側(cè)耳內(nèi)酯在制備治療炎癥藥物中的應(yīng)用
【專利說明】側(cè)耳內(nèi)醋在制備治療炎癥藥物中的應(yīng)用 -、技術(shù)領(lǐng)域：
[0001] 本發(fā)明設(shè)及天然藥物領(lǐng)域，具體設(shè)及薄荷燒型單祗抑制憐脂酶A2(PLA2)活性和在 制備抗炎藥物中的用途。 二、【背景技術(shù)】：
[0002] 憐脂酶A2(PLA2)存在于各種生物體中.其生理功能是專一性水解憐脂sn-2 脂鍵，使之分解為脂肪酸和溶血憐脂。若脂肪酸為花生四締酸（arachidonicacid), 則被環(huán)氧合酶（cyclooxygenase)和5-脂氧合酶（lipoxygenase)分別分解為前列腺 素（prostaglandins)和白S締（leukotrienes)，前列腺素是炎癥的前體，而白S締在引 發(fā)哮喘的發(fā)病機(jī)理中起著重要的作用；溶血憐脂代謝成的血小板活化因子（plateletactivatingfactor) 也是導(dǎo)致炎癥的重要介質(zhì)。PLA2 處于炎癥調(diào)節(jié)因子生物合成的關(guān)鍵 位置.如果能夠有效地抑制PLA2的活性，與炎癥過程密切相關(guān)的S個調(diào)節(jié)因子的生物合成 都將被抑制。高效專一的PLA2抑制劑有可能發(fā)展成為新型的非醬體抗炎藥。 陽00；3] 側(cè)耳屬（Pleurotus(Fr.)Kumm.)是由真菌學(xué)家P.Kummer首先W磨茹屬的Agari州SOStreatsJacqRr.為模式種而建立的，屬于香茹科Lentinaceae。全世界約有 50種，我國目前包括野生和引種栽培的已知種類達(dá)36種，是側(cè)耳屬真菌種類資源較為豐富 的國家之一。從真菌杏鮑茹（Pleurotuseryngii)的發(fā)酵液分離鑒定了一個新化合物側(cè)耳 內(nèi)醋，其結(jié)構(gòu)如下：
[0004]
陽0化]偵[|耳內(nèi)醋（pleurolactone) H、
【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0006] 技術(shù)問題
[0007] 本發(fā)明的目的之一是提供一種薄荷燒型單祗化合物在制備PLA2抑制劑和抗炎藥 物的新用途。按照本發(fā)明，可把該新化合物制備成藥物，用于制備P1A抑制劑和炎癥等相 關(guān)疾病的治療。 陽00引技術(shù)方案
[0009] 本發(fā)明提供了一種側(cè)耳內(nèi)醋在制備治療炎癥藥物中的應(yīng)用。
[0010] 所述的側(cè)耳內(nèi)醋在制備治療炎癥藥物中的應(yīng)用，其通過作為PLA2的抑制劑實現(xiàn) 的。
[0011] 本發(fā)明提供了側(cè)耳內(nèi)醋與醫(yī)學(xué)上可接受的藥用輔料組成藥物組合物及其制劑。 如，片劑、丸劑、膏劑、膠囊劑、口服液、顆粒劑W及注射液粉針劑或水針液。
[0012] 從真菌杏鮑茹的發(fā)酵液提取、分離、純化得到的運種新的薄荷燒型單祗化合物，命 名為側(cè)耳內(nèi)醋（pleurolactone)?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)式為：
[0013]
