一種荷葉總生物堿提取工藝的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于一種從藥食兩用植物中分離純化生物堿的方法，具體涉及一種荷葉總生物堿提取工藝。
【背景技術(shù)】
[0002]進(jìn)入二十一世紀(jì)，人們對生活品質(zhì)的要求越來越高，追求健康是幸福生活的前提，因此從天然植物中提取功能性成分進(jìn)行加工成藥品和保健品備受關(guān)注。我國的天然織物資源十分豐富，也積累了豐富的臨床應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)，在利用天然織物方面具有得天獨(dú)厚的優(yōu)勢。充分挖掘尚未得到合理利用的資源，開發(fā)無公害的植物天然功能成分及其功能產(chǎn)品，是當(dāng)前的潮流與趨勢。
[0003]荷葉是一種既是食物又是藥品的天然織物。荷葉是睡蓮科植物蓮的干燥葉片，具有清暑化濕、升發(fā)清陽、涼血止血等多種功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研宄表明:荷葉中生物堿具有降血脂，抑制膽固醇、抗氧化等藥理活性，是荷葉的主要有效成分。荷葉堿純品為白色針狀晶體，由于荷葉堿為弱堿性有機(jī)生物堿，不能直接溶于水，但易溶于甲醇、乙醇、丙酮等親水性有機(jī)溶劑的酸性溶液中，微溶于熱的石油醚、乙醚、乙酸乙酯和氯仿中。因此，根據(jù)離子交換理論，在酸性條件下，荷葉堿是以陽離子狀態(tài)存在，可采用離子交換技術(shù)分離荷葉堿，對吸附在陽離子交換樹脂上的荷葉堿，可采用含有氫離子、鉀離子、鈉離子等無機(jī)離子的洗脫液進(jìn)行洗脫，該洗脫劑可以是酸性、中性或堿性的親水性有機(jī)溶劑。因此開發(fā)出一種荷葉堿的提取純化工藝是本技術(shù)領(lǐng)域人員亟需解決的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，針對以上現(xiàn)有技術(shù)存在的缺點(diǎn)，提出一種荷葉總生物堿提取工藝，該提取工藝簡單、縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間、降低能耗、減少實(shí)驗(yàn)操作費(fèi)用和生產(chǎn)成本，提取出來的荷葉總生物堿純度高。
[0005]本發(fā)明解決以上技術(shù)問題的技術(shù)方案是:
一種荷葉總生物堿提取工藝，提取工藝具體操作步驟如下:
(一)荷葉預(yù)處理
將新鮮荷葉用磷酸水溶液淋洗一次，蒸餾水浸泡5-10min，淋洗至水溶液至中性，用鼓風(fēng)干燥箱子干燥含水量8-10%以下，粉碎過40目篩，裝入密封料袋中，放入冰箱中冷藏，備用；
其中，磷酸水溶液的pH為3.5-4.5 ；
(二)荷葉總生物堿的提取
取預(yù)處理好的荷葉粉，溶解于pH=2.5的鹽酸的水溶液中，微波照射處理后，置于恒溫水浴鍋中提取2.5h，過濾，濾渣再用鹽酸溶液提取1.5h，合并兩次濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀真空濃縮，過濾，濾液調(diào)節(jié)PH值至2-3，用氯仿萃取，棄去氯仿層，以除去脂類和樹脂；取上層液，加入3%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至7左右，靜置片刻，待肉眼可見沉淀，過濾，除去鞣質(zhì)；濾液再加入3%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至10.5左右，再用氯仿萃取，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)干燥后，用pH=2.5的鹽酸溶液在超聲波清洗機(jī)上洗脫生物堿，轉(zhuǎn)移至容量瓶，定容，搖勻得到荷葉總生物堿提取液，備用；
