一種注射用總蟾毒內(nèi)酯納米脂質(zhì)載體給藥系統(tǒng)及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種注射用總蟾毒內(nèi)酯納米脂質(zhì)載體給藥系統(tǒng)及其制備方法
【背景技術(shù)】
[0002]中華大蟾餘(Bufobufo gar gar i z an s Cantor)為蟾餘科動(dòng)物，蟾皮(the skin oftoad, ST)為蟾蜍的干燥表皮?！吨腥A本草》記載其能“解毒散結(jié)，消積利水，殺蟲消疳”，可被應(yīng)用于多種腫瘤的治療，對(duì)胃癌、食管癌、膀胱癌、肝癌、白血病有一定臨床療效，其性味性寒、味苦，有小毒，具有消炎解毒、消腫止痛、軟堅(jiān)散結(jié)、抑制腫瘤生長(zhǎng)、調(diào)節(jié)免疫等功效。華蟾素提取自中藥中華大蟾蜍皮，系采用傳統(tǒng)方法水提醇沉法值得的中藥注射液，華蟾素注射液抗腫瘤療效顯著，但存在雜質(zhì)多、質(zhì)量及臨床療效不穩(wěn)定、毒副作用大等嚴(yán)重缺陷。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，華蟾素注射液中具抗腫瘤活性的總蟾毒內(nèi)酯類(蟾毒配基類、蟾蜍毒素類)成分含量極低，目前尚未有生物堿成分有抗腫瘤活性的研究報(bào)道，且臨床研究認(rèn)為華蟾素不良反應(yīng)心律失常、局部靜脈刺激反應(yīng)、皮膚反應(yīng)、哮喘、超敏反應(yīng)等均為水溶性吲哚類生物堿成分的藥理作用所致。因此，提取純化華蟾素的重點(diǎn)在于富集內(nèi)酯類成分和去除生物堿及其他雜質(zhì)成分，特別是生物堿成分。
[0003]對(duì)華蟾素提取液進(jìn)行分離純化，得華蟾素有效部位一一總蟾毒內(nèi)酯，主要含有蟾毒配基(resibufogenin)、華蟾醉毒基(cinobufagin)、蟾毒靈(bufalin)、蟾毒它靈(Bufotalin)、日蟾毒它靈-3-半辛二酸酯(Gamabufotalin-3-hydrogen Suberate)、蟾餘靈-3- 丁二酰精氨酸酯、華蟾毒精-3- 丁二酰精氨酸酯等內(nèi)酯類成分。目前市場(chǎng)上中藥注射液普遍存在的諸多問題，開發(fā)出質(zhì)量穩(wěn)定、工藝先進(jìn)、毒副作用少、療效高的中藥注射制劑是十分必要的，鑒于總蟾毒內(nèi)酯具有獨(dú)特的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，我們對(duì)華蟾素注射液進(jìn)行二次深度開發(fā)，研制了總蟾毒內(nèi)酯凍干制劑一一 “注射用華蟾內(nèi)酯”。
[0004]納米脂質(zhì)載體(Nanostructured Lipid Carriers, NLC)作為第二代脂質(zhì)納米粒，由于引入了液態(tài)脂質(zhì)，使得藥物在納米粒脂質(zhì)核心中的溶解度增加，提高了納米粒的載藥量，并且大大減緩了脂質(zhì)核心向完美晶型轉(zhuǎn)變的速率，從而延緩了 SLN的藥物泄漏問題，更好地改善總蟾毒內(nèi)酯缺陷。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明針對(duì)總蟾毒內(nèi)酯水溶性差，生物利用度低的問題，提供一種穩(wěn)定的注射用總蟾毒內(nèi)酯納米脂質(zhì)載體及其制備方法，其特征在于制備過程包含以下步驟:
[0006](I)，將固態(tài)脂質(zhì)、液態(tài)脂質(zhì)、卵磷脂和藥物加入到適量的甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、乙醇或組合形成的有機(jī)溶劑中，加熱至65-80°C使之溶解，形成油相。
[0007](2)，將表面活性劑加入到蒸餾水中形成水相，并加熱保持與油相溫度一致。
[0008](3)，在攪拌條件下將⑴緩慢滴加入⑵中并持續(xù)攪拌，乳化時(shí)間維持1-3小時(shí)至有機(jī)溶劑揮發(fā)完全，得初乳液。
[0009](4)，將(3)形成的初乳液迅速倒入適量冰水中，并保持與乳化過程相同轉(zhuǎn)速，攪拌0.5-2小時(shí)后得總蟾毒內(nèi)酯納米脂質(zhì)載體。
