專利名稱：利用司來吉蘭或去甲基司來吉蘭治療創(chuàng)傷、燒傷和皮膚病損害的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及通過表面給予含有司來吉蘭(seleginline)和/或去甲基司來吉蘭(desmethylselegiline)的組合物來治療創(chuàng)傷、燒傷或皮膚病損害的方法。
本發(fā)明背景A．自由基自由基是在它們的外層軌道上具有一個(gè)或多個(gè)不成對(duì)電子的分子。這些電子的存在，結(jié)合分子尋求最低的穩(wěn)定的能量狀態(tài)的趨勢(shì)，導(dǎo)致自由基高活性和通常短暫的壽命。在體內(nèi)經(jīng)常發(fā)現(xiàn)的自由基是氧、超氧化物陰離子和羥基基團(tuán)。這些通常稱作為“氧化劑”，并且常常是電子經(jīng)過分子到分子的串聯(lián)的結(jié)果。
B．損傷和自由基損害如創(chuàng)傷和燒傷的損傷產(chǎn)生自由基，該自由基具有局部和全身兩種作用。局部而言，自由基與組織缺血(Granger等，Gastroenterology81:22-29(1981)；Parks等，Gastroenterology82:9-15(1982))和再灌注損傷(Schiller等，Critical Care Med.21:S92-S100(1993))兩者有關(guān)。全身而言，燒傷常常引起心、肺和肝臟機(jī)能障礙。研究人員已經(jīng)發(fā)現(xiàn)當(dāng)脂質(zhì)過氧化作用(通常由自由基的活動(dòng)引起)降低時(shí)可改善燒傷愈合(LaLonde等，J.Burns Care & Rehabilitation17:379-383(1996))。
C．光照損害皮膚暴露于紫外線和光譜的可見部分的電磁輻射和離子輻射可導(dǎo)致皮膚細(xì)胞中蛋白質(zhì)和DNA兩者的損害。這種“光照損害”與非-黑素瘤皮膚癌、免疫功能抑制和光照老化(photoaging)的誘導(dǎo)有關(guān)。
皮膚暴露于紫外線和離子輻射以及伴隨的病理生物學(xué)改變與氧化劑的產(chǎn)生和抗-氧化劑水平及活性的降低密切相關(guān)(Stewart等，J.Inv.Dermatol.106:1086-1089(1996)；Darr等，Brit.J.Dermatol.127:247-253(1992))。具體地說，研究已顯示在暴露于UVB輻射以后，表皮的超氧化物歧化酶活性和維生素C及維生素E的水平均降低。排出氧化劑(如通過外源性抗-氧化劑的應(yīng)用)或阻止氧化劑產(chǎn)生(如通過減少暴露于離子輻射)能減輕或防止皮膚病損害。離子輻射的副作用包括水腫、血管擴(kuò)張、真皮中淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、角質(zhì)細(xì)胞角化不良和表皮海綿層細(xì)胞間水腫。
D．利用抗-氧化劑去除自由基毒性已采用許多不同的策略試圖阻止或減輕自由基損害。內(nèi)源性抗-氧化劑，如超氧化物歧化酶、過氧化氫酶或谷胱甘肽過氧化物酶，可用來保護(hù)細(xì)胞膜，而藥劑如抗壞血酸和谷胱甘肽則可用于保護(hù)細(xì)胞質(zhì)。其它抗-氧化劑，如α-生育酚和維甲酸，也已被用于減輕自由基的作用。
缺血后超氧化物歧化酶的應(yīng)用阻止了伴有再灌注損傷的毛細(xì)血管通透性的增加(Granger等，Gastroenterology81:22-29(1981))，并且去除再灌注前和再灌注時(shí)產(chǎn)生的自由基可阻止或減輕多系統(tǒng)器官衰竭綜合癥的嚴(yán)重性(Schiller等，Critical Care Med.21:S92-S100(1993))。Stewart等已證明通過將含有抗-氧化劑如維生素C、亞硒酸鹽或水溶性維生素E類物質(zhì)的培養(yǎng)基補(bǔ)充到細(xì)胞周圍，可減輕人角質(zhì)細(xì)胞中UVB誘導(dǎo)的DNA損害(J.Inv.Dermatol.106:1086-1089(1996))。
