紅背葉根提取物及制備方法和在制備治療乙肝藥物的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，特別涉及一種紅背葉根的有效部位提取物，還涉及該提取 物的制備方法和用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 乙肝是由乙型肝炎病毒（HBV)引起的一種嚴(yán)重危害人類健康的疾病，具有傳染性 強(qiáng)，流行面廣和發(fā)病率高的特點。我國約有1.2億乙肝病人及HBV攜帶者。研宄發(fā)現(xiàn)，"無 癥狀乙肝病毒攜帶者"中60%?70%肝活檢病理報告為慢性迀延性肝炎或慢性活動性肝 炎，長期的乙肝病毒感染可發(fā)展為肝硬化，甚至肝癌。乙肝病毒對我國居民的身體健康和生 命安全造成了極大的危害。目前廣泛用于臨床治療HBV感染的藥物為干擾素（IFN)及核苷 類藥物。IFN是目前療效較為肯定的抗HBV藥物，但臨床有效率僅為20 %?30 %，且副作用 大、費用高，其應(yīng)用受到一定限制。核苷類似藥物拉米呋啶可抑制HBV-DNA多聚酶活性，治 療后患者血清中HBV-DNA滴度明顯下降，但易出現(xiàn)耐藥變異病毒株，且停藥后病毒復(fù)制易 反彈?；瘜W(xué)合成藥物的毒副反應(yīng)及耐藥變異病毒株的出現(xiàn)，使人們更加關(guān)注傳統(tǒng)中醫(yī)藥療 法，因此從中藥與天然藥物中篩選有確切療效的抗HBV藥物是當(dāng)前中藥研宄的一個熱點。
[0003] 紅背葉根為雙子葉植物藥大戟科植物紅背山麻桿Alchornea trewioides(Benth.)Muell. -Arg.的根。別名紅背娘、紅帽頂（《廣西中草藥》），紅羅裙 (廣州空軍《常用中草藥手冊》）。分布我國中部和東南、華南，通常以根、葉入藥。其根味 甘，性平。功效清熱解毒，祛風(fēng)除濕，散瘀止血，平喘，殺蟲止癢。傳統(tǒng)應(yīng)用于治腸炎腹瀉，痢 疾，黃疸型肝炎，尿路感染和結(jié)石，腎炎，小便不利，血尿，血崩，白帶，濕瘆，蕁麻瘆，癰瘡腫 毒，瘡瘍久不收口等癥。近代醫(yī)學(xué)研宄表明，紅背葉根中具有止咳、祛痰作用，抗乙酰膽堿作 用和輕度抑制金黃色與白色葡萄球菌作用。
[0004] 紅背葉根水提物及水提醇沉所得浸膏具有抗肝炎病毒和阻止肝纖維化的作用，可 在臨床上用以治療慢性肝炎和肝硬化。研宄結(jié)果表明紅背葉根可顯著抑制四氯化碳（CCL4) 復(fù)合因素及酒精性肝纖維化大鼠血清中的致肝纖維化的兩個重要因子（TGF-β 1、??ΜΡ-1)， 且模型動物肝纖維指標(biāo)（ΗΑ、ΙΙΙ型前膠原），肝功指標(biāo)（ALT、AST)都有顯著降低，并有保肝、 降酶、抗肝纖維化的作用。體外試驗研宄表明紅背葉根可抑制HBV蛋白中HBeAg、HBsAg的 表達(dá)，有一定的抗乙肝病毒作用?？锅喴腋尾《驹囼灡砻骷t背葉根有抑制體內(nèi)D-HBV復(fù)制 的作用，作用與劑量和用藥時間相關(guān)。其作用較拉米夫定弱，但維持時間長，服藥安全。臨 床應(yīng)用試驗表明慢性乙型肝炎患者給藥每日紅背葉根20克，水煎服。治療4周后，所有患 者癥狀均有一定的改善，尤其是緩解肝區(qū)不適較明顯，患者肝功能均有不同程度改善；治療 12周后，治療組與對照組比較，AST和改善蛋白代謝方面較為明顯（P〈0. 05)。因此，對紅背 葉根進(jìn)行有效部位抗乙肝的篩選及用途研宄具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，提供一種紅背葉根提取物及其制備方法，以及該 提取物的用途。
[0006] 本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案如下：一種紅背葉根提取物的制備方 法，其特征在于包括以下步驟：
[0007] (1)紅背葉根藥材用6-12倍量乙醇提取1-2小時，提取1-3次，合并乙醇提取液， 過濾后減壓濃縮；
[0008] (2)將步驟（1)所得濃縮液離心，上清液減壓濃縮備用；
[0009] (3)將步驟（2)得到的濃縮液，以1. 3-1. 7柱體積/小時的流速，上大孔吸附樹脂 柱；
[0010] (4)用去離子水洗脫除去雜質(zhì)后，再用乙醇洗脫，洗脫流速為2. 3-2. 7柱體積/小 時；
[0011] (5)收集乙醇洗脫液減壓干燥，粉碎后得到紅背葉根有效部位提取物。
[0012] 所述步驟（1)中乙醇濃度為60 % -90%。