[0010]固體脂質(zhì)材料可以是單硬脂酸甘油酯、雙硬脂酸甘油酯、山崳酸甘油酯、棕櫚酸甘油酯、硬脂酸等，也可以是上述材料組成的混合固體脂質(zhì)。
[0011 ] 硬脂酸可以是SA單體，也可以是不同長(zhǎng)度PEG修飾后的SA，如PEG2000-SA，PEG800-SA 等。
[0012]液態(tài)脂質(zhì)可以是中鏈或長(zhǎng)鏈脂肪酸甘油酯、辛葵酸三甘油酯、油酸、維生素E、食用油等。
[0013]卵磷脂可以是蛋黃卵磷脂或大豆卵磷脂或氫化大豆卵磷脂，含量為0.5%-2.5%。
[0014]表面活性劑為非離子表面活性劑，如T80，F(xiàn)68，P188等，其含量為0.5% -2.5%。
[0015]液態(tài)脂質(zhì)和固態(tài)脂質(zhì)的比例可為1:20?1:1，優(yōu)選的為3:10。
[0016]轉(zhuǎn)速可以在400?1200轉(zhuǎn)/分鐘之間，優(yōu)選的為700轉(zhuǎn)/分鐘。
[0017]初乳液與固化水的比例可為1:1?1:4，優(yōu)選的為1:2.5。
[0018]對(duì)本發(fā)明中總蟾毒內(nèi)酯脂質(zhì)納米粒大小、粒徑分布和包封率評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)如下:
[0019]1，將總蟾毒內(nèi)酯納米脂質(zhì)載體溶液稀釋數(shù)倍，用激光粒度儀分析測(cè)定其納米粒大小和粒徑分布。
[0020]2，以超濾離心法測(cè)定總蟾毒內(nèi)酯納米脂質(zhì)載體包封率。吸取ImL總蟾毒內(nèi)酯納米脂質(zhì)載體溶液，移入4mL超濾離心管(Millipore，1kDa)，將超濾離心管置于干燥配套外管中并3000rpm離心1min后，取外管中離心后溶液20 μ L，用甲醇定容到4mL，得Cf。另取20 μ LGB納米脂質(zhì)載體溶液，直接用甲醇定容到4mL，得Ct。包封率計(jì)算公式如下:EE (% )=(Ct-Cf)/Ct X 100 %。
[0021 ] 所測(cè)得的總蟾毒內(nèi)酯納米脂質(zhì)載體，粒徑為170-250nm，多分散系數(shù)為0.085-0.3，包封率為 30% -75% ο
[0022]本發(fā)明制得的總蟾毒內(nèi)酯脂質(zhì)納米粒具有較好的穩(wěn)定性，可改善總蟾毒內(nèi)酯水溶性差、生物利用度低等缺陷。
【具體實(shí)施方式】
[0023]下面以實(shí)例來說明本發(fā)明的總蟾毒內(nèi)酯納米脂質(zhì)載體的制備方法，但不以此作為對(duì)本發(fā)明的限制。
[0024]實(shí)施例1
[0025]將2mg總蟾毒內(nèi)酯，60mg單硬脂酸甘油酯，30mg中鏈甘油三酯，2mg蛋黃卵磷脂投入ImL無水乙醇中，并加熱至70°C，構(gòu)成油相。將2mg吐溫80加入到4mL蒸餾水中，加熱至70°C構(gòu)成水相。將油相緩慢滴加至水相中，整個(gè)過程在900rpm攪拌下進(jìn)行。攪拌過程持續(xù)3h，至有機(jī)溶劑揮干形成初乳。將初乳迅速倒入1mL冰水中并攪拌2小時(shí)，攪拌速度維持900rpm，即得總蟾毒內(nèi)酯納米脂質(zhì)載體。
[0026]檢測(cè):總蟾毒內(nèi)酯納米脂質(zhì)載體平均粒徑為238.4nm，PDI為0.252，包封率為28.
[0027]實(shí)施例2
[0028]將2mg總蟾毒內(nèi)酯，30mg雙硬脂酸甘油酯，30mg硬脂酸，30mg中鏈甘油三酯，1.5mg卵磷脂投入ImL無水甲醇與丙酮(1:1)混合溶液中，并加熱至70°C，構(gòu)成油相。將2mg吐溫80加入到4mL蒸餾水中，加熱至70°C構(gòu)成水相。將油相緩慢滴加至水相中，整個(gè)過程在100rpm攪拌下進(jìn)行。攪拌過程持續(xù)2.5h，至有機(jī)溶劑揮干形成初乳。將初乳迅速倒入15mL冰水中并攪拌1.5小時(shí)，攪拌速度維持lOOOrpm，即得總蟾毒內(nèi)酯納米脂質(zhì)載體。
[0029]檢測(cè):總蟾毒內(nèi)酯納米脂質(zhì)載體平均粒徑為223.6nm，PDI為0.199，包封率為39.
[0030]實(shí)施例3
[0031]將3mg總蟾毒內(nèi)酯，30mg山崳酸甘油酯，40mg硬脂酸，25mg長(zhǎng)鏈甘油三酯，L 5mg大豆卵磷脂投入ImL 二氯甲烷與丙酮(1:2)混合溶液中，并加熱至70°C，構(gòu)成油相。將Img吐溫80和l