E．司來吉蘭和去甲基司來吉蘭單胺氧化酶A(MAO-A)和單胺氧化酶B(MAO-B)是在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周圍組織中發(fā)現(xiàn)的酶。MAO-A和MAO-B催化伯胺(包括神經(jīng)活性和血管活性胺)的氧化脫氨作用，導(dǎo)致毒性自由基類物質(zhì)和自由基產(chǎn)生的串聯(lián)的形成。司來吉蘭是一種有效的和選擇性的單胺氧化酶B抑制劑，并且已報(bào)道具有保護(hù)或恢復(fù)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元的作用(Knoll,Mount Sinai J.Med.55:67-74(1988))。盡管司來吉蘭引起該作用的確切機(jī)制尚不清楚，有證據(jù)支持其可通過減輕由單胺氧化酶和/或其它氧化劑引起的氧化損害而提供神經(jīng)保護(hù)或神經(jīng)元修復(fù)(Jenner等，Neurology 47:S162-S170(1996))。在這點(diǎn)上，司來吉蘭已顯示出增加內(nèi)源性抗-氧化劑超氧化物歧化酶、過氧化氫酶和谷胱甘肽過氧化物酶的活性(同上)。
去甲基司來吉蘭，司來吉蘭的代謝產(chǎn)物之一，與司來吉蘭相比表現(xiàn)出較低的MAO-B抑制活性，并且在MAO-A的抑制方面，其活呈較大程度的降低。因此，期望去甲基司來吉蘭可產(chǎn)生司來吉蘭樣的神經(jīng)保護(hù)作用，并具有較低的伴隨MAO-A抑制的副作用的危險(xiǎn)。
盡管司來吉蘭已被用于治療帕金森氏病，但其用作損傷如燒傷和創(chuàng)傷的治療，以及用作減輕皮膚病損害如光照損害的治療迄今尚不清楚。本發(fā)明涉及依靠給予司來吉蘭或去甲基司來吉蘭來加速愈合并減少這些疾病的相關(guān)并發(fā)癥的方法。
本發(fā)明概述本發(fā)明是基于含有司來吉蘭和/或去甲基司來吉蘭的組合物能被用于創(chuàng)傷、燒傷和光照損害的皮膚的治療這一發(fā)現(xiàn)。在燒傷和創(chuàng)傷的情況下，組合物應(yīng)給予足夠時(shí)期以促進(jìn)上皮形成。在皮膚光照損害的情況下，所述組合物應(yīng)給予足夠時(shí)期以促進(jìn)愈合，所述愈合以一種或多種與皮膚光照損害有關(guān)的癥狀的減輕作為依據(jù)。這些癥狀包括水腫、血管擴(kuò)張、真皮中淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、角質(zhì)細(xì)胞角化不良和表皮海綿層細(xì)胞間水腫。
盡管本發(fā)明包括以任何途徑給藥，但優(yōu)選含有1×10-11摩爾/升和1×10-3摩爾/升之間的司來吉蘭和/或去甲基司來吉蘭的局部組合物以表面方式給藥。局部使用的組合物可以噴霧劑、貼片、軟膏、霜?jiǎng)?、洗劑或凝膠的方式給予。如此處使用的，術(shù)語“去甲基司來吉蘭”既表示所述藥物的R(-)對(duì)映體形式、所述藥物的S(+)對(duì)映體形式，也表示兩者的外消旋混合物。在進(jìn)行本方法時(shí)，可以采用基本上無所述S(+)對(duì)映體的所述R(-)對(duì)映體，反之亦然。如果一種對(duì)映體構(gòu)成少于10％的合并的去甲基司來吉蘭對(duì)映體，其基本上是缺乏的。組合物可以含有水、懸浮劑、增稠劑、濕潤(rùn)劑、防腐劑、潤(rùn)膚劑、乳化劑和薄膜形成劑。它們可直接施用于患者的皮膚，或者它們可作為貼片的部分使用。
盡管并非優(yōu)選，非-表面途徑給藥也符合本發(fā)明，并且可以被采用。當(dāng)非-口服使用時(shí)，司來吉蘭或去甲基司來吉蘭的劑量至少應(yīng)為每公斤體重0.015mg，以游離仲胺為基礎(chǔ)計(jì)算，根據(jù)給藥途徑和治療后的反應(yīng)，可逐步使用更高的劑量。通常，非-口服日劑量為大約0.10mg/kg，并可增加到大約1.0mg/kg(所有這些劑量再次以游離仲胺為基礎(chǔ)計(jì)算)。
本發(fā)明詳述在以下描述中，將提及醫(yī)藥領(lǐng)域中技術(shù)人員熟知的多種方法學(xué)。在闡述這些方法的一般原理的標(biāo)準(zhǔn)參考著作中描述了這些方法學(xué)。除非另外指明，否則該描述僅適用于司來吉蘭，以及去甲基司來吉蘭的所有對(duì)映體形式。