[0014] 上述側(cè)耳內(nèi)醋的制備方法，其特征在于真菌杏鮑茹的發(fā)酵液為原料，經(jīng)水或有 機(jī)溶劑或混合溶劑提取，水提取液直接過大孔樹脂吸附，有機(jī)溶劑或混合溶劑提取液濃縮 后加水溶解再經(jīng)大孔樹脂吸附或正下醇萃取，大孔樹脂吸附物或正下醇萃取物經(jīng)柱層析分 離而得。其中，大孔樹脂包括D10UAB-5、或HP-20 ;柱層析用擔(dān)體選自硅膠、氧化侶、聚酷胺 和0DS中的一種或幾種；有機(jī)溶劑包括甲醇、乙醇或正下醇；提取溫度低于100°C。
[001引本發(fā)明提供了側(cè)耳內(nèi)醋制備P1A抑制劑和抗炎藥物的應(yīng)用。在體外，側(cè)耳內(nèi)醋的ICs。值與嗎I噪PLA2抑制劑的1C5。相近，體內(nèi)實驗表明側(cè)耳內(nèi)醋20mg?kg1和40mg?kg1兩 劑量組可通過對PLAz活性的顯著抑制作用，從而減少炎癥介質(zhì)PGE的含量，提示側(cè)耳內(nèi)醋 有類似于P1A抑制劑的作用；此外，40mg?kg1和80mg?kg1兩劑量組對二甲苯所致小鼠 耳腫脹有明顯的抑制作用。
[0016] 有益效果
[0017] 本發(fā)明公開了從真菌杏鮑茹的發(fā)酵液中提取分離的一種內(nèi)醋類新化合物的化學(xué) 結(jié)構(gòu)，W及該化合物制備方法及在醫(yī)藥領(lǐng)域中的用途，尤其在制備憐脂酶A2(PLA2)抑制劑 和抗炎藥物的用途。鑒于PLA2抑制劑的研究可W為研究P1A在細(xì)胞及分子水平復(fù)雜的作 用過程提供有力的手段，同時也為臨床抗炎及多種自身免疫疾病的治療開辟廣闊的治療前 景，本發(fā)明對于充分開發(fā)利用真菌杏鮑茹的發(fā)酵液中的內(nèi)醋類化合物具有十分重要的現(xiàn)實 意義。 陽01引試驗證明，在體外，側(cè)耳內(nèi)醋的ICg。值與嗎I噪PLA2抑制劑的1CW相近，體內(nèi)實驗 表明側(cè)耳內(nèi)醋20mg?kg1和40mg?kg1兩劑量組可通過對PLA2活性的顯著抑制作用，從 而減少炎癥介質(zhì)PGE的含量，提示側(cè)耳內(nèi)醋有類似于PLAz抑制劑的作用；此外，40mg?kg1 和80mg?kg巧劑量組對二甲苯所致小鼠耳腫脹有明顯的抑制作用，說明側(cè)耳內(nèi)醋可用于 P1A抑制劑和抗炎藥物的開發(fā)。 四、【具體實施方式】：
[0019] 結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不僅僅限于所列舉 的實施方式。 陽〇2〇] 實施例1
[0021] 本發(fā)明自真菌杏鮑茹的發(fā)酵液中提取、分離、純化得到的運種內(nèi)醋類新化合物，命 名為側(cè)耳內(nèi)醋。 陽0巧 1.提取分離
[0023] 本發(fā)明將真菌杏鮑茹的發(fā)酵液依次用石油酸、乙酸乙醋萃取，得石油酸部位和乙 酸乙醋部位。乙酸乙脂部位進(jìn)行硅膠柱層析，流動相依次為氯仿-甲醇（10 :1、4 :1、1 :1)、 甲醇。其中氯仿-甲醇（2:1)部分經(jīng)反復(fù)反相柱分離及凝膠柱純化得到單體化合物側(cè)耳內(nèi) 醋。
[0024] 2.結(jié)構(gòu)鑒定 陽0巧]無色油狀體，[a]〇25. 9 =巧8. 5。（C0. 02,MeOH)，UV(MeOH)Amax:213皿，IR(邸r)Vmax3389,1760,1630cm1，ESI-MS顯示分子離子峰為221 [M+Na]+。結(jié)合氨譜和碳 譜推測，分子式?；疉，分子量198。 陽0%] 表1新的薄荷燒型單祗的核磁共振數(shù)據(jù)（S，ppm, 0 =TMS，CDCI3)
