經(jīng)修飾的透明質(zhì)酸衍生物及其用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及透明質(zhì)酸衍生物和它們在醫(yī)學(xué)和化妝品領(lǐng)域中的用途或作為飲食添 加物的用途。本發(fā)明另外涉及含有這樣的衍生物的藥物組合物以及得到它們的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 長久以來，研宄人員已經(jīng)已經(jīng)做出了大量努力來鑒別新的組織修復(fù)醫(yī)療裝置，以 提供克服以前的裝置的某些缺點的新工具，或者更加適用于特定組織。近十年來，所述努力 甚至已經(jīng)增加，也因為人們渴望簡單地通過改變正常老化進(jìn)程來改變他們的美學(xué)表像的需 要日益增加。
[0003] 公認(rèn)的是，皮膚是可以被多種天然和非天然因素改變的感覺組織，所述因素諸如 紫外線暴露、老化、吸煙、燒傷、痤瘡、疾病等…
[0004] 在健康的受試者中，組織修復(fù)或組織再生在傷害所述組織的損傷以后通過愈合過 程而發(fā)生。在老化過程中，透明質(zhì)酸和/或膠原在軟組織中的產(chǎn)生減少，伴隨著加速的降解 速率。這樣的機(jī)制會導(dǎo)致凹陷區(qū)（depressed area)諸如紋線、皺紋、紋理和裙皺的形成。
[0005] 目前可得到的克服軟組織缺陷的方法包括外科手術(shù)（例如，自體或異種移植）或 涉及使用真皮填充劑的更低侵襲性技術(shù)的應(yīng)用。
[0006] 皮膚是由3個主要層組成的高度機(jī)化的結(jié)構(gòu)，每個層具有它自身的功能。被稱作 表皮的外層主要由角質(zhì)形成細(xì)胞組成，并且擔(dān)任保護(hù)免于外界因素（諸如病原體、由紫外 線引起的氧化劑應(yīng)激、化學(xué)試劑的侵害）的作用，同時調(diào)節(jié)通過經(jīng)表皮損失從身體釋放的 水的量。
[0007] 中層是真皮，且是基本上由3種纖維蛋白蛋白質(zhì)（即膠原、彈性蛋白和網(wǎng)硬蛋白） 以及支持基質(zhì)組成的致密彈性纖維結(jié)締組織。所述支持基質(zhì)由糖胺聚糖（即，GAG)組成， 所述糖胺聚糖是能夠結(jié)合大量水的長鏈多糖。它們一起形成不會泄漏真皮的凝膠。
[0008] 最后，被稱作下皮的內(nèi)層是纖維脂肪層，其松散地連接至真皮，起隔斷層和保護(hù)墊 的作用。
[0009] 真皮-表皮連接決定了皮膚的表面。因而，具有錨定結(jié)構(gòu)完整性的真皮-表皮連 接會維持折疊，由此增加真皮和表皮之間的接觸的表面積，并促進(jìn)這2種組織之間的可擴(kuò) 散因子的交換，從而強(qiáng)化它們的粘結(jié)力和改善皮膚的外觀。在改變錨定結(jié)構(gòu)的情況下，特別 是由于膠原IV、膠原VII、層粘連蛋白V的合成的缺乏和/或由于老化或疾病，這會造成真 皮-表皮連接的扁平化。實際上，已經(jīng)證實，膠原IV和膠原VII在創(chuàng)傷愈合過程中是非常 重要的（Betz P,等人，Int. J. Legal. Med.，1992, 105, 93)。
[0010] 組織修復(fù)也涵蓋了慢性創(chuàng)傷和/或非愈合性創(chuàng)傷。這樣的創(chuàng)傷的患病率在年齡相 關(guān)的疾病中、在受獲得性免疫缺陷綜合征（AIDS)影響的人中、或在癌癥干預(yù)以后面臨輻射 的患者中增加。慢性創(chuàng)傷（諸如靜脈腿潰瘍）需要長期護(hù)理，且花費非常大。此外，這樣的 創(chuàng)傷經(jīng)常在愈合的18個月內(nèi)復(fù)發(fā)。在過去的40年中，潮濕創(chuàng)傷愈合的概念已經(jīng)被普遍接 受，從而產(chǎn)生了數(shù)百種不同的敷料技術(shù)，它們的目的在于改善愈合過程的時間和質(zhì)量。除了 傳統(tǒng)的紗布以外，大多數(shù)目前可得到的敷料屬于下述類別之一：泡沫、水膠體、水凝膠、海藻 酸鹽和膜；前2種代表全球潮濕創(chuàng)傷敷料市場的最大份額。水膠體最常見地由羧甲纖維素、 明膠或果膠制成，且可以與海藻酸鹽、透明質(zhì)酸鹽或膠原或其混合物相組合。涉及生物材料 (諸如膠原、透明質(zhì)酸、殼聚糖、海藻酸鹽或彈性蛋白）的敷料被稱作生物敷料。
