基酸合成和代謝基因，脂類(lèi)代謝基因、輔因子合成代謝基因等較正常對(duì)照組明顯減少。
[0018]葉綠素銅鈉(Sodium copper chlorophyllin)又稱(chēng)銅葉綠素鈉，通過(guò)有機(jī)溶劑(如丙酮)提取蠶糞或植物葉子，經(jīng)皂化(用氫氧化鈉的甲醇溶液除去甲基和葉綠基酯基)后用氧化銅銅化而成。其化學(xué)命名為Sodium copper chlorophyllin，分子式為C34H29CuN4Na306，分子量:722.13。CAS號(hào):65963-40-8。葉綠素銅鈉為墨綠色粉末。易溶于水，略溶于醇和氯仿，微溶于乙醚，偏酸性(PH6.5以下)，如有鈣離子存在時(shí)則有沉淀析出。葉綠素及其衍生物據(jù)報(bào)道具有抗菌、抗氧化和抗腫瘤等藥用作用。葉綠素銅鈉鹽、鐵鈉鹽、鈷鈉鹽是良好的造血細(xì)胞復(fù)合劑，對(duì)放療后及各種原因引起的血細(xì)胞減少癥和各種貧血有治療作用。有研究報(bào)道葉綠素銅鈉可以通過(guò)阻斷THP-1細(xì)胞中NF-kB信號(hào)通路抑制由瘡皰丙酸桿菌引起的IL-8和MCP-1分泌。
[0019]在對(duì)大鼠肝細(xì)胞線(xiàn)粒體和pBR322質(zhì)粒的體外實(shí)驗(yàn)中證實(shí)葉綠素銅鈉能夠通過(guò)抗T射線(xiàn)引起的氧化作用和DNA損害保護(hù)線(xiàn)粒體，還被證實(shí)能夠抑制HaCaT細(xì)胞中由UVB刺激引起的R0S積累。葉綠素銅鈉也被證實(shí)能夠通過(guò)端粒酶活性和C0X-2表達(dá)抑制HT29細(xì)胞生長(zhǎng)，使其阻礙于A期。葉綠素銅鈉適用于各種原因所致的白血細(xì)胞減少癥，急慢性肝炎、迀延性肝炎引起的肝腫大、肝硬化等的治療。據(jù)認(rèn)為，葉綠素銅鈉有其多重雙鍵，可能會(huì)中和自由電子，拮抗致癌物質(zhì)的作用。例如，有報(bào)道說(shuō)葉綠素銅鈉可抑制黃曲霉毒素B1(AFB1)對(duì)-DNA的結(jié)合，因此可能有抗癌變的作用。但是，還沒(méi)有嚴(yán)格的科學(xué)證據(jù)來(lái)證明葉綠素銅鈉的抗癌功能。葉綠素銅鈉被用于寵物飼料的添加劑，以及食品色素。至今，尚無(wú)以關(guān)于以葉綠素銅鈉為活性成分，或含有葉綠素銅鈉的藥物恢復(fù)腸道微生態(tài)平衡的機(jī)理研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0020]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，提供葉綠素銅鈉在醫(yī)藥方面的新用途。
[0021]本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn):葉綠素銅鈉在制備治療調(diào)節(jié)腸道菌群藥物中的應(yīng)用。
[0022]進(jìn)一步地，所述腸道菌群為厚壁菌門(mén)細(xì)菌。
[0023]進(jìn)一步地，所述腸道菌群為α —變形桿菌綱細(xì)菌。
[0024]進(jìn)一步地，所述腸道菌群為丫一變形桿菌綱細(xì)菌。
[0025]葉綠素銅鈉在制備治療腸道菌群失衡引起的肝病藥物中的應(yīng)用。
[0026]進(jìn)一步地，所述肝病包括肝硬化、脂肪肝、急性或慢性肝臟損傷、肝臟纖維化。
[0027]在肝硬化過(guò)程中，厚壁菌門(mén)細(xì)菌數(shù)量會(huì)降低，葉綠素銅鈉可以上調(diào)厚壁菌門(mén)細(xì)菌數(shù)量。
[0028]在肝硬化過(guò)程中，α —變形桿菌綱的豐度上升，葉綠素銅鈉可以抑制α —變形桿菌門(mén)的數(shù)量。
[0029]在肝硬化過(guò)程中，γ 一變形桿菌綱的豐度上升，葉綠素銅鈉可以抑制γ —變形桿菌門(mén)的數(shù)量。
[0030]根據(jù)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以及其有效預(yù)防肝硬化發(fā)生的使用劑量。因此，根據(jù)該藥效及劑量，新適應(yīng)癥的合理劑量包括20 mg, 40 mg, 60 mg, 80 mg，100 mg，120 mg，以及更高的使用劑量。
[0031]本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):葉綠素銅鈉類(lèi)似于益生元，使腸道的微生物菌群生態(tài)達(dá)成平衡，從而限制了條件致病菌的生長(zhǎng)，腸道細(xì)菌毒素的釋放，從而緩減肝病。本發(fā)明通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了葉綠素銅鈉可以用于調(diào)節(jié)腸道菌群，增加厚壁菌門(mén)細(xì)菌數(shù)量、抑制α —變形桿菌綱和γ —變形桿菌綱的豐度。腸道菌群的失調(diào)與多種肝臟疾病，包括肝臟衰竭以及肝硬化有密切相關(guān)性，因此，葉綠素銅鈉的制備可以用于預(yù)防及治療多種肝臟疾病。
