5447(ⅸ)電信信息(A)電話(212)688-9200(B)電傳(212)838-3884(2)序列鑒定號1的信息(ⅰ)序列特征(A)長度11個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:1:Ser Thr Leu Val Glu Val Thr Leu Gly Glu Val1 5 10(2)序列鑒定號2的信息(ⅰ)序列特征(A)長度9個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:2:Leu Val Glu Val Thr Leu Gly Glu Val1 5(2)序列鑒定號3的信息(ⅰ)序列特征(A)長度9個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型
(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:3:Lys Met Val Glu Leu Val His Phe Leu1 5(2)序列鑒定號4的信息(ⅰ)序列特征(A)長度10個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:4:Val Ile Phe Ser Lys Ala Ser Glu Tyr Leu1 5 10(2)序列鑒定號5的信息(ⅰ)序列特征(A)長度10個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:5:Tyr Leu Gln Leu Val Phe Gly Ile Glu Val1 5 10(2)序列鑒定號6的信息(ⅰ)序列特征(A)長度9個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:6:Gln Leu Val Phe Gly Ile Glu Val Val1 5(2)序列鑒定號7的信息(ⅰ)序列特征(A)長度11個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:7:Gln Leu Val Phe Gly Ile Glu Val Val Glu Val1 5 10(2)序列鑒定號8的信息(ⅰ)序列特征(A)長度9個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型
(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:8:Ile Ile Val Leu Ala Ile Ile Ala Ile1 5(2)序列鑒定號9的信息(ⅰ)序列特征(A)長度11個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:9:Lys Ile Trp Glu Glu Leu Ser Met Leu Glu Val1 5 10(2)序列鑒定號10的信息(ⅰ)序列特征(A)長度10個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:10:Ala Leu Ile Glu Thr Ser Tyr Val Lys Val1 5 10(2)序列鑒定號11的信息(ⅰ)序列特征(A)長度9個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:11:Leu Ile Glu Thr Ser Tyr Val Lys Val1 5(2)序列鑒定號12的信息(ⅰ)序列特征(A)長度11個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:12:Gly Leu Glu Ala Arg Gly Glu Ala Leu Gly Leu1 5 10(2)序列鑒定號13的信息(ⅰ)序列特征(A)長度9個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型
(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:13:Gly Leu Glu Ala Arg Gly Glu Ala Leu1 5(2)序列鑒定號14的信息(ⅰ)序列特征(A)長度9個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:14:Ala Leu Gly Leu Val Gly Ala Gln Ala1 5(2)序列鑒定號15的信息(ⅰ)序列特征(A)長度9個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:15:Gly Leu Val Gly Ala Gln Ala Pro Ala1 5(2)序列鑒定號16的信息(ⅰ)序列特征(A)長度9個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:16:Asp Leu Glu Ser Glu Phe Gln Ala Ala1 5(2)序列鑒定號17的信息(ⅰ)序列特征(A)長度10個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:17:Asp Leu Glu Ser Glu Phe Gln Ala Ala Ile1 5 10(2)序列鑒定號18的信息(ⅰ)序列特征(A)長度10個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型
(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:18:Ala Ile Ser Arg Lys Met Val Glu Leu Val1 5 10(2)序列鑒定號19的信息(ⅰ)序列特征(A)長度9個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:19:Ala Ile Ser Arg Lys Met Val Glu Leu1 5(2)序列鑒定號20的信息(ⅰ)序列特征(A)長度10個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:20:Lys Met Val Glu Leu Val His Phe Leu Leu1 5 10(2)序列鑒定號2l的信息(ⅰ)序列特征(A)長度11個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:21:Lys Met Val Glu Leu Val His Phe Leu Leu Leu1 5 10(2)序列鑒定號22的信息(ⅰ)序列特征(A)長度11個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQID NO:22:Leu Leu Leu Lys Tyr Arg Ala Arg Glu Pro Val1 5 10(2)序列鑒定號23的信息(ⅰ)序列特征(A)長度10個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型