[0013] 所述步驟（1)中乙醇濃度為70% -80%。
[0014] 所述步驟（4)中乙醇濃度為20% -60%。
[0015] 所述步驟（4)中乙醇濃度為30% -50%。
[0016] 所述步驟（5)得到的紅背葉根有效部位提取物是以生物堿類及黃酮類為主要活 性成分的提取物。
[0017] 由上述制備方法制得的紅背葉根提取物。
[0018] 上述紅背葉根提取物在制備抗乙肝藥物中的應(yīng)用。
[0019] 本發(fā)明的有益效果如下：
[0020] 1.本發(fā)明的提取工藝簡便合理，可以得到紅背葉根有效部位提取物。
[0021] 2.本發(fā)明的紅背葉根提取物，在抗鴨乙肝病毒實驗中，3個劑量在 7(1，14(1〇7，1'14)可顯著抑制血清1)冊￥0嫩(?〈0.01)，停藥5(1(?5)后1)冊￥0嫩有所回升， 但相對給藥前仍有顯著降低。說明本發(fā)明提取物具有較理想的抗乙肝病毒作用，是較有前 途的候選藥物。
【具體實施方式】
[0022] 本發(fā)明是一種紅背葉根提取物的制備方法，其包括以下步驟：
[0023] (1)紅背葉根藥材用6-12倍量乙醇提取1-2小時，提取1-3次，合并乙醇 提取液，過濾后減壓濃縮。優(yōu)選的，步驟（1)中乙醇濃度為60 %-90%，更優(yōu)選的，乙 醇濃度為70 % -80%。紅背葉根是雙子葉植物藥大戟科植物紅背山麻桿Alchornea trewioides(Benth.)Muell. -Arg.的根。
[0024] (2)將步驟（1)所得濃縮液離心，上清液減壓濃縮備用。
[0025] (3)將步驟（2)得到的濃縮液，以1. 3-1. 7柱體積/小時的流速，上中等極性或非 極性的大孔吸附樹脂柱。
[0026] (4)用去離子水洗脫除去雜質(zhì)后，再用乙醇洗脫，洗脫流速為2. 3-2. 7柱體積/小 時。優(yōu)選的，步驟（4)中乙醇濃度為20% -60%，更優(yōu)選的，乙醇濃度為30% -50%。
[0027] (5)收集乙醇洗脫液減壓干燥，粉碎后即得到紅背葉根有效部位提取物，該紅背葉 根有效部位提取物是以生物堿類及黃酮類為主要活性成分的提取物。
[0028] 上述紅背葉根有效部位提取物在制備抗乙肝藥物中的應(yīng)用。
[0029] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。但是，本發(fā)明不局限于所給出的這些實 施例。最優(yōu)選實施例1。
[0030] 實施例1
[0031] 將紅背葉根藥材，用乙醇回流提取2次，乙醇濃度75%，加醇量為藥材重量的10 倍，提取時間90min。合并提取液，濾過并減壓濃縮，將濃縮液離心，取上清液減壓濃縮備用。
[0032] 取中等極性大孔吸附樹脂，按與生藥重量比1:2的比例裝柱，然后將上述備用的 濃縮液以1. 5柱體積/小時的流速通過此大孔樹脂柱，完全通過后，先用去離子水洗脫，再 用30-50%乙醇進(jìn)行洗脫，洗脫流速為2. 5柱體積/小時。收集乙醇洗脫液，減壓干燥、粉 碎，得到紅背葉根提取物。得率為0. 38%。
[0033] 實施例2
[0034] 將紅背葉根藥材，用乙醇回流提取3次，乙醇濃度90%，加醇量為藥材重量的12 倍，提取時間120min。合并提取液，濾過并減壓濃縮，將濃縮液離心，取上清液減壓濃縮備 用。
[0035] 取中等極性大孔吸附樹脂，按與生藥重量比1:2的比例裝柱，然后將上述備用的 濃縮液以1. 5柱體積/小時的流速通過此大孔樹脂柱，完全通過后，先用去離子水洗脫，再 用30-60%乙醇進(jìn)行洗脫，洗脫流速為2. 5柱體積/小時。收集乙醇洗脫液，減壓干燥、粉 碎，得到紅背葉根提取物。得率為0. 29%。
[0036] 實施例3
[0037] 將紅背葉根藥材，用乙醇回流提取1次，乙醇濃度60%，加醇量為藥材重量的6倍， 提取時間60min。合并提取液，濾過并減壓濃縮，將濃縮液離心，取上清液減壓濃縮備用。
[0038] 取中等極性大孔吸附樹脂，按與生藥重量比1:2的比例裝柱，然后將上述備用的 濃縮液以1. 5柱體積/小時的流速通過此大孔樹脂柱，完全通過后，先用去離子水洗脫，再 用20-40%乙醇進(jìn)行洗脫，洗脫流速為2. 5柱體積/小時。收集乙醇洗脫液，減壓干燥、粉 碎，得到紅背葉根提取物。得率為0.31%。
[0039] 實施例4
[0040] 將紅背葉根藥材，用乙醇回流提取3次，乙醇濃度70%，加醇量為藥材重量的7倍， 提取時間80min。合并提取液，濾過并減壓濃縮，將濃縮液離心，取上清液減壓濃縮備用。