[0027]
[0028] 本發(fā)明的新化合物作為藥物活性成分可W制成常規(guī)的藥用劑型，如，片劑、丸劑、 膏劑、膠囊劑、口服液、顆粒劑W及注射液粉針劑或水針液。
[0029] 3.體外抑制PIA作用
[0030] WSIBLINKS類似物為底物，WnajanajaPlA(眼鏡蛇蛇毒中提取的P1A)作為水 解酶，嗎I噪P1A抑制劑5-甲氧基-1-芐基-1H-嗎I噪-3-乙酷胺為對照，通過酶標(biāo)儀比色 系統(tǒng)測定水解的最大反應(yīng)速率，進(jìn)行抑制活性的定性定量比較，結(jié)果見表2。
[0031] 表2對化ja化jaPIA抑制作用和SCORE的預(yù)測值
[0032]
[0034] 從表2的結(jié)果表明，側(cè)耳內(nèi)醋的ICs。值與嗎I噪PLA2抑制劑的1C5。相化實驗測定 值與SCORE預(yù)測值呈對應(yīng)關(guān)系，提示側(cè)耳內(nèi)醋有類似于PLA2抑制劑的作用。 陽0對 4.抗炎作用
[0036] (1)對小鼠耳廓二甲苯炎癥的影響
[0037]對雄性小鼠60只隨機(jī)分5組，①對照組②側(cè)耳內(nèi)醋I(20mg?kg1)、 II(40mg'kg1)、III(80mg'kg1)立個劑量組③嗎I噪美辛組（8mg-kg1)，各組灌胃給藥或給 予等量的生理鹽水，每天1次，連續(xù)3d，末次給藥后30min，每鼠右耳廓內(nèi)外側(cè)滴涂20y1二 甲苯致炎，左耳作為對照，致炎后30min脫頸椎處死小鼠，用直徑7mm打孔器分別于左、右耳 相同部位打下耳片，稱重，W左、右耳片重量差值表示腫脹度，結(jié)果見表3。 陽0測表3側(cè)耳內(nèi)醋對二甲苯所致小鼠耳廓炎癥耳腫脹度的影響狂±器，I尸巧
[0039]
[0040]與模型組比較*P<0. 05, **P<0. 01 陽041] 實驗結(jié)果表明，側(cè)耳內(nèi)醋40mg?kg嘴80mg ? kg 1兩劑量組對二甲苯所致小鼠耳 腫脹有明顯的抑制作用，提示側(cè)耳內(nèi)醋有一定抗炎作用。
[0042] (2)對角叉菜膠制備大鼠氣囊滑膜炎炎癥模型的影響 柳創(chuàng)取健康SD雄性大白鼠，隨機(jī)分為6組：①正常組；②模型組；③側(cè)耳內(nèi)醋I(lOmg.kg1)、II(20mg.kg1)、111 (40mg.kg1)S個劑量；④地塞米松組（0. 15mg.kg1)。 各組動物乙酸輕度麻醉，背部正中s.c無菌空氣20ml，3d補充注射空氣10ml維持氣囊腫 脹，6d氣囊內(nèi)注射角叉菜膠50皿?kg1致炎，正常對照組同法注射生理鹽水等容積。各組 動物于第3d開始灌胃給藥①②組給予等容積生理鹽水，6d致炎前30min再給藥給藥一次。 致炎化后動物i.P戊己比妥鋼25mg?kg1麻醉，氣囊內(nèi)注射無菌無巧儀Hank'S平衡鹽液 (皿SS)4ml灌洗，收集灌洗液，進(jìn)行灌洗液中白細(xì)胞數(shù)和蛋白質(zhì)含量的測定；采用微量酸滴 定法測定PLA2活性；采用放免法測定PGE的含量，結(jié)果見表4。 W44] 表4側(cè)耳內(nèi)醋對大鼠氣囊滑膜炎灌洗液中白細(xì)胞數(shù)、 W45]蛋白質(zhì)和PGE含量及P1A活性的影響（玄±S，巧=8)
[0046]
[0047]與模型組比較*P<0. 05, **P<0. 01