劑量用于本發(fā)明目的的司來吉蘭和/或去甲基司來吉蘭的最佳日劑量取決于本領(lǐng)域中已知的方法，該方法以臨床情況為基礎(chǔ)，如損傷的嚴(yán)重性、接受治療的患者的狀況、期望的治療反應(yīng)和給予患者或動(dòng)物的伴隨的治療。然而，一般希望主治醫(yī)生或獸醫(yī)使用含有1×10-11摩爾/升和1×10-3摩爾/升之間(優(yōu)選1×10-9摩爾/升和1×10-3摩爾/升之間)濃度的司來吉蘭和/或去甲基司來吉蘭的局部用組合物。應(yīng)給予足夠的組合物以完全覆蓋個(gè)體皮膚上的損害區(qū)域。
如果醫(yī)生選擇非-口服途徑給予，至少應(yīng)每日給予至少0.015mg/kg的司來吉蘭和/或去甲基司來吉蘭，更常用劑量為大約0.10mg/kg。所述日劑量可增加到大約1.0 mg/kg。在所有情況下，劑量均以給予的所述藥劑的游離仲胺為基礎(chǔ)計(jì)算。這些準(zhǔn)則進(jìn)一步需要由主治醫(yī)生或獸醫(yī)根據(jù)接受治療個(gè)體的年齡、體重、臨床狀況和觀察到的反應(yīng)而謹(jǐn)慎地測(cè)定準(zhǔn)確的劑量。
局部用組合物可每日數(shù)次給予創(chuàng)傷、燒傷或光照損害的皮膚。同樣，非-口服制劑的日劑量可以單個(gè)或多個(gè)劑量方案給予。此外，可采用允許活性藥劑持續(xù)釋放的劑型(如透皮貼片)給藥。
劑型給藥途徑如以上所提到的，表面局部給藥和局部用劑型通常首選用于本方法。然而，文獻(xiàn)中描述的司來吉蘭給藥的許多劑型的任何一種均可采用，并且需要時(shí)可包括去甲基司來吉蘭。例如，U.S.4,812,481公開了，以口、胸、內(nèi)服、肺、直腸、鼻、陰道、舌、靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、心內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹腔內(nèi)、皮內(nèi)和皮下用制劑與金剛胺聯(lián)合使用的司來吉蘭的用途。U.S.4,192,550描述了一種司來吉蘭的劑型，該劑型具有一個(gè)外壁，在外壁上有一個(gè)或多個(gè)孔，其對(duì)司來吉蘭不能滲透但是對(duì)外部液體可滲透。這種劑型可適用于口服、舌下和口腔給藥。同樣，U.S.4,387,615公開了多種司來吉蘭組合物，包括片劑、丸劑、膠囊、散劑、氣霧劑、栓劑、皮膚貼片、胃腸外制劑和口服液體(包括油混懸劑、溶液和乳劑)。那里進(jìn)一步公開的是內(nèi)含司來吉蘭的緩釋(長(zhǎng)效)制劑和裝置。
可按照常規(guī)技術(shù)制備局部用劑型，通常優(yōu)選霜?jiǎng)?。局部霜?jiǎng)┛梢允腔瘖y品樣柔和的水包油劑、霜?jiǎng)?洗劑/乳劑，含有所需特別濃度的司來吉蘭和/或去甲基司來吉蘭。這種濕潤(rùn)霜?jiǎng)┬问娇珊休d體、維持載體在合適pH的緩沖系統(tǒng)以及可接受的抗微生物防腐系統(tǒng)。所述霜?jiǎng)┛蛇M(jìn)一步含有增稠劑、濕潤(rùn)劑、潤(rùn)膚劑、乳化劑和薄膜形成劑。制備合適制劑的方法是本領(lǐng)域中所熟知的(參見如Remington’sPharmaceutical Sciences，第16版，A.Oslo.ed.,Easton PA(1980))。
利用在本領(lǐng)域中已被描述的多種技術(shù)能制備透皮劑型。在美國(guó)專利號(hào)4,861,800、4,868,218、5,128,145、5,190,763和5,242,950以及國(guó)外專利文件EP-A404807、EP-A509761和EP-A593807中均可發(fā)現(xiàn)實(shí)施例。可采用單層貼片的整體結(jié)構(gòu)，在該貼片中將藥物直接與粘附劑結(jié)合并將該混合物澆鑄到背材布片上。EP-A593807描述了一種組合物，在該組合物中司來吉蘭作為酸加成鹽通過將其結(jié)合到多層貼片中而給予，該多層貼片促使所述鹽轉(zhuǎn)化為司來吉蘭的游離堿形式。人們也可采用一種使用易溶液體結(jié)晶組合物的裝置，例如，在該組合物中5-15％的司來吉蘭與液體和固體聚乙二醇混合物、聚合物和非-離子表面活性劑混合物，任選加入丙二醇和乳化劑。這種透皮制劑制備的更進(jìn)一步的細(xì)節(jié)可參考EP-A5509761。