(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:23:Leu Leu Lys Tyr Arg Ala Arg Glu Pro Val1 5 10(2)序列鑒定號24的信息(ⅰ)序列特征(A)長度11個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:24:Val Leu Arg Asn Cys Gln Asp Phe Phe Pro Val1 5 10(2)序列鑒定號25的信息(ⅰ)序列特征(A)長度11個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:25:Tyr Leu Gln Leu Val Phe Gly Ile Glu Val Val1 5 10(2)序列鑒定號26的信息(ⅰ)序列特征(A)長度10個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:26:Gly Ile Glu Val Val Glu Val Val Pro Ile1 5 10(2)序列鑒定號27的信息(ⅰ)序列特征(A)長度9個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:27:Pro Ile Ser His Leu Tyr Ile Leu Val1 5(2)序列鑒定號28的信息(ⅰ)序列特征(A)長度9個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型
(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:28:His Leu Tyr Ile Leu Val Thr Cys Leu1 5(2)序列鑒定號29的信息(ⅰ)序列特征(A)長度11個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:29:His Leu Tyr Ile Leu Val Thr Cys Leu Gly Leu1 5 10(2)序列鑒定號30的信息(ⅰ)序列特征(A)長度9個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:30:Tyr Ile Leu Val Thr Cys Leu Gly Leu1 5(2)序列鑒定號31的信息(ⅰ)序列特征(A)長度9個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:31:Cys Leu Gly Leu Ser Tyr Asp Gly Leu1 5(2)序列鑒定號32的信息:
(ⅰ)序列特征(A)長度10個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:32:Cys Leu Gly Leu Ser Tyr Asp Gly Leu Leu1 5 10(2)序列鑒定號33的信息(ⅰ)序列特征(A)長度9個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型
(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:33:Val Met Pro Lys Thr Gly Leu Leu Ile1 5(2)序列鑒定號34的信息(ⅰ)序列特征(A)長度10個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:34:Val Mer Pro Lys Thr Gly Leu Leu Ile Ile1 5 10(2)序列鑒定號35的信息(ⅰ)序列特征(A)長度11個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:35:Val Met Pro Lys Thr Gly Leu Leu Ile Ile Val1 5 10(2)序列鑒定號36的信息(ⅰ)序列特征(A)長度9個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:36:Gly Leu Leu Ile Ile Val Leu Ala Ile1 5(2)序列鑒定號37的信息(ⅰ)序列特征(A)長度10個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:37:Gly Leu Leu Ile Ile Val Leu Ala Ile Ile1 5 10(2)序列鑒定號38的信息(ⅰ)序列特征(A)長度11個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型
(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:38:Gly Leu Leu Ile Ile Val Leu Ala Ile Ile Ala1 5 10(2)序列鑒定號39的信息(ⅰ)序列特征(A)長度9個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:39:Leu Leu Ile Ile Val Leu Ala Ile Ile1 5(2)序列鑒定號40的信息(ⅰ)序列特征(A)長度10個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:40:Leu Leu Ile Ile Val Leu Ala Ile Ile Ala1 5 10(2)序列鑒定號41的信息(ⅰ)序列特征(A)長度11個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:41:Leu Leu Ile Ile Val Leu Ala Ile Ile Ala Ile1 5 10(2)序列鑒定號42的信息(ⅰ)序列特征(A)長度9個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:42:Leu Ile Ile Val Leu Ala Ile Ile Ala1 5(2)序列鑒定號43的信息(ⅰ)序列特征(A)長度10個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型
(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:43:Leu Ile Ile Val Leu Ala Ile Ile Ala Ile15 10(2)序列鑒定號44的信息(ⅰ)序列特征(A)長度9個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:44:Ile Ile Ala Ile Glu Gly Asp Cys Ala1 5 10(2)序列鑒定號45的信息(ⅰ)序列特征(A)長度9個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:45:Lys Ile Trp Glu Glu Leu Ser Met Leu1 5(2)序列鑒定號46的信息(ⅰ)序列特征(A)長度11個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:46:Leu Met Gln Asp Leu Val Gln Glu Asn Tyr Leu1 5 10(2)序列鑒定號47的信息(ⅰ)序列特征(A)長度9個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:47:Phe Leu Trp Gly Pro Arg Ala Leu Ile1 5(2)序列鑒定號48的信息(ⅰ)序列特征(A)長度10個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型