其中，固液比為1:40-1:30 ；
(三)樹脂純化荷葉總生物堿
(1)樹脂的預(yù)處理
a.乙醇浸泡:將樹脂浸泡在95%或無水乙醇中，并不時(shí)用玻璃棒攪拌，使樹脂和乙醇充分接觸，樹脂浸泡時(shí)間為18-24h ;
b.乙醇沖洗:將浸泡好的樹脂裝柱，再用無水乙醇沖洗，直至流出液加等量蒸餾水無白色渾濁；
c.蒸餾水沖洗:用大量的蒸餾水沖洗樹脂直至流出液無醇味；
(2)裝柱
將玻璃層析柱垂直固定在實(shí)驗(yàn)架上，關(guān)閉底柱活塞，在柱中加入一定量的蒸餾水，然后將樹脂帶水邊攪拌邊緩慢加入層析柱中，保持層析柱中水面高于樹脂層面3-5cm，過多的水由柱底活塞放出；
(3)上樣液的制備
將上述步驟(二)中提取得到的荷葉總生物堿提取液用氫氧化納調(diào)成堿性pH為10-11，再加入無機(jī)鹽，即得到上樣液；
其中無機(jī)鹽為氯化鈉、硫酸鈉、硫酸銨中的一種；
(4)吸附和洗脫
將上樣液經(jīng)過裝有大孔樹脂的玻璃層析柱進(jìn)行吸附處理，然后再用洗脫劑對玻璃層析柱子進(jìn)行洗脫處理；
其中，洗脫劑為甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯中的一種或幾種混合物；
(四)石油醚萃取與結(jié)晶純化
將步驟(三)中經(jīng)樹脂純化后的荷葉總生物堿，在60°C條件下，用石油醚萃取，趁熱過濾，濾液冷卻至室溫后，即有少量針狀晶體析出后，移至-20°C冰箱中結(jié)晶24h，將結(jié)晶的晶體抽慮出來，真空干燥5-7h得到高純度荷葉總生物堿。
[0006]本發(fā)明進(jìn)一步限定的技術(shù)方案為:
前述荷葉總生物堿提取工藝中，微波照射處理?xiàng)l件為:中火微波輻射2.5-3min。
[0007]前述荷葉總生物堿提取工藝中，樹脂為AB-8、HP-20、D-10U NKA-9四種大孔樹脂中的一種。
[0008]前述荷葉總生物堿提取工藝中，樹脂純化荷葉總生物堿中吸附條件為:上樣液無機(jī)鹽濃度1.0-2.0moI/L,吸附流速為2.0-2.5BV/h ;洗脫條件:pH為3的洗脫劑，洗脫流速
1.5-2.0 BV/ho
[0009]本發(fā)明的有益效果是:(I)本發(fā)明中以稀鹽酸作為提取溶劑，荷葉總生物堿可以形成生物堿鹽正離子形式，溶解性能好，提取效率高，所含雜質(zhì)少，節(jié)省試劑。
[0010](2)本發(fā)明中采用了微波輔助提取荷葉總生物堿，極性較大的分子可以獲得較多的微波能，利用這一性質(zhì)可以選擇性地提取極性分子，使目標(biāo)組分直接被分離出來，從而使產(chǎn)品的純度提高，質(zhì)量得以改善，其次，微波提取大大降低了提取時(shí)間，提高了提取速度。
[0011](3)本發(fā)明采用微波輔助法提取工藝簡單、縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間、降低能耗、減少實(shí)驗(yàn)操作費(fèi)用和生產(chǎn)成本，是生物堿提取的一種非常有發(fā)展?jié)摿Φ男滦图夹g(shù)。
[0012](4)本發(fā)明中在上樣液中加入適量的無機(jī)鹽(氯化鈉、硫酸鈉、硫酸銨)可以降低非極性吸附質(zhì)的溶解度，使大孔吸附樹脂的吸附量加大。
[0013](5)本發(fā)明中采用大孔吸附樹脂可以避免傳統(tǒng)分離純化生物堿一般用陽離子交換樹脂，因解吸時(shí)需要用酸、堿或鹽類洗脫劑，引入雜質(zhì)，給后來的分離帶來不方便的問題。