利用在例如U.S.5,192,550、5,221,536、5,266,332、5,057,321、5,446,070、4,826,379或5,354,885中描述的技術(shù)可制備司來吉蘭和/或去甲基司來吉蘭的口腔和舌下使用的劑型。
司來吉蘭或去甲基司來吉蘭的化學(xué)形式本發(fā)明不限于任何司來吉蘭和/或去甲基司來吉蘭的具體形式，并且藥物既可作為游離堿也可作為藥學(xué)上可接受的酸加成鹽而被使用。在后一情況下，通常優(yōu)選鹽酸鹽。然而，也可使用得自有機(jī)和無機(jī)酸的其它鹽。
治療方式此處公開的方法可用于人類和非人類兩種患者。關(guān)于后者，所述方法特別(但并非唯一)針對(duì)家庭哺乳動(dòng)物如犬和貓類。
在創(chuàng)傷和燒傷病例中，應(yīng)連續(xù)給予司來吉蘭和/或去甲基司來吉蘭治療直到完成上皮形成。對(duì)于皮膚病損害，應(yīng)連續(xù)治療直到有關(guān)癥狀如水腫、血管擴(kuò)張、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)或表皮海綿層細(xì)胞間水腫消退。所述藥物既可以有規(guī)律的間期給予(如，每日兩次)，也可以基本上連續(xù)的方式(如，經(jīng)由透皮貼片)給予。
實(shí)施例實(shí)施例1司來吉蘭和去甲基司來吉蘭對(duì)光照損害的保護(hù)作用司來吉蘭和/或去甲基司來吉蘭防止光照損害的能力可與因暴露于UVB輻射而致細(xì)胞凋亡的數(shù)目的減少有關(guān)。前期研究顯示當(dāng)暴露于600-800J/m2時(shí)，生長(zhǎng)于無血清培養(yǎng)基中的人初始角質(zhì)細(xì)胞對(duì)紫外線導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡敏感。此外，缺乏生長(zhǎng)因子，尤其是胰島素，將增加角質(zhì)細(xì)胞對(duì)UVB輻射的敏感性而在紫外線水平為200J/m2時(shí)即發(fā)生細(xì)胞凋亡。
將生長(zhǎng)于完全的，和缺乏生長(zhǎng)因子(GFD)的培養(yǎng)基中的兩組人初始角質(zhì)細(xì)胞用于全部四組的培養(yǎng)物中。然后將角質(zhì)細(xì)胞置于GFD或含有0、1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4和1×10-3M司來吉蘭或去甲基司來吉蘭的完全培養(yǎng)基中。24小時(shí)后加入藥物，用0或200J/m2的UVB照射生長(zhǎng)于GFD培養(yǎng)基中的角質(zhì)細(xì)胞，用0或800J/m2的UVB照射生長(zhǎng)于完全培養(yǎng)基中的角質(zhì)細(xì)胞。應(yīng)用形態(tài)學(xué)檢查法、DAPI染色法、膜聯(lián)蛋白V-異硫氰酸熒光素-熒光活化細(xì)胞分檢器(Annexin V-FITC FACS)分析法和PARP切割分析法，測(cè)定角質(zhì)細(xì)胞在照射后15小時(shí)凋亡發(fā)生情況。
首先，用形態(tài)學(xué)檢測(cè)角質(zhì)細(xì)胞的凋亡跡象。在形態(tài)學(xué)檢查之后，通過胰酶消化并低速離心沉淀收集細(xì)胞。將每份沉淀分成三部分用于剩余的檢測(cè)。
DAPI染色是用于檢測(cè)細(xì)胞凋亡時(shí)細(xì)胞核濃縮的特征的。用PBS洗滌每份細(xì)胞沉淀的一個(gè)等份，用Histochoice固定，然后將其再懸浮于DAPI染色液中1小時(shí)。隨后用PBS洗滌細(xì)胞并用cytospins將其裝載于顯微玻片上。然后通過落射熒光顯微鏡使細(xì)胞顯影并確定凋亡細(xì)胞的百分率。