【附圖說(shuō)明】
[0032]圖1為蛋氨酸以及膽堿缺乏飲食(MCD)喂養(yǎng)小鼠引起的脂肪肝，應(yīng)用葉綠素銅鈉治療后，小腸石錯(cuò)切片；
圖2為四氯化碳小鼠引起的肝硬化，應(yīng)用葉綠素酮鈉治療后，肝臟石蠟切片馬松染色圖；
圖3為肝硬化小鼠經(jīng)葉綠素銅鈉治療后，大便中厚壁菌門(mén)含量變化；
圖4為肝硬化小鼠經(jīng)葉綠素銅鈉治療后，大便中α-變形菌門(mén)含量變化；
圖5為肝硬化小鼠經(jīng)葉綠素銅鈉治療后，大便中變形菌門(mén)含量變化。
【具體實(shí)施方式】
[0033]下面結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的描述，本發(fā)明的保護(hù)范圍不局限于以下所述。
[0034]實(shí)施例1:葉綠素銅鈉保護(hù)小腸絨毛膜 1.材料與方法
1.1材料
雄性C57BL/6及BALB/C小鼠由北京華阜康生物科技股份有限公司提供；葉綠素銅鈉粉末由成都通德藥業(yè)有限公司提供，分子式為C34H29CuN4Na306，分子量:722.13，CAS號(hào):65963-40-8 ;四氯化碳(CC14)與礦物油均由sigma公司提供；蛋氨酸膽堿缺乏(MCD)飼料由南通特洛菲飼料科技有限公司提供。
[0035]1.2試劑配制
葉綠素銅鈉藥劑(母液):在超凈工作臺(tái)內(nèi)將50 ml滅菌超純水、100 mg葉綠素銅鈉粉末依次加入50 ml滅菌離心管，渦旋混勻并置于4°C保存。
[0036]CC14注射液:在超凈工作臺(tái)內(nèi)分別將0.75 ml,2.25 ml、3.75ml CC14和14.25ml、12.75 ml、11.25 ml礦物油依次加入15ml滅菌離心管，分別配制為5%、15%、25% CC14注射液，渦旋混勻并置于4°C保存。
[0037]1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物非酒精性脂肪性肝炎模型的建立
3-4周齡雄性C57BL/6小鼠經(jīng)1周正常飼料喂養(yǎng)后給予蛋氨酸以及膽堿缺乏飲食(MCD)飼料喂養(yǎng)，對(duì)照組同時(shí)給予正常(MCS)飼料喂養(yǎng)。喂養(yǎng)45天后處死小鼠并取肝臟組織、小腸組織進(jìn)行切片觀察及RNA提取。
[0038]1.4實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的治療研究
在超凈工作臺(tái)中于實(shí)驗(yàn)小鼠飲用水中定量加入葉綠素銅鈉母液使其終濃度分別達(dá)到25 μ g/ml和50 μ g/ml，對(duì)照組加入相同劑量滅菌超純水。每3天重新配制飲用水。
[0039]1.5實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝硬化模型的建立
3-4周齡雄性BALB/C小鼠經(jīng)2周正常飼料喂養(yǎng)后給予CC1J復(fù)腔注射。分別進(jìn)行4周、
2周和8周的5%、15%,25% CC14腹腔注射，每次注射劑量參照10 μ 1/g體重，對(duì)照組同時(shí)給予對(duì)應(yīng)劑量礦物油注射。于25% 0:14注射4周后開(kāi)始取小鼠新鮮糞便提取細(xì)菌DNA進(jìn)行定量PCR分析。
[0040]1.6實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的治療研究
在超凈工作臺(tái)中于實(shí)驗(yàn)小鼠飲用水中定量加入葉綠素銅鈉母液使其終濃度分別達(dá)到25 μ g/ml和50 μ g/ml，對(duì)照組加入相同劑量滅菌超純水。每3天重新配制飲用水。
[0041]1.7 結(jié)果
圖1所示為小腸石蠟切片Η.E.染色結(jié)果。與正常對(duì)照MCS飼料喂養(yǎng)小鼠相比，MCD飼料喂養(yǎng)小鼠小腸絨毛表皮細(xì)胞出現(xiàn)萎縮、變薄，而經(jīng)葉綠素銅鈉治療小鼠其小腸絨毛表皮細(xì)胞恢復(fù)至正常對(duì)照水平。表明口服一定劑量的葉綠素銅鈉可以保護(hù)小腸絨毛表皮細(xì)胞。而完整的小腸絨毛表皮細(xì)胞及腸道表面的粘膜對(duì)于腸道防御起重要的作用。
[0042]實(shí)施例2: 口服葉綠素銅鈉可以有效地預(yù)防肝臟纖維化/肝硬化的發(fā)生 1.1材料
雄性BALB/C小鼠由北京華阜康生物科技股份有限公司提供；葉綠素銅鈉粉末由成都通德藥業(yè)有限公司提供，分子式為C34H29CuN4Na306，分子量:722.13