[0011] 由于膠原是細(xì)胞外基質(zhì)（ECM)的最豐富蛋白，基于膠原的生物敷料已經(jīng)被廣泛地 開發(fā)，但是已經(jīng)逐漸被新生代的敷料替代。
[0012] 已經(jīng)證實，基于海藻酸鹽的敷料能夠促進(jìn)細(xì)胞活性諸如附著和增殖（Thomas S.，J. Wound Care，2000, 9, 2, 56 ;Thomas S.，J. Wound Care，2000, 9, 3, 115 ;Thomas S.，J. Wound Care, 2000, 9, 4, 163) 〇
[0013] 由于假定的成纖維細(xì)胞形成的刺激和增加的與愈合有關(guān)的早期反應(yīng)，殼 聚糖多糖已經(jīng)被用于治療燒傷和創(chuàng)傷（Paul W.，等人，1^11(1813;[011^61\41'1^· Organs, 2004, 18, 18) 0
[0014] 最后，存在多種含有透明質(zhì)酸鹽的敷料，其中透明質(zhì)酸已經(jīng)經(jīng)過化學(xué)修飾，并同時 維持它的天然的生物相容性、生物可降解性和免疫原性缺乏。透明質(zhì)酸是以高濃度存在于 皮膚和結(jié)締組織中的內(nèi)源多糖。在皮膚中，聚合的透明質(zhì)酸可以結(jié)合水，從而形成輔助水合 和充盈的粘稠物質(zhì)。因此，透明質(zhì)酸隨著老化的損失與增加的脫水和皮膚的起皺有關(guān)。除 了皮膚以外，透明質(zhì)酸（即，HA)作為細(xì)胞內(nèi)基質(zhì)的核心組分也天然地存在于身體的不同的 其它組織（諸如肌腱、肌肉、軟骨和玻璃體液）中，從而使得它非常適合靶向這些組織的生 物醫(yī)學(xué)應(yīng)用。
[0015] 基于HA的生物材料敷料的例子是這樣的，其中HA :
[0016] V未經(jīng)過修飾，如它的鈉鹽（例如，ialugen，Ibsa)，呈乳膏劑的形式或在含有4g ialugen的紗布墊中，用于局部施用。
[0017] V如在專利EP0216453中描述的，經(jīng)由羧酸部分而完全地或部分地酯化（例如， HyaffTBy)，用于藥物（例如，外科手術(shù)皮膚病學(xué)、眼科學(xué)、牙醫(yī)學(xué)：Ballini A.，等人，Int. J. Med. Sci.，2009, 6, 2, 65)或化妝品領(lǐng)域中。這些HA-酯可以被擠出以產(chǎn)生膜和纖維，被低 壓凍干以得到海綿狀物，或通過噴霧干燥、提取和蒸發(fā)進(jìn)行加工以產(chǎn)生微球。
[0018] V經(jīng)由羥基部分而酯化（W02004013182)。
[0019] V與其它生物活性成分連接：
[0020] 〇紫杉醇，以防止外科手術(shù)后的粘著形成（Jackson J. K.，等人，Pharm. Res. , 2002, 19, 4, 411 ；W002090390)；
[0021] ο 氨芐西林（GB2207142);
[0022] V與下述物質(zhì)交聯(lián)以形成分子網(wǎng)絡(luò)
[0023] οα羥酸的聚合物諸如聚乳酸（W02006069578) ;1，4_ 丁二醇二縮水甘油基醚； 1，3_二胺丙烷；多功能的環(huán)氧衍生物（ΕΡ0161887);或可以
[0024] 〇在葡萄糖胺殘基的脫乙?；陌被糠峙c葡糖醛酸部分的羧酸基團(tuán)之間 自交聯(lián)，或在葡糖醛酸部分的羧酸基團(tuán)與任何單元的羥基基團(tuán)之間自交聯(lián)（例如， US5676964B1，Hyalobarrier?，其在腹腔-骨盆外科手術(shù)以后充當(dāng)保護(hù)和隔開組織的屏 障，并由此避免粘著并發(fā)癥）。