膜聯(lián)蛋白V-FIT FACS分析法是用于測(cè)定暴露于細(xì)胞外的磷脂酰絲氨酸的。在細(xì)胞凋亡早期，部分細(xì)胞漿膜的易位導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)正常的磷脂酰絲氨酸移向胞漿膜表面外側(cè)。膜聯(lián)蛋白V可與細(xì)胞外的磷脂酰絲氨酸結(jié)合而且可通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)這種結(jié)合的數(shù)量。用PBS洗滌每份細(xì)胞沉淀的一個(gè)等份并將其再懸浮于結(jié)合緩沖液中。然后將細(xì)胞置于膜聯(lián)蛋白V-FIT和碘化丙錠(propidium iodide)中避光孵育15分鐘。在培養(yǎng)之后，用FACS分析法測(cè)定細(xì)胞凋亡的百分率。凋亡細(xì)胞為膜聯(lián)蛋白V-FACS陽性而碘化丙錠陰性。
PARP切割分析法用于測(cè)定凋亡發(fā)生期間蛋白水解的串聯(lián)。用于與凋亡有關(guān)的蛋白酶的底物的一種是多聚(二磷酸腺苷核糖)多聚酶，或PARP。切割后，PARP減小為特征是85kD的片段。將每份細(xì)胞沉淀的一個(gè)等份懸浮于含有7％尿素和蛋白裂解液的RPIA緩沖液中。得到的細(xì)胞蛋白隨后通過半-干電泳轉(zhuǎn)移至固相化蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移膜(Immobilin Pmembranes)上并在室溫下于TSB緩沖液(150mM氯化鈉；100mM Tris-堿，pH7.5；2％封閉劑B∶Boehringer Mannheim)中孵育2小時(shí)。用TSB和2％封閉劑B稀釋抗-PARP的單克隆抗體(CloneC-2-10)。在孵育1小時(shí)后，用含有0.1％吐溫(Tween)20的TSB緩沖液洗滌所述膜三次。完成孵育之后，將用TSB稀釋生物素化的山羊(Fab′-片段)抗-鼠Ig(免疫球蛋白)加到所述膜中而且隨后用含有0.1％吐溫20的TSB緩沖液洗滌所述膜三次。將鏈霉親和素-辣根過氧化物酶偶和物加入上述膜中并用Enhanced Chemilumine-scent Plus(Amersham)使蛋白結(jié)合帶顯影。用光密度測(cè)定法對(duì)全部的PARP蛋白與切割的PARP片段(85kD)進(jìn)行比較以測(cè)定PARP切割的百分率。
實(shí)施例2司來吉蘭和去甲基司來吉蘭對(duì)燒傷的治療作用應(yīng)用二度燒傷模型測(cè)試司來吉蘭和去甲基司來吉蘭幫助治療燒傷的能力。在二度燒傷中，表皮的所有表面均被破壞。表皮的覆蓋是鄰近于燒傷部位的殘留的上皮和表皮細(xì)胞的再生。這一治療過程的階段被稱為上皮形成。
A．材料和方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物將豬用作實(shí)驗(yàn)用研究動(dòng)物，因?yàn)樗鼈兊钠つw與人類皮膚有許多形態(tài)學(xué)上的相似。實(shí)驗(yàn)開始前，將7只無特異性病原體的年輕雌性的，重量在25-30公斤的豬(SPF:Ken-O-Kaw Farms,Windsor,IL)置于房中2周。給這些動(dòng)物任意喂飼基礎(chǔ)飼料并且將其分別飼養(yǎng)在具有控制溫度(19-21℃)和光線(12h/12h LD)設(shè)備的房間。
制造創(chuàng)傷技術(shù)在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物夾鉗夾固定。通過用無抗生素肥皂和無菌水洗滌，對(duì)動(dòng)物后背及兩側(cè)備皮以供制造創(chuàng)傷用。在用面罩吸入isoflurane和氧氣的混合氣體后，將每只動(dòng)物肌肉注射鹽酸氯胺酮(20mg/Kg)、xylazine(2mg/Kg)和阿托品(0.05mg/Kg)進(jìn)行麻醉。將五個(gè)特別設(shè)計(jì)的重量為358g的圓柱形銅桿每個(gè)均在沸水浴中加熱到100℃。將銅桿從水浴中取出并在施用于皮膚表面之前吹干以避免水滴在皮膚上造成的蒸氣燙傷。該銅桿以垂直位置放置在皮膚上六秒鐘，施以重力提供的壓力，以便造成8.5mm直徑×0.8mm深度的燙傷。燙傷后即刻，用無菌刮刀去除該燙傷水泡的頂部。所述燙傷創(chuàng)面相互間間隔大約2cm。
