淫羊藿次苷類化合物、其制備方法,及其在促進(jìn)人細(xì)胞產(chǎn)生γ-干擾素作用和在疾病治療中 ...的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種淫羊藿次苷類化合物及其制備方法，該類化合物在促進(jìn)人體細(xì)胞 產(chǎn)生γ-干擾素，顯著提高人體免疫力的作用；以及基于此原理所涉及的在疾病治療、保健 品、美容護(hù)膚品等方面的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 人體的免疫力是指機(jī)體抵抗寄主細(xì)胞外或寄主細(xì)胞內(nèi)致病因子感染或入侵的抵 御能力，即維護(hù)人體內(nèi)正常和穩(wěn)定環(huán)境的能力。人類生存環(huán)境中，如空氣、水、食物、及人類 生活所接觸物品等，都含有各種各樣有害健康的微生物，如細(xì)菌、病毒、支原體、衣原體、真 菌等病原體（寄主細(xì)胞外致病因子）。人體內(nèi)也可能受環(huán)境變化影響，出現(xiàn)病毒或細(xì)菌在 寄主細(xì)胞內(nèi)的潛伏，或基因變異所產(chǎn)生的癌細(xì)胞等（寄主細(xì)胞內(nèi)致病因子）的感染或入侵。 當(dāng)這些致病因子感染或侵入機(jī)體時(shí)，在正常情況下，人體將通過(guò)自身的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生相應(yīng) 的抗體或各種細(xì)胞因子（如干擾素等），將感染或侵入的致病因子吞噬和消滅。當(dāng)人體的免 疫體系所產(chǎn)生的免疫力（抗體或細(xì)胞因子等）不足以對(duì)抗致病因子的進(jìn)攻時(shí)，人就會(huì)生病。
[0003] 提高人體自身免疫力，對(duì)于保持身體健康，防止或減少疾病的發(fā)生具有重要意義。 通過(guò)藥物增強(qiáng)人體免疫力是預(yù)防和治療感染性疾病及癌癥等的有效方法，即免疫治療。發(fā) 現(xiàn)和發(fā)展增強(qiáng)人體免疫力的有效藥物對(duì)于自身免疫力低下，特別是對(duì)患有自身免疫性疾病 的人群尤為重要。
[0004] 從總體上看，能夠用于免疫治療的藥物很少。目前，臨床上使用的增強(qiáng)人體免疫力 藥物，主要是大分子的肽類或蛋白類藥物，如胸腺肽、免疫球蛋白、干擾素等，這些藥物都有 特定的適應(yīng)癥，有很大的局限性，并且易降解、半衰期較短、生物利用度差、大規(guī)模合成與 分離純化難度大。
[0005] 國(guó)內(nèi)外以天然產(chǎn)物為基礎(chǔ)發(fā)展的提高人體免疫力的制劑，基本上屬于保健品范 疇，實(shí)際效果很難保證。迄今為止，尋找具有良好增強(qiáng)免疫效果的小分子化合物的嘗試均告 失敗。尚無(wú)小分子化合物用于免疫治療的報(bào)道。
[0006] 淫羊藿是一味傳統(tǒng)中藥材，現(xiàn)有技術(shù)中對(duì)其使用均為在中醫(yī)理論指導(dǎo)下使用淫羊 藿植株煎湯、浸酒、熬膏，制丸散等。對(duì)于其中有效成分的分離并系統(tǒng)研宄較少，特別是其中 的淫羊藿次苷I和淫羊藿次苷C，由于其含量極低（它的同系物-淫羊藿苷含量較高），難 以進(jìn)行有效的研宄，產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用更無(wú)從談起。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明人長(zhǎng)期致力于中藥有效成分在免疫治療方面的研宄。本發(fā)明人建立了基于 檢測(cè)人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs)產(chǎn)生γ-干擾素水平的免疫學(xué)試驗(yàn)?zāi)Ｐ?。?yīng)用這個(gè)模 型，可以從包括傳統(tǒng)中藥、藥用植物等在內(nèi)的多種來(lái)源的化學(xué)成分中，篩選出具有促進(jìn)（或 抑制）人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs)產(chǎn)生γ-干擾素水平的化合物。由于人γ-干擾素是 人體的一種重要的抵抗疾病的免疫蛋白（細(xì)胞因子），它的產(chǎn)生水平，與人體的免疫力直接 相關(guān)。因此，該模型是篩選和發(fā)現(xiàn)具有提高人體免疫力功能藥物的理想技術(shù)。