[0025] V沉積在膜/紗布上。
[0026] 有些敷料可以進(jìn)一步含有補(bǔ)充性的生物活性成分諸如抗生素、抗炎藥、鎮(zhèn)痛藥或 生長因子或它們的混合物。這樣的產(chǎn)品的非窮盡列表中的代表可以為：Solaraze?,它是 含有3%雙氯芬酸（在2. 5%透明質(zhì)酸中）的局部用凝膠，最近被批準(zhǔn)用于治療光化性角化 ??；或Regranex，即含有重組人血小板衍生的生長因子-BB的凝膠，目前處于III期臨床試 驗中，用于神經(jīng)病的糖尿病性潰瘍。
[0027] W02007048522 公開了一種由透明質(zhì)酸鈉 （sodium hyaluronate acid)、甘氨酸和 脯氨酸和可能含有的賴氨酸和亮氨酸組成的乳膏組合物，其在快速的創(chuàng)傷愈合過程中可有 效地促進(jìn)細(xì)胞再聚合。
[0028] W02010003797公開了具有不同分子量的基于HA的組合物，其用于治療角膜創(chuàng)傷。 它聲稱，低分子量HA級分（即，51kDa和320kDa)會增進(jìn)愈合過程，同時高分子量HA級分 (即，1500kDa)可能因為過于粘稠而不會促進(jìn)的創(chuàng)傷愈合。
[0029] W02008015249公開了由高分子量HA和多胺（例如，腐胺（putrecine))的顆粒制 成的組合物，優(yōu)選膠體，其用作填充劑（即，抗-皺紋填充劑或唇填充劑），用于治療創(chuàng)傷 愈合和用于保護(hù)人皮膚免于紫外（UVA)輻射，但是也用于保護(hù)人皮膚對抗自由基的有害作 用。公開的唯一實驗數(shù)據(jù)關(guān)注不同組合物的吸光度結(jié)果，因此被指示用作皮膚保護(hù)組合物。
[0030] 還已經(jīng)將主要由交聯(lián)的HA制成的水凝膠報道為聚合基質(zhì)，其可用于培養(yǎng)細(xì)胞（例 如，形成軟骨的細(xì)胞、形成骨的細(xì)胞、肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和器官細(xì)胞）和將所述細(xì)胞植入 特定器官中（US6129761)。
[0031] 真皮填充劑是本領(lǐng)域眾所周知，且通常由基于膠原和/或透明質(zhì)酸的衍生物制 成。在過去，最廣泛地使用的填充劑是基于?；蛉四z原，且傾向于持續(xù)3-6個月。更近的填 充劑類別是基于透明質(zhì)酸（HA)，它們之間在HA的交聯(lián)模式（即，類型和程度）、粒度和制劑 方面存在差異。對這些參數(shù)中的每一種已經(jīng)進(jìn)行了大量研宄和精細(xì)調(diào)節(jié)，以產(chǎn)生有目的地 適合不同身體區(qū)域的填充劑。
[0032] 為了克服HA不穩(wěn)定性和/或容易被透明質(zhì)酸酶降解，在過去的十年中出現(xiàn)了具有 提高的半衰期的交聯(lián)HA填充劑。普遍接受的是，具有低粘度的基于HA的真皮填充劑（諸 如輕度交聯(lián)的和/或由低分子量組成的那些）在體內(nèi)的持續(xù)時間短于高度交聯(lián)的和/或由 高分子量HA組成的那些真皮填充劑。從高度修飾的HA衍生出的第二類填充劑通常是優(yōu)選 的，因為所述填充劑不需要象低粘度填充劑那樣頻繁地注射給患者。
[0033] 已經(jīng)于2003年12月得到FDA批準(zhǔn)的第一類基于HA的交聯(lián)的真皮填充劑是 Restylane?，即它在歐洲被批準(zhǔn)以后7年。Restylane?也被稱作非動物的穩(wěn)定化的透明 質(zhì)酸（NASHA)，是由具有大約100萬分子量的透明質(zhì)酸組成的可注射填充劑，其已經(jīng)與兩 臂交聯(lián)劑（即，1，4- 丁二醇