在動(dòng)物的前三分之二造成大約90個(gè)燙傷創(chuàng)面。動(dòng)物的后三分之一由于在燙傷創(chuàng)面愈合中解剖學(xué)的差異(在該部位觀察到更加快的愈合)而不能使用。將燙傷創(chuàng)面隨機(jī)分配為7個(gè)治療組，并以在表1中顯示的方案給藥。
表1治療組動(dòng)物數(shù)治療組1 藥劑A(劑量X) 藥劑A(劑量Y) 藥劑A(劑量Z)1 藥劑A(劑量Y) 藥劑A(劑量Z) 藥劑B(劑量X)1 藥劑A(劑量Z) 藥劑B(劑量X) 藥劑B(劑量Y)1 藥劑B(劑量X) 藥劑B(劑量Y) 藥劑B(劑量Z)1 藥劑B(劑量Y) 藥劑B(劑量Z) 暴露于空氣，對(duì)照1 藥劑A(劑量X) 藥劑B(劑量Z) 暴露于空氣，對(duì)照1 藥劑A(劑量X) 藥劑A(劑量Y) 暴露于空氣，對(duì)照藥劑A=司來吉蘭 劑量X=10-4M藥劑B=去甲基司來吉蘭HCl 劑量Y=10-6M劑量Z=10-8M所有七只動(dòng)物均被采用，并且在創(chuàng)傷后7-12天的每一天分析每個(gè)治療組的總共15個(gè)創(chuàng)面。編碼治療以維持雙盲研究準(zhǔn)則。所述燙傷創(chuàng)面用25μg的試驗(yàn)物質(zhì)(足以覆蓋每個(gè)創(chuàng)面)治療。允許治療滲透進(jìn)入該部位至少20分鐘時(shí)間。每一治療均在水泡去除20分鐘內(nèi)給予，并且在開始5天每日一次給予治療。
表皮移行評(píng)估自燙傷日(0天)后第7天開始，其后每天連續(xù)4到6天，用電子角膜刀切除五個(gè)燙傷創(chuàng)面和每個(gè)治療部位的周邊正常皮膚。棄去任何非切除的無傷的樣品。將切除的創(chuàng)面和周邊正常皮膚在0.5M NaBr中于37℃下孵育24小時(shí)。孵育后，將樣品分為表皮和皮片。用顯微鏡檢查所述表皮創(chuàng)面部位的缺損。如果不存在缺損(治愈)，則認(rèn)為上皮形成完全。創(chuàng)面的任何缺損表示未達(dá)到完全治愈。為了持久地記錄，將所述表皮的皮片置于紙板上。
B． 結(jié)果實(shí)驗(yàn)完成后，將編碼顯露出來并將數(shù)據(jù)制成表格。將所述治愈創(chuàng)面(上皮形成完全)的數(shù)除以每天創(chuàng)面樣品的總數(shù)再乘以100。結(jié)果示于表2中。
表2上皮形成結(jié)果(綜合數(shù)據(jù))*
*創(chuàng)面為治愈的創(chuàng)面數(shù)(上皮形成完全)與評(píng)估的創(chuàng)面數(shù)之比0上皮形成完全的創(chuàng)面的百分率編碼A=鹽酸司來吉蘭 2=10-6MB=鹽酸去甲基司來吉蘭3=10-8M1=10-4M所有創(chuàng)面均在施用后10-15分鐘內(nèi)吸收給予的化合物。在治療的頭三天內(nèi)，在吸收施用的藥劑后，所有治療組的創(chuàng)面均結(jié)痂并變?yōu)榘咨＿@在治療組A和B中更顯著。15分鐘后，所述結(jié)痂的顏色又變?yōu)檎?。在治療組中均未觀察到任何殘余痕跡、紅斑或感染。示于表2中的結(jié)果可如下述總結(jié)第7-9天無任何創(chuàng)面完成上皮形成。
第10天用濃度為1×10-4M和1×10-6M的鹽酸司來吉蘭治療組的創(chuàng)面有百分之二十(20％)上皮形成完全。其它治療組無任何創(chuàng)面(0％)完成上皮形成。
第11天無論是用鹽酸司來吉蘭(10-4M和10-6M)、鹽酸去甲基司來吉蘭(10-6M和10-8M)或生理鹽水治療組的創(chuàng)面均有百分之三十三(33％)上皮形成完全。用鹽酸去甲基司來吉蘭(10-4M)治療組的創(chuàng)面有百分之七(7％)上皮形成完全。用鹽酸司來吉蘭(10-8M)治療組，無任何創(chuàng)面完成上皮形成。