[0008] 在篩選過(guò)程中，本發(fā)明人非常驚訝地發(fā)現(xiàn)，淫羊藿中含量極低的兩種成分一一淫 羊藿次苷I和淫羊藿次苷C，顯示出了能夠顯著促進(jìn)人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs)產(chǎn)生 γ-干擾素水平的作用。而淫羊藿所含的其它天然化學(xué)成分，幾乎沒(méi)有任何相關(guān)的活性。這 個(gè)研宄結(jié)果表明，淫羊藿次苷I和淫羊藿次苷C能夠直接促進(jìn)人體細(xì)胞產(chǎn)生重要的免疫蛋 白一一 γ -干擾素，表明該類化合物在提高人體免疫力方面具有重要應(yīng)用前景。
[0009] 在上述重大發(fā)現(xiàn)的基礎(chǔ)上，本發(fā)明人以天然化合物，如淫羊藿苷、淫羊藿新苷Α、淫 羊藿次苷I或淫羊藿次苷C為基本原料，通過(guò)化學(xué)轉(zhuǎn)化方法（半合成）得到其它的淫羊藿 次苷類化合物，部分淫羊藿次苷類化合物也可以通過(guò)全合成方法獲得。經(jīng)篩選模型檢驗(yàn)證 明，這些物質(zhì)也具備類似淫羊藿次苷I或淫羊藿次苷C的活性。
[0010] 因此，本發(fā)明的第一個(gè)目的，是提供一種淫羊藿次苷類化合物（如式I所示）。
[0011]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種如式I所示的淫羊藿次苷類化合物：
(Icariside derivatives) 式I中的R1,馬和R 3所代表的基團(tuán)如下面各項(xiàng)所定義： (1) R1選自 H，OH, OCH 3, CH3COO, CH3, CF3, NH2, CH3NH, CH3CONH, CN，Br, Cl, F ; (2) R2選自 H，OH, OCH 3, CH3COO, NH2, CH3NH, (CH3) 2N，CH3CONH, CN ; (3) R3選自 H，OH, OCH 3, OC2H5, OC3H7, CH3COO, CH3, CF3, C1-C6-NH2 (其中 C1-C6為具有 1-6 個(gè) C的烷基、環(huán)烷基、烯烴基、環(huán)烯烴基，尤其是環(huán)戊基氨基、環(huán)己基氨基；以及嗎啡啉基，甲基 哌嗪基），NH2，CH 3NH，（CH3)2N, (CH3CH2)2N, CH3CONH, CN，Br, Cl, F，氨基酸?；被狨０被?(R' -CH-C0NH-)，寡肽酰基，寡肽酰氨基等。
2. 權(quán)利要求1所述的式I的淫羊藿次苷類化合物，其中R i= 0H，0CH3;R 2= 0H，0CH3;R 3 =OH, OCH3, OC3H70
3. 權(quán)利要求1或2所述的式I的淫羊藿次苷類化合物，其中所述化合物是： (1) R1= OH, R2= OH, R3= OH ； (2) ?= OH, R2= OH, R3= 0CH3 ； (3) R1= OH, OCH 3, R2= OH, OCH 3, R3= OH, OCH 3, OC3H7; (4) ?= OCH 3, R2= OH, R3= OCH3; (5) ?= OH, R2= OCH3, R3= OCH3; (6) ?= OH,，R2= OH, R3= OC 3H7。
4. 一種制備權(quán)利要求1-3任意一種式I的淫羊藿次苷類化合物的方法，其特征在于： 以淫羊藿次苷I、淫羊藿次苷C等天然產(chǎn)物衍生化得到式I所示的淫羊藿類化合物的方法。
5. -種淫羊藿次苷I或淫羊藿次苷C的制備方法，其特征在于通過(guò)例如酶轉(zhuǎn)化技術(shù)，將 淫羊藿中含量豐富的成分淫羊藿苷轉(zhuǎn)化成淫羊藿次苷I。
6. 權(quán)利要求5所述的淫羊藿次苷I的制備方法，其特征在于以淫羊藿苷為原料，溶于磷 酸鹽緩沖溶液中，加入固定化鼠李糖苷酶反應(yīng)并重結(jié)晶。