[0048] 在小鼠耳廓炎癥實驗的基礎(chǔ)上，又進(jìn)行了大鼠氣囊滑膜炎癥試驗，結(jié)果與上次實 驗基本一致，側(cè)耳內(nèi)醋可減少灌流液中白細(xì)胞的滲出和蛋白質(zhì)的含量；與此同時，側(cè)耳內(nèi)醋 20mg?kg1和40mg?kg1兩劑量組可通過對PLA2活性的顯著抑制作用，從而減少炎癥介質(zhì) PGE的含量，此實驗結(jié)果與其體外抑制PLA2作用一致，說明側(cè)耳內(nèi)醋可用于PLA2抑制劑和 抗眼藥物的開發(fā)。 W例實施例2
[0050] 真菌杏鮑茹的發(fā)酵液40Kg，依次用石油酸、乙酸乙醋萃取。乙酸乙醋萃取物經(jīng)柱層 析分離后分別得到側(cè)耳內(nèi)醋4克。 陽0川實施例3
[0052] 真菌杏鮑茹的發(fā)酵液lOKg，經(jīng)大孔樹脂值101、AB-5、HP-20等）吸附，用水，30% 乙醇沖洗后用70%乙醇洗脫，70%乙醇洗脫液減壓回收溶劑得總浸膏?？偨嘣俳?jīng)柱層析 (硅膠柱層析：氯仿-甲醇系統(tǒng)，RP-C18柱層析：水-甲醇系統(tǒng)）分離后，分別得到側(cè)耳內(nèi) 醋0.8克。
[0053] 實施例4含本發(fā)明新的薄荷燒型單祗單體的片劑 陽054] 取實施例1制得的新的薄荷燒型單祗化合物lOOmg與淀粉50mg，糊精50mg混合， 用適量30%乙醇做濕潤劑，制成軟材，常規(guī)方法制粒，加入適量硬脂酸儀混合，制成片劑。
[0055] 實施例5含本發(fā)明新的薄荷燒型單祗的膠囊劑
[0056] 取新的薄荷燒型單祗化合物50mg與淀粉70mg，糊精lOmg，糖粉lOmg混合，用適量 30%乙醇做濕潤劑，制成軟材，常規(guī)方法制粒，裝入硬膠囊中。
[0057] 實施65含本發(fā)明新的薄荷燒型單祗的緩釋膠囊劑
[0058] 取新的薄荷燒型單祗化合物80mg與徑丙基甲基纖維素K15M120mg，乙基纖維素 45cps40mg，乳糖40mg混合，用10%乙締化咯燒酬k30乙醇溶液適量，制成軟材，常規(guī)方法 制粒，裝入硬膠囊中制成緩釋膠囊。
【主權(quán)項】
1. 一種側(cè)耳內(nèi)酯在制備治療炎癥藥物中的應(yīng)用。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的所述的側(cè)耳內(nèi)酯在制備治療炎癥藥物中的應(yīng)用，其通過作為 PLA2的抑制劑實現(xiàn)的。
【專利摘要】本發(fā)明涉及天然藥物領(lǐng)域，具體涉及薄荷烷型單萜抑制磷脂酶A2（PLA2）活性和在制備抗炎藥物中的用途。本發(fā)明提供了一種側(cè)耳內(nèi)酯在制備治療炎癥藥物中的應(yīng)用。試驗證明，在體外，側(cè)耳內(nèi)酯的IC50值與吲哚PLA2抑制劑的IC50相近，體內(nèi)實驗表明側(cè)耳內(nèi)酯20mg?kg-1和40mg?kg-1兩劑量組可通過對PLA2活性的顯著抑制作用，從而減少炎癥介質(zhì)PGE的含量，提示側(cè)耳內(nèi)酯有類似于PLA2抑制劑的作用；此外，40mg?kg-1和80mg?kg-1兩劑量組對二甲苯所致小鼠耳腫脹有明顯的抑制作用，說明側(cè)耳內(nèi)酯可用于PLA2抑制劑和抗炎藥物的開發(fā)。
【IPC分類】A61K31/365, A61P37/02, A61P29/00
【公開號】CN105213371
【申請?zhí)枴緾N201510671985
【發(fā)明人】羅瑞雪
【申請人】蘇州普羅達(dá)生物科技有限公司
【公開日】2016年1月6日
【申請日】2015年10月18日