第12天用鹽酸司來吉蘭(分別為10-4M和10-6M)治療的組，其創(chuàng)面有百分之三十三(33％)和百分之四十(40％)上皮形成完全。用濃度為10-8M的鹽酸司來吉蘭治療組僅有百分之七(7％)上皮形成完全。用鹽酸去甲基司來吉蘭(分別為10-4M和10-6M和10-8M)治療的組，其創(chuàng)面有百分之三十三(33％)、百分之四十七(47％)和百分之六十七(67％)上皮形成完全。用生理鹽水治療組，例如所述對(duì)照細(xì)胞，有百分之四十(40％)的創(chuàng)面上皮形成完全。
第13天用鹽酸司來吉蘭(分別為10-4M和10-6M)治療的組，其創(chuàng)面有百分之三十三(33％)和百分之四十(40％)上皮形成完全。用濃度為10-8M的鹽酸司來吉蘭治療組有百分之三十八(38％)的創(chuàng)面上皮形成完全。
用鹽酸去甲基司來吉蘭(分別為10-4M和10-6M和10-8M)治療的組，其創(chuàng)面有百分之六十九(69％)、
百分之百(100％)和百分之六十七(67％)上皮形成完全。用生理鹽水治療組，例如所述對(duì)照組，有百分之六十七(67％)的創(chuàng)面上皮形成完全。
C．討論這些研究的數(shù)據(jù)提示用鹽酸司來吉蘭(10-4M和10-6M)治療的創(chuàng)面能比其它治療組更早期建立上皮形成。然而，在第13天，用鹽酸去甲基司來吉蘭(所有濃度)治療組有更高的上皮形成完全的百分率。用鹽酸去甲基司來吉蘭(10-6M)治療組創(chuàng)面上皮形成完全快于所有其它治療組。
實(shí)施例3應(yīng)用司來吉蘭和去甲基司來吉蘭改善光照損害的皮膚的外觀將在前臂和雙手的背部表現(xiàn)出中等至嚴(yán)重的光照性老化的女性人群作為研究對(duì)象，隨機(jī)安排接受賦形劑加司來吉蘭或僅接受賦形劑。在16周之內(nèi)，給研究對(duì)象提供足夠的霜?jiǎng)┮愿采w設(shè)計(jì)的測(cè)試部位BID。在給予霜?jiǎng)┲昂驮诘诙?、第八、第十六和第二十四周，?duì)測(cè)試部位的所述外觀進(jìn)行臨床評(píng)估。
實(shí)施例4應(yīng)用司來吉蘭維護(hù)維甲酸對(duì)光照性老化皮膚的陽性作用將在面部和其前臂的背部表現(xiàn)出中等至嚴(yán)重的光照性老化的女性人群作為研究對(duì)象，隨機(jī)安排給予賦形劑加司來吉蘭的結(jié)合或僅給予賦形劑。在最初的16周之內(nèi)，所有受試對(duì)象用維甲酸霜?jiǎng)┟咳找淮翁幚硭麄儍蓚?cè)的面部、前臂和手的表面。在隨后的一周內(nèi)，所有受試對(duì)象在測(cè)試部位不使用處理。在接下來的16周內(nèi)，所述受試對(duì)象使用僅含有賦形劑或含有賦形劑加司來吉蘭的霜?jiǎng)└采w設(shè)計(jì)的部位BID的一半。在給予霜?jiǎng)┲昂驼麄€(gè)研究過程中對(duì)測(cè)試部位進(jìn)行臨床評(píng)估。
此處引用的所有參考文獻(xiàn)通過引用全部結(jié)合到到本文中。對(duì)于現(xiàn)在已充分描述的本發(fā)明，本領(lǐng)域的技術(shù)人員將會(huì)理解本發(fā)明可在一個(gè)廣泛和同等的條件、參數(shù)等范圍內(nèi)進(jìn)行，而不影響本發(fā)明或其任何實(shí)施例的精髓或?qū)嵤┓秶?br> 權(quán)利要求
1．在患者中治療創(chuàng)傷的一種方法，其包括在足以促使所述創(chuàng)傷上皮形成的時(shí)間段內(nèi)將含有司來吉蘭(selegiline)和/或去甲基司來吉蘭(desmethylselegi1ine)的組合物給予所述患者。
2．權(quán)利要求1的方法，其中所述組合物是含有1×10-11摩爾/升和1×10-3摩爾/升之間濃度的司來吉蘭的局部組合物。
3．權(quán)利要求1的方法，其中所述組合物是含有1×10-11摩爾/升和1×10-3摩爾/升之間濃度的去甲基司來吉蘭的局部組合物。
4．權(quán)利要求1的方法，其中所述組合物含有R(-)對(duì)映體形式的去甲基司來吉蘭，而所述S(+)對(duì)映體基本上不存在。