7. 權(quán)利要求5所述的淫羊藿次苷C的制備方法，其特征在于以淫羊藿新苷A為原料， 加入固定化鼠李糖苷酶反應(yīng)將淫羊藿新苷A分子中的3-0-鼠李糖基除去，得到淫羊藿次苷 Co
8. -種藥物組合物，其含有式I淫羊藿次苷類化合物中的至少一種物質(zhì)，例如淫羊藿 次苷I、淫羊藿次苷C以及藥學(xué)上可接受的載體和/或輔劑。
9. 一種保健品組合物，其含有式I淫羊藿次苷類化合物中的至少一種物質(zhì)，例如淫羊 藿次苷I、淫羊藿次苷C以及保健領(lǐng)域可接受的載體和/或輔劑。
10. -種美容護(hù)膚品組合物，其含有式I淫羊藿次苷類化合物中的至少一種物質(zhì)，例如 淫羊藿次苷I、淫羊藿次苷C以及美容護(hù)膚領(lǐng)域可接受的載體和/或輔劑。
11. 權(quán)利要求8-10的組合物，其可以是片劑、丸劑、膠囊、注射劑、懸浮劑、乳劑、外用涂 抹劑、面膜。
12. 權(quán)利要求1-3、8-10任意一種物質(zhì)或組合物用于制備藥物的用途，該藥物用 于治療任何與人體免疫力有關(guān)的疾病，特別是能夠通過(guò)促進(jìn)人體細(xì)胞產(chǎn)生γ-干擾素 (interferon-gamma，IFN-γ)，提高人體的免疫力相關(guān)的疾病的用途。
13. 權(quán)利要求1-3、8-10任意一種物質(zhì)或組合物用于制備藥物的用途，該藥物用于治療 任何與人體內(nèi)THl型的免疫應(yīng)答（誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答）相關(guān)的疾病的用途。
14. 權(quán)利要求12或13的制藥用途，其中用于治療的疾病為肺結(jié)核、流感、乙肝和丙肝等 感染性疾病，以及腫瘤。
15. -種用于篩選具有增強(qiáng)人體免疫效果物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。該模型系?yīng)用不同的外源 抗原刺激人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs)，產(chǎn)生細(xì)胞因子IFN-γ，將待測(cè)藥物加入到外源抗 原與人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs)的混合體系中，測(cè)定對(duì)IFN-γ產(chǎn)生水平的影響，以篩選 具有提高人體免疫力或抑制人體免疫力的小分子化合物。
【專利摘要】一種如式I所示的淫羊藿次苷類化合物(icariside derivatives)，為中藥淫羊藿的天然化學(xué)成分，或基于這些天然產(chǎn)物的化學(xué)修飾產(chǎn)物或全合成產(chǎn)物。它們具有促進(jìn)人體細(xì)胞產(chǎn)生γ-干擾素(interferon-gamma，IFN-γ，一種具有抵抗疾病功能的細(xì)胞因子)的功能，能夠顯著提高人體的免疫力。實(shí)驗(yàn)顯示淫羊藿次苷類化合物在防治包括肺結(jié)核、流感、乙肝和丙肝等感染性疾病，及腫瘤的免疫治療方面具有重要應(yīng)用前景；也可用于制備與提高人體免疫力相關(guān)的保健藥品、飲品、美容護(hù)膚品等。淫羊藿次苷屬于傳統(tǒng)中藥的有效成分及其結(jié)構(gòu)修飾產(chǎn)物，毒副作用小，使用安全。式I淫羊藿次苷類化合物(Icariside derivatives)。
【IPC分類】A61P31-06, C12P17-14, A61K8-49, A61K31-7048, A61Q19-00, A61P37-04, C07H17-07, A61P31-16, A61P35-00, C07H1-08, A23L1-30, A61P31-20
【公開(kāi)號(hào)】CN104825479
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510264195
【發(fā)明人】古練權(quán), 吳長(zhǎng)有, 周金林, 盧宇靖, 歐田苗, 黃寶華, 林麗薇
【申請(qǐng)人】佛山市金駿康健康科技有限公司
【公開(kāi)日】2015年8月12日
【申請(qǐng)日】2015年5月20日