【具體實(shí)施方式】
[0014]實(shí)施例1
本實(shí)施例提供一種荷葉總生物堿提取工藝，提取工藝具體操作步驟如下:
(一)荷葉預(yù)處理
將新鮮荷葉用磷酸水溶液淋洗一次，蒸餾水浸泡5min，淋洗至水溶液至中性，用鼓風(fēng)干燥箱子干燥含水量9%以下，粉碎過40目篩，裝入密封料袋中，放入冰箱中冷藏，備用；其中，磷酸水溶液的pH為3.5 ;
(二)荷葉總生物堿的提取
取預(yù)處理好的荷葉粉，溶解于pH=2.5的鹽酸的水溶液中，中火微波輻射2.5min處理后，置于恒溫水浴鍋中提取2.5h，過濾，濾渣再用鹽酸溶液提取1.5h，合并兩次濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀真空濃縮，過濾，濾液調(diào)節(jié)PH值至3，用氯仿萃取，棄去氯仿層，以除去脂類和樹脂；取上層液，加入3%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至7左右，靜置片刻，待肉眼可見沉淀，過濾，除去鞣質(zhì)；濾液再加入3%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至10.5左右，再用氯仿萃取，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)干燥后，用pH=2.5的鹽酸溶液在超聲波清洗機(jī)上洗脫生物堿，轉(zhuǎn)移至容量瓶，定容，搖勻得到荷葉總生物堿提取液，備用；
其中，固液比為1:30 ；
(三)樹脂純化荷葉總生物堿
(1)樹脂的預(yù)處理
a.乙醇浸泡:將樹脂浸泡在95%或無水乙醇中，并不時(shí)用玻璃棒攪拌，使樹脂和乙醇充分接觸，樹脂浸泡時(shí)間為24h ；
樹脂為AB-8、HP-20、D-1O1、NKA-9四種大孔樹脂中的一種；
b.乙醇沖洗:將浸泡好的樹脂裝柱，再用無水乙醇沖洗，直至流出液加等量蒸餾水無白色渾濁；
c.蒸餾水沖洗:用大量的蒸餾水沖洗樹脂直至流出液無醇味；
(2)裝柱
將玻璃層析柱垂直固定在實(shí)驗(yàn)架上，關(guān)閉底柱活塞，在柱中加入一定量的蒸餾水，然后將樹脂帶水邊攪拌邊緩慢加入層析柱中，保持層析柱中水面高于樹脂層面3cm，過多的水由柱底活塞放出；
(3)上樣液的制備
將上述步驟(二)中提取得到的荷葉總生物堿提取液用氫氧化納調(diào)成堿性pH為11，再加入無機(jī)鹽，即得到上樣液；
其中無機(jī)鹽為氯化鈉、硫酸鈉、硫酸銨中的一種； (4)吸附和洗脫
將上樣液經(jīng)過裝有大孔樹脂的玻璃層析柱進(jìn)行吸附處理，然后再用洗脫劑對玻璃層析柱子進(jìn)行洗脫處理；
其中，洗脫劑為甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯中的一種或幾種混合物；
樹脂純化荷葉總生物堿中吸附條件為:上樣液無機(jī)鹽濃度2.0mol/L，吸附流速為2.2BV/h ;洗脫條件:pH為3的洗脫劑，洗脫流速2.0 BV/h ；
(四)石油醚萃取與結(jié)晶純化
將步驟(三)中經(jīng)樹脂純化后的荷葉總生物堿，在60°C條件下，用石油醚萃取，趁熱過濾，濾液冷卻至室溫后，即有少量針狀晶體析出后，移至-20°C冰箱中結(jié)晶24h，將結(jié)晶的晶體抽慮出來，真空干燥77h得到高純度荷葉總生物堿。
[0015]實(shí)施例2
本實(shí)施例提供一種荷葉總生物堿提取工藝，提取工藝具體操作步驟如下:
(一)荷葉預(yù)處理
將新鮮荷葉用磷酸水溶液淋洗一次，蒸餾水浸泡lOmin，淋洗至水溶液至中性，用鼓風(fēng)干燥箱子干燥含水量8%以下，粉碎過40目篩，裝入密封料袋中，放入冰箱中冷藏，備用；