(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:48:Leu Ile Glu Thr Ser Tyr Val Lys Val Leu1 5 10(2)序列鑒定號49的信息(ⅰ)序列特征(A)長度11個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:49:Ala Leu Ile Glu Thr Ser Tyr Val Lys Val Leu1 5 10(2)序列鑒定號50的信息(ⅰ)序列特征(A)長度10個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:50:Thr Leu Lys Ile Gly Gly Glu Pro His Ile1 5 10(2)序列鑒定號51的信息(ⅰ)序列特征(A)長度11個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:51:His Ile Ser Tyr Pro Pro Leu His Glu Arg Ala1 5 10(2)序列鑒定號52的信息(ⅰ)序列特征(A)長度9個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:52:Gln Thr Ala Ser Ser Ser Ser Thr Leu1 5(2)序列鑒定號53的信息(ⅰ)序列特征(A)長度10個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型
(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:53:Gln Thr Ala Ser Ser Ser Ser Thr Leu Val1 5 10(2)序列鑒定號54的信息(ⅰ)序列特征(A)長度9個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:54:Val Thr Leu Gly Glu Val Pro Ala Ala1 5(2)序列鑒定號55的信息(ⅰ)序列特征(A)長度10個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:55:Val Thr Lys Ala Glu Met Leu Glu Ser Val1 5 10(2)序列鑒定號56的信息(ⅰ)序列特征(A)長度11個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:56:Val Thr Lys Ala Glu Met Leu Glu Ser Val Leu1 5 10(2)序列鑒定號57的信息(ⅰ)序列特征(A)長度11個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:57:Val Thr Cys Leu Gly Leu Ser Tyr Asp Gly Leu1 5 10(2)序列鑒定號58的信息(ⅰ)序列特征(A)長度9個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型
(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:58:Lys Thr Gly Leu Leu Ile Ile Val Leu1 5(2)序列鑒定號59的信息(ⅰ)序列特征(A)長度10個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:59:Lys thr Gly Leu Leu Ile Ile Val Leu Ala1 5 10(2)序列鑒定號60的信息(ⅰ)序列特征(A)長度11個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:60:Lys Thr Gly Leu Leu Ile Ile Val Leu Ala Ile1 5 10(2)序列鑒定號6l的信息(ⅰ)序列特征(A)長度11個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:61:His Thr Leu Lys Ile Gly Gly Glu Pro His Ile1 5 10(2)序列鑒定號62的信息(ⅰ)序列特征(A)長度9個氨基酸殘基(B)類型氨基酸(C)拓?fù)鋵W(xué)線型(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:62:Met Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr1 權(quán)利要求
1.對HLA-A2分子與SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5和SEQID NO:9之一的復(fù)合物具有特異性的分離的溶胞性T細(xì)胞克隆。
2.權(quán)利要求1的分離的溶胞性T細(xì)胞克隆，其中所說的分離的溶胞性T細(xì)胞克隆對HLA-A2分子的復(fù)合物具有特異性。
3.權(quán)利要求1的分離的溶胞性T細(xì)胞克隆，其中所說的分離的溶胞性T細(xì)胞克隆對HLA-A2分子與SEQ ID No:5的復(fù)合物具有特異性。
4.權(quán)利要求1的分離的溶胞性T細(xì)胞克隆，其中所說的分離的溶胞性T細(xì)胞克隆對HLA-A2分子與SEQ ID No:9的復(fù)合物具有特異性。
5.在受試者中誘導(dǎo)產(chǎn)生溶胞性T細(xì)胞的方法，包含給細(xì)胞上存在HLA-A2分子的受試者施用SEQ ID No:3、SEQ ID No:5和SEQID No:9中的至少一種，施用量足以誘導(dǎo)針對HLA-A2與SEQ ID No:3、SEQ ID No:5和SEQ ID No:9之一的復(fù)合物的溶胞性T細(xì)胞的增生。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所說的受試者需要溶胞性T細(xì)胞增生。
7.選自SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:69的分離的肽。
全文摘要
本發(fā)明公開了來自MAGE－2分子且結(jié)合HLA－A*0201分子的新肽。其中一些特別有用,因?yàn)楫?dāng)它們與其HLA－A*0201配偶性分子復(fù)合時可誘導(dǎo)CTL增生。
文檔編號A61K35/26GK1226897SQ97196749
公開日1999年8月25日 申請日期1997年7月24日 優(yōu)先權(quán)日1996年7月25日
發(fā)明者科內(nèi)利斯·J·M·梅利夫, M·W·維塞倫, 舒爾德·范德堡, 皮埃爾·范德布魯根, 蒂埃里·布恩法勒爾 申請人:路德維格癌癥研究所, 萊頓大學(xué)