5．權(quán)利要求1的方法，其中所述組合物含有S(+)對(duì)映體形式的去甲基司來吉蘭，而所述R(-)對(duì)映體基本上不存在。
6．權(quán)利要求2或3的方法，其中所述組合物是霜?jiǎng)┬问健?br> 7．權(quán)利要求2或3的方法，其中所述局部組合物是凝膠形式。
8．權(quán)利要求1的方法，其中所述組合物包含以貼片方式釋藥的司來吉蘭。
9．權(quán)利要求1的方法，其中所述組合物包含以貼片方式釋藥的去甲基司來吉蘭。
10．權(quán)利要求1的方法，其中所述組合物進(jìn)一步包含選自下列的一種或多種化合物水、懸浮劑、增稠劑、濕潤(rùn)劑、防腐劑、潤(rùn)膚劑、乳化劑和薄膜形成劑。
11．在患者中治療燒傷的一種方法，其包括在足以促使所述燒傷上皮形成的時(shí)間段內(nèi)將含有司來吉蘭和/或去甲基司來吉蘭的組合物給予所述患者。
12．權(quán)利要求11的方法，其中所述組合物是含有1×10-11摩爾/升和1×10-3摩爾/升之間濃度的司來吉蘭的局部組合物。
13．權(quán)利要求11的方法，其中所述組合物是含有1×10-11摩爾/升和1×10-3摩爾/升之間濃度的去甲基司來吉蘭的局部組合物。
14．權(quán)利要求11的方法，其中所述組合物含有R(-)對(duì)映體形式的去甲基司來吉蘭，而所述S(+)對(duì)映體基本上不存在。
15．權(quán)利要求11的方法，其中所述組合物含有S(+)對(duì)映體形式的去甲基司來吉蘭，而所述R(-)對(duì)映體基本上不存在。
16．權(quán)利要求12或13的方法，其中所述組合物是霜?jiǎng)┬问健?br> 17．權(quán)利要求12或13的方法，其中所述局部組合物是凝膠形式。
18．權(quán)利要求11的方法，其中所述組合物包含以貼片方式釋藥的司來吉蘭。
19．權(quán)利要求11的方法，其中所述組合物包含以貼片方式釋藥的去甲基司來吉蘭。
20．權(quán)利要求11的方法，其中所述組合物進(jìn)一步包含選自以下的一種或多種化合物水、懸浮劑、增稠劑、濕潤(rùn)劑、防腐劑、潤(rùn)膚劑、乳化劑和薄膜形成劑。
21．治療患者光照損害的皮膚的一種方法，其包括在足以促進(jìn)所述光照損害的皮膚愈合的時(shí)間段內(nèi)將含有司來吉蘭和/或去甲基司來吉蘭的組合物給予所述患者。
22．權(quán)利要求21的方法，其中所述組合物是含有1×10-11摩爾/升和1×10-3摩爾/升之間濃度的司來吉蘭的局部組合物。
23．權(quán)利要求21的方法，其中所述組合物是含有1×10-11摩爾/升和1×10-3摩爾/升之間濃度的去甲基司來吉蘭的局部組合物。
24．權(quán)利要求21的方法，其中所述組合物含有R(-)對(duì)映體形式的去甲基司來吉蘭，而所述S(+)對(duì)映體基本上不存在。
25．權(quán)利要求21的方法，其中所述組合物含有S(+)對(duì)映體形式的去甲基司來吉蘭，而所述R(-)對(duì)映體基本上不存在。
26．權(quán)利要求22或23的方法，其中所述組合物是霜?jiǎng)┬问健?br> 27．權(quán)利要求22或23的方法，其中所述局部組合物是凝膠形式。
28．權(quán)利要求21的方法，其中所述組合物包含以貼片方式釋藥的司來吉蘭。
29．權(quán)利要求21的方法，其中所述組合物包含以貼片方式釋藥的去甲基司來吉蘭。
30．權(quán)利要求21的方法，其中所述組合物進(jìn)一步包含由選自下列的一種或多種化合物組成的稀釋劑或載體水、懸浮劑、增稠劑、濕潤(rùn)劑、防腐劑、潤(rùn)膚劑、乳化劑和薄膜形成劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及可用于治療創(chuàng)傷、燒傷和光照損害的皮膚的方法。該方法可用于人類和動(dòng)物,并涉及給予含有司米吉蘭和/或去甲基司米吉蘭的組合物。
文檔編號(hào)A61K31/137GK1300209SQ99806075
公開日2001年6月20日 申請(qǐng)日期1999年3月3日 優(yōu)先權(quán)日1998年3月16日
發(fā)明者M·G·雷斯尼克 申請(qǐng)人:薩默塞特藥品有限公司